TWI808353B

TWI808353B - 魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途

Info

Publication number: TWI808353B
Application number: TW109138877A
Authority: TW
Inventors: 王泰來; 吳智謀
Original assignee: 德河海洋生技股份有限公司
Priority date: 2020-11-06
Filing date: 2020-11-06
Publication date: 2023-07-11
Also published as: TW202218672A

Abstract

本發明係關於一種魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，該魚類係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合。

Description

魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途

本發明係關於一種魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途。

在隨著時代的改變包括飲食習慣的改變或內外壓力的增加等各種原因，受到脫髮困擾的人不在少數。毛髮是在皮膚表面生出的角質化結構，有對外部衝擊的緩衝作用，尤其是頭髮，保護頭皮不受太陽光、寒風、物體摩擦等外部刺激而受傷。毛髮生長週期構成為3個階段，被劃分成毛髮生長最為活躍的生長期、毛髮開始退化的退化期及停止毛髮的生長或進入休息階段的休止期。而研究也證實毛髮的生長與一些細胞激素及生長因子有關，尤其指出血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)，在毛囊生命的發展中扮演一個重要的角色，不只起始生長，還有確定分化、結構與生長的時間長短等。

在隨著年齡增加或生活壓力遽增的因素下，毛囊數與活躍度都大幅減少，造成毛囊生長週期停留在休止期或甚至是凋亡，最終毛髮脫落而日漸稀疏。因此，為了治療脫髮，就是需要將休止期狀態的毛囊活化走向生長期，且將生長期延長。

目前市場上的宣稱治療或預防脫髮用製劑主要有含有米諾地爾(minoxidil)，其主要用於增加流向頭皮的血流量，供應毛囊充足養分以強化髮根功能。但是，上述製劑因副作用或使用上的注意事項而使人們在使用上有諸多限制。

本發明人之前申請中華民國專利申請號108106784揭示一種新穎成分係一未經水解處理之”石斑魚受精卵萃取物”，經動物試驗證實對皮膚創傷(燒燙傷)具有加速傷口癒合之用途。而在本發明之前，從未有先前技術公開石斑魚受精卵萃取物具有提升毛囊細胞血管內皮生長因子表現率與促進毛髮生長及毛髮分布率/濃密度的用途。

爰此，本發明人在非可預期的情形下發現到石斑魚受精卵萃取物具有效提升毛囊血管內皮生長因子表現率以及促進毛髮生長之新用途。

因此，在一方面，本發明提供一種魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，該魚類係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合；其中，該魚類受精卵萃取物係以10~18℃低溫水萃提取方式，並經濾膜過濾及除味程序而得。

進一步，該促毛髮生長組合物包含有3.7wt%至37wt%之魚類受精卵萃取物，該促毛髮生長組合物施用方式為至少0.2ml/每4平方公分體表面積/每天。

進一步，該魚類受精卵萃取物可提升毛囊之血管內皮生長因子表現率，令毛囊進入活躍的生長期，增進毛髮生長及毛髮分布率，強健髮根以防止脫髮。

進一步，該促毛髮生長組合物更包括有一醫藥上可接受之載體。

另一方面，本發明再提供一種提升毛囊血管內皮生長因子表現率的方法，係以一有效劑量之石斑魚受精卵萃取物施予一所需個體之體表皮膚，而提升毛囊之血管內皮生長因子表現率。

進一步，該石斑魚受精卵萃取物之使用濃度為3.7wt%至37wt%。

進一步，該石斑魚受精卵萃取物施用方式為至少0.2ml/每4平方公分體表面積/每天。

進一步，該石斑魚受精卵之魚種係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合。

進一步，該石斑魚受精卵萃取物更包括併入一粧品或醫藥上可接受之載體。

進一步，該粧品之載體形式，係包含養髮液、洗髮乳、潤髮乳、頭皮護理凝膠或頭皮精華液。

根據上述技術特徵可達成以下功效：透過本發明之方法能達到有效提升毛囊血管內皮生長因子表現率，進而實現有效促進毛髮生長與毛髮分布率/濃密度之新用途。

[第一圖]係本發明實施例之小鼠背部毛髮生長長度統計比較圖。

[第二圖]係本發明實施例之小鼠背部毛髮生長分布統計比較圖。

[第三圖]係本發明實施例之小鼠背部第4、8、12天毛髮生長狀態影像圖。

[第四圖]係本發明實施例之第16天小鼠背部皮膚毛囊生長週期比較圖。

[第五A圖]係本發明實施例之第16天小鼠背部皮膚血管內皮生長因子免疫染色比較圖。

[第五B圖]係本發明實施例之第16天小鼠背部皮膚血管內皮生長因子表現率比較圖。

本發明中使用的「有效劑量」乙詞是指與未接收該量的相應個體相比具明顯治療或改善效果者。該詞還包括在其範圍內可有效增強正常生理功能的量。

本發明中使用的「粧品/醫藥上可接受的載體」乙詞是指在與製劑的其他成分相容、而且對被施予的個體無害的層面上粧品/醫藥上可接受的載體、稀釋劑、或賦形劑。可以在本發明中使用技術領域中普遍知道或使用的任何載體、稀釋劑或賦形劑，取決於對粧品/醫藥製劑的要求。

依據本發明發現，石斑魚受精卵萃取物對於提升毛囊血管內皮生長因子表現率以及促進毛髮生長與分布率具有顯著效果，可做為毛髮生長促進劑之用途使用。

因此，本發明提供一種魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，該魚類係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合；其中，該魚類受精卵萃取物係以10~18℃低溫水萃提取方式，並經濾膜過濾及除味程序而得。

本發明實施例中，不限定魚類受精卵來自多品系混合，亦可以是單一品系受精卵進行萃取。惟經本發明人先前實驗經驗確認單一品系(例如點帶石斑)之受精卵萃取物所得功效結果劣於等比例混合前述鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑等幾種魚類之受精卵進行萃取而得之受精卵萃取物的功效，故本發明實施例即以前述鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑等幾種魚類之受精卵等比例混合(1：1：1：1：1)後進行萃取所得之萃取物為範例進行說明。本發明所屬技術領域中具通常知識者皆能理解同品種之魚類所產之受精卵，其萃取物所具之功效應屬可推測範圍內，可視為相同或相近。

而前述魚類受精卵萃取物係透過低溫水萃方法獲得，包含在低溫下(10至18℃)使用超音波或高速均質機對受精卵進行均質化處理，令受精卵中蛋白或胜肽分子釋放入水液中，再經過多階段雜質過濾(1mm至0.1μm孔徑濾網/膜)及除味過程(1g活性碳/1L萃取液)而得。

本發明所屬技術領域中具通常知識者皆可理解的是，前述魚類受精卵萃取物是一種蛋白質總和的概念，意即將受精卵中所有可能存在與細胞增生分化有關的蛋白質、胜肽分子等成分都保留下來，因為其中可能包含了許許多多未知的活性成分以及未知的特性，皆可能與受精卵中細胞增生或分化息息相關，本發明人遂行開發利用該等未知特性於特定用途上。

較佳的是，該促毛髮生長組合物包含有3.7wt%至37wt%之魚類受精卵萃取物，該促毛髮生長組合物施用方式為至少0.2ml/每4平方公分體表面積。

較佳的是，該魚類受精卵萃取物可提升毛囊之血管內皮生長因子表現率，令毛囊進入活躍的生長期，促進毛髮生長及毛髮分布率，強健髮根以防止脫髮。

較佳的是，該促毛髮生長組合物更包括有一醫藥上可接受之載體。

較佳的是，該石斑魚受精卵萃取物之使用有效劑量的濃度為3.7%至37%，且該石斑魚受精卵萃取物施用方式為至少0.2ml/每4平方公分體表面積/每天。

雖本發明實施例中以前述3.7wt%及37wt%兩濃度點內區間作為試驗範例說明，但不以此限制在該二濃度點內區間範圍以外的濃度就不具有前述功效，以本發明人之先前試驗篩選濃度點經驗推測，在更低的濃度點(例如0.1%~0.5%)也應該具有前述功效，只差別在功效數值之高低差異。

較佳的是，該石斑魚受精卵之魚種係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合。

較佳的是，該石斑魚受精卵萃取物更包括併入一粧品或醫藥上可接受之載體。而該粧品之載體形式，係包含養髮液、洗髮乳、潤髮乳、頭皮護理凝膠或頭皮精華液。

本發明實施例說明如下：

一、小鼠背部毛髮生長長度及面積比較試驗

本試驗使用購自國家實驗動物中心C57BL/6 Narl品系小鼠，6-8周齡，體重約22-26克，共12隻雄鼠，分為對照組(生理食鹽水)、低劑量組(石斑魚受精卵萃取物3.7wt%)、高劑量組(石斑魚受精卵萃取物37wt%)等三組，每組各4隻小鼠進行試驗。每隻小鼠背面均以石臘(80-85℃)脫除背部2x2公分(4平方公分)面積之毛髮，以建立脫毛之模式。脫毛當天為第0天，每天各組各自施予200μl之試驗物質(生理食鹽水或石斑魚受精卵萃取物)在2x2公分的脫毛區域皮膚，連續觀察16天後犧牲取下脫毛區域之皮膚進行組織免疫染色分析。其中毛髮長度量測係將脫毛區域利用不鏽鋼鑷子隨機拔取數根毛髮利用游標尺測量毛髮生長的長度，單位為毫米(mm)。而毛髮分布面積量測係背部脫毛區域於0、4、8、12、16天，利用投影片上描繪2x2公分的方框，貼附在背部脫毛區域，即為觀測區域面積共4平方公分，再利用照相機拍攝存檔(脫毛區域旁黏貼校正用之scale貼紙)，再以Image J軟體分析計算毛髮生長分布面積的百分比；其計算公式為：毛髮生長分布面積百分比%=〔第N天毛髮分布面積(平方公分)/觀測區域面積4平方公分〕x 100%。

首先請一併參閱第一、三圖所示，係本發明中各組小鼠背部毛髮生長長度統計比較圖與影像圖。其中第16天之數據結果經計算統計後(P<0.05；ab不同英文符號表示具差異性)得知，對照組毛髮平均長度3.96±0.17mm；低劑量組(石斑魚受精卵萃取物3.7wt%)毛髮平均長度5.15±0.63mm，較對照組長了30.1%；而高劑量組(石斑魚受精卵萃取物37wt%)毛髮平均長度5.83±0.65mm，更是比對照組長了47.2%，由此證實，石斑魚受精卵萃取物確實能作為增進毛髮生長速度之用途。

請再一併參閱第二、三圖所示，係本發明實施例中小鼠背部毛髮生長分布統計比較圖與影像圖。其中第8天之數據結果經計算統計後(P<0.05；ab不同英文符號表示具差異性)得知，對照組毛髮生長分布率0.61±0.15%；低劑量組(石斑魚受精卵萃取物3.7wt%)毛髮生長分布率3.49±1.88%，較對照組毛髮生長分布率多了2.88%，換句話說總生長面積是對照組的5.7倍(3.49/0.61)；而高劑量組(石斑魚受精卵萃取物37wt%)毛髮生長分布率3.72±0.2%，更是比對照組毛髮生長分布率多了3.11%，換句話說總生長面積是對照組的6.1倍(3.72/0.61)。由此證實，石斑魚受精卵萃取物確實能作為增加毛髮生長分布率，達到毛髮濃密效果的用途。

二、毛囊生長週期變化分析

各組小鼠犧牲當日採樣背部皮膚組織釘於紙板上維持結構平整。並且浸泡於10%中性緩衝福馬林固定至少48小時後，由試驗獸醫師修整。經組織脫水、石蠟包埋與切片，施以蘇木紫-伊紅染色與免疫組織化學染色，由試驗獸醫師顯微檢查切片。而毛囊生長週期之判別係參照J Invest Dermatol(Muller-Rover et al.,2001)，本試驗將以單盲方式，隨機檢視切片上的10個100倍縱切視野，並採用3分期系統評估毛囊生長週期。

又請參閱第四圖所示，係本發明實施例之第16天小鼠背部皮膚毛囊生長週期比較圖。經上述判別系統分析後發現，在對照組部分可見到多數毛囊處於退化期(參圖中白色箭頭所指處)，僅有少量處於生長期(圖中黑色箭頭所指處)；在低劑量組(石斑魚受精卵萃取物3.7wt%)部分，其退化期(白色箭頭)與生長期(黑色箭頭)的毛囊大約各占一半數量；而在高劑量組(石斑魚受精卵萃取物37wt%)部分，其生長期(黑色箭頭)的毛囊佔據較多數量。藉由上述結果證實，石斑魚受精卵萃取物能明顯促使毛囊進入活躍的生長期，達到促進毛髮生長，穩健毛根的功效，作為促進毛髮生長的新用途。

三、免疫組織染色分析

各組小鼠取樣皮膚組織以10%中性緩衝福馬林固定及切片且經抗原修復後，以帶有2%山羊血清的稀釋液，於室溫進行抗原阻避一小時。隨後將一抗(Rabbit anti-mouse VEGFA,ab51745)稀釋為5ug/mL，滴上切片後於4℃環境保濕避光隔夜。次日洗去一抗，以雙氧水除去內源性過氧化酵素，洗淨後覆以稀釋1000倍的二抗(Goat anti-Rabbit with HRP)，經紅色DAB呈色六分鐘後以蘇木紫作對照染色，經純水洗淨後風乾封片觀察。將染色後玻片於隨機檢視的10個200倍縱切視野內評分是否有小鼠內源性血管內皮生長因子(VEGF)的呈色反應表現。

復請先參閱第五A圖所示，係本發明實施例之第16天小鼠背部皮膚血管內皮生長因子免疫染色比較圖。由染色結果得知，對照組中多數毛囊皆未有血管內皮生長因子表現的訊號(參圖中白色箭頭所指處)，僅有少量帶有微弱訊號反應(圖中黑色箭頭所指處)；在低劑量組(石斑魚受精卵萃取物3.7wt%)部分，血管內皮生長因子表現的訊號已較對照組明顯(黑色箭頭所指處)，但仍有少數毛囊處無表現訊號(白色箭頭所指處)；而在高劑量組(石斑魚受精卵萃取物37wt%)部分，毛囊處的血管內皮生長因子表現訊號明顯增強增多(黑色箭頭所指處)。

再者，請續參第五B圖所示，係將上述試驗中各組毛囊血管內皮生長因子表現的訊號數據經統計分析後(P<0.05)得知，對照組的毛囊血管內皮生長因子表現率57.5%；低劑量組(石斑魚受精卵萃取物3.7wt%)的毛囊血管內皮生長因子表現率70%，較對照組多增加了12.5%表現率；而高劑量組(石斑魚受精卵萃取物37wt%)的毛囊血管內皮生長因子表現率87.5%，較對照組更是多增加了30%表現率。這也證實了，透過本發明實施有效劑量的石斑魚受精卵萃取物於所需個體之體表皮膚的方法一特定時間後，確實能明顯提升毛囊血管內皮生長因子表現率。

綜合上述實施例之說明，當可充分瞭解本發明中透過實施使用有效劑量之石斑魚受精卵萃取物於所需個體之體表皮膚的方法一特定時間後，確實能明顯提升毛囊血管內皮生長因子表現率，促使毛囊進入活躍的生長期，進而達成促進毛髮生長與毛髮分布率/濃密度的新用途。惟以上所述實施例僅係為本發明之較佳實施例，當不能以此限定本發明實施之範圍，即依本發明申請專利範圍及發明說明內容所作簡單的等效變化與修飾，皆屬本發明涵蓋之範圍內。

Claims

一種魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，該魚類係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合；其中，該魚類受精卵萃取物係以10~18℃低溫水萃提取方式，並經濾膜過濾及除味程序而得，其中，該促毛髮生長組合物包含有3.7wt%至37wt%之魚類受精卵萃取物。
如請求項1之魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，該魚類受精卵萃取物可提升毛囊之血管內皮生長因子表現率，促進毛髮生長及毛髮分布率，強健髮根以防止脫髮。
如請求項1之魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，更包括有一醫藥上可接受之載體。
如請求項1之魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，該石斑魚受精卵萃取物更包括併入一粧品可接受之載體。
如請求項4之魚類受精卵萃取物用於製備促毛髮生長組合物之用途，其中，該粧品之載體形式，係包含養髮液、洗髮乳、潤髮乳、頭皮護理凝膠或頭皮精華液。