TWI794706B - 用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液及其製造方法 - Google Patents

Abstract

本發明之課題在於提供一種可靠性優異、用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液及其製造方法。

本發明係提供一種試驗液，其總蛋白質濃度為0.5g/dL以上2.4g/dL以下，白蛋白與球蛋白之比(A/G比)為0.8以上1.5以下，且血球數為1×10²個/μL以下。

Description

用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液及其製造方法

本發明屬於醫療機器領域，係關於一種用於醫療機器之性能評價之試驗液及其製造方法，特別係關於一種用於評價處理人體腔液用之裝置或零件之性能的試驗液及其製造方法。

作為難治性腹水症之治療法，存在一種腹水過濾濃縮再靜注法(Cell-free and Concentrated Ascites Reinfusion Therapy)，其係從患者體內取出腹水，並從該腹水中除去細菌及癌細胞等病因物質，在殘留有白蛋白等有用成分之狀態下進行除水，並將該除水後之濃縮液送回體內。

貯存有腹水之患者，大致可分為因肝硬化等疾病而貯存之肝性腹水患者，以及因胃癌、卵巢癌、大腸癌等癌而貯存之癌性腹水患者。以往，上述治療法大多主要是對肝性腹水患者施行，然而近年來，已觀察到對癌性腹水患者實施上述治療法之治療效果，並且對癌性腹水患者施行的機會正在增加。

上述治療法中，一般使用腹水處理裝置。此腹水處理裝置，係使用將腹水袋、過濾器、濃縮器、及濃縮腹水袋以此順序串聯連接，並藉由落差或泵使腹水流動而將腹水過濾、濃縮者。

例如，對肝硬化等易積存腹水及胸水(以下總稱為腹水)之患者進行腹水過濾濃縮再靜注法，將針刺入貯存部而排出體外之腹水，藉 由使用中空纖維膜等之兩種過濾器進行過濾濃縮處理，從而獲得濃厚蛋白質溶液，並將其滴注予患者，以利用腹水中的蛋白質使患者的血中蛋白質濃度上升。兩種過濾器中的第一種為用於去除腹水中所含之癌細胞、血球成分等細胞成分之過濾過濾器，其使用具有細胞成分無法通過，而水分、蛋白質等溶質成分能夠通過之孔徑的膜。另一方面，另一種過濾器為用於從蛋白質濃度稀薄之腹水中除水，並濃縮蛋白質之濃縮過濾器，其使用蛋白質成分幾乎無法通過，而水分、電解質等能夠通過的膜。通常，從便利性之觀點而言，會採用以濃縮器將以過濾器濾出細胞成分之腹水濃縮之方法，並使用連續進行此等之裝置。

此外，作為此種腹水處理裝置，專利文獻1已記載一種腹水處理裝置，其具有將過濾處理與再循環處理之切換自動化之系統。

【先前技術文獻】

【專利文獻】

【專利文獻1】日本特開2013-188427號公報

關於體腔液之處理，已發表有各式各樣的實用機器及裝置，此種機器及裝置在實際使用中要求非常高的安全性及可靠性。如前所述，濃縮器是用以濃縮體腔液中對人體有用之營養成分，通常，濃縮後之體腔液被認為已除去病毒成分及多餘的水分，因此經常被期待能盡快直接送回人體中。

實際使用濃縮器進行腹水濃縮時，通常會使用基於機器或裝置之各種控制機構來控制濃縮器。然而，本發明人們透過實際觀察而得知以下情事。

首先，機器及裝置本身的結構、或主要零件的數據雖可作為有關濃縮能力及效果的參考，但在實際操作中，將濃縮器調整至適當的參數在某些情況下會有困難，此外，在操作之穩定性上亦可能產生問題。

濃縮器本身的材料(通常為具有指定孔徑之多孔膜材料)亦會對體腔液之濃縮效果產生重要的影響。另一方面，本發明人們得知，針對此材料之選擇，至今為止係僅以膜材料之廠商所提供之參數進行判斷，但膜材料之廠商所提供之參數，通常係藉由醫療領域以外之試驗手段(即物理、化學試驗)而獲得。通常，選擇膜材料後，即默認此等膜材料本身在有關人體腔液之處理上是合格的。因此，提升濃縮器使用之安全性及可靠性，主要是如上所述，藉由調整濃縮器之運作狀態/參數，或藉由調整濃縮器之結構而進行。

進一步地，於實際使用中，濃縮器可能會有各式各樣複雜的狀況。例如，即使是經認可為合格的濃縮器，於濃縮時亦有遲遲無法達成可靠的濃縮效果，而導致濃縮時間延長或人體營養物質的不必要流失之情形。此外，於腹水之處理中，藉由使用濃縮器進行處理之體腔液，通常為經上流之過濾器進行過濾之體腔液，故而有例如因肝硬化所引起、或因癌所引起之形成原因不同而體腔液之成分相異之情形，以及因上流之過濾器及其過濾條件不同而成分相異之情形。因此，即使是於特定患者之處理時、或與特定之上流之過濾器組合使用時可達成所期望之處理效果的濃縮器，若更換患者或上流之過濾器，亦有可能於使用時發生問題，而被質疑濃縮器之適用性。因此，亟需一種用於評價濃縮器之適用性之試驗方法。

包含濃縮器之體腔液處理裝置，為封閉的一對一系統，因此若基於濃縮器之體腔液之處理出現異常(例如，因濃縮器之堵塞等而造成濃縮能力異常下降)，通常無法藉由簡單操作進行裝置之修理或更換。由於一般沒有有效的解決方法，因此通常需將整個裝置更換成新的，其所造成之經濟成本及實際的損失並非可輕易被接受。此外，由於沒有有效的解決方法，因此此種問題一般被視為不可避免的系統性風險。

針對上述問題，本發明人們推測：一直以來根據獨立之材料之參數、控制機構、裝置之構成等經驗判斷濃縮器之性能，為上述系統性風險之起因。進一步進行研究後得知，此種系統性風險並非不可避免。因此，本發明所欲解決之課題在於提供一種用於評價濃縮器之試驗手段(試驗液)，以正確地反映濃縮器之濃縮性能。

本發明人們進行深入研究後發現，藉由實施以下之發明可解決上述課題。

本發明係提供：

一種用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液，其特徵係：總蛋白質濃度為0.5g/dL以上2.4g/dL以下，白蛋白與球蛋白之比(A/G比)為0.8以上1.5以下，且血球數為1×10²個/μL以下。

於數個實施型態中，該試驗液係進一步含有抗凝固劑。

於數個實施型態中，該抗凝固劑係含有選自肝素及其鹽、乙二胺四乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、及水蛭素中至少任一物質。

於數個實施型態中，該抗凝固劑係含有2Unit/mL以上之肝素及/或其鹽。

於數個實施型態中，該試驗液之總蛋白質濃度為0.5g/dL以上0.9g/dL以下。

於數個實施型態中，該試驗液之總蛋白質濃度為2.0g/dL以上2.4g/dL以下。

於數個實施型態中，該試驗液係用於體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之評價試驗。

此外，本發明係提供：

一種用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液的製造方法，其特徵係包含：

過濾步驟，係藉由具有0.2μm以下之平均孔徑之過濾膜過濾原料液；以及

濃度調整步驟，係調整已過濾之濾液之總蛋白質及/或白蛋白之濃度。

於數個實施型態中，該過濾膜，係具有相對於所有孔之個數，0.08μm以上且0.12μm以下之孔之個數的比例為60%以上之孔徑分布。

於數個實施型態中，該原料液係含有人以外之動物血漿。

於數個實施型態中，該人以外之動物血漿係牛血漿。

於數個實施型態中，該濃度調整步驟，係將總蛋白質濃度調整為0.5g/dL以上2.4g/dL以下。

於數個實施型態中，該濃度調整步驟，係將總蛋白質濃度調整為0.5g/dL以上0.9g/dL以下。

於數個實施型態中，該濃度調整步驟，係將總蛋白質濃度調整為2.0g/dL以上2.4g/dL以下。

於數個實施型態中，該濃度調整步驟，係將白蛋白與球蛋白之比(A/G比)調整為0.8以上1.5以下。

於數個實施型態中，進一步包含：凍結、溶解步驟；以及纖維蛋白除去步驟。

於數個實施型態中，該纖維蛋白除去步驟，係包含於凍結、溶解步驟後藉由紗布過濾除去該纖維蛋白。

於數個實施型態中，該凍結、溶解步驟及纖維蛋白除去步驟，係於該過濾步驟前，或於該過濾步驟後且該濃度調整步驟前實施。

此外，本發明係提供：

一種用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之套組，其特徵係包含：

收容部；以及

試驗液，係收容於該收容部，並含有上述之試驗液或由上述之製造方法所獲得之試驗液。

於數個實施型態中，該套組係用於體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之評價試驗。

本發明係提供一種用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液及其製造方法、包含該試驗液或以該製造方法製造之試驗液之套組、前述試驗液及套組之使用；藉由實施上述發明，可達成以下之效果：

(1)藉由使用本發明之試驗液，可整體性、系統性地評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能。此種試驗液及其製造方法，於本行業所知之文獻中並未有所報告，可提供本行業所使用之濃縮器之可靠的評價試劑。

(2)本發明之試驗液等，可準確地反映濃縮人體腔液時濃縮器之處理效果及處理能力，並可評價此類型、批次之濃縮器是否可確實且安全地對患者提供醫療服務，因此可極力防止濃縮器使用中之偏差及事故，並減輕 患者之醫療負擔及醫療風險。

(3)本發明之試驗液等可廣泛地適用，亦即，其不僅可適用於對起因於肝硬化之腹水之濃縮器的評價，亦可適用於對起因於癌之腹水之濃縮器的評價。

(4)藉由使用本發明之試驗液等，可以高操作性對濃縮器進行方便的評價方法，因此迅速的試驗變為可能。

1:濃縮器本體

2:濃縮液輸出埠(第一輸出埠)

3:濃縮器之輸入埠

4:濾液輸出埠(第二輸出埠)

5:試驗液袋

6:濃縮液袋

7:濾液袋

a,b,c:線路

〔圖1〕為表示本發明之試驗液之評價對象物一體腔液濃縮器之其中一種結構者。

〔圖2〕為表示以本發明之一實施型態中之試驗液，評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗中所使用之裝置者。

〔圖3〕為本發明之實施例及參考例中各濃縮器運轉時之膜間壓力差(TMP)數據圖。

以下詳細地說明本發明。以下所記載之技術事項之說明，雖是根據本發明之代表性實施型態、具體例，但本發明並不限於此等實施型態、具體例。此外，說明以下事項：

本說明書中，以「數值A~數值B」表示之數值範圍，係包含端點之數值A、B。

本說明書中，「%」只要無特別事先聲明，則意指重量或質量百分率。

本說明書中，「亦可」係意指可進行該處理，亦可不進行該處理。

本說明書中，「根據期望」或「根據期望之」係意指使用或不使用該物質、成分、步驟、條件等。

本說明書中，單位之名稱皆係國際標準單位之名稱。

本說明書中，只要無特別事先聲明，「複數」係意指二以上。

本說明書中，「數個(較佳)實施型態」、「其他(較佳)實施型態」、「實施型態」等，係意指與此實施型態相關之特定要素(例如：要件、結構、性質及/或特性)包含於此處所記載之至少一個實施型態中，同時亦存在或不存在於其他實施型態中。此外，上述要素於各實施型態中能夠以任意的適當態樣組合。

本發明係提供一種用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液，其總蛋白質濃度為0.5g/dL以上2.4g/dL以下，白蛋白與球蛋白之比(A/G比)為0.8以上1.5以下，且血球數為1×10²個/μL以下。

<體腔液濃縮器>

適用於本發明之體腔液濃縮器(有時亦簡稱為「濃縮器」。)可為本行業之體腔液濃縮用之任意的濃縮器。

圖1表示適用於本發明之濃縮器的典型結構。圖中，1為濃縮器本體，3為濃縮器之輸入埠。實際對患者進行治療時，經上流之過濾器(未圖示)處理之體腔液從濃縮器之輸入埠3進入濃縮器本體1。與此相應地，使用本發明之試驗液實施評價時，係從輸入埠3進入濃縮器1。圖1中，2為濃縮器之濃縮液輸出埠(第一輸出埠)，實際使用時，經前述濃縮器處理之濃縮液從濃縮液輸出埠2被取出。圖1中，4為濾液輸出埠(第二輸出埠)，用於取出濃縮器之濃縮中所產生之濾液。

進一步地，於其他實施型態中，適用於本發明之濃縮器，亦具備用於排出殘留於濃縮器本體1之體腔液之殘液排出埠(未圖示)。

濃縮器本體1內設有濃縮單元。本發明之數個實施型態中，前述濃縮單元係選自多孔膜者。多孔膜並無特別限定，可使用本行業一般的超過濾膜。通常，濃縮器多孔膜之孔徑比上流之過濾器所用之膜的孔徑小。多孔膜，主要係濃縮低濃度之蛋白質溶液中之蛋白質。此外，蛋白質幾乎被去除之主要為水分之濾液，會穿出至膜的另一側。

於本發明之數個較佳實施型態中，適用於本發明之多孔膜，係具有相對於總孔數，0.08μm以上0.12μm以下之孔數之比率為60%以上之孔徑分布，較佳為70%以上之孔徑分布。於其他較佳實施型態中，適用於本發明之濃縮器之超過濾性能為85mL/min/200mmHg以上150mL/min/200mmHg以下。若超過濾性能低於85mL/min/200mmHg，則濃縮時濾液之排出量變少，而無法獲得充分濃縮之蛋白質溶液。若超過濾性能為85mL/min/200mmHg以上，則堵塞之可能性變低因而理想，更佳為95mL/min/200mmHg以上。另一方面，若超過濾性能高於150mL/min/200mmHg，則蛋白質會漏至濾液中，而無法獲得充分的蛋白質濃度。前述之較佳多孔膜因其優異之性能而廣為使用，於使用本發明之試驗液評價具備此種多孔膜之濃縮裝置之性能的情形，可進一步發揮本發明所帶來之效果。

多孔膜之種類並無特別限定，但在數個較佳實施型態中，從濃縮效率之觀點而言，係使用中空纖維膜。此處所言之中空纖維膜，其形狀及尺寸並無特別限定，只要是具有上述超過濾性能者即可。材質方面，基於製膜時容易控制孔徑且化學穩定性優異之理由，以聚碸系為佳。或者，亦可為亦包含聚醚碸之碸系、纖維素系。聚碸系高分子，因其為芳香族化合物而抗輻射性特別優異，且亦非常耐熱及化學處理，安全性亦優異。因此，可採用各式各樣的製膜條件並可進行輻射滅菌，作為用於腹水濃縮器 之膜材質特佳。又，「~系」不僅意指均聚物，亦包含與其他單體之共聚物及經化學修飾之類似物。

此處所言之聚碸系高分子(以下有時稱為PSf)，係具有碸鍵之高分子化合物之總稱，並無特別規定，可列舉例如：重複單元以下述之式(1)、式(2)、式(3)、式(4)及式(5)表示之聚碸系聚合物。亦可為此等之芳香環之一部分導入有取代基之修飾聚合物。從工業上容易取得之觀點而言，較佳為重複單元以式(1)、式(2)及式(3)表示之芳香族聚碸系聚合物，其中，特佳為具有以式(1)表示之化學結構之聚碸。此雙酚型聚碸樹脂，例如由Solvay‧Advanced‧Polymers以「Udel(註冊商標)」之商品名進行市售，因聚合度等而存在數個種類，但並無特別限定。

本發明之聚碸系中空纖維膜，較佳係藉由親水性高分子而具有親水性者。其原因係若僅使用聚碸系高分子，則中空纖維膜表面會呈疏 水性，蛋白質容易吸附於此種表面，從而致使蛋白質之回收性能下降。親水性高分子，可列舉：聚乙烯吡咯烷酮(以下有時稱為PVP)、及聚乙二醇、聚乙烯醇、聚丙二醇等，其中，從親水化之效果及安全性方面而言，較佳為PVP。PVP亦因分子量等而存在數個種類，例如其市售品可列舉：PVP之K-15、30、90(均為ISP公司製)等。本發明所使用之PVP之分子量(黏度平均分子量)為1萬~200萬，較佳為5萬~150萬。親水性高分子之膜中含有率為聚合物總量的3~20%，較佳為3~10%。含有率為3%以下之情形，作為親水化劑之效果減弱，此外，含有率超過20%之情形，由於製膜原液之黏度會過度上升，因此在生產上並不佳。

經親水化之聚碸中空纖維膜之製造方法，可利用習知之乾濕式製膜技術。首先，將聚碸系高分子與聚乙烯吡咯烷酮等親水性高分子溶解於雙方共通之溶劑，而調製均勻的紡絲原液。此種共通溶劑，於親水性高分子為聚乙烯吡咯烷酮之情形，可列舉例如：二甲基乙醯胺(以下稱為DMAC)、二甲基亞碸、N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基甲醯胺、環丁碸、二噁烷等溶劑，或由兩種以上上述溶劑之混合液所成之溶劑。又，亦可於紡絲原液中加入水等添加物，以控制孔徑。

製作中空纖維膜時，係使用孔內管(tube-in-orifice)型紡嘴，使來自該紡嘴之孔口之紡絲原液、及來自管中之中空內液同時噴出至空中。中空內液用於使紡絲原液凝固，可使用水、或以水為主體之凝固液。中空內液，可依據目標之中空纖維膜之超過濾性能等性能決定其組成等，雖無法一概而定，但一般而言理想使用紡絲原液所使用之溶劑與水之混合溶液。例如，使用0~65重量%之DMAC水溶液等作為中空內液。與中空內液一同從紡嘴噴出之紡絲原液，行越空行部，並被導入、浸漬至設置於紡嘴下部之以水為主體之凝固浴中，從而完成凝固。然後，經過凝固之中空纖 維之洗淨步驟等，以捲取機捲取濕潤狀態之中空纖維膜，從而獲得成束之中空纖維膜，然後進行乾燥。或者，亦可經過洗淨步驟，接著於乾燥機內進行乾燥，從而獲得中空纖維束，製造方法並無特定。

由於濃縮器係藉由壓力而運作，因此為了方便說明，將濃縮器內多孔膜之壓力大的一側稱為多孔膜之一次側，將多孔膜之壓力小的一側稱為多孔膜之二次側。

在此，前述一次側例如進行蛋白質成分之濃縮，前述二次側進行濾液(水分)之排出。又，圖1中，濃縮器之濃縮液輸出埠2係連接於多孔膜之一次側之空間，濾液輸出埠4係連接於多孔膜之二次側之空間。

<試驗液>

本發明係藉由提供試驗液對濃縮器之濃縮及分離能力進行試驗。理論上，為了完全反映受試濃縮器實際的濃縮及分離能力，使用患者之體腔液進行評價及試驗最為可靠。然而，此種理論並不實際。

首先，要事先取得患者之體腔液幾乎是不可能的，而要取得依標準方法以過濾器進行過濾後之體腔液更是不可能。而且，若使用特定患者之體腔液評價濃縮器，其評價結果不具普遍性，而僅與特定時期中的該個別患者相關。進一步地，由於濃縮器本身通常價格昂貴，且試驗後之濃縮器基本上無法再利用，因此若如此實施，則一名患者至少需支付兩倍的醫療費用。又，若將患者之體腔液用於試驗，則無法將其回收，因此從醫療倫理之觀點而言亦是不可能的。因此，使用患者之體腔液評價濃縮器之濃縮性能並不具實用價值。

因此，為了評價濃縮器，提供可靠的試驗液是重要的。本發明人們透過實際觀察而得知：濃縮器最重要的功能為濃縮及回收含有蛋白質之體液，因此可藉由提供含有指定濃度之蛋白質之試驗液，評價濃縮器 之濃縮性能。進一步地，人體腔液會因形成原因而體腔液之組成相異，因此實際處理時供給至濃縮器之來自上流之過濾器之體腔液的組成亦並非固定不變。因此，選擇適當濃度之試驗液亦是重要的。

本發明之用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液中，總蛋白質濃度為0.5g/dL以上2.4g/dL以下，白蛋白與球蛋白之比(A/G比)為0.8以上1.5以下，且血球數為1×10²個/μL以下。

本發明中，若前述試驗液中之血球數超過1×10²個/μL，則試驗液中易發生凝固級聯(如血栓之塊狀物)，從而無法重現性良好地對濃縮性能進行試驗。從此觀點而言，本發明中，係使前述試驗液中之血球數為1×10²個/μL以下，較佳為50個/μL以下，更佳為10個/μL以下，進一步更佳為本質上不含有血液細胞。從考慮處理成本之觀點而言，血球數，例如亦可為5個/μL以上。

本發明中，從提高試驗液之通用性及可靠性之觀點而言，係採用蛋白質之含量為0.5g/dL以上2.4g/dL以下之溶液，特別係採用水溶液作為試驗液。若蛋白質之濃度過低，則無法評價濃縮之效果(若蛋白質過稀，則濃縮器實際上是對水進行濃縮，評價試驗之結果並無法反映濃縮器對人體腔液之實際處理效果)。另一方面，藉由使蛋白質之含量為2.4g/dL以下，TMP(施加於濃縮器內之多孔膜之膜間壓力差)不會在評價試驗期間(30分鐘~1小時，與患者通常的治療時間相同)內上升，可確保評價試驗之良好的重現性。

本發明人們透過實際觀察而得知：只要將試驗液中蛋白質之含量設定為上述範圍，評價結果將更加接近濃縮器之實際使用效果。此外，只要在上述範圍內調整蛋白質之含量，便可提高本發明之試驗液之通用性，亦即，在可正確地評價以起因於肝硬化之人體腔液為對象之濃縮器的 實際使用性能的同時，亦可正確地評價以起因於各種癌之人體腔液為對象之濃縮器的實際使用性能。

進一步地，於本發明之數個較佳實施型態中，使試驗液中蛋白質之含量在0.5g/dL以上0.9g/dL以下之範圍。此種試驗液，特別係在評價以起因於肝硬化之人體腔液為對象之濃縮器的實際使用性能之情形，具有更高的可靠性。

於本發明之其他較佳實施型態中，使試驗液中蛋白質之含量在2.0g/dL以上2.4g/dL以下之範圍。此種試驗液，特別係在評價以起因於各種癌之人體腔液為對象之濃縮器的實際使用性能之情形，具有更高的可靠性。

進一步地，關於蛋白質之種類，於本發明中可使用含有白蛋白、及白蛋白以外之蛋白質者。前述白蛋白以外之蛋白質較佳係球蛋白。此外，從減少試驗液之成分所造成之濃縮器堵塞之觀點而言，較佳係使用少量的纖維蛋白作為前述蛋白質，或不使用纖維蛋白。

於本發明之數個實施型態中，前述試驗液之白蛋白與球蛋白之比(A/G比)係0.8以上1.5以下。本發明中，白蛋白與球蛋白之比為上述範圍之試驗液，應會帶來可更良好地反映濃縮器實際運作時之性能之評價結果。

進一步地，於本發明之數個較佳實施型態中，前述試驗液之白蛋白與球蛋白之比(A/G比)係0.8以上1.2以下。此種試驗液，特別係在評價以起因於肝硬化之人體腔液為對象之濃縮器的實際使用性能之情形，具有更高的可靠性。

進一步地，於本發明之數個較佳實施型態中，前述試驗液之白蛋白與球蛋白之比(A/G比)係0.9以上1.5以下。此種試驗液，特別係在 評價以起因於各種癌之人體腔液為對象之濃縮器的實際使用性能之情形，具有更高的可靠性。

此外，實際使用試驗液時，對試驗液不僅期待其評價試驗中之高可靠性，從試驗液之實際使用及貯藏容易性之觀點而言，亦期待其成分之均勻性及穩定性。因此，於本發明之數個較佳實施型態中，在不會對本發明之試驗液使用時之可靠性產生不良影響之前提下，從提高試驗液之穩定性之觀點而言，使試驗液中含有指定含量之抗凝固劑。

可用於本發明之試驗液之抗凝固劑，並無特別限定，可使用選自肝素及其鹽、乙二胺四乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、水蛭素所成群中至少任一者或此等之混合物。

於數個較佳實施型態中，前述抗凝固劑至少含有肝素或其鹽。從有效地提高試驗液之穩定性之觀點而言，前述抗凝固劑係含有2Unit/mL以上，較佳係含有3Unit/mL以上，更佳係含有5Unit/mL以上之肝素及/或其鹽。

本發明之評價用試驗液，除了上述蛋白質、根據期望之抗凝固劑以外，只要不會對試驗液之評價效果產生影響，亦可依實際需要含有其他輔助成分。輔助成分，可列舉無機鹽、pH緩衝成分。

<試驗液之製造方法>

本發明之用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液的製造方法，係包含：過濾步驟，藉由具有0.2μm以下之平均孔徑之過濾膜過濾原料液；以及濃度調整步驟，調整已過濾之濾液之總蛋白質及/或白蛋白之濃度。

於本發明之數個較佳實施型態中，可藉由人以外之動物之血漿調製上述試驗液。由於動物血漿含有蛋白質，在生物學上有一定程度近似於人體腔液，因此於採用動物血漿作為前述原料液之情形，可達到簡化 試驗液之調製，並提高試驗液之使用效果。

上述動物血漿並無特別限定，可使用(略大型之)哺乳類動物之血液，例如可使用牛、羊、豬、馬、鹿之血液。從採取容易度之觀點而言，較佳係使用牛或羊之血漿。進一步地，血漿可為新鮮之血漿，亦可為經冷藏保存之血漿，但從操作容易度之觀點而言，較佳係使用新鮮之動物血漿。此外，根據期望，亦可於血漿中加入上述抗凝固劑，特別是肝素。

前述過濾步驟中，前述過濾膜並無特別限定，於本發明之數個實施型態中，可使用本行業一般的多孔膜，典型而言可使用中空纖維膜。

於數個實施型態中，前述過濾膜，可以於筒狀容器內部具備中空纖維膜束之過濾器之形式使用。於該筒狀容器中，藉由使原料液從前述中空纖維膜束之中空纖維膜外側通過至中空纖維膜內側，從而除去體腔液中之特定物質。在此，前述中空纖維膜，係分散配置為前述筒狀容器之內部橫切面中前述中空纖維膜束之填充率為20%以上41%以下，且前述中空纖維膜束之平均中空纖維膜間距離為150μm以上。

於數個較佳實施型態中，前述中空纖維膜束之最大中空纖維膜間距離為300μm以上，前述中空纖維膜束之有效膜面積為0.7m²以上3.0m²以下，前述中空纖維膜之內徑為50μm以上500μm以下。

於數個較佳實施型態中，從過濾性能之平衡之觀點而言，前述過濾膜，係具有相對於所有孔之個數，0.08μm以上且0.12μm以下之孔之個數的比例為60%以上，較佳為70%以上，更佳為80%以上之孔徑分布。

進一步地，本發明之其他實施型態中，於前述過濾步驟前，亦可使用例如紗布、不織布、或濾紙等粗孔徑之過濾膜進行過濾(以下亦稱為粗過濾)。此等粗孔徑之過濾膜，例如可具有10μm、100μm、或1mm之平均孔徑，可單層使用，亦可積層使用。

從方便過濾及成本之觀點而言，本發明較佳係使用上述紗布等粗孔徑之過濾膜進行前述粗過濾步驟。藉由前述粗過濾步驟，除去以組織片段、纖維蛋白及一部分之血球為主之無用成分，從而提升前述過濾步驟之效率。亦可進行多次過濾，以確保過濾效果。

此外，於數個較佳實施型態中，例如為了防止纖維蛋白等成分所造成之試驗結果之均勻性下降，於前述過濾步驟前進行凍結、溶解原料液之步驟，亦可例如藉由前述粗過濾步驟除去纖維蛋白。又，此凍結、溶解步驟及纖維蛋白除去步驟，亦可於前述過濾步驟後且前述濃度調整步驟前進行。

對過濾步驟所獲得之濾液進一步進行濃度調整步驟，使其成為所欲之組成，較佳係使其成為本發明之上述試驗液之組成。

濃度調整步驟係包含蛋白質濃度之調整，典型而言，係藉由添加蛋白質，從而將蛋白質濃度調整至本發明之試驗液指定之範圍。

進一步地，亦可將藉由上述步驟所獲得之試驗液放入容器中以備將來使用。試驗液之保存條件並無特別限定，典型而言可冷藏保存。

從使用方便性之觀點而言，於本發明之較佳實施型態中，亦可將上述步驟所獲得之試驗液作為套組保存。前述套組，係包含收容部、及收容於前述收容部之試驗液。前述套組，亦可具備可撓性或剛性之外殼，且於數個實施型態中，具有可與外部連通之輸出埠或連接口。此種輸出埠或連接口係被密封直至使用時。於其他實施型態中，亦可使前述套組為真空，亦即其內部為真空直至使用時。

<評價方法>

使用本發明之上述試驗液評價濃縮器。

於數個實施型態中，至少使用濃縮步驟及計算步驟進行濃縮器之評價。

<濃縮步驟>

上述濃縮步驟中，含蛋白質之試驗液被送至濃縮器，並分離成濃縮液及濾液。

圖2所示之裝置，係本發明之一實施型態中所使用之裝置，3為濃縮器之輸入埠，5為收容試驗液之容器(試驗液袋)，6為收容藉由濃縮器之處理所獲得之濃縮液之容器(濃縮液袋)，7為收容從濃縮器排出之濾液之容器(濾液袋)。在此，所謂濃縮步驟，係經由線路從濃縮器之輸入埠3將試驗液供給至濃縮器，並藉由多孔膜將試驗液分離成濃縮液及濾液。

進一步地，於其他實施型態中，用於評價試驗之系統除了圖2所示之裝置或結構以外，根據期望還具備：再循環裝置，係使濃縮液袋6內之濃縮液再循環至試驗液袋；以及控制裝置，係當收容於前述濃縮液袋之濃縮液的量達到第一指定量時使過濾運作停止，並使收容於前述濃縮液袋6之濃縮液藉由前述再循環裝置再循環至前述試驗液袋，然後再度供給至濃縮器使其濃縮。

進一步地，各裝置間之物質搬運亦可藉由動力裝置進行；前述動力裝置之種類並無特別限定，可使用滾子泵。

本發明之評價試驗可在0~50℃之條件下實施，較佳為在15~35℃之條件下實施。若溫度過低，則試驗液之流動性變差，且濃縮器之濃縮處理亦會下降。若溫度過高，則有蛋白質成分變性之虞。

進行本發明之評價試驗時，試驗液從線路a被搬運往濃縮器本體1，並藉由濃縮器內之多孔膜一次側之加壓，進行試驗液之濃縮及濾液(主要為水分)之排出。濃縮液進一步經由線路b被供給至濃縮液袋6，濾液則經由線路c被供給至濾液袋7。

進一步地，可藉由再循環裝置將濃縮液袋6內之濃縮液送回 試驗液袋5，並進行再濃縮及再排出。

測定濃縮處理後之濃縮液袋6內之濃縮液及/或濾液袋7內之濾液之成分，從而評價濃縮器之性能。

<計算步驟>

本發明中，藉由計算步驟，測定前述試驗液之成分、前述濃縮液及/或前述濾液之成分，並算出前述體腔液濃縮器之蛋白質回收性能。

於數個實施型態中，藉由濃縮器之白蛋白回收率評價濃縮器之蛋白質回收性能。

藉由自動測定裝置(日本電子股份有限公司製BioMajesty^TMJCA-BM6050)測定濃縮液中白蛋白的量，並藉由式(1)算出前述白蛋白回收率。

式(1)．．．白蛋白回收率(%)=(濃縮液中之白蛋白量/試驗液中之白蛋白量)×100

於其他實施型態中，前述白蛋白回收率亦可藉由式(2)算出。

式(2)．．．白蛋白回收率(%)={(濃縮液量×濃縮液中之白蛋白濃度)/(試驗液量×試驗液中之白蛋白濃度)}×100

進一步地，於其他實施型態中，特別是於濃縮器之體積較大、或明顯有殘液之情形下，濃縮器之評價方法亦考慮殘留於濃縮器之殘液。

於此情形，本發明之評價試驗，係進一步包含殘液回收步驟，於前述濃縮步驟後回收殘留於前述體腔液濃縮器之殘留試驗液。

因此，於數個實施型態中，前述蛋白質回收性能係白蛋白回收率，並於計算步驟中，測定前述試驗液、前述濃縮液、前述殘留試驗液 中之白蛋白，並算出前述體腔液濃縮器之蛋白質回收性能。

於此情形，前述白蛋白回收率係藉由式(3)算出。

式(3)．．．白蛋白回收率(%)={(濃縮液中之白蛋白量+殘留試驗液中之白蛋白量)/試驗液中之白蛋白量}×100

進一步地，前述白蛋白回收率亦可藉由式(4)算出。

式(4)．．．白蛋白回收率(%)={(濃縮液量×濃縮液中之白蛋白濃度+殘留試驗液量×殘留試驗液中之白蛋白濃度)/(試驗液量×試驗液中之白蛋白濃度)}×100

於其他實施型態中，係於前述濃縮步驟後回收前述濾液。該濾液中可能含有通過多孔膜之蛋白質，因此於此情形，前述蛋白質回收性能亦可藉由白蛋白穿透率表示。亦即，前述計算步驟中，係測定前述試驗液及前述濾液中之白蛋白，並算出前述白蛋白穿透率。

於數個實施型態中，前述白蛋白穿透率，例如藉由式(5)算出。

式(5)．．．白蛋白穿透率(%)=(濾液中之白蛋白量/試驗液中之白蛋白量)×100

於數個實施型態中，前述白蛋白穿透率，例如亦可藉由式(6)算出。

式(6)．．．白蛋白穿透率(%)={(濾液量×濾液中之白蛋白濃度)/(試驗液量×試驗液中之白蛋白濃度)}×100

進一步地，濃縮器之實際使用性能，除了白蛋白之濃縮狀況以外，亦可藉由α1-MG(α1-微球蛋白)之回收率進行評價。

前述計算步驟中，係測定前述試驗液、前述濃縮液中之α1-MG，並算出前述濃縮器之前述α1-MG回收率。

於數個實施型態中，前述α1-MG回收率係藉由式(7)算出。

式(7)．．．α1-MG回收率(%)=(濃縮液中之α1-MG量/試驗液中之α1-MG量)×100

於數個實施型態中，前述α1-MG回收率，例如亦可藉由式(8)算出。

式(8)．．．α1-MG回收率(%)={(濃縮液量×濃縮液中之α1-MG濃度)/(試驗液量×試驗液中之α1-MG濃度)}×100

此外，在亦考慮殘液之情形下，計算步驟中，係測定前述試驗液、前述濃縮液、前述殘留試驗液中之α1-MG，並算出前述濃縮器之前述α1-MG回收率。

於數個實施型態中，前述α1-MG回收率係藉由式(9)算出。

式(9)．．．α1-MG回收率(%)={(濃縮液中之α1-MG量+殘留試驗液中之α1-MG量)/試驗液中之α1-MG量}×100

於數個實施型態中，前述α1-MG回收率係藉由式(10)算出。

式(10)．．．α1-MG回收率(%)={(濃縮液量×濃縮液中之α1-MG濃度+殘留試驗液量×殘留試驗液中之α1-MG濃度)/(試驗液量×試驗液中之α1-MG濃度)}×100

此外，亦可藉由α1-MG之穿透率評價前述蛋白質回收性能。於此情形下，前述計算步驟中，係測定前述試驗液及前述濾液中之α1-MG，並算出前述α1-MG穿透率。

於數個實施型態中，前述α1-MG穿透率係藉由式(11)算出。

式(11)．．．α1-MG穿透率(%)=(濾液中之α1-MG量/試驗液中之α1-MG量)×100

於數個實施型態中，前述α1-MG穿透率亦可藉由式(12)算 出。

式(12)．．．α1-MG穿透率(%)={(濾液量×濾液中之α1-MG濃度)/(試驗液量×試驗液中之α1-MG濃度)}×100

<數據處理>

本發明中，係藉由如上所述之白蛋白之回收率、白蛋白之穿透率、α1-MG之回收率或α1-MG之穿透率評價濃縮器之實際使用性能。

於數個實施型態中，可根據上述式(1)~(12)中任一者之計算所得之數據進行評價。此外，根據期望，亦可藉由習知之數學方法進行數據之加權處理，從而獲得更綜合性的評價指數。關於具體之數學處理方法，本發明中並無特別限定。

【實施例】

以下藉由具體的實施例說明本發明。

實施例

將於牛血漿中加入肝素並進行凍結、溶解者以紗布進行粗過濾後，以具有0.2μm以下之平均孔徑之中空纖維膜進行過濾，然後將調整成總蛋白(以下稱為「TP」。)濃度為2g/dL、白蛋白/球蛋白比(「A/G比」)為1.2之液體作為試驗液。該試驗液中之肝素濃度為3.2Unit/mL，血球數為0個/μL。

將試驗液放入試驗液袋(圖2中之5)並調整溫度至27±1℃，再經由線路，以流量50mL/min之速度將試驗液供給至濃縮器之輸入埠(圖2中之3)，使濃縮倍率為10倍，並使濃縮器之第一輸出埠(圖2中之2)之流量為5mL/min(被收集至袋中)，並且以45mL/min之流量自濃縮器之第二輸出埠(圖2中之4)產生濾液(被收集至袋中)，如此送液60分鐘(試驗液量3L)。

停止濃縮後，使用試驗液及濃縮液以式(1)計算白蛋白之回收率。此時，殘留於濃縮器內之液體為46mL。

白蛋白回收率(%)=(濃縮液中之白蛋白量/試驗液中之白蛋白量)×100

測定之結果，濃縮液中之白蛋白的量為23.7g。此外，白蛋白回收率為69.3%。

進一步地，從濃縮器之輸入埠導入空氣，從而回收殘留於濃縮器之殘留試驗液。使用試驗液及濃縮液、殘留試驗液以式(3)計算白蛋白之回收率。

白蛋白回收率(%)={(濃縮液中之白蛋白量+殘留試驗液中之白蛋白量)/試驗液中之白蛋白量}×100

測定之結果，濃縮液及殘留試驗液中之白蛋白的量為27.5g。此外，白蛋白回收率為80.6%。

使用該試驗液對3個(n=3)同一批次之濃縮器進行試驗，使用試驗液及濃縮液、殘留試驗液以式(3)求得之白蛋白回收率之平均為79.9%，相對標準偏差(RSD)為0.0161(1.61%)。

參考例1

除了將實施例中試驗液之蛋白質濃度調整成4g/dL以外，其他皆與實施例相同而進行濃縮處理。

參考例2

除了將實施例中試驗液之蛋白質濃度調整成7g/dL以外，其他皆與實施例相同而進行濃縮處理。

<評價>

測定實施例及參考例1、2之濃縮時之TMP(膜間壓力差)。實施例之濃縮時TMP之變化以TP2表示，參考例1之濃縮時TMP之變化以TP4表示，參 考例2之濃縮時TMP之變化以TP7表示，結果示於圖3。

圖3顯示：試驗期間(患者通常需要的醫療時間，即30min~60min)實施例之TMP小於150mmHg。另一方面，參考例1則於30min時TMP趨近於400mmHg，參考例2則於10min時TMP趨近於400mmHg。

由以上現象可知，實施例之試驗液可獲得具有高重現性之試驗結果，並可正確地進行性能試驗。此方法可模擬濃縮器對人體腔液進行的濃縮處理於通常使用時之濃縮狀況，並可基本地掌握濃縮器實際運作時之濃縮性能。

參考例1及參考例2中，TMP(膜間壓力差)在短期間內(30分鐘以內)上升。如此一來，便無法按計畫對整個處理時間進行試驗。此外，若TMP過度上升，則可能發生膜破損及容器損壞，進而無法繼續進行試驗。於此種情形下，將無法有效地預見濃縮器通常運作時之性能，不具可靠的重現性。

以上係藉由具體的實施例說明本發明，但所屬技術領域中具有通常知識者應可理解本發明並不限於此等。

與本發明之實施例相關之以上說明僅為例示性說明，並非窮舉之意，亦非限定之意。所屬技術領域中具有通常知識者可在不脫離上述實施例之宗旨及精神之範圍內進行各式各樣的變形及變更。本說明書中之用語，係為了最佳地說明實施例之原理、實際之適用及對先前技術之改良，或使所屬技術領域中具有通常知識者理解本說明書中所記載之實施例而採用者。

【產業利用性】

本發明之試驗液及其製造方法，可利用於產業上對人體腔液 用濃縮器之評價。

1:濃縮器本體

2:濃縮液輸出埠(第一輸出埠)

3:濃縮器之輸入埠

4:濾液輸出埠(第二輸出埠)

Claims (20)

1. 一種用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液，其特徵係：總蛋白質濃度為0.5g/dL以上2.4g/dL以下，白蛋白與球蛋白之比(A/G比)為0.8以上1.5以下，且血球數為1×10²個/μL以下。
2. 如請求項1所述之試驗液，其中，進一步含有抗凝固劑。
3. 如請求項2所述之試驗液，其中，該抗凝固劑係含有選自肝素及其鹽、乙二胺四乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、及水蛭素中至少任一物質。
4. 如請求項3所述之試驗液，其中，該抗凝固劑係含有2Unit/mL以上之肝素及/或其鹽。
5. 如請求項1至4中任一項所述之試驗液，其中，該試驗液之總蛋白質濃度為0.5g/dL以上0.9g/dL以下。
6. 如請求項1至4中任一項所述之試驗液，其中，該試驗液之總蛋白質濃度為2.0g/dL以上2.4g/dL以下。
7. 一種體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之評價試驗方法，其特徵係其使用如請求項1至6中任一項所述之試驗液。
8. 一種如請求項1至6中任一項所述之用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之試驗液的製造方法，其特徵係包含：過濾步驟，係藉由具有0.2μm以下之平均孔徑之過濾膜過濾原料液；以及濃度調整步驟，係調整已過濾之濾液之總蛋白質及/或白蛋白之濃度；該原料液係含有人以外之動物血漿。
9. 如請求項8所述之試驗液之製造方法，其中，該過濾膜，係具有相對於所有孔之個數，0.08μm以上且0.12μm以下之孔之個數的比例為60%以上之孔徑分布。
10. 如請求項8所述之試驗液之製造方法，其中，該人以外之動物血漿係牛血漿。
11. 如請求項8所述之試驗液之製造方法，其中，該濃度調整步驟，係將總蛋白質濃度調整為0.5g/dL以上2.4g/dL以下。
12. 如請求項9所述之試驗液之製造方法，其中，該濃度調整步驟，係將總蛋白質濃度調整為0.5g/dL以上2.4g/dL以下。
13. 如請求項8至12中任一項所述之試驗液之製造方法，其中，該濃度調整步驟，係將總蛋白質濃度調整為0.5g/dL以上0.9g/dL以下。
14. 如請求項8至12中任一項所述之試驗液之製造方法，其中，該濃度調整步驟，係將總蛋白質濃度調整為2.0g/dL以上2.4g/dL以下。
15. 如請求項8至12中任一項所述之試驗液之製造方法，其中，該濃度調整步驟，係將白蛋白與球蛋白之比(A/G比)調整為0.8以上1.5以下。
16. 如請求項8至12中任一項所述之試驗液之製造方法，其中，進一步包含：凍結、溶解步驟；以及纖維蛋白除去步驟。
17. 如請求項16所述之試驗液之製造方法，其中，該纖維蛋白除去步驟，係包含於凍結、溶解步驟後藉由紗布過濾除去該纖維蛋白。
18. 如請求項16所述之試驗液之製造方法，其中，該凍結、溶解步驟及纖維蛋白除去步驟，係於該過濾步驟前，或於該過濾步驟後且該濃度調整步驟前實施。
19. 一種用於評價體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之套組，其特徵係包含：收容部；以及試驗液，係收容於該收容部，並含有如請求項1至6中任一項所述之試驗液 或由如請求項8至18中任一項所述之製造方法所獲得之試驗液。
20. 一種體腔液濃縮器之蛋白質回收性能之評價試驗方法，其特徵係使用如請求項19所述之套組。

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