TWI786343B - 用於美白功效之含乳酸菌發酵物之組合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
一種選自以下至少其中之一經分離的乳酸菌所發酵產出之發酵物：短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種(Bifidobacterium longum subsp.infantis)BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌(Lactobacillus salivarius subap.salicinius)AP-32菌株及副乾酪乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株，上述乳酸菌之發酵物具有皮膚美白之功效，且以食品組合物或藥妝品組合物的形式存在。
Description
本發明是有關一種組合物以及其用途，特別是一種用於美白功效之含乳酸菌發酵物之組合物以及其用途。
愛美是人類的天性，擁有白皙亮麗的肌膚是許多東方女性所夢寐以求的夢想。皮膚長期暴露在污染物質、致癌物質及紫外線之下，難免會對皮膚產生傷害。為了減少這些物質對皮膚的傷害，皮膚中的黑色素細胞會產生黑色素。黑色素能吸收大部分紫外線，從而保護和減輕紫外線光引起的皮膚急性和慢性損傷。
黑色素堆積在皮膚，皮膚細胞會產生細胞代謝機制來去除基底層中的黑色素，其原理主要是透過皮膚細胞新陳代謝，以新的皮膚細胞增生取代舊有的黑色素堆積細胞，將被日曬後的皮膚恢復成原本的顏色。然而，隨著年齡增長、睡眠不足、紫外線、生活壓力等外在或內在因素持續刺激皮膚，往往讓黑色素的生成超過了皮膚可以代謝的速度而加速皮膚老化，導致皮膚暗沉或黑斑、皮膚癌等疾病。
綜上所述，發展出一種安全且可長期使用之具有美白功效之營養補充品或藥妝品有其迫切性。而乳酸菌之發酵物一般來說是安全且有益健康的，因此，找出具有美白功效的乳酸菌發酵物便是目前極需努力的目標。
本發明提供一種含乳酸菌發酵物之組合物，其具有抑制黑色素生成之活性效果，因而能夠減少黑色素堆積，進而具有皮膚美白之功效並改善膚質。
本發明一實施例之用於美白功效之含乳酸菌發酵物之組合物包含以乳酸菌菌株所發酵產生之具有美白功效之乳酸菌發酵物以及賦形劑、稀釋劑或載體，其中乳酸菌菌株包含經分離的副乾酪乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株(BCRC910646)，且發酵物為經加熱殺菌之發酵液，或發酵液所乾燥成之發酵物粉末，上述乳酸菌菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所。
本發明另一實施例之以含乳酸菌發酵物之組合物作為美白功效之用途，其中含乳酸菌發酵物之組合物包含以乳酸菌菌株所發酵產生之具有美白功效之乳酸菌發酵物以及賦形劑、稀釋劑或載體，其中乳酸菌菌株包含經分離的副乾酪乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株(BCRC910646)，且發酵物為經加熱殺菌之發酵液，或發酵液所乾燥成之發酵物粉末，上述乳酸菌菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所。
以下藉由具體實施例配合所附的圖式詳加說明，當更容易瞭解本發明之目的、技術內容、特點及其所達成之功效。
圖1為本發明乳酸菌菌株之乳酸菌發酵物之抑制黑色素形成能力的試驗結果。
圖2為本發明乳酸菌菌株之乳酸菌發酵物之抑制酪氨酸酶活性分析的試驗結果。
以下將詳述本發明之各實施例，並配合圖式作為例示。除了這些詳細說明之外，本發明亦可廣泛地施行於其它的實施例中，任何所述實施例的輕易替代、修改、等效變化都包含在本發明之範圍內，並以申請專利範圍為準。在說明書的描述中，為了使讀者對本發明有較完整的瞭解，提供了許多特定細節；然而，本發明可能在省略部分或全部特定細節的前提下，仍可實施。此外，眾所周知的步驟或元件並未描述於細節中，以避免對本發明形成不必要之限制。圖式中相同或類似之元件將以相同或類似符號來表示。特別注意的是，圖式僅為示意之用，並非代表元件實際之尺寸或數量，有些細節可能未完全繪出，以求圖式之簡潔。
本發明所述之乳酸菌菌株之冷凍乾燥培養物已寄存於財團法人食品工業發展研究所(地址為台灣新竹市食品路331號)。寄存之詳細資料如表1所示：
如表1所列已寄存的短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株以及副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株之發酵物，被發現具有抑制黑色素形成及抑制黑色素合成酶的效果。可以理解的是，抑制黑色素形成具有皮膚美白淡斑的活性效果，而抑制黑色素合成酶則具有預防黑色素形成的活性效果。為了簡化說明，在未特別說明的情況下，以美白功效可代表抑制黑色素形成以及抑制黑色素合成酶的效果。
於一實施例中，表1所列之乳酸菌菌株之發酵物可作為美白功效之用途。舉例而言，本發明一實施例之用於美白功效之含乳酸菌發酵物之組合物包含由乳酸菌菌株所發酵產生之發酵物以及賦形劑、稀釋劑或載體。該乳酸菌菌株選自以下至少其中之一經分離的乳酸菌菌株：短雙歧桿菌Bv-889菌株，寄存編號為BCRC910844、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株，寄存編號為BCRC910812、
動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株，寄存編號為BCRC910645、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株，寄存編號為BCRC910902、唾液乳酸桿菌AP-32菌株，寄存編號為BCRC910437以及副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株，寄存編號為BCRC910646。上述乳酸菌菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所。於一實施例中，賦形劑、稀釋劑或載體可為生理上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體，使本發明之含乳酸菌發酵物之組合物作為一食品組合物使用。或者，賦形劑、稀釋劑或載體可為藥妝上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體，使本發明之含乳酸菌發酵物之組合物作為一藥妝品組合物使用。
於食品組合物之實施例中，生理上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體可為一食品。舉例而言，食品可包含但不限於乳製飲品、茶、咖啡、口香糖、潔牙糖(例如口含片、咀嚼錠、軟糖等)或以上之組合，其中乳製飲品可包含發酵乳、優格、乳酪或乳製飲品乳粉等。
於藥妝品組合物之實施例中，藥妝上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體可為：1)液狀化妝品，例如沐浴液、洗髮液、化妝水、香水等；2)乳液狀化妝品；3)膏霜狀化妝品，例如潤面霜、粉底霜、洗髮膏；4)粉狀化妝品，例如香粉、爽身粉；5)塊狀化妝品，例如粉餅、化妝盒；6)棒狀化妝品，例如口紅、髮蠟。
於一實施例中，本發明之乳酸菌菌株所發酵產生之發酵物可包含去活性菌株或去除菌體的發酵液或其乾燥粉末。舉例而言，發酵液可為發酵上清液或乳清發酵液等。於一實施例中，本發明之用於美白功效之含乳酸菌發酵物之組合物中乳酸菌發酵物之粉劑含量為0.5%以上；或者，乳酸菌發酵物之溶液含量為2.5%以上。
實施例1：乳酸菌菌株之形態學以及一般性質
根據16S rDNA序列分析以及API細菌鑑定系統分析結果來確認菌株在分類學上的特徵。本發明之乳酸菌菌株在形態學及一般性質上的特徵詳細列於表2：
實施例2：乳酸菌發酵物之收集與保存
本發明之乳酸菌菌株所發酵產生之發酵物是以短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株以及副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株至少其中之一進行發酵以產生其發酵物，再經由離心、過濾、加熱殺菌等步驟，最後純化出發酵液。依據需求，發酵液可進一步乾燥成乳酸菌發酵物粉末。發酵液之粉劑或水溶液可保存於常溫。本發明所使用之短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株分離自人類母乳。唾液乳酸桿菌AP-32菌株分離自人類糞便。副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株分離自人類腸道。
實施例3：乳酸菌發酵物之抑制黑色素形成能力分析
黑色素瘤細胞(B16-F10)被廣泛的應用在分析黑色素生成的細胞模型，實驗中可以利用紫外光的照射誘發生成黑色素。黑色素瘤細胞也可以透過加入黑色素細胞刺激激素α-MSH(melanocyte-stimulating hormones)誘發黑色素
瘤細胞的活化，進而產生黑色素。所生成的黑色素可以利用測量OD400nm來加以定量。簡言之，將細胞溶解，萃取出黑色素，然後利用分光光度儀分析OD400nm吸光值，吸光值越大代表黑色素瘤細胞所產生的黑色素越多。
本次實驗是將本發明之短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株或副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株之發酵物粉劑2.5%或7.5%水溶液混合100nM黑色素細胞刺激激素，接著加入黑色素瘤細胞(B16-F10)共培養48小時。熊果素(arbutin)可抑制黑色素生成，因此以1mM及2mM熊果素(arbutin)混合黑色素細胞刺激激素的黑色素瘤細胞作為陽性對照組，此外，只用黑色素細胞激素刺激的黑色素瘤細胞作為陰性對照組。將細胞溶解後，利用測量OD400nm計算各組相對的黑色素生成量。
請參照圖1，其為本發明之乳酸菌發酵物抑制黑色素生成之試驗結果，其中符號**表示p值<0.01，亦即統計學上具有非常顯著的差異；符號*表示p值<0.05，亦即統計學上具有顯著差異。由圖1之結果可知(最上方虛線為陰性對照組、下方兩條虛線為陽性對照組)，本發明之短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株或副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株之發酵物可以有效抑制由黑色素細胞刺激激素所誘發之黑色素生成，其效果與熊果素相當。本發明之乳酸菌菌株所發酵產出之發酵物具有美白功效。
實施例4：乳酸菌發酵物之抑制酪氨酸酶活性分析
酪氨酸酶(tyrosinase)在黑色素的合成中扮演著重要的角色。酪氨酸酶是一種氧化酶，是調控黑色素生成的限速酶。這種酶參與黑色素合成的兩個反應：第一步將單酚羥基化為二酚，第二步將鄰二酚氧化為鄰二醌。鄰二醌再經
過幾個步驟反應後就變為黑色素。因此，酪氨酸酶的活性越高，所生成的黑色素就越多，呈正比關係。而透過抑制酪氨酸酶則可降低黑色素的生成，例如可使用麴酸(Kojic acids)來抑制酪氨酸酶活性，達到美白的效果。本實驗是將本發明之短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株或副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株之發酵物粉劑配置成20%水溶液進行酪氨酸酶活性抑制分析。另外，以水作為作為空白試驗組，濃度0.75mM麴酸及2mM熊果素做為陽性對照組；100nM黑色素細胞刺激激素作為陰性對照組。酪氨酸酶活性抑制分析是使用Tyrosinase Inhibitor Screening Kit(BioVision)，所有實驗流程皆依照kit的說明書建議進行分析。
請參照圖2，以說明本發明之乳酸菌發酵物之抑制酪氨酸酶活性之試驗結果，其中符號***表示p值<0.005，即統計學上具有非常顯著的差異。由圖2之試驗結果可知，相較於不具抑制酪氨酸酶活性的陰性對照組(黑色素細胞刺激激素組)以及空白控制組，本發明之短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株或副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株之發酵物具有抑制酪氨酸酶活性的功能，且其抑制的功效可以媲美具有皮膚美白作用的麴酸(Kojic acids)及熊果素，甚至更好。
綜合上述，本發明之短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株或副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株所發酵產出之發酵物具有抑制黑色素生成以及抑制黑色素合成酵素的能力。因此，本發明之短雙歧桿菌Bv-889菌株、長雙歧桿菌嬰兒亞種BLI-02菌株、動物雙歧桿菌乳亞種CP-9菌株、兩
歧雙歧桿菌Bf-688菌株、唾液乳酸桿菌AP-32菌株或副乾酪乳酸桿菌GL-156菌株所發酵產出之發酵物具有皮膚美白淡斑之活性效果，且能夠預防生成黑色素。
以上所述之實施例僅是為說明本發明之技術思想及特點，其目的在使熟習此項技藝之人士能夠瞭解本發明之內容並據以實施，當不能以之限定本發明之專利範圍，即大凡依本發明所揭示之精神所作之均等變化或修飾，仍應涵蓋在本發明之專利範圍內。
1.財團法人食品工業發展研究所、2018年07月20日、BCRC910844
2.財團法人食品工業發展研究所、2018年01月18日、BCRC910812
3.財團法人食品工業發展研究所、2014年08月21日、BCRC910645
4.財團法人食品工業發展研究所、2019年06月12日、BCRC910902
5.財團法人食品工業發展研究所、2009年07月30日、BCRC910437
6.財團法人食品工業發展研究所、2014年08月21日、BCRC910646
Claims (9)
- 一種以含乳酸菌發酵物之組合物作為抑制黑色素形成及抑制黑色素合成酶之效果以達到皮膚美白功效之用途，其中該含乳酸菌發酵物之組合物包含：以乳酸菌菌株所發酵產生之具有抑制黑色素形成及抑制黑色素合成酶之效果以達到皮膚美白功效之發酵物，其中該乳酸菌菌株包含經分離的副乾酪乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei)GL-156菌株(BCRC910646)，且該發酵物為經加熱殺菌之發酵液，或該發酵液所乾燥成之發酵物粉末；以及賦形劑、稀釋劑或載體。
- 如請求項1所述之用途，其中該乳酸菌菌株更包含短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)Bv-889菌株(BCRC910844)、長雙歧桿菌嬰兒亞種(Bifidobacterium longum subsp.infantis)BLI-02菌株(BCRC910812)、動物雙歧桿菌乳亞種(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)CP-9菌株(BCRC910645)、兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)Bf-688菌株(BCRC910902)、唾液乳酸桿菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32菌株(BCRC910437)或以上之組合。
- 如請求項1所述之用途，其中該發酵物為包含去活性菌株或去除菌體的發酵上清液、乳清發酵液、或以上之乾燥粉末。
- 如請求項1所述之用途，其中該賦形劑、稀釋劑或載體為生理上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體。
- 如請求項1所述之用途，其中該賦形劑、稀釋劑或載體為一食品。
- 如請求項5所述用途，其中該食品包含發酵乳、優格、乳酪、乳粉、茶、咖啡、口香糖、潔牙糖或以上之組合。
- 如請求項1所述之用途，其中該賦形劑、稀釋劑或載體為藥妝上可接受之賦形劑、稀釋劑或載體。
- 如請求項1所述之用途，其中該含乳酸菌發酵物之組合物為液狀化妝品、乳液狀化妝品、膏霜狀化妝品、粉狀化妝品、塊狀化妝品或棒狀化妝品。
- 如請求項1所述之用途，其中該含乳酸菌發酵物之組合物為沐浴液、洗髮液、化妝水、香水、潤面霜、粉底霜、洗髮膏、香粉、爽身粉、粉餅、口紅或髮蠟。
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