TWI737587B - 用於螢光成像之紅外線染料 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於器官成像之方法，其包含：向個體投與診斷有效量之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-苯氧基環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽或2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-(4-磺酸根基苯氧基)環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽。在一個實施例中，該器官包括腎、膀胱、肝、膽囊、脾臟、腸、心臟、肺及肌肉中之一或多者。

Description

用於螢光成像之紅外線染料 相關申請案之交叉參考
本申請案主張於2014年11月26日提出申請之美國臨時專利申請案第62/084,971號之優先權，出於所有目的，該案件之教示內容以引用方式併入本文中。
本發明提供螢光成像之方法。
習用腹腔鏡及機器人腹腔鏡技術二者在結腸直腸及婦科外科手術領域中之實踐均快速增加。如在Simorov等人，「Laparoscopic colon resection trends in utilization and rate of conversion to open procedure：a national database review of academic medical centers」Ann Surg.2012 256(3),462-468；Wright等人，「Robotically assisted vs laparoscopic hysterectomy among women with benign gynecologic disease」JAMA 2013 309(7),689-698；及Park等人，「Ureteral injury in gynecologic surgery：a 5-year review in a community hospital」Korean J.Urol.2012 53(2),120-125中所述之最近研究報導所有結腸直腸切除術之42%及高於30%之婦科手術均以此方式進行嘗試。
腹腔鏡途徑提供若干優於習用開腹外科手術之優點，包括減少手術後疼痛、縮短住院時間、減少外科手術部位感染及減少總住院費用，如以下中所述：Kiran等人，「Laparoscopic approach significantly reduces surgical site infections after colorectal surgery：data from national surgical quality improvement program」J Am Coll Surg.2010 211(2)232-238；Bilimoria等人，「Laparoscopic-assisted vs.open colectomy for cancer：comparison of short-term outcomes from 121 hospitals」J Gastrointest Surg.2008 12(11)2001-2009；Juo等人，「Is Minimally Invasive Colon Resection Better Than Traditional Approaches？：First Comprehensive National Examination With Propensity Score Matching」JAMA Surg.2014 149(2)177-184；Wilson等人，「Laparoscopic colectomy is associated with a lower incidence of postoperative complications compared with open colectomy：a propensity score-matched cohort analysis」Colorectal Dis.2014 16(5)382-389；Kobayashi等人，「Total laparoscopic hysterectomy in 1253 patients using an early ureteral identification technique」J Obstet Gynaecol Res.2012 38(9)1194-1200；Makinen等人，「Ten years of progress--improved hysterectomy outcomes in Finland 1996-2006：a longitudinal observation study」BMJ Open 2013 3(10)e003169。
然而，有限的觸覺及二維影像可導致醫源性輸尿管損傷。儘管不經常發生，但腹腔鏡輸尿管損傷仍係具有顯著相關發病率之嚴重併發症。報告指示對於結腸直腸及婦科外科手術而言發生率介於0.1%與7.6%之間，其中該等中之多於80%未能在手術中(intraoperatively)識別，如在以下中所述：Park等人；Palaniappa等人，「Incidence of iatrogenic ureteral injury after laparoscopic colectomy」Arch Surg.2012 147(3),267-271；及da Silva等人，「Role of prophylactic ureteric stents in colorectal surgery」Asian J Endosc Surg.2012 5(3),105-110。關於手術中輸尿管鑑別之當前技術包括輸尿管內置管置放、x- 射線螢光鏡檢查及可見染料；然而，內置管及螢光鏡檢查二者均為患者帶來額外風險，且可見染料通常並不敏感，如在以下中所述：Tanaka等人，「Real-time intraoperative ureteral guidance using invisible near-infrared fluorescence」J Urol.2007 178(5),2197-2202；Bothwell等人，「Prophylactic ureteral catheterization in colon surgery.A five-year review」Dis Colon Rectum.1994 37(4),330-334；Wood等人，「Routine use of ureteric catheters at laparoscopic hysterectomy may cause unnecessary complications」J Am Assoc Gynecol Laparosc.1996 3(3),393-397；及Brandes等人，「Diagnosis and management of ureteric injury：an evidence-based analysis」BJU Int.2004 94(3),277-289。
使用花青染料之螢光成像係支援外科手術導引技術(surgical navigation)且提供解剖結構之即時照明之快速浮現領域。在700-900nm範圍中發射可避免來自組織自發螢光之干擾且可穿透大約1cm組織，如在以下中所述：Adams等人，「Comparison of visible and near-infrared wavelength-excitable fluorescent dyes for molecular imaging of cancer」J Biomed Opt.2007 12(2),024017；及Keereweer等人，「Optical Image-Guided Cancer Surgery：Challenges and Limitations」Clin Cancer Res.2013 19(14),3745-3754。
螢光成像之另一應用係用於膽道解剖(包括膽管及膽囊管)之即時手術中成像。當前方法通常使用綠靛花青(ICG)染料藉由在外科手術之前膽道內注射或靜脈內注射。然而，研究顯示使用ICG染料存在明顯問題。該等問題包括排泄至膽汁中之差的效率及動力學(Tanaka等人，「Real-time intraoperative assessment of the extrahepatic bile ducts in rats and pigs using invisible near-infrared fluorescent light」Surgery 2008 144(1)39-48)及患者之不利反應(Benya等人，「Adverse reactions to indocyanine green：a case report and a review of the literature」Cathet Cardiovasc Diagn.1989 17(4)231-233)。
業內需要用以非侵入性地檢測及量測所關注靶標之敏感組合物及方法。特定而言，業內需要經改良之穩定花青染料以檢測在腹腔鏡或機器人外科手術期間可發生之對各種器官之損傷。本發明滿足該等及其他需要。
在實施例中，本發明包括用於腎輸尿管成像之方法，其包含：向個體投與診斷有效量之式1之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-(4-磺酸根基苯氧基)環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽化合物：
Figure 104139216-A0202-12-0004-2
或其溶劑合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子，其中該投與係在選自由以下組成之群之一或多個時間實施：手術之前、手術期間、手術之後及其組合；將該個體之腎臟系統之組織暴露於電磁輻射；及檢測來自該化合物之螢光輻射。
在一個實施例中，該方法包括經靜脈內投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括投與式1化合物，其中該醫藥上可接受之陽離子係選自由鉀或鈉組成之群。
在一個實施例中，該方法包括投與式1化合物與醫藥上可接受之載劑之組合，該醫藥上可接受之載劑選自由以下組成之群：無菌生理鹽水溶液、無菌水溶液、無熱原水溶液、等滲鹽水溶液及磷酸鹽緩衝溶液。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約3000.0μg/kg與大約1500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1500.0μg/kg與大約1000.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1000.0μg/kg與大約500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約500.0μg/kg與大約170.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約170.0μg/kg與大約120.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約120.0μg/kg與大約60.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括在投與一定時期後量測個體之腎臟系統之組織處剩餘之所投與式1化合物之螢光強度。在某些態樣中，該等方法提供式1化合物於尿液或膽汁中之可視化。
在一個實施例中，該方法包括在投與大約24小時後所投與式1化合物之經量測螢光強度係背景螢光。
在一個實施例中，該方法包括選自由以下組成之群之手術：腹腔鏡手術、機器人手術、機器人腹腔鏡手術及開放式手術。
在一個實施例中，該方法包括在投與長達大約6小時後，與所投與式1化合物在脾臟、腸、心臟、肺、肌肉或其組合中之一或多者中之經量測螢光強度相比，所投與式1化合物在腎中之經量測螢光強度 較高。
在一個實施例中，本發明提供固體形式(多晶型物)，其係式1之形式A。式1之形式A具有在約4.3°處包含峰(以2-θ表示)之X-射線粉末繞射圖案。形式A具有在約4.3°、約9.6°、約12.9°、約18.3°及約20.8°處包含峰(以2-θ表示)之X-射線粉末繞射圖案。形式A具有實質上如圖1E中所示之X-射線粉末繞射圖案。
在一個實施例中，本發明提供用於膽管成像之方法，其包含將式1化合物投與個體；及檢測來自該化合物之螢光輻射。
在另一實施例中，本發明提供式1化合物之多晶型物或固體形式(形式A)，此乃因其提供包含實質上如表2中所列示峰之XRPD圖案。
在實施例中，本發明包括用於肝膽道成像之方法，其包含：向個體投與診斷有效量之式2之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-苯氧基環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽：
Figure 104139216-A0202-12-0006-3
或其溶劑合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子，其中該投與係在選自由以下組成之群之一或多個時間實施：手術之前、手術期間、手術之後及其組合；將個體之肝系統的組織暴露於電磁輻 射；及檢測來自該化合物之螢光輻射發射。
在一個實施例中，該方法包括經靜脈內投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括投與式2化合物，其中該醫藥上可接受之陽離子係選自由鉀或鈉組成之群。
在一個實施例中，該方法包括投與式2化合物與醫藥上可接受之載劑之組合，該醫藥上可接受之載劑選自由以下組成之群：無菌生理鹽水溶液、無菌水溶液、無熱原水溶液、等滲鹽水溶液及磷酸鹽緩衝溶液。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約3000.0μg/kg與大約1500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1500.0μg/kg與大約1000.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1000.0μg/kg與大約500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約500.0μg/kg與大約170.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約170.0μg/kg與大約120.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約120.0μg/kg與大約60.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括在投與一定時期後量測個體之肝系統之組織處剩餘之所投與式2化合物之螢光強度。
在某些態樣中，該等方法提供式2化合物於尿液或膽汁中之可視化。
在一個實施例中，該方法包括在投與大約24小時後所投與式2化合物之經量測螢光強度係背景螢光。
在一個實施例中，該方法包括選自由以下組成之群之手術：腹腔鏡手術、機器人手術、機器人腹腔鏡手術及開放式手術。
在一個實施例中，該方法包括在投與長達大約6小時後，與所投與式2化合物在脾臟、腸、心臟、肺、肌肉或其組合中之一或多者中之經量測螢光強度相比，所投與式2化合物在肝中之經量測螢光強度較高。
在實施例中，本發明包括用於肝膽囊管成像之方法，其包含：向個體投與診斷有效量之式2之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-苯氧基環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽：
Figure 104139216-A0202-12-0008-4
或其溶劑合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子，其中該投與係在選自由以下組成之群之一或多個時間實施：手術之前、手術期間、手術之後及其組合；將個體之肝系統的組織暴露於電磁輻射；及檢測來自該化合物之螢光輻射。
在一個實施例中，該方法包括經靜脈內投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括投與式2化合物，其中該醫藥上可接受之陽離子係選自由鉀或鈉組成之群。
在一個實施例中，該方法包括投與式2化合物與醫藥上可接受之載劑之組合，該醫藥上可接受之載劑選自由以下組成之群：無菌生理鹽水溶液、無菌水溶液、無熱原水溶液、等滲鹽水溶液及磷酸鹽緩衝溶液。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約3000.0μg/kg與大約1500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1500.0μg/kg與大約1000.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1000.0μg/kg與大約500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約500.0μg/kg與大約170.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約170.0μg/kg與大約120.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約120.0μg/kg與大約60.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括在投與一定時期後量測個體之肝系統之組織處剩餘之所投與式2化合物之螢光強度。
在一個實施例中，該方法包括在投與大約24小時後所投與式2化合物之經量測螢光強度係背景螢光。
在一個實施例中，該方法包括選自由以下組成之群之手術：腹腔鏡手術、機器人手術、機器人腹腔鏡手術及開放式手術。
在一個實施例中，本發明提供用於腎輸尿管成像之方法，其包含將式2化合物投與個體；及檢測來自該化合物之螢光輻射。
在一個實施例中，該方法包括在投與長達大約6小時後，與所投與式2化合物在脾臟、腸、心臟、肺、肌肉或其組合中之一或多者中 之經量測螢光強度相比，所投與式2化合物在肝中之經量測螢光強度較高。
在一個實施例中，醫藥組合物包含診斷成像量之式1化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑。
在一個實施例中，包含診斷成像量之式1化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物係包含於靜脈輸注(IV)袋中。
在一個實施例中，醫藥組合物包含診斷成像量之式2化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑。
在一個實施例中，包含診斷成像量之式2化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物係包含於靜脈輸注(IV)袋中。
在一個實施例中，本發明包括套組，該套組含有醫藥組合物，該醫藥組合物包含診斷成像量之式1化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑；及使用說明手冊或使用說明。該醫藥組合物可包含於靜脈輸注(IV)袋中。
在其他實施例中，本發明包括套組，該套組含有醫藥組合物，該醫藥組合物包含診斷成像量之式2化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑；及使用說明手冊或使用說明。該醫藥組合物可包含於靜脈輸注(IV)袋中。
在實施例中，本發明包括物質之組合物，其包含：式2之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-苯氧基環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽：
Figure 104139216-A0202-12-0011-5
或其溶劑合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子。
其他實施例、態樣及目標在結合以下詳細說明及附圖閱讀時將變得更好理解。
在每一圖中，800CW對應於比較實例1中所闡述之化合物；800BK-磺酸鹽係指式1化合物；800BK-NOS係指式2化合物。
圖1A-1F顯示5個試樣之X-射線粉末繞射(XRPD)圖案。圖1A及1C中所示之試樣代表形式A。圖1B係形式A，但結晶較少。圖1D及1E顯示結晶形式A之XRPD圖案。圖1F顯示非晶形之XRPD。
圖2A及2B圖解說明針對A549細胞(A)及A431細胞(B)之活體外基於細胞之分析。圖2C顯示螢光隨所製備用於活體內成像之每一染料之濃度(0.03-1μM)之變化。
圖3A-C圖解說明小鼠對於比較實例1之化合物(A)、式1化合物(B)及式2化合物(C)探針之背側視圖螢光影像。呈現探針投與後之多個大概時間點之影像：30分鐘、2小時、5小時及24小時。將Pearl®脈衝式小動物成像系統用於所有動物及器官影像獲取。
圖4A-C圖解說明相同小鼠對於比較實例1之化合物(圖4A)、式1化合物(圖4B)及式2化合物探針(圖4C)之腹側視圖螢光影像。呈現探針投與後之多個大概時間點之影像：30分鐘、2小時、5小時及24小 時。箭頭突出膀胱區域性膀胱信號。白色箭頭指向膽囊信號。
圖5圖解說明圖4之比較實例1之化合物、式1化合物及式2化合物探針之影像的全身螢光強度數量。
圖6A-D顯示針對比較實例1之化合物(A)、式2化合物(B)、式1化合物(C)：肝、脾臟、腸、心臟/肺、腎、腦及肌肉(D)之小鼠器官的螢光數據。對於所有探針，將螢光信號(800nm)調整為面積(像素)。
圖7圖解說明在投與式1化合物探針後在小鼠中捕獲之輸尿管、腎及膀胱之影像。
圖8A-B以所選蛋白質之經著色電泳凝膠之直方圖圖解說明探針之螢光檢測，其顯示所指定染料對人類(H)、牛(B)、卵白蛋白(O)或5% FBS(胎牛血清)(8A)之非特異性或親和性。在經著色電泳凝膠之螢光影像中，深灰色代表來自所檢查化合物之信號，淺灰色代表蛋白質負載之考馬斯藍(Coomassie Blue)評估且白色代表兩種色彩駐留之位置(8B)。
圖9圖解說明關於對照試樣(無探針)、式1化合物、式2化合物及綠靛花青(ICG)染料之小鼠尿液之螢光信號(800nm)分析。
圖10A、10B、10C、10D及10E圖解說明針對以下之膽道成像：50奈莫耳ICG之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)溶液(圖10A)、1奈莫耳式2化合物之PBS溶液(圖10B)、0.5奈莫耳式2化合物之PBS溶液(圖10C)及0.1奈莫耳式2化合物之PBS溶液(圖10D及10E)。針對每一條件所展示之成像區域分別係在1分鐘、30分鐘、2小時、5小時及24小時時(自左至右)記錄。
圖11A-11H顯示投與之後各種小鼠器官之影像。比較對照(圖11A)、式1化合物(圖11C及11E)及式2化合物(圖11B及11D)投與24及72小時後各種小鼠器官之螢光影像。所檢查之器官包括：心臟(Ht)、肺(Ln)、腎(Kd)、肝(Lv)、脾臟(Spl)、腸(Int)、腦(Br)及肌肉(Ms)。在24 小時時，肝及腎中保留一些信號，但經過72小時信號實質上減弱。圖11F-11H顯示式2化合物(0.1奈莫耳)之肝、膽囊及膽管之手術中螢光(800nm，式2化合物)(圖11G)、白光(圖11F)及複合影像(圖11H)。
圖12顯示所注射染料溶液-800CW、800BK-磺酸鹽(式1化合物；800BK或BK)及800BK-NOS(式2化合物；800NOS或NOS)之斑點測試。
圖13A-13C顯示注射有所測試染料中之一者之代表性小鼠之整個動物的背側及腹側視圖成像。圖之每一面板顯示注射15分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時及24小時後動物之背側及腹側視圖。圖13A、圖13B及圖13C中分別顯示注射有800CW染料、800NOS染料及800BK染料之動物。
圖14顯示整個動物LUT標度、器官1/10th LUT標度及器官1/100th LUT標度。
圖15A-15D顯示在器官1/10th LUT標度上之腎(左下角)、肝(右下角)、肺(左上角)及肌肉(右上角)之信號強度。來自注射有無探針(對照)、800CW染料、800NOS染料及800BK染料之器官分別顯示於圖15A、圖15B、圖15C及圖15D中。
圖16A-16D顯示在器官1/100th LUT標度上之腎(左下角)、肝(右下角)、肺(左上角)及肌肉(右上角)之信號強度。來自注射有無探針(對照)、800CW染料、800NOS染料及800BK染料之器官分別顯示於圖16A、圖16B、圖16C及圖16D中。
I.定義
術語「一(a,an)」或「該(the)」如本文中所用既包括具有一個成員之態樣，亦包括具有多於一個成員之態樣。舉例而言，包含使用如本文所闡述化合物之成像方法之實施例將包含其中使用兩種或更多種 本文所述化合物之方法的態樣。
如本文所用修飾數值之術語「大約」或「約」指示圍繞彼值之界定範圍。若「X」係該值，則「大約X」或「大約X」將指示自0.9X至1.1X之值，且更佳地自0.95X至1.05X之值。對「大約X」或「大約X」之任何提及特定指示至少值X、0.95X、0.96X、0.97X、0.98X、0.99X、1.01X、1.02X、1.03X、1.04X及1.05X。舉例而言，「大約X」或「約X」意欲教示且提供關於(例如)「0.98X」之請求限制之書面描述支持。
當數量「X」僅允許整數值(例如，「X個碳」)且X至多15時，「約X」指示(X-1)至(X+1)。在此情形中，本文所用之「約X」特定指示至少值X、X-1及X+1。若X為至少16，則0.90X及1.10X之值舍入為最接近的整數值以界定範圍之邊界。
當應用修飾詞「大約」或「約」以闡述數值範圍之開始時，則應用於範圍之兩個端點。因此，「大約700至850nm」等效於「大約700nm至大約850nm」。因此，「約700至850nm」等效於「約700nm至約850nm」。當應用「大約」或「約」來闡述一組值之第一值時，其應用於彼組中之所有值。因此，「約680、700或750nm」等效於「約680nm、約700nm或約750nm」。
如本文所用「平衡電荷」包括在標準生理條件下化合物及其相關反離子之靜電荷為零之狀況。為達成平衡電荷，熟習此項技術者應瞭解在平衡吲哚啉鎓環之+1電荷的第一額外磺酸根基之後，必須添加陽離子反離子(例如，I族金屬(例如鈉)之陽離子)以平衡來自額外磺酸根基之負電荷。類似地，必須添加陰離子反離子以平衡任何額外陽離子基團(例如，在生理條件下之最基本胺基)。
II.實施例
儘管本文顯示並闡述本發明之較佳實施例，但該等實施例僅以 實例的方式提供且並不意欲以其他方式限制本發明之範圍。在實踐本發明時可採用關於本發明之所述實施例的各種替代方案。
花青染料之一些優點包括：(1)花青染料強烈吸收光並發射螢光；(2)許多花青染料在螢光顯微鏡下不會快速光漂白；(3)許多結構及合成程序係可用的且染料之類型係多種多樣的；且(4)花青染料相對較小(典型分子量為約1,000道爾頓(dalton))，因此其不會造成明顯空間干擾。
一般而言，花青染料係根據Hamer,F.M.,Cyanine Dyes and Related Compounds,Weissberger,Mass.編輯，Wiley Interscience,N.Y.1964中教示之程序合成。舉例而言，美國專利第6,663,847號；第6,887,854號；第6,995,274號；第7,504,089號；第7,547,721號；第7,597,878號及第8,303,936號(以引用的方式併入)闡述各種花青染料之合成原理。
已知含有反應性官能基之其他花青染料。舉例而言，美國專利第4,337,063號；第4,404,289號及第4,405,711號(以引用的方式併入)闡述具有N-羥基琥珀醯亞胺活性酯基團之各種花青染料的合成。美國專利第4,981,977號(以引用的方式併入)闡述具有羧酸基團之花青染料的合成。美國專利第5,268,486號(以引用的方式併入)揭示製備芳基磺酸鹽花青染料之方法。美國專利第6,027,709號(以引用的方式併入)揭示製備具有亞磷醯胺基團之花青染料的方法。美國專利第6,048,982號(以引用的方式併入)揭示製備具有選自由以下組成之群之反應性基團之花青染料的方法：異硫氰酸酯、異氰酸酯、亞磷醯胺、單氯三嗪、二氯三嗪、單或二鹵素取代之吡啶、單或二鹵素取代之二嗪、氮丙啶、磺醯鹵、醯鹵、羥基琥珀醯亞胺酯、羥基磺基琥珀醯亞胺酯、醯亞胺酯、乙二醛及醛。
如本文所述，本發明提供具有式1之化合物的花青染料的使用：
Figure 104139216-A0202-12-0016-6
或其溶劑合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子。
在一個實施例中，本發明提供固體形式(多晶型物)，其係式1之形式A。式1之形式A具有在約4.3°處包含峰(以2-θ表示)之X-射線粉末繞射圖案。形式A具有在約4.3°、約9.6°、約12.9°、約18.3°及約20.8°處包含峰(以2-θ表示)之X-射線粉末繞射圖案。形式A具有實質上如圖1E中所示之X-射線粉末繞射圖案。
在某些態樣中，本發明之多晶型物在投與個體之前調配成組合物。
式1化合物可以結晶或非結晶形式或作為其混合物存在。對於本發明呈結晶形式之鹽而言，熟習此項技術者應瞭解可形成醫藥上可接受之溶劑合物，其中在結晶期間溶劑分子併入晶格中。溶劑合物可涉及非水性溶劑，例如乙醇、異丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺及乙酸乙酯。在一個實施例中，本發明提供併入晶格中之式1化合物之鈉鹽。
在一個態樣中，本發明提供呈分離或純形式之式1化合物之多晶型物。「經分離」或「純」或「實質上純」形式係指其中相對於試樣中可存在之其他材料多晶型物係以>75%、具體地>90%、>91%、>92%、>93%、>94%、>95%、>96%、>97%、>98%或>99%之量存在之試樣。
根據本發明方法製得之多晶型物可藉由此項技術之任何方法來 表徵。舉例而言，根據本發明方法製得之多晶型物可藉由X-射線粉末繞射(XRPD)、差示掃描量熱法(DSC)、熱重分析(TGA)、熱載臺顯微鏡及光譜法(例如，拉曼(Raman)、固態核磁共振(ssNMR)及紅外線(IR))來表徵。
XRPD
本發明之多晶型物可藉由X-射線粉末繞射圖案(XRPD)來表徵。XRPD峰之相對強度可端視試樣製備技術、試樣安裝程序及所採用具體儀器而變。而且，儀器變化及其他因素可影響2θ值。因此，XRPD峰指派可變化±約0.2度。
本發明之多晶型形式可用於成像劑之製備且可借助結晶製程獲得以產生結晶及半結晶形式。在各個實施例中，結晶係藉由在反應混合物中生成式1化合物並自反應混合物分離期望多晶型物、或藉由將原始化合物溶解於溶劑中、視情況加熱、隨後藉由冷卻(包括主動冷卻)及/或藉由添加反溶劑達一定時期使產物結晶/固化來製備。結晶之後可在受控條件下實施乾燥，直至在最終多晶型形式中達到期望水含量為止。
在另一實施例中，本發明提供製備式1化合物之多晶型物(形式A)之方法。在各個實施例中，本發明係關於製備式1化合物之多晶型物的方法，其中該方法涉及將非晶形轉化成期望多晶型物。在某些實施例中，該等方法包含將包含非晶形之組合物暴露於足以將非晶形之總量的至少約50%轉化成至少約50%期望多晶型物之條件，並視需要分離期望多晶型物。
在某些情況中，結晶固體將比非晶形固體更適於純化且結晶形式能夠以較高純度製備。此係因為，在適當條件下，晶體之形成傾向於自固體排除雜質，與此相比非晶形固體係以較少控制方式形成。類似地，結晶固體通常將具有比非晶形固體更好之穩定性，此乃因晶體 堆積給出保護性效應。對於為多晶型之材料而言，一些晶體形式在排除雜質及增強穩定性方面正常地將比其他形式更有效。
在一個實施例中，本發明提供根據式2之組合物：
Figure 104139216-A0202-12-0018-7
或其水合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子。
本發明之一個實施例包括用於器官成像之方法，其包含：向個體投與診斷有效量之式1之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-(4-磺酸根基苯氧基)環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽化合物：
Figure 104139216-A0202-12-0018-8
或其溶劑合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子，其中該投與係在選自由以下組成之群之一或多個時間實施：手術之前、手術期間、手術之後及其組合；將個體之器官系統的組織暴露於電磁輻 射；及檢測來自該化合物之螢光輻射。在一個實施例中，器官包括腎、膀胱、肝、脾臟、腸、心臟、肺及肌肉中之一或多者。在一個實施例中，器官係腎、膀胱或其組合。在另一實施例中，器官係腎之輸尿管。
在一個實施例中，該方法包括經靜脈內投與式1化合物。式1化合物可作為濃注(bolus injection)(例如靜脈內濃注)投與。在一些實施例中，約5mL至約10mL包含式1化合物之組合物係在一次濃注中投與。
在一個實施例中，該方法包括投與式1化合物，其中該醫藥上可接受之陽離子係選自由鉀或鈉組成之群。
在一個實施例中，該方法包括投與式1化合物與醫藥上可接受之載劑之組合，該醫藥上可接受之載劑選自由以下組成之群：無菌生理鹽水溶液、無菌水溶液、無熱原水溶液、等滲鹽水溶液及磷酸鹽緩衝溶液。
該式1化合物可高度溶於水。在一些實施例中，式1化合物重新懸浮於水中達至少200mg/mL、或約300mg/mL至約320mg/mL之濃度。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約3000.0μg/kg與大約1500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1500.0μg/kg與大約1000.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1000.0μg/kg與大約500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約500.0μg/kg與大約170.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約170.0μg/kg與大約 120.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約120.0μg/kg與大約60.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約30.0μg/kg與大約500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式1化合物。
式1化合物可係無毒的。其可吸收光並發射螢光，且在螢光成像下不會快速光漂白。在投與時，式1化合物可經由個體中體液之自然流動輸送至該個體之組織及器官。如此，式1化合物可自投與位點攜帶或輸送至期望位點、組織及器官用於(例如)可視化。
在某些實施例中，本文之化合物及方法可使膽道成像，膽道包括肝、膽囊、脾臟、小腸及相關導管之任一部分。在某些情況中，膽道包括肝內膽管、膽囊管-膽囊至膽總管及膽總管-肝及膽囊至小腸。在一些情況中，本文之化合物在投與一定時期之後在個體之膽汁或尿液中發現。本發明提供在尿液或膽汁中之式1或2化合物之組合物。
在某些態樣中，該等方法提供式1或2之化合物於尿液或膽汁中之可視化。
在一個實施例中，該方法包括在投與一定時期後量測個體器官之組織處剩餘之所投與式1化合物之螢光強度。在一個實施例中，器官包括腎、膀胱、肝、膽囊、脾臟、腸、心臟、肺及肌肉中之一或多者。在一個實施例中，器官係腎、膀胱或組合。在另一實施例中，器官係腎之輸尿管。在一些實施例中，該方法包括在投與一定時期後量測個體之尿液或膽汁中剩餘之所投與式1化合物之螢光強度。
在一個實施例中，該方法包括在投與大約24小時後所投與式1化合物之經量測螢光強度係背景螢光。
在一個實施例中，該方法包括選自由以下組成之群之手術：腹腔鏡手術、機器人手術、機器人腹腔鏡手術、內窺鏡手術及開放式手 術。
在一個實施例中，該方法包括在投與長達大約6小時後，與所投與式1化合物在脾臟、腸、心臟、肺、肌肉或其組合中之一或多者中之經量測螢光強度相比，所投與式1化合物在腎中之經量測螢光強度較高。
在一個實施例中，醫藥組合物包含診斷成像量之式1化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑。
在另一實施例中，一種用於器官成像之方法，其包含：向個體投與診斷有效量之式2之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-苯氧基環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽：
Figure 104139216-A0202-12-0021-9
或其溶劑合物或多晶型物且具有醫藥上可接受之陽離子，其中該投與係在選自由以下組成之群之一或多個時間實施：手術之前、手術期間、手術之後及其組合；將個體之器官系統的組織暴露於電磁輻射；及檢測來自該化合物之螢光輻射。在一個實施例中，器官包括腎、膀胱、肝、脾臟、腸、心臟、肺及肌肉中之一或多者。在一個實施例中，器官係肝。在一個實施例中，器官係肝之膽管。在一個實施例中，器官係肝之膽囊管。
在一個實施例中，該方法包括經靜脈內投與式2化合物。式2化 合物可作為濃注(例如靜脈內濃注)投與。在一些實施例中，在一次濃注中投與約5mL至約10mL包含式2化合物之組合物。
在一個實施例中，該方法包括投與式2化合物，其中該醫藥上可接受之陽離子係選自由鉀或鈉組成之群。
在一個實施例中，該方法包括投與式2化合物與醫藥上可接受之載劑之組合，該醫藥上可接受之載劑選自由以下組成之群：無菌生理鹽水溶液、無菌水溶液、無熱原水溶液、等滲鹽水溶液及磷酸鹽緩衝溶液。
式2化合物可高度溶於水中。在一些實施例中，式2化合物重新懸浮於水中達至少200mg/mL、約300mg/mL或約320mg/mL之濃度。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約3000.0μg/kg與大約1500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1500.0μg/kg與大約1000.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約1000.0μg/kg與大約500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約500.0μg/kg與大約170.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約170.0μg/kg與大約120.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約120.0μg/kg與大約60.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
在一個實施例中，該方法包括以在介於大約30.0μg/kg與大約500.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量投與式2化合物。
式2化合物可係無毒的。其可吸收光並發射螢光，且在螢光成像下不會快速光漂白。在投與時，式2化合物可經由個體中體液之自然 流動輸送至該個體之組織及器官。如此，式2化合物可自投與位點攜帶或輸送至期望位點、組織及器官用於(例如)可視化。
在一個實施例中，該方法包括在投與一定時期後量測個體之器官系統之組織處剩餘之所投與式2化合物之螢光強度。在一個實施例中，器官包括腎、膀胱、肝、膽囊、脾臟、腸、心臟、肺及肌肉中之一或多者。在一個實施例中，器官係肝。在另一實施例中，器官係肝之膽管。在一個實施例中，器官係肝之膽囊管。在一些實施例中，該方法包括在投與一定時期後量測個體之尿液或膽汁中剩餘之所投與式2化合物之螢光強度。
在一個實施例中，該方法包括在投與大約24小時後所投與式2化合物之經量測螢光強度係背景螢光。
在一個實施例中，該方法包括選自由以下組成之群之手術：腹腔鏡手術、機器人手術、機器人腹腔鏡手術、內窺鏡手術及開放式手術。
在一個實施例中，該方法包括在投與長達大約6小時後，與所投與式2化合物在脾臟、腸、心臟、肺、肌肉或其組合中之一或多者中之經量測螢光強度相比，所投與式2化合物在肝中之經量測螢光強度較高。
在一個實施例中，醫藥組合物包含診斷成像量之式2化合物、醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑。
在一些實施例中，式1化合物或式2化合物之醫藥組合物係以診斷有效量與醫藥上可接受之陽離子及醫藥上可接受之載劑組合。在該等實施例中，醫藥組合物包含於靜脈滴注袋中。
在所選實施例中，式1化合物及式2化合物中每一者之診斷有效量獨立地小於(例如)3000.0、2800.0、2600.0、2400.0、2200.0、2000.0、1800.0、1600.0、1400.0、1200.0、1000.0、950.0、900.0、 850.0、800.0、750.0、700.0、650.0、600.0、550.0、500.0、490.0、480.0、470.0、460.0、450.0、440.0、430.0、420.0、410.0、400.0、390.0、380.0、370.0、360.0、350.0、340.0、330.0、320.0、310.0、300.0、290.0、280.0、270.0、260.0、250.0、240.0、230.0、220.0、210.0、200.0、190.0、180.0、170.0、160.0、150.0、140.0、130.0、120.0、110.0、100.0、95.0、90.0、85.0、80.0、75.0、70.0、65.0、60.0、55.0、50.0、49.0、48.0、47.0、46.0、45.0、44.0、43.0、42.0、41.0、40.0、39.5、39.0、38.5、38.0、37.5、37.0、36.5、36.0、35.5、35.0、34.5、34.0、33.5、33.0、32.5、32.0、31.5、31.0、30.9、30.8、30.7、30.6、30.5、30.4、30.3、30.2、30.1μg/kg。
在所選實施例中，式1化合物及式2化合物中每一者之診斷有效量獨立地大於(例如)2800.0、2600.0、2400.0、2200.0、2000.0、1800.0、1600.0、1400.0、1200.0、1000.0、950.0、900.0、850.0、800.0、750.0、700.0、650.0、600.0、550.0、500.0、490.0、480.0、470.0、460.0、450.0、440.0、430.0、420.0、410.0、400.0、390.0、380.0、370.0、360.0、350.0、340.0、330.0、320.0、310.0、300.0、290.0、280.0、270.0、260.0、250.0、240.0、230.0、220.0、210.0、200.0、190.0、180.0、170.0、160.0、150.0、140.0、130.0、120.0、110.0、100.0、95.0、90.0、85.0、80.0、75.0、70.0、65.0、60.0、55.0、50.0、49.0、48.0、47.0、46.0、45.0、44.0、43.0、42.0、41.0、40.0、39.5、39.0、38.5、38.0、37.5、37.0、36.5、36.0、35.5、35.0、34.5、34.0、33.5、33.0、32.5、32.0、31.5、31.0、30.9、30.8、30.7、30.6、30.5、30.4、30.3、30.2、30.1、30.0μg/kg。
在所選實施例中，式1化合物及式2化合物中每一者之診斷有效 量獨立地在以下範圍內：大約30.0μg/kg至大約3000.0μg/kg、大約30.1μg/kg至大約2800.0μg/kg、大約30.2μg/kg至大約2600.0μg/kg、大約30.3μg/kg至大約2400.0μg/kg、大約30.4μg/kg至大約2200.0μg/kg、大約30.5μg/kg至大約2000.0μg/kg、大約30.6μg/kg至大約1800.0μg/kg、大約30.7μg/kg至大約1600.0μg/kg、大約30.8μg/kg至大約1400.0μg/kg、大約30.9μg/kg至大約1200.0μg/kg、大約31.0μg/kg至大約1000.0μg/kg、大約31.5μg/kg至大約950.0μg/kg、大約32.0μg/kg至大約900.0μg/kg、大約32.5μg/kg至大約850.0μg/kg、大約33.0μg/kg至大約800.0μg/kg、大約33.5μg/kg至大約750.0μg/kg、大約34.0μg/kg至大約700.0μg/kg、大約34.5μg/kg至大約650.0μg/kg、大約35.0μg/kg至大約600.0μg/kg、大約35.5μg/kg至大約550.0μg/kg、大約36.0μg/kg至大約500.0μg/kg、大約36.5μg/kg至大約490.0μg/kg、大約37.0μg/kg至大約480.0μg/kg、大約37.5μg/kg至大約470.0μg/kg、大約38.0μg/kg至大約460.0μg/kg、大約38.5μg/kg至大約450.0μg/kg、大約39.0μg/kg至大約440.0μg/kg、大約39.5μg/kg至大約430.0μg/kg、大約40.0μg/kg至大約420.0μg/kg、大約41.0μg/kg至大約410.0μg/kg、大約42.0μg/kg至大約400.0μg/kg、大約43.0μg/kg至大約390.0μg/kg、大約44.0μg/kg至大約380.0μg/kg、大約45.0μg/kg至大約370.0μg/kg、大約46.0μg/kg至大約360.0μg/kg、大約47.0μg/kg至大約350.0μg/kg、大約48.0μg/kg至大約340.0μg/kg、大約49.0μg/kg至大約330.0μg/kg、大約50.0μg/kg至大約320.0μg/kg、大約55.0μg/kg至大約310.0μg/kg、大約60.0μg/kg至大約300.0μg/kg、大約65.0μg/kg至大約290.0μg/kg、大約70.0μg/kg至大約280.0μg/kg、大約75.0μg/kg至大約270.0μg/kg、大約80.0μg/kg至大約260.0μg/kg、大約85.0μg/kg至大約250.0μg/kg、大約90.0μg/kg至大約240.0μg/kg、大約95.0μg/kg至大約230.0μg/kg、大 約100.0μg/kg至大約220.0μg/kg、大約110.0μg/kg至大約210.0μg/kg、大約120.0μg/kg至大約200.0μg/kg、大約130.0μg/kg至大約190.0μg/kg、大約140.0μg/kg至大約180.0μg/kg及大約150.0μg/kg至大約170.0μg/kg。
在一個實施例中，式1化合物之診斷有效量係在大約3000.0μg/kg至大約1500.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式1化合物之診斷有效量係在大約1500.0μg/kg至大約1000.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式1化合物之診斷有效量係在大約1000.0μg/kg至大約500.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式1化合物之診斷有效量係在大約500.0μg/kg至大約170.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式1化合物之診斷有效量係在大約170.0μg/kg至大約120.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式1化合物之診斷有效量係在大約120.0μg/kg至大約60.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式1化合物之診斷有效量係在大約30.0μg/kg至大約500.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式2化合物之診斷有效量係在大約3000.0μg/kg至大約1500.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式2化合物之診斷有效量係在大約1500.0μg/kg至大約1000.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式2化合物之診斷有效量係在大約1000.0μg/kg至大約500.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式2化合物之診斷有效量係在大約500.0μg/kg至大約170.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式2化合物之診斷有效量係在大約170.0μg/kg至大約120.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式2化合物之診斷有效量係在大約120.0μg/kg至大約60.0μg/kg之範圍內。
在一個實施例中，式2化合物之診斷有效量係在大約30.0μg/kg至大約500.0μg/kg之範圍內。
本發明之式1化合物及式2化合物中每一者之診斷有效量在寬劑量範圍內係有效的。準確劑量將取決於投與途徑、每一化合物投與之形式、欲治療個體之性別、年齡及體重及投與者之偏好及經驗。
在所選實施例中，所投與式1化合物及所投與式2化合物中每一者之螢光強度可在(例如)以下時期獨立地量測：投與後小於24小時、23小時、22小時、21小時、20小時、19小時、18小時、17小時、16小時、15小時、14小時、13小時、12小時、11小時、10小時、9.5小時、9.0小時、8.5小時、8.0小時、7.5小時、7.0小時、6.5小時、6.0小時、5.5小時、5.0小時、4.75小時、4.50小時、4.25小時、4.00小時、3.75小時、3.50小時、3.25小時、3.00小時、2.75小時、2.50小時、2.25小時、2.00小時、1.75小時、1.50小時、1.25小時、1.00小時、0.90小時、0.80小時、0.70小時、0.60小時、0.50小時、0.40小時、0.30小時、0.20小時。
在所選實施例中，所投與式1化合物及所投與式2化合物中每一者之螢光強度可在(例如)以下時期獨立地量測：投與後大於23小時、22小時、21小時、20小時、19小時、18小時、17小時、16小時、15小時、14小時、13小時、12小時、11小時、10小時、9.5小時、9.0小時、8.5小時、8.0小時、7.5小時、7.0小時、6.5小時、6.0小時、5.5小時、5.0小時、4.75小時、4.50小時、4.25小時、4.00小時、3.75小時、3.50小時、3.25小時、3.00小時、2.75小時、2.50小時、2.25小 時、2.00小時、1.75小時、1.50小時、1.25小時、1.00小時、0.90小時、0.80小時、0.70小時、0.60小時、0.50小時、0.40小時、0.30小時、0.20小時、0.10小時。
在所選實施例中，所投與式1化合物及所投與式2化合物中每一者之螢光強度可在以下範圍內之時期獨立地量測：投與後大約0.10小時至大約24小時、大約0.20小時至大約23小時、大約0.30小時至大約22小時、大約0.40小時至大約21小時、大約0.50小時至大約20小時、大約0.60小時至大約19小時、大約0.70小時至大約18小時、大約0.80小時至大約17小時、大約0.90小時至大約16小時、大約1.00小時至大約15小時、大約1.25小時至大約14小時、大約1.50小時至大約13小時、大約1.75小時至大約12小時、大約2.00小時至大約11小時、大約2.25小時至大約10小時、大約2.50小時至大約9.5小時、大約2.75小時至大約9.0小時、大約3.00小時至大約8.5小時、大約3.25小時至大約8.0小時、大約3.50小時至大約7.5小時、大約3.75小時至大約7.0小時、大約4.00小時至大約6.5小時、大約4.25小時至大約6.0小時、大約4.50小時至大約5.5小時、大約4.75小時至大約5.0小時。
在本文所述方法之實施例中，試樣利用所選光之波長照射以獲得可檢測光反應，並利用用於檢測該光反應之構件進行觀察。可用於照射本發明之染料化合物之儀器包括(但不限於)鎢燈、手持式紫外燈、汞弧燈、氙燈、發光二極體(LED)、雷射及雷射二極體。該等照射源視情況整合於外科手術用相機、腹腔鏡及顯微鏡中。本發明之較佳實施例係可在或接近波長633-636nm、647nm、660nm、680nm及超過700nm(例如780nm、810nm及850nm)下激發之染料，此乃因該等區域密切匹配相對便宜激發源之輸出。光學反應視情況藉由肉眼檢查、或藉由使用以下裝置中之任一者檢測：CCD相機、攝像機、照相膠片。
所用之NIR成像探針係式1化合物；激發773nm及發射790nm或獨立地式2，激發772nm及發射787nm。
本文所述之式1化合物及式2化合物可以與劑量調配物相容之方式且以將有效或適於活體內成像之量投與。所投與之數量取決於多種因素，包括，例如個體之年齡、體重、身體活動及飲食、欲成像之組織或器官及欲執行之手術或外科手術之類型。在某些實施例中，劑量之大小亦可由具體個體中伴隨化合物投與之任何不利負效應之存在、性質及程度來決定。
然而，應瞭解，用於任一具體患者之特定劑量量及給藥頻率可不同且將取決於各種因素，包括所用特定化合物之活性、彼化合物之代謝穩定性及作用時間長度、年齡、體重、整體健康狀況、性別、飲食、投與模式及時間、排泄速率、藥物組合、具體病況之嚴重程度及接受治療之主體。
在某些實施例中，劑量可呈固體、半固體形式或凍乾粉末形式，較佳成適於簡單投與精確劑量之單位劑型。在一些實施例中，劑量係以用於一或多次投與之具體劑量提供於容器、小瓶或注射器中。
如本文所用，術語「單位劑型」係指適於作為單一劑量用於人類及其他動物之物理離散單元，每一單元含有經計算以產生期望開始、耐受性及/或螢光效應之預定量之成像劑與適宜醫藥賦形劑之組合(例如，安瓿)。此外，可製備較濃之劑型，然後可自其產生較稀之單位劑型。因此，較濃劑型將含有實質上超出(例如)至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多倍之量的成像劑。
製備該等劑型之方法已為熟習此項技術者已知(參見例如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版，Mack Publishing公司，Easton,PA(1990))。劑型通常包括習用醫藥載劑或賦形劑且可另外包括其他醫藥劑、載劑、佐劑、稀釋劑、組織滲透增強 劑、增溶劑及諸如此類。適當賦形劑可藉由此項技術中已知之方法針對具體劑型及投與途徑來調整(參見例如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版，Mack Publishing Co.,Easton,PA(1990))。
在某些實施例中，劑型含有穩定劑用於化合物之儲存、分離、純化及/或凍乾。用於凍乾之試劑包括(但不限於)糖，例如單糖、二糖或右旋糖酐。其他糖包括葡萄糖、半乳糖、木糖、葡糖醛酸、海藻糖、右旋糖酐、羥乙基澱粉、甘露醇或5%右旋糖。
對於非經腸投與(例如靜脈內注射，動脈內注射、皮下注射，肌肉注射及諸如此類)，有效劑量可呈無菌可注射溶液及無菌經包裝粉末之形式。較佳地，可注射溶液係在約4.5至約7.5之pH或生理pH下調配。
在一些實施例中，用於成像之有效劑量含有本文所述呈在室溫下穩定數月之高品質、易溶解形式之凍乾化合物。式1或式2之凍乾化合物可儲存於任何適宜形式之密封容器中，例如含有用於個體(例如成年人)之單一劑量之量之化合物的密封小瓶或注射器。術語「小瓶」在本文中廣泛使用，係指經設計且適於密封劑無菌儲存、運輸及處置少量(例如，單一劑量)藥物之任何藥物包裝裝置。單腔室小瓶(其將僅含有凍乾化合物，沒有水)係眾所周知的；典型單腔室小瓶可經設計與靜脈內輸注袋一起使用。另一選擇為，可使用含有凍乾化合物及無菌水溶液之二腔室小瓶，以能夠立即重構並注射含有式1或式2化合物之水性液體。
本文提供含有式1化合物或式2化合物之套組。在一些實施例中，套組包含一或多個含有呈(例如)凍乾形式之式1化合物之小瓶或注射器。在其他實施例中，套組包含一或多個含有呈(例如)凍乾形式之式2化合物之小瓶或注射器。該等套組亦可包括醫藥上可接受之載 劑或無菌水溶液，例如在投與之前用於重構化合物之無菌水。在一些情形中，套組亦包括用於非經腸投與化合物或與靜脈內輸注袋一起使用之無菌注射器。套組亦可包括使用說明手冊。
當在本文中使用範圍時，範圍之所有組合及子組合及本文特定實施例均意欲包括在內。在提及數量或數值範圍時，術語「大約」意指所提及之數量或數值範圍係在實驗可變性內(或統計學實驗誤差內)之近似值，且由此數量或數值範圍可在(例如)所述數量或數值範圍之1%與15%之間變化。術語「包含(comprising)」(及相關術語，例如「(comprise或comprises)」或「具有」或「包括」)包括彼等「由所述特徵組成」或「基本上由所述特徵組成」之實施例。
III.實例 實例1
式1化合物可藉由將3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氫-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-2H-吲哚-2-亞基]-亞乙基]-1-環己烯-1-基]-乙烯基]-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3H-吲哚鎓氫氧化物內鹽三鈉鹽(1g,1.05mmol)溶於25mL水中並用氮氣鼓泡15分鐘來合成。將4-羥基苯磺酸鈉二水合物(875mg,3.77mmol)溶於3.6mL 1N NaOH(3.6mmol)中並添加至反應混合物。將反應混合物置於40℃之油浴中並攪拌16小時。藉由旋轉蒸發將溶液乾燥且然後將產物自80：20乙醇：水重結晶。將化合物過濾，然後用乙醇洗滌並在真空下在60℃下乾燥18小時。
式1化合物之多晶型物(形式A)可如下製備：將3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氫-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-2H-吲哚-2-亞基]-亞乙基]-1-環己烯-1-基]-乙烯基]-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3H-吲哚鎓氫氧化物內鹽三鈉鹽(20g,21mmol)及4-羥基苯磺酸鈉二水合物(5.84g,25.2mmol)之混合物懸浮於水(120ml) 中。將懸浮液加熱至85℃，此時觀察到完全溶解。逐滴添加氫氧化鈉水溶液(10N,2.5ml,25mmol)並將反應攪拌45min。緩慢添加異丙醇(360ml)以維持反應溫度高於60℃。然後將換號玩緩慢冷卻至周圍溫度並將所得漿液過濾。濾餅用40ml異丙醇：水(3：1)沖洗並用40ml異丙醇沖洗兩次並在50-60℃下在真空下乾燥以獲得18.4g呈深綠色固體狀之式1化合物。然後藉由在大約70℃下溶於(50ml)及異丙醇(100ml)中並將混合物緩慢冷卻至周圍溫度來使10克(9mmol)此材料重結晶。藉由過濾收集固體並用20ml異丙醇：水(2：1)沖洗並用20ml異丙醇沖洗兩次並在50-60℃下在真空下乾燥以獲得6.7g呈結晶深綠色固體狀之式1化合物。
形式A之X-射線粉末繞射(XRPD)
XRPD分析係在PANalytical X’pert pro上在3°與35° 2θ之間掃描試樣來實施。將材料輕柔地碾磨並裝載至具有Kapton或mylar聚合物膜以支撐試樣之多孔板上。然後將多孔板加載於以穿透模式運行之Panalytical繞射儀並進行分析。
XRPD數據顯示於圖1A-1F中。如所圖解說明，圖1A及1C相同且係二者均適度結晶且代表形式A。圖1B具有類似結晶度且係形式A。
圖1D係結晶。圖1E係圖1D之放大圖。圖1D及圖1E代表形式A。
圖1F係非晶形。
形式A之固態形式之特徵XRPD角及d-間距彙總彙總於表1。量測峰位置並製表。
Figure 104139216-A0202-12-0033-10
Figure 104139216-A0202-12-0034-12
形式A之固態形式之特徵XRPD角及d-間距彙總彙總於表2。量測峰位置並製表。
Figure 104139216-A0202-12-0034-13
Figure 104139216-A0202-12-0035-14
實例2
式2化合物可藉由將3,3-二甲基-2-[2-[2-氯-3-[2-[1,3-二氫-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-2H-吲哚-2-亞基]-亞乙基]-1-環己烯-1-基]-乙烯基]-5-磺基-1-(4-磺基丁基)-3H-吲哚鎓氫氧化物內鹽三鈉鹽(1g,1.05mmol)溶於25mL水中並用氮氣吹掃15分鐘來合成。將苯酚鈉三水合物(390mg,2.29mmol)溶於2mL超純水中並添加至反應混合物。將反應混合物置於40℃之油浴中並攪拌4小時。藉由旋轉蒸發將溶液乾燥且然後將產物自90：10乙醇：水重結晶。將化合物過濾，然後用乙醇洗滌並在真空下在60℃下乾燥18小時。
比較實例1
比較實例1之化合物(亦稱為800CW)之結構顯示如下：
Figure 104139216-A0202-12-0036-15
綠靛花青(ICG)染料之結構顯示如下：
Figure 104139216-A0202-12-0036-16
實例3：活體外
利用兩個癌細胞系(A431及A549)實施活體外基於細胞之分析以評估式1化合物及式2化合物之非特異性結合。染料與800CW具有可比性。此顯示於圖2A、2B及2C中。
已證實式2化合物與式1化合物及800CW相比非特異性結合增加2倍。式1化合物與800CW更具可比性。
為證實所有三種化合物具有相當之螢光，製得一系列稀釋液並在Odyssey SA螢光成像系統(LI-COR Biosciences)上成像。利用儀器軟體量化每一孔中之螢光。圖2C顯示此測試中之所有三種化合物之螢光極為接近，因此證實在基於板之分析中注意到之在較高濃度下螢光增加可能係由於化合物非特異性結合至細胞之傾向。
一般而言，低非特異性結合係優點。兩個細胞系對於所有化合物而言在低於1μM之濃度下均顯示低非特異性結合。然而，所有在較高濃度下均開始顯示一些結合。
實例4：活體內
使用Pearl脈衝成像系統(LI-COR Biosciences)之800螢光通道使注射有探針之動物隨時間成像。在裸小鼠中實施800CW、式1化合物及式2化合物之清除曲線(所有化合物之劑量為1奈莫耳)。在24小時時期內評價連續影像及切除器官。背側影像系列呈現於圖3。使用Pearl脈衝式小動物成像系統用於所有動物及器官影像獲取。
使用比較實例1之化合物作為參考。根據背側視圖，沒有關於任何探針之腎信號。在注射後2小時時，式2化合物展現在肝區域中發出自背部可見之高信號。由於式2化合物迅速收集於肝中而絕不會完全散播，且在注射5小時後，與800CW及式1化合物相比全身信號降低。
實例5：腹側影像
腹側影像呈現於圖4中。自目視檢查，式1化合物及800CW之清除模式類似。該兩種探針看來經由腎迅速清除。此特徵對於使泌尿系統成像極為有用。
另一方面，式2化合物藉助肝清除。此特徵係膽管監測染料之極有用屬性，其可「模擬」當前用於此臨床應用之ICG。對於活體外基於板之分析，顯示式1化合物及式2化合物具有與800CW類似之螢光強度。然而，根據活體內數據，顯示式1化合物迅速移動穿過組織，但在器官中停留延長時期。
注意到800CW及式1化合物探針之膀胱信號係最強信號(紫色箭頭)。
三種探針之全身螢光數量(腹側視圖)顯示於圖5中。非侵入性成像將不會捕獲關於動物之全深度之信號，但強度值可用於顯示相對趨 勢。
800CW及式1化合物與式2化合物相比具有較低清除率。然而，式2化合物之信號看起來總體低於800CW及式1化合物之信號，其看起來迅速收集於肝中。投與24小時後，所有三種探針之剩餘螢光減弱至大致相同程度。
檢查螢光信號之另一途徑係藉由量測在具體時間點時剩餘化合物之%。30min時間點係基線，其他時間點正規化至該時間點。此數據呈現於下表3中。
Figure 104139216-A0202-12-0038-17
顯示每一時間時剩餘之信號%，其中注射後30min時間點用作基線。
式2化合物在2小時時出現最大減少。式1化合物極類似於800CW，且注射後24小時時所有化合物極為類似，剩餘信號小於基線之2%。
實例6：器官
在24小時時切除器官並使其成像。數據呈現於圖6中。
式1化合物與式2化合物相比在注射後24小時時在肝及腎中保持較高含量。令人驚訝地，主要自肝清除之式2化合物與800CW及式1化合物相比在24小時時具有較低肝信號。此可藉由式1化合物與800CW及式2化合物相比自組織之總體清除較慢來解釋。
在腦中未檢測到800CW或式1化合物或式2化合物且可能係由於 其不能跨越血腦障壁。
圖7圖解說明輸尿管以及腎及膀胱。當投與式1化合物以拍攝腎之輸尿管時，投與後捕獲該區域之影像。
圖8圖解說明所選蛋白質之經著色電泳凝膠之螢光影像，其顯示所指定化合物對人類(H)、牛(B)、卵白蛋白(O)或5% FBS(胎牛血清)之非特異性或親和性。很明顯，式2化合物類似於ICG具有用於膽管檢查之潛力。
實例7：小鼠尿液
由於式1化合物之主要消除途徑係腎，故分析小鼠中之尿液輸出。自接受以下各項之小鼠獲得尿液：無式1化合物及式2化合物(對照)、式1化合物、ICG及式2化合物。尿液用乙腈：甲醇混合物萃取並在Odyssey CLx成像器(LI-COR Biosciences)上成像，如圖9中所示。
未看到對照及ICG之螢光信號。ICG係藉由肝消除，因此無信號在意料之中。式2化合物具有輕微螢光，此表明並不完全排斥肝排泄。
實例8：與ICG之比較
在式2化合物與ICG之間針對其在使膽管成像中之共同應用實施比較(圖10A及10B)。使用Pearl脈衝式小動物成像系統用於所有動物及器官影像獲取。ICG不易溶於水性介質且在活體內給出遠比式2化合物弱之螢光信號。製備50奈莫耳ICG於磷酸鹽緩衝鹽水溶液中之溶液，經靜脈內注射，並與1奈莫耳式2化合物溶液比較在1分鐘、30分鐘、2小時、5小時及24小時之時期時之定位。
在1分鐘、30分鐘、2小時、5小時及24小時之時期時式2化合物之劑量反應之比較顯示於圖10B(1奈莫耳)、圖10C(0.5奈莫耳)及圖10D及10E(0.1奈莫耳)中。除圖10E外，所有影像皆使用相同LUT表呈現，其中圖10D之LUT降低以使800nm信號變亮，而使其可見。
在靜脈內投與1奈莫耳(圖10B)及0.5奈莫耳(圖10C)劑量30min後，膽囊係可見的且在2小時及5小時影像中仍係可見的。圖10D中之0.1奈莫耳劑量之影像使用與1奈莫耳及0.5奈莫耳劑量系列相同之標度看起來顯示極低檢測信號。然而，若標度如圖10E一樣經調整，則膽囊目標區域在極低背景下係可見的。寬劑量範圍可適於具體成像系統或應用。
實例9：切除器官評價
針對式1化合物及式2化合物在24小時及72小時時檢查各種器官之螢光信號強度(圖11A-11E)。所檢查器官包括：心臟(Ht)、肺(Ln)、腎(Kd)、肝(Lv)、脾臟(Spl)、腸(Int)、腦(Br)及肌肉(Ms)。在24小時時，在肝及腎中保留一些信號，但在72小時時該信號實質上減少。
圖11A顯示使用對照(800CW)投與24小時後之結果。
圖11B顯示使用式2化合物投與24小時後之結果。圖11C顯示使用式1化合物投與24小時後之結果。
圖11D-11E分別顯示投與式2及式1後72小時之結果。
圖11F顯示用於測定膽道結構是否可見之非外科手術打開動物。 動物之肝經定位以暴露關鍵結構。圖11F-11H之影像系列呈現肝之白光影像，其中將肝葉提高以暴露膽囊及與卡洛氏三角(Calot’s triangle)相關聯之膽管；800nm影像，如藉由式2化合物之螢光研究所檢測；及在白光影像之頂部覆蓋800nm影像之複合影像。
實例10：小鼠中之消除途徑
此實例闡述評價本文所述之染料自注射該等染料之動物之排泄的實驗。所測試染料係穩定的花青染料(IR染料)：800CW、800BK-磺酸鹽(式1化合物；800BK或BK)及800BK-NOS(式2化合物；800NOS或NOS)。在此研究中，12隻裸小鼠(每治療組3隻)注射(1)無探針(對照組)；(2)800CW；(3)800NOS；或(4)800BK。將三種探針(800CW- 1166g/莫耳(原本為1091.1g/莫耳)、800NOS-1011.09g/莫耳及800BK-1113.14g/莫耳)溶於PBS中。實施三種探針之斑點測試以檢測當稀釋至1奈莫耳/100μl之注射劑量時之螢光信號(圖12)。800CW之螢光稍微高於800NOS及800BK之螢光。
小鼠藉由尾靜脈注射接受1奈莫耳染料。小鼠在IV注射後經24小時連續成像：注射後5分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時及24小時。每一染料一隻動物之一系列代表性影像呈現於圖13A-13C。所有數據均正規化至相同LUT。對照小鼠(無探針)用作參照(無信號對照)。使用Pearl® Trilogy成像系統(LI-COR®)實施成像。
然後將小鼠處死並收穫其器官及組織(即，肝、腎、肺、脾臟及肌肉)。使器官成像以檢測螢光。當動物及器官影像使用相同LUT時，器官中之螢光不可檢測。因此，將動物標度之下限擴大，使得器官之影像可檢測(圖14)。舉例而言，「器官1/10th標度」用於圖15A-15D之影像且「器官1/100th標度」用於圖16A-16D之影像。
圖15A顯示在對照動物之器官中沒有螢光。在經800CW(圖15B)、800NOS(圖15C)及800BK(圖15D)處理之動物中腎(左下角)及肝(右下角)具有可檢測信號。除800CW處理外，在該等處理中肌肉(右上角)或肺組織(左上角)不可見。在1/10th LUT標度下，高位準係整個動物LUT標度之1/10th。數據顯示當在整個動物LUT標度下成像時該等器官中僅保留殘餘染料。
圖16A-D顯示若整個動物LUT標度降至100x使得經調整標度為整個動物標度之1/100th，則在器官中有一些信號。圖16A顯示來自對照動物之信號。圖16B、16C及16D分別顯示來自800CW處理之動物、800NOS處理之動物及800BK處理之動物之器官的信號。
800CW及800BK係以腎方式排泄。800CW動物中之較高總體信號主要係由於意外地將較高濃度之探針注射於動物中。
800NOS係經由膽道(肝、膽囊及膽管)及腸自體內消除。在800NOS處理之動物中，在15分鐘時肝係可見的，且然後隨著染料迅速離開肝膽囊係可見的。數據亦顯示染料移動至腸以排泄。在2小時至6小時之間之主要信號係在腸中。在投與後24小時時，腸信號幾乎不可檢測。
使器官在三個LUT標度下成像；每一者在所覆蓋之信號範圍內逐漸減小。將每一漸進式標度之下限擴大以覆蓋整個紅色至藍色範圍(圖14)。在諸如肝、腎、肺及肌肉之任一目標器官中保留極少信號。對於800CW及800BK在腎中發現類似信號強度。在肝中，800BK與800CW相比具有較高信號。該等結果顯示800BK與800CW及800NOS相比在肝中具有較長停留時間。此可係由於800BK比800CW增加(高)之血漿蛋白結合。
此實例顯示IRDye 800NOS自全身至膽道系統之快速清除，其中在肝中具有極短停留時間且亦迅速排泄至腸中。藉由肝之快速清除暗示800NOS具有低血漿蛋白結合活性。
實例11：子宮切除術期間之輸尿管可視化
將式1之醫藥調配物於含有5mL鹽水(0.9%氯化鈉)之小瓶(25mg)中溶解並在外科手術前15分鐘以5mg/mL之濃度經由濃注投與患者。用於此手術之醫療裝置係PINPOINT內窺鏡螢光成像系統(Novadaq,Mississauga,Ontario,Canada)。在手術期間之任一點，當外科醫師需要鑑別輸尿管時，將裝置之模式切換至近紅外線檢測成像，且外科醫師經由醫療裝置之監測器或顯示器可視化輸尿管。輸尿管之此鑑別係在監測器上作為重疊影像可視化，其中外科醫師可利用白光成像同時定位輸尿管。
實例12：膽囊切除術期間之膽管可視化
將式2之醫藥調配物於含有5mL鹽水(0.9%氯化鈉)之小瓶(25mg) 中溶解並在外科手術開始前15分鐘以5mg/mL之濃度經由濃注投與患者。用於此手術之醫療裝置係da Vinci Firefly外科手術系統(Intuitive Surgical,Sunnyvale CA)。在手術期間，當外科醫師需要鑑別膽管時，將裝置之模式切換至近紅外線檢測成像，且外科醫師經由醫療裝置之監測器或顯示器藉由視需要在白光影像與近紅外線影像之間切換可視化膽管。
應瞭解，本文所述之實例及實施例僅為說明之目的，且基於其之各種修改或改變應為熟習此項技術者所瞭解且欲包括在本申請案之精神與範圍內及隨附申請專利範圍之範疇內。出於各種目的，本文所引用之所有出版物、專利及專利申請案之全部內容皆在此以引用方式併入。
Figure 104139216-A0202-11-0002-1

Claims (20)

  1. 一種診斷有效量之式1之2-((E)-2-((E)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-1-(4-磺酸根基丁基)吲哚啉-2-亞基)亞乙基)-2-(4-磺酸根基苯氧基)環己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-1-(4-磺酸根基丁基)-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸鹽之多晶型化合物之形式A固體形式之用途，
    Figure 104139216-A0305-02-0046-4
     其具有包含在4.3°±0.2°、9.6°±0.2°及12.9°±0.2°處以2-θ表示之峰的X-射線粉末繞射圖案，該用途係用於製備用於個體之腎輸尿管成像之藥劑，其中該藥劑係在選自由以下組成之群之一或多個時間投與：手術之前、手術期間、手術之後及其組合，其中該個體之腎臟系統之組織係暴露於電磁輻射；及來自該化合物之螢光輻射係經偵測。
  2. 如請求項1之用途，其中該投與係經靜脈內實施。
  3. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該化合物係與選自由以下組成之群之醫藥上可接受之載劑組合投與：無菌生理鹽水溶液、無菌水溶液、無熱原水溶液、等滲鹽水溶液及磷酸鹽緩衝溶液。
  4. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該投與係以在介於3000.0 μg/kg與1500.0μg/kg範圍內之該化合物之診斷有效量實施。
  5. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該投與係以在介於1500.0μg/kg與1000.0μg/kg範圍內之該化合物之診斷有效量實施。
  6. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該投與係以在介於1000.0μg/kg與500.0μg/kg範圍內之該化合物之診斷有效量實施。
  7. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該投與係以在介於500.0μg/kg與170.0μg/kg範圍內之該化合物之診斷有效量實施。
  8. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該投與係以在介於170.0μg/kg與120.0μg/kg範圍內之該化合物之診斷有效量實施。
  9. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該投與係以在介於120.0μg/kg與60.0μg/kg範圍內之該化合物之診斷有效量實施。
  10. 如請求項1至2中任一項之用途，其中在投與一定時期後量測該個體之腎臟系統之該組織處剩餘之該所投與化合物之螢光強度。
  11. 如請求項10中任一項之用途，其中該所投與化合物之經量測螢光強度係投與24小時後之背景螢光。
  12. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該手術係選自由以下組成之群：腹腔鏡手術、機器人手術、機器人腹腔鏡手術及開放式手術。
  13. 如請求項10之用途，其中在投與長達6小時後，與該所投與化合物在脾臟、腸、心臟、肺、肌肉或其組合中之一或多者中之經量測螢光強度相比，該所投與化合物在腎中之該經量測螢光強度較高。
  14. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該投與係以在介於500.0μg/kg與30.0μg/kg範圍內之化合物之診斷有效量進行。
  15. 一種式1之形式A固體形式，
    Figure 104139216-A0305-02-0048-3
     其具有包含在4.3°±0.2°、9.6°±0.2°及12.9°±0.2°處以2-θ表示之峰的X-射線粉末繞射圖案。
  16. 如請求項15之式1之形式A固體形式，其進一步具有包含在18.3°±0.2°處以2-θ表示之峰的X-射線粉末繞射圖案。
  17. 如請求項15之式1之形式A固體形式，其進一步具有包含在20.8°±0.2°處以2-θ表示之峰的X-射線粉末繞射圖案。
  18. 如請求項15之式1之形式A固體形式，其具有實質上如圖1E中所示之X-射線粉末繞射圖案。
  19. 如請求項15之式1之形式A固體形式，其中形式A為實質上純的，其係指相對於試樣中可存在之其他材料>75%。
  20. 一種醫藥套組，其包含醫藥組合物及說明手冊，其中該醫藥組合物包含如請求項1所定義之診斷有效量之式1之多晶型化合物之形式A固體形式。
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