TWI801377B - 治療具有ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）感染之個體之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種採用靶向HBV之RNAi劑與HBV疫苗之組合，而治療具有B型肝炎病毒(HBV)感染(例如，慢性HBV感染)之個體之方法。

Description

治療具有B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法 相關申請案
本申請案主張2017年4月18日申請之美國臨時專利申請案案號62/486,618、2017年9月1日申請之美國臨時專利申請案案號62/553,358、2018年3月23日申請之美國臨時專利申請案案號62/646,978、及2018年4月11日申請之美國臨時專利申請案案號62/655,862之優先權益。上述各臨時專利申請案之完整內容已分別以引用之方式併入本文中。
序列表
本申請案包含之序列表已呈ASCII格式電子檔交付，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。該於2018年4月12日製作之ASCII複本名稱為21301-07220_SL.txt，檔案大小為463,147位元組。
本發明提供一種採用靶向HBV之RNAi劑與HBV疫苗之組合治療具有B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。
B型肝炎病毒(HBV)為一種包膜DNA病毒，其會感染肝臟，造成肝細胞壞死、發炎，且為發展出肝硬化與肝細胞癌瘤(HCC)之主要風險因子。世界衛生組織(WHO)估計全世界每年有2億4000萬人感染慢性感染HBV，主要分佈在低收入至中收入國家，其中每年約有650,000人死於HBV感染之併發症。雖然可以取得有效之HBV疫苗且致力於為新生兒接種疫苗已有效降低HBV感染發生率與普及率，但此等計畫多年來並未證實會影響死亡率(2015年預防、照護及治療慢性B型肝炎感染患者之WHO準則，參見apps.who.int/iris/bitstream/10665/154590/1/9789241549059_eng.pdf？ua=1&ua=1)。
已發展出許多種醫療劑來治療HBV，其等可以有效降低HBV感染之疾病負荷，但通常無法治癒，因其無法完全消除病毒之所有複製型，包括共價閉合之環狀DNA(cccDNA)，其駐留在肝細胞核內，並成為病毒複製及病毒RNA轉錄的模板。核苷酸與核苷類似物通常基於其安全性與效力而被視為治療慢性HBV感染之黃金準則，其可有效壓制HBV複製，但無法消除cccDNA，無法防止病毒蛋白質表現，必需長期投藥，而且可能發展出抗性。此外，使用核苷(酸)抑制劑治療時，無法完全減輕仍然會發展出肝細胞癌瘤(HCC)之嚴重風險(約7%儘管接受治療仍在5至7年內發展)。基於干擾素之療法會造成血清轉換並治癒約10至15%患者，允許治療中斷，但該製劑具有嚴重副作用，而且必需長期冷藏保存，以致較不適用於最盛行 HBV感染的國家。
慢性HBV治療進一步受到HBV逃避或壓制免疫反應的能力複雜化，造成持續感染。HBV蛋白質具有抑制免疫性質，其中B型肝炎s抗原(HBsAg)佔感染HBV個體之循環中絕大多數的HBV蛋白質。此外，雖然病毒血症中血清B型肝炎e抗原(HBeAg)之排除(經由血清轉換)或減少與治療後持續控制HBV感染之發展沒有相關性，但感染HBV之血液中血清HBsAg之排除(及血清轉換)已成為對治療之抗病毒反應之公認預後指標，將在治療後調控HBV感染。然而，此點僅發生在小部分接受免疫療法之患者。因此，儘管罕見，仍有可能讓患者具有充分可靠的免疫反應來壓制或清除HBV感染，至少造成功能性治癒該疾病。
本發明提供用於治療B型肝炎病毒(HBV)感染之RNAi劑與HBV疫苗，及治療具有B型肝炎病毒(HBV)感染(例如，慢性HBV感染)之個體之方法，其包括組合療法或治療療程，包括靶向至少一種HBV轉錄物之RNAi劑與醫療性疫苗接種。
因此，本發明在一項態樣中提供一種用於治療B型肝炎病毒(HBV)感染之RNAi劑與HBV疫苗，及治療具有B型肝炎病毒(HBV)感染(例如，慢性HBV感染)之個體之方法。該等方法包括之療程包括對感染HBV之個體投與(例如，依序投與)靶向至少三種HBV轉錄物之RNAi 劑，其中該RNAi劑包含正義股與反義股；包含HBV核心抗原(HBcAg)與HBV表面抗原(HBsAg)之蛋白質系疫苗；及包含編碼HBcAg或HBsAg之表現構築體之核酸系疫苗，其中該構築體所編碼之蛋白質與該蛋白質系疫苗共享抗原表位，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療具有B型肝炎病毒(HBV)感染(例如，慢性HBV感染)之個體之療程。該療程包括使用靶向至少三種HBV轉錄物之RNAi劑，其中該RNAi劑包含正義股與反義股；包含HBV核心抗原(HBcAg)與HBV表面抗原(HBsAg)之蛋白質系疫苗；及包含編碼HBcAg或HBsAg之表現構築體之核酸系疫苗，其中該構築體所編碼之蛋白質與該蛋白質系疫苗共享抗原表位。
一項實施例中，HBcAg蛋白質或其免疫原性片段與出現在蛋白質系疫苗之HBV核心抗原(HBcAg)多肽或其免疫原性片段及/或HBsAg蛋白質或其免疫原性片段共享抗原表位，與出現在蛋白質系疫苗之HBV表面抗原(HBsAg)多肽或其免疫原性片段共享抗原表位。
某些實施例中，該RNAi劑包含至少一種經修飾之核苷酸。
某些實施例中，該核酸系疫苗包含編碼HBcAg與HBsAg之表現構築體。
某些實施例中，該靶向HBV之RNAi劑係投與個體至少兩次。
某些實施例中，該投與個體之靶向HBV之RNAi劑使個體血清中HBsAg降低至少0.5 log 10IU/ml。某些實施例中，該個體在投與第一劑蛋白質系疫苗之前，血清中HBsAg至少降低0.5 log10IU/ml。某些實施例中，該個體在投與第一劑蛋白質系疫苗之前，血清中HBsAg至少降低1 log10IU/ml。某些實施例中，該個體在投與疫苗之前，血清中HBsAg為2 log 10IU/ml或更低。
某些實施例中，投與個體之RNAi劑不超過每週一次。某些實施例中，投與個體之RNAi劑不超過每四週一次。
某些實施例中，該RNAi劑投與個體之劑量為0.01mg/kg至10mg/kg；或0.5mg/kg至50mg/kg；或10mg/kg至30mg/kg。某些實施例中，該RNAi劑投與個體之劑量係選自：0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、與30mg/kg。有些實施例中，該RNAi劑投與個體之劑量約每週一次；約每兩週一次；約每三週一次；約每四週一次；或該RNAi劑投與個體之劑量不超過每週一次；或該RNAi劑投與個體之劑量不超過每四週一次。
某些實施例中，該蛋白質系疫苗包含HBsAg之至少一個決定基與HBcA之至少一個決定基之胺基酸序列。
某些實施例中，該包含編碼HBcAg或HBsAg之表現載體構築體之核酸系疫苗係編碼包含HBsAg之至 少一個決定基(determinant)或HBcAg之至少一個決定基之胺基酸序列。
某些實施例中，HBsAg之決定基包含與SEQ ID NO：22之胺基酸124至147至少90%同一性之序列。某些實施例中，HBsAg之決定基包含與SEQ ID NO：23之胺基酸99至168至少90%同一性之序列。
某些實施例中，HBcAg之決定基所包含之序列包含SEQ ID NO：24之胺基酸80。某些實施例中，該包含SEQ ID NO：24之胺基酸80之序列包含與SEQ ID NO：24之至少胺基酸70至90至少90%同一性之胺基酸序列。某些實施例中，HBcAg之決定基所包含之序列包含SEQ ID NO：24之胺基酸138。某些實施例中，該包含SEQ ID NO：14胺基酸80之序列包含與SEQ ID NO：24之至少胺基酸128至143至少90%同一性之胺基酸序列。某些實施例中，HBcAg之決定基包含與SEQ ID NO：24之至少40、50、60、70、80、90、或100個連續胺基酸至少90%同一性之胺基酸序列。某些實施例中，HBcAg之決定基包含與SEQ ID NO：24之胺基酸18至143至少90%同一性之序列。
某些實施例中，投與個體之蛋白質系疫苗包含劑量為0.1μg至1.0mg之HBcAg與劑量為0.1μg至1.0mg之HBsAg。有些實施例中，該蛋白質系疫苗投與個體之劑量為約每週一次；約每兩週一次；約每三週一次；約每四週一次；或該蛋白質系疫苗投與個體之劑量為不超 過每週一次；或該蛋白質系疫苗投與個體之劑量為不超過每四週一次。
某些實施例中，該HBcAg蛋白質與HBsAg蛋白質係含在單一個調配物中。某些實施例中，該HBcAg蛋白質與HBsAg蛋白質不存在單一個調配物中。某些實施例中，該蛋白質系疫苗包含佐劑。有些實施例中，該佐劑刺激平衡之Th1/Th2反應。某些實施例中，該佐劑係選自：單磷醯基脂質A(MPL)、聚(I：C)、聚ICLC佐劑、CpG DNA、聚ICLC佐劑、STING促效劑、c-二-AMP、c-二-GMP、c-二-CMP；短的鈍端5'-三磷酸dsRNA(3pRNA)Rig-I配體、聚[二(鈉羧酸根乙基苯氧基)磷腈](PCEP))、礬、病毒小體、細胞素、IL-12、AS02、AS03、AS04、MF59、ISCOMATRIX®、IC31®、或Rig-I配體。某些實施例中，該佐劑係選自：聚I：C佐劑、CpG佐劑、STING促效劑、或PCEP佐劑。
某些實施例中，該蛋白質系疫苗係投與個體至少兩次。某些實施例中，該蛋白質系疫苗係投與個體不超過每兩週一次。某些實施例中，該蛋白質系疫苗係在不早於投與個體最後一劑RNAi劑當天才投與個體。某些實施例中，該蛋白質系疫苗係在投與個體最後一劑RNAi劑的同日投與個體。某些實施例中，該蛋白質系疫苗係在不晚於投與個體最後一劑RNAi劑之後一個月內投與個體。某些實施例中，該蛋白質系疫苗係在不晚於投與個體最後一劑RNAi劑之後兩個月內投與個體。某些實施例中，該蛋白質系疫苗係在不晚於投與個體最後一劑RNAi劑之 後三個月內投與個體。
某些實施例中，本發明方法進一步包括在投與至少一劑RNAi劑之後及投與該蛋白質系疫苗之前，測定血清HBsAg含量。亦即，在投與至少一劑RNAi劑之後及投與該蛋白質系疫苗之前，測定個體之血清HBsAg含量。
某些實施例中，本發明方法進一步包括在投與至少一劑RNAi劑之後及投與該蛋白質系疫苗之前，測定血清HBeAg含量。亦即，在投與至少一劑RNAi劑之後及投與該蛋白質系疫苗之前，測定個體之血清HBeAg含量。
某些實施例中，本發明方法進一步包括在投與至少一劑RNAi劑之後及投與該蛋白質系疫苗之前，測定血清HBsAg含量與HBeAg含量。亦即，在投與至少一劑RNAi劑之後及投與該蛋白質系疫苗之前，測定個體之血清HBsAg含量與血清HBeAg含量。
某些實施例中，核酸系疫苗包含HBcAg與HBsAg二者之至少一種編碼表現載體構築體。某些實施例中，該表現構築體促進單一個啟動子表現HBcAg與HBsAg。其他實施例中，表現構築體促進分開之啟動子表現HBcAg與HBsAg。
某些實施例中，至少一個啟動子係選自：呼吸道融合病毒(RSV)啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、PH5啟動子、與H1啟動子。某些實施例中，表現構築體 包含病毒載體。某些實施例中，病毒載體係選自：腺病毒載體；反轉錄病毒載體、慢病毒載體、莫洛尼氏(moloney)鼠類白血病病毒載體、腺相關病毒載體；單純皰疹病毒載體；SV 40載體；多瘤病毒載體；乳頭狀瘤病毒載體；微小核糖核酸病毒載體；痘病毒載體、正痘病毒載體、牛痘病毒載體、經修飾之安卡拉(Ankara)(MVA)載體、鳥痘載體、金絲雀痘載體、雞痘載體、腺病毒載體、與EB(Epstein Barr)病毒載體。某些實施例中，病毒載體為MVA載體。
某些實施例中，投與個體之核酸系疫苗包含組織培養感染劑量(TCID50)為106至1010 TCID50；或106至109 TCID50；或106至108 TCID50。
某些實施例中，投與個體之核酸系載體係在不早於投與最後一劑蛋白質系疫苗之後至少2週才投與個體。
某些實施例中，該等方法進一步包括在投與至少一劑RNAi劑之後及投與核酸系疫苗之前，測定血清HBsAg含量。亦即，在投與至少一劑RNAi劑之後及投與核酸系疫苗之前，測定個體之血清HBsAg含量。某些實施例中，核酸系疫苗係在投與個體至少一劑蛋白質系疫苗之後之血清HBsAg進一步降低至少0.5 log 10後，才投與個體。某些療程之實施例中，係投與個體單劑核酸系疫苗。
某些實施例中，該等方法進一步包括在投與至少一劑RNAi劑之後及投與核酸系疫苗之前，測定血清HBeAg含量。亦即，在投與至少一劑RNAi劑之後及投 與核酸系疫苗之前，測定個體之血清HBeAg含量。某些實施例中，在投與個體至少一劑蛋白質系疫苗之後之血清HBeAg進行降低至少0.5 log 10之後，才將核酸系疫苗投與個體。某些療程之實施例中，係投與個體單劑核酸系疫苗。
某些實施例中，該等方法進一步包括在投與至少一劑RNAi劑之後及投與核酸系疫苗之前，測定血清HBsAg含量與HBeAg含量。亦即，在投與至少一劑RNAi劑之後及投與核酸系疫苗之前，測定個體血清HBsAg含量與血清HBeAg含量。某些實施例中，在投與個體至少一劑蛋白質系疫苗之後之血清HBsAg與血清HBeAg進一步降低至少0.5 log 10之後，才將核酸系疫苗係投與個體。某些療程之實施例中，係投與個體單劑核酸系疫苗。
某些實施例中，該等方法進一步包括至少在投與靶向HBV之iRNA之前，對個體投與核苷(酸)類似物。某些實施例中，核苷(酸)類似物係在整個療程中投與。某些實施例中，核苷(酸)類似物係選自：替諾福韋二吡呋酯(Tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide)(TAF)、拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、替比夫定(Telbivudine)、AGX-1009、恩曲他濱(emtricitabine)、克拉夫定(clevudine)、利托那韋(ritonavir)、迪夫昔(dipivoxil)、洛布卡韋(lobucavir)、泛維爾(famvir)、FTC、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇 (theradigm)-HBV、胸腺素-α、及更昔洛韋(ganciclovir)、貝斯福韋(besifovir)(ANA-380/LB-80380)、與替諾福韋(tenofovir-exaliades)(TLX/CMX157)。
某些實施例中，在投與RNAi劑之前，個體具有之血清HBsAg低於3000IU/ml。某些實施例中，在投與RNAi劑之前，個體具有之血清HBsAg低於4000IU/ml。某些實施例中，在投與RNAi劑之前，個體具有之血清HBsAg低於5000IU/ml。
某些實施例中，在投與RNAi劑之後及在投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量減少至少2 log10級數。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及在投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBeAg含量減少至少1 log10級數。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及在投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量減少至少2 log10級數，及HBeAg含量減少至少1 log10級數。
某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量降至500IU/ml或更低。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量降至200IU/ml或更低。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量降至100IU/ml或更低。
某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBeAg含量降至500 IU/ml或更低。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBeAg含量降至200IU/ml或更低。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBeAg含量降至100IU/ml或更低。
某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量與HBeAg含量降至500IU/ml或更低。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量與HBeAg含量降至200IU/ml或更低。某些實施例中，在投與RNAi劑之後及投與第一劑蛋白質系疫苗之前，個體之HBsAg含量與HBeAg含量降至100IU/ml或更低。
某些實施例中，在核酸系疫苗之劑量結束之後，個體之血清HBsAg與HBeAg含量係降至低於使用臨床分析法之檢測程度連續至少三個月。某些實施例中，在核酸系疫苗之劑量結束之後，個體之血清HBsAg與HBeAg含量降至低於使用臨床分析法之檢測程度連續至少六個月。
某些實施例中，在核酸系疫苗之劑量結束之後，個體之血清HBsAg降至低於使用臨床分析法之檢測程度連續至少六個月。
某些實施例中，該等方法進一步包括對個體投與免疫刺激劑。某些實施例中，免疫刺激劑係選自以下各者所組成群組：聚乙二醇基化干擾素α2a (PEG-IFN-α-2a)、干擾素α-2b、PEG-IFN-α-2b、干擾素λ重組人類間白素-7、與類Toll受體3、7、8或9(TLR3、TLR7、TLR8、TLR9)促效劑、病毒進入抑制劑、Myrcludex、抑制HBsAg分泌或釋出之寡核苷酸、REP 9AC、衣殼抑制劑、Bay41-4109、NVR-1221、cccDNA抑制劑(IHVR-25)、病毒衣殼、MVA衣殼、免疫檢查點調節劑、CTLA-4抑制劑、易普利單抗(ipilimumab)、PD-1抑制劑、諾福路單抗(Nivolumab)、培伯利單抗(Pembrolizumab)、BGB-A317抗體、PD-L1抑制劑、艾索利單抗(atezolizumab)、艾福路單抗(avelumab)、杜拉福單抗(durvalumab)、與黏合素(affimer)生物醫療劑。
某些療程之實施例中，個體為人類。
某些療程之實施例中，RNAi劑靶向HBV之四種轉錄物。某些實施例中，RNAi劑係選自：附錄A中之iRNA。某些實施例中，RNAi劑係選自：附錄A表2至11中任一個表之任一製劑。某些實施例中，RNAi劑靶向SEQ ID NO：1(NC_003977.1)之核苷酸206至228、207至229、210至232、212至234、214至236、215至237、216至238、226至248、245至267、250至272、252至274、253至275、254至276、256至278、258至280、263至285、370至392、373至395、375至397、401至423、405至427、410至432、411至433、422至444、424至446、425至447、426至448、731至753、734至756、1174至1196、1250至1272、1255至1277、1256至1278、1545 至1567、1547至1569、1551至1571、1577至1597、1579至1597、1580至1598、1806至1825、1812至1831、1814至1836、1829至1851、1831至1853、1857至1879、1864至1886、2259至2281、2298至2320、或2828至2850中至少15個連續核苷酸。某些實施例中，RNAi劑靶向SEQ ID NO：1(NC_003977.1)之核苷酸1579至1597或1812至1831中至少15個連續核苷酸。某些實施例中，RNAi劑靶向SEQ ID NO：1(NC_003977.1)之核苷酸1579至1597或1812至1831。
某些實施例中，RNAi劑之反義股包含UGUGAAGCGAAGUGCACACUU(SEQ ID NO：25)或AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU(SEQ ID NO：26)中至少15個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之反義股包含UGUGAAGCGAAGUGCACACUU(SEQ ID NO：25)或AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU(SEQ ID NO：26)中至少19個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之反義股包含UGUGAAGCGAAGUGCACACUU(SEQ ID NO：25)或AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU(SEQ ID NO：26)之核苷酸序列。
某些實施例中，RNAi劑之正義股包含GUGUGCACUUCGCUUCACA(SEQ ID NO：27)或CACCAUGCAACUUUUUCACCU(SEQ ID NO：28)中至少15個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之正義股包含GUGUGCACUUCGCUUCACA(SEQ ID NO： 27)或CACCAUGCAACUUUUUCACCU(SEQ ID NO：28)中至少19個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之正義股包含GUGUGCACUUCGCUUCACA(SEQ ID NO：27)或CACCAUGCAACUUUUUCACCU(SEQ ID NO：28)之核苷酸序列。
某些實施例中，RNAi劑之反義股包含UGUGAAGCGAAGUGCACACUU(SEQ ID NO：25)中至少15個連續核苷酸之核苷酸序列，及正義股包含GUGUGCACUUCGCUUCACA(SEQ ID NO：27)中至少15個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之反義股包含UGUGAAGCGAAGUGCACACUU(SEQ ID NO：25)中至少19個連續核苷酸之核苷酸序列，及正義股包含GUGUGCACUUCGCUUCACA(SEQ ID NO：27)中至少19個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之反義股包含UGUGAAGCGAAGUGCACACUU(SEQ ID NO：25)之核苷酸序列，及正義股包含GUGUGCACUUCGCUUCACA(SEQ ID NO：27)之核苷酸序列。
某些實施例中，RNAi劑之反義股包含AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU(SEQ ID NO：26)中至少15個連續核苷酸之核苷酸序列，及RNAi劑之正義股包含CACCAUGCAACUUUUUCACCU(SEQ ID NO：28)中至少15個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之反義股包含AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU(SEQ ID NO：26)中至少19個連續核苷酸之核苷酸序列，及RNAi 劑之正義股包含CACCAUGCAACUUUUUCACCU(SEQ ID NO：28)中至少19個連續核苷酸之核苷酸序列。某些實施例中，RNAi劑之反義股包含AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU(SEQ ID NO：26)之核苷酸序列，及RNAi劑之正義股包含CACCAUGCAACUUUUUCACCU(SEQ ID NO：28)之核苷酸序列。
某些療程之實施例中，該正義股之實質上所有核苷酸與該反義股之實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係與附接在3’-末端之配體接合。某些實施例中，配體為利用單價鏈結體、二價分支鏈結體、或三價分支鏈結體附接之一或多種GalNAc衍生物。某些實施例中，至少一種該經修飾之核苷酸係選自由以下各者所組成群組：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基修飾之核苷酸、2’-C-烷基修飾之核苷酸、2’-羥基修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O烷基修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
某些實施例中，RNAi劑之至少一股包含至少1個核苷酸之3’突出。某些實施例中，RNAi劑之至少一股包含至少2個核苷酸之3’突出。某些實施例中，RNAi劑之雙股區為15至30對核苷酸長度；17至23對核苷酸長度；17至25對核苷酸長度；23至27對核苷酸長度；19至21對核苷酸長度；21至23對核苷酸長度。
某些實施例中，RNAi劑之各股具有15至30個核苷酸。
某些實施例中，RNAi劑之各股具有19至30個核苷酸。
某些實施例中，配體為
Figure 107113207-A0202-12-0017-4138
 及RNAi劑可視需要接合至如下方案之配體：
Figure 107113207-A0202-12-0017-4139
其中X為O或S。
某些實施例中，正義股包含核苷酸序列5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：29)，及反義股包含核苷酸序列5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：30)；或正義股包含核苷酸序列5’-csasccauGfcAfAfCfuuuuucaccu-3’(SEQ ID NO：31)，及反義股包含核苷酸序列5’-asGfsgugAfaAfAfaguuGfcAfuggugsusu-3’(SEQ ID NO：32)，其中a、c、與u分別為2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2'-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、與2'-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯；as、cs、gs、與us分別為2'-O-甲基腺苷-3’-硫代磷酸酯、2'-O-甲基胞苷-3’-硫代磷酸酯、2'-O-甲基鳥苷-3’-硫代磷酸酯、與2'-O-甲基尿苷-3’-硫代磷酸酯；Af、Cf、Gf、與Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯、與2’-氟尿苷-3’-磷酸酯；及Gfs為2’-氟鳥苷-3’-硫代磷酸酯。某些實施例中，RNAi劑為AD-66810或AD-66816。
某些實施例中，蛋白質系疫苗包含出現在至少4、5、6、7、8、9、或10種HBV基因型之抗原表位。
某些實施例中，核酸系疫苗包含出現在至少4、5、6、7、8、9、或10種HBV基因型之抗原表位。
本發明進一步提供一種使用本文所提供之RNAi劑與疫苗，依據本文所提供之方法來治療具有B型 肝炎病毒感染之個體之方法。某些實施例中，RNAi劑與HBV疫苗係用於製造供治療感染HBV之個體之醫藥。
本發明進一步提供一種套組，其包含本文所提供之RNAi劑與疫苗，並提供治療具有B型肝炎病毒感染之個體之治療療程說明書。
本發明利用下列詳細說明與圖式進一步說明。
第1圖圖解說明約3.2kb雙股HBV基因組之結構。HBV基因組透過RNA中間物發生複製，產生約3.5kb、2.4kb、2.1kb、與0.7kb之4個重疊病毒轉錄物(箭頭表示終止位點)，編碼七種病毒蛋白質(pre-S1、pre-S2、S、P、X、pre-C、與C)之共同3’端係跨越三個讀碼框轉譯。
第2A至2E圖為出示基因轉殖小鼠模式中siRNA壓制HBV之圖式。在投與單次皮下3mg/kg或9mg/kg劑量之對照GalNAc-siRNA(一種不會靶向HBV之siRNA)、AD-66816、或AD-66810後，HBV1.3-xfs小鼠(每組n=6)血清之(2A)HBsAg、(2B)HBeAg、與(2C)HBV-DNA含量。利用RT-qPCR測定肝溶胞物之(2D)總HBV RNA與(2E)3.5kb HBV轉錄物含量，並相對於甘油醛3-磷酸酯脫氫酶(GAPDH)之表現校正。
第3圖圖解出示之投藥療程實驗係在投與針對HBV之醫療性疫苗之前，先使用核苷抑制劑恩替卡韋(Entecavir) (係一種HBV-shRNA)、對照GalNAc-siRNA、AD-66816、或AD-66810前處理HBV1.3-xfs小鼠，分析其效應。
第4A至4C圖為出示HBV1.3-xfs小鼠依據第3圖所示投藥療程處理後之血清中(4A)HBsAg、(4B)HBeAg、與(4C)HBV-DNA之含量之圖式。
第5A至5F圖為出示HBV1.3-xfs小鼠依據第3圖所示投藥療程處理後，其肝中對抗肽(5A)HBs(S208)、(5B)HBc(C93)、與(5C)MVA(B8R)之T細胞免疫反應之圖式。第5D至5F圖出示第5A至5C圖之相同數據之再次分析，以配合未充分排除之死的免疫細胞，並顯示肝中對抗肽(5D)HBs(S208)、(5E)HBc(C93)、與(5F)MVA(B8R)之T細胞免疫反應。
第6A至6C圖出示HBV1.3-xfs小鼠依據第3圖所示投藥療程處理後之肝細胞中HBV RNA與蛋白質含量。第6A圖出示總HBV RNA。第6B圖出示RT-qPCR所測定，相對於GAPDH之HBV 3.5kb轉錄物含量。第6C圖出示採用免疫組織化學染色法所檢測肝切片，每mm2之HBcAg陽性細胞數。
第7圖圖解出示之投藥療程實驗係在投與針對HBV之醫療性疫苗之前，使用對照siRNA或AD-66816前處理HBV1.3-xfs小鼠，分析其效應。
第8A至8C圖為出示HBV1.3-xfs小鼠依據第7圖所示投藥療程處理後之血清中(8A)HBsAg、(8B)HBeAg、與(8C)HBV-DNA含量之圖式。
第9A至9D圖為出示HBV1.3-xfs小鼠依據第7圖所示投藥療程處理後，肝中對抗肽(9A)HBs(S208)、(9B)HBc(C93)、(9C)HBc(Cpool)與(9D)MVA(B8R)之T細胞免疫反應之圖式。
第10A至10C圖出示HBV1.3-xfs小鼠依據第7圖所示投藥療程處理後，肝細胞中HBV RNA含量與蛋白質含量。第10A圖出示總HBV RNA。第10B圖出示RT-qPCR所測定，相對於GAPDH之HBV 3.5kb轉錄物含量。第10C圖出示採用免疫組織化學染色法所檢測肝切片，每mm2之HBcAg陽性細胞數。
第11A與11B圖為出示個別HBV1.3-xfs小鼠在第7圖所提供投藥療程之6週療程後，在第一劑疫苗之後第7週，血清中(11A)HBsAg與(11B)HBeAg含量之圖式。
第11C與11D圖為出示個別HBV1.3-xfs小鼠在第7圖所提供投藥療程之6週療程後，在第一劑疫苗之後第7週，肝中對抗HBs(S208)之(11C)抗HBs抗體反應與(11D)T細胞免疫反應之圖式。
第12圖圖解出示之投藥療程實驗係在投與針對HBV之醫療性疫苗之前，使用對照siRNA或AD-66816前處理已感染AAV載體之小鼠，分析其效應。
第13A至13G圖係依據第12圖提供之投藥療程。第13A與13B圖為出示HBV-AAV小鼠血清中(13A)HBsAg與(13B)HBeAg含量之圖式(插第13C圖為第13B圖中之稍後時間點之放大部分)。第13D圖出示第22週之血清HBV DNA含量。第13D與13E圖出示在第22週時，(13D)總HBV DNA與(13E)AAV-DNA之每個肝細胞之複本數。第13F與13G圖出示肝中(13F)HBV 3.5 RNA相對於GAPDH RNA及(13G)總HBV RNA相對於GAPDH RNA之相對表現。
第14A至14C圖為出示依據第12圖提供之投藥療程，(14A)實驗全程之抗HBs抗體反應及(14B)實驗第116天之抗HBe抗體反應。第14C圖為第14B圖中延至稍後時間點之外插圖。
第15A與15B圖出示依據第12圖提供之投藥療程，動物在實驗全程之(15A)ALT含量與(15B)體重。
本文已提供正式之序列表，其形成本說明書之一部分。
本文提供附錄A，其提供siRNA所靶向標靶序列與iRNA劑之實例，並形成本說明書之一部分。
本發明提供使用iRNA劑之治療療程與方法，其效應在於由RNA-誘發靜默複合物(RISC)介導裂解一或多種HBV基因之RNA轉錄物(開放讀碼框/轉錄物)，並提供B型肝炎疫苗，刺激對抗一或多種HBV蛋白質之免疫反應，以治療HBV感染。該治療療程與方法較佳係在限定時間期內提供功能性治癒。
下列詳細說明揭示如何製造及使用包含iRNA以抑制HBV基因表現之組成物，及供治療罹患可能 因抑制或降低HBV基因表現而受益之疾病與病變之個體之組成物、用途與方法。
I.定義
為了更容易了解本發明，首先定義某些術語。此外應注意，不論何時出示之參數數值或數值範圍，其均指示該出示數值及該範圍之間之數值與範圍亦為本發明一部分。
本文所採用冠詞「一(a)」與「一(an)」係指該文法上主詞為一個或超過一個(亦即，至少一個)。例如，「一個元素」係指一個元素或超過一個元素，例如，複數個元素。
本文所採用術語「包括」意指片語「包括(但不限於)：」，並可與其交換使用。
本文所採用術語「或」意指「與/或」，並可與其交換使用，除非另有說明。
本為所採用術語「約」意指在發明所屬技術領域之典型容忍範圍內。例如，咸了解「約」在平均值之2個標準偏差內。某些實施例中，「約」意指+/-10%。某些實施例中，「約」意指+/-5%。當「約」出現在一系列數字或範圍之前時，咸了解，「約」可修飾該系列或範圍內之每一個數字。
咸了解，數字或一系列數字之前之術語「至少」係包括與該術語「至少」相鄰之數字，及邏輯上包括在內之實質上所有接續數字或整數，可從內文中了解。例 如，核酸分子中之核苷酸數目必需為整數。例如，「21個核苷酸之核酸分子中之至少18個核苷酸」意指18、19、20、或21個核苷酸具有所指示之性質。當「至少」出現在一系列數字或範圍之前時，咸了解「至少」可修飾該系列或範圍中每一個數字。
本文所採用「不多於」或「低於」咸了解係指與該片語相鄰且邏輯上較低之數值或整數，以內文邏輯而言，可低達零。例如，具有「不多於2個核苷酸」之突出之雙螺旋具有2、1、或0個核苷酸突出。當「不多於」出現在一系列數字或範圍之前時，咸了解，「不多於」可修飾該系列或範圍內每個數字。本文所採用範圍同時包括上限與下限。
若序列與其在轉錄物或其他序列指定之位點之間有矛盾時，以本說明書中指示之核苷酸序列優先。
發明所屬技術領域中之技術人員可以適當決定本發明各種不同實施例之組合。
本文所採用術語「B型肝炎病毒」可與術語「HBV」交換使用，係指發明所屬技術領域中習知之非細胞病變性之屬於肝病毒科(Hepadnaviridae)之嗜肝性DNA病毒。
HBV基因組係部分雙股且具有重疊讀碼框之環狀DNA(參見例如，第1圖)。
由HBV基因組編碼之轉錄物依據大小，有四種轉錄物(本文可稱為「基因」或「開放讀碼框」)。此 等包含稱為C、X、P、與S之開放讀碼框。核心蛋白質係由基因C編碼(HBcAg)。B型肝炎e抗原(HBeAg)係由前-核心(前-C)蛋白質經過蛋白質水解過程產生。DNA聚合酶係由基因P編碼。基因S為編碼表面抗原之基因(HBsAg)。HBsAg基因為一個長的開放讀碼框，其在框內包含三個「起始」(ATG)密碼子，產生三種不同大小之多肽，稱為大、中、與小型S抗原、pre-S1+pre-S2+S、pre-S2+S、或S。表面抗原除了修飾HBV之套膜外，亦為次病毒粒子之一部分，其產量遠超過病毒粒子，並在免疫耐受性及螯合抗抗HBsAg抗體扮演某種角色，藉以讓感染性粒子逃避免疫偵測。該由基因X編碼之非結構性蛋白質之功能並未完全了解，但其在轉錄轉活化與複製扮演某種角色，並與肝癌之發展有關。該蛋白質序列實例提供於隨附之序列表(參見例如，SEQ ID NO：1、3、16、與20)。
HBV為在複製過程中利用反轉錄酶之少數幾種DNA病毒之一，該過程中涉及多個階段，包括進入、脫殼、及轉運病毒基因組至核中。開始時，HBV基因組之複製涉及產生RNA中間物，然後經過逆轉錄，產生DNA病毒基因組。
當細胞感染HBV時，病毒基因組鬆開環狀DNA(rcDNA)轉運至細胞核內，轉化成游離基因體共價閉合環狀DNA(cccDNA)，其作為病毒mRNA之轉錄模板。在轉錄及輸出細胞核後，細胞質病毒前基因組RNA(pgRNA)與HBV聚合酶及衣殼蛋白質組裝形成核衣殼，在內部進行 聚合酶催化之逆轉錄，產生反股DNA，其接著複製成正股DNA，形成後代rcDNA基因組。成熟之核衣殼再使用病毒套膜蛋白質包裝，呈病毒粒子釋出或運至細胞核，透過細胞內cccDNA擴增途徑擴增cccDNA儲庫。cccDNA為HBV複製循環之必要組分，負責建立感染與病毒持續性。
HBV感染造成產生兩種不同粒子：1)感染性HBV病毒本身(或Dane粒子)，其包括由HBcAg組裝之病毒衣殼，並覆蓋由脂質膜與HBV表面抗原組成之套膜，及2)次病毒粒子(或SVP)，其包含沒有感染性之小型與中型B型肝炎表面抗原HBsAg。所產生之每個病毒粒子會釋出超過10,000個SVP至血液中。因此SVP(與其所運載之HBsAg蛋白質)代表血液中絕大多數病毒蛋白質。感染HBV之細胞亦分泌前核心蛋白質(稱為HBV e-抗原(HBeAg))之可溶性蛋白質水解產物。
已測定8種基因型HBV，稱為A至H，及另外兩種基因型I與J，其分別具有不同地理分佈。該病毒係非細胞病變性，具有病毒專一性之細胞免疫性，係曝露到HBV之結果(在肝病緩解6個月後急性感染；或經常與漸進性肝損傷有關之慢性HBV感染)之主要決定基。
術語「HBV」包括任何HBV基因型(A至J)。HBV基因組之參考序列之完整編碼序列可參見例如，GenBank登錄號GI：21326584(SEQ ID NO：1)與GI：3582357(SEQ ID NO：3)。反義序列分別提供於SEQ ID NO：2與4。C、X、P、與S蛋白質之胺基酸序列可參見例如，NCBI 登錄號YP_009173857.1(C蛋白質)；YP_009173867.1與BAA32912.1(X蛋白質)；YP_009173866.1與BAA32913.1(P蛋白質)；及YP_009173869.1、YP_009173870.1、YP_009173871.1、與BAA32914.1(S蛋白質)(SEQ ID NO：5至13)。來自HBV基因型D菌株ayw之蛋白質與DNA序列提供於SEQ ID NO：14至17。來自HBV基因型A菌株adw之蛋白質與DNA序列提供於SEQ ID NO：18至21。
其他HBV mRNA序列實例很容易利用公開之資料庫取得，例如，GenBank,UniProt、與OMIM。可在http：//www.hpa-bioinformatics.org.uk/HepSEQ/main.php進入國際B型肝炎病毒菌株資料庫(International Repository for Hepatitis B Virus Strain Data)。
本文所採用術語「HBV」亦指HBV基因組之天然發生DNA序列變異，亦即基因型A-J與其變體。
本文所採用「抗原表位」亦稱為「抗原決定基」或「決定基」，咸了解係指被免疫系統(明確言之，被抗體、B細胞、與/或T細胞)辨識之蛋白質抗原部分。抗原表位包括構形抗原表位與線性抗原表位。當蛋白質具有足以被抗體、B細胞、與/或T細胞辨識之長度或大小及抗原性之共同胺基酸序列時，其等即具有共享之抗原表位。由MHC I類分子呈現之T細胞抗原表位通常為約8至11個胺基酸長度之肽，而MHC II類分子則呈現約13至17個胺基酸長度之更長肽。構形抗原表位通常不連續並跨越較長胺基酸序列。
本文所採用術語「核苷(酸)類似物」或「反轉錄酶抑制劑」係一種DNA複製抑制劑，其在結構上類似核苷酸或核苷且專一性抑制HBV cccDNA複製，且不顯著抑制宿主(例如，人類)DNA複製。此等抑制劑包括替諾福韋二吡呋酯(Tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide)(TAF)、拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、替比夫定(Telbivudine)、AGX-1009、恩曲他濱(emtricitabine)、克拉夫定(clevudine)、利托那韋(ritonavir)、迪夫昔(dipivoxil)、洛布卡韋(lobucavir)、泛維爾(famvir)、FTC、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇(theradigm)-HBV、胸腺素-α、更昔洛韋(ganciclovir)、貝斯福韋(besifovir)(ANA-380/LB-80380)、與替諾福韋(tenofvir-exaliades)(TLX/CMX157)。某些實施例中，核苷(酸)類似物為恩替卡韋(Entecavir)(ETV)。核苷(酸)類似物可自許多來源取得商品並依據其標示用於本文提供之方法(例如，通常經口投與特定劑量)或由發明所屬技術領域中者決定用於治療HBV。
本文所採用「標靶序列」係指在HBV轉錄物轉錄期間所形成mRNA分子之核苷酸序列中之連續部分，包括作為主要轉錄產物之RNA處理產物之mRNA。一項實施例中，序列之標靶部分之長度應為足以作為受質之長度，可在HBV轉錄物轉錄期間所形成mRNA分子之部分核苷酸序列位置或附近位置接受iRNA所主導之裂解。一項實 施例中，該標靶序列在HBV轉錄物之蛋白質編碼區內。
標靶序列可為約9至36個核苷酸之長度，例如，約15至30個核苷酸之長度。例如，標靶序列可為約15至30個核苷酸、15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22個核苷酸之長度。上述範圍與長度之間之範圍與長度亦包括為本發明之一部分。
本文所採用術語「包含序列之股」係指包含核苷酸鏈之寡核苷酸，其係採用標準核苷酸命名法之序列說明。
「G」、「C」、「A」、「T」與「U」分別一般表示核苷酸，其分別包含鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸苷與尿嘧啶之鹼基。然而，咸了解，術語「核糖核苷酸」或「核苷酸」亦指經修飾之核苷酸，如下文中進一步說明，或替代之置換部分(moiety)。熟悉發明所屬技術領域者咸了解，鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤與尿嘧啶可在不會實質上 改變該包含帶有此置換部分之核苷酸之寡核苷酸鹼基配對性質下改用其他部分置換。例如(但不限於)，包含肌苷作為其鹼基之核苷酸可與包含腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶之核苷酸形成鹼基對。因此，如本發明所說明特徵之dsRNA之核苷酸序列中包含尿嘧啶、鳥嘌呤或腺嘌呤之核苷酸可被包含例如，肌苷之核苷酸置換。另一項實例中，寡核苷酸中之任何腺嘌呤與胞嘧啶均可分別被鳥嘌呤與尿嘧啶置換，與標靶mRNA形成G-U搖擺鹼基對。包含此等置換部分之序列適合如本發明所說明特徵之組成物與方法。
本文所採用術語「RNAi劑」、「iRNA劑」、「「siRNA劑」等等為雙股RNA，其較佳係靶向保留在所有HBV血清型之HBV基因組中之區域，且較佳係設計用於藉由抑制一種以上HBV轉錄物之表現來抑制HBV生命循環之所有步驟，例如，病毒之複製、組裝、分泌，及病毒抗原之分泌。特定言之，由於HBV基因組之轉錄造成多順反子之重疊RNA，本發明用於靶向單一HBV轉錄物之RNAi劑較佳係造成顯著抑制大多數或所有HBV轉錄物之表現。所有HBV轉錄物係至少部分重疊且共享相同聚腺苷酸化訊號。因此，所有病毒轉錄物具有相同3'端，且因此本發明靶向X基因之RNAi劑將靶向所有病毒轉錄物，應會造成不僅抑制X基因表現，而且抑制所有其他病毒轉錄物(包括前基因組RNA(pgRNA))之表現。此外，本發明RNAi劑已設計用於藉由靶向pgRNA、HBV結構基因、聚合酶、與HBV X基因來抑制HBV病毒複製。此外，其已設計用 於介導在可影響免疫耐受性之SVP與其他病毒蛋白質之靜默，藉以讓個體之免疫系統偵測到病毒抗原之存在並作出反應，因此即可建立調控及清除HBV感染之免疫反應。在不希望受到理論限制下，咸信上述性質與特定標靶位點與/或特定修飾在此等RNAi劑中之組合或次組合賦予本發明RNAi劑改良之效力、安定性、安全性、藥效與耐久性。此等製劑提供於例如，PCT公開案案號WO 2016/077321、WO 2012/024170、WO 2017/027350、與WO 2013/003520，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。RNAi劑之標靶位點實例及RNAi劑實例已提供於一併提出之附錄A，其形成本說明書之一部分。術語RNAi劑進一步包括shRNA，例如，腺相關病毒(AAV)8載體在人工微(小)RNA中，在肝專一性啟動子調控下傳遞shRNA；可視需要共同傳遞導向shRNA正義股以約束脫靶基因調節作用之誘餌(「TuD」)，已提供於Michler等人，2016(EMBO Mol.Med.,8：1082-1098，已以引用之方式併入本文中)。
iRNA劑之各股之大多數核苷酸可為核糖核苷酸，但如同本文之詳細說明，各股或兩股亦可包括一個或多個非核糖核苷酸，例如，去氧核糖核苷酸與/或經修飾之核苷酸。此外，本說明書所採用「RNAi劑」可能包括經化學修飾之核糖核苷酸；RNAi劑可能在多重核苷酸包括實質修飾。
本文所採用術語「經修飾核苷酸」係指分別獨立具有糖部分基團、經修飾之核苷酸之間鏈結體、與/ 或經修飾之核鹼基之核苷酸。因此，術語「經修飾核苷酸」包括在核苷之間鏈結體、糖部分基團、或核鹼基之取代、加成、或排除例如，官能基或原子。適用於本發明製劑之修飾法包括本文所揭示發明所屬技術領域中已知之所有修飾型態。針對本說明書與申請專利範圍目的，「RNAi劑」包括用於siRNA型分子之任何此等修飾。
本文所採用「醫療性HBV疫苗」等等可為針對一或多種HBV蛋白質之可誘發免疫反應(較佳為效應子T細胞誘發之反應)之肽疫苗、DNA疫苗(包括載體系疫苗)、或細胞系疫苗。較佳係該疫苗為會與多重HBV血清型，較佳為所有HBV血清型交叉反應之多重抗原表位疫苗。發明所屬技術領域中已知許多種醫療性HBV疫苗，且已在各種不同臨床前及臨床發展階段。蛋白質系疫苗包括B型肝炎表面抗原(HBsAg)與核心抗原(HBcAg)疫苗(例如，Li等人，2015,Vaccine.33：4247-4254，已以引用之方式併入本文中)。DNA疫苗實例包括HB-110(Genexine,Kim等人，2008.Exp Mol Med.40：669-676.)、pDPSC18(PowderMed)、INO-1800(Inovio Pharmaceuticals)、HB02 VAC-AND(ANRS)、與CVI-HBV-002(CHA Vaccine Institute Co.,Ltd.)。蛋白質系疫苗實例包括Theravax/DV-601(Dynavax Technologies Corp.)、εPA-44(Chongqing Jiachen Biotechnology Ltd.)、與ABX 203(ABIVAX S.A.)。細胞系疫苗實例包括HPDCs-T免疫療法(Sun Yat-Sen University)。亦已知有組合疫苗與產品，且包括HepTcellTM(FP-02.2疫苗(肽)+ IC31®佐劑(組合肽-寡核苷酸佐劑)(參見美國專利公開案案號2013/0330382、2012/0276138、與2015/0216967，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中))；GS-4774(Gilead，一種融合蛋白質S.核心X疫苗+Tarmogen T細胞免疫刺激劑)、pSG2.HBs/MVA.HBs(蛋白質初免/病毒載體追加，Oxxon Therapeutics)、與蛋白質-初免/經修飾之安卡拉(Ankara)病毒載體-追加(HBsAg與HBsAg蛋白質+HBcAg與HBsAg含於MVA表現載體，Backes等人，2016,Vaccine.34：923-32，及WO2017121791，其揭示內容均以引用方式併入本文中)。
本文所採用術語「佐劑」咸了解係指促進(例如，增強、加速、或延長)針對已投與之抗原之免疫反應之製劑，與其一起投與來誘發長期保護免疫性。針對佐劑本身沒實質免疫反應。佐劑包括(但不限於)：病原體組分、粒狀佐劑、與組合佐劑(參見例如，www.niaid.nih.gov/research/vaccine-adjuvants-types)。病原體組分(例如，單磷醯基脂質A(MPL)、聚(I：C)、聚ICLC佐劑、CpG DNA、c-二-AMP、c-二-GMP、c-二-CMP；短的平滑端5'-三磷酸dsRNA(3pRNA)RIG-1配位體、與乳劑，如，聚[二(鈉羧酸根乙基苯氧基)磷腈](PCEP))，可藉由靶向先天的免疫細胞內側或表面上各種不同受體，協助啟動針對疫苗之早期非專一性或先天的免疫反應。先天的免疫系統影響後天免疫反應，其提供長期保護對抗該疫苗所靶向之病原體。粒狀佐劑(例如，礬、病毒小體、細胞素例如，IL-12)形成極 小粒子，其可刺激免疫系統，亦可增強傳遞抗原至免疫細胞。組合佐劑(例如，AS02、AS03、與AS04(均來自GSK)；MF59(Novartis)；ISCOMATRIX®(CSL Limited)；與IC31®(Altimmune)誘發多重保護性免疫反應。單獨使用時具有適度效應之佐劑可能在共同使用時誘發更強力免疫反應。
本發明較佳實施例中，本發明使用佐劑來促進體液及細胞免疫反應。因此，需要平衡之Th1/Th2助手T細胞反應來支持中和抗體反應及效應子細胞毒性T細胞反應。較佳係由佐劑提供平衡之Th1/Th2反應。某些實施例中，佐劑為以下一或多者：聚I：C佐劑、聚ICLC佐劑、CpG佐劑、STING促效劑(c-二-AMP佐劑、c-二-GMP佐劑、或c-二-CMP佐劑)、ISCOMATRIX®佐劑、PCEP佐劑、與Rig-I-配體佐劑。某些實施例中，佐劑為聚I：C佐劑、CpG佐劑、STING促效劑、或PCEP佐劑。某些實施例中，佐劑不為礬。
本文所採用「免疫刺激劑」為可以與或不與抗原分別獨立投與來刺激免疫反應之製劑。免疫刺激劑包括(但不限於)：聚乙二醇基化干擾素α2a(PEG-IFN-α-2a)、干擾素α-2b、PEG-IFN-α-2b、干擾素λ重組人類間白素-7、與類Toll受體3、7、8或9(TLR3、TLR7、TLR8、TLR9)促效劑、病毒進入抑制劑(例如，Myrcludex)、抑制HBsAg分泌或釋出之寡核苷酸(例如，REP 9AC)、衣殼抑制劑(例如，Bay41-4109與NVR-1221)、cccDNA抑制劑(例如，IHVR-25)。某些實施例中，免疫刺激劑可包括病毒衣殼， 可視需要為空病毒衣殼，例如，MVA衣殼。
免疫刺激劑亦可包括免疫檢查點調節劑。免疫檢查點調節劑可為刺激性或抑制性。本文所採用免疫檢查點調節劑加強免疫反應。免疫檢查點調節劑包括(但不限於)：CTLA-4抑制劑，如易普利單抗(ipilimumab)、PD-1抑制劑，如諾福路單抗(Nivolumab)、培伯利單抗(Pembrolizumab)、與BGB-A317抗體。除了黏合素(affimer)生物醫療劑以外，PD-L1抑制劑尚包括艾索利單抗(atezolizumab)、艾福路單抗(avelumab)、與杜拉福單抗(durvalumab)。
本文所採用「個體」為動物，如哺乳動物，包括靈長類(如：人類、非人類靈長類，例如猴子與黑猩猩)、非靈長類(例如，小鼠模式或可以感染HBV之其他動物模式)。一項實施例中，該個體為人類，如正接受治療或評估如本文所說明可能因降低HBV基因表現及/或複製而受益之疾病、病變或病症之人類。某些實施例中，個體患有慢性B型肝炎病毒(HBV)感染。某些實施例中，個體同時患有慢性B型肝炎病毒(HBV)感染與D型肝炎病毒(HDV)感染。
本文所採用術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指下列有利或所需結果，包括(但不限於)：緩和感染HBV之個體之一或多個症狀，包括(但不限於)：血清HBV DNA或肝HBV ccc DNA之存在、血清或肝HBV抗原，例如，HBsAg或HBeAg之存在。HBV感染之診斷 標準係發明所屬技術領域者。「治療」亦可意指比沒有接受治療時之預期存活性延長存活，或降低發展HCC之風險。
某些實施例中，HBV相關疾病為慢性B型肝炎(CHB)。某些實施例中，個體已感染HBV至少5年。某些實施例中，個體已感染HBV至少10年。某些實施例中，個體在出生時即已感染HBV。患有慢性B型肝炎疾病之個體係免疫耐受性的，患有活性慢性感染併發壞死性發炎肝疾病、在未出現可檢測之壞死性發炎下提高肝細胞轉換率、或在沒有任何活性疾病證據下出現無活性慢性感染，且該等個體亦沒有症狀。患有慢性B型肝炎疾病之個體為HBsAg陽性並具有高病毒血症(
Figure 107113207-A0202-12-0036-57
104個HBV-DNA複本/ml血液)或低病毒血症(<103個HBV-DNA複本/ml血液)。患有慢性活性肝炎之患者，尤指在高複製狀態期間之患者，可能出現類似彼等急性肝炎患者之症狀。CHB個體持續感染HBV係因持續感染ccc HBV DNA的結果。某些實施例中，患有CHB之個體為HBeAg陽性。其他實施例中，患有CHB之個體為HBeAg陰性。
較佳實施例中，治療HBV感染造成「功能性治癒」B型肝炎。本文所採用術語「功能性治癒」咸了解係清除循環中之HBsAg，較佳係伴隨轉化成即使使用臨床相關分析法也沒有可檢測到之HBsAg抗體之狀態。例如，沒有可檢測到之抗體可包括採用化學發光微粒免疫分析法(CMIA)或任何其他免疫分析法測定之訊號低於10mIU/ml，且可稱為抗HBs血清轉換。功能性治癒不需要清除所有複 製型HBV(例如，肝中之cccDNA)。抗HBs血清轉換自發性發生在每年約0.2至1%之慢性感染患者。然而，即使在抗HBs血清轉換之後，仍可能持續10年觀察到低量HBV，此表示發生功能性治癒而非完全治癒。在不受機轉限制下，認為免疫系統可以維持針對HBV。功能性治癒容許中斷HBV感染之任何治療。然而，咸了解，HBV感染之「功能性治癒」可能不足以預防或治療由HBV感染造成之疾病或病症，例如，肝纖維化、HCC、硬化。
個體之HBV基因表現或HBV複製之程度、或疾病標記或症狀之說明中，術語「較低」係指統計上顯著降低此等程度。該降低可為例如，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、或更多。監測HBV感染時，通常使用log10級數來說明抗原血(例如，血清中HBsAg含量)或病毒血(血清中HBV DNA含量)之含量。咸了解，降低1 log10係降低90%(殘留10%)，降低2 log10係降低99%(殘留1%)，依此類推。某些實施例中，疾病標記物係降至檢測程度以下。
某些實施例中，疾病標記物之表現係經正常化，亦即，降至未罹患此等病變之個體之正常範圍內，例如，如ALT或AST之疾病標記物之含量降至未罹患此等病變之個體之正常範圍內之可接受程度。當該疾病相關程度從正常程度升高時，即從正常程度上限值(ULN)計算其變化。當該疾病相關程度從正常程度下降時，即從正常程度下限值(LLN)計算其變化。該下降程度為個體之數值 與正常數值之間之變化百分比。例如，正常AST含量可表示為每公升10至40個單位。若治療前，個體之AST含量為每公升200單位(亦即5倍ULN，比正常上限值每公升高出160單位)，且在治療後，個體之AST含量為每公升120單位(亦即3倍ULN，比正常上限值每公升高出80單位)，則所升高之AST係下降50%(80/160)而趨向正常。
本文所採用術語「抑制」可與「降低」、「靜默」、「下調」、「壓制」及其他類似術語交換使用，且包括任何程度之抑制作用。較佳抑制作用包括統計上或臨床上顯著抑制。
片語「抑制HBV基因表現」係指減弱編碼一多種HBV病毒蛋白質(如，例如，preS1/2-S、preS、S、P、X、preC、與C)、及HBV基因之變異株或突變株之任何HBV轉錄物(例如，3.5kb、2.4kb、2.1kb、或0.7kb轉錄物)。
「抑制HBV基因表現」包括任何顯著程度的抑制HBV基因或轉錄物，例如，至少部分壓制HBV基因S、P、X、或C、或其任何組合，例如，S、P、與C之表現。可依據與HBV基因表現相關之任何變數之程度或程度變化(例如，HBV mRNA含量、HBV蛋白質含量、與/或HBV cccDNA含量)來分析HBV基因之表現。此程度可以在個別細胞中或在一群細胞中(包括例如，衍生自個體之樣本)分析，例如，可在血清中監測含量。
本發明方法之有些實施例中，係抑制HBV 基因表現至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、或至分析檢測程度以下。較佳實施例中，抑制HBV基因表現之結果為臨床上相關抑制基因表現程度，例如，充分抑制，以便讓疫苗具有有效之免疫反應來對抗HBV蛋白質。
對HBV基因表現之抑制性可由其中HBV基因已轉錄且已接受處理(例如，由細胞或細胞群與本發明RNAi劑接觸，或對含有該等細胞之個體投與本發明RNAi劑)之第一細胞或細胞群(此等細胞可能存在於例如，衍生自個體之檢體)之RNA表現量下降來表示，因此當與實質上與該第一細胞或細胞群相同，但未曾接受處理之第二細胞或細胞群(對照組細胞(群))比較時，HBV基因表現已受到抑制。較佳實施例中，採用PCT公開案案號WO 2016/077321(其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)之實例2所提供之rtPCR方法分析抑制性，其係於適當匹配之細胞株中，在10nM雙螺旋濃度下，進行活體外分析法，採用下列公式，由處理組細胞之mRNA表現量相對於對照組細胞之mRNA量之百分比來表示：
Figure 107113207-A0202-12-0039-4140
或者，對HBV基因表現之抑制性可藉由功能性連接HBV基因表現之參數之下降程度來分析，例如，如本文所說明。可於經組成性表現或經過基因組工程處理而表現HBV基因之任何細胞中，採用發明所屬技術領域中已知分析法測定HBV基因靜默。
對HBV蛋白質表現之抑制性可由細胞或細胞群之HBV蛋白質表現下降程度來分析(例如，衍生自個體之檢體中之蛋白質表現程度)。如上文中mRNA抑制性分析法之說明，經過處理之細胞或細胞群之蛋白質表現程度之抑制性同樣可由相對於對照組細胞或細胞群或血清中之蛋白質含量之百分比表示。
可用於分析HBV基因表現之抑制性之對照組細胞或細胞群包括未曾與本發明RNAi劑接觸之細胞或細胞群。例如，對照組細胞或細胞群可能衍生自接受RNAi劑治療前之個體(例如，人類或動物個體)。另一項實施例中，可與適當對照樣本(例如，已知族群對照樣本)比較含量。
細胞或細胞群之HBV RNA表現程度或循環中HBV RNA含量可採用發明所屬技術領域中已知用於分析mRNA表現之任何方法測定，較佳為採用PCT公開案案號WO 2016/077321之實例2或本文實例1所提供之rtPCR方法分析。一項實施例中，測定檢體中之HBV基因(例如，總HBV RNA、HBV轉錄物，例如，HBV 3.5kb轉錄物)表現程度時，係檢測轉錄之聚核苷酸或其一部分，例如，HBV基因之RNA。可能採用RNA萃取技術，包括例如，使用酸苯酚/胍異硫氰酸酯萃取法(RNAzol B；Biogenesis)、RNeasy RNA製備套組(Qiagen)或PAXgene(PreAnalytix，瑞士)，從細胞中萃取RNA。利用核糖核酸雜交法之典型分析法包括核連綴分析法、RT-PCR、RNase保護分析法 (Melton等人，Nuc.Acids Res.12：7035)、北方墨點法、原位雜交法、與微陣列分析法。循環中之HBV mRNA可採用PCT公開案案號WO 2012/177906中說明之方法檢測，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
一項實施例中，使用核酸探針測定HBV基因表現程度。本文所採用術語「探針」係指可以選擇性結合專一性HBV基因之任何分子。探針可由熟悉發明所屬技術領域者合成，或衍生自適當之生物製劑。探針可能特別設計帶有標記物。可用為探針之分子實例包括(但不限於)：RNA、DNA、蛋白質、抗體與有機分子。
單離之mRNA可用於雜交或擴增分析法，其包括(但不限於)：南方或北方分析法、聚合酶鏈反應(PCR)分析法、與探針陣列法。其中一種測定mRNA含量之方法涉及由單離之mRNA與可雜交HBV mRNA之核酸分子(探針)接觸。一項實施例中，mRNA係固定在固態表面並與探針接觸，例如，讓單離之mRNA流經瓊脂凝膠，讓mRNA從凝膠轉移至膜如硝基纖維素。另一項實施例中，由探針(群)固定在固態表面，讓mRNA與探針(群)接觸，例如，使用Affymetrix®基因晶片陣列。熟悉發明所屬技術領域者很容易擷用已知之mRNA檢測法來測定HBV mRNA含量。
另一種測定檢體中HBV基因表現程度之方法涉及例如，檢體中mRNA之核酸擴增過程與/或逆轉錄酶(製備cDNA)，例如，RT-PCR(述於Mullis之1987年美 國專利案號4,683,202之實驗實施例)、連接酶鏈反應(Barany(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：189-193)、自主序列複製(Guatelli等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：1874-1878)、轉錄擴增系統(Kwoh等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：1173-1177)、Q-β複製酶(Lizardi等人(1988)Bio/Technology 6：1197)、滾環式複製(Lizardi等人，美國專利案號5,854,033)或任何其他核酸擴增方法，然後採用熟悉發明所屬技術領域者習知之方法檢測擴增之分子。若核酸分子數量極低時，此等檢測程序特別適用於檢測此等核酸分子。本發明特別態樣中，由定量式產螢光式RT-PCR(亦即TaqManTM系統)，例如，採用本文提供之方法，測定HBV基因表現程度。
可使用膜墨點(如用於雜交分析法，如北方、南方、斑點等等)，或微孔、檢體試管、凝膠、珠粒或纖維(或任何包含已結合核酸之固態擔體)監測HBV RNA之表現程度。參見美國專利案號5,770,722、5,874,219、5,744,305、5,677,195、與5,445,934，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。亦包括於溶液中使用核酸探針測定HBV表現程度。
較佳實施例中，採用實時PCR(qPCR)分析RNA表現程度。此等方法之用法舉例說明於本文所出示之實例中。
可採用發明所屬技術領域中已知用於測定蛋白質含量之任何方法測定HBV蛋白質表現程度。此等方 法包括例如，電泳法、毛細管電泳法、高效液相層析法(HPLC)、薄層層析法(TLC)、高擴散性層析法、流體或凝膠沉澱反應、吸光光譜分析計、比色分析法、光譜光度分析法、流式細胞計、免疫擴散法(單相或雙向)、免疫電泳、西方墨點、放射免疫分析法(RIA)、酵素-聯結免疫吸附分析法(ELISA)、免疫螢光分析法、電化學發光分析法等等。
有些實施例中，可藉由檢測或監測HBV感染症狀之下降來監測本發明方法之效力。可採用係發明所屬技術領域中已知之任何方法來分析症狀。
本文所採用術語「B型肝炎病毒相關疾病」或「HBV相關疾病」為由HBV感染或複製所引起或相關之疾病或病變。術語「HBV相關疾病」包括可因降低HBV基因表現或複製而受益之疾病、病變、或病症。HBV相關疾病之無限制實例包括例如，D型肝炎病毒感染；丁型肝炎(hepatitis delta)；慢性B型肝炎；肝纖維化；末期肝病；冷凝球蛋白血症；肝細胞癌瘤。
本文所採用術語「檢體」係指從個體採集或由其製備之類似流體、細胞或單離組織，及個體內之流體、細胞或組織。生物流體實例包括血液、血清、血漿、免疫細胞、淋巴、尿液、唾液等等。組織檢體可包括來自組織、器官或局部區域之檢體。例如，檢體可能衍生自特定器官、器官之一部分、或彼等器官內之流體或細胞。某些實施例中，檢體可能衍生自肝臟(例如，全肝臟或肝臟之某些節段或肝臟中某些細胞型態，如，例如，肝細胞、駐 留型肝免疫細胞)。較佳實施例中，「衍生自個體之檢體」係指從該個體抽出之血液或由其衍生之血漿、血清、或選擇細胞集合(例如，免疫細胞族群)。另一項實施例中，「衍生自個體之檢體」係指得自該個體之肝臟組織(或其次組分)。
本文所採用「編碼序列」咸了解係指編碼特定胺基酸序列之DNA序列。某些實施例中，DNA序列可由RNA序列逆轉錄。某些實施例中，iRNA(例如，shRNA)係靶向編碼序列。
本文所採用術語「合適之調節序列」等等係指位於編碼序列上游(5'非編碼序列)、之內、或下游(3'非編碼序列)之核苷酸序列，其會影響相關編碼序列之轉錄、RNA處理或安定性、或轉譯。調節序列可包括啟動子、轉譯前導序列、插入序列、與聚腺苷酸化辨識序列。
本文所採用「啟動子」係指可以調控編碼序列或功能性RNA之表現之DNA序列。通常，編碼序列位於啟動子序列之3'。啟動子可完全衍生自天然基因，或可由來自天然界之不同啟動子之不同元素組成，或甚至可包含合成之DNA節段。可以選擇啟動子來促進編碼序列在特定細胞型態中或在不同發展階段之表現，或因應不同環境條件之表現。某些實施例中，啟動子為在肝臟中有活性之啟動子，例如，肝專一性啟動子。許多啟動子序列係發明所屬技術領域中已知，且適當啟動子序列之選擇係彼等發明所屬技術領域中之技術人員之專業能力範圍內。
術語「以可操縱方式連接」係指連結單一核酸片段之核酸序列，以致其中之一之功能會受到另一者之影響。例如，當啟動子可以影響編碼序列之表現(亦即編碼序列在啟動子之轉錄調控下)時，則其係以可操縱方式連接編碼序列。
本文所採用術語「表現」係指轉錄及穩定累積正義(mRNA)或反義RNA、或由該技術之核酸片段衍生之RNAi劑(例如，shRNA)。「過度表現」係指在基因轉殖或重組有機體中之基因產物產量超過正常或未經轉化有機體之產量。
本文所採用「表現載體」或「表現構築體」係指核酸中之編碼序列以可操縱方式連接啟動子序列，以讓編碼序列在啟動子之調控下表現。表現載體包括(但不限於)：病毒載體或質體載體。傳遞表現載體進入細胞中之方法係發明所屬技術領域中已知者。
II. 本發明之治療方法
本發明提供依序使用可降低HBV基因表現之製劑(例如，影響RNA誘發靜默複合物(RISC)所介導裂解一或多個HBV轉錄物之iRNA劑)與B型肝炎疫苗之治療療程與方法，來刺激對抗一或多種HBV蛋白質之免疫反應，供治療HBV感染。該治療療程與方法較佳係在指定時間期內提供功能性治癒HBV。
本文提供之治療療程與方法包括依次投與 醫療劑，以提供治療，較佳係功能性治癒HBV感染。該方法使用之製劑係發明所屬技術領域中已知者。然而，單獨使用製劑無法為大多數個體持續長期降低HBV疾病負荷，例如，降低HBsAg含量至低於2 log10，較佳為1 log10IU/ml或至檢測程度以下。顯著降低HBV疾病負荷，例如，降低HBsAg含量至低於2 log10，較佳為1 log10IU/ml或至檢測程度以下，將提供中斷投與醫療劑之機會，並為實質多數個體提供功能性治癒HBV。在不受機轉限制下，提出本文提供之治療療程與方法，包括投與靶向HBV之iRNA劑，使個體內之HBV抗原與核酸實質上降低充分幅度與足夠的持續時間，以便藉由投與多重劑量醫療性疫苗來誘發有效免疫反應。本文所提供療程與方法可為顯著數量之個體，較佳為至少30%、40%、50%、60%、或70%之個體，實質降低疾病負荷及功能性治癒。
採用感染HBV之基因轉殖小鼠模式HBV1.3 xfs來評估本文所提供之組合療法。初步實驗證實靶向HBV之兩種經不同化學修飾之GalNAc-iRNA劑(AD-66816與AD-66810)在單次皮下投與劑量3mg/kg或9mg/kg下，可依類似效力抑制血清中HBsAg與HBeAg蛋白質含量、與HBV DNA，長達至少21天。使用非-HBV iRNA對照物時，沒有觀察到顯著減弱(參見第2圖)。依據此結果，在組合療法試驗中選擇低於3mg/kg之劑量。
第一次組合療法試驗(參見第3圖)中，小鼠經以下6種治療療程之一者前處理(每組n=6)： (1)無處理；(2)於第0週第一天開始至試驗全程，含1μg/ml恩替卡韋(Entecavir)之水；(3)於第0、4、8、與12週之第一天，劑量3mg/kg之對照iRNA劑；(4)於第0週第一天，單劑編碼靶向HBV之shRNA之表現載體(HBV-shRNA)(Michler等人，2016)；或(5-6)於第0、4、8、與12週之第一天，3mg/kg劑量之AD-66816或AD-66810(通稱HBV-siRNA)。
於第12週與第14週之第一天，取含重組表現之酵母HBsAg(15μg)與表現HBcAg(15μg)之大腸桿菌(E.coli)之混合物，使用31.9μg合成之硫代磷酸化CpGODN 1668(CpG)與25μg聚[二(鈉羧酸根乙基苯氧基)磷腈(PCEP)為佐劑，作為蛋白質初免疫苗接種，經皮下投與所有小鼠(Backes,2016)。
在第16週第一天，取含表現HBsAg或HBcAg之經修飾之安卡拉(Ankara)病毒(各病毒5x107個粒子)之混合物作為追加疫苗，經皮下接種所有小鼠(Backes,2016)。
在第0、2、4、8、12、16、與17週之第一天取得血液檢體，分析HBsAg、HBeAg、與HBV DNA含量。第1、2、與3組之小鼠(假處理、恩替卡韋、對照iRNA劑)觀察到之HBsAg與HBeAg含量結果類似(第4A圖與第4B圖)。HBV-shRNA或HBV-siRNA單獨會造成血清中 HBsAg、HBeAg、與HBV DNA顯著降低。三劑初免-追加(prime boost)疫苗接種流程造成所有組之HBsAg進一步降低，並使HBV-shRNA與HBV-siRNA組中至少有些動物之HBsAg含量降至檢測程度以下。然而，疫苗處理組並未使任何一組的HBeAg含量下降。恩替卡韋單獨處理組之HBV DNA含量降至約定量下限以下，因此沒有檢測到三劑初免-追加疫苗之效應(第4C圖)。假處理與HBV-shRNA、HBV-siRNA、及對照siRNA之處理均使HBV DNA含量下降，且初免-追加疫苗使所有組之HBV-DNA含量進一步下降。此等數據證實RNAi在降低病毒抗原上優於核苷(酸)類似物療法。此外，RNAi與後續疫苗接種之組合對HBsAg與HBV DNA含量之效應大於其等製劑單獨使用時。
在實驗最後一天(第17週第一天)，犧牲小鼠，取出肝臟。採用Backes,2016所提供之方法，檢測針對HBsAg、HBcAg、與MVA病毒粒子之反應，分析肝內CD8+ T細胞效應。接受HBV-shRNA或HBV-siRNA處理之小鼠可以產生對抗HBsAg與HBcAg之CD8+免疫反應(第5A與5B圖)。假處理、恩替卡韋、或對照siRNA組則未觀察到對抗HBV抗原之顯著免疫反應。然而，所有動物均觀察到對抗MVA病毒之類似免疫反應，且與前處理或病毒抗原含量無關(第5C圖)，此表示疫苗接種在所有動物中均同等運作，證實有補體免疫系統的存在。第5A至5C圖所示之數據經過再次分析，以配合第一次分析時未充分排除之死的免疫細胞。第二次分析所得數據(示於第5D至 F圖)再次顯示僅有接受HBV-shRNA或HBV-siRNA前處理之小鼠可以在接種醫療性疫苗後產生HBV專一性CD8+ T細胞，但MVA專一性反應不受前處理影響。第二次分析所減少之變異歸因於更嚴格排除死細胞。此等數據證實RNAi處理，相對於目前使用核苷類似物之標準照護治療法，可以恢復HBV專一性T細胞免疫性，並可在接種醫療性疫苗後誘發HBV專一性CD8 T細胞反應。
亦可分析血清中針對HBV抗原之抗體免疫反應。雖然疫苗僅可在接受HBV-siRNA或HBV-shRNA前處理之動物中誘發T-細胞免疫反應，但直到第17週之分析時間點為止，所有組對抗HBsAg與HBcAg之抗體反應均類似，不受前處理影響。沒有可檢測到之HBeAg抗體反應。此等數據證實高HBV抗原負荷優先抑制HBV專一性T細胞，而非B細胞反應。
亦採用RT-qPCR分析肝中HBV轉錄物之存在，並相對於肝GAPDH轉錄物校正。接受HBV-shRNA或HBV-siRNA處理之小鼠證實HBV轉錄物含量顯著下降(第6A與6B圖)。假處理組與恩替卡韋組或對照siRNA組之間沒有觀察到顯著差異。採用免疫組織化學染色法分析肝切片之核心抗原表現，以評估肝中抗病毒效應(第6C圖)。接種疫苗前未接受前處理之動物中，平均每mm2有83個肝細胞之細胞質表現HBc。此數據與接受恩替卡韋或對照siRNA前處理之動物沒有顯著變化。然而，AAV-shRNA或HBV siRNA前處理動物之細胞質HBcAg陽性細胞數則顯 著減少。此等數據證實RNAi/疫苗接種組合療法不僅壓制血清中抗原，而且壓制肝中病毒抗原表現。
在證實使用shRNA或siRNA壓制HBV抗原表現可以有效加強對HBV疫苗療程之免疫反應後，設計一個試驗來決定壓制HBV抗原的持續時間是否具有加強HBV免疫反應之效應。利用HBV 1.3xfs小鼠模式，小鼠接受HBV-siRNA AD-66816處理8週、6週、或3週，或接受對照siRNA處理8週，經皮下投與3mg/kg/劑，然後如上述投與初免-追加疫苗療程，但其中改用10μg c-二-AMP替代PCEP+CPG作為佐劑(8週組與3週組每組n=6，6週組每組n=6)(參見第7圖)。
第一次投與AD-66816A後，觀察到HBsAg、HBeAg、與HBV DNA之各含量顯著下降(第8A至8C圖)。在追加疫苗處理後，觀察到HBsAg進一步顯著下降，在8週前處理組中觀察到最大幅下降至分析檢測程度以下，代表所有處理組動物之HBsAg含量下降超過5 log10。免疫接種僅使HBV DNA微幅下降(<0.5 log10)，未進一步減少HBeAg含量。此等數據證實接種醫療性疫苗與接種疫苗之前壓制抗原之持續時間期之相關性。重構HBV專一性CD8 T細胞反應需要數週時間，其中6週或較佳係8週前處理造成HBsAg減弱之結果高於3週前處理組。
同樣地，肝中對抗HBsAg與HBcAg之T-細胞反應對應於減弱HBV抗原之持續時間，壓制HBV抗原的持續時間越長，造成越大T-細胞反應(第9A至9C圖)。 所有組均針對MVA病毒抗原觀察到類似反應，與前處理無關(第9D圖)。所有組之抗體反應均類似。
亦採用RT-qPCR分析肝中HBV轉錄物之存在，並相對於肝GAPDH轉錄物校正。前處理持續時間越長，HBV RNA減弱程度越高(第10A與10B圖)。
亦採用免疫組織化學染色法分析肝切片之細胞質HbcAg表現，以評估肝之處理法之抗病毒效應(第10C圖)。在接種疫苗之前先接受對照siRNA前處理之動物平均每mm2有172個肝細胞顯示細胞質表現HBc。在接種疫苗之前壓制HBV時間越長，細胞質HBcAg陽性肝細胞逐漸減少，在8週前處理組中，平均每mm2僅12個細胞質HBcAg陽性肝細胞。此等數據證實在接種疫苗之前壓制抗原時間越長，觀察到HBV專一性CD8+ T細胞反應提高，造成肝中HBV抗原表現下降。為了評估反應持續時間，從接受AD-66816 HBV-siRNA前處理6週的小鼠(n=6)中，在接種追加疫苗後2週與3週時收集血液檢體。6隻小鼠中有三隻之HBsAg含量持續降至分析檢測程度以下(第11A與11B圖)。明確言之，在開始接種疫苗時具有最高HBsAg與HBeAg含量之三隻老鼠(第2、4、與5隻)在接種疫苗之後，顯示抗原效價下降，直到實驗結束。反之，在開始接種疫苗時具有最低抗原效價之三隻老鼠(第1、3、與6隻)之HbsAg進一步下降至檢測限值以下。此等數據證實可能利用本文提供之治療療程達到功能性治癒。此等數據亦顯示，在開始接種疫苗時之抗原含量會影響接種醫 療性疫苗之反應。最後，在不受機轉限制下，此等數據顯示接種醫療性疫苗後之抗原含量下降係受到(至少部分受到)CD8+ T細胞介導。此等數據證實循環中之HBV抗原減弱(例如，HbsAg、HBcAg)，但不會單獨抑制HBV DNA複製，加強針對HBV醫療性疫苗(例如，初免追加醫療性疫苗接種療程)之免疫反應。亦即，使用siRNA前處理可以加強免疫反應，但不可單獨使用核苷(酸)抑制劑，因為該免疫反應係基於CD8+ T-細胞之免疫反應。
需要減弱的強度與持續時間係依例如，個體之疾病負荷程度而定。循環中之抗原含量越高，需要減弱HBV抗原的幅度與持續時間越大，才能加強免疫反應。應從接受醫療性疫苗處理之前的個體中減弱血清HbsAg至少0.5 log 10(IU/ml)，較佳為1 log 10(IU/ml)、1.5 log 10(IU/ml)、2 log 10(IU/ml)、或更多。某些實施例中，投與疫苗之前之血清HBsAg含量不超過2.5 log 10(IU/ml)、2 log 10(IU/ml)、1.5 log 10(IU/ml)。
此外，如本文所證實，HBV抗原減弱持續時間越長，傾向於更強大的免疫反應。因此，投與疫苗之前，血清HBsAg最好減弱至夠低程度持續至少4週、6週、或8週。
設計第二系列實驗，使用腺相關病毒感染系統，在後天感染HBV之小鼠模式中探討siRNA/疫苗接種組合治療療程。此等試驗中，對野生型C57/B16小鼠(9週齡)經i.v.注射2x1010個帶有超長1.2倍之基因型D之 HBV基因組(AAV-HBV1.2)之腺相關病毒血清型8(Adeno-Associated-Virus Serotype 8)(AAV8)基因組等效物(參見例如，Yang等人(2014)Cell and Mol Immunol 11：71)。在經過AAV-轉導後4週(第-28天)開始，在第0、29、與57天，動物接受三劑對照siRNA、或HBV siRNA(HBV AD-66816或AD-66810)處理，然後每一組的半數動物於第57天與第70天接受由初免蛋白質疫苗接種與HbsAg、HbcAg、與10μg c-二-AMP組成之疫苗療程，及於第84天追加MVA-HBs與MVA-HBc。治療療程示於第12圖。
繼AAV-HBV1.2轉導之後，HBsAg與HBeAg值上升至相當於HBV基因轉殖小鼠(HBVxfs)中之程度(參見例如，第13A與13B圖)。經過HBV siRNA處理之小鼠之HBsAg含量平均下降約2 log10級數，且HBeAg含量下降超過1 log10級數，因此HBsAg與HBeAg含量均降至約500IU/ml以下，而對照siRNA則對抗原含量沒有影響。沒有接受疫苗療程但經過其中一種HBV siRNA處理的動物在最後一次施加siRNA後，顯示抗原含量慢慢回升。抗原血在18週後回到基線含量。HBV-siRNA與疫苗療程之組合治療造成持久反應，其使HBsAg與HBeAg在實驗期間均降至檢測限制以下。在追加MVA之前，觀察到HBsAg與HBeAg含量下降，此表示接種蛋白質疫苗可能足以影響治癒。血清與肝中HBV DNA與RNA二者均在HBV-siRNA與疫苗療程之組合治療後顯著下降(第13D至13H圖)。此證實，RNAi介導之壓制作用可以強力降低抗原表現，但 使用疫苗療程治療可以延長反應持續性。
接受對照siRNA之動物僅接受疫苗療程時，抗原含量短暫下降，直到實驗結束時仍在回升中。反之，接受HBV-siRNA與疫苗接種之所有動物中，在開始接種疫苗以後，HBsAg與HBeAg含量降至檢測限值以下。在最後一次施用siRNA之後至少22週最後一個測定時間點，仍舊檢測不到大部分抗原含量(第13A與13B圖)。接受HBV siRNA前處理之動物之血中抗原持續減少，反之接受對照siRNA前處理的動物之抗原回升，進一步證實僅可在已在接種疫苗之前先降低抗原效價之動物中達到免疫調控。
與血中抗原減少一致的是接受HBV siRNA加疫苗療程處理之動物發展出高效價之抗HBs抗體，並在所有接種動物中造成抗HBs與抗HBe血清轉換(第14圖)。siRNA-前處理動物發展出提高10倍且更恆定之抗HBs效價，可以完全且持續清除血清HBsAg與HbeAg。值得注意的是，在HBV siRNA處理後接種的3/12小鼠，在第15與22週之間，其抗HBe含量顯示短暫下降，造成HBeAg低度復發(第13C圖)，再度受到調控。雖然亦可在接受對照siRNA加疫苗療程之動物中測定抗HBs抗體，但其含量較低。此外，僅有接受HBV siRNA加疫苗療程之動物發展出抗HBe抗體。總言之，無法單獨由siRNA治療療程或醫療性疫苗接種療程達成功能性治癒。然而，血中抗原減少及發展出抗HBs與抗HBe抗體，證實HBV siRNA加疫苗療程之組合可以達成功能性治癒。
實驗全程中，監測動物之ALT與體重。在接受HBV siRNA與疫苗接種療程組合之處理組中，觀察到血中抗原減少及同時ALT活性稍微提高(第15A圖)。此等組相較於所有其他未接受HBV siRNA-疫苗接種療程組合之處理組顯示顯著但中度提高(由重複測定之雙向ANOVA測得均p>0.05或更小；僅在開始接種疫苗後之時間點比較)。在不受機轉限制下，認為被HBV siRNA-疫苗療程組合誘發之CD8+ T細胞殺死表現HBV之肝細胞，造成ALT升高。
在實驗全程測定動物體重，以分析治療法之耐受性。不受siRNA處理的影響，實驗全程的體重均有穩定上升。有接種的動物，在接種疫苗之後顯示體重微幅且短暫下降(約5%)，但在9天內即回升到正常程度，接著上升至相當於對照組(第15B圖)。總言之，ALT活性與體重二者之數據證實所有檢視之處理，包括：僅siRNA、僅疫苗、及siRNA/疫苗療程之組合均有良好耐受性。
要減弱血清中HBsAg含量之siRNA投藥數量與時間依例如，所採用之特定製劑而定。由於本文方法中所採用及於例如，附錄A與PCT公開案案號WO 2016/077321(其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)中所提供之GalNAc siRNA實例之持續性與效力，單劑siRNA可能足以提供投與醫療性疫苗之前需要減弱之程度與持續時間。如第4圖所示，單劑之編碼shRNA之AAV載體足以提供持續減弱HBV抗原與HBV DNA。彼等發明 所屬技術領域中之技術人員可以監測HBV疾病狀態，例如，測定血中HBsAg含量，以決定適合特定個體之siRNA與疫苗投藥時間與投藥量。
許多種醫療性HBV疫苗係發明所屬技術領域中已知者且於本文中討論。較佳實施例中，以初免-追加疫苗接種程序，如，本文採用之程序較佳。然而，本文所提供減弱HBV抗原方法可與發明所屬技術領域中已知之其他醫療性HBV疫苗組合使用，包括彼等不足以單獨使用者。疫苗接種包括至少兩劑呈蛋白質型或核酸型之抗原。某些實施例中，疫苗接種包括三劑蛋白質系疫苗。較佳實施例中，該方法包括投與異源性疫苗，亦即至少一劑蛋白質系疫苗與至少一劑核酸系疫苗。疫苗與投藥療程之實施例提供於例如，PCT公開案案號WO 2017/121791，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
本文所提供方法包括使用核酸系疫苗，其包含編碼HBcAg或HbsAg之表現載體構築體，其中該構築體編碼之蛋白質與該蛋白質系疫苗共享抗原表位。因此，咸了解，未要求核酸系疫苗或蛋白質系疫苗提供全長度蛋白質。要求核酸系疫苗與蛋白質系疫苗提供至少一個存在於HBcAg或HBsAg之共享的抗原表位，並不要求提供全長度蛋白質。如上述，抗原表位可能相當短，MHC I類分子通常為約8至11個胺基酸長度之肽，而MHC II類分子為約13至17個胺基酸長度之更長肽，其構形抗原表位更長。然而，咸了解，較佳係使用蛋白質抗原與蛋白質抗原 之編碼序列(其編碼多重抗原表位)。此外，咸了解，出現在蛋白質系疫苗與由核酸系疫苗編碼之抗原可能相同或可能不同。亦顯然應針對其免疫原性選擇抗原。此等抗原係發明所屬技術領域中熟知者。
某些實施例中，蛋白質系疫苗與核酸系疫苗之投藥順序係與本文所提供方法例舉之順序相反。亦即，先投與核酸系疫苗，其次再投與蛋白質系疫苗。某些實施例中，共投與三劑疫苗，兩劑核酸系疫苗之後再單劑蛋白質系疫苗。另一實施例中，單劑核酸系疫苗之後再兩劑蛋白質系疫苗。其他實施例中，該等疫苗各投與一劑。
較佳實施例中，初免-追加疫苗接種法包括使用佐劑與含蛋白質抗原。該等方法中使用適當佐劑來促進針對抗原之基於細胞反應。佐劑較佳係提供平衡之Th1/Th2反應。
本文所提供siRNA+疫苗法可與投與核苷(酸)抑制劑(其係治療HBV之標準照護法)組合使用。某些實施例中，個體先接受核苷(酸)抑制劑治療後，再接受siRNA+疫苗治療療程處理。某些實施例中，個體全程接受siRNA+疫苗治療療程與核苷(酸)抑制劑處理。某些實施例中，先投與核苷(酸)抑制劑來降低現存與HBV感染相關之發炎，然後再投與靶向HBV之核酸醫療劑(例如，siRNA、shRNA、反義寡核苷酸)。
某些實施例中，個體可使用其他用於治療HBV之製劑前處理或同時處理。此等製劑包括(但不限於)： 免疫刺激劑(例如，聚乙二醇基化干擾素α2a(PEG-IFN-α2a)、干擾素α-2b、重組人類間白素-7、與類Toll受體7(TLR7)促效劑)、病毒進入抑制劑(例如，Myrcludex)、抑制HBsAg分泌或釋出之寡核苷酸(例如，REP 9AC)、衣殼抑制劑(例如，Bay41-4109與NVR-1221)、cccDNA抑制劑(例如，IHVR-25)、Rig-I配體、或免疫檢查點調節劑。某些實施例中，免疫刺激劑為Rig-I配體或免疫檢查點調節劑。功能性治癒包括HBsAg低於50IU/ml持續至少3個月，較佳為6個月，或針對HBsAg有可檢測之抗體反應。較佳實施例中，功能性治癒同時包括HBsAg低於50IU/ml持續至少3個月，較佳為6個月且針對HBsAg有可檢測之抗體反應。
A. 本發明方法所使用之RNAi劑
本發明包括使用iRNA，其抑制至少一種HBV轉錄物，較佳係三或四種HBV轉錄物(開放讀碼框，有時候在本文中稱為基因)之表現。由於HBV基因組之高度緊縮結構，其可能設計單一iRNA來抑制三或四種HBV轉錄物之表現(參見第1圖)。為了簡便起見，本文稱為「一種HBV轉錄物」或「該HBV轉錄物」。咸了解，較佳實施例包括抑制超過一種HBV轉錄物(或開放讀碼框)，較佳為至少三種HBV轉錄物(或開放讀碼框)。此外咸了解，有八種HBV基因型，及兩種另外提出之基因型，其可進一步包括由來自公開之序列之突變。因此，某些iRNA劑可能依據特定基 因型及感染HBV之個體而定，抑制不同數量之基因。
有些實施例中，iRNA劑包括雙股核糖核酸(dsRNA)分子，可在感染HBV之個體細胞中抑制HBV轉錄物表現或降低含量。dsRNA包括之反義股具有之互補區係與HBV轉錄物在表現時所形成mRNA之至少一部分互補。該互補區之長度係約30個核苷酸或更少核苷酸(例如，約30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、或18個核苷酸或更少核苷酸之長度)。當與表現HBV基因之細胞接觸時，該iRNA選擇性抑制至少一種，較佳為三或四種HBV基因之表現。較佳實施例中，依實例中所提供，於適當細胞株中，採用qPCR法測定表現之抑制性。於活體外分析活性時，採用PCT公開案案號WO 2016/077321之實例2提供之方法，在單劑10nM雙螺旋最終濃度下決定抑制百分比。於活體內試驗中，由處理後之含量與例如，適當之歷史對照組或集合族群對照組比較，來決定降低之含量，例如，當無法取得個體之基線值時。必需由發明所屬技術領域中之技術人員小心選擇適當對照組。
dsRNA包括兩個RNA股，其可在dsRNA所採用之條件下互補並雜交形成雙螺旋結構。dsRNA之其中一股(反義股)包括與標靶序列實質上互補(且通常完全互補)之互補區。該標靶序列可衍生自HBV基因表現期間所形成mRNA之序列。已知有多重HBV基因型，iRNA劑較佳係設計成在儘可能多種基因型中抑制HBV基因表現。咸了解，與一或多種HBV基因型完美互補之siRNA將不 會與所有基因型完美互補。另一股(正義股)包括與反義股互補之區，因此當在合適條件下組合時，這兩股可雜交並形成雙螺旋結構。如本文所說明及發明所屬技術領域中已知者，dsRNA之互補序列亦可呈單一核酸分子之自我互補區分別包含在分開之寡核苷酸。
通常，雙螺旋結構之長度為15與30對鹼基，例如，15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22對鹼基長度。上述範圍與長度之間之範圍與長度亦包括為本發明之一部分。
同樣地，標靶序列之互補區之長度為15與30個核苷酸，例如，15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、 19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24,20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22個核苷酸之長度。上述範圍與長度之間之範圍與長度亦包括為本發明之一部分。
有些實施例中，dsRNA為約15至20個核苷酸之長度、或約25至30個核苷酸之長度。通常，dsRNA之長度足以作為Dicer酵素之受質。例如，發明所屬技術領域中已知長度超過約21至23個核苷酸之dsRNA可以作為Dicer之受質。熟悉發明所屬技術領域者咸了解，用於裂解之標靶RNA區最常為較大RNA分子(經常為mRNA分子)之一部分。若相關時，mRNA標靶之「一部分」為mRNA標靶之連續序列，其長度應足以作為RNAi所主導裂解作用(亦即透過RISC途徑裂解)之受質。
發明所屬技術領域中之技術人員亦咸了解，雙螺旋區為dsRNA之主要功能部分，例如，約9至36對鹼基之雙螺旋區，例如，約10至36、11至36、12至36、13至36、14至36、15至36、9至35、10至35、11至35、12至35、13至35、14至35、15至35、9至34、10至34、11至34、12至34、13至34、14至34、15至34、9至33、10至33、11至33、12至33、13至33、14至33、15至33、9至32、10至32、11至32、12至32、13至32、14 至32、15至32、9至31、10至31、11至31、12至31、13至32、14至31、15至31、15至30、15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19-27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19-21、19-20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22對鹼基。因此一項實施例中，為了可供處理成為功能性雙螺旋(例如，15至30對鹼基)以靶向所需裂解之RNA，以具有超過30對鹼基之雙螺旋區之RNA分子或RNA分子之複合物作為dsRNA。因此熟悉發明所屬技術領域者咸了解，在一項實施例中，miRNA為dsRNA。另一項實施例中，dsRNA不為天然miRNA。另一項實施例中，適用於靶向HBV基因表現之iRNA劑不會在標靶細胞中由較大dsRNA裂解產生。
雙螺旋區可為容許透過RISC途徑專一性降解所需標靶RNA之任何長度，其範圍可在約9至36對鹼基長度，例如，約15至30對鹼基長度、例如，約9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或 36對鹼基長度、如，約15至30、15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19-20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22對鹼基長度。上述範圍與長度之間之範圍與長度亦包括為本發明之一部分。
形成雙螺旋結構之兩股可能為一個較大RNA分子之不同部分，或其可能為分開之RNA分子。若這兩股為一個較大RNA分子之一部分，且因此利用形成該雙螺旋結構之其中一股之3’-端與另一股之5’-端之間未中斷之核苷酸鏈連接時，該連接之RNA鏈稱為「髮夾環」。髮夾環可包含至少一個未配對之核苷酸。有些實施例中，髮夾環可包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少20個、至少23個、或更多個未配對之核苷酸。
有些實施例中，本發明dsRNA劑包含四環。本文所採用dsRNA之「四環」係指由四個核苷酸形成的一個環(單股區)，其形成穩定的二級結構，造成相鄰華生-克 里克(Watson-Crick)雜交核苷酸之安定性。在不受理論限制下，四環可以藉由堆疊交互作用安定相鄰之華生-克里克鹼基對。此外，四環中四個核苷酸之間交互作用包括(但不限於)：非華生-克里克鹼基配對、堆疊交互作用、氫鍵、與接觸交互作用(Cheong等人，Nature 199wAug 16；346(6285)：680-2；Heus與Pardi,Science 1991 Jul 12；253(5016)：191-4)。四環賦予相鄰雙螺旋之熔點(Tm)增加高於由四個隨機鹼基組成之簡單模式環序列所預期之熔點。例如，四環可於10mM NaHPO4中賦予熔點達至少55℃，接近包含至少2對鹼基長度之雙螺旋之髮夾。四環可能包含核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸、經修飾之核苷酸、與其組合。RNA四環實例包括UNCG四環家族(例如，UUCG)、GNRA四環家族(例如，GAAA)、與CUUG四環(Woese等人，Proc Natl Acad Sci U S A.1990 Nov；87(21)：8467-71；Antao等人，Nucleic Acids Res.1991 Nov 11；19(21)：5901-5)。DNA四環的突例包括d(GNNA)四環家族(例如，d(GTTA)、d(GNRA))四環家族、d(GNAB)四環家族、d(CNNG)四環家族、d(TNCG)四環家族(例如，d(TTCG))。(Nakano等人，Biochemistry,41(48),14281-14292,2002；Shinji等人，Nippon Kagakkai Koen Yokoshu vol.78th；no.2；p.731(2000))。
本發明某些實施例中，包含四環-與經修飾之核苷酸之dsNA已有說明，例如，說明於美國專利公開案案號2011/0288147，其完整揭示內容已以引用方式併入本文中。某些此等實施例中，本發明dsNA具有第一股與 第二股，其中第一股與第二股形成19至25個核苷酸長度之雙螺旋區，其中該第一股包含3'區，其延伸超出第一股-第二股雙螺旋區，且包含四環，且dsNA在第一股之3'末端與第二股之5'末端之間有中斷。
視需要，該中斷位置在含四環之雙股核酸(dsNA)之計畫Dicer裂解位點。如同本發明任何其他雙螺旋寡核苷酸，本發明含四環之雙螺旋可具有本文所揭示或發明所屬技術領域中已知之任何修飾範圍，包括例如，2'-O-甲基、2'-氟、反轉鹼基、GalNAc部分等等。通常，若含四環-dsNA將不使用脂質奈米粒子或採用某些其他方法傳遞以保護dsNA免於在傳遞過程中被降解時，該含四環之dsNA之兩股上每一個核苷酸係經化學修飾。然而，某些實施例中，一個或多個核苷酸未經修飾。
若dsRNA之兩個實質上互補股包含在分開之RNA分子時，彼等分子不一定需要，但可以共價連結。若這兩股利用其他除了形成該雙螺旋結構之其中一股之3’-端與另一股之5’-端之間未中斷之核苷酸鏈以外之連接方式連接時，該連接結構稱為「鏈結體」。RNA股可能具有相同或不同數量之核苷酸。鹼基對之最高數量即為dsRNA中最短股之核苷酸數量減去雙螺旋中任何突出後之數量。除了雙螺旋結構外，RNAi亦可包含一個或多個核苷酸突出。
本文所說明dsRNA可進一步包括一個或多個單股核苷酸突出，例如，1、2、3、或4個核苷酸。具有 至少一個核苷酸突出之dsRNA令人意外地具有比其鈍端之對應物更優異之抑制性質。核苷酸突出可包含或其組成為核苷酸/核苷類似物，包括去氧核苷酸/核苷。該(等)突出可位於正義股、反義股或其任何組合。此外，突出之核苷酸(群)可出現在dsRNA之反義或正義股之5'-端、3'-端或兩端。某些實施例中，可能為更長之延長突出。
dsRNA可採用發明所屬技術領域中已知標準方法合成。本發明iRNA化合物可採用兩個步驟製程製備。首先，分開製備雙股RNA分子之個別股。然後黏合該組分股。siRNA化合物之個別股可採用溶液相或固體相有機合成法或二者予以製備。某些實施例中，iRNA化合物係由表現載體傳遞至細胞中製成。
一項態樣中，本發明之dsRNA包括至少兩個核苷酸序列，正義序列與反義序列。正義股係由附錄A中任一個表所提供序列所組成之群組選擇，及正義股之對應反義股係由附錄A中任一個表所提供序列所組成之群組選擇。
有些實施例中，正義股係由附錄A中任一個表所提供序列所組成之群組選擇，及正義股之對應反義股係由附錄A中任一個表所提供序列所組成之群組選擇。此態樣中，兩個序列之一係與該兩個序列另一者互補，其中一個序列係與HBV基因表現中所產生mRNA之序列實質上互補。因此，此態樣中，dsRNA將包括兩個寡核苷酸，其中一個寡核苷酸係如附錄A中任一個表中說明之正義股， 及第二個寡核苷酸係如附錄A中任一個表中所說明正義股之對應反義股。一項實施例中，dsRNA之實質上互補序列係包含在分開之寡核苷酸。另一項實施例中，dsRNA之實質上互補序列係包含在單一寡核苷酸。
咸了解，雖然附錄A之表中有些序列說明於經修飾或接合之序列，但本發明iRNA(例如，本發明dsRNA)之RNA可能包含附錄A之表中所示之任何一個序列，其係未修飾、未接合、或經修飾或已接合而與本為所說明者不同。其他標靶位點提供於例如，PCT公開案案號WO 2016/077321、WO 2012/024170、WO 2017/027350、與WO 2013/003520；與Michler,2016，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
發明所屬技術領域中之技術人員咸了解，具有雙螺旋結構約20至23對鹼基，例如，21對鹼基之dsRNA已經被推崇為特別有效用於誘發RNA干擾(Elbashir等人，EMBO 2001,20：6877-6888)。然而，其他人已發現較短或較長RNA雙螺旋結構亦有效(Chu與Rana(2007)RNA 14：1714-1719；Kim等人(2005)Nat Biotech 23：222-226)。上述實施例中，依據附錄A中任一個表所提供之寡核苷酸序列之性質，本文說明之dsRNA可包括至少一股長度至少21個核苷酸。可以合理地期待，由附錄A中任一個表中其中一個序列在一端或兩端減去幾個核苷酸形成之較短雙螺旋相較於上述dsRNA為同樣有效。因此，具有至少15、16、17、18、19、20、或更多 個連續核苷酸序列之dsRNA係衍生自附錄A中任一個表中之一個序列，且其在抑制HBV基因表現之能力，與包含全序列之dsRNA之差異不超過5、10、15、20、25、或30%抑制性。
本文說明之iRNA可包含與標靶序列或與一或多個HBV標靶序列歸因於例如，HBV基因型之間之序列變異而有一個或多個錯配。一項實施例中，本文說明之iRNA包含不超過3個錯配。若iRNA之反義股包含與標靶序列之錯配時，該錯配之區域最好不位在互補區之中心。若iRNA之反義股包含與標靶序列之錯配時，該錯配最好侷限在互補區之5’-或3’-端起之最後5個核苷酸內。例如，對23個核苷酸之iRNA劑而言，作為HBV基因之互補區之該股通常不會在中心13個核苷酸內包含任何錯配。可採用本文說明之方法發明所屬技術領域中已知方法決定包含與標靶序列錯配之iRNA是否可以有效抑制HBV基因表現。具有錯配之iRNA於抑制HBV基因表現之效力考量很重要，尤其若在各種不同基因型與族群中已知HBV基因中之特定互補區具有多形性序列變異時。
i. 本發明方法所使用之經修飾iRNA
有些實施例中，本發明所使用之iRNA(例如，dsRNA)之RNA未經過修飾，且不包含例如，發明所屬技術領域中已知及本文說明之化學修飾與/或接合，例如，當由表現載體產生時。其他實施例中，本發明iRNA(例如，dsRNA)之 RNA係經過化學修飾，以加強安定性或其他有利特性。本發明某些實施例中，本發明iRNA之實質上所有核苷酸均經修飾。本發明其他實施例中，本發明iRNA之所有核苷酸均經修飾。本發明iRNA中「實質上所有核苷酸經修飾」係指大部分，但非全部經修飾，且可包括不超過5、4、3、2或1個未修飾之核苷酸。
如本發明所說明特徵之核酸可採用發明所屬技術領域中習知之方法合成與/或修飾，如彼等說明於「Current protocols in nucleic acid chemistry」,Beaucage,S.L.等人(編輯)，John Wiley & Sons,Inc.,New York,NY,USA，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。修飾法包括例如，末端修飾，例如，5’-端修飾(磷酸化、接合、反向鏈結體)或3’-端修飾(接合、DNA核苷酸、反向鏈結體等等)；鹼基修飾，例如使用安定化鹼基、去安定化鹼基或會與對象之擴張區之鹼基配對之鹼基置換、排除鹼基(脫鹼基核苷酸)、或接合鹼基；糖修飾(例如，在2’-位置或4’-位置)或置換糖；與/或骨架修飾，包括修飾或置換磷酸二酯鏈結基。適用於本文所說明實施例之iRNA化合物之明確實例包括(但不限於)：包含經修飾骨架或沒有天然核苷之間鏈結基之RNA。具有經修飾骨架之RNA特別包括彼等骨架中沒有磷原子者。針對本說明書之目的及發明所屬技術領域中有時候提及者，其核苷之間骨架中沒有磷原子之經修飾RNA亦可視為寡核苷。有些實施例中，經修飾之iRNA將在核苷之間骨架中具有磷原子。
經修飾之RNA骨架包括例如，硫代磷酸酯、對掌性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基磷酸三酯、甲基與其他烷基之膦酸酯(包括膦酸3'-伸烷基酯與對掌性膦酸酯)、次膦酸酯、胺基磷酸酯(包括3'-胺基胺基磷酸酯與胺基烷基胺基磷酸酯)、硫羰基胺基磷酸酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯、與具有正常3'-5'鏈結基之硼代磷酸酯、其2'-5'-鏈結類似物、及彼等具有反向極性者，其中核苷單元之相鄰成對鹼基係依3'-5'鏈結5'-3'或2'-5'鏈結5'-2'。亦包括各種不同鹽類、混合鹽類與游離酸型。
教示上述含磷鏈結基製法之代表性美國專利包括(但不限於)：美國專利案號3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,195；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,316；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；5,625,050；6,028,188；6,124,445；6,160,109；6,169,170；6,172,209；6,239,265；6,277,603；6,326,199；6,346,614；6,444,423；6,531,590；6,534,639；6,608,035；6,683,167；6,858,715；6,867,294；6,878,805；7,015,315；7,041,816；7,273,933；7,321,029；與US Pat RE39464，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
其中不包括磷原子之經修飾RNA骨架所具 有之骨架係由短鏈烷基或環烷基核苷之間鏈結基、混合雜原子、及烷基或環烷基之核苷之間鏈結基、或一個或多個短鏈雜原子或雜環核苷之間鏈結基形成。此等包括彼等具有N-嗎啉基鏈結基(一部分從核苷之糖部分形成)；矽氧烷骨架；硫化物、亞碸與碸骨架；甲醯乙醯基(formacetyl)與硫甲醯乙醯基骨架；亞甲基甲醯乙醯基與硫甲醯乙醯基骨架；含烯烴骨架；胺磺酸根骨架；亞甲基亞胺基及亞甲基肼基骨架；磺酸根與磺醯胺骨架；醯胺骨架；與其他具有混合N、O、S與CH2組分者。
教示上述寡核苷製法之代表性美國專利包括(但不限於)：美國專利案號5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,64,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；與5,677,439，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
其他實施例中，希望包括合適RNA擬似物用於iRNA，其中核苷酸單元之糖與核苷之間鏈結基(亦即骨架)二者均被新穎基團置換。該等鹼基單元維持與適當核酸標靶化合物雜交。其中一種寡聚化合物為已顯示具有優異雜交性質之RNA擬似物，稱為肽核酸(PNA)。PNA化合物中，RNA之糖骨架被包含醯胺之骨架(特定言之胺基乙基甘胺酸骨架)置換。核鹼基則保留並直接或間接結合骨架 之醯胺部分之氮雜態氮原子。教示PNA化合物製法之代表性美國專利包括(但不限於)：美國專利案號5,539,082；5,714,331；與5,719,262，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。適用於本發明iRNA之其他PNA化合物說明於例如，Nielsen等人，Science,1991,254,1497-1500。
如本發明所說明特徵之某些實施例包括具有硫代磷酸根骨架之RNA與具有雜原子骨架之寡核苷，特定言之上述美國專利案號5,489,677之-CH2-NH-CH2-、-CH2-N(CH3)-O-CH2-[稱為亞甲基(甲基亞胺基)或MMI骨架]、-CH2-O-N(CH3)-CH2-、-CH2-N(CH3)-N(CH3)-CH2-與-N(CH3)-CH2-CH2-[其中天然磷酸二酯骨架係由-O-P-O-CH2-表示]，與上述美國專利案號5,602,240之醯胺骨架。有些實施例中，如本文所說明特徵之RNA具有上述美國專利案號5,034,506之N-嗎啉基骨架結構。
經修飾之RNA亦可包含一個或多個經取代之糖部分基團。為本文主要特徵之該等iRNA(例如，dsRNA)可包括在2'-位置具有下列其中一項：OH；F；O-、S-、或N-烷基；O-、S-、或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中該烷基、烯基與炔基可為經取代或未經取代之C1至C10烷基或C2至C10烯基與炔基。合適修飾實例包括O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2).nOCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2、與O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2，其中n與m為1至約10。其他實施例中，dsRNA在2'-位置具有下列其中一項：C1至C10低碳數烷基、經取代之低 碳數烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、雜環烷基、雜環烷芳基、胺基烷基胺基、聚烷基胺基、經取代之矽基、RNA裂解基團、報導子基團、嵌入劑、改善iRNA之藥物動力學性質之基團、或改善iRNA之藥效學性質之基團、及具有類似性質之其他取代基。有些實施例中，該修飾包括2'-甲氧基乙氧基(2'-O-CH2CH2OCH3，亦稱為2'-O-(2-甲氧基乙基)或2'-MOE)(Martin等人，Helv.Chim.Acta,1995,78：486-504)，亦即烷氧基-烷氧基。另一種修飾實例為2'-二甲基胺基氧基乙氧基，亦即O(CH2)2ON(CH3)2基團(亦稱為2'-DMAOE，其說明於下文實例中)與2'-二甲基胺基乙氧基乙氧基(發明所屬技術領域中亦稱為2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基或2'-DMAEOE)，亦即2’-O-CH2-O-CH2-N(CH2)2。
其他修飾包括2'-甲氧基(2'-OCH3)、2'-胺基丙氧基(2'-OCH2CH2CH2NH2)與2'-氟(2'-F)。亦可在iRNA之RNA的其他位置進行類似修飾，特定言之在3'末端核苷酸之糖或2'-5'鏈結dsRNA中之3'位置及在5'末端核苷酸之5'位置。iRNA亦可具有糖擬似物(如環丁基部分基團)替代呋喃戊糖基糖。教示此等經修飾糖結構製法之代表性美國專利包括(但不限於)：美國專利案號4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873； 5,646,265；5,658,873；5,670,633；與5,700,920，其中某些專利案已成為本申請案共同擁有。上述完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
iRNA之RNA亦可包括核鹼基(發明所屬技術領域中經常簡稱「鹼基」)修飾或取代。本文所採用「未經修飾」或「天然」核鹼基包括嘌呤鹼基：腺嘌呤(A)與鳥嘌呤(G)，與嘧啶鹼基：胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)與尿嘧啶(U)。經修飾之核鹼基包括其他合成性與天然核鹼基，如去氧-胸腺嘧啶(dT)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥基甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤與鳥嘌呤之6-甲基與其他烷基衍生物、腺嘌呤與鳥嘌呤之2-丙基與其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶與2-硫胞嘧啶、5-鹵尿嘧啶與胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶與胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶與胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基與其他8-經取代之腺嘌呤與鳥嘌呤、5-鹵基(特定言之5-溴、5-三氟甲基)及其他5-經取代之尿嘧啶與胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤與7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤與8-氮雜腺嘌呤、7-去氮雜鳥嘌呤與7-去氮雜腺嘌呤及3-去氮雜鳥嘌呤與3-去氮雜腺嘌呤。其他核鹼基包括彼等揭示於美國專利案號3,687,808；彼等揭示於Modified Nucleosides in Biochemistry,Biotechnology and Medicine,Herdewijn,P.編輯Wiley-VCH,2008；彼等揭示於The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering,p. 858-859,Kroschwitz,J.L.編輯John Wiley & Sons,1990；彼等揭示於Englisch等人，Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613；及彼等揭示於Sanghvi,Y S.,Chapter 15,dsRNA Research and Applications,p.289-302,Crooke,S.T.與Lebleu,B.編輯CRC Press,1993。某些此等核鹼基特別適用於增加本發明說明特徵之寡聚化合物之結合親和性。其等包括5-經取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶與N-2、N-6與O-6經取代之嘌呤，包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶與5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代法已顯示可使核酸雙螺旋安定性提高0.6-1.2℃(Sanghvi,Y.S.,Crooke,S.T.與Lebleu,B.編輯，dsRNA Research and Applications,CRC Press,Boca Raton,1993,pp.276-278)，且為鹼基取代法實例，甚至特佳為與2’-O-甲氧基乙基糖修飾法組合時。
教示上述某些經修飾之核鹼基及其他經修飾之核鹼基之代表性美國專利包括(但不限於)：上述美國專利案號3,687,808；4,845,205；5,130,30；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121、5,596,091；5,614,617；5,681,941；5,750,692；6,015,886；6,147,200；6,166,197；6,222,025；6,235,887；6,380,368；6,528,640；6,639,062；6,617,438；7,045,610；7,427,672；與7,495,088，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
iRNA之RNA亦可經修飾以包括一個或多個鎖核酸(LNA)。鎖核酸為具有經修飾之核糖部分基團之核苷酸，其中該核糖部分基團包含連接2'與4'碳之額外橋連基。此結構有效地「封鎖」3'-內部結構構形內之核糖。添加鎖核酸至siRNA中時，已顯示增加血清中siRNA安定性，並降低脫靶效應(Elmen,J.等人，(2005)Nucleic Acids Research 33(1)：439-447；Mook,OR.等人，(2007)Mol Canc Ther 6(3)：833-843；Grunweller,A.等人，(2003)Nucleic Acids Research 31(12)：3185-3193)。
有些實施例中，本發明iRNA包含一個或多個單體，其係UNA(非鎖核酸)核苷酸。UNA為未封鎖之無環核酸，其中已移除糖之任一個鍵，形成未封鎖之「糖」殘基。一項實例中，UNA亦包括已移除C1'-C4'之間有鍵結之單體(亦即C1'與C4'碳之間之碳-氧-碳共價鍵)。另一項實例中，移除糖之C2'-C3'鍵(亦即C2'與C3'碳之間之碳-碳共價鍵)(參見Nuc.Acids Symp.Series,52,133-134(2008)與Fluiter等人，Mol.Biosyst.,2009,10,1039，已以引用方式併入本文中)。
iRNA之RNA亦可經修飾而包括一個或多個雙環糖部分基團。「雙環糖」係經過兩個原子之橋連修飾之呋喃糖基環。「雙環核苷」(「BNA」)為具有糖部分基團之核苷，其包含一個連接糖環之兩個碳原子之橋連基，藉以形成雙環系統。某些實施例中，該橋連基連接糖環之4'-碳與2'-碳。因此，有些實施例中，本發明製劑可包括一個 或多個鎖核酸(LNA)。鎖核酸為具有經修飾之核糖部分基團之核苷酸，其中該核糖部分基團包含額外的連接2'與4'碳之橋連基。換言之，LNA為包含雙環糖部分基團(其包含4'-CH2-O-2'橋連基)之核苷酸。此結構有效地「封鎖」3'-內部結構構形內之核糖。添加鎖核酸至siRNA中時，已顯示增加血清中siRNA安定性，並降低脫靶效應(Elmen,J.等人(2005)Nucleic Acids Research 33(1)：439-447；Mook,OR.等人(2007)Mol Canc Ther 6(3)：833-843；Grunweller,A.等人(2003)Nucleic Acids Research 31(12)：3185-3193)。用於本發明多核苷酸之雙環核苷實例包括(但不限於)在4'與2'核糖基環原子之間包含橋連基之核苷。某些實施例中，本發明反義多核苷酸劑包括一個或多個包含4'至2'橋連基之雙環核苷。此等4'至2'橋連雙環核苷實例包括(但不限於)：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'(亦稱為「限制性乙基」或「cEt」)與4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(與其類似物；參見例如，美國專利案號7,399,845)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(與其類似物；參見例如，美國專利案號8,278,283)；4'-CH2-N(OCH3)-2'(與其類似物；參見例如，美國專利案號8,278,425)；4'-CH2-O-N(CH3)-2'(參見例如，US20040171570)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R為H、C1-C12烷基、或保護基(參見例如，美國專利案號7,427,672)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(參見例如，Chattopadhyaya等人，J.Org.Chem.,2009,74,118-134)；與4'-CH2-C(=CH2)-2'(與其類似物； 參見例如，美國專利案號8,278,426)。上述完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
教示鎖核酸核苷酸製法之其他代表性美國專利與美國專利公告案包括(但不限於)下列：美國專利案號6,268,490；6,525,191；6,670,461；6,770,748；6,794,499；6,998,484；7,053,207；7,034,133；7,084,125；7,399,845；7,427,672；7,569,686；7,741,457；8,022,193；8,030,467；8,278,425；8,278,426；8,278,283；US 20080039618；與US 20090012281，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
上述任何雙環核苷可以製成具有一或多個立體化學糖組態，包括例如，α-L-呋喃核糖及β-D-呋喃核糖(參見WO 99/14226)。
iRNA之RNA亦可經修飾而包括一或多個限制性乙基核苷酸。本文所採用「限制性乙基核苷酸」或「cEt」為包含雙環糖部分基團(其包含4'-CH(CH3)-O-2'橋連基)之鎖核酸。一項實施例中，限制性乙基核苷酸係S構形，本文中稱為「S-cEt」。
本發明iRNA亦包括一或多個「構型限制性核苷酸」(「CRN」)。CRN為具有連接核糖之C2’與C4’碳或核糖之C3與-C5'碳之鏈結體之核苷酸類似物。CRN封鎖核糖環成為安定構形，並增加與mRNA雜交之親和性。該鏈結體之長度足以將氧安置在具有最佳安定性與親和性之位置，產生較少核糖環皺摺。
教示上述某些CRN之製法之代表性公開文獻包括(但不限於)：US 20130190383與WO 2013036868，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
對RNA分子端之可能安定化修飾包括N-(乙醯基胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-NHAc)、N-(己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6)、N-(乙醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-NHAc)、胸苷-2'-O-去氧胸苷(醚)、N-(胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-胺基)、2-二十二碳烷醯基-尿苷-3"-磷酸酯、反向鹼基dT(idT)等等。此修飾之揭示內容可參見PCT公開案案號WO 2011005861。
本發明iRNA之核苷酸之其他修飾包括5’磷酸酯或5’磷酸酯擬似物，例如，RNAi劑之反義股之5’-末端磷酸酯或磷酸酯擬似物。合適之磷酸酯擬似物揭示於例如，美國專利公開案案號20120157511，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
某些明確實施例中，本發明方法使用之RNAi劑係選自附錄A中任一個表所列製劑群組中之製劑。此等製劑可進一步包括配體。
ii. 與配體接合之iRNA
本發明iRNA中RNA之另一種修飾涉及化學鏈結RNA與一個或多個可加強iRNA之活性、細胞分佈或細胞吸收之配體、部分基團或接合物。此等部分基團包括(但不限於)：脂質部分基團，如膽固醇部分基團(Letsinger等人，Proc. Natl.Acid.Sci.USA,1989,86：6553-6556)、膽酸(Manoharan等人，Biorg.Med.Chem.Let.,1994,4：1053-1060)、硫醚，例如，己基-S-三苯甲基硫醇(beryl-S-tritylthiol)(Manoharan等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.,1992,660：306-309；Manoharan等人，Biorg.Med.Chem.Let.,1993,3：2765-2770)、硫膽固醇(Oberhauser等人，Nucl.Acids Res.,1992,20：533-538)、脂系鏈，例如，十二碳烷二醇或十一碳烷基(Saison-Behmoaras等人，EMBO J,1991,10：1111-1118；Kabanov等人，FEBS Lett.,1990,259：327-330；Svinarchuk等人，Biochimie,1993,75：49-54)、磷脂，例如，二-十六碳烷基-消旋性-甘油或1,2-二-O-十六碳烷基-消旋性-甘油基-3-膦酸三乙基銨鹽(Manoharan等人，Tetrahedron Lett.,1995,36：3651-3654；Shea等人，Nucl.Acids Res.,1990,18：3777-3783)、多元胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人，Nuclosides & Nuclotides,1995,14：969-973)、或金剛烷乙酸(Manoharan等人，Tetrahedron Lett.,1995,36：3651-3654)、棕櫚基部分基團(Mishra等人，Biochim.Biophys.Acta,1995,1264：229-237)、或十八碳烷基胺或己基胺基-羰基氧膽固醇部分基團(Crooke等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277：923-937)。
一項實施例中，iRNA劑引進配體後改變其分佈、靶向或壽命。較佳實施例中，例如，相較於沒有此等配體之物種，該等配體可加強對所選定標靶(例如，對分子、細胞或細胞型態、隔室(例如，細胞或器官隔室)、組織、器官或身體區域)之親和性。較佳配體將不參與雙螺旋 核酸中之雙螺旋配對。
配體可包括天然物質，如蛋白質(例如，人類血清白蛋白(HSA)、低密度脂蛋白(LDL)、或球蛋白)；碳水化合物(例如，葡聚糖、普藍多醣(pullulan)、幾丁質、幾丁聚醣、菊糖、環糊精、N-乙醯基半乳糖胺或玻尿酸)；或脂質。配體亦可為重組或合成性分子，如合成性聚合物，例如，合成性聚胺基酸。聚胺基酸實例包括聚離胺酸(PLL)、聚L-天冬胺酸、聚L-麩胺酸等聚胺基酸；苯乙烯-馬來酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物、二乙烯基醚-馬來酸酐共聚物、N-(2-羥基丙基)甲基丙烯基醯胺共聚物(HMPA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚胺基甲酸酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-異丙基丙烯基醯胺聚合物、或聚磷腈。多元胺實例包括聚乙烯亞胺、聚離胺酸(PLL)、精胺、精脒、多元胺、偽肽-多元胺、肽擬似性多元胺、樹枝狀多元胺、精胺酸、脒、魚精蛋白、陽離子性脂質、陽離子性紫質、多元胺之四級鹽、或α螺旋肽。
配體亦可包括靶向基團，例如，靶向細胞或組織之製劑，例如，凝集素、醣蛋白、脂質或蛋白質，例如，結合特定細胞型態(如腎臟細胞)之抗體。靶向基團可為促甲狀腺激素、促黑激素、凝集素、醣蛋白、表面活性蛋白質A、黏蛋白碳水化合物、多價乳糖、單價或多價半乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺、N-乙醯基-葡萄糖胺、多價甘露糖、多價岩藻糖、糖基化聚胺基酸、轉鐵蛋白、雙膦酸、聚麩胺酸、聚天冬胺酸、脂質、膽固醇、類固醇、膽 汁酸、葉酸鹽、維生素B12、維生素A、生物素、或RGD肽或RGD肽擬似物。某些實施例中，配體包括單價或多價半乳糖。某些實施例中，配體包括膽固醇。
其他配體實例包括染劑、螯合劑(例如，吖啶類)、交鏈劑(例如，補骨脂內酯、絲裂黴素C)、紫質(TPPC4、德卟啉(texaphyrin)、噻啉(Sapphyrin))、多環狀芳香烴(例如，吩
Figure 107113207-A0202-12-0082-58
、二氫吩
Figure 107113207-A0202-12-0082-59
)、人造內切核酸酶(例如，EDTA)、親脂性分子，例如，膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睾酮、1,3-雙-O(十六碳烷基)甘油、香葉草基氧己基、十六碳烷基甘油、龍腦、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七碳烷基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、O3-(油基)石膽酸、O3-(油基)膽烯酸、二甲氧基三苯甲基、或吩噁
Figure 107113207-A0202-12-0082-60
)與肽接合物(例如，觸足肽(antennopedia peptide)、Tat肽)、烷化劑、磷酸鹽、胺基、氫硫基、PEG(例如，PEG-40K)、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代之烷基、標記放射性之標記物、酵素、半抗原(例如，生物素)、轉運/吸收促進劑(例如，阿斯匹靈、維生素E、葉酸)、合成性核糖核酸酶(例如，咪唑、雙咪唑、組織胺、咪唑簇集物、吖啶-咪唑接合物、Eu3+四氮雜大環複合物)、二硝基苯基、HRP、或AP。
配體可為蛋白質(例如，醣蛋白)、或肽(例如，對輔配體具有特異親和性之分子)、或抗體(例如，結合特異化細胞型態(如：肝細胞)之抗體)。配體亦可包括激素與激素受體。其亦可包括非肽物質，如：脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔因子、多價乳糖、單價或多價半 乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺、N-乙醯基-葡萄糖胺多價甘露糖、或多價岩藻糖。配體可為例如，脂多醣、p38 MAP激酶之活化劑、或NF-κB之活化劑。
配體可為例如，可藉由例如，破壞細胞之細胞骨架，例如，破壞細胞之微小管、微絲、或中間絲而促進細胞吸收iRNA劑之藥物物質。該藥物可為例如，紫杉酚(taxon)、長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、細胞鬆弛素(cytochalasin)、諾考達唑(nocodazole)、促進微絲聚合劑(japlakinolide)、微絲解聚劑(latrunculin A)、毒傘素(phalloidin)、紅海海綿抗菌素(swinholide A)、茚達諾辛(indanocine)、或邁爾素(myoservin)。
有些實施例中，附接本文所說明iRNA之配體之作用為藥物動力學調控劑(PK調控劑)。PK調控劑包括：親脂物、膽汁酸、類固醇、磷脂類似物、肽類、蛋白質結合劑、PEG、維生素等等。PK調控劑實例包括(但不限於)：膽固醇、脂肪酸、膽酸、石膽酸、二烷基甘油酯、二醯基甘油酯、磷脂類、鞘脂類、納普生(naproxen)、布洛芬(ibuprofen)、維生素E、生物素等等。亦已知包含許多硫代磷酸根鏈結基之寡核苷酸可以結合血清蛋白質，因此在骨架中包含許多硫代磷酸根鏈結基之短寡核苷酸，例如，約5個鹼基、10個鹼基、15個鹼基或20個鹼基之寡核苷酸亦適用為本發明之配體(例如，作為PK調控配體)。此外，在本文說明之實施例中，可結合血清組分(例如，血清蛋白質)之適體亦適用為PK調控配體。
本發明配體-接合寡核苷酸可利用帶有側接反應性官能基之寡核苷酸合成，如由鏈結分子附接在寡核苷酸上所衍生者(如下文說明)。此反應性寡核苷酸可能直接與自商品取得之配體、經由合成而帶有任何各種不同保護基之配體、或已附接鏈結性部分基團之配體反應。
本發明接合物所使用之寡核苷酸可能適宜且照例採用習知之固相合成技術製造。此等合成法之儀器係由數個供應商提供，包括例如，Applied Biosystems(Foster City,Calif.)。亦可額外使用或改用發明所屬技術領域中已知任何其他方式進行此等合成法。亦已知使用類似技術來製備其他寡核苷酸，如硫代磷酸酯與烷基化衍生物。
本發明配體-接合寡核苷酸與帶有配體分子之序列專一性鏈結核苷中，可能在合適之DNA合成儀，利用標準核苷酸或核苷前體、或已經帶有鏈結性部分基團之核苷酸或核苷接合物前體、已經帶有配位體分子之配體-核苷酸或核苷-接合物前體、或帶有非核苷配體之構成嵌段組裝成寡核苷酸與寡核苷。
當使用已經帶有鏈結性部分基團之核苷酸-接合物前體時，通常先完成與專一性序列鏈結之核苷之合成法，然後由配體分子與鏈結性部分基團反應，形成配體-接合寡核苷酸。有些實施例中，本發明寡核苷酸或鏈結核苷係採用自動化合成儀，除了使用可自商品購得常用於合成寡核苷酸之標準亞胺基磷酸酯(phosphoramidite)與非標 準亞胺基磷酸酯外，尚可使用衍生自配體-核苷接合物之亞胺基磷酸酯合成。
1. 脂質接合物
一項實施例中，配體或接合物為脂質或脂質系分子。此等脂質或脂質系分子較佳係結合血清蛋白質，例如，人類血清白蛋白(HSA)。HSA結合性配體可以讓接合物分佈在標靶組織，例如，身體之非腎臟標靶組織。例如，該標靶組織可為肝臟，包括肝之實質細胞。其他可結合HAS之分子亦可作為配體使用。例如，可使用納普生(naproxen)或阿斯匹靈。脂質或脂質系配體可以(a)提高接合物對降解之抗性，(b)提高靶向或轉運至標靶細胞或細胞膜，與/或(c)可用於調整與血清蛋白質(例如，HAS)之結合性。
脂質系配體可用於抑制(例如，調控)接合物與標靶組織之結合性。例如，脂質或脂質系配體與HAS之結合性越強時，越不容易靶向腎臟，因此越不容易從身體清除。與HAS之結合性較低之脂質或脂質系配體可用於將該接合物靶向腎臟。
一項較佳實施例中，該脂質系配體會結合HAS。較佳係其與HAS具有充分結合親和性，使該接合物優先分佈至非腎臟組織。然而，該親和性最好不會太強導致無法逆轉HSA-配體結合性。
另一項較佳實施例中，該脂質系配體與HAS結合之親和性弱或完全沒有親和性，因此該接合物將 會優先分佈至腎臟。除了脂質系配體外，亦可改用或額外使用其他靶向腎臟細胞之部分基團。
另一項態樣中，該配體為例如，維生素之部分基團，其可被標靶細胞(例如，增生細胞)吸收。其等特別適用於治療特徵在於不期望之細胞增生之病變，例如，惡性或非惡性型，例如，癌細胞。維生素實例包括維生素A、E、與K。其他可被標靶細胞(如肝細胞)吸收之維生素實例包括B維生素，例如，葉酸、B12、核黃素、生物素、吡哆醛或其他維生素，或營養素。亦包括HSA與低密度脂蛋白(LDL)。
2. 細胞滲透劑
另一項態樣中，該配體為細胞滲透劑，較佳為螺旋細胞滲透劑。該製劑較佳為兩親性。該製劑實例為肽，如tat或觸足肽。若該製劑為肽時，其可經修飾，包括肽基擬似物、反轉異構體、非肽或偽肽鏈結基，及使用D-胺基酸。該螺旋劑較佳為α-螺旋劑，其較佳具有親脂相與疏脂相。
配體可為肽或肽擬似物。肽擬似物(本文亦稱為寡肽擬似物)為可以折疊成類似天然肽之限定三度空間結構之分子。在iRNA劑附接肽及肽擬似物時，可以藉由如加強細胞辨識與吸收來影響iRNA之藥物動力學分佈性。該肽或肽擬似物部分基團之長度可為約5至50個胺基酸，例如，長度約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸。
肽或肽擬似物可為例如，細胞滲透肽、陽離子性肽、兩親性肽、或疏水性肽(例如，主要由Tyr、Trp或Phe組成)。肽部分基團可為樹枝狀肽、限定肽或交鏈肽。或者，肽部分基團可包括疏水性跨膜序列(MTS)。含疏水性MTS之肽實例為具有下列胺基酸序列之RFGF：AAVALLPAVLLALLAP(SEQ ID NO：33)。包含疏水性MTS之RFGF類似物(例如，胺基酸序列AALLPVLLAAP(SEQ ID NO：34))亦可作為靶向部分基團。該肽部分基團可為「傳遞」肽，其可攜帶大型極性分子(包括肽、寡核苷酸與蛋白質)穿越細胞膜。已發現例如，來自HIV Tat蛋白質(GRKKRRQRRRPPQ(SEQ ID NO：35)與果蠅觸足肽(Drosophila antennapedia)蛋白質(RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO：36)之序列具有作為傳遞肽之功能。肽或肽擬似物可由DNA之隨機序列編碼，如從噬菌體展示庫或一珠粒一化合物(one-bead-one-compound(OBOC))組合庫(Lam等人，Nature,354：82-84,1991)判別之肽。為了靶向細胞目的而藉由引進之單體單元與dsRNA劑系鏈之肽或肽擬似物實例為精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸(RGD)-肽、或RGD擬似物。肽部分基團之長度範圍可為約5個胺基酸至約40個胺基酸。該肽部分基團具有之結構修飾為如增加安定性或主導構型性質。可採用下文說明之任何結構修飾。
本發明組成物與方法所使用之RGD肽可為線性或環狀，且可經過修飾，例如，糖基化或甲基化，以促進靶向特定組織(群)。包含RGD之肽與肽擬似物可包括 D-胺基酸及合成性RGD擬似物。除了RGD外，尚可使用靶向整合素配位體之其他部分基團。此配位體之較佳接合物係靶向PECAM-1或VEGF。
「細胞滲透性肽」可以通透細胞，例如，微生物細胞，如細菌或真菌細胞，或哺乳動物細胞，如人類細胞。可通透微生物細胞之肽可為例如，α-螺旋線性肽(例如，LL-37或Ceropin P1)、包含二硫鍵之肽(例如，α-防禦素(defensin)、β-防禦素或制菌肽(bactenecin))，或僅包含一個或兩個主要胺基酸之肽(例如，PR-39或吲哚抗生肽(indolicidin))。細胞滲透性肽亦可包括核定位訊號(NLS)。例如，細胞滲透性肽可為二部組合之兩親性肽，如MPG，其係衍生自HIV-1 gp41之融合肽功能域與SV40大型T抗原之NLS(Simeoni等人，Nucl.Acids Res.31：2717-2724,2003)。
3. 碳水化合物接合物
本發明組成物與方法之有些實施例中，iRNA寡核苷酸進一步包含碳水化合物。接合碳水化合物之iRNA有利於在活體內傳遞核酸，且其組成物適合活體內之醫療用途，如本文所說明。本文所採用「碳水化合物」係指其本身即為由一個或多個具有至少6個碳原子(其可為線性、分支或環狀)與在各碳原子鍵結之氧、氮或硫原子之單糖單元所組成碳水化合物之化合物；或具有由一個或多個各具有至少6個碳原子(其可為線性、分支或環狀)與在各碳原子上鍵結 之氧、氮或硫原子之單糖單元所組成之碳水化合物作為其中一部分之化合物。代表性碳水化合物包括糖類(單糖、雙醣、三醣與包含約4、5、6、7、8、或9個單糖單元之寡醣類)，與多醣類，如澱粉、肝醣、纖維素與多醣膠質。特定單糖包括C5與更多碳(例如，C5、C6、C7、或C8)之糖類；雙醣與三醣包括具有兩個或三個單糖單元之醣類(例如，C5、C6、C7、或C8)。
一項實施例中，本發明組成物與方法所使用之碳水化合物接合物為單糖。另一項實施例中，本發明組成物與方法所使用之碳水化合物接合物係選自由下列各物所組成之群組：
Figure 107113207-A0202-12-0089-4141
Figure 107113207-A0202-12-0089-4142
Figure 107113207-A0202-12-0090-4144
Figure 107113207-A0202-12-0090-4145
Figure 107113207-A0202-12-0090-4146
Figure 107113207-A0202-12-0090-4147
Figure 107113207-A0202-12-0090-4143
Figure 107113207-A0202-12-0091-4149
Figure 107113207-A0202-12-0091-4150
Figure 107113207-A0202-12-0091-4148
Figure 107113207-A0202-12-0092-4151
Figure 107113207-A0202-12-0092-4152
Figure 107113207-A0202-12-0092-4153
Figure 107113207-A0202-12-0092-4154
Figure 107113207-A0202-12-0092-4155
Figure 107113207-A0202-12-0093-4157
Figure 107113207-A0202-12-0093-4158
Figure 107113207-A0202-12-0093-4159
Figure 107113207-A0202-12-0093-4160
Figure 107113207-A0202-12-0093-4161
Figure 107113207-A0202-12-0093-4156
一項實施例中，單糖為N-乙醯基半乳糖胺，如，
Figure 107113207-A0202-12-0094-4162
用於本文所說明實施例之另一種代表性碳水化合物接合物包括(但不限於)：
Figure 107113207-A0202-12-0094-4163
(式XXIII)，當X或Y其中之一為寡核苷酸時，另一個為氫。
本發明某些實施例中，GalNAc或GalNAc衍生物係經由單價鏈結體附接本發明iRNA劑。有些實施例中，GalNAc或GalNAc衍生物係經由二價鏈結體附接本發明iRNA劑。本發明另一項實施例中，GalNAc或GalNAc衍生物係經由三價鏈結體附接本發明iRNA劑。
一項實施例中，本發明雙股RNAi劑包含一個GalNAc或GalNAc衍生物附接iRNA劑。另一項實施例中，本發明雙股RNAi劑包含複數個(例如，2、3、4、5、或6個)GalNAc或GalNAc衍生物，每一個分別獨立透過複數個單價鏈結體附接雙股RNAi劑之複數個核苷酸。
有些實施例中，例如，當本發明iRNA劑之兩股為一個較大分子之一部分，利用其中一股之3’-端與另一股之5’-端之間未中斷之核苷酸連接時，形成髮夾環，其包含複數個未配對之核苷酸，髮夾環內每一個未配對之核苷酸可以分別獨立包含經由單價鏈結體附接之GalNAc或GalNAc衍生物。髮夾環亦可由雙螺旋其中一股之延長突出形成。
有些實施例中，碳水化合物接合物進一步再包含一或多種如上述配體，如，但不限於：PK調控劑或細胞滲透肽。
適用於本發明之其他碳水化合物接合物包括彼等說明於WO 2014179620與WO 2014179627中者，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
4. 鏈結體
有些實施例中，本文說明之接合物或配體可利用各種不同可以裂解或不可裂解之鏈結體附接iRNA寡核苷酸。
術語「鏈結體」或「鏈結基」意指連接化合物之兩個部分之有機部分基團，例如，共價附接化合物 之兩個部分。該鏈結體通常包含一個直接鍵結或原子(如氧或硫)、單元(如NR8、C(O)、C(O)NH、SO、SO2、SO2NH或原子鏈)，如(但不限於)：經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之烯基、經取代或未經取代之炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、雜環基烷基、雜環基烯基、雜環基炔基、芳基、雜芳基、雜環基、環烷基、環烯基、烷基芳基烷基、烷基芳基烯基、烷基芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基雜芳基烷基、烷基雜芳基烯基、烷基雜芳基炔基、烯基雜芳基烷基、烯基雜芳基烯基、烯基雜芳基炔基、炔基雜芳基烷基、炔基雜芳基烯基、炔基雜芳基炔基、烷基雜環基烷基、烷基雜環基烯基、烷基雜環基炔基、烯基雜環基烷基、烯基雜環基烯基、烯基雜環基炔基、炔基雜環基烷基、炔基雜環基烯基、炔基雜環基炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基雜芳基、烯基雜芳基、炔基雜芳基，其中一個或多個亞甲基可穿插或末端為O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜芳基、經取代或未經取代之雜環；其中R8為氫、醯基、脂系或經取代之脂系。一項實施例中，鏈結體為約1至24個原子，2至24、3至24、4至24、5至24、6至24、6至18、7至18、8至18個原子、7至17、8至17、6至16、7至16、或8至16個原子。
可裂解之鏈結基為在細胞外具有充分安定 性之基團，但當進入標靶細胞內時即裂解，而釋出被該鏈結體接在一起之兩個部分。較佳實施例中，可裂解之鏈結基在標靶細胞中或在第一參考條件(其可為例如，選擇模擬或代表細胞內條件)之裂解速度比在個體血液中或在第二參考條件(其可為例如，選擇模擬或代表血液或血清中之條件)至少快約10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或更多倍，或至少快約100倍。
可裂解鏈結基係可感受裂解劑之作用，例如，pH、氧化還原電位或降解性分子之存在。通常，裂解劑於細胞內部之存在或含量或活性高於其在血清或血液中。此等降解劑實例包括針對特定受質選擇或沒有受質專一性之氧化還原劑，包括例如，存在於細胞中之氧化性或還原性酵素或還原劑，如氫硫醇，其可利用還原作用降解可經氧化還原性裂解之鏈結基；酯酶；核內體或可產生酸性環境之製劑，例如，彼等造成pH 5或更低之製劑；可水解或降解酸可裂解鏈結基之酵素，藉由作用為一般酸類、肽酶(其可為受質專一性)與磷酸酶。
可裂解鏈結基(如二硫鍵)可對pH敏感。人類血清之pH為7.4，而細胞內平均pH稍低，在約7.1至7.3之範圍內。核內體具有較酸之pH，在5.5至6.0之範圍內，溶小體之pH甚至更酸，約5.0。有些鏈結體具有可裂解之鏈結基，可在較佳pH裂解，藉以從細胞內之配體釋放陽離子性脂質，或進入所需之細胞隔室內。
鏈結體可包括可被特定酵素裂解之可裂解 鏈結基。引進鏈結體中之可裂解鏈結基型態依所靶向之細胞而定。例如，靶向肝之配體可透過包括酯基之鏈結體連接陽離子性脂質。肝細胞富含酯酶，因此該鏈結體在肝細胞中之裂解效率高於在沒有富含酯酶之細胞型態中之效率。其他富含酯酶之細胞型態包括肺、腎皮質與睪丸之細胞。
當靶向富含肽酶之細胞型態(如肝細胞與滑液膜細胞)時，可使用包含肽鍵之鏈結體。
通常，可藉由測試降解劑裂解候選鏈結基之能力(或條件)來評估該候選之可裂解鏈結基之合適性。將亦需要亦測試候選之可裂解鏈結基於血液中或當與其他非標靶組織接觸時抗拒裂解之能力。因此，可以決定第一與第二條件之間對裂解作用之相對敏感性，其中所選擇之第一條件係其於標靶細胞中之裂解指標，所選擇之第二條件係其於其他組織或生物液體(例如，血液或血清)中之裂解指標。該評估法可於無細胞系統、細胞、細胞培養物、器官或組織培養物、或在完整動物中進行。其適用於在無細胞或培養條件下進行初次評估，並進一步在完整動物中確認評估。較佳實施例中，適用之候選化合物在細胞(或在選擇擬似細胞內條件之活體外條件下)之裂解比在血液或血清(或在選擇擬似細胞外條件之活體外條件下)至少快約2、4、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或約100倍。
a. 氧化還原可裂解之鏈結基
一項實施例中，可裂解之鏈結基為氧化還原可裂解之鏈結基，亦即可在還原或氧化時裂解。還原可裂解之鏈結基實例為二硫鏈結基(-S-S-)。可參見本文說明之方法來決定該候選之可裂解鏈結基是否為合適之「還原可裂解之鏈結基」，或例如，是否適用於帶有特定iRNA部分基團與特定靶向劑。例如，可藉由與二硫蘇糖醇(DTT)或其他還原劑培養，或使用發明所屬技術領域中已知擬似細胞(例如，標靶細胞)中所觀察到之裂解速率之試劑來評估候選物。該等候選物亦可在選擇擬似血液或血清之條件下評估。在一個實施例中，候選化合物在血液中至多裂解約10%。其他實施例中，適用之候選化合物在細胞(或在選擇擬似細胞內條件之活體外條件下)之裂解速度比在血液(或在選擇擬似細胞外條件之活體外條件下)至少快約2、4、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或約100倍。候選化合物之裂解可採用標準酵素動力學分析法，在選擇擬似細胞內介質條件下測定，並與選擇擬似細胞外基質之條件下之結果比較。
b. 磷酸根系可裂解鏈結基
另一項實施例中，可裂解之鏈結體包含磷酸根系可裂解鏈結基。磷酸根系可裂解鏈結基係被可降解或水解磷酸根之製劑裂解。該可於細胞中裂解磷酸根之製劑為酵素，如細胞中之磷酸酶。磷酸根系鏈結基實例為-O-P(O)(ORk)-O-、-O-P(S)(ORk)-O-、-O-P(S)(SRk)-O-、-S-P(O)(ORk)-O-、 -O-P(O)(ORk)-S-、-S-P(O)(ORk)-S-、-O-P(S)(ORk)-S-、-S-P(S)(ORk)-O-、-O-P(O)(Rk)-O-、-O-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-O-、-S-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-S-、-O-P(S)(Rk)-S-。較佳實施例為-O-P(O)(OH)-O-、-O-P(S)(OH)-O-、-O-P(S)(SH)-O-、-S-P(O)(OH)-O-、-O-P(O)(OH)-S-、-S-P(O)(OH)-S-、-O-P(S)(OH)-S-、-S-P(S)(OH)-O-、-O-P(O)(H)-O-、-O-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-O、-S-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-S-、-O-P(S)(H)-S-。較佳實施例為-O-P(O)(OH)-O-。此等候選物可採用類似上述之方法評估。
c. 酸可裂解之鏈結基
另一項實施例中，該可裂解鏈結體包含酸可裂解之鏈結基。酸可裂解之鏈結基為可在酸性條件下裂解之鏈結基。較佳實施例中，酸可裂解之鏈結基為在pH約6.5或更低(例如，約6.0、5.75、5.5、5.25、5.0或更低)之酸性環境下裂解，或被如同一般酸之作用之製劑(如酵素)裂解之基團。在細胞中，明確之低pH細胞器(如核內體與溶小體)可提供作為該酸可裂解鏈結基之裂解環境。該酸可裂解鏈結基實例包括(但不限於)：腙類、酯類、及胺基酸之酯類。該酸可裂解基團具有通式-C=NN-、C(O)O，或-OC(O)。較佳實施例為當附接酯之氧(烷氧基)之碳為芳基、經取代之烷基、或三級烷基(如：二甲基戊基或第三丁基)時。此等候選物可採用類似彼等上述方法評估。
d. 酯系鏈結基
另一項實施例中，可裂解鏈結體包含酯系可裂解鏈結基。該酯系可裂解鏈結基係被細胞中之酵素裂解，如酯酶與醯胺酶。酯系可裂解鏈結基實例包括(但不限於)：伸烷基、伸烯基與伸炔基之酯類。可裂解之酯鏈結基具有通式-C(O)O-或-OC(O)-。此等候選物可採用類似彼等上述方法評估。
e. 肽系可裂解鏈結基
再另一項實施例中，該可裂解之鏈結體包含肽系可裂解鏈結基。該肽系可裂解鏈結基可被細胞中酵素裂解，如肽酶與蛋白酶。該肽系可裂解鏈結基為在胺基酸之間形成之肽鍵，產生寡肽(例如，二肽、三肽等等)與多肽。該肽系可裂解鏈結基不包括醯胺基(-C(O)NH-)。該醯胺基可在任何伸烷基、伸烯基或伸炔基之間形成。肽鍵為在胺基酸之間形成醯胺鍵之特別型態，產生肽與蛋白質。該肽系裂解基團通常限於在胺基酸之間形成之肽鍵(亦即醯胺鍵)，產生肽與蛋白質，且不包括整個醯胺官能基。該肽系可裂解鏈結基具有通式一NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-，其中RA與RB為兩個相鄰胺基酸之R基團。此等候選物可採用彼等類似上述之方法評估。
一項實施例中，本發明iRNA透過鏈結體接合碳水化合物。使用本發明組成物與方法之鏈結體之iRNA 碳水化合物接合物之非限制實例包括(但不限於)：
Figure 107113207-A0202-12-0102-4164
Figure 107113207-A0202-12-0102-4165
Figure 107113207-A0202-12-0102-4166
Figure 107113207-A0202-12-0102-4167
Figure 107113207-A0202-12-0103-4169
Figure 107113207-A0202-12-0103-4170
Figure 107113207-A0202-12-0103-4171
Figure 107113207-A0202-12-0103-4168
 當X或Y中之一為寡核苷酸時，另一個為氫。
本發明組成物與方法之某些實施例中，配體係透過二價或三價之分支鏈結體附接之一或多種「GalNAc」(N-乙醯基半乳糖胺)衍生物。
一項實施例中，本發明dsRNA係接合二價或三價之分支鏈結體，其係選自由式(XXXII)至(XXXV)中任一式所示結構之群組中：
Figure 107113207-A0202-12-0104-4172
 其中：q2A、q2B、q3A、q3B、q4A、q4B、q5A、q5B與q5C每次出現時表示分別獨立之0至20，且其中重複單元可相同或不同；P2A、P2B、P3A、P3B、P4A、P4B、P5A、P5B、P5C、T2A、 T2B、T3A、T3B、T4A、T4B、T4A、T5B、T5C每次出現時分別獨立為不存在、CO、NH、O、S、OC(O)、NHC(O)、CH2、CH2NH或CH2O；Q2A、Q2B、Q3A、Q3B、Q4A、Q4B、Q5A、Q5B、Q5C每次出現時分別獨立為不存在、伸烷基、經取代之伸烷基，其中可在一個或多個亞甲基中穿插或末端基團為一個或多個O、S、S(O)、SO2、N(RN)、C(R’)=C(R”)、C≡C或C(O)；R2A、R2B、R3A、R3B、R4A、R4B、R5A、R5B、R5C每次出現時分別獨立為不存在、NH、O、S、CH2、C(O)O、C(O)NH、NHCH(Ra)C(O)、-C(O)-CH(Ra)-NH-、CO、CH=N-O、
Figure 107113207-A0202-12-0105-4173
、
Figure 107113207-A0202-12-0105-4174
、
Figure 107113207-A0202-12-0105-4175
、
Figure 107113207-A0202-12-0105-4176
、，
Figure 107113207-A0202-12-0105-4177
或雜環基；L2A、L2B、L3A、L3B、L4A、L4B、L5A、L5B與L5C表示配體；亦即每次出現時分別獨立為單糖(如：GalNAc)、雙醣、參醣、肆醣、寡醣或多醣；及Ra為H或胺基酸側鏈。RNAi劑特別適合使用三價接合GalNAc衍生物來抑制標靶基因表現，如彼等式(XXXV)：
Figure 107113207-A0202-12-0105-4178
 其中L5A、L5B與L5C表示單糖，如GalNAc衍生物。
接合GalNAc衍生物之合適二價與三價之分支鏈結基實例包括(但不限於)：如上述式II、VII、XI、X、與XIII之結構。
教示RNA接合物製法之代表性美國專利包括(但不限於)：美國專利案號4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717、5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241、5,391,723；5,416,203、5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928與5,688,941；6,294,664；6,320,017；6,576,752；6,783,931；6,900,297；7,037,646；8,106,022，其完整揭示內容已分別以引用方式併入本文中。
上述化合物不一定所有位置均經一致修飾，事實上可在單一化合物中或甚至在iRNA之單一核苷中引進超過一個上述修飾。本發明亦包括呈嵌合化合物之iRNA化合物。
本發明內容中，「嵌合」iRNA化合物或「嵌合體」為包含兩個或更多個化學上獨立區之iRNA化合物，較佳為dsRNA，該各區分別由至少一個單體單元組成，亦即以dsRNA化合物為例，為由核苷酸組成。此等iRNA通常包含至少一個區，其中RNA係經修飾，以賦予增加iRNA對抗核酸酶降解之抗性，增加細胞吸收性、或增加對標靶核酸之結合親和性。iRNA之額外一區可作為可以裂解RNA：DNA或RNA：RNA雜交體之酵素之受質。例如，RNase H為細胞內切核酸酶，其裂解RNA：DNA雙螺旋之RNA股。因此，活化RNase H造成裂解RNA標靶，藉以大幅加強iRNA抑制基因表現之效力。結果，當採用嵌合性dsRNA時，採用較短之iRNA經常可以得到相較於硫代磷酸酯去氧dsRNA與相同標靶區雜交之可比結果。RNA標靶之裂解作用照例可採用凝膠電泳分析法檢測，且若必要時，可聯合採用發明所屬技術領域中已知之核酸雜交技術。
某些例子中，iRNA之RNA可經過非配體基團修飾。許多種非配體分子已與iRNA接合，以加強iRNA之活性、細胞分佈性或細胞吸收性，且進行此等接合法之程序可從科學文獻中取得。此等非配體部分基團包括脂質部分基團，如：膽固醇(Kubo,T.等人Biochem.Biophys.Res.Comm.,2007,365(1)：54-61；Letsinger等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86：6553)、膽酸(Manoharan等人Bioorg.Med.Chem.Lett.,1994,4：1053)、硫醚，例如，己基-S-三 苯甲基硫醇(Manoharan等人Ann.N.Y.Acad.Sci.,1992,660：306；Manoharan等人Bioorg.Med.Chem.Let.,1993,3：2765)、硫代膽固醇(Oberhauser等人Nucl.Acids Res.,1992,20：533)、脂系鏈，例如，十二碳烷二醇或十一碳烷基(Saison-Behmoaras等人，EMBO J,1991,10：1111；Kabanov等人，FEBS Lett.,1990,259：327；Svinarchuk等人，Biochimie,1993,75：49)、磷脂，例如，二-十六碳烷基-消旋性-甘油或1,2-二-O-十六碳烷基-消旋性-甘油基-3-H-膦酸三乙基銨鹽(Manoharan等人，Tetrahedroh Lett.,1995,36：3651；Shea等人，Nucl.Acids Res.,1990,18：3777)、多元胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人，Nuclosides & Nuclotides,1995,14：969)、或金剛烷乙酸(Manoharan等人，Tetrahedron Lett.,1995,36：3651)、棕櫚基部分基團(Mishra等人，Biochim.Biophys.Acta,1995,1264：229)、或十八碳烷基胺或己基胺基-羰基氧膽固醇部分基團(Crooke等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277：923)。教示此等RNA接合物製法之代表性美國專利已如上述。典型接合法程序涉及合成在序列之一個或多個位置帶有胺基鏈結體之RNA。該胺基再採用適當偶合或活化試劑，與準備接合之分子反應。該接合反應可在RNA仍結合在固態擔體時進行或可在裂解RNA後，在溶液相中進行。通常採用HPLC法純化RNA接合物，產生純接合物。
iii. 本發明iRNA之傳遞法
可採用許多不同方式傳遞本發明iRNA至細胞中，例如，個體(如感染HBV之人類個體)中之細胞。亦可直接投與包含iRNA(例如，dsRNA)之組成物傳遞給個體。或者，可能間接投與編碼並主導iRNA表現之一或多種載體，於活體內傳遞。此等替代法更進一步於下文中說明。
通常，本發明iRNA可採用任何傳遞核酸分子之方法(活體外或活體內)(參見例如，Akhtar S.與Julian RL.(1992)Trends Cell.Biol.2(5)：139-144與WO94/02595，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)。用於活體內傳遞時，要傳遞iRNA分子之考量因素包括例如，所傳遞分子之生物安定性、預防所傳遞分子在標靶組織中之非專一性效應及累積。全身投與iRNA以治療疾病時，RNA可經修飾或改用藥物傳遞系統傳遞；這兩種方法均作用於預防dsRNA於活體內被內切-與外切-核酸酶快速降解。修飾RNA或醫藥載劑亦可讓iRNA組成物靶向標靶組織，並避免不期望之脫靶效應。iRNA分子可採用化學法接合親脂性基團(如膽固醇)進行修飾，以加強細胞吸收並預防降解。另一項替代實施例，可使用藥物傳遞系統(如奈米粒子、樹枝狀物、聚合物、脂質體或陽離子性傳遞系統)傳遞iRNA。帶正電荷之陽離子性傳遞系統可促進iRNA分子(帶負電荷)之結合，亦加強在帶負電荷之細胞膜之交互作用，讓細胞有效吸收iRNA。陽離子性脂質、樹枝狀物、或聚合物可與iRNA結合，或誘發形成包埋iRNA之囊泡或微胞(參見例如，Kim SH.等人(2008)Journal of Controlled Release 129(2)：107-116)。形成囊泡或微胞在全身投藥時進一步預防iRNA降解。製造及投與陽離子性-iRNA複合物之方法係熟悉發明所屬技術領域者之能力範圍內(參見例如，Sorensen,DR.等人(2003)J.Mol.Biol 327：761-766；Verma,UN.等人(2003)Clin.Cancer Res.9：1291-1300；Arnold,AS等人(2007)J.Hypertens.25：197-205，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)。適用於全身傳遞iRNA之藥物傳遞系統之有些非限制性實例包括DOTAP(Sorensen,DR.等人(2003)，如上述文獻；Verma,UN.等人(2003)，如上述文獻)、寡染胺(Oligofectamine)「固態核酸脂質粒子」(Zimmermann,TS.等人(2006)Nature 441：111-114)、心磷脂(cardiolipin)(Chien,PY.等人(2005)Cancer Gene Ther.12：321-328；Pal,A.等人(2005)Int J.Oncol.26：1087-1091)、聚乙二亞胺(Bonnet ME.等人(2008)Pharm.Res.8月16日電子書(Epub ahead of print)；Aigner,A.(2006)J.Biomed.Biotechnol.71659)、Arg-Gly-Asp(RGD)肽類(Liu,S.(2006)Mol.Pharm.3：472-487)、與聚醯胺基胺類(Tomalia,DA.等人(2007)Biochem.Soc.Trans.35：61-67；Yoo,H.等人(1999)Pharm.Res.16：1799-1804)。有些實施例中，iRNA與環糊精形成複合物，供全身性投藥。iRNA與環糊精之投藥方法與醫藥組成物可參見美國專利案號7,427,605，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。某些實施例中，iRNA劑可使用兩親性肽投藥，以促進依賴pH逃離核內體(pH-dependent endosomal escape)(參見例如，Bartz等人， 2011.Biochem.J.435：475-87，已以引用之方式併入本文中)。
1. 本發明所使用編碼iRNA之載體
靶向HBV基因之iRNA可由嵌入DNA或RNA載體中之轉錄單位表現(參見例如，Couture,A等人TIG.(1996),12：5-10；Skillern,A.等人，WO 00/22113、WO 00/22114、與美國專利案號6,054,299)。供表現靶向HBV之shRNA之表現載體實例提供於Michler等人，2016，其揭示用於傳遞之腺相關病毒(AAV)8載體，包括(i)讓shRNA包埋在肝專一性啟動子之下之人工(微)小RNA；(ii)共同表現之Argonaute-2，一種速率限制細胞因子，其被過量RNAi啟動子飽和時會有毒性；或(iii)共同傳遞針對shRNA正義股之誘餌(「TuD」)，以約束脫靶基因調節作用。將編碼各shRNA之寡核苷酸直接插入自我互補AAV載體質體(過去已由Grimm等人，2006(Nature 441：537-541)提出)(包含H1啟動子，接著為兩個供插入寡核苷酸之BbsI位點及一個RSV啟動子)，選殖表現shRNAs shHBV4至7之質體，用於細胞培養試驗。此等構築體若大小適於表現載體，則亦可用於表現疫苗抗原。
該表現可為暫時(數小時至數週)或持續性(數週至數個月或更久)，依所採用之特定構築體與標靶組織或細胞型態而定。此等基因轉殖可呈線性構築體、環狀質體、或病毒載體引進，其可為整合或非整合載體。亦可 構築該基因轉殖，使其得以呈染色體外質體遺傳(Gassmann等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1995)92：1292)。
iRNA之個別股或兩股可由表現載體之啟動子轉錄。當希望這兩個分開股可以表現產生例如，dsRNA時，可以將兩個分開之表現載體共同引進(例如，轉染或感染)至標靶細胞。或者，dsRNA之各個別股可利用均位於相同表現質體之啟動子轉錄。一項實施例中，dsRNA係表現反向重複序列多核苷酸，其利用鏈結體多核苷酸序列鏈結，因此dsRNA具有莖與環結構。
iRNA表現載體通常為DNA質體或病毒載體。可採用可與真核生物細胞相容，較佳為彼等與脊椎動物細胞相容之表現載體來製造重組構築體，供表現本文所說明之iRNA。真核生物細胞表現載體係發明所屬技術領域中習知，且可從許多商品來源取得。通常，所提供之此等載體包含合宜之限制酶切割位點，供嵌入所需之核酸節段。iRNA表現載體可經全身性傳遞，如經皮下、靜脈內、或經肌內投藥。此等載體亦可用於由核酸系疫苗表現病毒抗原。
本文所說明方法與組成物可使用之病毒載體系統包括(但不限於)：(a)腺病毒載體；(b)反轉錄病毒載體，包括(但不限於)：慢病毒載體、莫洛尼氏鼠類白血病病毒等等；(c)腺相關病毒載體；(d)單純皰疹病毒載體；(e)SV 40載體；(f)多瘤病毒載體；(g)乳頭狀瘤病毒載體；(h)微小核糖核酸病毒載體；(i)痘病毒載體，如，正痘，例 如，牛痘病毒載體，包括經修飾之安卡拉(Ankara)病毒載體或鳥痘，例如，金絲雀痘或雞痘；與(j)輔助病毒依賴型(helper-dependent)或空殼(gutless)腺病毒。複製缺陷病毒亦有利。不同載體將會或將不會納入細胞之基因組中。若需要時，構築體可包括用於轉染之病毒序列。或者，構築體可納入可以進行游離基因體複製之載體中，例如，EPV與EBV載體。供重組表現iRNA或HBV抗原之構築體通常需要調節元件，例如，啟動子、加強子等等，以確保iRNA於標靶細胞中表現。下文中將進一步說明有關載體與構築體之其他態樣。
此等構築體與載體若大小適合表現載體，亦可用於表現疫苗抗原。此等限制係彼等發明所屬技術領域中之技術人員咸了解。
B. 本發明方法所使用之醫療性HBV疫苗
本發明療程與方法使用之醫療性HBV疫苗可為肽疫苗、包括載體系疫苗之DNA疫苗或細胞系疫苗，其可誘發免疫反應，較佳為效應子T細胞誘發之反應，對抗一或多種HBV蛋白質。較佳疫苗為多重抗原表位疫苗，其可與多重HBV血清型，較佳為所有HBV血清型交叉反應。
醫療性疫苗之設計在於活化患者之免疫系統，以辨識並調控或消除已確立之病原體感染。此點與設計在於促進入侵的病原體快速進行抗體介導中和作用之預防性疫苗接種完全不同。調控及消除持續性病毒，如肝炎、 疱疹、或乳頭狀瘤病毒需要多重專一性與多功能性效應子T細胞反應。此等T細胞反應理想上係針對持續表現之病毒抗原，以制止病原體。醫療性疫苗正在發展用於許多種慢性感染。B型肝炎病毒感染為可採用醫療性疫苗接種處理的選項，因為自發性免疫介導治癒慢性B型肝炎及消除病毒的病例極罕見。
強大的T細胞反應似乎為達成HBV治癒之必要條件。雖然HBV專一性CD4+與CD8+ T細胞反應很容易在已解除HBV感染的患者中檢測到，但HBV專一性T細胞很罕見且最可能因大量循環之病毒HBeAg與HBsAg而在慢性B型肝炎中出現功能性損傷。T細胞藉由其細胞毒性消除感染HBV之細胞，而且亦以非溶胞方式調控HBV基因表現及複製。
為了克服慢性B型肝炎中之免疫耐受性，已在預臨床模式中使用不同方法探討，使用DNA或肽疫苗、或載體系疫苗或細胞系疫苗來誘發效應子T細胞反應。已發展出涵蓋充分不同HBV基因型及最多種HLA型之多重抗原表位醫療性疫苗候選物。雖然已證實適當肽呈現，但免疫原性仍受到限制，且該方法仍無法轉移至臨床上。下表提供未盡臚列清單。
Figure 107113207-A0202-12-0115-4179
Figure 107113207-A0202-12-0116-4180
Figure 107113207-A0202-12-0117-4181
現存的預防性疫苗已用於為慢性感染患者 恢復HBV專一性免疫力，但仍無法提供功能性治癒。此等次病毒粒子系之疫苗可以在慢性肝病毒感染動物模式中降低HBV複製，但未曾在慢性B型肝炎患者中成功。使用礬作為佐劑之抗原-抗體(HBsAg-HBIG)免疫原性複合物醫療性疫苗候選物首先在雙盲，安慰劑對照之第II b期臨床試驗中顯示有希望之結果，但包括450位患者之第III期臨床試驗結果卻令人失望。其最可能原因為使用礬系佐劑之次病毒粒疫苗之設計為預防性疫苗，且優先誘發抗體，而非誘發醫療效力所需之細胞毒性T細胞反應。
或者，編碼HBV套膜蛋白質之DNA疫苗之設計係誘發HBV專一性T細胞，但成功結果亦有限。由於DNA系疫苗很難誘發抗體反應，無法達成HBeAg或HBsAg血清轉換。另一種DNA初免，包含編碼HBV套膜蛋白質之HBV preS/S區之痘病毒-追加疫苗在黑猩猩中顯示有希望的結果，但亦在臨床第IIa期試驗中失敗，其無法誘發持續T細胞反應，亦無法在慢性HBV帶原者中減少病毒血。其等可能無法誘發T細胞充分協助或擴大多重專一性免疫反應。
發明所屬技術領域中已知之任何疫苗均可用於本文提供之方法與療程。較佳實施例包括初免-追加疫苗接種流程，其係如實例中所提供及如PCT公開案案號WO 2017/121791(其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)中所提供，投與蛋白質抗原兩次及投與核酸疫苗一次。如上文所討論，疫苗中之蛋白質抗原序列與由核酸系疫苗 編碼之胺基酸序列不一定一致。其等必需共享至少一個抗原表位，較佳為多個抗原表位，因此連續投與疫苗具有所需之初免-追加效應。此外，如本文所討論，較佳實施例中，本文所提供治療療程將提供橫跨多種(若非全部)HBV血清型均有效之治療療程。因此，咸了解，傳遞給個體之抗原可能不會與感染個體之HBV病毒所表現之抗原具有一致之抗原序列。
發明所屬技術領域中已知HBV抗原之有些部分係在感染HBV之初始免疫反應期間所產生抗體之主要標靶，稱為決定基。例如，HBsAg包括「a」決定基抗原表位，其位於226個胺基酸S基因(SEQ ID NO：8或22)之主要親水區(MHR，胺基酸100至169)中之胺基酸124至147。此「a」決定基係抗HBs抗體在急性B型肝炎之初始免疫反應過程期間之主要標靶之一。某些實施例中，HBsAg之免疫原性片段包含相較於全長度蛋白質，對應於小套膜蛋白質(SEQ ID NO：23)胺基酸位置至少胺基酸99至168(參見例如，Lada等人，J.Virol.(2006)80：2968-2975，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)。
同樣地，已在HBcAg中判別決定基(參見例如，Salfeld等人，J.Virol.(1989)63：798-808，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)。全長度核心蛋白質為183個胺基酸長度，係由組裝功能域(胺基酸1至149)與核酸結合性功能域(胺基酸150至183)組成。已經判別三種不同主要決定基之特徵。在組裝核心(HBc)中負責HBc抗原 性之單一構形決定基與線性HBe-相關決定基(HBe1)二者均經過圖譜分析其在胺基酸80周圍之重疊親水性序列；指定第二個HBe決定基(HBe2)位在胺基酸138附近，但發現其抗原性需要分子內包含胺基酸10至140之間之延長序列。通常，此等免疫原性片段，相較於全長度核心蛋白質，包含對應於SEQ ID NO：24所示序列位置之至少胺基酸18至143。類似序列可於SEQ ID NO：10中判別。
較佳實施例中，疫苗包括之胺基酸序列或所編碼之胺基酸序列包括HBsAg或HBcAg之至少一個決定基。明確言之，某些實施例中，靶向HBsAg之疫苗至少包括HBsAg之胺基酸127至147之胺基酸序列，例如，至少包括小套膜蛋白質胺基酸序列(SEQ ID NO：23)之胺基酸99至168。某些實施例中，疫苗靶向在HBcAg之至少胺基酸80周圍之親水性序列或至少胺基酸138周圍之胺基酸序列，例如，包括胺基酸80或胺基酸138之SEQ ID NO：43之至少40個胺基酸部分、至少50個胺基酸部分、至少60個胺基酸部分、至少70個胺基酸部分、至少80個胺基酸部分、至少90個胺基酸部分、或至少100個胺基酸部分，或其編碼序列。較佳實施例中，靶向HBcAg之抗原之抗原胺基酸序列包括SEQ ID NO：24之胺基酸80或138 N末端與C末端之至少20個胺基酸。某些實施例中，靶向HBcAg之疫苗至少包括HBsAg之胺基酸10至140或18至143之胺基酸序列。
某些實施例中，疫苗可包含任何一個或多 個SEQ ID NO：22、23、或24之整個胺基酸序列或編碼該整個胺基酸序列。
咸了解有多種HBV血清型，其具有編碼不同胺基酸序列之不同核酸序列。因此，咸了解，蛋白質系疫苗之胺基酸序列或由核酸系疫苗編碼之胺基酸序列不一定與SEQ ID NO中提供之序列100%同一性。本發明某些實施例中，蛋白質系疫苗之胺基酸序列或由核酸系疫苗編碼之胺基酸序列與SEQ ID NO：22、23、或24中一部分為至少90%同一性、至少91%同一性、至少92%同一性、至少93%同一性、至少94%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、或至少98%同一性。其他例示性HBsAg與HBcAg胺基酸序列提供於序列表中。為了判別對應上述序列中HBsAg與HBcAg決定基之適當序列之排比法係發明所屬技術領域中已知者。
疫苗較佳包含MVA病毒，濃度範圍在104至109組織培養感染劑量(TCID)50/ml，較佳濃度範圍為105至5x108 TCID50/ml，更佳濃度範圍為106至108 TCID50/ml，及最佳濃度範圍為107至108 TCID50/ml。
對人類之較佳疫苗接種劑量包含106至109 TCID50，最佳劑量為106 TCID50或107 TCID50或108 TCID50。
本發明較佳方法包括同時投與蛋白質系疫苗與核酸系疫苗。然而，其他方法包括僅投與蛋白質抗原。較不佳實施例中，包括僅投與編碼抗原之核酸。
i. 佐劑
本文所採用術語「佐劑」咸了解係指促進(例如，加強、加速、或延長)針對已投與之抗原之免疫反應之製劑，以誘發長期保護免疫性。針對佐劑本身沒實質免疫反應。佐劑包括(但不限於)：病原體組分、粒狀佐劑、與組合佐劑(參見例如，www.niaid.nih.gov/research/vaccine-adjuvants-types)。病原體組分(例如，單磷醯基脂質A(MPL)、聚(I：C)、CpG DNA、乳劑如聚[二(鈉羧酸根乙基苯氧基)磷腈](PCEP))可藉由靶向先天免疫細胞內或表面之各種不同受體，協助啟動針對疫苗之早期非專一性或先天的免疫反應。先天免疫系統影響後天免疫反應，其提供長期保護對抗該疫苗所靶向之病原體。粒狀佐劑(例如，礬、病毒小體、細胞素例如，IL-12)形成極小粒子，可刺激免疫系統，亦可加強傳遞抗原至免疫細胞。組合佐劑(例如，AS02、AS03、與AS04(均來自GSK)；MF59(Novartis)；ISCOMATRIX®(CSL Limited)；與IC31®(Altimmune)誘發多重保護性免疫反應。單獨使用時具有適度效應之佐劑在共同使用時可能誘發更強力免疫反應。某些實施例中，較佳佐劑包括c-二-AMP、c-二-GMP、、c-二-CMP、聚ICLC、CpG、ISCOMATRIX®、AS02、AS03、AS04、或RIG-I配體，如5’ 3P-RNA。某些實施例中，可使用含或不含表現HBV抗原之核酸之病毒衣殼作為佐劑。本發明方法可使用例如，優先刺激T細胞之疫苗，如僅MVA-或DNA初免、MVA追加或腺病毒載體初免-MVA追加。
本發明較佳實施例中，本發明所使用之佐劑如上述可促進體液與細胞免疫反應。某些實施例中，佐劑提供平衡之Th1/Th2反應。
ii. 無佐劑之免疫刺激劑與其他製劑
本發明方法可進一步包括投與用於治療HBV或刺激免疫反應之其他製劑。此等製劑可包括免疫刺激劑(例如，聚乙二醇基化干擾素α2a(PEG-IFN-α2a)、干擾素α-2b、重組人類間白素-7、與類Toll受體3、7、8、或9(TLR3、TLR7、TLR8、或TLR9)促效劑)、病毒進入抑制劑(例如，Myrcludex)、抑制HBsAg分泌或釋出之寡核苷酸(例如，REP 9AC)、衣殼抑制劑(例如，Bay41-4109與NVR-1221)、cccDNA抑制劑(例如，IHVR-25)、Rig-I-配體、STING促效劑、對抗HBV之基於抗體之免疫療法(對抗HBV之單價抗體、兩價抗體、或三價抗體)、或免疫檢查點調節劑。此等製劑係發明所屬技術領域中已知者。
C. 本發明方法所使用之核苷酸與核苷類似物
核苷酸與核苷類似物被視為HBV感染之標準照護法，因為其等通常安全且便宜。然而，核苷酸與核苷類似物無法治癒HBV感染，可能導致發展出抗性，必需無限期服用。核苷酸類似物與核苷類似物包括(但不限於)：替諾福韋二吡呋酯(Tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide)、拉米夫定(Lamivudine)、 阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、替比夫定(Telbivudine)、AGX-1009、恩曲他濱(emtricitabine)、克拉夫定(clevudine)、利托那韋(ritonavir)、迪夫昔(dipivoxil)、洛布卡韋(lobucavir)、泛維爾(famvir)、FTC、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇(theradigm)-HBV、胸腺素-α、及更昔洛韋(ganciclovir))、貝斯福韋(besifovir)(ANA-380/LB-80380)、與替諾福韋-抑利德斯(Tenofvir-Exalidex)(TXL/CMX157)。某些實施例中，核苷(酸)類似物為恩替卡韋(Entecavir)(ETV)或替諾福韋(Tenofovir)或其衍生物。某些實施例中，核苷(酸)類似物不為拉米夫定(Lamivudine)。核苷(酸)類似物可自許多商品來源取得，且可依據其仿單適應症用於本文提供之方法(例如，通常口服特定劑量)或由習此發明所屬技術領域之操作者決定用於治療HBV。
III. 靶向HBV之反義寡核苷酸
本發明包括使用促進裂解至少一種HBV轉錄物，較佳係三或四種HBV轉錄物之iRNA。本文所提供本發明方法中，反義寡核苷酸同樣可用於促進裂解至少一種HBV轉錄物，較佳為三或四種HBV轉錄物。靶向HBV之反義寡核苷酸實例提供於例如，美國專利公開案案號2013/0035366、2012/0207709、與2004/0127446，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
彼等發明所屬技術領域中之技術人員咸了解，上文所 提供用於傳遞siRNA之接合物、鏈結體、與調配物可用於調配及傳遞反義寡核苷酸醫療劑給個體。
IV. 本發明之醫藥組成物
本發明亦包括其中包括本發明所使用之iRNA或疫苗之醫藥組成物與調配物。咸了解，核准之醫療劑係依其包裝說明書指示之途徑調配及投藥。
有些實施例中，本文提供包含本文說明之iRNA或疫苗、與醫藥上可接受之載劑之醫藥組成物。包含iRNA或疫苗之醫藥組成物適用於治療感染HBV之個體。此等醫藥組成物係依據傳遞模式調配，例如，調配成以非經腸式傳遞而全身性投藥之組成物，例如，經皮下(SC)、肌內(IM)、或經靜脈內(IV)傳遞。
本發明所使用之醫藥性RNAi組成物可投與充分劑量，以顯著降低至少一種HBV轉錄物之含量。通常，本發明iRNA之合適劑量在接受者每天每公斤體重約0.001至約200.0毫克之範圍內，通常在每天每公斤體重約1至50mg之範圍內。通常，本發明iRNA之合適劑量在約0.1mg/kg至約5.0mg/kg，較佳為約0.3mg/kg與約3.0mg/kg之範圍內。重複投藥療程可包括規律投與醫療量之iRNA，如每隔一週或一年一次。某些實施例中，iRNA係約每個月投藥一次至約每一季投藥一次(亦即約每三個月一次)。較佳實施例中，RNAi劑係皮下投藥。
疫苗之調配與用藥係依所投與疫苗之性質 而定。在蛋白質初免-表現載體追加疫苗接種策略中，蛋白質系初免疫苗係間隔約2、3、或4週投藥，其中在第二劑蛋白質系疫苗之後約2、3、或4週追加表現載體疫苗。某些實施例中，第一劑與第二劑蛋白質系疫苗之間間隔約兩週。某些實施例中，第二劑該蛋白質系疫苗與追加DNA表現載體疫苗之間間隔約2週。某些實施例中，初免與追加疫苗接種係採用分別獨立選自下列之途徑投與：肌內、皮內、或皮下。
本發明所使用醫藥性核酸系疫苗不論作為初免劑或追加劑，其投藥劑量均應足以促進免疫反應。該核酸系疫苗之投藥量將依例如，疫苗之設計而定。本文所提供之療程可包括使用現有核酸系疫苗，與醫療效力與安全性有關之適當劑量應依所採用之特定製劑而定。
本發明所使用醫藥性蛋白質系疫苗不論作為初免劑或追加劑，其投藥劑量均應足以促進免疫反應。該蛋白質系疫苗之投藥量將依例如，所使用之佐劑而定。蛋白質系疫苗之投藥量為例如，約5至100mg/kg/劑、約10至50mg/kg/劑、或約20至40mg/kg/劑。本文所提供之療程可包括使用現有蛋白質系疫苗，與醫療效力與安全性有關之適當劑量應依所採用之特定製劑而定。
經過初始治療療程後，該治療法可減少投藥頻率。較佳實施例中，本文所提供治療療程與方法造成功能性治癒之結果，可以在完成療程或由診斷標準指示達功能性治癒，例如，HBsAg含量較佳係降至本文所提供方 法之檢測程度以下且對HBsAg出現可檢測之免疫反應之後，即可停止治療。
發明所屬技術領域中之技術人員咸了解，某些因素會影響有效治療個體時所需之劑量與投藥時間，包括(但不限於)：疾病或病變之嚴重性、過去之治療、個體之一般健康與/或年齡、及其他現有疾病。此外，以醫療有效量之組成物治療該個體時可包括單次治療或連續治療。本發明方法與療程中所使用個別醫療劑可採用習知方法或使用本文說明且發明所述技術領域中已知之適當動物模式，依據活體內試驗估測其有效劑量及活體內半衰期。
A.包含膜分子組合之iRNA調配物
本發明組成物與方法所使用之iRNA可調配成在膜分子組合(例如，脂質體或微胞)中傳遞。本文所採用術語「脂質體」係指由兩親性脂質排成至少一個雙層(例如，一個雙層或複數個雙層)所組成之囊泡。脂質體包括單層與多層囊泡，其具有由親脂性材料形成之膜與水性內部。該水性部分包含iRNA組成物。親脂性材料隔離該水性內部與水性外部(其通常不包括iRNA組成物，但某些實例中可能包括)。脂質體適用於轉運及傳遞活性成分至作用位點。由於脂質體膜為結構類似於生物膜，因此當施加脂質體至組織時，脂質體雙層與細胞膜之雙層融合。當脂質體併入且繼續進行細胞過程時，包括iRNA之內部水性內容物即傳遞至細胞中，此時iRNA專一性結合標靶RNA，並可介導RNAi。 某些情況中，脂質體亦會例如，主導iRNA專一性靶向特定細胞型態。
包含iRNA劑之脂質體可依各種不同方法製備。其中一項實例中，脂質體之脂質成分溶於清潔劑中，因此與脂質組分形成微胞。例如，脂質成分可為兩親性陽離子性脂質或脂質接合物。清潔劑可具有高的臨界微胞濃度，且可為非離子性。清潔劑實例包括膽酸鹽、CHAPS、辛基葡糖苷、去氧膽酸鹽、與月桂醯基肌胺酸。然後添加iRNA製劑至包括脂質組分之微胞中。脂質之陽離子性基團與iRNA劑交互作用，在iRNA劑周圍縮合，形成脂質體。縮合後，排除清潔劑(例如，採用透析法)，產生iRNA劑之脂質體製劑。
若必要時，可在縮合反應期間添加(例如，採用調控添加法)促進縮合之載劑化合物。例如，載劑化合物可為核酸以外之聚合物(例如，精胺或精脒)。亦可調整pH以便有利於縮合。
引進多核苷酸/陽離子性脂質複合物作為該傳遞媒劑之結構組分來製造安定之多核苷酸傳遞媒劑之方法進一步說明於例如，WO 96/37194，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。脂質體調配物亦包括以下文獻所說明方法實例之一個或多個態樣：Felgner,P.L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 8：7413-7417,1987；美國專利案號4,897,355；美國專利案號5,171,678；Bangham等人M.Mol.Biol.23：238,1965；Olson等人Biochim.Biophys. Acta 557：9,1979；Szoka等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75：4194,1978；Mayhew等人Biochim.Biophys.Acta 775：169,1984；Kim等人Biochim.Biophys.Acta 728：339,1983；與Fukunaga等人Endocrinol.115：757,1984。常用於製備適當大小之脂質凝集物作為傳遞媒劑使用之技術包括音波法與冷凍-解凍附加擠壓法(參見例如，Mayer等人之Biochim.Biophys.Acta 858：161,1986)。當需要一致性小(50至200nm)且相對均一之凝集物時，可能使用微流體化法(Mayhew等人之Biochim.Biophys.Acta 775：169,1984)。很容易採用此等方法來包裹iRNA劑製劑進入脂質體中。
脂質體分成兩大類。陽離子性脂質體為帶正電荷之脂質體，其會與帶著負電荷之核酸分子反應，形成安定複合物。帶正電荷之核酸/脂質體複合物會與帶負電荷之細胞表面結合，並在核內體中內化。由於核內體中為酸性pH，因此脂質體會瓦解，釋出其內容物進入細胞質中(Wang等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.,1987,147,980-985)。
對pH敏感或帶負電荷之脂質體，包埋核酸，而不是與其複合。由於核酸與脂質均帶類似電荷，因此會發生排斥而不是形成複合物。儘管如此，有些核酸包埋在此等脂質體之水性內部中。對pH敏感之脂質體已被用於傳遞編碼胸苷激酶基因之核酸至培養物之細胞單層中。已在標靶細胞中檢測到外源性基因之表現(Zhou等人，Journal of Controlled Release,1992,19,269-274)。
其中一種主要脂質體組成物型態包括除了天然衍生之磷脂醯基膽鹼以外之磷脂質。中性脂質體組成物可由例如，二肉豆蔻醯基磷脂醯基膽鹼(DMPC)或二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼(DPPC)形成。陰離子性脂質體組成物通常係由二肉豆蔻醯基磷脂醯基甘油形成，而陰離子性基因融合性脂質體則主要由二油醯基磷脂醯基乙醇胺(DOPE)形成。另一種脂質體組成物係由磷脂醯基膽鹼(PC)形成，如，例如，大豆PC與蛋PC。另一種係由磷脂質或磷脂醯基膽鹼或膽固醇之混合物形成。
於活體外與活體內引進脂質體進入細胞之其他方法實例包括美國專利案號5,283,185與5,171,678；WO 94/00569；WO 93/24640；WO 91/16024；Felgner,J.Biol.Chem.269：2550,1994；Nabel,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：11307,1993；Nabel,Human Gene Ther.3：649,1992；Gershon,Biochem.32：7143,1993；與Strauss EMBO J.11：417,1992。
亦曾檢視非離子性脂質體系統，以判斷其傳遞藥物至皮膚之用途，特定言之包含非離子性表面活性劑與膽固醇之系統。曾利用包含NovasomeTM I(二月桂酸甘油酯/膽固醇/聚氧乙烯-10-硬脂基醚)與NovasomeTM II(二硬脂酸甘油酯/膽固醇/聚氧乙烯-10-硬脂基醚)之非離子性脂質體調配物傳遞環孢素-A進入小鼠皮膚之真皮。結果顯示，此等非離子性脂質體系統可以有效促進環孢素-A沉積在不同皮膚層內(Hu等人S.T.P.Pharma.Sci.,1994,4(6) 466)。
脂質體亦包括「立體上安定之」脂質體，本文所採用該名詞係指包含一或多種特異化脂質之脂質體，當該脂質納入脂質體中時，其相對於缺乏此等特異化脂質之脂質體更加強其循環壽命。立體上安定之脂質體實例為彼等在脂質體形成囊泡之脂質部分中，(A)包含一或多種配醣脂，如單唾液酸神經節苷脂GM1，或(B)係經過一或多種親水性聚合物衍化，如聚乙二醇(PEG)部分基團。雖然不希望受到任何特定理論之限制，但發明所屬技術領域中認為，至少針對包含神經節苷脂、鞘磷脂或PEG-衍生之脂質，可藉由減少吸收進入網狀內皮系統(RES)細胞來加強此等立體上安定之脂質體之循環半衰期(Allen等人，FEBS Letters,1987,223,42；Wu等人，Cancer Research,1993,53,3765)。
發明所屬技術領域中已知包含一或多種配醣脂之各種不同脂質體。Papahadjopoulos等人(Ann.N.Y.Acad.Sci.,1987,507,64)提出單唾液酸神經節苷脂GM1、半乳糖腦苷脂硫酸酯與磷脂醯基肌醇改善脂質體之血液半衰期之能力。此等結果已闡述於Gabizon等人(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1988,85,6949)。均頒予Allen等人之美國專利案號4,837,028與WO 88/04924揭示之脂質體包含(1)鞘磷脂與(2)神經節苷脂GM1或半乳糖腦苷脂硫酸酯。美國專利案號5,543,152揭示包含鞘磷脂之脂質體。WO 9713499(Lim等人)揭示包含1,2-sn-二肉豆蔻醯基磷脂醯 基膽鹼之脂質體。
陽離子性脂質體之優點在於可與細胞膜融合。非陽離子性脂質體雖然無法如同漿膜一般有效融合，但可於活體內被巨噬細胞吸收，並可用於傳遞iRNA劑至巨噬細胞。
脂質體之其他優點包括：得自天然磷脂質之脂質體為生物可相容與生物可降解；脂質體可容納廣範圍的水可溶性與脂質可溶性藥物；脂質體可保護包埋在其內部隔室內之iRNA劑免於代謝與降解(Rosoff說明於「Pharmaceutical Dosage Forms」，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，第一冊，p.245)。製備脂質體調配物時之重要考量為脂質表面電荷、囊泡大小及脂質體之水性體積。
帶正電荷之合成性陽離子性脂質：N-[1-(2,3-二油基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)可用於形成小脂質體，其與核酸自發性交互反應，形成脂質-核酸複合物，其可再與組織培養細胞之細胞膜之帶負電荷脂質融合，造成傳遞iRNA劑(有關DOTMA及其使用DNA之方法之說明可參見例如，Felgner,P.L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 8：7413-7417,1987與美國專利案號4,897,355)。
DOTMA類似物：1,2-雙(油醯基氧基)-3-(三甲基銨)丙烷(DOTAP)可與磷脂質組合使用，形成與DNA-複合之囊泡。LipofectinTM(Bethesda Research Laboratories, Gaithersburg,Md.)為一種傳遞高陰離子性核酸進入活組織培養細胞之有效劑，其包含帶正電荷之DOTMA脂質體，與帶負電荷之多核苷酸自發性交互作用，形成複合物。當使用帶充分正電荷之脂質體時，所得複合物之淨電荷亦帶正電。依此方式製得之帶正電荷複合物自發性附接帶負電荷之細胞表面，與漿膜融合，有效傳遞功能性核酸至例如，組織培養細胞中。另一種可自商品取得之陽離子性脂質：1,2-雙基氧基)(油醯基氧基)-3,3-(三甲基銨)丙烷(「DOTAP」)(Boehringer Mannheim,Indianapolis,Indiana)不同於DOTMA之處在於該油醯基部分基團係利用酯而非醚鏈結基鏈結。
其他提出之陽離子性脂質化合物包括彼等已接合各種不同部分基團者，包括例如，羧基精胺，其已接合兩種脂質中之一，且包括化合物，如5-羧基精胺基甘胺酸二辛基油醯基醯胺(「DOGS」)(TransfectamTM,Promega,Madison,Wisconsin)與二棕櫚醯基磷脂醯基乙醇胺5-羧基精胺基-醯胺(「DPPES」)(參見例如，美國專利案號5,171,678)。
另一種陽離子性脂質接合物包括與膽固醇衍化之脂質(「DC-Chol」)，其已與DOPE組合調配至脂質體中(參見Gao,X.與Huang,L.,Biochim.Biophys.Res.Commun.179：280,1991)。有報告提出由聚離胺酸接合DOPE製成之脂聚離胺酸可以在血清之存在下有效轉染(Zhou,X.等人，Biochim.Biophys.Acta 1065：8,1991)。 某些細胞株中，此等包含接合陽離子性脂質之脂質體據稱比包含DOTMA之組成物具有更低之毒性，並可提供更有效之轉染。其他可自商品取得之陽離子性脂質產品包括DMRIE與DMRIE-HP(Vical,La Jolla,California)與脂染胺(Lipofectamine)(DOSPA)(Life Technology,Inc.,Gaithersburg,Maryland)。其他適合傳遞寡核苷酸之陽離子性脂質說明於WO 98/39359與WO 96/37194。
脂質體調配物特別適合局部投藥，脂質體比其他調配物具有數項優點。此等優點包括降低與高度全身性吸收所投與藥物有關之副作用、增加所投與藥物在所需標靶處之累積量、及投與iRNA劑至皮膚中之能力。有些實施例中，採用脂質體傳遞iRNA劑至表皮細胞，且亦加強iRNA劑滲透進入皮膚組織，例如，皮膚中。例如，脂質體可局部施用。藥物調配成脂質體經局部表面傳遞至皮膚之作用已有文獻說明(參見例如，Weiner等人，Journal of Drug Targeting,1992,vol.2,405-410與du Plessis等人，Antiviral Research,18,1992,259-265；Mannino,R.J.與Fould-Fogerite,S.,Biotechniques 6：682-690,1988；Itani,T.等人，Gene 56：267-276.1987；Nicolau,C.等人，Meth.Enz.149：157-176,1987；Straubinger,R.M.與Papahadjopoulos,D.Meth.Enz.101：512-527,1983；Wang,C.Y.與Huang,L.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7851-7855,1987)。
包括iRNA之脂質體可具有高度變形性。此等變形性讓脂質體得以滲透經由比脂質體平均半徑更小之 小孔。例如，傳遞體(transfersome)即為一種可變形之脂質體。可以添加表面邊界活化劑(通常為表面活性劑)至標準脂質體組成物中來製備傳遞體。包括iRNA劑之傳遞體可例如，經皮下注射傳遞，以傳遞iRNA劑至皮膚中之角質細胞。為了穿過完整之哺乳動物皮膚，脂質囊泡必需在合適之跨皮梯度之影響下穿過一系列小孔，每個孔之直徑均小於50nm。此外，因脂質系性質，此等傳遞體可以自行最優化(配合例如，皮膚中之小孔形狀)、自行修補，並經常不需要切斷即可到達其標靶，並經常可自行裝載。
其他適合本發明之調配物說明於WO 2008042973。
表面活性劑可廣泛用於如乳液(包括微乳液)與脂質體之調配物。許多不同型態之表面活性劑(包括天然與合成性)之性質最常用之分類與分級方式為親水性/疏水性平衡值(HLB)。親水性基團(亦稱為「頭基」)為調配物中所採用不同表面活性劑提供最適用之分類方式(Rieger述於「Pharmaceutical Dosage Forms」,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,1988,p.285)。
若表面活性劑分子未離子化，則歸類於非離子性表面活性劑。非離子性表面活性劑廣泛用於醫藥與化粧品，且適用於大範圍之pH值。通常其HLB值範圍為2至約18，依其結構而定。非離子性表面活性劑包括非離子性酯類，如乙二醇酯類、丙二醇酯類、甘油基酯類、聚甘油基酯類、山梨糖醇酐酯類、蔗糖酯類與乙氧基化酯類。 此類表面活性劑亦包括非離子性烷醇醯胺類與醚類，如脂肪醇乙氧化物、丙氧化醇、與乙氧基化/丙氧基化嵌段聚合物。聚氧乙烯表面活性劑為最常用之非離子性表面活性劑類之成員。
若溶解或分散於水中時表面活性劑分子攜帶負電荷，則該表面活性劑歸類為陰離子性。陰離子性表面活性劑包括羧酸鹽類，如皂類、乳酸醯基酯類、胺基酸之醯基醯胺類、硫酸之酯類(如硫酸烷基酯與硫酸乙氧基化烷基酯類)、磺酸鹽類(如烷基苯磺酸鹽、醯基羥乙基磺酸鹽、醯基牛磺酸鹽)與磺琥珀酸鹽類、與磷酸鹽類。陰離子性表面活性劑類之最重要成員為硫酸烷基酯類與皂類。
若溶解或分散於水中時表面活性劑分子攜帶正電荷，則該表面活性劑歸類為陽離子性。陽離子性表面活性劑包括四級銨鹽類與乙氧基化胺類。該四級銨鹽類為此類物質之最常用成員。
若表面活性劑分子有能力攜帶正電荷或負電荷時，該表面活性劑則歸類於兩親性。兩親性表面活性劑包括丙烯酸衍生物、經取代之烷基醯胺類、N-烷基甜菜鹼與磷脂。
表面活性劑於藥品、調配物與乳液中之用法已有說明(Rieger述於「Pharmaceutical Dosage Forms」,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,1988,p.285)。
本發明方法所使用之iRNA亦可呈微胞調配物提供。本文中「微胞」之定義為一種特別類型之分子 集合，其中兩親性分子呈球狀結構排列，因此分子之所有疏水性部分均向內，讓親水性部分與周圍水相接觸。若環境為疏水性時，其排列則相反。
B.脂質粒子
本發明iRNA，例如，dsRNA可以完全包埋在脂質調配物(例如，LNP)或其他核酸-脂質粒子中。包含在適當啟動子調控下編碼病毒抗原之序列之表現載體或RNA可以在脂質粒子中調配用於傳遞。
本文所採用術語「LNP」係指安定之核酸-脂質粒子。LNP通常包含陽離子性脂質、非陽離子性脂質、與防止粒子凝集之脂質(例如，PEG-脂質接合物)。LNP極適用於全身性用途，因為其在經靜脈內(i.v.)注射後，顯現延長之循環壽命，並可在遠方位點(例如，離開投藥位點之身體部位)累積。LNP包括「pSPLP」，其包括包埋之縮合劑-核酸複合物，其說明於WO 0003683。本發明粒子典型地具有平均直徑約50nm至約150nm，更典型為約60nm至約130nm，更典型為約70nm至約110nm，最典型為約70nm至約90nm，且實質上無毒。此外，當核酸存在於本發明之核酸-脂質粒子中時，可以在水溶液中抵抗核酸酶之降解。核酸-脂質粒子與其製法揭示於例如，美國專利案號5,976,567；5,981,501；6,534,484；6,586,410；與6,815,432；US20100324120與WO 9640964。
有些實施例中，脂質與藥物之比值(質量/ 質量比值)(例如，脂質與dsRNA比例)將在約1：1至約50：1、約1：1至約25：1、約3：1至約15：1、約4：1至約10：1、約5：1至約9：1、或約6：1至約9：1之範圍內。上述範圍之間之範圍亦包括在本發明之一部分。
該陽離子性脂質可為例如，N,N-二油基-N,N-二甲基氯化銨(DODAC)、N,N-二硬脂基-N,N-二甲基溴化銨(DDAB)、N-(1-(2,3-二油醯基氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTAP)、N-(1-(2,3-二油基氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)、N,N-二甲基-2,3-二油基氧基)丙基胺(DODMA)、1,2-二亞油基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA)、1,2-二亞麻基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLenDMA)、1,2-二亞油基胺甲醯基氧基-3-二甲基胺基丙烷(DLin-C-DAP)、1,2-二亞油基氧基-3-(二甲基胺基)乙醯氧基丙烷(DLin-DAC)、1,2-二亞油基氧基-3-N-嗎啉基丙烷(DLin-MA)、1,2-二亞油醯基-3-二甲基胺基丙烷(DLinDaP)、1,2-二亞油基硫基-3-二甲基胺基丙烷(DLin-S-DMA)、1-亞油醯基-2-亞油基氧基-3-二甲基胺基丙烷(DLin-2-DMAP)、1,2-二亞油基氧基-3-三甲基胺基丙烷氯化物鹽(DLin-TMA.Cl)、1,2-二亞油醯基-3-三甲基胺基丙烷氯化物鹽(DLin-TAP.Cl)、1,2-二亞油基氧基-3-(N-甲基N-哌
Figure 107113207-A0202-12-0138-61
基)丙烷(DLin-MPZ)、或3-(N,N-二亞油基胺基)-1,2-丙二醇(DLinAP)、3-(N,N-二油基胺基)-1,2-丙二醇(DOAP)、1,2-二亞油基側氧基-3-(2-N,N-二甲基胺基)乙氧基丙烷(DLin-EG-DMA)、1,2-二亞麻基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷 (DLinDMA)、2,2-二亞油基-4-二甲基胺基甲基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-DMA)或其類似物、(3aR,5s,6aS)-N,N-二甲基-2,2-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)四氫-3aH-環戊并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-胺(ALN100)、4-(二甲基胺基)丁酸(6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(MC3)、1,1'-(2-(4-(2-((2-(雙(2-羥基十二碳烷基)胺基)乙基)(2-羥基十二碳烷基)胺基)乙基)哌
Figure 107113207-A0202-12-0139-62
-1-基)乙基氮烷二基(azanediyl))十二碳烷-2-醇(Tech G1)、或其混合物。陽離子性脂質佔粒子中總脂質含量之約20莫耳%至約50莫耳%或約40莫耳%。其他實施例中，可使用化合物2,2-二亞油基-4-二甲基胺基乙基-[1,3]-二氧雜環戊烷製備脂質-siRNA奈米粒子。
有些實施例中，脂質-siRNA粒子包括40% 2,2-二亞油基-4-二甲基胺基乙基-[1,3]-二氧雜環戊烷：10% DSPC：40%膽固醇：10% PEG-C-DOMG(莫耳百分比)，粒度為63.0±20nm，及0.027 siRNA/脂質比值。
該可離子化/非陽離子性脂質可為陰離子性脂質或中性脂質，包括(但不限於)：二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯基膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼(DPPC)、二油醯基磷脂醯基甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯基甘油(DPPG)、二油醯基-磷脂醯基乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯基膽鹼(POPC)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯基乙醇胺(POPE)、二油醯基-磷脂醯基乙醇胺4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧酸鹽(DOPE-mal)、 二棕櫚醯基磷脂醯基乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂醯基-磷脂醯基-乙醇胺(DSPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂醯基-2-油醯基-磷脂醯基乙醇胺(SOPE)、膽固醇、或其混合物。若包含膽固醇時，該非陽離子性脂質可佔粒子中總脂質含量之約5莫耳%至約90莫耳%、約10莫耳%、或約58莫耳%。
該抑制粒子凝集之接合脂質可為例如，聚乙二醇(PEG)-脂質，包括(但不限於)：PEG-二醯基甘油(DAG)、PEG-二烷基氧丙基(DAA)、PEG-磷脂質、PEG-神經醯胺(Cer)，或其混合物。PEG-DAA接合物可為例如，PEG-二月桂基氧基丙基(Ci2)、PEG-二肉荳蔻基氧基丙基(Ci4)、PEG-二棕櫚基氧基丙基(Ci6)、或PEG-二硬脂基氧基丙基(C]8)。該防止粒子凝集之接合脂質可佔粒子中總脂質含量之0莫耳%至約20莫耳%或約2莫耳%。
有些實施例中，該核酸-脂質粒子進一步包括膽固醇，例如，佔粒子中總脂質含量之約10莫耳%至約60莫耳%或約48莫耳%。
一項實施例中，可使用類脂質ND98．4HCl(MW 1487)(參見US20090023673，其揭示內容已以引用之方式併入本文中)、膽固醇(Sigma-Aldrich)、與PEG-神經醯胺C16(Avanti Polar Lipids)製備脂質-dsRNA奈米粒子(亦即LNP01粒子)。分別於乙醇中製備各儲備液如下：ND98，133mg/ml；膽固醇，25mg/ml；PEG-神經醯胺C16， 100mg/ml。然後ND98、膽固醇、與PEG-神經醯胺C16儲備液依例如，42：48：10莫耳比組合。組合之脂質溶液再與dsRNA水溶液(例如，乙酸鈉溶液，pH 5)混合，使最終乙醇濃度為約35至45%，最終乙酸鈉濃度為約100至300mM。通常會在混合時自發形成脂質-dsRNA奈米粒子。依所需粒度分佈而定，所得奈米粒子混合物可使用例如，熱桶擠壓機，如Lipex Extruder(Northern Lipids,Inc)，通過聚碳酸膜(例如，截斷值100nm)擠壓。有時候可以省略擠壓步驟。可採用例如，透析或切向流過濾法排除乙醇，並同時進行緩衝液交換。緩衝液可與例如，約pH 7，例如，約pH 6.9、約pH 7.0、約pH 7.1、約pH 7.2、約pH 7.3、或約pH 7.4之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)交換。
Figure 107113207-A0202-12-0141-4182
LNP01調配物說明於，例如，WO 2008042973，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
其他脂質-dsRNA調配物實例說明於表1。
Figure 107113207-A0202-12-0142-4183
Figure 107113207-A0202-12-0143-4184
Figure 107113207-A0202-12-0144-4185
DSPC：二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼
DPPC：二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼
PEG-DMG：PEG-二肉豆蔻醯基甘油(C14-PEG或PEG-C14)(PEG平均分子量為2000)
PEG-DSG：PEG-二硬脂基甘油(C18-PEG或PEG-C18)(PEG平均分子量為2000)
PEG-cDMA：PEG-胺甲醯基-1,2-二肉荳蔻基氧基丙基胺(PEG平均分子量為2000)
包含SNALP(1,2-二亞麻基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA))之調配物說明於國際公告案案號WO2009/127060(申請日：2009年4月15日)，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含XTC之調配物說明於PCT公開案案號WO 2010/088537，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含MC3之調配物說明於例如，美國公開案案號2010/0324120，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含ALNY-100之調配物說明於例如，PCT公開案案號WO 2010/054406，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含C12-200之調配物說明於PCT公開案案號WO 2010/129709，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
供經口投藥之組成物與調配物包括粉劑或粒劑、微粒、奈米粒、含於水性或非水性介質中之懸浮液或溶液、膠囊、凝膠膠囊、藥包、錠劑或迷你錠劑。可能期望增稠劑、調味劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或結合劑。有些實施例中，經口調配物為彼等其中由如本發明所說明特徵之dsRNA與一或多種滲透加強劑表面活性劑及 螯合劑組合投藥。合適表面活性劑包括脂肪酸或其酯類或鹽類、膽汁酸或其鹽類。合適膽汁酸/鹽類包括鵝去氧膽酸(CDCA)與熊去氧鵝去氧膽酸(UDCA)、膽酸、去氫膽酸、去氧膽酸、葡膽酸、甘膽酸、去氧甘膽酸、牛磺膽酸、牛磺去氧膽酸、牛磺-24,25-二氫-褐黴酸鈉與醣二氫褐黴酸鈉。合適脂肪酸包括花生四烯酸、十一碳烷酸、油酸、月桂酸、辛酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、二癸酸酯、三癸酸酯、單油酸甘油酯、二月桂酸甘油酯、1-單癸酸甘油酯、1-十二碳烷基氮雜環庚烷-2-酮、醯基肉鹼、醯基膽鹼、或其單酸甘油脂、二酸甘油脂或醫藥上可接受之鹽(例如，鈉鹽)。有些實施例中，可使用滲透加強劑之組合，例如，脂肪酸/鹽類與膽汁酸/鹽類之組合。其中一種組合實例為月桂酸鈉鹽、癸酸與UDCA之組合。其他滲透加強劑包括聚氧乙烯-9-月桂基醚、聚氧乙烯-20-鯨蠟基醚。如本發明所說明特徵之dsRNA可呈包括噴霧乾燥之粒子或複合形成微粒或奈米粒子之粒型經口傳遞。dsRNA複合劑包括聚-胺基酸；聚亞胺；聚丙烯酸酯；聚丙烯酸烷基酯、聚氧雜環丁烷(polyoxethane)、聚氰基丙烯酸烷基酯；陽離子化明膠、白蛋白、澱粉、丙烯酸酯、聚乙二醇(PEG)與澱粉；聚氰基丙烯酸烷基酯；DEAE-衍生之聚亞胺、短梗黴多醣(pollulans)、纖維素與澱粉。合適複合劑包括幾丁聚醣、N-三甲基幾丁聚醣、聚-L-離胺酸、聚組胺酸、聚鳥胺酸、聚精胺、魚精蛋白，聚乙烯吡啶、聚硫二乙基胺基甲基乙烯P(TDAE)、聚胺基苯乙烯(例如，對 胺基)、聚(氰基丙烯酸甲基酯)、聚(氰基丙烯酸乙基酯)、聚(氰基丙烯酸丁基酯)、聚(氰基丙烯酸異丁基酯)、聚(氰基丙烯酸異己基酯)、DEAE-甲基丙烯酸酯、DEAE-丙烯酸己基酯、DEAE-丙烯醯胺、DEAE-白蛋白與DEAE-葡聚糖、聚丙烯酸甲基酯、聚丙烯酸己基酯、聚(D,L-乳酸)、聚(DL-乳酸-共-乙醇酸(PLGA)、藻酸鹽、與聚乙二醇(PEG)。dsRNA之口服調配物與其製法詳細說明於美國專利案號6,887,906與6,747,014、與US 20030027780，其揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
本發明醫藥組成物包括(但不限於)：溶液、乳液與包含脂質體之調配物。此等組成物可由各種不同組分產生，包括(但不限於)：預成型液體、自行乳化之固體與自行乳化之半固體。當治療肝病變(如肝癌瘤)時，特佳為靶向肝臟之調配物。
適合呈單位劑型之本發明醫藥調配物可依據醫藥產業習知技術製備。此等技術包括組合活性成分與醫藥載劑(群)或賦形劑(群)之步驟。通常，調配物之製法為均勻且密切組合活性成分與液態載劑或細碎固態載劑或二者，然後若必要時，使產物成型。
V. 本發明方法之用途
本發明出示各種不同與治療療程。咸了解，該等方法提供使用本文所提供之RNAi劑與疫苗。亦即本發明提供用於治療具有B型肝炎感染之個體之方法： a)靶向至少三種HBV轉錄物之RNAi劑，其中該RNAi劑包含正義股與反義股；b)包含HBV核心抗原(HBcAg)與HBV表面抗原(HBsAg)之蛋白質系疫苗；及c)包含編碼HBcAg或HBsAg之表現載體構築體之核酸系疫苗，其中該編碼蛋白質之構築體與該蛋白質系疫苗共享抗原表位；藉以治療個體。
該用途包括本文所提供RNAi劑、蛋白質系疫苗、與核酸系疫苗之所有變化與實例。
VI. 施行本發明方法之套組
本發明出示治療具有B型肝炎感染之個體之各種不同方法、治療療程與製劑用法。咸了解，操作本發明方法之製劑可依據本文揭示內容製備。此等套組包括：a)靶向至少三種HBV轉錄物之RNAi劑，其中該RNAi劑包含正義股與反義股；b)包含HBV核心抗原(HBcAg)與HBV表面抗原(HBsAg)之蛋白質系疫苗；c)包含編碼HBcAg或HBsAg之表現載體構築體核酸系疫苗，其中該編碼蛋白質之構築體與該蛋白質系疫苗共享抗原表位；藉以治療個體；及d)用於指示治療具有B型肝炎感染之個體之說明書。
該等用法包括本文所提供RNAi劑、蛋白質系疫苗、與核酸系疫苗之所有變化與實例。套組之組分可 於例如，盒子中一起提供。某些實施例中，本發明之組分例如，基於不同儲存要求，可以分開提供，但可以例如，依據包裝之使用說明書，一起使用。
本發明利用下列實例進一步說明，此等實例不應構成限制。本說明書及圖式、附錄A、與序列表所摘錄所有參考文獻、專利與公開專利申請案等揭示內容均已以引用之方式併入本文中。
實例 實例1. 材料與方法 iRNA實例
iRNA標靶位點及未修飾與經修飾之siRNA序列之實例提供於附錄A之表中。
以下實驗中所使用經化學修飾之HBV-siRNA雙螺旋具有下列序列：未修飾之序列：
Figure 107113207-A0202-12-0149-3819
經修飾之序列：
Figure 107113207-A0202-12-0150-3820
經修飾之核酸序列中之核苷酸單體縮寫提供於附錄A之表1。
AD-66810之標靶位點為GTGTGCACTTCGCTTCACA(SEQ ID NO：39)，其係NC_003977.1(SEQ ID NO：1)之核苷酸1579-1597。
AD-66816之標靶位點為CACCATGCAACTTTTTCACCT(SEQ ID NO：40)，其係NC_003977.1(SEQ ID NO：1)之核苷酸1812-1832。
HBV-siRNA之細胞培養評估法
取表現h-NTCP之HepG2細胞，依二重複感染(100感染倍數(MOI))HBV粒子/細胞(亞型ayw))。在感染後第4天，細胞經過胰蛋白酶處理，再接種至多孔盤中，轉染對照物或HBV-siRNAs AD-66810(其化學修飾已示於上表中，且正義與反義序列係分別如SEQ ID NO：37與30所示)或AD-66816(其化學修飾已示於上表中，且正義與反義序列係分別如SEQ ID NO：38與32所示)分別使用Lipofectamine® RNAiMax製成100nM、10nM、或1nM 傳遞。於再接種後第3、6、10、13、與17天收集上清液，並相對於未轉染對照組測定HBeAg與HBsAg含量。採用化學發光微粒免疫分析法(CMIA)，於Abbott Architect免疫分析儀(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL,USA)測定HBsAg與HBeAg含量。
小鼠、投與siRNA及接種疫苗
HBV-基因轉殖小鼠(StrainHBV1.3xfs(HBV基因型D，亞型ayw))係在特定無病原體條件下，依據機構指示自家育種所產生。
對於siRNA投與，小鼠經皮下接受投與3mg/kg或9mg/kg劑量之對照siRNA或HBV-siRNA(經修飾之AD-66810或經修飾之AD-66816)；或經尾部靜脈內接受投與1×1011個AAV粒子，以表現HBV-shRNA，如圖式與下列實例所示。
對於蛋白質疫苗接種，小鼠係經皮下免疫接種由重組酵母HBsAg與大腸桿菌HBcAg(APP Latvijas Biomedicinas,Riga,Latvia)與31.91μg合成之硫代磷酸化CpG ODN 1668與25μg聚[二(鈉羧酸根乙基苯氧基)磷腈(PCEP)含於50μl PBS中之混合物。
重組MVA係依過去之說明(Staib等人，2003.Biotechniques.34：694-700)採用同源重組及宿主範圍選擇來產生(Staib等人，2003.Biotechniques.34：694-700)。選殖整個HBcAg(基因型D，亞型ayw)與HBsAg開放讀碼框 (基因型A，亞型ayw或adw)進入MVA轉移質體pIII△HR-PH5或pIII△HR-P7.5中，以使HBV蛋白質在早發/晚發牛痘病毒之病毒專一性啟動子PH5(HBcAg ayw/HBsAg ayw/HBsAg adw)或P7.5(HBsAg ayw)之調控。在構築各病毒後，即驗證基因表現、插入之DNA序列、與病毒純度。對於產生疫苗製劑，MVA照例在CEF中繁殖，經由蔗糖進行超離心純化，於1mM Tris-HCl pH 9.0中再組成，並依標準方法滴定(Staib等人，2004.Methods Mol Biol.269：77-100)。對於MVA接種疫苗，在小鼠腹膜內接種含在500μl PBS中之1×108感染單位之各重組MVA。
特定投藥療程提供於下列實例與第3、7、與12圖中。
血清分析
使用化學發光微粒免疫分析法(CMIA)，於Abbott Architect免疫分析儀(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL,USA)，在稀釋1：33測定血清HBsAg與HBeAg含量；在稀釋1：100測定抗HBs含量。依Untergasser等人，2006(Hepatology.43：539-47)之說明，採用實時聚合酶鏈反應定量血清HBV效價，及測定血清中HBV DNA含量。HBV DNA量係以治療前之DNA含量校正。
抗HBc抗體係在稀釋1：20，使用Enzgnost抗HBc單株試驗，於BEPIII平台(均來自Siemens Healthcare,Eschborn,Germany)測定。若所測定之樣本超 出線性範圍外時，可適當使用更高或更低稀釋度。
依Untergasser等人，2006(Hepatology.43：539-47)之說明，採用實時聚合酶鏈反應定量血清HBV效價及測定血清中HBV DNA含量。HBV DNA量係以治療前之DNA含量校正。
在抽血當天，採用Reflotron GPT/ALT試驗法(Roche Diagnostics,Mannheim,Germany)，於磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)中稀釋1：4，測定ALT活性。
淋巴球刺激分析法
依Stross等人，2012(Hepatology 56：873-83)之說明單離肝臟相關之淋巴球(LAL)，使用H2-kb-或H-2Db-限制肽(參見Backes,2016)，於1mg/ml布雷非德菌素A(Brefeldin A)(Sigma-Aldrich,Taufkirchen,Germany)之存在下刺激12小時。死/活的細胞使用乙啶鎓單疊氮化溴(ethidium monoazidebromide)(Invitrogen®,Karlsruhe,Germany)染色，使用抗CD16/CD32-Fc-阻斷劑(BD Biosciences,Heidelberg,Germany)阻斷。表面標記物使用PB-接合之抗CD8-α與PE-接合之抗CD4(eBiosciences,Eching,Germany)染色。細胞內細胞素染色法(ICS)係使用FITC抗IFN-γ(XMG1.2)、PE-Cy7抗TNF-α與APC抗IL-2(eBiosciences,Ech-ing,Germany)，採用Cytofix/Cytoperm套組(BD Biosciences,Heidelberg,Germany)，依據製造商之建議進行。相同的數據分析兩次，第二次更嚴格排除死細胞。
表現HBc之肝細胞之免疫組織化學染色法
取出肝臟，於4%多聚甲醛中固定，使用石蠟包埋。肝臟切片(2μm)，使用作為初級抗體之兔子抗HbcAg(Diagnostic Biosystems,Pleasanton,CA；#RP 017；稀釋1：50；於100℃，使用EDTA恢復30min)與偶聯辣根過氧化物之二次抗體為切片染色。於Ventana緩衝液中培養，於NEXES免疫組織化學自動操作機(Ventana Instruments)上，使用IVIEW DAB檢測套組(Ventana Instruments)或於Bond MAX(Leica Biosystems)進行染色。對於分析，使用SCN 400玻片掃描儀掃描玻片，使用Tissue AI積分軟體(均來自Leica Biosystems)計算陽性細胞數。
來自肝溶胞物之HBV轉錄物
對於分析來自肝溶胞物之HBV轉錄物，使用RNeasy迷你套組(Qiagen)從30mg肝組織萃取RNA，使用Superscript III套組(Thermo Fisher Scientific)合成cDNA。HBV轉錄物使用僅針對3.5kb轉錄物之引子擴增(前向引子5’-GAGTGTGGATTCGCACTCC-3’(SEQ ID NO：41)；反向引子5’-GAGGCGAGGGAGTTCTTCT-3’(SEQ ID NO：42))，或使用與所有HBV轉錄物共有之3'端結合之引子擴增(前向引子5’-TCACCAGCACCATGCAAC-3’(SEQ ID NO：43)；反向引子5’-AAGCCACCCAAGGCACAG-3’(SEQ ID NO：44))(變性：95℃ 5min；擴增：95℃ 3s,60℃ 30s(40次循環))(Yan等人，2012)。結果相對於鼠類GAPDH表現 校正(前向引子5’-ACCAACTGCTTAGCCC-3’(SEQ ID NO：45)；反向引子5’-CCACGACGGACACATT-3’(SEQ ID NO：46))(變性：95℃ 5min；擴增：95℃ 15s，60℃ 10s，72℃ 25s(45次循環))。所有PCR反應均在LightCycler 480(Roche Diagnostics)進行。
AAV-HBV小鼠模式
對於AAV小鼠模式，野生型C57/B16小鼠(9週齡；每個處理組6隻動物)，經i.v.注射2x1010個基因組等效物(geq)之腺相關病毒(Adeno-Associated-Virus)血清型8(AAV8)(帶有超長1.2-倍之基因型D之HBV基因組(AAV-HBV1.2)(第-28天)(參見例如，Yang等人(2014)Cell and Mol Immunol 11：71)。在AAV-轉導4週後開始(第0天)，動物接受3次注射(3mg/kg bw，每組n=12)對照siRNA、或HBV siRNA(AD-66816或AD-66810)(第0、29、與57天)。每個siRNA處理組分成兩小組(每組n=6)，接受或不接受由重組HBsAg、HBcAg(各15μg)與10μg c-二-AMP(第57天與第70天投與)及追加MVA-HBs與MVA-HBc(各5x107geq)(第84天)組成之疫苗療程。治療療程示意圖提供於第12圖。
實例2-於HepG2-NTCP細胞培養物中評估HBV-siRNA及於HBVxfs小鼠中之劑量探索實驗
於活體外感染模式中，在經過1nM、10nM、或100nM 經修飾之AD-66810或經修飾之AD-66816 HBV-siRNA、或如上述提供之對照siRNA其中之一處理之感染HBV之HepG2-NTCP細胞中，評估抗HBV siRNA對減弱HBV抗原與DNA之效力。在siRNA處理後第3、6、10、13、與17天收集上清液，分析HBeAg與HBsAg含量，與未轉染對照組比較。兩種HBV-siRNA均證實有效減弱HBeAg與HbsAg二者之表現，在第13天與第17天觀察到最高減弱程度。使用對照siRNA沒有觀察到顯著減弱。此等數據證實AD-66810或AD-66816 HBV-siRNA在感染HBV之活體外系統中，以持續方式有效減弱HBV抗原表現。
隨後於慢性B型肝炎之HBVxfs基因轉殖模式中測試HBV與對照siRNA。HBVxfs小鼠包括整合之HBV基因組，其在肝專一性啟動子之調控下表現。於約10週齡小鼠，投與3或9mg/kg劑量之AD-66810或AD-66816 HBV-siRNA或對照siRNA其中之一(每組n=6)。在siRNA處理後第6、13、與21天時收集血液檢體，製備血清。如上述測定血清中HbeAg、HBsAg、與HBV DNA含量(第2A至2C圖)。此外，從肝單離RNA，採用Yan,2012之方法測定總HBV RNA與HBV 3.5kB轉錄物含量，並相對於GAPDH表現進行校正(第2D與2E圖)。
兩種HBV-siRNA在兩種劑量下，均證實有效減弱HBsAg與HBeAg表現，並比對照組降低血清中HBV DNA含量(參見第2A至2C圖)。此外，相對於GAPDH DNA之總肝HBV RNA及相對於GAPDH RNA含量之3.5kb HBV RNA在兩種HBV siRNA劑量下均比對照含量大幅下降(第2D與2E圖)。依據此等結果，選擇3mg/kg劑量用於進一步實驗。
實例3-於HBV基因轉殖小鼠模式中，在投與醫療性疫苗之前比較siRNA與核苷(酸)類似物降低之抗原負荷量
在HBVxfs小鼠模式中證實靶向HBV之siRNA可有效減弱HBsAg與HBeAg表現及降低血清中HBV DNA含量，採用初免-追加療程，測試小鼠在投與醫療性疫苗之前先使用核苷類似物恩替卡韋或HBV-siRNA處理之效力。處理流程示於第3圖。
採用初免-追加療程，在投與疫苗之前，依以下6種治療療程之一前處理小鼠(每組n=6)：(1)無處理；(2)實驗全程，於第0週第一天開始投與含於水中之恩替卡韋1μg/ml，(預期劑量為約4mg/天，依據Lütgehetmann等人，2011,Gastroenterology.140：2074-83提供之計算)；(3)於第0、4、8、與12週之第一天投與3mg/kg劑量之對照iRNA劑；(4)於第0週第一天投與單劑編碼靶向HBV之shRNA(HBV-shRNA)之表現載體(Michler等人，2016)；或(5-6)於第0、4、8、與12週之第一天投與3mg/kg劑量之經修飾之AD-66816或經修飾之AD-86610(通稱 HBV-siRNA)。
於第12週與第14週之第一天，對所有小鼠經皮下投與含重組表現之酵母HBsAg(15μg)與大腸桿菌表現之HBcAg(15μg)並使用31.9μg合成之硫代磷酸化CpGODN 1668(CpG)與25μg聚[二(鈉羧酸根乙基苯氧基)磷腈(PCEP)為佐劑之混合物作為蛋白質-初免疫苗接種(Backes,2016)。
於第16週第一天，將表現HBsAg或HBcAg之經修飾之安卡拉病毒(每個病毒有5 x 107個粒子)經皮下投與所有小鼠，作為追加疫苗接種(Backes,2016)。
於第0、2、4、8、12、16、與17週之第一天取得血液檢體，從其中製備血清檢體，分析HBsAg、HBeAg、與HBV DNA含量。結果示於第4圖。
第1、2、與3組之小鼠(假處理、恩替卡韋、對照iRNA劑)之HBsAg與HBeAg含量類似。HBV-shRNA或HBV-siRNAs(AD-66816或AD-86610)單獨使用時即造成血清中HBsAg、HBeAg、與HBV IDNA顯著下降(第4A-4C圖)。三劑初免-追加疫苗接種流程造成所有組之HBsAg進一步下降，並使HBV-shRNA與HBV-siRNA組中至少有些動物之HBsAg含量降至檢測程度以下。然而，疫苗處理並未使任一組的HBeAg含量下降。在不受機轉限制下，認為造成HBsAg下降而非HBeAg下降之結果歸因於疫苗對抗C蛋白質之水解過程所產生之s抗原而非e抗原所誘發之免疫反應所致(參見如下討論之第5圖)。
單獨使用恩替卡韋時，HBV DNA含量降至定量下限值以下，因此三劑初免-追加疫苗沒有可檢測之效力(第4C圖)。假處理及HBV-shRNA、HBV-siRNAs、與對照siRNA之處理均降低HBV DNA含量，且初免-追加疫苗使所有組之HBV-DNA進一步下降。假處理與對照siRNA在此實驗中降低HBV DNA含量的原因尚不明瞭。在其他實驗中，使用對照siRNA處理時，沒有觀察到HBV DNA下降之反應(參見例如，第2C與8C圖)。此等數據證實RNAi在降低病毒抗原優於核苷(酸)類似物療法。此外，RNAi與接續之疫苗接種之組合對HBsAg與HBV DNA含量之效力超過該等製劑單獨使用時。
在實驗最後一天(第17週第一天)，犧牲小鼠，取出肝臟。從肝中單離肝相關淋巴球，並利用細胞內細胞素染色法測定肽刺激之CD8+ T細胞反應。明確言之，肝內CD8+ T細胞反應係採用Backes，2016提供之方法分析針對HBsAg、HBcAg、與MVA病毒粒子之反應。採用兩種不同閥值分析數據兩次，以排除死的免疫細胞，因為第一次分析中所排除死的免疫細胞(提供於第5A至5C圖)經測定仍不足夠。第二次分析示於第5D至5F圖。第二次分析證實第一次分析之結論。
在接種疫苗之前接受HBV-shRNA或HBV-siRNA前處理之小鼠可以產生對抗HBsAg與HBcAg之CD8+ T細胞免疫反應(第5A、5B、5D、與5E圖)，此表示當在接種疫苗之前壓制HBV抗原含量，可以誘發細胞 毒性T細胞清除HBV感染。假處理組、恩替卡韋組、或對照siRNA組沒有觀察到對抗HBV抗原之顯著CD8+ T細胞免疫反應。所有動物對抗MVA病毒均呈顯著且類似之CD8+ T細胞免疫反應，與前處理或病毒抗原含量無關，證實疫苗接種在所有動物中發揮同等作用，不受HBV抗原含量影響，藉以證實補體免疫系統之存在(第5C與5F圖)。假處理動物與任何其他組動物之間之抗體產量沒有觀察到顯著差異，此表示高HBV抗原含量可能誘發T細胞耐受性。
此等數據證實，與核苷類似物之標準照護法相反，RNAi處理法可以回復肝中HBV專一性T細胞免疫性，可以在接種醫療性疫苗之後誘發HBV專一性CD8+ T細胞反應。可靠的CD8+效應子T細胞反應已與病毒清除及功能性治癒相關(參見例如，Thimme等人，2003.J.Virol.77：68-76、與Backes等人，2016.Vaccine.34：923-932)。
亦從肝中單離RNA，採用Yan,2012之方法檢測總HBV RNA與HBV 3.5kB轉錄物含量，並相對於GAPDH表現進行校正。投與疫苗之前使用HBV-siRNA或HBV-shRNA處理小鼠，造成HBV總RNA與HBV 3.5kb轉錄物比假處理對照組顯著降低(第6A與6B圖)。接種疫苗之前使用恩替卡韋或對照siRNA處理之小鼠之HBV總RNA與HBV 3.5kb轉錄物與假處理對照組沒有顯著變化。此等數據證實HBV siRNA及shRNA二者與對照組及恩替 卡韋組相反，均成功地降低HBV轉錄物含量。
此外，採用免疫組織化學染色法測定肝切片之HBc及計算每mm2之HBc陽性細胞數，分析肝中HBV抗原表現(第6C圖)。僅有經過HBV siRNA或shRNA前處理之動物組在接著接種疫苗後才顯示降低之HBc表現，但恩替卡韋或對照siRNA則沒有。
實驗全程監測體重與ALT含量。任何處理組與假處理對照組之間比較，沒有觀察到顯著差異。
實例4-在HBV基因轉殖小鼠模式中評估HBV抗原減弱之持續時間對免疫接種之反應之影響
在證實採用shRNA或siRNA壓制HBV抗原表現可以有效加強對HBV疫苗療程之免疫反應後，設計一個試驗來測定壓制HBV抗原的持續時間長短是否會影響加強HBV免疫反應。處理流程示於第7圖。
採用HBV1.3xfs小鼠模式，小鼠經皮下投藥接受HBV-siRNA AD-66816(經修飾)處理8、6、或3週，或接受對照siRNA處理8週，3mg/kg/劑。投與siRNA後，如上述投與初免-追加疫苗療程，但在投與蛋白質時改用c-二-AMP替代PCEP+CPG作為佐劑(每組n=6)。因此，8週組之小鼠(n=6)接受三劑siRNA，第三劑係在投與疫苗的第一天投藥。6週組之小鼠(n=12)接受兩劑siRNA，第二劑係在投與疫苗的第一天之前兩週投藥。最後，3週組之小鼠(n=6)接受一劑siRNA，係在投與疫苗的第一天之前三 週投藥。
在第0週第一天投與第一劑疫苗之前(負數)與之後，在第-8週、-6週、-4週、-2週、0週、2週、4週、與6週的第一天收集血液檢體。製備血清，如上述分析HBsAg、HBeAg、與HBV DNA含量。
在第一次投與AD-66816之後觀察到各HBsAg、HBeAg、與HBV DNA顯著降低(第8A至8C圖)。在追加疫苗處理之後，觀察到HBsAg進一步顯著降低，在8週前處理組觀察到最大降幅，降至分析檢測程度以下，表示所有處理組動物之HBsAg含量下降超過5 log10。免疫接種僅造成HBV DNA微幅下降(<0.5 log10)，經過siRNA處理則顯著下降。未觀察到HBeAg含量因應疫苗接種療程而進一步下降。
此等數據證實接種醫療性疫苗之效力與開始接種疫苗之前壓制抗原之持續時間長短之相關性。HBV專一性CD8+ T細胞之重構需要數週，需6週或較佳8週前處理，而非3週前處理。
在實驗最後一天，在開始接種後第6週第一天，每組6隻小鼠，犧牲小鼠，取出肝臟。單離肝相關淋巴球，及如上述進行淋巴球刺激分析法。明確言之，採用Backes,2016所提供之方法，檢測針對HBsAg、HBcAg、與MVA病毒粒子之反應，分析肝內CD8+ T細胞效應。對抗肝中HBsAg與HBcAg之T-細胞反應對應於HBV抗原減弱之持續時間長短，HBV抗原持續時間越長觀察到的越高 免疫反應程度之傾向造成的T-細胞反應越大(參見第9A至9C圖)。所有組對MVA病毒抗原均觀察到類似反應，與前處理無關，此表示疫苗接種在所有動物中均同等運作，不受HBV抗原含量影響，證實有補體免疫系統的存在(第9D圖)。對照siRNA處理組動物與任何其他組動物之間之抗體產量沒有觀察到顯著差異。此證實HBV專一性CD8+ T細胞反應之重構不會立即發生，若動物具有降低之HBV抗原效價持續至少6或8週，則相對於僅3週組，可在接種醫療性疫苗後觀察到更強反應。由前面的結果進一步證實，與T細胞反應相反，B細胞免疫性似乎不受HBV抗原效價顯著影響。
亦從肝中單離RNA，採用Yan,2012之方法檢測總HBV RNA與HBV 3.5kB轉錄物含量，並相對於GAPDH表現進行校正。投與疫苗之前使用HBV-siRNA AD-66816處理小鼠，造成肝溶胞物中HBV總RNA與HBV 3.5kb轉錄物比對照siRNA處理對照組顯著降低(第10A與10B圖)。此外，採用免疫組織化學染色法及計算每mm2之HBc陽性細胞數，分析肝中HBV抗原表現(第10C圖)。由HBV專一性CD8反應提高與siRNA前處理持續時間延長所觀察到之相關性，在肝中觀察到表現HBc之細胞數減少。此等結果證實CD8+ T細胞反應的確預防肝中抗原表現。
為了評定反應持續性，從接受AD-66816 HBV-siRNA前處理及使用6週治療療程之小鼠，在投與追 加疫苗後2週與3週時收集血液檢體(第11A至11D圖)。6隻小鼠中，有3隻之HBsAg含量持續降至分析檢測程度以下(第11A圖)。實驗過程沒有觀察到HBeAg含量有類似的下降情形(第11B圖)。此等數據顯示，本文所提供siRNA-疫苗接種組合療法之最大效應比接種MVA疫苗後晚一週，選擇此時間點作為分析CD8+ T細胞反應的最佳終止時間點。在6週投藥療程後第7週投與第一劑疫苗後，抗HBs抗體反應(第11C圖)與在肝中對抗HBs(S208)之T細胞免疫反應(第11D圖)。動物之間的抗體反應有變異。
此等數據證實，可能使用本文提供之治療療程達到功能性治癒。此外，此等數據顯示，至少在實驗的短期過程內，HBsAg與HBeAg負荷越低，免疫清除HB抗原之程度越大並加強免疫反應。
實驗全程監測體重與ALT含量。任何處理組與假處理對照組之間比較，沒有觀察到顯著差異。
實例5-於AAV-HBV小鼠模式中評估HBV抗原減弱之持續時間對免疫接種之反應之影響
於基因轉殖小鼠模式中證實siRNA-疫苗組合治療療程之效力後，採用AAV-HBV感染小鼠模式來探討該治療療程在後天感染模式中之效力(參見例如，Yang等人(2014)Cell Mol Immunol 11：71)。此小鼠模式在感染帶有可複製HBV基因組之重組體腺相關病毒(AAV)後，出現持續HBV病毒血症。
HBV基因轉殖與AAV-HBV小鼠模式之間有許多差異。HBV基因轉殖小鼠基本上從出生起即表現HBV抗原，而AAV-HBV模式則在小鼠的生命期稍後引進HBV基因組。此舉可能影響免疫耐受性。此外，HBV基因轉殖小鼠在身體的每一個細胞帶有基因轉殖，提供「外漏」肝外表現。雖然AAV8血清型會影響肝臟外部的細胞，但其具有強力之趨肝性。此外，不可能在基因轉殖小鼠中清除HBV感染。當殺死表現基因轉殖HBV之肝細胞時，其會被新的HBV表現細胞置換。在感染模式中，若殺死感染的細胞時，新分裂的細胞不會在細胞分裂時被感染。
9週齡C57/B16小鼠感染AAV-HBV(-28天)。然後在第0、29、與57天(亦即0週、4週、8週)使用其中一種對照siRNA、或其中一或兩種HBV-siRNA、經修飾之AD-66816或經修飾之AD-66810經皮下投藥處理小鼠，3mg/kg(每組n=12)。各siRNA處理組分成兩小組(每組n=6)。一組接受HBV疫苗方法處理(於第57與70天進行蛋白質初免，及於第84天追加MVA，亦即分別在第8、10、與12週)，及一組則不進行處理。出示投藥療程之示意圖提供於第12圖。實驗全程監測小鼠之血清HBsAg、HBeAg、抗HBS抗體、體重、與ALT。亦定期測定抗HBe抗體含量。
第13A與13B圖顯示HBsAg與HBeAg含量比經過AAV-HBV病毒轉導2週內之基因轉殖小鼠提高。僅接受對照siRNA複製之HBV處理超過8個月之小鼠之含量相當於慢性感染之人類(HBsAg含量約2,000IU/ml， HBV病毒血症106-107IU/ml)。HBV siRNAs AD-66816與AD-66810分別使HBsAg降低2與2.5 log10，及HBeAg降低
Figure 107113207-A0202-12-0166-720
1 log10。該效力在停止siRNA處理後持續至少4週，然後血中抗原在18週後慢慢回升至基線程度(第13A與13B圖)。
在第22週時，如上述採用qPCR測定肝內HBV DNA(第13D圖)與AAV DNA(第13E圖)含量。採用rtPCR測定肝之HBV 3.5 RNA相對於GAPDH RNA(第13F圖)及總HBV RNA相對於GAPDH RNA(第13G圖)之相對表現。接受組合siRNA-疫苗方法處理之小鼠，在第22週處理時間點證實其總HBV DNA與AAV DNA顯著低於未處理對照組或單獨siRNA或疫苗處理組(第13D與13E圖)。應注意，組合治療結果使總HBV DNA含量降至低於每個細胞一個複本數(第13D圖)。接受組合siRNA-疫苗方法處理之小鼠亦證實HBV 3.5kb RNA表現相對於GAPDH RNA表現之相對表現程度比所有其他治療療程顯著降低(第13F圖)。觀察到總HBV RNA相對於GAPDH RNA表現之結果比單獨疫苗或siRNA處理結果顯著降低(第13G圖)。此等數據建議短程單獨投與siRNA或對抗HBV之醫療性疫苗不足以持續壓制HBV感染。在siRNA減弱HBV表現後之免疫介導調控HBV即可維持長久。在最後一劑siRNA之後22週，在僅接受HBV siRNA但未接種疫苗的組中，siRNA之效力逐漸衰退。接受siRNA-疫苗方法處理的小鼠，直到結束投與siRNA之後仍長時間維持壓制HBV DNA與 RNA。
此等完全免疫活性小鼠在單獨siRNA處理下，沒有觀察到免疫反應，但疫苗處理造成所有接種疫苗的動物產生抗HBs血清轉換(第14A與14B圖)。然而，接受siRNA前處理動物發展出高10倍且更恆定之抗HBs效價，可以完全且持續清除血清HBsAg與HBeAg。反之，僅在接受HBV siRNA前處理的動物中觀察到抗HBe血清轉換。值得注意的是，12隻經過HBV siRNA接種疫苗處理的小鼠中有3隻在第15週與第22週之間顯示短暫復發HBeAg，且併發抗HBe含量下降(第13C圖)。在不受機轉限制下，認為HBeAg復發受到疫苗所誘發之記憶免疫反應的調控。總言之，由siRNA組合雜源性初免-追加疫苗壓制HBV抗原表現，足以打破對HBV抗原之免疫耐受性。該連續療法在持續感染HBV之小鼠模式中達成長期功能性治癒，不會造成顯著肝損傷。
第14A與14B圖顯示接受HBV siRNA附加疫苗療程處理之動物發展出高效價之抗HBs抗體與抗HBe抗體。在最後一劑疫苗之後，抗HBs抗體含量持續上升。雖然亦可在接受對照siRNA附加疫苗療程之動物中測定抗HBs抗體，但其含量顯著較低。此外，僅有接受HBV siRNA附加疫苗療程的動物發展出抗HBe抗體，並達成抗HBe血清轉換。使用siRNA與疫苗之組合療法似乎有良好耐受性。所有小鼠同樣均增加體重，僅觀察到輕度ALT上升(<2-倍正常值之上限)(第15A與15B圖)。同時接受HBV siRNA 與疫苗接種療程之處理組出現血中抗原減少，同時ALT活性稍微上升(第15A圖)。此等組顯示比未接受組合HBVsiRNA-疫苗療程之所有其他處理組顯著但中度提高(經過重複測定雙向ANOVA均為p>0.05或更低；僅比較開始接種疫苗後之時間點)。實驗全程中，動物體重均上升，與siRNA處理無關。接種疫苗的動物在接種疫苗之後顯示體重微幅且暫時下降(約5%)，但在9天內即回升正常值，並繼續增加體重至相當於對照組(第15B圖)。
在不受機轉限制下，本文所提供數據強力顯示，例行檢測到循環HBsAg與HBeAg之高度HBV抗原表現阻止了HBV專一性CD8+ T細胞反應，此點對未來慢性B型肝炎之免疫療法有深遠的影響結果。採用2種不同慢性B型肝炎小鼠模式，認為可藉由基於RNAi之療法壓制肝細胞中之HBV蛋白質表現來復原HBV專一性免疫調控作用。此等藉由RNAi降低HBV抗原的作法與核苷(酸)類似物之標準照護法相反，可以藉由接種醫療性疫苗誘發調控HBV感染所需要的強力HBV專一性CD8+ T細胞反應。
附錄A
Figure 107113207-A0202-12-0169-3821
Figure 107113207-A0202-12-0170-3822
Figure 107113207-A0202-12-0171-3823
Figure 107113207-A0202-12-0172-3824
Figure 107113207-A0202-12-0173-3825
Figure 107113207-A0202-12-0174-3826
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Figure 107113207-A0202-12-0179-3831
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均等物
熟悉發明所屬技術領域者將了解，或可採用例行實驗即可確認許多本文所說明明確實施例及方法之均等物。此等均等物均計畫包括在下列申請專利範圍中。
<110> 美商阿尼拉製藥公司(ALNYLAM PHARMACEUTICALS,INC.) 慕尼黑工業大學(TECHNISCHE UNIVERSITAT MUNCHEN)
<120> 治療具有B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法
<130> 121301-07220
<140> 107113207
<141> 2018-04-18
<150> US 62/655,862
<151> 2018-04-11
<150> US 62/646,978
<151> 2018-03-23
<150> US 62/553,358
<151> 2017-09-01
<150> US 62/486,618
<151> 2017-04-18
<160> 1445
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 3182
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1
Figure 107113207-A0305-02-0206-1
Figure 107113207-A0202-12-0205-3864
Figure 107113207-A0202-12-0206-3865
<210> 2
<211> 3182
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 2
Figure 107113207-A0202-12-0206-3866
Figure 107113207-A0202-12-0207-3867
Figure 107113207-A0202-12-0208-3868
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<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (2768)..(2768)
<223> a、c、t、g、未知或其他
<400> 3
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Figure 107113207-A0202-12-0209-3870
Figure 107113207-A0202-12-0210-3871
<210> 4
<211> 3215
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (448)..(448)
<223> a、c、t、g、未知或其他
<400> 4
Figure 107113207-A0202-12-0210-3872
Figure 107113207-A0202-12-0211-3873
Figure 107113207-A0202-12-0212-3874
<210> 5
<211> 832
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 5
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Figure 107113207-A0202-12-0213-3876
Figure 107113207-A0202-12-0214-3877
Figure 107113207-A0202-12-0215-3878
Figure 107113207-A0202-12-0216-3879
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<211> 389
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 6
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Figure 107113207-A0202-12-0217-3881
<210> 7
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<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 7
Figure 107113207-A0202-12-0218-3882
Figure 107113207-A0202-12-0219-3883
<210> 8
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<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 8
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Figure 107113207-A0202-12-0220-3885
<210> 9
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<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 9
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Figure 107113207-A0202-12-0221-3887
<210> 10
<211> 212
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 10
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Figure 107113207-A0202-12-0222-3889
<210> 11
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<213> B型肝炎病毒
<400> 11
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Figure 107113207-A0202-12-0223-3891
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<210> 12
<211> 400
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 12
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<210> 13
<211> 210
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 13
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<210> 14
<211> 389
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 14
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<210> 15
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<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 15
Figure 107113207-A0202-12-0230-3902
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<210> 16
<211> 3182
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 16
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Figure 107113207-A0202-12-0232-3905
Figure 107113207-A0202-12-0233-3906
<210> 17
<211> 3182
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 17
Figure 107113207-A0202-12-0233-3907
Figure 107113207-A0202-12-0234-3908
Figure 107113207-A0202-12-0235-3909
<210> 18
<211> 389
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 18
Figure 107113207-A0202-12-0235-3910
Figure 107113207-A0202-12-0236-3911
Figure 107113207-A0202-12-0237-3912
<210> 19
<211> 185
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 19
Figure 107113207-A0202-12-0237-3913
Figure 107113207-A0202-12-0238-3914
<210> 20
<211> 3200
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 20
Figure 107113207-A0202-12-0238-3915
Figure 107113207-A0202-12-0239-3916
<210> 21
<211> 3200
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 21
Figure 107113207-A0202-12-0240-3917
Figure 107113207-A0202-12-0241-3918
<210> 22
<211> 226
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 22
Figure 107113207-A0202-12-0242-3919
Figure 107113207-A0202-12-0243-3920
<210> 23
<211> 247
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 23
Figure 107113207-A0202-12-0243-3921
Figure 107113207-A0202-12-0244-3922
<210> 24
<211> 149
<212> PRT
<213> B型肝炎病毒
<400> 24
Figure 107113207-A0202-12-0244-3923
<210> 25
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 25
Figure 107113207-A0202-12-0245-3924
<210> 26
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 26
Figure 107113207-A0202-12-0245-3925
<210> 27
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 27
Figure 107113207-A0202-12-0245-3926
<210> 28
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 28
Figure 107113207-A0202-12-0245-3927
<210> 29
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 29
Figure 107113207-A0202-12-0246-3928
<210> 30
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 30
Figure 107113207-A0202-12-0246-3929
<210> 31
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 31
Figure 107113207-A0202-12-0246-3930
<210> 32
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 32
Figure 107113207-A0202-12-0246-3931
<210> 33
<211> 16
<212> PRT
<213> 未知物
<220>
<223> 未知物之說明：RFGF肽
<400> 33
Figure 107113207-A0202-12-0246-3932
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 未知物
<220>
<223> 未知物之說明：RFGF類似物肽
<400> 34
Figure 107113207-A0202-12-0247-3933
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人類免疫缺陷病毒
<400> 35
Figure 107113207-A0202-12-0247-3934
<210> 36
<211> 16
<212> PRT
<213> 果蠅(Drosophila sp.)
<400> 36
Figure 107113207-A0202-12-0247-3935
<210> 37
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 37
Figure 107113207-A0202-12-0247-3936
<210> 38
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 38
Figure 107113207-A0202-12-0248-3937
<210> 39
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 39
Figure 107113207-A0202-12-0248-3938
<210> 40
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 40
Figure 107113207-A0202-12-0248-3939
<210> 41
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性引子
<400> 41
Figure 107113207-A0202-12-0248-3940
<210> 42
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性引子
<400> 42
Figure 107113207-A0202-12-0248-3941
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性引子
<400> 43
Figure 107113207-A0202-12-0249-3942
<210> 44
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性引子
<400> 44
Figure 107113207-A0202-12-0249-3943
<210> 45
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性引子
<400> 45
Figure 107113207-A0202-12-0249-3944
<210> 46
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性引子
<400> 46
Figure 107113207-A0202-12-0249-3945
<210> 47
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 47
Figure 107113207-A0202-12-0249-3946
<210> 48
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 48
Figure 107113207-A0202-12-0250-3947
<210> 49
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 49
Figure 107113207-A0202-12-0250-3948
<210> 50
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 50
Figure 107113207-A0202-12-0250-3949
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 51
Figure 107113207-A0202-12-0250-3950
<210> 52
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 52
Figure 107113207-A0202-12-0251-3951
<210> 53
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 53
Figure 107113207-A0202-12-0251-3952
<210> 54
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 54
Figure 107113207-A0202-12-0251-3953
<210> 55
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 55
Figure 107113207-A0202-12-0251-3954
<210> 56
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 56
Figure 107113207-A0202-12-0252-3955
<210> 57
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 57
Figure 107113207-A0202-12-0252-3956
<210> 58
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 58
Figure 107113207-A0202-12-0252-3957
<210> 59
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 59
Figure 107113207-A0202-12-0252-3958
<210> 60
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 60
Figure 107113207-A0202-12-0252-3959
<210> 61
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 61
Figure 107113207-A0202-12-0253-3960
<210> 62
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 62
Figure 107113207-A0202-12-0253-3961
<210> 63
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 63
Figure 107113207-A0202-12-0253-3962
<210> 64
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 64
Figure 107113207-A0202-12-0253-3963
<210> 65
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 65
Figure 107113207-A0202-12-0254-4199
<210> 66
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 66
Figure 107113207-A0202-12-0254-3965
<210> 67
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 67
Figure 107113207-A0202-12-0254-3966
<210> 68
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 68
Figure 107113207-A0202-12-0254-3967
<210> 69
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 69
Figure 107113207-A0202-12-0254-4200
<210> 70
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 70
Figure 107113207-A0202-12-0255-3969
<210> 71
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 71
Figure 107113207-A0202-12-0255-3970
<210> 72
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 72
Figure 107113207-A0202-12-0255-3971
<210> 73
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 73
Figure 107113207-A0202-12-0255-3972
<210> 74
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 74
Figure 107113207-A0202-12-0256-3974
<210> 75
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 75
Figure 107113207-A0202-12-0256-3975
<210> 76
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 76
Figure 107113207-A0202-12-0256-4201
<210> 77
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 77
Figure 107113207-A0202-12-0256-4202
<210> 78
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 78
Figure 107113207-A0202-12-0256-4203
<210> 79
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 79
Figure 107113207-A0202-12-0257-3978
<210> 80
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 80
Figure 107113207-A0202-12-0257-3979
<210> 81
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 81
Figure 107113207-A0202-12-0257-3980
<210> 82
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 82
Figure 107113207-A0202-12-0257-3981
<210> 83
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 83
Figure 107113207-A0202-12-0257-3982
<210> 84
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 84
Figure 107113207-A0202-12-0258-3983
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 85
Figure 107113207-A0202-12-0258-3984
<210> 86
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 86
Figure 107113207-A0202-12-0258-3985
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 87
Figure 107113207-A0202-12-0259-3986
<210> 88
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 88
Figure 107113207-A0202-12-0259-3987
<210> 89
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 89
Figure 107113207-A0202-12-0259-3988
<210> 90
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 90
Figure 107113207-A0202-12-0259-3989
<210> 91
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 91
Figure 107113207-A0202-12-0259-3990
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 92
Figure 107113207-A0202-12-0260-3991
<210> 93
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 93
Figure 107113207-A0202-12-0260-3992
<210> 94
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 94
Figure 107113207-A0202-12-0260-3993
<210> 95
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 95
Figure 107113207-A0202-12-0260-3994
<210> 96
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 96
Figure 107113207-A0202-12-0261-3995
<210> 97
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 97
Figure 107113207-A0202-12-0261-3996
<210> 98
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 98
Figure 107113207-A0202-12-0261-3997
<210> 99
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 99
Figure 107113207-A0202-12-0261-3998
<210> 100
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 100
Figure 107113207-A0202-12-0262-3999
<210> 101
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 101
Figure 107113207-A0202-12-0262-4000
<210> 102
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 102
Figure 107113207-A0202-12-0262-4001
<210> 103
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 103
Figure 107113207-A0202-12-0262-4002
<210> 104
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 104
Figure 107113207-A0202-12-0262-4003
<210> 105
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 105
Figure 107113207-A0202-12-0263-4004
<210> 106
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 106
Figure 107113207-A0202-12-0263-4005
<210> 107
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 107
Figure 107113207-A0202-12-0263-4006
<210> 108
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 108
Figure 107113207-A0202-12-0263-4007
<210> 109
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 109
Figure 107113207-A0202-12-0263-4008
<210> 110
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 110
Figure 107113207-A0202-12-0264-4009
<210> 111
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 111
Figure 107113207-A0202-12-0264-4010
<210> 112
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 112
Figure 107113207-A0202-12-0264-4011
<210> 113
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 113
Figure 107113207-A0202-12-0264-4012
<210> 114
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 114
Figure 107113207-A0202-12-0265-4013
<210> 115
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 115
Figure 107113207-A0202-12-0265-4014
<210> 116
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 116
Figure 107113207-A0202-12-0265-4015
<210> 117
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 117
Figure 107113207-A0202-12-0265-4016
<210> 118
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 118
Figure 107113207-A0202-12-0265-4017
<210> 119
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 119
Figure 107113207-A0202-12-0266-4018
<210> 120
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 120
Figure 107113207-A0202-12-0266-4019
<210> 121
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 121
Figure 107113207-A0202-12-0266-4020
<210> 122
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 122
Figure 107113207-A0202-12-0266-4021
<210> 123
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 123
Figure 107113207-A0202-12-0267-4022
<210> 124
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 124
Figure 107113207-A0202-12-0267-4023
<210> 125
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 125
Figure 107113207-A0202-12-0267-4024
<210> 126
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 126
Figure 107113207-A0202-12-0267-4025
<210> 127
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 127
Figure 107113207-A0202-12-0268-4026
<210> 128
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 128
Figure 107113207-A0202-12-0268-4027
<210> 129
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 129
Figure 107113207-A0202-12-0268-4028
<210> 130
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 130
Figure 107113207-A0202-12-0268-4029
<210> 131
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 131
Figure 107113207-A0202-12-0269-4030
<210> 132
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 132
Figure 107113207-A0202-12-0269-4031
<210> 133
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 133
Figure 107113207-A0202-12-0269-4032
<210> 134
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 134
Figure 107113207-A0202-12-0269-4033
<210> 135
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 135
Figure 107113207-A0202-12-0269-4034
<210> 136
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 136
Figure 107113207-A0202-12-0270-4035
<210> 137
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 137
Figure 107113207-A0202-12-0270-4036
<210> 138
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 138
Figure 107113207-A0202-12-0270-4037
<210> 139
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 139
Figure 107113207-A0202-12-0270-4038
<210> 140
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 140
Figure 107113207-A0202-12-0271-4039
<210> 141
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 141
Figure 107113207-A0202-12-0271-4040
<210> 142
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 142
Figure 107113207-A0202-12-0271-4041
<210> 143
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 143
Figure 107113207-A0202-12-0271-4042
<210> 144
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 144
Figure 107113207-A0202-12-0271-4043
<210> 145
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 145
Figure 107113207-A0202-12-0272-4044
<210> 146
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 146
Figure 107113207-A0202-12-0272-4045
<210> 147
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 147
Figure 107113207-A0202-12-0272-4046
<210> 148
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 148
Figure 107113207-A0202-12-0272-4047
<210> 149
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 149
Figure 107113207-A0202-12-0273-4048
<210> 150
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 150
Figure 107113207-A0202-12-0273-4049
<210> 151
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 151
Figure 107113207-A0202-12-0273-4050
<210> 152
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 152
Figure 107113207-A0202-12-0273-4051
<210> 153
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 153
Figure 107113207-A0202-12-0273-4052
<210> 154
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 154
Figure 107113207-A0202-12-0274-4053
<210> 155
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 155
Figure 107113207-A0202-12-0274-4054
<210> 156
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 156
Figure 107113207-A0202-12-0274-4055
<210> 157
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 157
Figure 107113207-A0202-12-0274-4056
<210> 158
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 158
Figure 107113207-A0202-12-0275-4057
<210> 159
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 159
Figure 107113207-A0202-12-0275-4058
<210> 160
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 160
Figure 107113207-A0202-12-0275-4059
<210> 161
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 161
Figure 107113207-A0202-12-0275-4060
<210> 162
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 162
Figure 107113207-A0202-12-0275-4061
<210> 163
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 163
Figure 107113207-A0202-12-0276-4062
<210> 164
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 164
Figure 107113207-A0202-12-0276-4063
<210> 165
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 165
Figure 107113207-A0202-12-0276-4064
<210> 166
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 166
Figure 107113207-A0202-12-0276-4065
<210> 167
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 167
Figure 107113207-A0202-12-0277-4066
<210> 168
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 168
Figure 107113207-A0202-12-0277-4067
<210> 169
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 169
Figure 107113207-A0202-12-0277-4068
<210> 170
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 170
Figure 107113207-A0202-12-0277-4069
<210> 171
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 171
Figure 107113207-A0202-12-0277-4070
<210> 172
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 172
Figure 107113207-A0202-12-0278-4071
<210> 173
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 173
Figure 107113207-A0202-12-0278-4072
<210> 174
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 174
Figure 107113207-A0202-12-0278-4073
<210> 175
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 175
Figure 107113207-A0202-12-0278-4074
<210> 176
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 176
Figure 107113207-A0202-12-0279-4075
<210> 177
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 177
Figure 107113207-A0202-12-0279-4076
<210> 178
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 178
Figure 107113207-A0202-12-0279-4077
<210> 179
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 179
Figure 107113207-A0202-12-0279-4078
<210> 180
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 180
Figure 107113207-A0202-12-0279-4079
<210> 181
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 181
Figure 107113207-A0202-12-0280-4080
<210> 182
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 182
Figure 107113207-A0202-12-0280-4081
<210> 183
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 183
Figure 107113207-A0202-12-0280-4082
<210> 184
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 184
Figure 107113207-A0202-12-0280-4083
<210> 185
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 185
Figure 107113207-A0202-12-0281-4084
<210> 186
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 186
Figure 107113207-A0202-12-0281-4085
<210> 187
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 187
Figure 107113207-A0202-12-0281-4086
<210> 188
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 188
Figure 107113207-A0202-12-0281-4087
<210> 189
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 189
Figure 107113207-A0202-12-0281-4088
<210> 190
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 190
Figure 107113207-A0202-12-0282-4089
<210> 191
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 191
Figure 107113207-A0202-12-0282-4090
<210> 192
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 192
Figure 107113207-A0202-12-0282-4091
<210> 193
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 193
Figure 107113207-A0202-12-0282-4092
<210> 194
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 194
Figure 107113207-A0202-12-0282-4093
<210> 195
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 195
Figure 107113207-A0202-12-0283-4096
<210> 196
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 196
Figure 107113207-A0202-12-0283-4097
<210> 197
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 197
Figure 107113207-A0202-12-0283-4094
<210> 198
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 198
Figure 107113207-A0202-12-0283-4095
<210> 199
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 199
Figure 107113207-A0202-12-0284-4098
<210> 200
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 200
Figure 107113207-A0202-12-0284-4099
<210> 201
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 201
Figure 107113207-A0202-12-0284-4100
<210> 202
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 202
Figure 107113207-A0202-12-0284-4101
<210> 203
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 203
Figure 107113207-A0202-12-0284-4102
<210> 204
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 204
Figure 107113207-A0202-12-0285-4103
<210> 205
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 205
Figure 107113207-A0202-12-0285-4104
<210> 206
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 206
Figure 107113207-A0202-12-0285-4105
<210> 207
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 207
Figure 107113207-A0202-12-0285-4106
<210> 208
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 208
Figure 107113207-A0202-12-0286-4107
<210> 209
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 209
Figure 107113207-A0202-12-0286-4108
<210> 210
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 210
Figure 107113207-A0202-12-0286-4109
<210> 211
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 211
Figure 107113207-A0202-12-0286-4110
<210> 212
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 212
Figure 107113207-A0202-12-0286-4111
<210> 213
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 213
Figure 107113207-A0202-12-0287-4112
<210> 214
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 214
Figure 107113207-A0202-12-0287-4113
<210> 215
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 215
Figure 107113207-A0202-12-0287-4114
<210> 216
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 216
Figure 107113207-A0202-12-0287-4115
<210> 217
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 217
Figure 107113207-A0202-12-0288-4116
<210> 218
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 218
Figure 107113207-A0202-12-0288-4117
<210> 219
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 219
Figure 107113207-A0202-12-0288-4118
<210> 220
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 220
Figure 107113207-A0202-12-0288-4119
<210> 221
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 221
Figure 107113207-A0202-12-0289-4120
<210> 222
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 222
Figure 107113207-A0202-12-0289-4121
<210> 223
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 223
Figure 107113207-A0202-12-0289-4122
<210> 224
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 224
Figure 107113207-A0202-12-0289-4123
<210> 225
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 225
Figure 107113207-A0202-12-0290-4124
<210> 226
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 226
Figure 107113207-A0202-12-0290-4125
<210> 227
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 227
Figure 107113207-A0202-12-0290-4126
<210> 228
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 228
Figure 107113207-A0202-12-0290-4127
<210> 229
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 229
Figure 107113207-A0202-12-0290-4128
<210> 230
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 230
Figure 107113207-A0202-12-0291-4129
<210> 231
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 231
Figure 107113207-A0202-12-0291-4130
<210> 232
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 232
Figure 107113207-A0202-12-0291-4131
<210> 233
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 233
Figure 107113207-A0202-12-0291-4132
<210> 234
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 234
Figure 107113207-A0202-12-0292-4133
<210> 235
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 235
Figure 107113207-A0202-12-0292-4134
<210> 236
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 236
Figure 107113207-A0202-12-0292-4135
<210> 237
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 237
Figure 107113207-A0202-12-0292-4136
<210> 238
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 238
Figure 107113207-A0202-12-0293-3187
<210> 239
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 239
Figure 107113207-A0202-12-0293-3188
<210> 240
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 240
Figure 107113207-A0202-12-0293-3189
<210> 241
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 241
Figure 107113207-A0202-12-0294-3190
<210> 242
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 242
Figure 107113207-A0202-12-0294-3191
<210> 243
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 243
Figure 107113207-A0202-12-0294-3192
<210> 244
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 244
Figure 107113207-A0202-12-0294-3193
<210> 245
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 245
Figure 107113207-A0202-12-0295-3194
<210> 246
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 246
Figure 107113207-A0202-12-0295-3195
<210> 247
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 247
Figure 107113207-A0202-12-0295-3196
<210> 248
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 248
Figure 107113207-A0202-12-0295-3197
<210> 249
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 249
Figure 107113207-A0202-12-0296-3198
<210> 250
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 250
Figure 107113207-A0202-12-0296-3199
<210> 251
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 251
Figure 107113207-A0202-12-0296-3200
<210> 252
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 252
Figure 107113207-A0202-12-0296-3201
<210> 253
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 253
Figure 107113207-A0202-12-0297-3202
<210> 254
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 254
Figure 107113207-A0202-12-0297-3203
<210> 255
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 255
Figure 107113207-A0202-12-0297-3204
<210> 256
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 256
Figure 107113207-A0202-12-0297-3205
<210> 257
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 257
Figure 107113207-A0202-12-0298-3206
<210> 258
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 258
Figure 107113207-A0202-12-0298-3207
<210> 259
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 259
Figure 107113207-A0202-12-0298-3208
<210> 260
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 260
Figure 107113207-A0202-12-0298-3209
<210> 261
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 261
Figure 107113207-A0202-12-0298-3210
<210> 262
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 262
Figure 107113207-A0202-12-0299-3211
<210> 263
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 263
Figure 107113207-A0202-12-0299-3212
<210> 264
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 264
Figure 107113207-A0202-12-0299-3213
<210> 265
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 265
Figure 107113207-A0202-12-0299-3214
<210> 266
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 266
Figure 107113207-A0202-12-0300-3215
<210> 267
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 267
Figure 107113207-A0202-12-0300-3216
<210> 268
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 268
Figure 107113207-A0202-12-0300-3217
<210> 269
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 269
Figure 107113207-A0202-12-0300-3218
<210> 270
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 270
Figure 107113207-A0202-12-0301-3219
<210> 271
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 271
Figure 107113207-A0202-12-0301-3220
<210> 272
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 272
Figure 107113207-A0202-12-0301-3221
<210> 273
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 273
Figure 107113207-A0202-12-0301-3222
<210> 274
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 274
Figure 107113207-A0202-12-0301-3223
<210> 275
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 275
Figure 107113207-A0202-12-0302-3224
<210> 276
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 276
Figure 107113207-A0202-12-0302-3225
<210> 277
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 277
Figure 107113207-A0202-12-0302-3226
<210> 278
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 278
Figure 107113207-A0202-12-0302-3227
<210> 279
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 279
Figure 107113207-A0202-12-0303-3228
<210> 280
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 280
Figure 107113207-A0202-12-0303-3229
<210> 281
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 281
Figure 107113207-A0202-12-0303-3230
<210> 282
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 282
Figure 107113207-A0202-12-0303-3231
<210> 283
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 283
Figure 107113207-A0202-12-0303-3232
<210> 284
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 284
Figure 107113207-A0202-12-0304-3233
<210> 285
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 285
Figure 107113207-A0202-12-0304-3234
<210> 286
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 286
Figure 107113207-A0202-12-0304-3235
<210> 287
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 287
Figure 107113207-A0202-12-0304-3236
<210> 288
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 288
Figure 107113207-A0202-12-0304-3237
<210> 289
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 289
Figure 107113207-A0202-12-0305-3238
<210> 290
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 290
Figure 107113207-A0202-12-0305-3239
<210> 291
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 291
Figure 107113207-A0202-12-0305-3240
<210> 292
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 292
Figure 107113207-A0202-12-0305-3241
<210> 293
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 293
Figure 107113207-A0202-12-0306-3242
<210> 294
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 294
Figure 107113207-A0202-12-0306-3243
<210> 295
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 295
Figure 107113207-A0202-12-0306-3244
<210> 296
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 296
Figure 107113207-A0202-12-0306-3245
<210> 297
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 297
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<210> 298
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<212> RNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 298
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<210> 299
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 299
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<210> 300
<211> 23
<212> DNA
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 300
Figure 107113207-A0202-12-0307-3249
<210> 301
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 301
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<210> 302
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 302
Figure 107113207-A0202-12-0308-3251
<210> 303
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 303
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<210> 304
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 304
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<210> 305
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 305
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<210> 306
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 306
Figure 107113207-A0202-12-0309-3255
<210> 307
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 307
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<210> 308
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 308
Figure 107113207-A0202-12-0309-3257
<210> 309
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 309
Figure 107113207-A0202-12-0309-3258
<210> 310
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 310
Figure 107113207-A0202-12-0309-3259
<210> 311
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 311
Figure 107113207-A0202-12-0310-3260
<210> 312
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 312
Figure 107113207-A0202-12-0310-3261
<210> 313
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 313
Figure 107113207-A0202-12-0310-3262
<210> 314
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 314
Figure 107113207-A0202-12-0310-3263
<210> 315
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 315
Figure 107113207-A0202-12-0311-3264
<210> 316
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 316
Figure 107113207-A0202-12-0311-3265
<210> 317
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 317
Figure 107113207-A0202-12-0311-3266
<210> 318
<211> 23
<212> RNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 318
Figure 107113207-A0202-12-0311-3267
<210> 319
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 319
Figure 107113207-A0202-12-0311-3268
<210> 320
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 320
Figure 107113207-A0202-12-0312-3269
<210> 321
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 321
Figure 107113207-A0202-12-0312-3270
<210> 322
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 322
Figure 107113207-A0202-12-0312-3271
<210> 323
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 323
Figure 107113207-A0202-12-0312-3272
<210> 324
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 324
Figure 107113207-A0202-12-0312-3273
<210> 325
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 325
Figure 107113207-A0202-12-0313-3274
<210> 326
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 326
Figure 107113207-A0202-12-0313-3275
<210> 327
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 327
Figure 107113207-A0202-12-0313-3276
<210> 328
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 328
Figure 107113207-A0202-12-0313-3277
<210> 329
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 329
Figure 107113207-A0202-12-0314-3278
<210> 330
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 330
Figure 107113207-A0202-12-0314-3279
<210> 331
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 331
Figure 107113207-A0202-12-0314-3280
<210> 332
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 332
Figure 107113207-A0202-12-0314-3281
<210> 333
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 333
Figure 107113207-A0202-12-0314-3282
<210> 334
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 334
Figure 107113207-A0202-12-0315-3283
<210> 335
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 335
Figure 107113207-A0202-12-0315-3284
<210> 336
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 336
Figure 107113207-A0202-12-0315-3285
<210> 337
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 337
Figure 107113207-A0202-12-0315-3286
<210> 338
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 338
Figure 107113207-A0202-12-0316-3287
<210> 339
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 339
Figure 107113207-A0202-12-0316-3288
<210> 340
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 340
Figure 107113207-A0202-12-0316-3289
<210> 341
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 341
Figure 107113207-A0202-12-0316-3290
<210> 342
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 342
Figure 107113207-A0202-12-0317-3291
<210> 343
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 343
Figure 107113207-A0202-12-0317-3292
<210> 344
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 344
Figure 107113207-A0202-12-0317-3293
<210> 345
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 345
Figure 107113207-A0202-12-0317-3294
<210> 346
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 346
Figure 107113207-A0202-12-0317-3295
<210> 347
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 347
Figure 107113207-A0202-12-0318-3296
<210> 348
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 348
Figure 107113207-A0202-12-0318-3297
<210> 349
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 349
Figure 107113207-A0202-12-0318-3298
<210> 350
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 350
Figure 107113207-A0202-12-0318-3299
<210> 351
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 351
Figure 107113207-A0202-12-0319-3300
<210> 352
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 352
Figure 107113207-A0202-12-0319-3301
<210> 353
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 353
Figure 107113207-A0202-12-0319-3302
<210> 354
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 354
Figure 107113207-A0202-12-0319-3303
<210> 355
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 355
Figure 107113207-A0202-12-0320-3304
<210> 356
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 356
Figure 107113207-A0202-12-0320-3305
<210> 357
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 357
Figure 107113207-A0202-12-0320-3306
<210> 358
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 358
Figure 107113207-A0202-12-0320-3307
<210> 359
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 359
Figure 107113207-A0202-12-0320-3308
<210> 360
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 360
Figure 107113207-A0202-12-0321-3309
<210> 361
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 361
Figure 107113207-A0202-12-0321-3310
<210> 362
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 362
Figure 107113207-A0202-12-0321-3311
<210> 363
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 363
Figure 107113207-A0202-12-0321-3312
<210> 364
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 364
Figure 107113207-A0202-12-0322-3313
<210> 365
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 365
Figure 107113207-A0202-12-0322-3314
<210> 366
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 366
Figure 107113207-A0202-12-0322-3315
<210> 367
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 367
Figure 107113207-A0202-12-0322-3316
<210> 368
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 368
Figure 107113207-A0202-12-0322-3317
<210> 369
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 369
Figure 107113207-A0202-12-0323-3318
<210> 370
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 370
Figure 107113207-A0202-12-0323-3319
<210> 371
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 371
Figure 107113207-A0202-12-0323-3320
<210> 372
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 372
Figure 107113207-A0202-12-0323-3321
<210> 373
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 373
Figure 107113207-A0202-12-0323-3322
<210> 374
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 374
Figure 107113207-A0202-12-0324-3323
<210> 375
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 375
Figure 107113207-A0202-12-0324-3324
<210> 376
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 376
Figure 107113207-A0202-12-0324-3325
<210> 377
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 377
Figure 107113207-A0202-12-0324-3326
<210> 378
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 378
Figure 107113207-A0202-12-0325-3327
<210> 379
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 379
Figure 107113207-A0202-12-0325-3328
<210> 380
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 380
Figure 107113207-A0202-12-0325-3329
<210> 381
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 381
Figure 107113207-A0202-12-0325-3330
<210> 382
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 382
Figure 107113207-A0202-12-0325-3331
<210> 383
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 383
Figure 107113207-A0202-12-0326-3332
<210> 384
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 384
Figure 107113207-A0202-12-0326-3333
<210> 385
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 385
Figure 107113207-A0202-12-0326-3334
<210> 386
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 386
Figure 107113207-A0202-12-0326-3335
<210> 387
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 387
Figure 107113207-A0202-12-0327-3336
<210> 388
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 388
Figure 107113207-A0202-12-0327-3337
<210> 389
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 389
Figure 107113207-A0202-12-0327-3338
<210> 390
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 390
Figure 107113207-A0202-12-0327-3339
<210> 391
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 391
Figure 107113207-A0202-12-0327-3340
<210> 392
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 392
Figure 107113207-A0202-12-0328-3341
<210> 393
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 393
Figure 107113207-A0202-12-0328-3342
<210> 394
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 394
Figure 107113207-A0202-12-0328-3343
<210> 395
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 395
Figure 107113207-A0202-12-0328-3344
<210> 396
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 396
Figure 107113207-A0202-12-0329-3345
<210> 397
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 397
Figure 107113207-A0202-12-0329-3346
<210> 398
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 398
Figure 107113207-A0202-12-0329-3347
<210> 399
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 399
Figure 107113207-A0202-12-0329-3348
<210> 400
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 400
Figure 107113207-A0202-12-0329-3349
<210> 401
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 401
Figure 107113207-A0202-12-0330-3350
<210> 402
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 402
Figure 107113207-A0202-12-0330-3351
<210> 403
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 403
Figure 107113207-A0202-12-0330-3352
<210> 404
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 404
Figure 107113207-A0202-12-0330-3353
<210> 405
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 405
Figure 107113207-A0202-12-0331-3354
<210> 406
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 406
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<210> 407
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 407
Figure 107113207-A0202-12-0331-3356
<210> 408
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 408
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<210> 409
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 409
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<210> 410
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 410
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<210> 411
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 411
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<210> 412
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 412
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<210> 413
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 413
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<210> 414
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 414
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<210> 415
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 415
Figure 107113207-A0202-12-0333-3364
<210> 416
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 416
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<210> 417
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 417
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<210> 418
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 418
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<210> 419
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 419
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<210> 420
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 420
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<210> 421
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 421
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<210> 422
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 422
Figure 107113207-A0202-12-0334-3371
<210> 423
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 423
Figure 107113207-A0202-12-0335-3372
<210> 424
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 424
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<210> 425
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 425
Figure 107113207-A0202-12-0335-3374
<210> 426
<211> 23
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 426
Figure 107113207-A0202-12-0335-3375
<210> 427
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 427
Figure 107113207-A0202-12-0335-3376
<210> 428
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 428
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<210> 429
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 429
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<210> 430
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 430
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<210> 431
<211> 23
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 431
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<210> 432
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 432
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<210> 433
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 433
Figure 107113207-A0202-12-0337-3382
<210> 434
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 434
Figure 107113207-A0202-12-0337-3383
<210> 435
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 435
Figure 107113207-A0202-12-0337-3384
<210> 436
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 436
Figure 107113207-A0202-12-0337-3385
<210> 437
<211> 23
<212> DNA
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 437
Figure 107113207-A0202-12-0338-3386
<210> 438
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 438
Figure 107113207-A0202-12-0338-3387
<210> 439
<211> 23
<212> DNA
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 439
Figure 107113207-A0202-12-0338-3388
<210> 440
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 440
Figure 107113207-A0202-12-0338-3389
<210> 441
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 441
Figure 107113207-A0202-12-0339-3390
<210> 442
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 442
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<210> 443
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<212> DNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 443
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<210> 444
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 444
Figure 107113207-A0202-12-0339-3393
<210> 445
<211> 23
<212> DNA
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 445
Figure 107113207-A0202-12-0340-3394
<210> 446
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 446
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<210> 447
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 447
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<210> 448
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<212> RNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 448
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
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<210> 450
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<212> DNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 450
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<210> 451
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<212> DNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 451
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<210> 452
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 452
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<210> 453
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 453
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<210> 454
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 454
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<210> 455
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 455
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<210> 456
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 456
Figure 107113207-A0202-12-0342-3405
<210> 457
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 457
Figure 107113207-A0202-12-0343-3406
<210> 458
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 458
Figure 107113207-A0202-12-0343-3407
<210> 459
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 459
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<210> 460
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 460
Figure 107113207-A0202-12-0343-3409
<210> 461
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 461
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<210> 462
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 462
Figure 107113207-A0202-12-0344-3411
<210> 463
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 463
Figure 107113207-A0202-12-0344-3412
<210> 464
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 464
Figure 107113207-A0202-12-0344-3413
<210> 465
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 465
Figure 107113207-A0202-12-0345-3414
<210> 466
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 466
Figure 107113207-A0202-12-0345-3415
<210> 467
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 467
Figure 107113207-A0202-12-0345-3416
<210> 468
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 468
Figure 107113207-A0202-12-0346-3417
<210> 469
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 469
Figure 107113207-A0202-12-0346-3418
<210> 470
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 470
Figure 107113207-A0202-12-0346-3419
<210> 471
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 471
Figure 107113207-A0202-12-0346-3420
<210> 472
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 472
Figure 107113207-A0202-12-0347-3421
<210> 473
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 473
Figure 107113207-A0202-12-0347-3422
<210> 474
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 474
Figure 107113207-A0202-12-0347-3423
<210> 475
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 475
Figure 107113207-A0202-12-0347-3424
<210> 476
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 476
Figure 107113207-A0202-12-0348-3425
<210> 477
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 477
Figure 107113207-A0202-12-0348-3426
<210> 478
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 478
Figure 107113207-A0202-12-0348-3427
<210> 479
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 479
Figure 107113207-A0202-12-0348-3428
<210> 480
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 480
Figure 107113207-A0202-12-0349-3429
<210> 481
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 481
Figure 107113207-A0202-12-0349-3430
<210> 482
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 482
Figure 107113207-A0202-12-0349-3431
<210> 483
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 483
Figure 107113207-A0202-12-0349-3432
<210> 484
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 484
Figure 107113207-A0202-12-0350-3433
<210> 485
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 485
Figure 107113207-A0202-12-0350-3434
<210> 486
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 486
Figure 107113207-A0202-12-0350-3435
<210> 487
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 487
Figure 107113207-A0202-12-0350-3436
<210> 488
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 488
Figure 107113207-A0202-12-0350-3437
<210> 489
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 489
Figure 107113207-A0202-12-0351-3438
<210> 490
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 490
Figure 107113207-A0202-12-0351-3439
<210> 491
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 491
Figure 107113207-A0202-12-0351-3440
<210> 492
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (23)..(23)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 492
Figure 107113207-A0202-12-0352-3441
<210> 493
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 493
Figure 107113207-A0202-12-0352-3442
<210> 494
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 494
Figure 107113207-A0202-12-0352-3443
<210> 495
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 495
Figure 107113207-A0202-12-0352-3444
<210> 496
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 496
Figure 107113207-A0202-12-0352-3445
<210> 497
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 497
Figure 107113207-A0202-12-0353-3446
<210> 498
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 498
Figure 107113207-A0202-12-0353-3447
<210> 499
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 499
Figure 107113207-A0202-12-0353-3448
<210> 500
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 500
Figure 107113207-A0202-12-0354-3449
<210> 501
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 501
Figure 107113207-A0202-12-0354-3450
<210> 502
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 502
Figure 107113207-A0202-12-0354-3451
<210> 503
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 503
Figure 107113207-A0202-12-0354-3452
<210> 504
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 504
Figure 107113207-A0202-12-0355-3453
<210> 505
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 505
Figure 107113207-A0202-12-0355-3454
<210> 506
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 506
Figure 107113207-A0202-12-0355-3455
<210> 507
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 507
Figure 107113207-A0202-12-0355-3456
<210> 508
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 508
Figure 107113207-A0202-12-0355-3457
<210> 509
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 509
Figure 107113207-A0202-12-0356-3458
<210> 510
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 510
Figure 107113207-A0202-12-0356-3459
<210> 511
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 511
Figure 107113207-A0202-12-0356-3460
<210> 512
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 512
Figure 107113207-A0202-12-0356-3461
<210> 513
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 513
Figure 107113207-A0202-12-0357-3462
<210> 514
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 514
Figure 107113207-A0202-12-0357-3463
<210> 515
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 515
Figure 107113207-A0202-12-0357-3464
<210> 516
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 516
Figure 107113207-A0202-12-0357-3465
<210> 517
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 517
Figure 107113207-A0202-12-0358-3466
<210> 518
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 518
Figure 107113207-A0202-12-0358-3467
<210> 519
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220> 寡核苷酸
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性
<400> 519
Figure 107113207-A0202-12-0358-3468
<210> 520
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 520
Figure 107113207-A0202-12-0358-3469
<210> 521
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 521
Figure 107113207-A0202-12-0359-3470
<210> 522
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 522
Figure 107113207-A0202-12-0359-3471
<210> 523
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 523
Figure 107113207-A0202-12-0359-3472
<210> 524
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 524
Figure 107113207-A0202-12-0359-3473
<210> 525
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 525
Figure 107113207-A0202-12-0360-3474
<210> 526
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 526
Figure 107113207-A0202-12-0360-3475
<210> 527
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 527
Figure 107113207-A0202-12-0360-3476
<210> 528
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 528
Figure 107113207-A0202-12-0360-3477
<210> 529
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 529
Figure 107113207-A0202-12-0360-3478
<210> 530
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 530
Figure 107113207-A0202-12-0361-3479
<210> 531
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (23)..(23)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 531
Figure 107113207-A0202-12-0361-3480
<210> 532
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 532
Figure 107113207-A0202-12-0361-3481
<210> 533
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 533
Figure 107113207-A0202-12-0361-3482
<210> 534
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 534
Figure 107113207-A0202-12-0362-3483
<210> 535
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 535
Figure 107113207-A0202-12-0362-3484
<210> 536
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 536
Figure 107113207-A0202-12-0362-3485
<210> 537
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 537
Figure 107113207-A0202-12-0363-3486
<210> 538
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 538
Figure 107113207-A0202-12-0363-3487
<210> 539
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 539
Figure 107113207-A0202-12-0363-3488
<210> 540
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 540
Figure 107113207-A0202-12-0363-3489
<210> 541
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 541
Figure 107113207-A0202-12-0363-3490
<210> 542
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 542
Figure 107113207-A0202-12-0364-3491
<210> 543
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 543
Figure 107113207-A0202-12-0364-3492
<210> 544
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 544
Figure 107113207-A0202-12-0364-3493
<210> 545
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 545
Figure 107113207-A0202-12-0365-3494
<210> 546
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 546
Figure 107113207-A0202-12-0365-3495
<210> 547
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 547
Figure 107113207-A0202-12-0365-3496
<210> 548
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 548
Figure 107113207-A0202-12-0365-3497
<210> 549
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 549
Figure 107113207-A0202-12-0365-3498
<210> 550
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 550
Figure 107113207-A0202-12-0366-3499
<210> 551
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 551
Figure 107113207-A0202-12-0366-3500
<210> 552
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 552
Figure 107113207-A0202-12-0366-3501
<210> 553
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 553
Figure 107113207-A0202-12-0366-3502
<210> 554
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 554
Figure 107113207-A0202-12-0367-3503
<210> 555
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 555
Figure 107113207-A0202-12-0367-3504
<210> 556
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 556
Figure 107113207-A0202-12-0367-3505
<210> 557
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 557
Figure 107113207-A0202-12-0367-3506
<210> 558
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 558
Figure 107113207-A0202-12-0368-3507
<210> 559
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 559
Figure 107113207-A0202-12-0368-3508
<210> 560
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 560
Figure 107113207-A0202-12-0368-3509
<210> 561
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 561
Figure 107113207-A0202-12-0368-3510
<210> 562
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 562
Figure 107113207-A0202-12-0368-3511
<210> 563
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 563
Figure 107113207-A0202-12-0369-3512
<210> 564
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 564
Figure 107113207-A0202-12-0369-3513
<210> 565
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 565
Figure 107113207-A0202-12-0369-3514
<210> 566
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 566
Figure 107113207-A0202-12-0370-3515
<210> 567
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 567
Figure 107113207-A0202-12-0370-3516
<210> 568
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 568
Figure 107113207-A0202-12-0370-3517
<210> 569
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 569
Figure 107113207-A0202-12-0370-3518
<210> 570
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 570
Figure 107113207-A0202-12-0370-3519
<210> 571
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 571
Figure 107113207-A0202-12-0371-3520
<210> 572
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 572
Figure 107113207-A0202-12-0371-3521
<210> 573
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 573
Figure 107113207-A0202-12-0371-3522
<210> 574
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 574
Figure 107113207-A0202-12-0371-3523
<210> 575
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 575
Figure 107113207-A0202-12-0371-3524
<210> 576
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 576
Figure 107113207-A0202-12-0372-3525
<210> 577
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 577
Figure 107113207-A0202-12-0372-3526
<210> 578
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 578
Figure 107113207-A0202-12-0372-3527
<210> 579
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 579
Figure 107113207-A0202-12-0372-3528
<210> 580
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 580
Figure 107113207-A0202-12-0373-3529
<210> 581
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 581
Figure 107113207-A0202-12-0373-3530
<210> 582
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 582
Figure 107113207-A0202-12-0373-3531
<210> 583
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 583
Figure 107113207-A0202-12-0373-3532
<210> 584
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 584
Figure 107113207-A0202-12-0373-3533
<210> 585
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 585
Figure 107113207-A0202-12-0374-3534
<210> 586
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 586
Figure 107113207-A0202-12-0374-3535
<210> 587
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 587
Figure 107113207-A0202-12-0374-3536
<210> 588
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 588
Figure 107113207-A0202-12-0374-3537
<210> 589
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 589
Figure 107113207-A0202-12-0375-3538
<210> 590
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 590
Figure 107113207-A0202-12-0375-3539
<210> 591
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 591
Figure 107113207-A0202-12-0375-3540
<210> 592
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 592
Figure 107113207-A0202-12-0375-3541
<210> 593
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 593
Figure 107113207-A0202-12-0375-3542
<210> 594
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 594
Figure 107113207-A0202-12-0376-3543
<210> 595
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 595
Figure 107113207-A0202-12-0376-3544
<210> 596
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 596
Figure 107113207-A0202-12-0376-3545
<210> 597
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 597
Figure 107113207-A0202-12-0376-3546
<210> 598
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 598
Figure 107113207-A0202-12-0377-3547
<210> 599
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 599
Figure 107113207-A0202-12-0377-3548
<210> 600
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 600
Figure 107113207-A0202-12-0377-3549
<210> 601
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 601
Figure 107113207-A0202-12-0377-3550
<210> 602
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 602
Figure 107113207-A0202-12-0377-3551
<210> 603
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 603
Figure 107113207-A0202-12-0378-3552
<210> 604
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 604
Figure 107113207-A0202-12-0378-3553
<210> 605
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 605
Figure 107113207-A0202-12-0378-3554
<210> 606
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 606
Figure 107113207-A0202-12-0378-3555
<210> 607
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 607
Figure 107113207-A0202-12-0379-3556
<210> 608
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 608
Figure 107113207-A0202-12-0379-3557
<210> 609
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 609
Figure 107113207-A0202-12-0379-3558
<210> 610
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 610
Figure 107113207-A0202-12-0379-3559
<210> 611
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 611
Figure 107113207-A0202-12-0379-3560
<210> 612
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 612
Figure 107113207-A0202-12-0380-3561
<210> 613
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 613
Figure 107113207-A0202-12-0380-3562
<210> 614
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 614
Figure 107113207-A0202-12-0380-3563
<210> 615
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 615
Figure 107113207-A0202-12-0380-3564
<210> 616
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 616
Figure 107113207-A0202-12-0381-3565
<210> 617
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 617
Figure 107113207-A0202-12-0381-3566
<210> 618
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 618
Figure 107113207-A0202-12-0381-3567
<210> 619
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 619
Figure 107113207-A0202-12-0381-3568
<210> 620
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 620
Figure 107113207-A0202-12-0381-3569
<210> 621
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 621
Figure 107113207-A0202-12-0382-3570
<210> 622
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 622
Figure 107113207-A0202-12-0382-3571
<210> 623
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 623
Figure 107113207-A0202-12-0382-3572
<210> 624
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 624
Figure 107113207-A0202-12-0382-3573
<210> 625
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 625
Figure 107113207-A0202-12-0383-3574
<210> 626
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 626
Figure 107113207-A0202-12-0383-3575
<210> 627
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 627
Figure 107113207-A0202-12-0383-3576
<210> 628
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 628
Figure 107113207-A0202-12-0383-3577
<210> 629
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 629
Figure 107113207-A0202-12-0383-3578
<210> 630
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 630
Figure 107113207-A0202-12-0384-3579
<210> 631
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 631
Figure 107113207-A0202-12-0384-3580
<210> 632
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 632
Figure 107113207-A0202-12-0384-3581
<210> 633
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 633
Figure 107113207-A0202-12-0384-3582
<210> 634
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 634
Figure 107113207-A0202-12-0384-3583
<210> 635
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 635
Figure 107113207-A0202-12-0385-3584
<210> 636
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 636
Figure 107113207-A0202-12-0385-3585
<210> 637
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 637
Figure 107113207-A0202-12-0385-3586
<210> 638
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 638
Figure 107113207-A0202-12-0385-3587
<210> 639
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 639
Figure 107113207-A0202-12-0386-3588
<210> 640
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 640
Figure 107113207-A0202-12-0386-3589
<210> 641
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 641
Figure 107113207-A0202-12-0386-3590
<210> 642
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 642
Figure 107113207-A0202-12-0386-3591
<210> 643
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 643
Figure 107113207-A0202-12-0386-3592
<210> 644
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 644
Figure 107113207-A0202-12-0387-3593
<210> 645
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 645
Figure 107113207-A0202-12-0387-3594
<210> 646
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 646
Figure 107113207-A0202-12-0387-3595
<210> 647
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 647
Figure 107113207-A0202-12-0387-3596
<210> 648
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 648
Figure 107113207-A0202-12-0388-3597
<210> 649
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 649
Figure 107113207-A0202-12-0388-3598
<210> 650
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 650
Figure 107113207-A0202-12-0388-3599
<210> 651
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性
寡核苷酸
<400> 651
Figure 107113207-A0202-12-0388-3600
<210> 652
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 652
Figure 107113207-A0202-12-0389-3601
<210> 653
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 653
Figure 107113207-A0202-12-0389-3602
<210> 654
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 654
Figure 107113207-A0202-12-0389-3603
<210> 655
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 655
Figure 107113207-A0202-12-0389-3604
<210> 656
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 656
Figure 107113207-A0202-12-0390-3605
<210> 657
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 657
Figure 107113207-A0202-12-0390-3606
<210> 658
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 658
Figure 107113207-A0202-12-0390-3607
<210> 659
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 659
Figure 107113207-A0202-12-0390-3608
<210> 660
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 660
Figure 107113207-A0202-12-0391-3609
<210> 661
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 661
Figure 107113207-A0202-12-0391-3610
<210> 662
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 662
Figure 107113207-A0202-12-0391-3611
<210> 663
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 663
Figure 107113207-A0202-12-0391-3612
<210> 664
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 664
Figure 107113207-A0202-12-0392-3613
<210> 665
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 665
Figure 107113207-A0202-12-0392-3614
<210> 666
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 666
Figure 107113207-A0202-12-0392-3615
<210> 667
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 667
Figure 107113207-A0202-12-0393-3616
<210> 668
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 668
Figure 107113207-A0202-12-0393-3617
<210> 669
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 669
Figure 107113207-A0202-12-0393-3618
<210> 670
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 670
Figure 107113207-A0202-12-0393-3619
<210> 671
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 671
Figure 107113207-A0202-12-0394-3620
<210> 672
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 672
Figure 107113207-A0202-12-0394-3621
<210> 673
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (17)..(17)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-4-甲氧基-3-磷酸酯(無鹼基2'-OMe呋喃糖)
<400> 673
Figure 107113207-A0202-12-0394-3622
<210> 674
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 674
Figure 107113207-A0202-12-0395-3623
<210> 675
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 675
Figure 107113207-A0202-12-0395-3624
<210> 676
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 676
Figure 107113207-A0202-12-0395-3625
<210> 677
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 677
Figure 107113207-A0202-12-0395-3626
<210> 678
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 678
Figure 107113207-A0202-12-0396-3627
<210> 679
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 679
Figure 107113207-A0202-12-0396-3628
<210> 680
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 680
Figure 107113207-A0202-12-0396-3629
<210> 681
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-4-甲氧基-3-磷酸酯(無鹼基2'-OMe呋喃糖)
<400> 681
Figure 107113207-A0202-12-0397-3630
<210> 682
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 682
Figure 107113207-A0202-12-0397-3631
<210> 683
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 683
Figure 107113207-A0202-12-0397-3632
<210> 684
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 684
Figure 107113207-A0202-12-0398-3633
<210> 685
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 685
Figure 107113207-A0202-12-0398-3634
<210> 686
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 686
Figure 107113207-A0202-12-0398-3635
<210> 687
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-4-甲氧基-3-磷酸酯(無鹼基2'-OMe呋喃糖)
<400> 687
Figure 107113207-A0202-12-0398-3636
<210> 688
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 688
Figure 107113207-A0202-12-0399-3637
<210> 689
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 689
Figure 107113207-A0202-12-0399-3638
<210> 690
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 690
Figure 107113207-A0202-12-0399-3639
<210> 691
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 691
Figure 107113207-A0202-12-0399-3640
<210> 692
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 692
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<210> 693
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<212> DNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 693
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<210> 694
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 694
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<210> 695
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 695
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<210> 696
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 696
Figure 107113207-A0202-12-0401-3645
<210> 697
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 697
Figure 107113207-A0202-12-0401-3646
<210> 698
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 698
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<210> 699
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 699
Figure 107113207-A0202-12-0401-3648
<210> 700
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 700
Figure 107113207-A0202-12-0401-3649
<210> 701
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 701
Figure 107113207-A0202-12-0402-3650
<210> 702
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 702
Figure 107113207-A0202-12-0402-3651
<210> 703
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 703
Figure 107113207-A0202-12-0402-3652
<210> 704
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 704
Figure 107113207-A0202-12-0402-3653
<210> 705
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 705
Figure 107113207-A0202-12-0403-3654
<210> 706
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 706
Figure 107113207-A0202-12-0403-3655
<210> 707
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 707
Figure 107113207-A0202-12-0403-3656
<210> 708
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 708
Figure 107113207-A0202-12-0403-3657
<210> 709
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 709
Figure 107113207-A0202-12-0403-3658
<210> 710
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 710
Figure 107113207-A0202-12-0404-3659
<210> 711
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 711
Figure 107113207-A0202-12-0404-3660
<210> 712
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 712
Figure 107113207-A0202-12-0404-3661
<210> 713
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 713
Figure 107113207-A0202-12-0404-3662
<210> 714
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 714
Figure 107113207-A0202-12-0405-3663
<210> 715
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 715
Figure 107113207-A0202-12-0405-3664
<210> 716
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 716
Figure 107113207-A0202-12-0405-3665
<210> 717
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 717
Figure 107113207-A0202-12-0405-3666
<210> 718
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 718
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<210> 719
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 719
Figure 107113207-A0202-12-0406-3668
<210> 720
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 720
Figure 107113207-A0202-12-0406-3669
<210> 721
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 721
Figure 107113207-A0202-12-0406-3670
<210> 722
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 722
Figure 107113207-A0202-12-0406-3671
<210> 723
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 723
Figure 107113207-A0202-12-0407-3672
<210> 724
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 724
Figure 107113207-A0202-12-0407-3673
<210> 725
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 725
Figure 107113207-A0202-12-0407-3674
<210> 726
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 726
Figure 107113207-A0202-12-0407-3675
<210> 727
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 727
Figure 107113207-A0202-12-0407-3676
<210> 728
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 728
Figure 107113207-A0202-12-0408-3677
<210> 729
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 729
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<210> 730
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 730
Figure 107113207-A0202-12-0408-3679
<210> 731
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 731
Figure 107113207-A0202-12-0408-3680
<210> 732
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 732
Figure 107113207-A0202-12-0409-3681
<210> 733
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 733
Figure 107113207-A0202-12-0409-3682
<210> 734
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 734
Figure 107113207-A0202-12-0409-3683
<210> 735
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 735
Figure 107113207-A0202-12-0409-3684
<210> 736
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 736
Figure 107113207-A0202-12-0410-3685
<210> 737
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 737
Figure 107113207-A0202-12-0410-3686
<210> 738
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 738
Figure 107113207-A0202-12-0410-3687
<210> 739
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 739
Figure 107113207-A0202-12-0410-3688
<210> 740
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 740
Figure 107113207-A0202-12-0411-3689
<210> 741
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 741
Figure 107113207-A0202-12-0411-3690
<210> 742
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 742
Figure 107113207-A0202-12-0411-3691
<210> 743
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 743
Figure 107113207-A0202-12-0411-3692
<210> 744
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 744
Figure 107113207-A0202-12-0411-3693
<210> 745
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 745
Figure 107113207-A0202-12-0412-3694
<210> 746
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 746
Figure 107113207-A0202-12-0412-3695
<210> 747
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 747
Figure 107113207-A0202-12-0412-3696
<210> 748
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 748
Figure 107113207-A0202-12-0412-3697
<210> 749
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 749
Figure 107113207-A0202-12-0412-3698
<210> 750
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 750
Figure 107113207-A0202-12-0413-3699
<210> 751
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 751
Figure 107113207-A0202-12-0413-3700
<210> 752
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 752
Figure 107113207-A0202-12-0413-3701
<210> 753
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 753
Figure 107113207-A0202-12-0413-3702
<210> 754
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 754
Figure 107113207-A0202-12-0414-3703
<210> 755
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 755
Figure 107113207-A0202-12-0414-3704
<210> 756
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 756
Figure 107113207-A0202-12-0414-3705
<210> 757
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 757
Figure 107113207-A0202-12-0414-3706
<210> 758
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 758
Figure 107113207-A0202-12-0414-3707
<210> 759
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 759
Figure 107113207-A0202-12-0415-3708
<210> 760
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 760
Figure 107113207-A0202-12-0415-3709
<210> 761
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 761
Figure 107113207-A0202-12-0415-3710
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 762
Figure 107113207-A0202-12-0415-3711
<210> 763
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 763
Figure 107113207-A0202-12-0416-3712
<210> 764
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<212> RNA
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 764
Figure 107113207-A0202-12-0416-3713
<210> 765
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 765
Figure 107113207-A0202-12-0416-3714
<210> 766
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 766
Figure 107113207-A0202-12-0416-3715
<210> 767
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 767
Figure 107113207-A0202-12-0416-3716
<210> 768
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 768
Figure 107113207-A0202-12-0417-3717
<210> 769
<211> 23
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 769
Figure 107113207-A0202-12-0417-3718
<210> 770
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 770
Figure 107113207-A0202-12-0417-3719
<210> 771
<211> 23
<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 771
Figure 107113207-A0202-12-0417-3720
<210> 772
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 772
Figure 107113207-A0202-12-0418-3721
<210> 773
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 773
Figure 107113207-A0202-12-0418-3722
<210> 774
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 774
Figure 107113207-A0202-12-0418-3723
<210> 775
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 775
Figure 107113207-A0202-12-0418-3724
<210> 776
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 776
Figure 107113207-A0202-12-0419-3725
<210> 777
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 777
Figure 107113207-A0202-12-0419-3726
<210> 778
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 778
Figure 107113207-A0202-12-0419-3727
<210> 779
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 779
Figure 107113207-A0202-12-0419-3728
<210> 780
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 780
Figure 107113207-A0202-12-0420-3729
<210> 781
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 781
Figure 107113207-A0202-12-0420-3730
<210> 782
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 782
Figure 107113207-A0202-12-0420-3731
<210> 783
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 783
Figure 107113207-A0202-12-0420-3732
<210> 784
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 784
Figure 107113207-A0202-12-0420-3733
<210> 785
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 785
Figure 107113207-A0202-12-0421-3734
<210> 786
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 786
Figure 107113207-A0202-12-0421-3735
<210> 787
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 787
Figure 107113207-A0202-12-0421-3736
<210> 788
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 788
Figure 107113207-A0202-12-0421-3737
<210> 789
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 789
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<210> 790
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 790
Figure 107113207-A0202-12-0422-3739
<210> 791
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 791
Figure 107113207-A0202-12-0422-3740
<210> 792
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 792
Figure 107113207-A0202-12-0422-3741
<210> 793
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 793
Figure 107113207-A0202-12-0422-3742
<210> 794
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 794
Figure 107113207-A0202-12-0423-3743
<210> 795
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 795
Figure 107113207-A0202-12-0423-3744
<210> 796
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 796
Figure 107113207-A0202-12-0423-3745
<210> 797
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 797
Figure 107113207-A0202-12-0423-3746
<210> 798
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 798
Figure 107113207-A0202-12-0423-3747
<210> 799
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 799
Figure 107113207-A0202-12-0424-3748
<210> 800
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 800
Figure 107113207-A0202-12-0424-3749
<210> 801
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 801
Figure 107113207-A0202-12-0424-3750
<210> 802
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 802
Figure 107113207-A0202-12-0424-3751
<210> 803
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 803
Figure 107113207-A0202-12-0425-3752
<210> 804
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 804
Figure 107113207-A0202-12-0425-3753
<210> 805
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 805
Figure 107113207-A0202-12-0425-3754
<210> 806
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 806
Figure 107113207-A0202-12-0425-3755
<210> 807
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 807
Figure 107113207-A0202-12-0425-3756
<210> 808
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 808
Figure 107113207-A0202-12-0426-3757
<210> 809
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 809
Figure 107113207-A0202-12-0426-3758
<210> 810
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 810
Figure 107113207-A0202-12-0426-3759
<210> 811
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 811
Figure 107113207-A0202-12-0426-3760
<210> 812
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 812
Figure 107113207-A0202-12-0427-3761
<210> 813
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 813
Figure 107113207-A0202-12-0427-3762
<210> 814
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 814
Figure 107113207-A0202-12-0427-3763
<210> 815
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 815
Figure 107113207-A0202-12-0427-3764
<210> 816
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 816
Figure 107113207-A0202-12-0427-3765
<210> 817
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 817
Figure 107113207-A0202-12-0428-3766
<210> 818
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 818
Figure 107113207-A0202-12-0428-3767
<210> 819
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 819
Figure 107113207-A0202-12-0428-3768
<210> 820
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 820
Figure 107113207-A0202-12-0428-3769
<210> 821
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 821
Figure 107113207-A0202-12-0429-3770
<210> 822
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 822
Figure 107113207-A0202-12-0429-3771
<210> 823
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 823
Figure 107113207-A0202-12-0429-3772
<210> 824
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 824
Figure 107113207-A0202-12-0429-3773
<210> 825
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 825
Figure 107113207-A0202-12-0429-4195
<210> 826
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 826
Figure 107113207-A0202-12-0430-3775
<210> 827
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 827
Figure 107113207-A0202-12-0430-3776
<210> 828
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 828
Figure 107113207-A0202-12-0430-3777
<210> 829
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 829
Figure 107113207-A0202-12-0430-3778
<210> 830
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 830
Figure 107113207-A0202-12-0431-3779
<210> 831
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 831
Figure 107113207-A0202-12-0431-3780
<210> 832
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 832
Figure 107113207-A0202-12-0431-3781
<210> 833
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 833
Figure 107113207-A0202-12-0431-3782
<210> 834
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 834
Figure 107113207-A0202-12-0431-3783
<210> 835
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 835
Figure 107113207-A0202-12-0432-3784
<210> 836
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 836
Figure 107113207-A0202-12-0432-3785
<210> 837
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 837
Figure 107113207-A0202-12-0432-3786
<210> 838
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 838
Figure 107113207-A0202-12-0432-3787
<210> 839
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 839
Figure 107113207-A0202-12-0433-3788
<210> 840
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 840
Figure 107113207-A0202-12-0433-3789
<210> 841
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 841
Figure 107113207-A0202-12-0433-3790
<210> 842
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 842
Figure 107113207-A0202-12-0433-3791
<210> 843
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 843
Figure 107113207-A0202-12-0433-3792
<210> 844
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 844
Figure 107113207-A0202-12-0434-3793
<210> 845
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 845
Figure 107113207-A0202-12-0434-3794
<210> 846
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 846
Figure 107113207-A0202-12-0434-3795
<210> 847
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 847
Figure 107113207-A0202-12-0434-3796
<210> 848
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 848
Figure 107113207-A0202-12-0435-3797
<210> 849
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 849
Figure 107113207-A0202-12-0435-3798
<210> 850
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 850
Figure 107113207-A0202-12-0435-3799
<210> 851
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 851
Figure 107113207-A0202-12-0435-3800
<210> 852
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 852
Figure 107113207-A0202-12-0435-3801
<210> 853
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 853
Figure 107113207-A0202-12-0436-3802
<210> 854
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 854
Figure 107113207-A0202-12-0436-3803
<210> 855
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 855
Figure 107113207-A0202-12-0436-3804
<210> 856
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 856
Figure 107113207-A0202-12-0436-3805
<210> 857
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 857
Figure 107113207-A0202-12-0436-3806
<210> 858
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 858
Figure 107113207-A0202-12-0437-3807
<210> 859
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 859
Figure 107113207-A0202-12-0437-3808
<210> 860
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 860
Figure 107113207-A0202-12-0437-3809
<210> 861
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 861
Figure 107113207-A0202-12-0437-3810
<210> 862
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 862
Figure 107113207-A0202-12-0438-3811
<210> 863
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 863
Figure 107113207-A0202-12-0438-3812
<210> 864
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 864
Figure 107113207-A0202-12-0438-3813
<210> 865
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 865
Figure 107113207-A0202-12-0438-3814
<210> 866
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 866
Figure 107113207-A0202-12-0438-3815
<210> 867
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 867
Figure 107113207-A0202-12-0439-3816
<210> 868
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 868
Figure 107113207-A0202-12-0439-3817
<210> 869
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 869
Figure 107113207-A0202-12-0439-3818
<210> 870
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 870
Figure 107113207-A0202-12-0440-2013
<210> 871
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 871
Figure 107113207-A0202-12-0440-2014
<210> 872
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 872
Figure 107113207-A0202-12-0440-2015
<210> 873
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 873
Figure 107113207-A0202-12-0440-2016
<210> 874
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 874
Figure 107113207-A0202-12-0441-2021
<210> 875
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 875
Figure 107113207-A0202-12-0441-2022
<210> 876
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 876
Figure 107113207-A0202-12-0441-2023
<210> 877
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 877
Figure 107113207-A0202-12-0441-2024
<210> 878
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 878
Figure 107113207-A0202-12-0442-2028
<210> 879
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 879
Figure 107113207-A0202-12-0442-2029
<210> 880
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 880
Figure 107113207-A0202-12-0442-2031
<210> 881
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 881
Figure 107113207-A0202-12-0443-2036
<210> 882
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 882
Figure 107113207-A0202-12-0443-2037
<210> 883
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 883
Figure 107113207-A0202-12-0443-2038
<210> 884
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 884
Figure 107113207-A0202-12-0443-2039
<210> 885
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 885
Figure 107113207-A0202-12-0444-2044
<210> 886
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 886
Figure 107113207-A0202-12-0444-2045
<210> 887
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 887
Figure 107113207-A0202-12-0444-2046
<210> 888
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 888
Figure 107113207-A0202-12-0444-2047
<210> 889
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 889
Figure 107113207-A0202-12-0445-2052
<210> 890
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 890
Figure 107113207-A0202-12-0445-2053
<210> 891
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 891
Figure 107113207-A0202-12-0445-2054
<210> 892
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 892
Figure 107113207-A0202-12-0445-2055
<210> 893
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 893
Figure 107113207-A0202-12-0446-2060
<210> 894
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 894
Figure 107113207-A0202-12-0446-2061
<210> 895
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性
寡核苷酸
<400> 895
Figure 107113207-A0202-12-0446-2062
<210> 896
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 896
Figure 107113207-A0202-12-0447-2067
<210> 897
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 897
Figure 107113207-A0202-12-0447-2069
<210> 898
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 898
Figure 107113207-A0202-12-0447-2070
<210> 899
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 899
Figure 107113207-A0202-12-0447-2071
<210> 900
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 900
Figure 107113207-A0202-12-0448-2076
<210> 901
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 901
Figure 107113207-A0202-12-0448-2077
<210> 902
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 902
Figure 107113207-A0202-12-0448-2078
<210> 903
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 903
Figure 107113207-A0202-12-0448-2079
<210> 904
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 904
Figure 107113207-A0202-12-0449-2083
<210> 905
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 905
Figure 107113207-A0202-12-0449-2084
<210> 906
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 906
Figure 107113207-A0202-12-0449-2085
<210> 907
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 907
Figure 107113207-A0202-12-0450-2091
<210> 908
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 908
Figure 107113207-A0202-12-0450-2093
<210> 909
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 909
Figure 107113207-A0202-12-0450-2094
<210> 910
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 910
Figure 107113207-A0202-12-0450-2095
<210> 911
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 911
Figure 107113207-A0202-12-0450-2096
<210> 912
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 912
Figure 107113207-A0202-12-0451-2101
<210> 913
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 913
Figure 107113207-A0202-12-0451-2102
<210> 914
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 914
Figure 107113207-A0202-12-0451-2103
<210> 915
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 915
Figure 107113207-A0202-12-0451-2104
<210> 916
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 916
Figure 107113207-A0202-12-0452-2110
<210> 917
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 917
Figure 107113207-A0202-12-0452-2111
<210> 918
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 918
Figure 107113207-A0202-12-0452-2112
<210> 919
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 919
Figure 107113207-A0202-12-0452-2113
<210> 920
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 920
Figure 107113207-A0202-12-0452-2114
<210> 921
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 921
Figure 107113207-A0202-12-0453-2119
<210> 922
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 922
Figure 107113207-A0202-12-0453-2120
<210> 923
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 923
Figure 107113207-A0202-12-0453-2121
<210> 924
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 924
Figure 107113207-A0202-12-0453-2122
<210> 925
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 925
Figure 107113207-A0202-12-0454-2128
<210> 926
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 926
Figure 107113207-A0202-12-0454-2129
<210> 927
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 927
Figure 107113207-A0202-12-0454-2130
<210> 928
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 928
Figure 107113207-A0202-12-0454-2131
<210> 929
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 929
Figure 107113207-A0202-12-0454-2132
<210> 930
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 930
Figure 107113207-A0202-12-0455-2137
<210> 931
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 931
Figure 107113207-A0202-12-0455-2138
<210> 932
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 932
Figure 107113207-A0202-12-0455-2139
<210> 933
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 933
Figure 107113207-A0202-12-0455-2140
<210> 934
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 934
Figure 107113207-A0202-12-0456-2145
<210> 935
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 935
Figure 107113207-A0202-12-0456-2146
<210> 936
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 936
Figure 107113207-A0202-12-0456-2148
<210> 937
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 937
Figure 107113207-A0202-12-0456-2149
<210> 938
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 938
Figure 107113207-A0202-12-0457-2155
<210> 939
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 939
Figure 107113207-A0202-12-0457-2156
<210> 940
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 940
Figure 107113207-A0202-12-0457-2157
<210> 941
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 941
Figure 107113207-A0202-12-0457-2158
<210> 942
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 942
Figure 107113207-A0202-12-0458-2164
<210> 943
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 943
Figure 107113207-A0202-12-0458-2165
<210> 944
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 944
Figure 107113207-A0202-12-0458-2166
<210> 945
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 945
Figure 107113207-A0202-12-0458-2167
<210> 946
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 946
Figure 107113207-A0202-12-0458-2168
<210> 947
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 947
Figure 107113207-A0202-12-0459-2173
<210> 948
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 948
Figure 107113207-A0202-12-0459-2174
<210> 949
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 949
Figure 107113207-A0202-12-0459-2175
<210> 950
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 950
Figure 107113207-A0202-12-0459-2176
<210> 951
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 951
Figure 107113207-A0202-12-0460-2182
<210> 952
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 952
Figure 107113207-A0202-12-0460-2183
<210> 953
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 953
Figure 107113207-A0202-12-0460-2184
<210> 954
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 954
Figure 107113207-A0202-12-0460-2185
<210> 955
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 955
Figure 107113207-A0202-12-0460-2186
<210> 956
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 956
Figure 107113207-A0202-12-0461-2192
<210> 957
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 957
Figure 107113207-A0202-12-0461-2193
<210> 958
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 958
Figure 107113207-A0202-12-0461-2194
<210> 959
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 959
Figure 107113207-A0202-12-0461-2195
<210> 960
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 960
Figure 107113207-A0202-12-0461-2196
<210> 961
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 961
Figure 107113207-A0202-12-0462-2201
<210> 962
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 962
Figure 107113207-A0202-12-0462-2202
<210> 963
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 963
Figure 107113207-A0202-12-0462-2203
<210> 964
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 964
Figure 107113207-A0202-12-0462-2204
<210> 965
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 965
Figure 107113207-A0202-12-0463-2209
<210> 966
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 966
Figure 107113207-A0202-12-0463-2210
<210> 967
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 967
Figure 107113207-A0202-12-0463-2211
<210> 968
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 968
Figure 107113207-A0202-12-0463-2212
<210> 969
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 969
Figure 107113207-A0202-12-0464-2217
<210> 970
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 970
Figure 107113207-A0202-12-0464-2218
<210> 971
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 971
Figure 107113207-A0202-12-0464-4197
<210> 972
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 972
Figure 107113207-A0202-12-0464-2220
<210> 973
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾鹼基
<222> (23)..(23)
<223> 2-羥基甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 973
Figure 107113207-A0202-12-0465-2225
<210> 974
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 974
Figure 107113207-A0202-12-0465-2226
<210> 975
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 975
Figure 107113207-A0202-12-0465-2227
<210> 976
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 976
Figure 107113207-A0202-12-0465-2228
<210> 977
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 977
Figure 107113207-A0202-12-0466-2233
<210> 978
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 978
Figure 107113207-A0202-12-0466-2234
<210> 979
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 979
Figure 107113207-A0202-12-0466-2235
<210> 980
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 980
Figure 107113207-A0202-12-0466-2236
<210> 981
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 981
Figure 107113207-A0202-12-0467-2242
<210> 982
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 982
Figure 107113207-A0202-12-0467-2243
<210> 983
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 983
Figure 107113207-A0202-12-0467-2245
<210> 984
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 984
Figure 107113207-A0202-12-0467-2246
<210> 985
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 985
Figure 107113207-A0202-12-0468-2252
<210> 986
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 986
Figure 107113207-A0202-12-0468-2253
<210> 987
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 987
Figure 107113207-A0202-12-0468-2254
<210> 988
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 988
Figure 107113207-A0202-12-0468-2255
<210> 989
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 989
Figure 107113207-A0202-12-0468-2256
<210> 990
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 990
Figure 107113207-A0202-12-0469-2261
<210> 991
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性
寡核苷酸
<400> 991
Figure 107113207-A0202-12-0469-2262
<210> 992
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 992
Figure 107113207-A0202-12-0469-2263
<210> 993
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 993
Figure 107113207-A0202-12-0469-2265
<210> 994
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 994
Figure 107113207-A0202-12-0470-2270
<210> 995
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 995
Figure 107113207-A0202-12-0470-2271
<210> 996
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 996
Figure 107113207-A0202-12-0470-2272
<210> 997
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 997
Figure 107113207-A0202-12-0470-2273
<210> 998
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 998
Figure 107113207-A0202-12-0471-2279
<210> 999
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 999
Figure 107113207-A0202-12-0471-2280
<210> 1000
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1000
Figure 107113207-A0202-12-0471-2281
<210> 1001
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1001
Figure 107113207-A0202-12-0471-2282
<210> 1002
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1002
Figure 107113207-A0202-12-0471-2283
<210> 1003
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1003
Figure 107113207-A0202-12-0472-2288
<210> 1004
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1004
Figure 107113207-A0202-12-0472-2290
<210> 1005
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1005
Figure 107113207-A0202-12-0472-2291
<210> 1006
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1006
Figure 107113207-A0202-12-0472-2292
<210> 1007
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1007
Figure 107113207-A0202-12-0473-2298
<210> 1008
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1008
Figure 107113207-A0202-12-0473-2299
<210> 1009
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1009
Figure 107113207-A0202-12-0473-2301
<210> 1010
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1010
Figure 107113207-A0202-12-0473-2302
<210> 1011
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1011
Figure 107113207-A0202-12-0473-2303
<210> 1012
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1012
Figure 107113207-A0202-12-0474-2308
<210> 1013
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1013
Figure 107113207-A0202-12-0474-2309
<210> 1014
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1014
Figure 107113207-A0202-12-0474-2310
<210> 1015
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1015
Figure 107113207-A0202-12-0474-2311
<210> 1016
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1016
Figure 107113207-A0202-12-0475-2316
<210> 1017
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1017
Figure 107113207-A0202-12-0475-2317
<210> 1018
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1018
Figure 107113207-A0202-12-0475-2318
<210> 1019
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1019
Figure 107113207-A0202-12-0475-2319
<210> 1020
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1020
Figure 107113207-A0202-12-0476-2324
<210> 1021
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1021
Figure 107113207-A0202-12-0476-2325
<210> 1022
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1022
Figure 107113207-A0202-12-0476-2326
<210> 1023
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1023
Figure 107113207-A0202-12-0476-2327
<210> 1024
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1024
Figure 107113207-A0202-12-0477-2333
<210> 1025
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1025
Figure 107113207-A0202-12-0477-2334
<210> 1026
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1026
Figure 107113207-A0202-12-0477-2335
<210> 1027
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1027
Figure 107113207-A0202-12-0477-2336
<210> 1028
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1028
Figure 107113207-A0202-12-0477-2337
<210> 1029
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1029
Figure 107113207-A0202-12-0478-2342
<210> 1030
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1030
Figure 107113207-A0202-12-0478-2343
<210> 1031
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1031
Figure 107113207-A0202-12-0478-2344
<210> 1032
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1032
Figure 107113207-A0202-12-0478-2345
<210> 1033
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1033
Figure 107113207-A0202-12-0479-2350
<210> 1034
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1034
Figure 107113207-A0202-12-0479-2351
<210> 1035
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1035
Figure 107113207-A0202-12-0479-2352
<210> 1036
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1036
Figure 107113207-A0202-12-0479-2353
<210> 1037
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1037
Figure 107113207-A0202-12-0480-2359
<210> 1038
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1038
Figure 107113207-A0202-12-0480-2360
<210> 1039
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1039
Figure 107113207-A0202-12-0480-2361
<210> 1040
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1040
Figure 107113207-A0202-12-0480-2362
<210> 1041
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1041
Figure 107113207-A0202-12-0480-2363
<210> 1042
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1042
Figure 107113207-A0202-12-0481-2365
<210> 1043
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1043
Figure 107113207-A0202-12-0481-2367
<210> 1044
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1044
Figure 107113207-A0202-12-0481-2369
<210> 1045
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1045
Figure 107113207-A0202-12-0481-2371
<210> 1046
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1046
Figure 107113207-A0202-12-0482-2374
<210> 1047
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1047
Figure 107113207-A0202-12-0482-2376
<210> 1048
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1048
Figure 107113207-A0202-12-0482-2378
<210> 1049
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1049
Figure 107113207-A0202-12-0482-2380
<210> 1050
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1050
Figure 107113207-A0202-12-0482-2382
<210> 1051
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1051
Figure 107113207-A0202-12-0483-2384
<210> 1052
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1052
Figure 107113207-A0202-12-0483-2386
<210> 1053
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1053
Figure 107113207-A0202-12-0483-2388
<210> 1054
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1054
Figure 107113207-A0202-12-0483-2390
<210> 1055
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1055
Figure 107113207-A0202-12-0484-2392
<210> 1056
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1056
Figure 107113207-A0202-12-0484-2394
<210> 1057
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1057
Figure 107113207-A0202-12-0484-2396
<210> 1058
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1058
Figure 107113207-A0202-12-0484-2398
<210> 1059
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1059
Figure 107113207-A0202-12-0484-2401
<210> 1060
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1060
Figure 107113207-A0202-12-0485-2403
<210> 1061
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1061
Figure 107113207-A0202-12-0485-2405
<210> 1062
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1062
Figure 107113207-A0202-12-0485-2407
<210> 1063
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1063
Figure 107113207-A0202-12-0485-2409
<210> 1064
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1064
Figure 107113207-A0202-12-0486-2411
<210> 1065
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<220>
<223> 組合DNA/RNA分子之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1065
Figure 107113207-A0202-12-0486-2413
<210> 1066
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1066
Figure 107113207-A0202-12-0486-2415
<210> 1067
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1067
Figure 107113207-A0202-12-0486-2417
<210> 1068
<211> 23
<212> RNA <213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1068
Figure 107113207-A0202-12-0487-2419
<210> 1069
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1069
Figure 107113207-A0202-12-0487-2421
<210> 1070
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1070
Figure 107113207-A0202-12-0487-2423
<210> 1071
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1071
Figure 107113207-A0202-12-0487-2425
<210> 1072
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1072
Figure 107113207-A0202-12-0487-2427
<210> 1073
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1073
Figure 107113207-A0202-12-0488-2429
<210> 1074
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1074
Figure 107113207-A0202-12-0488-2431
<210> 1075
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1075
Figure 107113207-A0202-12-0488-2433
<210> 1076
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1076
Figure 107113207-A0202-12-0488-2435
<210> 1077
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1077
Figure 107113207-A0202-12-0488-2437
<210> 1078
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1078
Figure 107113207-A0202-12-0489-2439
<210> 1079
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1079
Figure 107113207-A0202-12-0489-2441
<210> 1080
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1080
Figure 107113207-A0202-12-0489-2443
<210> 1081
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1081
Figure 107113207-A0202-12-0489-2445
<210> 1082
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1082
Figure 107113207-A0202-12-0490-2447
<210> 1083
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1083
Figure 107113207-A0202-12-0490-2449
<210> 1084
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1084
Figure 107113207-A0202-12-0490-2451
<210> 1085
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1085
Figure 107113207-A0202-12-0490-2453
<210> 1086
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1086
Figure 107113207-A0202-12-0490-2455
<210> 1087
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1087
Figure 107113207-A0202-12-0491-2457
<210> 1088
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1088
Figure 107113207-A0202-12-0491-2459
<210> 1089
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1089
Figure 107113207-A0202-12-0491-2461
<210> 1090
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1090
Figure 107113207-A0202-12-0491-2463
<210> 1091
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1091
Figure 107113207-A0202-12-0492-2465
<210> 1092
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1092
Figure 107113207-A0202-12-0492-2467
<210> 1093
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1093
Figure 107113207-A0202-12-0492-2469
<210> 1094
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1094
Figure 107113207-A0202-12-0492-2471
<210> 1095
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1095
Figure 107113207-A0202-12-0492-2473
<210> 1096
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1096
Figure 107113207-A0202-12-0493-2475
<210> 1097
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1097
Figure 107113207-A0202-12-0493-2477
<210> 1098
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1098
Figure 107113207-A0202-12-0493-2479
<210> 1099
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1099
Figure 107113207-A0202-12-0493-2481
<210> 1100
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1100
Figure 107113207-A0202-12-0494-2483
<210> 1101
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1101
Figure 107113207-A0202-12-0494-2485
<210> 1102
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1102
Figure 107113207-A0202-12-0494-2487
<210> 1103
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1103
Figure 107113207-A0202-12-0494-2489
<210> 1104
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1104
Figure 107113207-A0202-12-0494-2491
<210> 1105
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1105
Figure 107113207-A0202-12-0495-2493
<210> 1106
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1106
Figure 107113207-A0202-12-0495-2495
<210> 1107
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1107
Figure 107113207-A0202-12-0495-2497
<210> 1108
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1108
Figure 107113207-A0202-12-0495-2499
<210> 1109
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1109
Figure 107113207-A0202-12-0496-2501
<210> 1110
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1110
Figure 107113207-A0202-12-0496-2503
<210> 1111
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1111
Figure 107113207-A0202-12-0496-2505
<210> 1112
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1112
Figure 107113207-A0202-12-0496-2507
<210> 1113
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1113
Figure 107113207-A0202-12-0496-2510
<210> 1114
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1114
Figure 107113207-A0202-12-0497-2512
<210> 1115
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1115
Figure 107113207-A0202-12-0497-2514
<210> 1116
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1116
Figure 107113207-A0202-12-0497-2516
<210> 1117
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1117
Figure 107113207-A0202-12-0497-2518
<210> 1118
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1118
Figure 107113207-A0202-12-0498-2520
<210> 1119
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1119
Figure 107113207-A0202-12-0498-2522
<210> 1120
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1120
Figure 107113207-A0202-12-0498-2524
<210> 1121
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1121
Figure 107113207-A0202-12-0498-2526
<210> 1122
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1122
Figure 107113207-A0202-12-0498-2528
<210> 1123
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1123
Figure 107113207-A0202-12-0499-2530
<210> 1124
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1124
Figure 107113207-A0202-12-0499-2532
<210> 1125
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1125
Figure 107113207-A0202-12-0499-2534
<210> 1126
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1126
Figure 107113207-A0202-12-0499-4198
<210> 1127
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1127
Figure 107113207-A0202-12-0500-2538
<210> 1128
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1128
Figure 107113207-A0202-12-0500-2540
<210> 1129
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1129
Figure 107113207-A0202-12-0500-2542
<210> 1130
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1130
Figure 107113207-A0202-12-0500-2544
<210> 1131
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1131
Figure 107113207-A0202-12-0500-2546
<210> 1132
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1132
Figure 107113207-A0202-12-0501-2548
<210> 1133
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1133
Figure 107113207-A0202-12-0501-2550
<210> 1134
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1134
Figure 107113207-A0202-12-0501-2552
<210> 1135
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1135
Figure 107113207-A0202-12-0501-2554
<210> 1136
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1136
Figure 107113207-A0202-12-0501-2556
<210> 1137
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1137
Figure 107113207-A0202-12-0502-2558
<210> 1138
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1138
Figure 107113207-A0202-12-0502-2560
<210> 1139
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1139
Figure 107113207-A0202-12-0502-2562
<210> 1140
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1140
Figure 107113207-A0202-12-0502-2564
<210> 1141
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1141
Figure 107113207-A0202-12-0503-2566
<210> 1142
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1142
Figure 107113207-A0202-12-0503-2568
<210> 1143
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1143
Figure 107113207-A0202-12-0503-2570
<210> 1144
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1144
Figure 107113207-A0202-12-0503-2572
<210> 1145
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1145
Figure 107113207-A0202-12-0503-2574
<210> 1146
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1146
Figure 107113207-A0202-12-0504-2576
<210> 1147
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1147
Figure 107113207-A0202-12-0504-2578
<210> 1148
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1148
Figure 107113207-A0202-12-0504-2580
<210> 1149
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1149
Figure 107113207-A0202-12-0504-2582
<210> 1150
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1150
Figure 107113207-A0202-12-0505-2584
<210> 1151
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1151
Figure 107113207-A0202-12-0505-2586
<210> 1152
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1152
Figure 107113207-A0202-12-0505-2588
<210> 1153
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1153
Figure 107113207-A0202-12-0505-2590
<210> 1154
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1154
Figure 107113207-A0202-12-0505-2592
<210> 1155
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1155
Figure 107113207-A0202-12-0506-2594
<210> 1156
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1156
Figure 107113207-A0202-12-0506-2596
<210> 1157
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1157
Figure 107113207-A0202-12-0506-2598
<210> 1158
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1158
Figure 107113207-A0202-12-0506-2600
<210> 1159
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1159
Figure 107113207-A0202-12-0507-2602
<210> 1160
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1160
Figure 107113207-A0202-12-0507-2604
<210> 1161
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1161
Figure 107113207-A0202-12-0507-2606
<210> 1162
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1162
Figure 107113207-A0202-12-0507-2608
<210> 1163
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1163
Figure 107113207-A0202-12-0507-2610
<210> 1164
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1164
Figure 107113207-A0202-12-0508-2612
<210> 1165
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1165
Figure 107113207-A0202-12-0508-2614
<210> 1166
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1166
Figure 107113207-A0202-12-0508-2616
<210> 1167
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1167
Figure 107113207-A0202-12-0508-2618
<210> 1168
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1168
Figure 107113207-A0202-12-0509-2620
<210> 1169
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1169
Figure 107113207-A0202-12-0509-2622
<210> 1170
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1170
Figure 107113207-A0202-12-0509-2624
<210> 1171
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1171
Figure 107113207-A0202-12-0509-2626
<210> 1172
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1172
Figure 107113207-A0202-12-0509-2628
<210> 1173
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1173
Figure 107113207-A0202-12-0510-2630
<210> 1174
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1174
Figure 107113207-A0202-12-0510-2632
<210> 1175
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1175
Figure 107113207-A0202-12-0510-2634
<210> 1176
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1176
Figure 107113207-A0202-12-0510-2636
<210> 1177
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1177
Figure 107113207-A0202-12-0511-2638
<210> 1178
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1178
Figure 107113207-A0202-12-0511-2640
<210> 1179
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1179
Figure 107113207-A0202-12-0511-2642
<210> 1180
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1180
Figure 107113207-A0202-12-0511-2644
<210> 1181
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1181
Figure 107113207-A0202-12-0511-2646
<210> 1182
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1182
Figure 107113207-A0202-12-0512-2648
<210> 1183
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1183
Figure 107113207-A0202-12-0512-2650
<210> 1184
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1184
Figure 107113207-A0202-12-0512-2652
<210> 1185
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1185
Figure 107113207-A0202-12-0512-2654
<210> 1186
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1186
Figure 107113207-A0202-12-0513-2656
<210> 1187
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1187
Figure 107113207-A0202-12-0513-2658
<210> 1188
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1188
Figure 107113207-A0202-12-0513-2660
<210> 1189
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1189
Figure 107113207-A0202-12-0513-2662
<210> 1190
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1190
Figure 107113207-A0202-12-0513-2664
<210> 1191
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1191
Figure 107113207-A0202-12-0514-2666
<210> 1192
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1192
Figure 107113207-A0202-12-0514-2668
<210> 1193
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1193
Figure 107113207-A0202-12-0514-2670
<210> 1194
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1194
Figure 107113207-A0202-12-0514-2672
<210> 1195
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1195
Figure 107113207-A0202-12-0514-2674
<210> 1196
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1196
Figure 107113207-A0202-12-0515-2676
<210> 1197
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1197
Figure 107113207-A0202-12-0515-2678
<210> 1198
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1198
Figure 107113207-A0202-12-0515-2680
<210> 1199
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1199
Figure 107113207-A0202-12-0515-2682
<210> 1200
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1200
Figure 107113207-A0202-12-0516-2684
<210> 1201
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1201
Figure 107113207-A0202-12-0516-2686
<210> 1202
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1202
Figure 107113207-A0202-12-0516-2689
<210> 1203
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1203
Figure 107113207-A0202-12-0516-2691
<210> 1204
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1204
Figure 107113207-A0202-12-0516-2693
<210> 1205
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1205
Figure 107113207-A0202-12-0517-2695
<210> 1206
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1206
Figure 107113207-A0202-12-0517-2697
<210> 1207
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1207
Figure 107113207-A0202-12-0517-2699
<210> 1208
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1208
Figure 107113207-A0202-12-0517-2701
<210> 1209
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1209
Figure 107113207-A0202-12-0518-2703
<210> 1210
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1210
Figure 107113207-A0202-12-0518-2705
<210> 1211
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1211
Figure 107113207-A0202-12-0518-2707
<210> 1212
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1212
Figure 107113207-A0202-12-0518-2709
<210> 1213
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1213
Figure 107113207-A0202-12-0518-2711
<210> 1214
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1214
Figure 107113207-A0202-12-0519-2713
<210> 1215
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1215
Figure 107113207-A0202-12-0519-2715
<210> 1216
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1216
Figure 107113207-A0202-12-0519-2717
<210> 1217
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1217
Figure 107113207-A0202-12-0519-2719
<210> 1218
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1218
Figure 107113207-A0202-12-0520-2721
<210> 1219
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1219
Figure 107113207-A0202-12-0520-2723
<210> 1220
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1220
Figure 107113207-A0202-12-0520-2725
<210> 1221
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1221
Figure 107113207-A0202-12-0520-2727
<210> 1222
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1222
Figure 107113207-A0202-12-0520-2729
<210> 1223
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1223
Figure 107113207-A0202-12-0521-2731
<210> 1224
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1224
Figure 107113207-A0202-12-0521-2733
<210> 1225
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1225
Figure 107113207-A0202-12-0521-2735
<210> 1226
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1226
Figure 107113207-A0202-12-0521-2737
<210> 1227
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1227
Figure 107113207-A0202-12-0522-2740
<210> 1228
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1228
Figure 107113207-A0202-12-0522-2742
<210> 1229
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1229
Figure 107113207-A0202-12-0522-2744
<210> 1230
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1230
Figure 107113207-A0202-12-0522-2746
<210> 1231
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1231
Figure 107113207-A0202-12-0522-2748
<210> 1232
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1232
Figure 107113207-A0202-12-0523-2750
<210> 1233
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1233
Figure 107113207-A0202-12-0523-2752
<210> 1234
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1234
Figure 107113207-A0202-12-0523-2754
<210> 1235
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1235
Figure 107113207-A0202-12-0523-2756
<210> 1236
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1236
Figure 107113207-A0202-12-0524-2761
<210> 1237
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1237
Figure 107113207-A0202-12-0524-2762
<210> 1238
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1238
Figure 107113207-A0202-12-0524-2764
<210> 1239
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1239
Figure 107113207-A0202-12-0524-2766
<210> 1240
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1240
Figure 107113207-A0202-12-0524-2768
<210> 1241
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1241
Figure 107113207-A0202-12-0525-2770
<210> 1242
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1242
Figure 107113207-A0202-12-0525-2772
<210> 1243
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1243
Figure 107113207-A0202-12-0525-2774
<210> 1244
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1244
Figure 107113207-A0202-12-0525-2776
<210> 1245
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1245
Figure 107113207-A0202-12-0526-2778
<210> 1246
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1246
Figure 107113207-A0202-12-0526-2780
<210> 1247
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1247
Figure 107113207-A0202-12-0526-2782
<210> 1248
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1248
Figure 107113207-A0202-12-0526-2784
<210> 1249
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1249
Figure 107113207-A0202-12-0526-2786
<210> 1250
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1250
Figure 107113207-A0202-12-0527-2788
<210> 1251
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1251
Figure 107113207-A0202-12-0527-2790
<210> 1252
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1252
Figure 107113207-A0202-12-0527-2792
<210> 1253
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1253
Figure 107113207-A0202-12-0527-2794
<210> 1254
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1254
Figure 107113207-A0202-12-0527-2796
<210> 1255
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1255
Figure 107113207-A0202-12-0528-2798
<210> 1256
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1256
Figure 107113207-A0202-12-0528-2800
<210> 1257
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1257
Figure 107113207-A0202-12-0528-2802
<210> 1258
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1258
Figure 107113207-A0202-12-0528-2804
<210> 1259
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1259
Figure 107113207-A0202-12-0529-2806
<210> 1260
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1260
Figure 107113207-A0202-12-0529-2808
<210> 1261
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1261
Figure 107113207-A0202-12-0529-2810
<210> 1262
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1262
Figure 107113207-A0202-12-0529-2812
<210> 1263
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1263
Figure 107113207-A0202-12-0529-2814
<210> 1264
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1264
Figure 107113207-A0202-12-0530-2816
<210> 1265
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1265
Figure 107113207-A0202-12-0530-2818
<210> 1266
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1266
Figure 107113207-A0202-12-0530-2820
<210> 1267
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1267
Figure 107113207-A0202-12-0530-2822
<210> 1268
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1268
Figure 107113207-A0202-12-0531-2824
<210> 1269
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1269
Figure 107113207-A0202-12-0531-2826
<210> 1270
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1270
Figure 107113207-A0202-12-0531-2829
<210> 1271
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1271
Figure 107113207-A0202-12-0531-2831
<210> 1272
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1272
Figure 107113207-A0202-12-0531-2833
<210> 1273
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1273
Figure 107113207-A0202-12-0532-2835
<210> 1274
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1274
Figure 107113207-A0202-12-0532-2837
<210> 1275
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1275
Figure 107113207-A0202-12-0532-2839
<210> 1276
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1276
Figure 107113207-A0202-12-0532-2841
<210> 1277
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1277
Figure 107113207-A0202-12-0533-2843
<210> 1278
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1278
Figure 107113207-A0202-12-0533-2845
<210> 1279
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1279
Figure 107113207-A0202-12-0533-2847
<210> 1280
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1280
Figure 107113207-A0202-12-0533-2849
<210> 1281
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1281
Figure 107113207-A0202-12-0533-2851
<210> 1282
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1282
Figure 107113207-A0202-12-0534-2853
<210> 1283
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1283
Figure 107113207-A0202-12-0534-2855
<210> 1284
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1284
Figure 107113207-A0202-12-0534-2857
<210> 1285
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1285
Figure 107113207-A0202-12-0534-2859
<210> 1286
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1286
Figure 107113207-A0202-12-0535-2861
<210> 1287
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1287
Figure 107113207-A0202-12-0535-2863
<210> 1288
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1288
Figure 107113207-A0202-12-0535-2865
<210> 1289
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1289
Figure 107113207-A0202-12-0535-2867
<210> 1290
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1290
Figure 107113207-A0202-12-0535-2869
<210> 1291
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1291
Figure 107113207-A0202-12-0536-2871
<210> 1292
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1292
Figure 107113207-A0202-12-0536-2873
<210> 1293
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1293
Figure 107113207-A0202-12-0536-2876
<210> 1294
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1294
Figure 107113207-A0202-12-0536-2878
<210> 1295
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1295
Figure 107113207-A0202-12-0536-2880
<210> 1296
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1296
Figure 107113207-A0202-12-0536-2882
<210> 1297
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1297
Figure 107113207-A0202-12-0537-2884
<210> 1298
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1298
Figure 107113207-A0202-12-0537-2886
<210> 1299
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1299
Figure 107113207-A0202-12-0537-2888
<210> 1300
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1300
Figure 107113207-A0202-12-0537-2890
<210> 1301
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1301
Figure 107113207-A0202-12-0537-2892
<210> 1302
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1302
Figure 107113207-A0202-12-0537-2894
<210> 1303
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1303
Figure 107113207-A0202-12-0538-2896
<210> 1304
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1304
Figure 107113207-A0202-12-0538-2898
<210> 1305
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1305
Figure 107113207-A0202-12-0538-2900
<210> 1306
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1306
Figure 107113207-A0202-12-0538-2902
<210> 1307
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1307
Figure 107113207-A0202-12-0538-2904
<210> 1308
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1308
Figure 107113207-A0202-12-0538-2906
<210> 1309
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1309
Figure 107113207-A0202-12-0538-2908
<210> 1310
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1310
Figure 107113207-A0202-12-0539-2910
<210> 1311
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1311
Figure 107113207-A0202-12-0539-2912
<210> 1312
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1312
Figure 107113207-A0202-12-0539-2914
<210> 1313
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1313
Figure 107113207-A0202-12-0539-2916
<210> 1314
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1314
Figure 107113207-A0202-12-0539-2918
<210> 1315
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1315
Figure 107113207-A0202-12-0539-2920
<210> 1316
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1316
Figure 107113207-A0202-12-0540-2922
<210> 1317
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1317
Figure 107113207-A0202-12-0540-2924
<210> 1318
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1318
Figure 107113207-A0202-12-0540-2926
<210> 1319
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1319
Figure 107113207-A0202-12-0540-2928
<210> 1320
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1320
Figure 107113207-A0202-12-0540-2930
<210> 1321
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1321
Figure 107113207-A0202-12-0540-2932
<210> 1322
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1322
Figure 107113207-A0202-12-0540-2934
<210> 1323
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1323
Figure 107113207-A0202-12-0541-2936
<210> 1324
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1324
Figure 107113207-A0202-12-0541-2938
<210> 1325
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1325
Figure 107113207-A0202-12-0541-2940
<210> 1326
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1326
Figure 107113207-A0202-12-0541-2942
<210> 1327
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1327
Figure 107113207-A0202-12-0541-2944
<210> 1328
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1328
Figure 107113207-A0202-12-0541-2946
<210> 1329
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1329
Figure 107113207-A0202-12-0542-2948
<210> 1330
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1330
Figure 107113207-A0202-12-0542-2950
<210> 1331
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1331
Figure 107113207-A0202-12-0542-2953
<210> 1332
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1332
Figure 107113207-A0202-12-0542-2955
<210> 1333
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1333
Figure 107113207-A0202-12-0542-2957
<210> 1334
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1334
Figure 107113207-A0202-12-0542-2959
<210> 1335
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1335
Figure 107113207-A0202-12-0542-2961
<210> 1336
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1336
Figure 107113207-A0202-12-0543-2963
<210> 1337
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1337
Figure 107113207-A0202-12-0543-2965
<210> 1338
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1338
Figure 107113207-A0202-12-0543-2967
<210> 1339
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1339
Figure 107113207-A0202-12-0543-2969
<210> 1340
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1340
Figure 107113207-A0202-12-0543-2971
<210> 1341
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1341
Figure 107113207-A0202-12-0543-2973
<210> 1342
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1342
Figure 107113207-A0202-12-0543-2975
<210> 1343
<211> 19
<212> RNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1343
Figure 107113207-A0202-12-0544-2977
<210> 1344
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1344
Figure 107113207-A0202-12-0544-2979
<210> 1345
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1345
Figure 107113207-A0202-12-0544-2981
<210> 1346
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1346
Figure 107113207-A0202-12-0544-2983
<210> 1347
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1347
Figure 107113207-A0202-12-0545-2985
<210> 1348
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1348
Figure 107113207-A0202-12-0545-2987
<210> 1349
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1349
Figure 107113207-A0202-12-0545-2989
<210> 1350
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1350
Figure 107113207-A0202-12-0545-2991
<210> 1351
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1351
Figure 107113207-A0202-12-0545-2993
<210> 1352
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1352
Figure 107113207-A0202-12-0546-2995
<210> 1353
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1353
Figure 107113207-A0202-12-0546-2997
<210> 1354
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1354
Figure 107113207-A0202-12-0546-2999
<210> 1355
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1355
Figure 107113207-A0202-12-0546-3001
<210> 1356
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1356
Figure 107113207-A0202-12-0547-3003
<210> 1357
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1357
Figure 107113207-A0202-12-0547-3005
<210> 1358
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1358
Figure 107113207-A0202-12-0547-3007
<210> 1359
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1359
Figure 107113207-A0202-12-0547-3009
<210> 1360
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1360
Figure 107113207-A0202-12-0547-3011
<210> 1361
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1361
Figure 107113207-A0202-12-0548-3013
<210> 1362
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1362
Figure 107113207-A0202-12-0548-3015
<210> 1363
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1363
Figure 107113207-A0202-12-0548-3017
<210> 1364
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1364
Figure 107113207-A0202-12-0548-3019
<210> 1365
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1365
Figure 107113207-A0202-12-0548-3021
<210> 1366
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1366
Figure 107113207-A0202-12-0549-3023
<210> 1367
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1367
Figure 107113207-A0202-12-0549-3025
<210> 1368
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1368
Figure 107113207-A0202-12-0549-3027
<210> 1369
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1369
Figure 107113207-A0202-12-0549-3029
<210> 1370
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1370
Figure 107113207-A0202-12-0550-3032
<210> 1371
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1371
Figure 107113207-A0202-12-0550-3034
<210> 1372
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1372
Figure 107113207-A0202-12-0550-3036
<210> 1373
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1373
Figure 107113207-A0202-12-0550-3038
<210> 1374
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1374
Figure 107113207-A0202-12-0550-3040
<210> 1375
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1375
Figure 107113207-A0202-12-0551-3042
<210> 1376
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1376
Figure 107113207-A0202-12-0551-3044
<210> 1377
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1377
Figure 107113207-A0202-12-0551-3046
<210> 1378
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1378
Figure 107113207-A0202-12-0551-3048
<210> 1379
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1379
Figure 107113207-A0202-12-0552-3051
<210> 1380
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1380
Figure 107113207-A0202-12-0552-3053
<210> 1381
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1381
Figure 107113207-A0202-12-0552-3055
<210> 1382
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1382
Figure 107113207-A0202-12-0552-3057
<210> 1383
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1383
Figure 107113207-A0202-12-0552-3059
<210> 1384
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1384
Figure 107113207-A0202-12-0553-3061
<210> 1385
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1385
Figure 107113207-A0202-12-0553-3063
<210> 1386
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1386
Figure 107113207-A0202-12-0553-3065
<210> 1387
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1387
Figure 107113207-A0202-12-0553-3067
<210> 1388
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1388
Figure 107113207-A0202-12-0554-3070
<210> 1389
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1389
Figure 107113207-A0202-12-0554-3072
<210> 1390
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1390
Figure 107113207-A0202-12-0554-3074
<210> 1391
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1391
Figure 107113207-A0202-12-0554-3076
<210> 1392
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1392
Figure 107113207-A0202-12-0554-3078
<210> 1393
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1393
Figure 107113207-A0202-12-0555-3080
<210> 1394
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1394
Figure 107113207-A0202-12-0555-3083
<210> 1395
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1395
Figure 107113207-A0202-12-0555-3085
<210> 1396
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1396
Figure 107113207-A0202-12-0555-3087
<210> 1397
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1397
Figure 107113207-A0202-12-0556-3089
<210> 1398
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1398
Figure 107113207-A0202-12-0556-3091
<210> 1399
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1399
Figure 107113207-A0202-12-0556-3093
<210> 1400
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1400
Figure 107113207-A0202-12-0556-3095
<210> 1401
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1401
Figure 107113207-A0202-12-0556-3097
<210> 1402
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1402
Figure 107113207-A0202-12-0557-3099
<210> 1403
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1403
Figure 107113207-A0202-12-0557-3101
<210> 1404
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1404
Figure 107113207-A0202-12-0557-3103
<210> 1405
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1405
Figure 107113207-A0202-12-0557-3105
<210> 1406
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1406
Figure 107113207-A0202-12-0558-3107
<210> 1407
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1407
Figure 107113207-A0202-12-0558-3109
<210> 1408
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1408
Figure 107113207-A0202-12-0558-3111
<210> 1409
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1409
Figure 107113207-A0202-12-0558-3113
<210> 1410
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1410
Figure 107113207-A0202-12-0558-3115
<210> 1411
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1411
Figure 107113207-A0202-12-0559-3117
<210> 1412
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1412
Figure 107113207-A0202-12-0559-3119
<210> 1413
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1413
Figure 107113207-A0202-12-0559-3121
<210> 1414
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1414
Figure 107113207-A0202-12-0559-3123
<210> 1415
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1415
Figure 107113207-A0202-12-0560-3125
<210> 1416
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1416
Figure 107113207-A0202-12-0560-3127
<210> 1417
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1417
Figure 107113207-A0202-12-0560-3129
<210> 1418
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1418
Figure 107113207-A0202-12-0560-3131
<210> 1419
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1419
Figure 107113207-A0202-12-0560-3133
<210> 1420
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1420
Figure 107113207-A0202-12-0561-3135
<210> 1421
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1421
Figure 107113207-A0202-12-0561-3137
<210> 1422
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1422
Figure 107113207-A0202-12-0561-3139
<210> 1423
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1423
Figure 107113207-A0202-12-0561-3141
<210> 1424
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1424
Figure 107113207-A0202-12-0561-3143
<210> 1425
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1425
Figure 107113207-A0202-12-0562-3145
<210> 1426
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1426
Figure 107113207-A0202-12-0562-3147
<210> 1427
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1427
Figure 107113207-A0202-12-0562-3149
<210> 1428
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1428
Figure 107113207-A0202-12-0562-3151
<210> 1429
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1429
Figure 107113207-A0202-12-0563-3153
<210> 1430
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1430
Figure 107113207-A0202-12-0563-3156
<210> 1431
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1431
Figure 107113207-A0202-12-0563-3158
<210> 1432
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1432
Figure 107113207-A0202-12-0563-3160
<210> 1433
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1433
Figure 107113207-A0202-12-0563-3162
<210> 1434
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1434
Figure 107113207-A0202-12-0564-3164
<210> 1435
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1435
Figure 107113207-A0202-12-0564-3166
<210> 1436
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1436
Figure 107113207-A0202-12-0564-3168
<210> 1437
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1437
Figure 107113207-A0202-12-0564-3170
<210> 1438
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1438
Figure 107113207-A0202-12-0565-3172
<210> 1439
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1439
Figure 107113207-A0202-12-0565-3174
<210> 1440
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1440
Figure 107113207-A0202-12-0565-3176
<210> 1441
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1441
Figure 107113207-A0202-12-0565-3178
<210> 1442
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1442
Figure 107113207-A0202-12-0565-3180
<210> 1443
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1443
Figure 107113207-A0202-12-0566-3182
<210> 1444
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1444
Figure 107113207-A0202-12-0566-3184
<210> 1445
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成性寡核苷酸
<400> 1445
Figure 107113207-A0202-12-0566-3186
Figure 107113207-A0202-11-0002-4137

Claims (25)

  1. 一種RNAi劑、蛋白質系HBV疫苗及核酸系HBV疫苗於製備治療或預防個體中B型肝炎病毒(HBV)感染之藥物的用途，其中投與治療有效量或預防有效量的該藥物至該個體；且其中：a)該RNAi劑抑制至少三種HBV轉錄物表現，且該RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，且(i)該正義股包含5'-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3'(SEQ ID NO：27)的核苷酸序列且該反義股包含5'-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3'(SEQ ID NO：25)的核苷酸序列，或者(ii)該正義股包含5'-CACCAUGCAACUUUUUCACCU-3'(SEQ ID NO：28)的核苷酸序列並且該反義股包含5'-AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU-3'(SEQ ID NO：26)的核苷酸序列；b)該蛋白質系HBV疫苗包含第一HBV核心抗原(HBcAg)多肽或其免疫原性片段及第一HBV表面抗原(HBsAg)多肽或其免疫原性片段；c)該核酸系HBV疫苗包含編碼第二HBcAg多肽或其免疫原性片段與/或第二HBsAg多肽或其免疫原性片段之表現載體構築體；d)該第二HBcAg多肽或其免疫原性片段與/或該第二HBsAg多肽或其免疫原性片段，與該第一HBcAg多肽或其免疫原性片段與/或該第一HBsAg多肽或其免疫 原性片段中之至少一者共享至少一個抗原表位；以及e)該RNAi劑係於該蛋白質系HBV疫苗的投與之前投與該個體，且該蛋白質系HBV疫苗係於該核酸系HBV疫苗的投與之前投與該個體。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中(a)該RNAi劑投與至少兩劑至該個體，或(b)該RNAi劑投與個體之劑量不超過每週一次，或者不超過每四週一次。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該RNAi劑投與該個體之劑量為0.01mg/kg至10mg/kg；0.5mg/kg至50mg/kg；10mg/kg至30mg/kg；0.5mg/kg；1mg/kg；1.5mg/kg；3mg/kg；5mg/kg；10mg/kg；或30mg/kg。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該第一HBcAg多肽或其免疫原性片段包含至少一個HBcAg決定基，及該第一HBsAg多肽或其免疫原性片段包含至少一個HBsAg決定基，且該第二HBcAg多肽或其免疫原性片段包含至少一個HBcAg決定基，及該第二HBsAg多肽或其免疫原性片段包含至少一個HBsAg決定基。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該第一與/或第二HBsAg決定基包含與SEQ ID NO：22之胺基酸124至147至少90%同一性之胺基酸序列，或者與SEQ ID NO：23之胺基酸99至168至少90%同一性之胺基酸序列。
  6. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該第一與/或第二HBcAg決定基包含含有SEQ ID NO：24之胺基酸 殘基80之胺基酸序列；與SEQ ID NO：24之至少胺基酸70至90至少90%同一性之胺基酸序列；包含SEQ ID NO：24之胺基酸殘基138的胺基酸序列；與SEQ ID NO：24之至少胺基酸128至143至少90%同一性之胺基酸序列；與SEQ ID NO：24之至少40、50、60、70、80、90、或100個連續胺基酸至少90%同一性之胺基酸序列；或者與SEQ ID NO：24之胺基酸18至143至少90%同一性之序列。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該蛋白質系HBV疫苗以約0.1μg至約1.0mg之該第一HBcAg多肽或其免疫原性片段的劑量，及約0.1μg至約1.0mg之該第一HBsAg多肽或其免疫原性片段的劑量投與該個體。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該蛋白質系HBV疫苗進一步包含佐劑。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中該佐劑為單磷醯基脂質A(MPL)、聚(I：C)、聚ICLC佐劑、CpG DNA、STING促效劑、c-二-AMP、c-二-GMP、c-二-CMP；短的鈍端5'-三磷酸dsRNA(3pRNA)Rig-I配體、聚[二(鈉羧酸根乙基苯氧基)磷腈](PCEP))、礬、病毒小體、細胞素、IL-12、AS02、AS03、AS04、MF59、ISCOMATRIX®、IC31®、或Rig-I配體。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中投與該個體的該蛋白質系HBV疫苗之劑量係為：至少兩次；不超 過每兩週一次；在不早於投與該RNAi劑之最後一劑當天的日子才投與該個體；與投與該RNAi劑之最後一劑同一天投與該個體；在不晚於投與該RNAi劑之最後一劑之後一個月內投與該個體；或者在不晚於投與該RNAi劑之最後一劑之後三個月內投與該個體。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該核酸系HBV疫苗包含至少一種編碼該第二HBcAg多肽或其免疫原性片段、與該第二HBsAg多肽或其免疫原性片段之表現載體構築體。
  12. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中該至少一種表現構築體包含(a)促進該第二HBcAg多肽或其免疫原性片段表現之啟動子、與該第二HBsAg多肽或其免疫原性片段，或者(b)第一與第二啟動子，該第一啟動子促進該第二HBcAg多肽或其免疫原性片段表現，及該第二啟動子促進該第二HBsAg多肽或其免疫原性片段表現。
  13. 如申請專利範圍第12項所述之用途，其中至少一種啟動子係選自由呼吸道融合病毒(RSV)啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、PH5啟動子與H1啟動子所組成群組。
  14. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該表現構築體包含病毒載體。
  15. 如申請專利範圍第14項所述之用途，其中該病毒載體係為腺病毒載體；反轉錄病毒載體、慢病毒載體、莫洛尼氏(moloney)鼠類白血病病毒載體、腺相關病毒載體； 單純皰疹病毒載體；SV 40載體；多瘤病毒載體；乳頭狀瘤病毒載體；微小核糖核酸病毒載體；痘病毒載體、正痘病毒載體、牛痘病毒載體、經修飾之安卡拉(Ankara)病毒(MVA)載體、鳥痘載體、金絲雀痘載體、雞痘載體或EB(Epstein Barr)病毒載體所組成群組。
  16. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該核酸系HBV疫苗係以組織培養感染劑量(TCID50)為106至1010TCID50；或106至109TCID50；或106至108TCID50投與該個體。
  17. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中(a)該核酸系HBV疫苗投與該個體之劑量係在不早於投與最後一劑之該蛋白質系HBV疫苗之後2週才投與該個體；(b)當投與至少一劑之該蛋白質系HBV疫苗後之該個體之該血清中HBsAg含量進一步降低至至少0.5 log 10IU/ml時，對該個體投與第一劑核酸系HBV疫苗；或者(c)對該個體投與單一劑量核酸系HBV疫苗。
  18. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中亦投與核苷(酸)類似物至該個體。
  19. 如申請專利範圍第18項所述之用途，其中該核苷(酸)類似物係為替諾福韋二吡呋酯(Tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide)(TAF)、拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、替比夫定(Telbivudine)、AGX-1009、恩曲他濱(emtricitabine)、克 拉夫定(clevudine)、利托那韋(ritonavir)、迪夫昔(dipivoxil)、洛布卡韋(lobucavir)、泛維爾(famvir)、FTC、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇(theradigm)-HBV、胸腺素-α、及更昔洛韋(ganciclovir))、貝斯福韋(besifovir)(ANA-380/LB-80380)或替諾福韋(tenofovir-exaliades)(TLX/CMX157)。
  20. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中亦投與免疫刺激劑至該個體。
  21. 如申請專利範圍第20項所述之用途，其中該免疫刺激劑係為聚乙二醇基化干擾素α2a(PEG-IFN-α-2a)、干擾素α-2b、PEG-IFN-α-2b、干擾素λa重組人類間白素-7、與類Toll受體3、7、8或9(TLR3、TLR7、TLR8、TLR9)促效劑、病毒進入抑制劑、Myrcludex、抑制HBsAg分泌或釋出之寡核苷酸、REP 9AC、衣殼抑制劑、Bay41-4109、NVR-1221、cccDNA抑制劑(IHVR-25)、病毒衣殼、MVA衣殼、免疫檢查點調節劑、CTLA-4抑制劑、易普利單抗、PD-1抑制劑、諾福路單抗、培伯利單抗、BGB-A317抗體、PD-L1抑制劑、艾索利單抗、艾福路單抗、杜拉福單抗或黏合素生物醫療劑。
  22. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體為人類。
  23. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中(a)該RNAi劑包括至少一種經修飾之核苷酸；(b)該正義股之實質上所有核苷酸與該反義股之實 質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係與附接在3’-端之配位體接合；(c)該RNAi劑包含至少1個或至少2個核苷酸之3’突出；(d)該RNAi劑之該雙股區為15至30對、17至23對、17至25對、23至27對、19至21對或21至23對核苷酸長度；(e)該RNAi劑之每一股具有15至30個或19至30個核苷酸。
  24. 如申請專利範圍第23項所述之用途，其中(i)該配位體係透過單價鏈結體、二價分支鏈結體、或三價分支鏈結體附接之一個或多個GalNAc衍生物，(ii)至少一種該經修飾之核苷酸係為去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸或包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸，(iii)該配體 為
    Figure 107113207-A0305-02-0576-2
    及/或(iv)該RNAi劑係與如下所示之配體接合：
    Figure 107113207-A0305-02-0576-3
     其中X為O或S。
  25. 一種用於治療具有HBV感染之個體之套組，該套組包含：a)抑制至少三種HBV轉錄物之表現之RNAi劑，其中該RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，以及(i)該正義股包含5'-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3'(SEQ ID NO：27)的核苷酸序列並且該反義股包含5'-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3'(SEQ ID NO：25)的核苷酸序列，或者(ii)該正義股包含5'-CACCAUGCAACUUUUUCACCU-3'(SEQ ID NO：28) 的核苷酸序列並且該反義股包含5'-AGGUGAAAAAGUUGCAUGGUGUU-3'(SEQ ID NO：26)的核苷酸序列；b)蛋白質系HBV疫苗，其包含第一HBV核心抗原(HBcAg)多肽或其免疫原性片段及第一HBV表面抗原(HBsAg)多肽或其免疫原性片段；及c)核酸系HBV疫苗，其包含編碼第二HBcAg多肽或其免疫原性片段及/或該第二HBsAg多肽或其免疫原性片段之表現載體構築體，其中該第二HBcAg多肽或其免疫原性片段及/或該第二HBsAg多肽或其免疫原性片段係與該第一HBcAg多肽或其免疫原性片段及/或該第一HBsAg多肽或其免疫原性片段中之至少一者共享至少一個抗原表位；及d)指示如申請專利範圍第1至24項中任一項所述之用途之使用說明書。
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