TWI726634B - 樹番茄的萃取方法及其組合物 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種樹番茄的萃取方法及樹番茄組合物。所述樹番茄的萃取方法 ，其包含：前處理樹番茄，以獲得原料；乾燥原料，以獲得乾燥物；浸泡乾燥物於水中持續特定時間；過濾經浸泡的乾燥物及水，以獲得粗萃液；加入C1-C4低級醇至粗萃液，以獲得上層膠體；以及乾燥上層膠體，以獲得樹番茄萃取物；其中，水與乾燥物的重量比為2~5：1。

Description

樹番茄的萃取方法及其組合物

本發明係關於一種樹番茄的萃取方法及其組合物，特別是一種能夠有效萃取樹番茄內含之活性成分的萃取方法、以及包含樹番茄萃取物之用於促進傷口癒合的組合物。

因應醫療產業的進步，具發展成藥用潛力的天然植物素材重回世界的舞台。透過天然植物素材多面向之開發與應用，可達成促進傳統醫藥與替代醫學的合理使用。

在眾多天然植物素材中，原產自南美洲安地斯山脈的樹番茄因為產量少、價格高且口感特殊，而甚少在市面上販售，致使樹番茄大多以外銷為主，而使國內甚少人認識此種天然植物素材。但事實上，樹番茄本身含有非常豐富的茄紅素、B胡蘿蔔素、維生素A、維生素C、維生素E、維生素B6、多酚(例如：花青素及其他類黃酮)、鐵質、葉酸、礦物質、微量元素等活性成分。

由於樹番茄所含的活性成分種類繁多，因此樹番茄非常適合用於與醫療產業結合。但是因為甚少人認識此種天然植物素材，所以目前仍缺乏能夠妥善萃取樹番茄的萃取方法，也相應缺乏使用樹番茄萃取物的組合物。

鑒於上述問題，本發明係提供一種樹番茄的萃取方法，其包含：前處理樹番茄，以獲得原料；乾燥原料，以獲得乾燥物；浸泡乾燥物於水中持續特定時間；過濾經浸泡的乾燥物及水，以獲得粗萃液；加入C1-C4低級醇至粗萃液，以獲得上層膠體；以及乾燥上層膠體，以獲得樹番茄萃取物；其中，水與乾燥物的重量比為2~5：1。

可選地，C1-C4低級醇與粗萃液的體積比為0.1~10：1。

可選地，特定時間為8~40小時。

可選地，樹番茄係為 Cyphomandra betaceaSendt.。

可選地，樹番茄係為紅寶樹番茄、黃金樹番茄或其組合。

根據本發明之另一目的，提供一種樹番茄組合物，其包含：前述樹番茄萃取物、包含蘆薈萃取物的蘆薈凝膠、以及高分子增稠劑；其中樹番茄萃取物、蘆薈凝膠、以及高分子增稠劑的重量比為1~20：85~95：5~15。

可選地，高分子增稠劑為Carbopol 940。

本發明之樹番茄的萃取方法及其組合物有下述優點：

首先，本發明之樹番茄的萃取方法係藉由前處理來破壞樹番茄的纖維結構，以使後續萃取時能夠完整的獲取樹番茄的有效成分。同時，本發明之樹番茄的萃取方法透過添加乙醇，而使得溶液分為上下層，並藉由僅取用上層膠體液體的步驟，而得到樹番茄萃取物。

再者，相較於市售藥膏及ㄧ般民眾經常使用的蘆薈凝膠，本發明含有樹番茄萃取物之樹番茄組合物具有更為優良之傷口癒合的功效。此外，本發明之樹番茄組合物含有從天然植物素材之樹番茄內萃取所得之樹番茄萃取物，因此對於不適用於西藥及/或經合成所得之藥物治療之患者而言，其被視為一種良好的替代物。

為使上述目的、技術特徵及實際實施後之效益更易於使本領域具通常知識者所理解，將於下文中以實施例搭配圖式更詳細地說明。

參照第1圖，其係為本發明之樹番茄的萃取方法之流程圖。

步驟S100中，前處理樹番茄，以獲得作為原料之經處理後的樹番茄。前處理可包含清洗、浸泡、擠壓、切碎、壓碎、壓輾、研磨、去皮及任何物理性及/或化學性前處理方式。前處理步驟可促進後續萃取步驟之萃取效果。其中，樹番茄可為 Cyphomandra betaceaSendt.。其中，樹番茄可為紅寶樹番茄(Solanum betaceum Cav. Mora cultivar)、黃金樹番茄(Solanum betaceum Cav. Mango cultivar)或其任意組合。其中，紅寶樹番茄外皮色澤紅潤，剖開後，香氣馬上撲鼻而來，吃起來的味道像是百香果、奇異果，味道較酸，而黃金樹番茄色澤為金橘色，口感則像是芒果、香瓜的綜合，口味偏甜。

步驟S200中，乾燥原料，以獲得乾燥物。乾燥步驟可為加熱乾燥、冷凍乾燥及所屬技術領域中具有通常知識者為習知的任何適合的乾燥製程。

步驟S300中，浸泡乾燥物於水中持續特定時間。較佳地，水與乾燥物的重量比為2~5：1；更佳地為2.5~4.5：1；又更佳地為2.8~3.5：1。其中，當水與乾燥物的重量比大於5：1時，會產生萃取液過稀，產率低之負面效果；而當水與乾燥物的重量比小於2：1時，則會產生萃取液太稠之負面效果。較佳地，浸泡乾燥物於水中的特定時間為8~40小時；更佳地為12~36小時；又更佳地為18~30小時。其中，當特定時間大於40小時時，會產生些微發酵之負面效果；而當特定時間小於8小時時，則會造成產率低之負面效果。

步驟S400中，過濾經浸泡的乾燥物及水，來去除樹番茄的種子與果渣，以獲得粗萃液。

步驟S500中，加入C1-C4低級醇至該粗萃液，以獲得上層膠體。C1-C4低級醇可為甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或其任意組合。較佳地，C1-C4低級醇與粗萃液的體積比為0.1~10：1；更佳地為0.5~5：1；又更佳地為0.8~3：1。其中，當C1-C4低級醇與粗萃液的體積比小於0.1：1時，會產生萃取產率低之負面效果；而當C1-C4低級醇與粗萃液的體積比大於10：1時，則會產生萃取液過稀，萃取效率差之負面效果。

步驟S600中，乾燥上層膠體，以獲得樹番茄萃取物。

在另一實施例中，製備樹番茄組合物。樹番茄組合物包含前述之樹番茄萃取物、包含蘆薈萃取物之蘆薈凝膠、以及高分子增稠劑。較佳地，樹番茄萃取物、蘆薈凝膠、以及高分子增稠劑的重量比 為1~20：85~95：5~15；更佳地，樹番茄萃取物、蘆薈凝膠、以及高分子增稠劑的重量比 為1~20：87~92：8~13。其中，蘆薈凝膠中的蘆薈萃取物可佔總蘆薈凝膠之重量為90%至95%。其中，高分子增稠劑可為Carbopol 940(廠商：SIGMA)、或為所屬技術領域中具有通常知識者為習知的合適高分子增稠劑。舉例而言，Carbopol 940可提供水包油型乳化體系的穩定性。具有極短流變性、高黏度、中等清澈度、低耐離子性及高耐剪切性等特性。

以下，將藉由本發明之實例進一步詳細說明。

樹番茄萃取物

選用紅寶樹番茄及黃金樹番茄(購自：南投水里春霖山園生技有限公司)。將新鮮樹番茄用自來水洗滌，果皮去除後用果汁機打碎再凍乾，加入水浸泡一天後用尼龍布過濾種子與果渣。其中，經乾燥的樹番茄果肉與水的重量比為1：3。

接著，再分次倒入乙醇，並取混合溶液之上層膠狀液體後，冷凍乾燥上層膠狀液體，並通過80孔篩網取其粉末，作為紅寶樹番茄萃取物及黃金樹番茄萃取物。密封包裝樹番茄萃取物之粉末放置於冷凍保存。其中，乙醇與水的體積比為1：1。紅寶樹番茄萃取物及黃金樹番茄萃取物之產率如表1所示。其中，產率(%)之計算方法為(實際產量/理論產量)x100%。

表1

	紅寶樹番茄萃取物	黃金樹番茄萃取物
未去皮重量(g)	588±7 g	594±9 g
去皮重量(g)	508±5 g	526±7 g
水含量(%)	70.99±1.27 %	85.78±1.36 %
產率(%)	0.75±0.03 %	0.46±0.08 %

樹番茄組合物

選用具有≥97%的費拉蘆薈葉(Aloe barbadensis Miller leaves)萃取物之蘆薈凝膠。將蘆薈凝膠與作為高分子增稠劑之Carbopol 940以9：1的重量比混合均勻後，再分別與紅寶樹番茄萃取物及黃金樹番茄萃取物做調配，兩種製成凝膠的濃度皆分為2.5%、5%、10%及20%，並以未添加樹番茄萃取物的蘆薈凝膠與市售藥膏作為比較例，其比例如表2所示。

表2

編號	樹番茄萃取物	蘆薈凝膠	高分子增稠劑
實例1-1	黃金樹番茄萃取物 2.5 g	90 g	10 g
實例1-2	黃金樹番茄萃取物 5 g	90 g	10 g
實例1-3	黃金樹番茄萃取物 10 g	90 g	10 g
實例1-4	黃金樹番茄萃取物 20 g	90 g	10 g
實例2-1	紅寶樹番茄萃取物 2.5 g	90 g	10 g
實例2-2	紅寶樹番茄萃取物 5 g	90 g	10 g
實例2-3	紅寶樹番茄萃取物 10 g	90 g	10 g
實例2-4	紅寶樹番茄萃取物 20 g	90 g	10 g
比較例1	未添加	90 g	10 g
比較例2	市售藥膏(利膚軟膏，Bacitracin-Neomycin)

接續上述，進行動物試驗及皮膚組織切片試驗。

動物試驗

小鼠購自樂斯科股份有限公司，選用6週大的ICR品系之雄性小鼠，體重約在30-35公克之間。老鼠皆飼養於黑暗及光照週期各12小時且給予正常飲食及RO水，借由空調維持室溫25±1℃。

將小鼠分成8組，分別為無擦藥之控制組、比較例1、比較例2、實例1-1、1-3、1-4、2-1、2-3及2-4，並於實驗第0～7天將其厚敷至厚度約為3~5毫米於傷口上。將小鼠確認麻醉後，以電動剃毛器將小鼠背部毛髮去除，以70%酒精消毒後，利用螺旋記號鉗開創傷口，測量傷口後分別於第0、1、2、3、4、5、7、10與15天測量皮膚傷口大小與觀察皮膚癒合之情形，並取傷口組織進行組織切片之判讀。 癒合過程中，皮膚傷口以數位相機拍照，記錄傷口恢復情形，直到傷口完全癒合為止。使用Adobe Photoshop及Adobe Illustrator軟體將傷口照片縮放為相同的比例再加以裁剪，作為傷口外觀癒合過程的連續記錄。最後，利用Image Pro Plus軟體計算傷口面積，以原始傷口面積為100%，換算傷口癒合過程中各時期的面積百分比，評估樣品處理使傷口癒合面積之變化情形。傷口面積之收縮程度(Wound contraction，%)之計算方式如式(1)所示。結果如表3、表4、第2圖及第3圖所示。

式(1) 其中，W _f為原始傷口面積之紙重，且W _t為未癒合傷口面積之紙重。

表3

天數	傷口面積 (單位 cm 2)
比較例 1	比較例2	實例1-1	實例1-3	實例1-4	實例2-1	實例2-3	實例2-4
第0日	0.109	0.101	0.097	0.091	0.085	0.091	0.092	0.094
第1日	0.105	0.093	0.075	0.07	0.075	0.071	0.109	0.102
第2日	0.103	0.088	0.075	0.069	0.073	0.071	0.091	0.09
第3日	0.067	0.058	0.031	0.034	0.035	0.028	0.06	0.04
第4日	0.053	0.043	0.024	0.028	0.029	0.018	0.039	0.03
第5日	0.029	0.022	0.013	0.02	0.018	0.009	0.019	0.027
第6日	0.013	0.005	0.002	0.01	0.01	0.004	0.015	0.018
第7日	0.007	0.003	0.001	0.008	0.004	0.001	0.015	0.006
第10日	0.002	0.001	0	0.001	0.001	0	0.001	0.002
第15日	0	0	0	0	0	0	0	0

表4

天數	傷口面積之收縮程度(%)
比較例1	比較例2	實例1-1	實例1-3	實例1-4	實例2-1	實例2-3	實例2-4
第3日	38.5%	42.6%	68%	62.6%	58.8%	69.2%	34.8%	57.4%
第7日	93.6%	97%	99%	91.2%	95.3%	99%	83.7%	93.6%
第10日	98.2%	99%	100%	98.9%	98.8%	100%	98.9%	97.9%
第15日	100%	100%	100%	100%	100%	100%	100%	100%

參照第2圖及第3圖，其係為本發明之樹番茄組合物之一實施例的傷口癒合測試影像及傷口癒合分析圖，並同時搭配參照表3，雖各組傷口癒合效果差異不大，但在第10天時，分別包含2.5%之黃金樹番茄萃取物及紅寶樹番茄萃取物之實例1-1及2-1可以明顯看出癒合完全。

在塗抹藥物後第3天，相較於比較例1，比較例2之傷口癒合效果更好。而在濃度2.5%時，不論在蘆薈凝膠中混合黃金樹番茄萃取物或是紅寶樹番茄萃取物，實例1-1及2-1皆優於比較例2；在濃度10%、20%時，實例1-3優於實例2-3且實例1-4優於實例2-4，代表黃金樹番茄萃取物的傷口癒合效果優於紅寶樹番茄萃取物。

皮膚組織切片試驗

皮膚病理組織切片

分別於第0、3、7、10與15天以及傷口完全癒合後之老鼠以氯胺酮(Ketamine)(75mg/kg)進行全身麻醉，再置於二氧化碳的環境中犧牲。以手術刀取下背部傷口的整塊皮膚，置於10%中性福馬林緩衝溶液中固定24小時後，再將欲觀察的傷口部位切割成小塊的組織，再次以10%中性福馬林緩衝溶液中固定24小時，待皮膚組織充分固定後，置於流水下水洗組織30分鐘，洗淨組織塊上的10 %中性福馬林緩衝溶液，使用低濃度到高濃度的酒精(75%、85%、90%、95%、100%、100%、100%)進行組織的脫水。脫水所需的時間視組織塊的大小做調整。脫水完畢的組織塊用二甲苯(xylene)浸泡兩次，每次90分鐘，目的在徹底清除酒精以便將組織塊浸潤在石蠟中。最後將組織塊以石蠟包埋，切片的濃度為5μm，使用已塗抹蛋白的載玻片黏覆組織切片，於45℃烘乾，再進行H&E染色(Hematoxylin and Eosin stain)、馬森(Masson)氏三色染色(Trichrome stain)分析。

H&E染色法與馬森氏三色染色法

H&E染色法是組織學中最普遍使用的染色法，蘇木紫(Hematoxylin)可將細胞核染成暗紫色或藍色，而伊紅(Eosin)可將細胞質和周遭結締組織染成不同深淺的粉紅色。進行染色前，組織切片要先進行水合過程，使用二甲苯使石蠟完全脫除，再使用不同濃度的酒精溶液及流水洗淨二甲苯，便完成染色前的準備。水合的步驟為︰二甲苯(2分鐘)、二甲苯(1分鐘)、100%酒精溶液(30秒)、100%酒精溶液(30秒)、100%酒精溶液(30秒)、95 %酒精溶液(30秒)、85%酒精溶液(30秒)、75%酒精溶液(30秒)、水洗(30秒)。完成水合之後開始進行染色︰將組織切片置於蘇木紫溶液中(2分鐘)、水洗(10分鐘)、伊紅溶液(3分鐘)、水洗(2分鐘)。再利用低濃度酒精至高濃度的酒精溶液將組織中的水分去除，並用二甲苯將酒精取代出來，同時將切片透明化︰75%酒精溶液(5秒)、85%酒精溶液(5秒)、95%酒精溶液(5秒)、100%酒精溶液(5秒)、100%酒精溶液(10秒)、二甲苯(2分鐘)、二甲苯(3分鐘)。最後，以封片膠封片並靜置風乾後即為染色完畢的皮膚組織切片。

馬森氏三色染色法對膠原纖維有選擇性染色的作用，可把結締組織中的膠原纖維染成藍色，把細胞核染成黑色，而肌肉纖維、角質層、細胞質則染成紅色。組織切片放置於 56℃波恩式溶液(Bouin’s solution)進行固定作用(1小時)，待室溫冷卻，水洗組織切片(約30分鐘)，直到看不見黃色為止，完成之後便可開始進行染色︰將組織切片置於維格特(Weiger)氏蘇木紫溶液中(5分鐘)、水洗(15分鐘)、猩紅-複紅溶液(5分鐘)、水洗(30秒)、5%磷鎢酸溶液(5分鐘)、阿爾襄藍溶液(5分鐘)、水洗(30秒)、1%冰醋酸溶液(2分鐘)、水洗(3分鐘)。再利用低濃度酒精至高濃度的酒精溶液將組織中的水分去除，並用二甲苯將酒精取代出來，同時將切片透明化。最後，以封片膠封片並靜置風乾後即為染色完畢的皮膚組織切片。

參照第4圖至第6圖，其係為本發明之樹番茄組合物之一實施例的皮膚組織影像。第4圖至第6圖為小鼠促傷口癒合第3、7、10、15天的皮膚組織切片，依上述動物試驗結果，在2.5%～10%濃度區間中選用含有5%樹番茄萃取物之組合物，並施用組合物至皮膚上，進行皮膚組織染色切片來觀察皮膚細胞增長情形。在顯微鏡下，可觀察出第3天皮膚開始產生炎症反應，發炎因子浸潤，但實例2-2之紅寶樹番茄凝膠已有些許細胞增長情形；而在第7天時就可明顯看出實例1-2及2-2之含有樹番茄的蘆薈凝膠其細胞生長較比較例2更快，證實樹番茄萃取物對傷口癒合具有效果。

簡單來說，可以發現塗抹含有樹番茄萃取物的組合物與不含樹番茄萃取物之蘆薈凝膠比較，老鼠傷口在第0～3天傷口收縮程度差異最大，原因可能在樹番茄萃取物中的多醣及氨基酸影響炎症纖維組織形成、纖維連接蛋白合成和成熟以及傷口收縮的改變，促進肉芽組織生長達到加速傷口癒合的作用。除此之外，樹番茄萃取物也含有大量植物多酚，多酚具有較强的清除自由基和抗氧化性，現代醫學研究已證實，很多疾病如組織器官老化等都與過剩的自由基有關，因此多酚通過清除自由基，能對自由基誘發的生物損傷引起保護作用，維持細胞膜的流動性和蛋白質的構型。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於申請專利範圍中。

S100~S600:步驟

第1圖係為本發明之樹番茄的萃取方法之流程圖。

第2圖係為本發明之樹番茄組合物之一實施例的傷口癒合測試影像。

第3圖係為本發明之樹番茄組合物之一實施例的傷口癒合分析圖。

第4圖至第6圖係為本發明之樹番茄組合物之一實施例的皮膚組織影像。

S100~S600:步驟

Claims (5)

1. 一種樹番茄的萃取方法，其包含：前處理一樹番茄，以獲得一原料；乾燥該原料，以獲得一乾燥物；浸泡該乾燥物於水中持續一特定時間；過濾經浸泡的該乾燥物及水，以獲得一粗萃液；加入C1-C4低級醇至該粗萃液，以獲得一上層膠體；以及乾燥該上層膠體，以獲得一樹番茄萃取物；其中，水與該乾燥物的重量比為2~5：1，該特定時間為8~40小時，且該C1-C4低級醇與該粗萃液的體積比為0.1~10：1。
2. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中該樹番茄係為Cyphomandra betacea Sendt.。
3. 如申請專利範圍第1項所述之萃取方法，其中該樹番茄係為紅寶樹番茄(Solanum betaceum Cav.Mora cultivar)、黃金樹番茄(Solanum betaceum Cav.Mango cultivar)或其組合。
4. 一種樹番茄組合物，其包含：如申請專利範圍第1至3項中的任一項所述之樹番茄萃取物；一蘆薈凝膠，包含一蘆薈萃取物；以及一高分子增稠劑；其中該樹番茄萃取物、該蘆薈凝膠、以及該高分子增稠劑的重量比為1~20：85~95：5~15。
5. 如申請專利範圍第4項所述之組合物，其中該高分子增稠劑為Carbopol 940。

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