TWI740327B - ４－（２－羥基乙氧基）苯酚用於製備改善皮膚老化及改善老化之醫藥組合物之用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種化合物用於製備抑制黑色素生成之醫藥組合物之用途，其中該化合物係為4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸。本發明亦提供一種利用4-(2-羥基乙氧基)苯酚製備改善皮膚狀態及改善老化之醫藥組合物之用途。

Description

4-(2-羥基乙氧基)苯酚用於製備改善皮膚老化及改善老化之醫藥組合物之用途

本發明係關於一種化合物之護膚或保健用途，特別係關於一種苯酚衍生物、核苷、或呋喃衍生物用於製備抑制黑色素生成之醫藥組合物之用途，或一種苯酚衍生物用於製備皮膚護理及抗老化之醫藥組合物之用途。

白皙及透亮的膚色是年輕有活力的象徵。為了展現個人活力，現代人透過諸如化妝及皮膚保養等方式維持皮膚亮白。膚色主要取決於黑色素細胞產生黑色素的量。先天遺傳、內分泌失調、生活作息、日光曝曬、及藥物使用等原因都可能刺激黑色素細胞增加黑色素生成(melanogenesis)，進而導致膚色黯沉或局部斑點。當黑色素過量產生是起因於無法改變的先天遺傳因素或者難以改變的工作或生活型態，對皮膚施用抑制黑色素生成的物質是維持皮膚亮白的一種有效方法。

黑色素生成的關鍵酵素是酪胺酸酶(tyrosinase)，其催化黑色素生成的二個起始步驟，即L-酪胺酸(L-tyrosine)經由羥基化轉變為L-二基苯丙胺酸(L-dihydroxyphenylalanine，簡稱L-多巴(L-dopa))，以及L-多巴被氧化為L-多巴醌(L-dopaquinone)。L-多巴醌會進一步轉變為黑色素(melanin)，包括真黑色素(eumelanin)及褐黑色素(pheomelanin)。由於酪胺酸酶對黑色素生成的重要性，許多皮膚美白劑皆以酪胺酸酶為抑制黑色素生成的作用標的。

眾人所熟知用於抑制黑色素生成的物質包括對苯二酚(1,4-dihydroxybezene)、熊果苷(arbutin)、及麴酸(kojic acid)。對苯二酚又名氫醌(hydroquinone)，其透過與酪胺酸酶(tyrosinase)的活性區結合而抑制酪胺酸酶活性，因此減少皮膚色素沉澱。對苯二酚曾被用於治療過度色素沉澱 (hyperpigmentation)達數十年，然而，此化合物會誘導活性氧生成，最終導致細胞氧化傷害，甚至造成永久喪失黑色素細胞。此外，對苯二酚被發現具有致癌性。因此，部分國家已禁止對苯二酚的使用。

熊果苷是一種糖基化氫醌，其藉由對酪胺酸酶的競爭性及可逆性結合而抑制酪胺酸酶活性。類似對苯二酚，熊果苷亦被用於治療過度色素沉澱，但其較對苯二酚有較低的黑色素細胞毒性。然而，熊果苷存在使用濃度過高時反而促進黑色素生成的疑慮。

麴酸是一種吡喃酮化合物，其透過螯合酪胺酸酶活性區的銅原子及抑制多巴色素的轉化而抑制黑色素生成。麴酸被普遍用於治療肝班(melaplasma)，但是此化合物在部分人群會引發皮膚炎及過敏。

有鑑於此，開發一種替代性的皮膚美白化合物，實有其必要。

本發明之一目的在提供一種化合物用於製備抑制黑色素生成之醫藥組合物之用途，其中該化合物係為4-(2-羥基乙氧基)苯酚(4-(2-hydroxyethoxy)phenol)、腺苷(adenosine)、或糠酸(2-furoic acid)。4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸的化學結構分別如式(I)、式(II)、及式(III)所示：

本發明之另一目的在提供一種4-(2-羥基乙氧基)苯酚用於製備改善皮膚狀態及改善老化之醫藥組合物之用途。

在本發明之一實施例中，該皮膚狀態之改善係抑制黑色素生成、促進膠原蛋白生成、抑制膠原蛋白分解、或促進彈性纖維(elastic fiber)形成。

在本發明之一實施例中，該皮膚狀態之改善係提升一編碼第一型膠原蛋白α1鏈(COL1A1)或第一型膠原蛋白α2鏈(COL1A2)的基因或其組合的表現量，因此促進膠蛋白生成。

在本發明之一實施例中，該皮膚狀態之改善係抑制一編碼基質金屬蛋白酶1(MMP1)的基因的表現量，藉此抑制膠原蛋白分解。

在本發明之一實施例中，該皮膚狀態之改善係提升一編碼原纖維蛋白1(FBN1)的基因的表現量，藉此促進彈性纖維形成。

在本發明之一實施例中，該老化之改善係提升一抗老化基因的表現。該抗老化基因所編碼蛋白質係為沉默信息調節因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1或sirtuin 1，SIRT1)。

在本發明之一實施例中，該老化之改善係提升一編碼伴隨蛋白T複合體(chaperonin containing TCP1 complex，CCT)次單元的基因的表現量，藉此促進細胞內蛋白質的正常摺疊。該CCT次單元可選自於由CCT2、CCT6A、CCT7、CCT8、及其任意組合所組成的群組。

在本發明之一實施例中，該老化之改善係提升一編碼自嗜相關蛋白1(autophagy-related protein 1，ATG1)、菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸合成酶(NAD⁺synthetase，NADSYN；亦稱NAD⁺合成酶)、或類泛素蛋白5(ubiquitin-like protein 5，UBL5)的基因或其任意組合的表現量；或抑制一編碼聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase，PARP；亦稱聚ADP核糖聚合酶)的基因的表現量，藉此提升細胞內粒線體活性。該PARP可選自於由PARP1、PARP2及其任意組合所組成的群組。

在本發明之一實施例中，該老化之改善係提升一編碼X射線修復交叉互補蛋白1(X-ray repair cross-complementing protein 1，XRCC1)、X射線修復交叉互補蛋白5(XRCC5)、mutL同源物1(mutL homolog 1，MLH1)、或mutS同源物6(mutS homolog 6，MSH6)的基因或其任意組合的表現量，藉此增強細胞對受損去氧核醣核酸(DNA)的修復能力。

在本發明之一實施例中，該老化之改善係提升一編碼介白素-6(interleukin-6，IL-6)或介白素-18(interleukin-18，IL-18)的基因或其組合的表現量，藉此提升一個體的免疫力。

在本發明之一實施例中，該老化之改善係提升一編碼清除者受體B1(scavenger receptor class B member 1，SCARB1)或三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白A1(ATP binding cassette transporter A1，ABCA1)的基因或其組合的表現量，藉此促進高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)形成。

在本發明之一實施例中，該老化之改善係提升一編碼前列腺素I2合成酶(prostaglandin I2 synthase，PTGIS；亦稱前列環素合成酶)或組織型纖溶酶原(tissue-type plasminogen activator，PLAT)的基因或其組合的表現量；或抑制一編碼凝血因子Ⅲ(coagulation factor Ⅲ，由F3基因編碼)、血小板衍生生長因子C(platelet derived growth factor C，PDGFC)、或介白素-8(interleukin-8，IL-8)的基因或其任意組合的表現量，藉此降低心血管疾病的發生風險。

本發明揭露4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸具有抑制黑色素生成效果，並且4-(2-羥基乙氧基)苯酚能改善皮膚狀態及個體老化，包括促進膠原蛋白生成、抑制膠原蛋白分解、或促進彈性纖維形成、促進蛋白質的正常摺疊、提升粒線體活性、增強細胞的DNA修復能力、提升個體免疫力、促進HDL形成、及降低心血管疾病風險。因此，本發明提供了皮膚美白以及延緩個體老化的新對策，即利用4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸製備抑制黑色素生成之組合物，及利用4-(2-羥基乙氧基)苯酚製備改善皮膚狀態及改善老化之組合物。該些組合物可具有粉末、顆粒、溶液、膠體、膏體或其他形式，且可製成醫藥品、食品、飲品、或營養補充劑，藉由口服、皮膚塗抹或其他方式給予一個體。

以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明之特點及應用，而非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

圖1顯示黑色素瘤細胞B16F10以4-(2-羥基乙氧基)苯酚(標記為EJ-01)、腺苷(標記為EJ-04)、或糠酸(標記為EJ-05)處理後的黑色素相對含量。

圖2顯示黑色素瘤細胞B16F10以指定濃度之麴酸或4-(2-羥基乙氧基)苯酚(標記為EJ-01)處理後的黑色素相對含量。

圖3顯示人類外周血單核細胞以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理24小時後，相對於對照組細胞的COL1A1、COL1A2、及FBN1基因的相對表現量。

圖4顯示人類外周血單核細胞以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理24小時後，相對於對照組細胞的MMP1基因的相對表現量。

圖5顯示人類外周血單核細胞以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理24小時後，相對於對照組細胞的CCT2、CCT6A、CCT7、CCT8、SIRT1、ATG1、NADSYN、UBL5、PARP1、及PARP2基因的相對表現量。

圖6顯示人類外周血單核細胞以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理24小時後，相對於對照組細胞的XRCC1、XRCC5、MLH1、及MSH6基因的相對表現量。

圖7顯示人類外周血單核細胞以12.5μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理24小時後，相對於對照組細胞的IL-6及IL-18基因的相對表現量。

圖8顯示人類外周血單核細胞以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理6小時後，相對於對照組細胞的SCARB1及ABCA1基因的相對表現量。

圖9顯示人類外周血單核細胞以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理24小時後，相對於對照組細胞的PTGIS、PLAT、F3、PDGFC、及IL-8基因的相對表現量。

定義

除非另有說明，本文中所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式。

本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。

除非另有說明，本文中所謂「個體」係指人類個體。

本文中所謂「改善皮膚狀態」係指抑制皮膚老化現象以提升皮膚的整體健康狀態。所謂皮膚老化現象包括黑色素在皮膚中(主要在表皮)累積而導致膚色黯沉或局部斑點；真皮層中的膠原纖維(collagen fiber)因其構成分子之膠原蛋白產量減少或分解增加而損失，及彈性纖維因其構成分子之彈力蛋白及原纖維蛋白的產量減少而損失，最終導致皺紋形成及皮膚鬆弛。因此，皮膚狀態之改善包括抑制黑色素生成、促進膠原蛋白生成、抑制膠原蛋白分解、及促進彈性纖維形成。

本文中所謂「改善老化」係指降低個體在老化過程出現亞健康或疾病狀態的可能性，或減少個體細胞中隨個體老化而發生分子或胞器的結構異常、功能失調、或數量變化。改善老化之一實例是調節與老化相關基因的表現量。

本文所述的醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而製備成一適合於非經腸道地(parenterally)或口服地(orally)投藥的劑型(dosage form)，其包括但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)、細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)以及類似之物。

本文所述的醫藥組合物可由非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥，其包括但不限於：腹膜內注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)、及靜脈內注射(intravenous injection)。

本文所述的醫藥組合物可包含一廣泛使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑(solvent)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。該些試劑的選用與數量落在熟習此項技術者的專業素養與例行技術範疇內。

前述醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝鹽溶液(phosphate buffered saline，PBS)、含糖溶液、含醇水溶液(aqueous solution containing alcohol)、及它們的組合。

材料與方法 材料

自Thermo Fisher Scientific購買DMEM培養基(GibcoDulbecco's modified Eagle’s medium)、胎牛血清(Gibcofetal bovine serum，FBS)、青黴素/鏈黴素(Gibco penicillin/streptomycin)、及磷酸緩衝鹽溶液(GibcoPBS)。自Lonza購買X-VIVO10無血清培養基。自Echo chemical購買二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)。自Sigma購買對苯二酚(純度

99%)及2-氯乙醇(2-chloroethanol；純度

99%)。自台灣默克公司購買正己烷(n-hexane)及乙酸乙酯(ethyl acetate)。

化合物

以下實施例所用的4-(2-羥基乙氧基)苯酚(本文中標記為EJ-01)、糠酸(本文中標記為EJ-05)、及腺苷(本文中標記為EJ-04)可直接向化學物製造商購買，例如北京福源坊科技有限公司及Sigma公司；或以化學合成方法製得。或者，該些化合物可分離自天然來源，例如植物或微生物。

在一實施例中，4-(2-羥基乙氧基)苯酚係以如下方法合成。首先，將12g對苯二酚、10mL 2-氯乙醇、及17g氫氧化鈉克溶於500mL水並加熱迴流4小時。該溶液冷卻後以濃鹽酸中和，續以乙酸乙酯萃取以獲得一脂溶性粗產物。該粗產物以正相矽膠管柱(40cm×5cm；台灣默克公司)進行層析，以正己烷與乙酸乙酯依體積比2：1至1：1之梯度混和液為移動相，可純化得單一化合物，其為淡黃色固體(產率約41%)，經氫核磁共振光譜(¹H-NMR)鑑定為4-(2-羥基乙氧基)苯酚。

細胞培養

以下實施例所用細胞包括購自美國典型培養物保存中心(American Type Culture Collection，ATCC)之小鼠黑色素瘤細胞株B16F10(ATCC CRL-6475)及分離自捐贈者血液之人類外周血單核細胞(peripheral mononuclear mononuclear cell，PBMC)。B16F10細胞在37℃、5%二氧化碳的條件下培養於 添加10% FBS及1%青黴素/鏈黴素的DMEM培養基，以下稱DMEM細胞培養基。PBMC細胞在37℃、5%二氧化碳的條件下培養於X-VIVO10無血清培養基，以下稱X-VIVO細胞培養基。

黑色素生成試驗

黑色素瘤細胞株B16F10的黑色素含量測定方法簡述如下。自經過指定處理的細胞培養物中收集B16F10細胞。該細胞以PBS溶液清洗並以胰蛋白酶(trypsin)溶液處理3分鐘，所得懸浮細胞以離心方式(400 xg，5分鐘)收集，經PBS溶液清洗二次，而後再懸浮於200μLPBS溶液。該細胞懸浮液以液態氮冷凍10分鐘，再置於室溫約30分鐘至完全解凍後，以離心方式(12,000 xg，3分鐘)移除上清液。餘下細胞沉澱與120μL之1N氫氧化鈉水溶液混合均勻，再於60℃加熱1小時以獲得一含溶解黑色素的細胞裂解液。將100μL該細胞裂解液移入一96孔盤，並使用ELISA讀盤機(enzyme-linked immunosorbent assay reader；BioTek)測量該細胞裂解液在450nm的吸光值(OD450)。黑色素相對含量係依下列公式計算：黑色素相對含量(%)=(各組OD450值/對照組OD450值)×100%。

基因表現量分析

基於核酸雜交技術，利用NanoString多重基因單分子計數分析(NanoStringnCounter analysis，簡稱nCounter分析)測定細胞經過指定處理後的目標基因的訊息RNA(mRNA)表現量，其步驟簡述如下。依據廠商使用說明，利用RNA萃取套組(RNA Extraction Kit；Geneaid)自細胞分離出RNA。其後，將75ng該RNA與表1所列目標基因的螢光條形碼標記探針雜交，並利用奈米序列計數儀(NanoStringnCounter；購自NanoString technologies公司，美國)對前述RNA進行直接計數。各目標基因的相對表現量係以nSolver分析軟體(nSolver^TM Analysis Software version 4.0)計算，其定義為相對於對照組細胞中相應基因的表現量的倍數或百分比。

統計分析

數據表示為平均值±標準差(SD)。使用Excel軟體進行統計分析，數據間差異在統計上的顯著性以學生t檢驗(student's t-test)判定。

實施例1 化合物抑制黑色素細胞的黑色素生成

為檢驗4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸對黑色素生成的影響，利用黑色素生成試驗測定黑色素瘤細胞株B16F10以前述化合物處理後，其黑色素含量變化。簡言之，將B16F10細胞依1.5×10⁵細胞/孔接種於6孔培養盤，各孔含有3mL DMEM細胞培養基。在37℃培養細胞24小時後，移除該細胞培養基，並將含有2.5μg/mL4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸(實驗組)之3mL DMEM細胞培養基添加至各孔細胞。另設置一對照組，係僅以3mL DMEM細胞培養基處理細胞。在37℃下培養48小時後，收集前述三組細胞以測定黑色素含量(三重複試驗)。

圖1顯示經前述處理之黑色素瘤細胞的黑色素相對含量；圖中*、**及***分別表示相比對照組為P<0.05、P<0.01、及P<0.001。依據該圖，相比對照組，4-(2-羥基乙氧基)苯酚之處理使黑色素含量顯著減少約15.3%；腺苷之處理使黑色素含量顯著減少約7.8%；糠酸之處理使黑色含量顯著減少約6.8%。此結果說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸皆可用於製備皮膚美白化合物。

此外，為比較4-(2-羥基乙氧基)苯酚與習知美白化合物之麴酸抑制黑色素生成的效果，依前述方式進行黑色素生成試驗，其中B16F10細胞被施以50μg/mL或25μg/mL4-(2-羥基乙氧基)苯酚或麴酸(實驗組)，或僅以3mL DMEM細胞培養基處理(對照組)。

圖2顯示經前述處理之黑色素瘤細胞的黑色素相對含量；圖中*及***分別表示相比對照組為P<0.05及P<0.001。依據該圖，相比對照組，麴酸在施用濃度為50μg/mL時顯著減少黑色素含量約10.3%，但在25μg/mL時無法顯著抑制黑色素生成，僅使黑色素含量減少約4%。相對地，25μg/mL或50μg/mL4-(2-羥基乙氧基)苯酚之處理使黑色素含量顯著減少分別約36.7%及53.4%。此結果說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚具有優於麴酸的黑色素生成抑制功效，因此可用於替代習知皮膚美白化合物。

實施例2 4-(2-羥基乙氧基)苯酚改善皮膚狀態及老化

為檢驗4-(2-羥基乙氧基)苯酚對於個體皮膚狀態及老化的影響，利用nCounter分析技術測定人類外周血單核細胞(PBMC)經4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理後，其與皮膚狀態及老化相關基因的表現量變化。該與皮膚狀態及老化相關基因所編碼蛋白質包括第一型膠原蛋白α1鏈(COL1A1)、第一型膠原蛋白α2鏈(COL1A2)、基質金屬蛋白酶1(MMP1)、原纖維蛋白1(FBN1)、沉默信息調節因子2同源蛋白1(SIRT1)、自嗜相關蛋白1(ATG1)、菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸合成酶(NADSYN)、類泛素蛋白5(UBL5)、伴隨蛋白T複合體(CCT)次單元、聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、X射線修復交叉互補蛋白1(XRCC1)、X射線修復交叉互補蛋白5(XRCC5)、mutL同源物1(MLH1)、mutS同源物6(MSH6)、介白素-6(IL-6)、介白素-18(IL-18)、清除者受體B1(SCARB1)、三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)、前列腺素I2合成酶(PTGIS)、組織型纖溶酶原(PLAT)、碼凝血因子Ⅲ(由F3基因編碼)、血小板衍生生長因子C(PDGFC)、及介白素-8(IL-8)。

進行實驗時，先將PBMC細胞依1.5×10⁵個細胞/孔接種於一6孔培養盤，各孔含有2mLX-VIVO10細胞培養基。在37℃培養細胞24小時後，將12.5μg/mL或25μg/mL4-(2-羥基乙氧基)苯酚加入培養基(實驗組)，或者不對細胞做任何處理(對照組)。該三組細胞於37℃培養6或24小時後用於基因表現量分析。

圖3至圖9顯示前述細胞中指定基因的相對表現量，其係以倍數表示；圖中*、**及***分別表示相比對照組為P<0.05、P<0.01及P<0.001。

依據圖3，相比對照組，以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理PBMC細胞24小時顯著提升COL1A1、COL1A2、及FBN1基因的表現量分別約28.1%、648.4%、及32.7%。此結果說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚能促進人體細胞產出大量存在於皮膚中的第一型膠原蛋白及彈性纖維構成分子之一的原纖維蛋白1，因此提升皮膚的結構支撐，導致皮膚彈性改善及減少皺紋形成。

依據圖4，相比對照組，以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理PBMC細胞24小時顯著降低MMP1基因的表現量約77.2%。由於MMP1可分解細胞外基質中的第一型膠原蛋白，此結果說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚能藉由抑制MMP1的生成而減少膠原蛋白分解，進而維持皮膚彈性。

依據圖5，相比對照組，以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理PBMC細胞24小時顯著提升CCT2、CCT6A、CCT7、及CCT8基因的表現量分別約21.8%、27.0%、16.5%、及9.8%，顯示4-(2-羥基乙氧基)苯酚促進協助蛋白質摺疊之伴隨蛋白T複合體的合成，因此有益於人體細胞內蛋白質保有正常結構及發揮正常功能。此外，4-(2-羥基乙氧基)苯酚之處理顯著提升ATG1及NADSYN基因的表現量分別約29.6%、85.1%、及25.4%，並且顯著抑制PARP1及PARP2基因的表現量分別約17.2%及42.8%。鑒於有研究指出NAD⁺合成酶負責合成細胞能量產生過程(如粒線體呼吸作用)所需之輔酶NAD⁺，ATG蛋白(包括ATG1)促進老化粒線體更新，UBL5協助蛋白質轉運至粒線體，及PARP表現增加與粒線體機能失調相關，此結果顯示4-(2-羥基乙氧基)苯酚能藉由促進ATG1、NADSYN、及UBL5基因的表現，及抑制PARP1與PARP2基因的表現而增強粒線體活性，進而改善人體細胞的養分代謝與能量產生。此外，4-(2-羥基乙氧基)苯酚之處理顯著提升與長壽相關之SIRT1基因的表現量約22.0%。因此，圖5之數據說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚能透過調節多種基因的表現而改善或延緩個體老化。

依據圖6，相比對照組，以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理PBMC細胞24小時顯著提升XRCC1、XRCC5、MLH1、及MSH6基因的表現量分別約53.7%、37.7%、44.5%、及25.1%。由於該些基因所編碼蛋白質皆屬DNA修復蛋白，此結果說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚能提升人體細胞對受損DNA或基因的修復能力，因此避免個體基因在個體老化過程中累積變異而喪失正常功能。

依據圖7，相比對照組，以12.5μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理PBMC細胞24小時顯著提升IL-6及IL-18基因的表現量分別約40.7%及65.7%。基於IL-6參與生產抗體之B細胞的成熟，及IL-18會刺激自然殺手細胞(natural killer cells)及部分T細胞分泌干擾素-γ(interferon-γ)，此結果說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚有益於提升個體免疫力，因此改善個體隨年齡增長而免疫力逐漸下降的狀況。

依據圖8，相比對照組，以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理PBMC細胞6小時顯著提升SCARB1及ABCA1基因的表現量分別約65.3%及22.3%。由於ABCA1作為轉運蛋白負責將膽固醇自細胞內轉運至細胞外，且SCARB1作為高密度脂蛋白(HDL)的結合受體可調節膽固醇與HDL間的運輸，此結果說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚有助於個體內HDL的形成，因此提高個體將膽固醇由身體組織運送至肝臟代謝的能力，及降低個體罹患心血管疾病的可能性。

依據圖9，相比對照組，以25μg/mL之4-(2-羥基乙氧基)苯酚處理PBMC細胞24小時顯著提升PTGIS及PLAT基因的表現量分別約34.7%及21.8%。此外，4-(2-羥基乙氧基)苯酚之處理顯著抑制F3、PDGFC、及IL-8基因的表現量分別約41.8%、21.1%、及42.2%。鑒於PTGIS催化作為血管舒張劑的前列腺素I2的合成；PLAT作為一種纖溶酶原能活化血纖維蛋白溶解酶以增加血栓清除；凝血因子Ⅲ負責凝血反應的啟動；PDGFC的表現增加與數種心血管疾病相關，如動脈粥樣硬化(atherosclerosis)、心臟纖維化(cardiac fibrosis)、及血管新生(neovascularization)；及IL-8具有促進血管新生的效果，圖9之數據說明4-(2-羥基乙氧基)苯酚能藉由調節前述基因的表現而降低心血管疾病風險。

綜上所述，前述資料顯示4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸具有抑制黑色素生成效果，並且4-(2-羥基乙氧基)苯酚能改善皮膚狀態及個體老化。因此，本發明提供了皮膚美白以及延緩個體老化的新對策，即利用4-(2-羥基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸製備抑制黑色素生成之組合物，及利用4-(2-羥基乙氧基)苯酚製備改善皮膚狀態及改善老化之組合物。該些組合物可具有粉末、顆粒、溶液、膠體、膏體或其他形式，且可製成醫藥品、食品、飲品、或營養補充劑，藉由口服、皮膚塗抹或其他方式給予一個體。

<110> 大江生醫股份有限公司

<120> 4-(2-羥基乙氧基)苯酚用於製備改善皮膚老化及改善老化之組合物之用途

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<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 3

<210> 4

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 4

<210> 5

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 5

<210> 6

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 6

<210> 7

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 7

<210> 8

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 8

<210> 9

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 9

<210> 10

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 10

<210> 11

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 11

<210> 12

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 12

<210> 13

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 13

<210> 14

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 14

<210> 15

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 15

<210> 16

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 16

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 17

<210> 18

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 18

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 19

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 20

<210> 21

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 21

<210> 22

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 22

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<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 23

<210> 24

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 24

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<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 合成探針

<400> 25

<210> 26

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成探針

<400> 26

Claims (12)

1. 一種化合物用於製備改善皮膚老化及改善個體老化之醫藥組合物之用途，其中該化合物為4-(2-羥基乙氧基)苯酚，其中該改善皮膚老化係促進膠原蛋白生成、抑制膠原蛋白分解、或促進彈性纖維形成。
2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該皮膚老化之改善係提升一編碼第一型膠原蛋白α1鏈(COL1A1)或第一型膠原蛋白α2鏈(COL1A2)的基因或其組合的表現量，以促進膠原蛋白生成。
3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該皮膚老化之改善係抑制一編碼基質金屬蛋白酶1(MMP1)的基因的表現量，以抑制膠原蛋白分解。
4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該皮膚老化之改善係提升一編碼原纖維蛋白1(FBN1)的基因的表現量，以促進彈性纖維形成。
5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體老化之改善係提升一抗老化基因的表現，其中該抗老化基因編碼沉默信息調節因子2同源蛋白1(SIRT1)。
6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體老化之改善係提升一編碼伴隨蛋白T複合體(CCT)次單元的基因的表現量，以促進蛋白質的正常摺疊，其中該CCT次單元係選自於由CCT2、CCT6A、CCT7、CCT8、及其任意組合所組成的群組。
7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體老化之改善係提升一編碼自嗜相關蛋白1(ATG1)、菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸合成酶(NADSYN)、或類泛素蛋白5(UBL5)的基因或其任意組合的表現量；或抑制一編碼聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的基因的表現量，以提升粒線體活性，其中該PARP係選自於由PARP1、PARP2及其任意組合所組成的群組。
8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體老化之改善係提升一編碼X射線修復交叉互補蛋白1(XRCC1)、X射線修復交叉互補蛋白5(XRCC5)、mutL同源物1(MLH1)、或mutS同源物6(MSH6)的基因或其任意組合的表現量，以增強對受損去氧核醣核酸的修復。
9. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體老化之改善係提升一編碼介白素-6(IL-6)或介白素-18(IL-18)的基因或其組合的表現量，以提升一個體的免疫力。
10. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體老化之改善係提升一編碼清除者受體B1(SCARB1)或三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)的基因或其組合的表現量，以促進高密度脂蛋白形成。
11. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該個體老化之改善係提升一編碼前列腺素I2合成酶(PTGIS)或組織型纖溶酶原(PLAT)的基因或其組合的表現量；或抑制一編碼凝血因子Ⅲ、血小板衍生生長因子C(PDGFC)、或介白素-8(IL-8)的基因或其任意組合的表現量，以降低心血管疾病風險。
12. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該4-(2-羥基乙氧基)苯酚之濃度至少為25μg/mL。

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