CN113041238B - 用于改善皮肤状态的化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明是关于一种化合物的护肤或保健用途，特别是关于用于改善皮肤状态的化合物及其应用。本发明提供一种化合物用于制备抑制黑色素生成的医药组合物的用途，其中所述化合物是4‑(2‑羟基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸。本发明亦提供一种利用4‑(2‑羟基乙氧基)苯酚制备改善皮肤状态及改善老化的医药组合物的用途。

Description

用于改善皮肤状态的化合物及其应用
技术领域
本发明是关于一种化合物的护肤或保健用途，特别是关于用于改善皮肤状态的化合物及其应用。
背景技术
白皙及透亮的肤色是年轻有活力的象征。为了展现个人活力，现代人透过诸如化妆及皮肤保养等方式维持皮肤亮白。肤色主要取决于黑色素细胞产生黑色素的量。先天遗传、内分泌失调、生活作息、日光曝晒、及药物使用等原因都可能刺激黑色素细胞增加黑色素生成(melanogenesis)，进而导致肤色黯沉或局部斑点。当黑色素过量产生是起因于无法改变的先天遗传因素或者难以改变的工作或生活型态，对皮肤施用抑制黑色素生成的物质是维持皮肤亮白的一种有效方法。
黑色素生成的关键酵素是酪胺酸酶(tyrosinase)，其催化黑色素生成的二个起始步骤，即L-酪胺酸(L-tyrosine)经由羟基化转变为L-二基苯丙胺酸(L-dihydroxyphenylalanine，简称L-多巴(L-dopa))，以及L-多巴被氧化为L-多巴醌(L-dopaquinone)。L-多巴醌会进一步转变为黑色素(melanin)，包括真黑色素(eumelanin)及褐黑色素(pheomelanin)。由于酪胺酸酶对黑色素生成的重要性，许多皮肤美白剂皆以酪胺酸酶为抑制黑色素生成的作用目标。
众人所熟知用于抑制黑色素生成的物质包括对苯二酚(1，4-dihydroxybezene)、熊果苷(arbutin)、及曲酸(kojic acid)。对苯二酚又名氢醌(hydroquinone)，其透过与酪胺酸酶(tyrosinase)的活性区结合而抑制酪胺酸酶活性，因此减少皮肤色素沉淀。对苯二酚曾被用于治疗过度色素沉淀(hyperpigmentation)达数十年，然而，此化合物会诱导活性氧生成，最终导致细胞氧化伤害，甚至造成永久丧失黑色素细胞。此外，对苯二酚被发现具有致癌性。因此，部分国家已禁止对苯二酚的使用。
熊果苷是一种糖基化氢醌，其藉由对酪胺酸酶的竞争性及可逆性结合而抑制酪胺酸酶活性。类似对苯二酚，熊果苷亦被用于治疗过度色素沉淀，但其较对苯二酚有较低的黑色素细胞毒性。然而，熊果苷存在使用浓度过高时反而促进黑色素生成的疑虑。
曲酸是一种吡喃酮化合物，其透过螯合酪胺酸酶活性区的铜原子及抑制多巴色素的转化而抑制黑色素生成。曲酸被普遍用于治疗肝班(melaplasma)，但是此化合物在部分人群会引发皮肤炎及过敏。
有鉴于此，开发一种替代性的皮肤美白化合物，实有其必要。
发明内容
本发明的一目的在提供一种化合物用于制备抑制黑色素生成的医药组合物的用途，其中该化合物是4-(2-羟基乙氧基)苯酚(4-(2-hydroxyethoxy)phenol)、腺苷(adenosine)、或糠酸(2-furoic acid)。4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸的化学结构分别如式(I)、式(II)、及式(III)所示：
本发明的另一目的在提供一种4-(2-羟基乙氧基)苯酚用于制备改善皮肤状态及改善老化的医药组合物的用途。
在本发明的一实施例中，该皮肤状态的改善是抑制黑色素生成、促进胶原蛋白生成、抑制胶原蛋白分解、或促进弹性纤维(elastic fiber)形成。
在本发明的一实施例中，该皮肤状态的改善是提升一编码第一型胶原蛋白α1链(COL1A1)或第一型胶原蛋白α2链(COL1A2)的基因或其组合的表现量，因此促进胶蛋白生成。
在本发明的一实施例中，该皮肤状态的改善是抑制一编码基质金属蛋白酶1(MMP1)的基因的表现量，藉此抑制胶原蛋白分解。
在本发明的一实施例中，该皮肤状态的改善是提升一编码原纤维蛋白1(FBN1)的基因的表现量，藉此促进弹性纤维形成。
在本发明的一实施例中，该老化的改善是提升一抗老化基因的表现。该抗老化基因所编码蛋白质是沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type informationregulation 2 homolog 1或sirtuin 1，SIRT1)。
在本发明的一实施例中，该老化的改善是提升一编码伴随蛋白T复合体(chaperonin containing TCP1 complex，CCT)次单元的基因的表现量，藉此促进细胞内蛋白质的正常折迭。该CCT次单元可选自于由CCT2、CCT6A、CCT7、CCT8、及其任意组合所组成的群组。
在本发明的一实施例中，该老化的改善是提升一编码自嗜相关蛋白1(autophagy-related protein 1，ATG1)、烟碱酰胺腺嘌呤二核苷酸合成酶(NAD+synthetase，NADSYN；亦称NAD+合成酶)、或类泛素蛋白5(ubiquitin-like protein 5，UBL5)的基因或其任意组合的表现量；或抑制一编码聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase，PARP；亦称聚ADP核糖聚合酶)的基因的表现量，藉此提升细胞内粒线体活性。该PARP可选自于由PARP1、PARP2及其任意组合所组成的群组。
在本发明的一实施例中，该老化的改善是提升一编码X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross-complementing protein 1，XRCC1)、X射线修复交叉互补蛋白5(XRCC5)、mutL同源物1(mutL homolog 1，MLH1)、或mutS同源物6(mutS homolog 6，MSH6)的基因或其任意组合的表现量，藉此增强细胞对受损脱氧核醣核酸(DNA)的修复能力。
在本发明的一实施例中，该老化的改善是提升一编码介白素-6(interleukin-6，IL-6)或介白素-18(interleukin-18，IL-18)的基因或其组合的表现量，藉此提升一个体的免疫力。
在本发明的一实施例中，该老化的改善是提升一编码清除者受体B1(scavengerreceptor class B member 1，SCARB1)或三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ATP bindingcassette transporter A1，ABCA1)的基因或其组合的表现量，藉此促进高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)形成。
在本发明的一实施例中，该老化的改善是提升一编码前列腺素I2合成酶(prostaglandin I2 synthase，PTGIS；亦称前列环素合成酶)或组织型纤溶酶原(tissue-type plasminogen activator，PLAT)的基因或其组合的表现量；或抑制一编码凝血因子III(coagulation factor III，由F3基因编码)、血小板衍生生长因子C(platelet derivedgrowth factor C，PDGFC)、或介白素-8(interleukin-8，IL-8)的基因或其任意组合的表现量，藉此降低心血管疾病的发生风险。
本发明揭露4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸具有抑制黑色素生成效果，并且4-(2-羟基乙氧基)苯酚能改善皮肤状态及个体老化，包括促进胶原蛋白生成、抑制胶原蛋白分解、或促进弹性纤维形成、促进蛋白质的正常折迭、提升粒线体活性、增强细胞的DNA修复能力、提升个体免疫力、促进HDL形成、及降低心血管疾病风险。因此，本发明提供了皮肤美白以及推迟个体老化的新对策，即利用4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸制备抑制黑色素生成的组合物，及利用4-(2-羟基乙氧基)苯酚制备改善皮肤状态及改善老化的组合物。该些组合物可具有粉末、颗粒、溶液、胶体、膏体或其他形式，且可制成医药品、食品、饮品、或营养补充剂，通过口服、皮肤涂抹或其他方式给予一个体。
以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明的特点及应用，而非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
附图说明
图1为黑色素瘤细胞B16F10以4-(2-羟基乙氧基)苯酚(标记为EJ-01)、腺苷(标记为EJ-04)、或糠酸(标记为EJ-05)处理后的黑色素相对含量图；
图2为黑色素瘤细胞B16F10以指定浓度的曲酸或4-(2-羟基乙氧基)苯酚(标记为EJ-01)处理后的黑色素相对含量图；
图3为人类外周血单核细胞以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理24小时后，相对于对照组细胞的COL1A1、COL1A2、及FBN1基因的相对表现量图；
图4为人类外周血单核细胞以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理24小时后，相对于对照组细胞的MMP1基因的相对表现量图；
图5为人类外周血单核细胞以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理24小时后，相对于对照组细胞的CCT2、CCT6A、CCT7、CCT8、SIRT1、ATG1、NADSYN、UBL5、PARP1、及PARP2基因的相对表现量图；
图6为人类外周血单核细胞以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理24小时后，相对于对照组细胞的XRCC1、XRCC5、MLH1、及MSH6基因的相对表现量图；
图7为人类外周血单核细胞以12.5μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理24小时后，相对于对照组细胞的IL-6及IL-18基因的相对表现量图；
图8为人类外周血单核细胞以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理6小时后，相对于对照组细胞的SCARB1及ABCA1基因的相对表现量图；
图9为人类外周血单核细胞以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理24小时后，相对于对照组细胞的PTGIS、PLAT、F3、PDGFC、及IL-8基因的相对表现量图。
具体实施方式
定义
除非另有说明，本文中所使用的「一」、「该」及类似用语应理解为包含单数及复数形式。
本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。
除非另有说明，本文中所谓「个体」是指人类个体。
本文中所谓「改善皮肤状态」是指抑制皮肤老化现象以提升皮肤的整体健康状态。所谓皮肤老化现象包括黑色素在皮肤中(主要在表皮)累积而导致肤色黯沉或局部斑点；真皮层中的胶原纤维(collagen fiber)因其构成分子的胶原蛋白产量减少或分解增加而损失，及弹性纤维因其构成分子的弹力蛋白及原纤维蛋白的产量减少而损失，最终导致皱纹形成及皮肤松弛。因此，皮肤状态的改善包括抑制黑色素生成、促进胶原蛋白生成、抑制胶原蛋白分解、及促进弹性纤维形成。
本文中所谓「改善老化」是指降低个体在老化过程出现亚健康或疾病状态的可能性，或减少个体细胞中随个体老化而发生分子或胞器的结构异常、功能失调、或数量变化。改善老化的一实例是调节与老化相关基因的表现量。
本文所述的医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而制备成一适合于非经肠地道(parenterally)或口服地(orally)投药的剂型(dosage form)，其包括但不限于：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、粉末(sterile powder)、锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)、细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)以及类似物。
本文所述的医药组合物可由非经肠道途径(parenteral routes)来投药，其包括但不限于：腹膜内注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneousinjection)、肌肉内注射(intramuscular injection)、及静脉内注射(intravenousinjection)。
本文所述的医药组合物可包含一广泛使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。该医药上可接受的载剂可包含一或多种选自于由下列所构成的群组中的试剂：溶剂(solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(ehelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似物。该些试剂的选用与数量落在熟习此项技术者的专业素养与例行技术范畴内。
前述医药上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成的群组中的溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲盐溶液(phosphate buffered saline，PBS)、含糖溶液、含醇水溶液(aqueous solution containing alcohol)、及它们的组合。
材料与方法
材料
自Thermo Fisher Scientific购买DMEM培养基(Gibco Dulbecco′s modifiedEagle’s medium)、胎牛血清(Gibco fetal bovine serum，FBS)、青霉素/链霉素(Gibcopenicillin/streptomycin)、及磷酸缓冲盐溶液(Gibco PBS)。自Lonza购买X-VIVO 10无血清培养基。自Echo chemical购买二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)。自Sigma购买对苯二酚(纯度≥99％)及2-氯乙醇(2-chloroethanol；纯度≥99％)。自中国台湾默克公司购买正己烷(n-hexane)及乙酸乙酯(ethyl acetate)。
化合物
以下实施例所用的4-(2-羟基乙氧基)苯酚(本文中标记为EJ-01)、糠酸(本文中标记为EJ-05)、及腺苷(本文中标记为EJ-04)可直接向化学物制造商购买，例如北京福源坊科技有限公司及Sigma公司；或以化学合成方法制得。或者，该些化合物可分离自天然来源，例如植物或微生物。
在一实施例中，4-(2-羟基乙氧基)苯酚是以如下方法合成。首先，将12g对苯二酚、10mL 2-氯乙醇、及17g氢氧化钠克溶于500mL水并加热回流4小时。该溶液冷却后以浓盐酸中和，续以乙酸乙酯萃取以获得一脂溶性粗产物。该粗产物以正相硅胶管柱(40cm×5cm；中国台湾默克公司)进行层析，以正己烷与乙酸乙酯依体积比2∶1至1∶1的梯度混和液为移动相，可纯化得单一化合物，其为淡黄色固体(产率约41％)，经氢核磁共振光谱(1H-NMR)鉴定为4-(2-羟基乙氧基)苯酚。
细胞培养
以下实施例所用细胞包括购自美国典型培养物保存中心(American TypeCulture Collection，ATCC)的小鼠黑色素瘤细胞株B16F10(ATCC CRL-6475)及分离自捐赠者血液的人类外周血单核细胞(peripheral mononuclear mononuclear cell，PBMC)。B16F10细胞在37℃、5％二氧化碳的条件下培养于添加10％FBS及1％青霉素/链霉素的DMEM培养基，以下称DMEM细胞培养基。PBMC细胞在37℃、5％二氧化碳的条件下培养于X-VIVO 10无血清培养基，以下称X-VIVO细胞培养基。
黑色素生成试验
黑色素瘤细胞株B16F10的黑色素含量测定方法简述如下。自经过指定处理的细胞培养物中收集B16F10细胞。该细胞以PBS溶液清洗并以胰蛋白酶(trypsin)溶液处理3分钟，所得悬浮细胞以离心方式(400xg，5分钟)收集，经PBS溶液清洗二次，而后再悬浮于200μLPBS溶液。该细胞悬浮液以液态氮冷冻10分钟，再置于室温约30分钟至完全解冻后，以离心方式(12,000xg，3分钟)移除上清液。余下细胞沉淀与120μL的1N氢氧化钠水溶液混合均匀，再于60℃加热1小时以获得一含溶解黑色素的细胞裂解液。将100μL该细胞裂解液移入一96孔盘，并使用ELISA读盘机(enzyme-linked immunosorbent assay reader；BioTek)测量该细胞裂解液在450nm的吸光值(OD 450)。黑色素相对含量是依下列公式计算：
黑色素相对含量(％)＝(各组OD450值/对照组OD450值)×100％。
基因表现量分析
基于核酸杂交技术，利用NanoString多重基因单分子计数分析(NanoStringnCounter analysis，简称nCounter分析)测定细胞经过指定处理后的目标基因的讯息RNA(mRNA)表现量，其步骤简述如下。依据厂商使用说明，利用RNA萃取套组(RNA ExtractionKit；Geneaid)自细胞分离出RNA。其后，将75ng该RNA与表1所列目标基因的荧光条形码标记探针杂交，并利用奈米序列计数仪(NanoString nCounter；购自NanoString technologies公司，美国)对前述RNA进行直接计数。各目标基因的相对表现量是以nSolver分析软件(nSolverTM Analysis Software version 4.0)计算，其定义为相对于对照组细胞中相应基因的表现量的倍数或百分比。
表1
统计分析
数据表示为平均值±标准偏差(SD)。使用Excel软件进行统计分析，数据间差异在统计上的显著性以学生t检验(student′s t-test)判定。
实施例1
化合物抑制黑色素细胞的黑色素生成
为检验4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸对黑色素生成的影响，利用黑色素生成试验测定黑色素瘤细胞株B16F10以前述化合物处理后，其黑色素含量变化。简言之，将B16F10细胞依1.5×105细胞/孔接种于6孔培养盘，各孔含有3mL DMEM细胞培养基。在37℃培养细胞24小时后，移除该细胞培养基，并将含有2.5μg/mL 4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸(实验组)的3mL DMEM细胞培养基添加至各孔细胞。另设置一对照组，是仅以3mLDMEM细胞培养基处理细胞。在37℃下培养48小时后，收集前述三组细胞以测定黑色素含量(三重复试验)。
图1显示经前述处理的黑色素瘤细胞的黑色素相对含量；图中*、**及***分别表示相比对照组为P＜0.05、P＜0.01、及P＜0.001。依据该图，相比对照组，4-(2-羟基乙氧基)苯酚的处理使黑色素含量显著减少约15.3％；腺苷的处理使黑色素含量显著减少约7.8％；糠酸的处理使黑色含量显著减少约6.8％。此结果说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸皆可用于制备皮肤美白化合物。
此外，为比较4-(2-羟基乙氧基)苯酚与习知美白化合物的曲酸抑制黑色素生成的效果，依前述方式进行黑色素生成试验，其中B16F10细胞被施以50μg/mL或25μg/mL 4-(2-羟基乙氧基)苯酚或曲酸(实验组)，或仅以3mL DMEM细胞培养基处理(对照组)。
图2显示经前述处理的黑色素瘤细胞的黑色素相对含量；图中*及***分别表示相比对照组为P＜0.05及P＜0.001。依据该图，相比对照组，曲酸在施用浓度为50μg/mL时显著减少黑色素含量约10.3％，但在25μg/mL时无法显著抑制黑色素生成，仅使黑色素含量减少约4％。相对地，25μg/mL或50μg/mL 4-(2-羟基乙氧基)苯酚的处理使黑色素含量显著减少分别约36.7％及53.4％。此结果说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚具有优于曲酸的黑色素生成抑制功效，因此可用于替代习知皮肤美白化合物。
实施例2
4-(2-羟基乙氧基)苯酚改善皮肤状态及老化
为检验4-(2-羟基乙氧基)苯酚对于个体皮肤状态及老化的影响，利用nCounter分析技术测定人类外周血单核细胞(PBMC)经4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理后，其与皮肤状态及老化相关基因的表现量变化。该与皮肤状态及老化相关基因所编码蛋白质包括第一型胶原蛋白α1链(COL1A1)、第一型胶原蛋白α2链(COL1A2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、原纤维蛋白1(FBN1)、沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、自嗜相关蛋白1(ATG1)、烟碱酰胺腺嘌呤二核苷酸合成酶(NADSYN)、类泛素蛋白5(UBL5)、伴随蛋白T复合体(CCT)次单元、聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、X射线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)、X射线修复交叉互补蛋白5(XRCC5)、mutL同源物1(MLH1)、mutS同源物6(MSH6)、介白素-6(IL-6)、介白素-18(IL-18)、清除者受体B1(SCARB1)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、前列腺素I2合成酶(PTGIS)、组织型纤溶酶原(PLAT)、码凝血因子III(由F3基因编码)、血小板衍生生长因子C(PDGFC)、及介白素-8(IL-8)。
进行实验时，先将PBMC细胞依1.5×105个细胞/孔接种于一6孔培养盘，各孔含有2mL X-VIVO 10细胞培养基。在37℃培养细胞24小时后，将12.5μg/mL或25μg//mL 4-(2-羟基乙氧基)苯酚加入培养基(实验组)，或者不对细胞做任何处理(对照组)。该三组细胞于37℃培养6或24小时后用于基因表现量分析。
图3至图9显示前述细胞中指定基因的相对表现量，其是以倍数表示；图中*、**及***分别表示相比对照组为P＜0.05、P＜0.01及P＜0.001。
依据图3，相比对照组，以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理PBMC细胞24小时显著提升COL1A1、COL1A2、及FBN1基因的表现量分别约28.1％、648.4％、及32.7％。此结果说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚能促进人体细胞产出大量存在于皮肤中的第一型胶原蛋白及弹性纤维构成分子之一的原纤维蛋白1，因此提升皮肤的结构支撑，导致皮肤弹性改善及减少皱纹形成。
依据图4，相比对照组，以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理PBMC细胞24小时显著降低MMP1基因的表现量约77.2％。由于MMP1可分解细胞外基质中的第一型胶原蛋白，此结果说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚能藉由抑制MMP1的生成而减少胶原蛋白分解，进而维持皮肤弹性。
依据图5，相比对照组，以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理PBMC细胞24小时显著提升CCT2、CCT6A、CCT7、及CCT8基因的表现量分别约21.8％、27.0％、16.5％、及9.8％，显示4-(2-羟基乙氧基)苯酚促进协助蛋白质折迭的伴随蛋白T复合体的合成，因此有益于人体细胞内蛋白质保有正常结构及发挥正常功能。此外，4-(2-羟基乙氧基)苯酚的处理显著提升ATG1及NADSYN基因的表现量分别约29.6％、85.1％、及25.4％，并且显著抑制PARP1及PARP2基因的表现量分别约17.2％及42.8％。鉴于有研究指出NAD+合成酶负责合成细胞能量产生过程(如粒线体呼吸作用)所需的辅酶NAD+，ATG蛋白(包括ATG1)促进老化粒线体更新，UBL5协助蛋白质转运至粒线体，及PARP表现增加与粒线体机能失调相关，此结果显示4-(2-羟基乙氧基)苯酚能藉由促进ATG1、NADSYN、及UBL5基因的表现，及抑制PARP1与PARP2基因的表现而增强粒线体活性，进而改善人体细胞的养分代谢与能量产生。此外，4-(2-羟基乙氧基)苯酚的处理显著提升与长寿相关的SIRT1基因的表现量约22.0％。因此，图5的数据说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚能透过调节多种基因的表现而改善或推迟个体老化。
依据图6，相比对照组，以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理PBMC细胞24小时显著提升XRCC1、XRCC5、MLH1、及MSH6基因的表现量分别约53.7％、37.7％、44.5％、及25.1％。由于该些基因所编码蛋白质皆属DNA修复蛋白，此结果说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚能提升人体细胞对受损DNA或基因的修复能力，因此避免个体基因在个体老化过程中累积变异而丧失正常功能。
依据图7，相比对照组，以12.5μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理PBMC细胞24小时显著提升IL-6及IL-18基因的表现量分别约40.7％及65.7％。基于IL-6参与生产抗体的B细胞的成熟，及IL-18会刺激自然杀手细胞(natural killer cells)及部分T细胞分泌干扰素-γ(interferon-γ)，此结果说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚有益于提升个体免疫力，因此改善个体随年龄增长而免疫力逐渐下降的状况。
依据图8，相比对照组，以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理PBMC细胞6小时显著提升SCARB1及ABCA1基因的表现量分别约65.3％及22.3％。由于ABCA1作为转运蛋白负责将胆固醇自细胞内转运至细胞外，且SCARB1作为高密度脂蛋白(HDL)的结合受体可调节胆固醇与HDL间的运输，此结果说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚有助于个体内HDL的形成，因此提高个体将胆固醇由身体组织运送至肝脏代谢的能力，及降低个体罹患心血管疾病的可能性。
依据图9，相比对照组，以25μg/mL的4-(2-羟基乙氧基)苯酚处理PBMC细胞24小时显著提升PTGIS及PLAT基因的表现量分别约34.7％及21.8％。此外，4-(2-羟基乙氧基)苯酚的处理显著抑制F3、PDGFC、及IL-8基因的表现量分别约41.8％、21.1％、及42.2％。鉴于PTGIS催化作为血管舒张剂的前列腺素I2的合成；PLAT作为一种纤溶酶原能活化血纤维蛋白溶解酶以增加血栓清除；凝血因子III负责凝血反应的启动；PDGFC的表现增加与数种心血管疾病相关，如动脉粥样硬化(atherosclerosis)、心脏纤维化(cardiac fibrosis)、及血管新生(neovascularization)；及IL-8具有促进血管新生的效果，图9的数据说明4-(2-羟基乙氧基)苯酚能藉由调节前述基因的表现而降低心血管疾病风险。
综上所述，前述数据显示4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、及糠酸具有抑制黑色素生成效果，并且4-(2-羟基乙氧基)苯酚能改善皮肤状态及个体老化。因此，本发明提供了皮肤美白以及推迟个体老化的新对策，即利用4-(2-羟基乙氧基)苯酚、腺苷、或糠酸制备抑制黑色素生成的组合物，及利用4-(2-羟基乙氧基)苯酚制备改善皮肤状态及改善老化的组合物。该些组合物可具有粉末、颗粒、溶液、胶体、膏体或其他形式，且可制成医药品、食品、饮品、或营养补充剂，藉由口服、皮肤涂抹或其他方式给予一个体。

Claims (4)

1.一种4-(2-羟基乙氧基)苯酚用于制备改善皮肤状态的医药组合物的用途，所述皮肤状态的改善是促进胶原蛋白生成、抑制胶原蛋白分解或促进弹性纤维形成。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述促进胶原蛋白生成是提升人类外周血单核细胞的一编码第一型胶原蛋白α1链或第一型胶原蛋白α2链的基因或其组合的表现量。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抑制胶原蛋白分解是抑制人类外周血单核细胞的一编码基质金属蛋白酶1的基因的表现量。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述4-(2-羟基乙氧基)苯酚提升人类外周血单核细胞的编码沉默信息调节因子2同源蛋白1。
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