TWI703147B

TWI703147B - 用於治療胃腸發炎性疾病之jak抑制劑化合物之前藥

Info

Publication number: TWI703147B
Application number: TW105138180A
Authority: TW
Inventors: 雷恩修森; 丹尼爾 D 羅恩; 唐娜ＡＡ威爾頓; 曼蒂羅伊; 派翠克Ｊ布萊瑟爾
Original assignee: 美商施萬生物製藥研發Ｉｐ有限責任公司
Priority date: 2015-11-24
Filing date: 2016-11-22
Publication date: 2020-09-01
Also published as: EA035816B1; EA201891248A1; PT3380486T; NZ742574A; MY189979A; ME03757B; US20170145044A1; SI3380486T1; US10961267B2; CN108290918B; CO2018005327A2; ES2784523T3; AU2016359494B2; ZA201802967B; MX2018006282A; CL2018001345A1; RS60237B1; CY1122918T1; SG11201803686UA; WO2017091544A1

Abstract

本發明提供作為JAK抑制劑之前藥的化合物，其用於將JAK抑制劑靶向傳遞至哺乳動物之胃腸道。本發明亦提供包含該等化合物之醫藥組合物、使用該等化合物治療胃腸發炎性疾病之方法、及適用於製備該等化合物之方法及中間物。

Description

用於治療胃腸發炎性疾病之JAK抑制劑化合物之前藥

本發明係針對經設計以將JAK抑制劑靶向傳遞至胃腸道的化合物。本發明亦係針對包含該等化合物之醫藥組合物，使用該等化合物治療胃腸發炎性疾病之方法，及適用於製備該等化合物之方法及中間物。

主要包括潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病(Crohn's disease)之發炎性腸病包括胃腸道之全部或部分慢性炎症。潰瘍性結腸炎之特徵在於直腸及大腸黏膜層的炎症及潰瘍而克隆氏病大部分涉及回腸但可發生在沿腸道之任何地方。常見症狀包括腹瀉、血便及腹痛。經由惡化及緩解之交替週期間歇性標記潰瘍性結腸炎之臨床療程。發病率似乎在已開發國家比在開發中國家更高。在主要工業化國家，估計有1.3百萬人患有潰瘍性結腸炎且數量預期隨人口增長而增加。患有潰瘍性結腸炎之患者罹患結腸直腸癌之風險增加。(例如，Danese等人，N Engl J Med ，2011 ，365 ，1713-1725)。另外，在工業化國家中估計有1百萬人患有克隆氏病。雖然存在多種治療選項來增進且維持患者中潰瘍性結腸炎(UC)之緩解，但無一者為理想的。柳氮磺胺吡啶相關之治療在輕度UC中常常有效，但在中度至重度疾病中很少有效。在患有中度至重度UC之患者中，皮質類固醇常常用以提供對緩解之快速誘導。然而，不贊成長期使用類固醇以維持緩解，此係由於其與較長期不良效應(例如，骨質疏鬆及骨折、感染、白內障、較慢之傷口癒合及對腎上腺激素產生之抑止)相關。在中度至重度UC患者中，諸如硫唑嘌呤、環孢靈及甲胺喋呤之全身性免疫抑止劑具有減緩發作及適度功效，但歸因於長期全身性免疫抑止之後果(例如，感染及淋巴瘤之風險增加)，長期使用可能存在問題。抗TNFα抗體(例如，英利昔單抗(infliximab)及阿達木單抗(adalimumab))雖然昂貴且需要皮下或靜脈內投藥，但在大約60%至70%患有中度至重度疾病之UC患者中有效。然而，至多三分之一患者不能充分響應，而另一三分之一初始響應者產生超過幾週的耐受度(Allez等人，J Crohn's Colitis ，2010 ，4 ，355-366；Rutgeerts等人，N Engl J Med ，2005 ，353 ，2462-2476)。最新審批通過之UC療法、維多珠單抗(vedolizumab)、抗α₄ β₇ 整合素抗體在中度至重度UC患者中有效，但其非經腸途徑為次優的，且經由此機制長期免疫抑止之後果有待確定。儘管現有治療性選項，但約10%至20%UC患者仍需要在10年診斷期內進行結腸切除術(Targownik等人，Am J Gastroenterol ，2012 ，107 ，1228-1235)。應瞭解，對於增進且維持中度至重度UC之緩解，而無由慢性、全身性免疫抑止引起之安全問題之有效治療，仍存在著未滿足之醫學需要。雖然未完全理解引起潰瘍性結腸炎之機制，但咸信基因上易感個體之環境因素藉由免疫系統至腸微生物群引起不當(過度)反應，導致結腸發炎、組織損害及疾病之相關症狀特徵。儘管UC之確切致病機制不明確，但顯而易見促炎性細胞激素在免疫反應中發揮關鍵作用(Strober等人，Gastroenterol，2011 ，140 ，1756-1767)。在UC中最常提高之許多促炎性細胞激素(例如，IL-4、IL-6、IL-13、IL-15、IL-23、IL-24、IFNg及瘦素)依賴於酪胺酸激酶之JAK家族(亦即，JAK1、JAK2、JAK3及Tyk2)以用於信號轉導。結合至細胞激素受體之配體引起其相關JAK之自體磷酸化，此反過來導致信號轉導子及轉導活化子(STAT)蛋白之磷酸化。不同STAT形成異二聚體或均二聚體且增進其目標基因在細胞核中之轉錄以調節諸如細胞生長、分化及死亡之功能(Clark等人，J Med Chem ，2014 ，57 ，5023-5038)。對JAK酶之家族之抑制可抑制許多關鍵促炎性細胞激素之信號傳導。因此，JAK抑制劑很可能適用於治療潰瘍性結腸炎及其他發炎性疾病，諸如克羅恩氏病、過敏性鼻炎、哮喘及慢性阻塞性肺病(COPD)。然而，歸因於JAK/STAT路徑對免疫系統之調節效應，全身性暴露於JAK抑制劑可能具有不利的全身性免疫抑止效應。 2012年11月美國審批通過托法替尼檸檬酸酯(Tofacitinib citrate) (Xeljanz^® ) (一種口服、全身性可供使用之盤式JAK抑制劑)以治療對甲胺喋呤(methotrexate)不充分響應或不耐受之患有中度至重度活躍性類風濕性關節炎的成年人。雖然在臨床研究中證實劑量越高功效更優，但基於劑量限制、全身性介導之不良跡象(例如，膽固醇增高、機會性感染率增大、嗜中性白細胞減少症、淋巴細胞減少症、淋巴瘤及固態腫瘤)僅認可5 mg每天兩次(BID)之托法替尼。藥物在詳述安全性風險之US中攜載有黑框警告且基於關於總體安全性之明顯且未解決之問題而在歐洲拒絕批准。在積極研發下，用於UC之托法替尼在第2階段UC試驗中已顯示功效(Sandborn等人，N Engl J Med ，2011 ，365 ，1713-1725)，尤其在10 mg及15 mg BID劑量時(亦參見Panes等人，BMC Gastroenterol ，2015 ，15 ，14)，目前未審批通過用於任何病症之給藥。對於治療潰瘍性結腸炎及其他胃腸發炎性疾病，將期望提供化合物在經口投藥時實現托法替尼在胃腸道中之足夠高暴露以最佳化臨床功效，同時避免全身性劑量限制全身性暴露。

在一個態樣中，本發明提供JAK抑制劑托法替尼之新穎的含有葡萄糖醛酸苷的前藥。此類前藥利用含有或產生選擇性分解含有葡萄糖醛酸之前藥部分的豐富的β-葡萄糖醛酸酶的腸微生物群落以觸發托法替尼在胃腸道中(尤其在結腸中)之釋放。出人意料地，本發明之含有葡萄糖醛酸苷之前藥足夠穩定以經分離、調配於醫藥組合物中並向需要治療的患者投與。然而，其亦充分不穩定從而由β-葡萄糖醛酸酶分解且進一步分解以有效釋放托法替尼。相比之下，當本發明中所使用之含有葡萄糖醛酸苷之前藥部分附著至已知或潛在地適用於治療UC之某些其他藥物時，該等藥物在於β-葡萄糖醛酸酶接觸時不經釋放(如下文更充分地描述)。因此，本發明之含有葡萄糖醛酸苷之前藥特別適用於傳遞及釋放托法替尼。在一個態樣中，本發明係關於式(I)化合物：

其中 n為0、1或2； R¹ 係選自氫、C_1-4 烷基、C_1-3 烷氧基、胺基、硝基、鹵基、氰基、羥基及三氟甲基；各個R² (若存在)係獨立地選自C_1-4 烷基、C_1-3 烷氧基、胺基、硝基、鹵基、氰基、羥基及三氟甲基； R³ 為氫、甲基或乙基； R⁴ 為氫、甲基或乙基；或其醫藥學上可接受之鹽。在另一態樣中，本發明係關於式(II)化合物：

其中 R¹ 係選自氫、C_1-4 烷基、C_1-3 烷氧基、胺基、硝基、鹵基、氰基、羥基及三氟甲基；或其醫藥學上可接受之鹽。在一個實施例中，本發明提供式(II)化合物(其中R¹ 係選自氫、甲基、甲氧基、胺基、硝基及氯基)或其醫藥學上可接受之鹽。在另一態樣中，本發明係關於式1 化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽。式1 化合物已展示較低口服生物可用性且一旦以臨床前物質經口投與之後活體內穩固釋放托法替尼(2)而引起結腸暴露比血漿暴露之比率相對於經口給藥托法替尼本身而獲得的比率顯著增加。

在一個實施例中，式1 化合物與β-葡萄糖醛酸酶接觸之後產生托法替尼或其鹽。在另一態樣中，本發明係關於一種包含醫藥學上可接受之載劑及式(I)、(II)或1化合物，或其醫藥學上可接受之鹽；或本文所描述之其任何特定實施例的醫藥組合物。在另一態樣中，本發明係關於一種治療哺乳動物中之胃腸發炎性疾病的方法，該方法包含向哺乳動物投與包含醫藥學上可接受之載劑及式(I)、(II)或1 化合物，或其醫藥學上可接受之鹽；或本文所描述之其任何特定實施例的醫藥組合物。在一個實施例中，胃腸發炎性疾病為潰瘍性結腸炎。在另一實施例中，胃腸發炎性疾病為克羅恩氏病。且在另一實施例中，胃腸發炎性疾病為與免疫檢查點抑制劑療法相關聯之結腸炎。在另一態樣中，本發明係關於一種將托法替尼傳遞至哺乳動物之胃腸道(尤其，至結腸)的方法，該方法包含向哺乳動物經口投與托法替尼之含有葡萄糖醛酸苷之前藥，該前藥藉由胃腸道中之β-葡萄糖醛酸酶分解以釋放托法替尼。在獨立且不同實施例中，托法替尼之含有葡萄糖醛酸苷之前藥為式(I)、(II)或1 化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或本文所描述之其任何特定實施例。在另一態樣中，本發明係關於一種製備式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的方法，該方法包含由式(I-A)化合物：

或其鹽脫除保護基；其中R¹ 、R² 、R³ 、R⁴ 及n如本文所定義；各個PG^a 獨立地為羥基保護基；且PG^b 為羧基保護基；以獲得式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在此方法之一個實施例中，R¹ 為硝基；R³ 及R⁴ 為甲基；各個PG^a 為乙醯基；PG^b 為甲基；且n 為0。在另一態樣中，本發明係關於一種式(I-A)化合物或其鹽；或本文所描述之其任何特定實施例。在另一態樣中，本發明係關於一種製備式1 化合物或其醫藥學上可接受之鹽的方法，該方法包含： (a) 使式12' 化合物或其鹽(其中各個PG^a 獨立地為羥基保護基)與式13 化合物反應

以獲得式14' 化合物：

以及 (b) 脫除式14' 化合物之保護基以獲得式1 化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在此方法之一個實施例中，PG^a 為乙醯基。在獨立且不同的態樣中，本發明亦係關於式13 化合物或其鹽；及式14' 化合物或其鹽；或本文所描述之其任何特定實施例。在獨立且不同的態樣中，本發明亦係關於適用於製備本發明之化合物的本文所描述之其他合成方法及中間物。在獨立且不同的態樣中，本發明亦係關於供醫學療法中使用；或供製備藥劑或調配物中使用的式(I)、(II)或1 化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或本文所描述之其任何特定實施例。在一個實施例中，藥劑或調配物係用於治療哺乳動物中之胃腸發炎性疾病。本文中揭示本發明之其他態樣及實施例。

相關申請案之交叉參考 本申請案主張2015年11月24日申請之美國臨時申請案第62/259,273號之權益；其全部揭示內容以全文引用之方式併入本文中。在其他態樣中，本發明提供JAK激酶抑制劑托法替尼之葡萄糖醛酸苷前藥、其醫藥學上可接受之鹽及用於其製備的中間物。如ChemDraw軟體(PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA)中所實施，本文中根據IUPAC公約命名化學結構。根據公約，可將式1 化合物識別為： (2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-2-硝基苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H -哌喃-2-甲酸，而托法替尼(2)可被識別為3-((3R, 4R )-4-甲基-3-(甲基(7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)胺基)哌啶-1-基)-3-側氧基丙腈。本發明之化合物含有多個對掌性中心。除非另外指示，否則特定立體異構體之描述或命名意謂所指示立構中心具有指定之立體化學，同時應理解為亦可存在少量其他立體異構體，其限制條件為所描繪或所命名之化合物的效用不因存在另一立體異構體而消除。定義除非另外指明，否則當描述本發明(包括其各種態樣及實施例)時，以下術語具有以下含義。除非在使用上下文中清晰地指明，否則單數術語「一(a/an)」及「該(the)」包括相應複數術語。術語「烷基」意謂可為直鏈或分支鏈或其組合之單價飽和烴基。除非另外定義，否則此等環烷基通常含有1個至約10個碳原子。代表性烷基包括(例如)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基、第三丁基、正戊基、正己基、2,2-二甲基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-乙基丁基、2,2-二甲基戊基、2-丙基戊基及其類似物。當特定數目之碳原子意欲用於特定術語時，碳原子數目在術語前展示。舉例而言，術語「C_1-3 烷基」意謂具有1至3個碳原子之烷基，其中碳原子呈任何化學可接受之組態，包括直鏈或分支鏈組態。術語「烷氧基」意謂單價基團-O-烷基，其中烷基如以上所定義。代表性烷氧基包括(例如)甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基及類似物。術語「鹵基」意指氟基、氯基、溴基或碘基。術語「治療有效量」意指當投與需要治療的患者時足以實現治療之量。如本文中所使用之術語「治療」意謂對諸如哺乳動物(特定言之人類)之患者之疾病、病症或醫學病狀(諸如胃腸發炎性疾病)的治療，其包括以下中之一或多者： (a) 預防疾病、病症或醫學病狀發生，亦即預防疾病或醫學病狀復發，或預防性治療預先易患疾病或醫學病狀之患者； (b) 改善疾病、病症或醫學病狀，亦即消除或引起患者之疾病、病症或醫學病狀的消退，包括抵消其它治療劑的作用； (c) 抑止疾病、病症或醫學病狀，亦即減緩或阻止患者之疾病、病症或醫學病狀之發展；或 (d) 緩解患者之疾病、病症或醫學病狀之症狀。術語「醫藥學上可接受之鹽」意謂可接受用於投與患者或哺乳動物(諸如人類)之鹽(例如，對於既定給藥方案具有可接受之哺乳動物安全性的鹽)。自酸衍生之代表性醫藥學上可接受之鹽包括乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、乙二磺酸(edisylic)、反丁烯二酸、龍膽酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、麩胺酸、馬尿酸、氫溴酸、氫氯酸、羥乙基磺酸、乳酸、乳糖酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏液酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸、菸鹼酸、硝酸、乳清酸、帕莫酸(pamoic)、泛酸、磷酸、丁二酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸及羥萘甲酸(xinafoic acid)及類似物。自醫藥學上可接受之無機鹼衍生的鹽類包括銨、鈣、鎂、鉀、鈉及鋅及類似物。自醫藥學上可接受之有機鹼衍生的鹽類包括精胺酸、膽鹼、還原葡糖胺、離胺酸、苄乙胺(benethamine)、苄乙二胺(benzathine)、甜菜鹼、2-二甲胺基乙醇、2-二乙胺基乙醇、哈胺(hydrabamine)、嗎啉、胺基丁三醇(tromethamine)、二乙醇胺、乙醇胺、乙二胺、三乙醇胺、1H -咪唑、哌嗪及類似物之鹽類。如本文所使用之術語「其鹽」意謂一種離子化合物，其中式(I)化合物之形式為離子化合物之陰離子或陽離子。舉例而言，離子化合物之陰離子可為式(I)化合物之去質子化形式的羧酸根陰離子。陽離子可為式(I)化合物之質子化形式，亦即胺基已經由酸質子化的形式。通常，鹽為醫藥學上可接受之鹽，但此點對於無意投與患者之中間化合物的鹽並非必要條件。式(I)之中性化合物可視情況呈兩性離子之形式，其中術語「兩性離子」意謂具有陽性及陰性電荷之中性分子。術語「羥基保護基」意謂適用於防止在羥基之不當反應的保護基。代表性羥基-保護基包括(但不限於)烷基，諸如甲基、乙基及第三丁基；烯丙基；醯基，例如烷醯基、諸如乙醯基；芳基甲基，諸如苯甲基(Bn)、對甲氧基苯甲基(PMB)、9-茀基甲基(Fm)及二苯甲基(二苯甲基，DPM)；矽烷基，諸如三甲基矽烷基(TMS)及第三丁基二甲基矽烷基(TBS)；及類似物。術語「羧基保護基」意謂適用於防止在羧基之不當反應的保護基。代表性羧基保護基包括(但不限於)烷基，諸如甲基、乙基、第三丁基及類似者；芳基甲基，諸如苯甲基、4-硝基苯甲基、4-甲氧基苯甲基及類似物；硫醇基，諸如-S-第三丁基及類似物；矽烷基，諸如三甲基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基及類似物；噁唑啉；及其類似物。本文中所使用之所有其他術語均意欲具有一般熟習其相關技術者所理解之其普通含義。合成程序 可根據隨附實例中詳細描述之合成方法來製備式(I)化合物。如特定用於製備式1 化合物之方案1中所說明，合成之關鍵步驟為在托法替尼與受保護形式之葡萄糖醛酸苷前藥部分12' 之間形成脲鍵。在方案1中，PG^a 表示羥基保護基，較佳為烯丙基或乙醯基，但亦可使用其他羥基保護基，包括諸如第三丁基二甲基矽烷基之矽烷基保護基。方案1

形成此主要脲鍵最初集中於將托法替尼用作親核體；然而，認為此鍵形成步驟為不一致的，此係由於托法替尼與一系列不同親電體之反應僅引起較低產量的期望產物形成。因此認為有必要切換兩個搭配物之作用且使托法替尼衍生物為親電子反應搭配物及使葡萄糖醛酸苷前藥部分為親核體。在檢驗許多試劑之後，確定托法替尼在經由胺基甲酸酯鍵與反應性對硝苯基或五氟苯基部分接合時可衍生化且提供親電子。舉例而言，氯甲酸對硝苯酯、雙(4-硝基苯基)碳酸酯或碳酸雙(五氟苯基)酯試劑能夠實現所需平衡，具有足夠的活性以影響與托法替尼形成鍵，同時亦提供在與葡萄糖醛酸苷物質反應之前不太具分解活性的中間產物。所得受保護之中間產物14' (例如當PG^a 為乙酸酯基團時)在後續步驟中利用氫氧化鋰脫除保護基以獲得式1 化合物。因此，在一個態樣中，本發明提供一種製備化合物1 之方法，該方法包含(a)使受保護之葡萄糖醛酸苷前藥部分12' 與親電子托法替尼衍生物13 反應以獲得化合物14' ，及(b)脫除化合物14' 之保護基以獲得式1 化合物。在另一態樣中，本發明提供親電子托法替尼化合物13 。針對式1 化合物說明β-葡萄糖醛酸酶對本發明之前藥的作用。如方案2中示出，在β-葡萄糖醛酸酶對式1 化合物作用時，藉由多步驟方法釋放托法替尼：方案2

在初始步驟中，β-葡萄糖醛酸酶分解式1 化合物之糖苷鍵，使得釋放葡萄糖醛酸(a )且形成糖苷配基中間產物(b )。糖苷配基自主分解得到可藉由水捕集之苯醌甲基化物物質(c )及丟失二氧化碳以得到二胺(d )之暫態胺基甲酸。二胺之分子內環化引起形成咪唑啶酮衍生物(e )且釋放托法替尼。如以下實驗部分中所描述，已在與純β-葡萄糖醛酸酶(分析2)及與新製備之大鼠結腸內含物勻漿(分析3)之培育中觀測到式1 化合物經由方案2中繪示之中間步驟轉化成托法替尼。在此等後半實驗中，隨時間變化監測式1 化合物、糖苷配基中間產物b 、二胺中間產物d 及托法替尼之濃度。伴隨著式1 化合物之快速消失，快速且暫時形成糖苷配基b 且更慢速率確定二胺d 及最終活性代謝物托法替尼之形態。本發明研究者已確定開始於細菌性β-葡萄糖醛酸酶解糖苷鍵以將所需活性部分直接有利地傳遞至結腸中之作用部位的葡萄糖醛酸苷前藥化合物之多步分解敏感地取決於鍵之性質及特異性活性部分。美沙拉嗪(Mesalamine)、5-胺基水楊酸(5-ASA) (化合物C-1M )為長期用以治療輕度至中度潰瘍性結腸炎之早期試劑。然而，本葡萄糖醛酸苷前藥途徑似乎並不適用於將5-ASA直接傳遞至結腸。在類似於上文提及之實驗中，將5-ASA (化合物C-1 )之葡萄糖醛酸苷前藥與大鼠結腸內含物勻漿一起培育。

雖然在類似於式1 化合物中之時間刻度觀測到類似於方案2中之糖苷配基b 之暫態糖苷配基及類似於d 之二胺的較慢形態，但不可發現活性代謝物5-ASA之跡象。最新公開案US2013/0109720揭示作為鈣釋放活性鈣通道(CRAC)抑制劑的2-(5-氟-4-甲基吡啶-3-基)-5-(4-甲基-6-(甲磺醯基)吡啶-3-基)-1H -吲哚(化合物C-2M )。亦咸信CRAC抑制劑適用於治療發炎性疾病。然而，本葡萄糖醛酸苷前藥途徑似乎亦並不適用於靶向傳遞此CRAC抑制劑。亦在大鼠結腸內含物勻漿中藉由類似於化合物C-1 所獲得之彼等的結果研究CRAC抑制劑前藥C-2 之分解。

雖然觀測到中間分解產物，但不可發現活性CRAC抑制劑C-2M 之釋放跡象。本跡象表明本發明之前藥獨特地適合於利用引發細菌性β-葡萄糖醛酸分解機制以在結腸中釋放托法替尼。醫藥組合物 本發明之化合物及其醫藥學上可接受之鹽通常以醫藥組合物或調配物之形式使用。因此，在其組合物態樣中之一者中，本發明係關於一種包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及式(I)、(II)或1 化合物或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物。視情況，必要時此等醫藥組合物可含有其他治療劑及/或調配劑。本發明之醫藥組合物通常含有治療有效量之本發明之化合物。然而，熟習此項技術者將認識到，醫藥組合物可含有大於一種治療有效量，亦即散裝組合物，或低於一種治療有效量，亦即針對多種投藥而設計以獲得治療有效量之個別單位劑量。通常地，此等醫藥組合物將含有約0.1重量%至約95重量%之式(I)化合物；包括約5重量%至約70重量%；諸如約10重量%至約60重量%之式(I)化合物。任何習知載劑或賦形劑可用於本發明之醫藥組合物中。特定載劑或賦形劑或載劑或賦形劑之組合的選擇將取決於用於治療特定患者或類型之醫學病狀或疾病病況的投藥模式。就此而言，對於特定之投藥模式，適合醫藥組合物之製備很好地在熟習醫藥技術者之範疇內。另外，本發明之醫藥組合物中所使用之載劑或賦形劑市售可得。作為進一步說明，常規的調配技術描述於雷明頓：The Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000)；及H.C. Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999)。可用作醫藥學上可接受之載劑之物質的代表性實例包括(但不限於)以下：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素，諸如微晶纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及纖維素乙酸酯；粉末狀黃蓍；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如丙三醇、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及乙基月桂酸酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原質水；等張性生理鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸緩衝溶液；及醫藥組合物中所採用之其他無毒的相容物質。通常藉由將本發明之化合物與醫藥學上可接受之載劑及一或多種視情況選用之成分徹底且緊密混合或摻合來製備醫藥組合物。隨後可使用習知程序及設備將所得均勻摻合之混合物成形為錠劑、膠囊、丸劑及其類似物或裝載至其中。本發明之醫藥組合物較佳以單位劑型封裝。術語「單位劑型」係指適用於給藥患者之物理離散單位，亦即，各單位含有經計算以單獨或與一或多種額外單元組合產生所需治療性效應的預定量之本發明化合物。舉例而言，此等單位劑型可為膠囊、錠劑、丸劑及其類似物，或適合於非經腸投藥之單位封裝。在一個實施例中，本發明之醫藥組合物適合於經口投藥。用於經口投藥之適合醫藥組合物可呈膠囊、錠劑、丸劑、口含錠、扁囊劑、糖衣藥丸、散劑、顆粒形式；或呈於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或呈水包油或油包水液體乳液形式；或呈酏劑或糖漿形式；及其類似形式；各自含有預定量之本發明化合物作為活性成份。當意欲以固體劑型(亦即，以膠囊、錠劑、丸劑及類似者之形式)經口投藥時，本發明之醫藥組合物將通常包含本發明之化合物及諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣的一或多種醫藥學上可接受之載劑。視情況或替代地，此類固體劑型亦可包含：填充劑或展劑，諸如澱粉、微晶纖維素、乳糖、磷酸二鈣、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及/或矽酸；黏合劑，諸如羧基甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及/或阿拉伯膠；保濕劑，諸如丙三醇；崩解劑，諸如交聯羧甲基纖維素鈉、瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、褐藻酸、某些矽酸鹽及/或碳酸鈉；溶液阻滯劑，諸如烷烴；吸收促進劑，諸如第四銨化合物；潤濕劑，諸如十六基醇及/或丙三醇單硬脂酸酯；吸附劑，諸如高嶺土及/或膨潤土；潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及/或其混合物；著色劑；及緩衝劑。釋放劑、濕潤劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於本發明之醫藥組合物中。醫藥學上可接受之抗氧化劑之實例包括：水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸鈉、亞硫酸鈉及其類似物；油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基大茴香醚、丁基化羥基甲苯、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α生育酚及其類似物；及金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。用於錠劑、膠囊、丸劑及其類似物之包衣劑包括用於腸溶包衣之彼等包衣劑，諸如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、聚乙酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三甲酸乙酸纖維素、羧甲基乙基纖維素、丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素及其類似物。本發明之醫藥組合物亦可經調配，以使用(例如)呈變化比例之羥丙基甲基纖維素或其他聚合物基質、脂質體及/或微球體，來提供活性劑之減緩或控制釋放。另外，本發明之醫藥組合物可視情況含有乳濁劑且可經調配，使得其視情況以經延遲方式在胃腸道之某一部分中僅僅或優先釋放活性成份。可使用之包埋組合物之實例包括聚合物質及蠟。活性劑亦可呈(若適宜)與以上所描述之賦形劑中之一或多者之微囊封形式。用於經口投藥之適合液體劑型(以說明之方式)包括醫藥學上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。液體劑型通常包含活性劑及惰性稀釋劑(諸如水)或其他溶劑、增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、油酸、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇及脫水山梨糖醇之脂肪酸酯，及其混合物。替代地，某些液體調配物可(例如)藉由噴霧乾燥轉變成用以藉由習知程序製備固體劑型的粉末。除活性成份以外，懸浮液可含有懸浮劑，諸如乙氧基化異硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇及脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂-瓊脂及黃蓍及其混合物。以下非限制性實例說明本發明之代表性醫藥組合物。錠劑口服固體劑型 將本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽與微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮及交聯羧甲纖維素鈉以4:5:1:1之比乾燥摻合，且壓縮成錠劑，得到(例如) 4 mg、10 mg或20 mg活性劑/錠劑之單位劑量。錠劑口服固體劑型 將本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽(40 g)與微晶纖維素(445 g)、煙霧狀二氧化矽(10 g)及硬脂酸(5 g)徹底摻合。隨後在製錠機上壓縮混合物以形成各重100 mg的錠劑。各錠劑提供適用於經口投藥之8 mg活性劑/單位劑量。錠劑口服固體劑型 將本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽(10 g)與玉米澱粉(50 g)、交聯羧甲纖維素鈉(25 g)、乳糖(110 mg)及硬脂酸鎂(5 mg)徹底摻合。隨後在製錠機上壓縮混合物以形成各重200 mg的錠劑。各錠劑提供適用於經口投藥之10 mg活性劑/單位劑量。膠囊口服固體劑型 藉由濕式造粒將本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮及交聯羧甲基纖維素鈉以4:5:1:1之比組合，且裝載至明膠或羥丙基甲基纖維素膠囊中，得到(例如) 4mg、10 mg或20 mg活性劑/膠囊之單位劑量。膠囊中之散劑 將本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽(1 mg至50 mg)填充至意欲經口投藥之空的羥丙基甲基纖維素(HPMC)膠囊中。液體調配物 將本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽(50 mg)與封端瓶子中之100 mL低卡路里混合漿果類運動飲品混合且充分溶解於其中。此溶液之不同容積經量測得到不同的劑量水準。液體調配物 包含本發明之化合物(0.1%)、水(98.9%)及抗壞血酸(1.0%)之液體調配物係藉由將本發明之化合物添加至水與抗壞血酸之混合物來形成。包覆腸溶包衣口服劑型 將本發明之化合物溶解於含有聚乙烯吡咯啶酮之水性溶液中且以1:5 w/w活性劑:珠粒之比噴霧包覆至微晶纖維素或糖珠粒上，且接著施用大致5%重量增加之包含丙烯酸共聚物(例如在商標名Eudragit-L®及Eudragit-S®下可獲得的丙烯酸共聚物之組合)或丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素的腸溶性包衣。將包覆腸溶包衣之珠粒裝載至明膠或羥丙基甲基纖維素膠囊中，得到(例如) 5 mg活性劑/膠囊之單位劑量。包覆腸溶包衣口服劑型 將包含Eudragit-L®及Eudragit-S®之組合或丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素之腸溶包衣施用至以上所描述之錠劑口服劑型或膠囊口服劑型。效用本發明化合物已經設計用以將臨床上有效試劑直接傳遞至胃腸道中之作用部位供治療胃腸發炎性疾病，尤其供治療諸如潰瘍性結腸炎及克隆氏病的發炎性腸道疾病。亦期望該等化合物適用於治療與免疫檢查點抑制劑治療劑相關聯之結腸炎。特定言之，本發明之葡萄糖醛酸苷前藥經設計用以利用胃腸道中(尤其結腸中)之豐富的細菌性β-葡萄糖醛酸苷酶以主要在下胃腸道中釋放JAK抑制劑托法替尼。此外，本發明之例示性化合物已展示不充分地全身性吸收，由此使免疫抑止之風險降到最低。本發明前藥化合物經設計以缺少生物活性。舉例而言，式1 化合物對於傑納斯激酶(Janus kinase) (JAK)族酶類、非JAK酶類或一系列G蛋白耦接受體、離子通道及可在胃腸(GI)道或全身性中表現的轉運蛋白無顯著親和力，或效能。在投與本發明化合物後的生物活性有助於產生托法替尼。如以下實驗部分中所描述，已在一或多種臨床前分析中充分剖析本發明化合物。已展示化合物在大鼠結腸糞便中所存在之β-葡萄糖醛酸的存在下分解。舉例而言，在腸內腔內含物與大鼠之十二指腸、回腸、空腸及結腸隔離勻漿培育中研究式1 化合物之代謝穩定性及托法替尼之形成。藉由托法替尼形成之跡象證實，化合物在十二指腸及空腸內含物(半衰期＞60分鐘)中之穩定至在回腸內含物(半衰期34分鐘)中之中度轉化至在結腸內含物(半衰期＜5分鐘)中之快速轉化的遞增轉化梯度。化合物遞增轉化之梯度反映細菌自上部GI至下部GI的遞增存在量。已在小鼠、大鼠及食蟹獼猴中研究經口投與本發明化合物後所釋放之托法替尼。如以下分析法4、5、9及10中所描述，在所有物質中，該等前藥展現托法替尼在結腸中之暴露量顯著高於在血漿中的暴露量。特定言之，在大鼠及猴中研究式1 化合物在胃腸道之特定節段中釋放之托法替尼，且與以等效劑量經口投與托法替尼本身而獲得的濃度相比。化合物1 不僅在整個胃腸道中之暴露量展現顯著高於血漿中的暴露量(例如，在大鼠結腸節段中比率大於500且在猴結腸節段中約60與150之間)，而且GI組織濃度及GI組織對血漿濃度之比率亦顯示相對於經口投與托法替尼本身所獲得的濃度增加。舉例而言，在猴中，在與口服托法替尼而獲得之濃度比較時，自經口投與前藥所觀測盲腸、近端及末端結腸組織中的托法替尼濃度為增加五倍至七倍。亦在小鼠噁唑酮誘導之結腸炎模型中測試本發明之某些化合物的功效。式1 及4 化合物在小鼠噁唑酮誘導之結腸炎模型中證實，要達到等效作用時所需的劑量比直接投與托法替尼時需要之劑量更低。另外，式1 化合物之有效劑量與托法替尼之全身性暴露量比托法替尼本身以其有效劑量投藥所獲得之全身性暴露量降低相關聯。在小鼠之免疫抑止模型中，化合物1 在噁唑酮模型中證實，在達到相比擬之功效時所需要之相同劑量下展示最小之免疫抑止效應(治療指數＞3 倍)，而托法替尼在低於其有效劑量之劑量下具有免疫抑止性(治療指數≤0.3)。因此，預期本發明之托法替尼之葡萄糖醛酸苷前藥適用於治療發炎性腸病，尤其潰瘍性結腸炎。亦預期本發明化合物適用於治療克隆氏病且治療與免疫檢查點抑制劑療法(癌症免疫療法之潛在嚴重後果)相關聯之結腸炎。免疫檢查點抑制劑療法包括細胞毒素T淋巴細胞相關聯之抗原4 (CTLA-4)抑制劑，諸如伊派利單抗(ipilimumab) (Yervoy®)；漸進式細胞死亡1 (PD-1)抑制劑，諸如派立珠單抗(pembrolizumab) (Keytruda®)或納武單抗(nivolumab) (Opdivo®)及程序化死亡配位體1 (PD-L1)抑制劑，諸如阿特唑單抗(atezolizumab) (Tecentriq®)。特定言之，該等化合物經預期適用於治療CTLA-4抑制劑誘導之結腸炎。該等化合物亦可在治療額外病況(諸如在移植物抗宿主疾病、口炎性腹瀉、微觀結腸炎、貯存袋炎及自體免疫性腸病中的胃腸不良效應)中找到效用。因此，在一個態樣中，本發明提供一種治療哺乳動物(例如，人類)之胃腸發炎性疾病之方法，該方法包含向哺乳動物投與治療有效量之本發明化合物，或包含醫藥學上可接受之載劑及本發明化合物之醫藥組合物。在一個實施例中，胃腸發炎性疾病為潰瘍性結腸炎。在另一實施例中，胃腸發炎性疾病為克羅恩氏病。且在另一實施例中，胃腸發炎性疾病為與免疫檢查點抑制劑療法相關聯之結腸炎。本發明進一步提供一種治療哺乳動物之潰瘍性結腸炎之方法，該方法包含向哺乳動物投與治療有效量之本發明化合物，或包含醫藥學上可接受之載劑及本發明化合物之醫藥組合物。當用於治療潰瘍性結腸炎時，本發明之化合物將通常以單一日劑量或每日多個劑量經口投與，不過可使用其它投藥形式。每劑量投與之活性劑之量或每天投與之總量將通常由醫師根據相關情況，包括待治療之病狀、所選投藥途徑、投與之實際化合物及其相對活性、個別患者之年齡、體重及反應、患者症狀之嚴重程度及其類似者來確定。對於平均70 kg的人類來說，用於治療潰瘍性結腸炎及其他腸胃發炎病症之合適劑量經預期為約2毫克/天至約60毫克/天的式(I)化合物，包括約4毫克/天至約50毫克/天及約4毫克/天至約40毫克/天的範圍。組合療法 本發明之化合物亦可與一或多種藉由相同機制或藉由不同機制起作用來實現胃腸發炎性病症之治療的藥劑組合使用。用於組合療法之藥劑之有用種類包括(但不限於)胺基水楊酸鹽、類固醇、全身性免疫抑止劑、抗TNFα抗體、抗α4 (抗VLA-4)抗體、抗整合素α₄ β₇ 抗體、抗細菌劑及抗腹瀉藥品。可與本發明化合物組合使用之胺基水楊酸鹽包括(但不限於)美沙拉嗪(mesalamine)、奧沙拉嗪(olsalazine)及柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)。類固醇之實例包括(但不限於)潑尼松(prednisone)、潑尼龍(prednisolone)、氫化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)、倍氯米松(beclomethasone)及氟替卡松(fluticasone)。適用於治療發炎性病症之全身性免疫抑止劑包括(但不限於)環孢靈、硫唑嘌呤、甲胺喋呤、6-巰基嘌呤及他克莫司(tacrolimus)。此外，在組合療法中可使用抗TNFα抗體，包括(但不限於)英利昔單抗(infliximab)、阿達木單抗(adalimumab)、戈利木單抗(golimumab)及賽妥珠單抗(certolizumab)。藉由其他機制起作用之有用化合物包括抗α4抗體，諸如那他珠單抗(natalizumab)；抗整合素α₄ β₇ 抗體，諸如維多珠單抗(vedolizumab)；抗細菌劑，諸如利福昔明(rifaximin)及抗腹瀉藥品，諸如洛哌丁胺(loperamide)。(Mozaffari等人，Expert Opin. Biol. Ther .2014 ，14 ，583-600；Danese，Gut ，2012 ，61 ，918-932；Lam 等人，Immunotherapy ，2014 ，6 ，963-971。) 因此，在另一態樣中，本發明提供一種用於治療胃腸發炎性病症之治療組合，該組合包含本發明之化合物及一或多種適用於治療胃腸發炎性病症之其他治療劑。舉例而言，本發明提供包含本發明之化合物及一或多種選自以下之藥劑的組合：胺基水楊酸鹽、類固醇、全身性免疫抑止劑、抗TNFα抗體、抗α4抗體、抗整合素α₄ β₇ 抗體、抗細菌劑及抗腹瀉藥品。二級藥劑(當包括時)以治療有效量，亦即以當與本發明之化合物共同投與時產生治療上有益之效應的任何量存在。此外，在一方法態樣中，本發明提供一種治療胃腸發炎性病症之方法，該方法包含向哺乳動物投與本發明之化合物及一或多種適用於治療胃腸發炎性病症之其他治療劑。當用於組合療法中時，該等藥劑可如上文所揭示，調配成單一醫藥組合物，或該等藥劑可提供在單獨的組合物中，這些單獨組合物同時或在不同時間通過相同或通過不同的投藥途徑投與。當分開投與時，該等藥劑之投與在時間上足夠接近以便提供所需治療效應。此等組合物可分開地封裝或可作為套組共同封裝。套組中兩種或更多種治療劑可通過相同的投藥途徑或通過不同的投藥途徑投與。實例提供以下合成及生物實例以說明本發明，且不以任何方式解釋為限制本發明之範疇。除非另外指示，否則在以下實例中，以下縮寫具有以下含義。以下未定義之縮寫具有其一般可接受之含義。 Ac = 乙醯基 ACN = 乙腈 alloc = 烯丙氧羰基 d = 天數 DCM = 二氯甲烷 DIPEA =N,N -二異丙基乙胺 DMAP = 4-二甲氨基吡啶 Et₃ N = 三乙胺 EtOAc = 乙酸乙酯 EtOH = 乙醇 h = 小時 IPA = 異丙醇 MeOH = 甲醇 min = 分鐘 RT = 室溫 tBu = 第三丁基 TFA = 三氟乙酸 THF = 四氫呋喃試劑及溶劑購自商業供應商(Sigma-Aldrich、Fluka等)且不經進一步純化即使用。藉由薄層層析(TLC)、分析型高效液相層析(anal. HPLC)及質譜分析監測反應混合物之進展。如在各反應中具體描述來處理反應混合物；通常藉由萃取及其他純化方法(諸如溫度依賴性及溶劑依賴性結晶及沈澱)來純化反應混合物。另外，藉由管柱層析或藉由製備型HPLC，通常使用C18或BDS管柱填充物及習知溶離劑來常規純化反應混合物。下文描述典型的製備型HPLC條件。通常藉由質譜法及分析型HPLC進行反應產物之表徵。藉由電噴霧電離法(ESMS)用耦接至自動純化系統之Applied Biosystems (Foster City, CA)型號API 150 EX儀器或Waters (Milford, MA) 3100儀器，來進行化合物之質譜鑑定。製備型 HPLC 條件管柱： C18, 5 μm 21.2 ×150 mm或C18, 5 μm 21×250或C14, 5 μm 21×150 mm 管柱溫度：室溫流速： 20.0 mL/min 行動相： A = 水+ 0.05 % TFA B = ACN + 0.05 % TFA, 注射體積： (100-1500 µL) 檢測器波長： 214 nm 將粗化合物以約50 mg/mL溶解於1:1水:乙酸中。使用2.1×50 mm C18管柱進行4分鐘分析規模的測試操作，接著使用100 μL注射液，使用基於分析規模測試操作的B滯留%的梯度，進行15分鐘或20分鐘製備型規模操作。準確之梯度依賴於樣品。用21×250 mm C18管柱及/或21×150 mm C14管柱檢查具有緊密操作雜質的樣品以進行最佳分離。通過質譜分析來鑑別含有所希望的產物的溶離份。分析型 HPLC 條件方法 A 儀器： Agilent 1260 HPLC 管柱： LUNA C18 (2)，150×4.60 mm，3微米管柱溫度： 35℃ 流速： 1.2 mL/min 注射體積： 5 μL 樣品製劑：溶解於1:1 ACN:水中成約0.5 mg/mL溶液行動相： A=水:ACN:TFA (98:2:0.05) B=水:ACN:TFA (30:70:0.05) 檢測器波長： 230 nm 梯度：總共28分鐘(時間(min)/%B )： 0/10、20/100、22/100、23/10、28/10方法 B 儀器： Agilent 1260 HPLC 管柱： Zorbax-Bonus RP C14，30×2.1 mm，1.8微米管柱溫度： 60℃ 流速： 1.2 mL/min 注射體積： 3 μL 樣品製劑：溶解於1:1 ACN:水中成約1.0 mg/mL溶液行動相： A =水:TFA (99.9%:0.1%) B = ACN:TFA (99.9%:0.1%) 檢測器波長： 214 nm 梯度：總共3.0分鐘(時間(min)/%B )：0/5、1.5/65、1.8/95、2.1/95、2.5/5、3.0/5製劑 1 三乙酸 (2S ,3R ,4S ,5S ,6S )-2-(4-( 羥基甲基 )-2- 硝基苯氧基 )-6-( 甲氧羰基 ) 四氫 -2H - 哌喃 -3,4,5- 三基酯 (10)

(a) 三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(9) 向2 L配備有機械攪拌器之3頸燒瓶中加入三乙酸(2R, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-溴基-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(8) (51 g，128.4 mmol)、4-羥基-3-硝基苯甲醛(20.98 g，125.5 mmol)及氧化銀(37.7 g，162.7 mmol)，接著加入ACN (750 mL)。在暗處攪拌反應混合物18小時且經由(Celite®)過濾。用ACN (3×100 mL)洗滌固體且將濾過物在減壓下蒸餾至100 mL。向濾過物中加入EtOAc (1750 mL)及飽和碳酸氫鈉(1 L)且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘，經Celite過濾並使其沈降。有機層經飽和碳酸氫鈉(1 L)及鹽水(1 L)洗滌，經硫酸鈉(100 g)乾燥2小時，過濾且在減壓下蒸餾至乾燥以獲得呈黃色固體之粗化合物9 (55 g，90%產率，97.4%純度) HPLC滯留時間15.61分鐘。 (b) 三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-(羥基甲基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(10) 向1 L配備有機械攪拌器之3頸燒瓶中加入化合物9 (32.7 g，67.6 mmol)，接著加入DCM (350 mL)及IPA (70 mL)。攪拌反應混合物至溶解固體且接著冷卻至0℃。向溶液中分三份加入硼氫化鈉(1.54 g，40.6 mmol)，保持溫度低於5℃且在0℃攪拌反應混合物1小時並緩慢倒入至冰水(400 mL)中。向溶液中加入DCM (350 mL)且攪拌混合物30分鐘，使其沈降30分鐘並分離各層。用DCM (100 mL)反萃取水層。將合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌。在30分鐘之後，分離各層且用DCM (100 mL)反萃取鹽水層。合併之有機層經硫酸鈉(50 g)乾燥2小時，經Celite過濾，且在減壓下蒸餾至乾燥。在50℃下將所得固體於95%變性EtOH (130 mL)攪拌30分鐘且在室溫下攪拌12小時以形成結晶固體，該結晶固體經EtOH (30 mL)洗滌且在室溫下真空乾燥16小時以獲得呈白色固體狀之標題化合物(21 g，66%產率，98%純度) HPLC方法A滯留時間13.18分鐘。製劑 2 ： 三乙酸 (2S ,3S ,4S ,5R ,6S )-2-( 甲氧羰基 )-6-(4-((( 甲基 (2-( 甲胺基 ) 乙基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 硝基苯氧基 ) 四氫 -2H - 哌喃 -3,4,5- 三基酯 (12)

向配備有電磁攪拌器之100 mL燒瓶中加入三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-(羥基甲基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(10) (4.86 g，10 mmol)及羰基二咪唑(2.11 g，13 mmol)，接著加入DCM (50 mL)。在室溫下攪拌反應混合物3小時以形成三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-(((1H -咪唑-1-羰基)氧基)甲基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(11) 之溶液。向250 mL配備有電磁攪拌器之3頸燒瓶中加入N¹ ,N² -二甲基乙烷-1,2-二胺(3.09 g，35 mmol，3.76 mL)，接著加入DCM (30 mL)。使反應混合物冷卻至0℃且在＜5℃下緩慢加入乙酸(2.1g，35 mmol，2 mL)以形成懸浮液。向懸浮液中緩慢加入中間產物11 之溶液；在0℃至5℃下攪拌反應混合物30分鐘且接著在室溫下攪拌3小時。加入DCM (30 mL)及水(60 mL)且在室溫下攪拌反應混合物10分鐘。有機層經水(2×60 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥2小時並過濾以獲得呈溶解狀態之標題化合物(約70%產率)，將其儲存於0℃至4℃下且不經純化即使用。HPLC方法A滯留時間11.04分鐘。製劑 3 ： 三乙酸 (2S ,3R ,4S ,5S ,6S )-2-(4-((((2-(4-(((3R ,4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-N- 甲基 -7H - 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲醯胺基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 硝基苯氧基 )-6-( 甲氧羰基 ) 四氫 -2H - 哌喃 -3,4,5- 三基酯 (14)

向1 L配備有電磁攪拌器之3頸燒瓶中加入3-((3R, 4R )-4-甲基-3-(甲基(7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)胺基)哌啶-1-基)-3-側氧基丙腈(2) (9.65 g，31 mmol)、雙(4-硝基苯基)碳酸酯(12.22 g，40 mmol)及ACN (240 mL)，且使反應混合物冷卻至0℃。逐滴加入DIPEA (5.59 g，43 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物4小時並冷卻至0℃。在＜10℃下向經冷卻之反應混合物中加入三乙酸(2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-2-(甲氧羰基)-6-(4-(((甲基(2-(甲胺基)乙基)-胺甲醯基)氧基)甲基)-2-硝基苯氧基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(12) 於DCM (350 mL，30 mmol)中之溶液且在15℃下攪拌反應混合物1小時並接著用乙酸(2.5 g，42 mmol)淬滅。加入DCM (200 mL)及水(300 mL)，分離各層且有機層經3%碳酸鈉(2×350 mL)，接著經0.5 M HCl (2×200 mL)及經10%氯化鈉(200 mL)洗滌，且經硫酸鈉(50 g)乾燥5小時，過濾，且濃縮至約100 mL。藉由矽膠層析(600 g二氧化矽管柱，流速60 mL/min，梯度：含40% DCM之EtOAc歷經5分鐘至100% EtOAc，100% EtOAc 60分鐘，含3% MeOH至5% MeOH之EtOAc歷經30分鐘，含5% MeOH之EtOAc至完成)純化濃縮溶液。合併純溶離份且在真空下蒸餾至乾燥以獲得標題化合物(21.2 g，97%純度，73%產率)。HPLC方法A滯留時間13.92分鐘。實例 1 ： (2S ,3S ,4S ,5R ,6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R ,4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-N - 甲基 -7H - 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲醯胺基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 硝基苯氧基 )-3,4,5- 三羥基四氫 -2H - 哌喃 -2- 甲酸 (1)

向500 mL配備有電磁攪拌器之3頸燒瓶中加入三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(14) (20.9 g，22 mmol)及THF (210 mL)。使反應混合物冷卻至0℃且歷經20分鐘加入含1 M LiOH之水(46 mL，47 mmol)並攪拌反應混合物20分鐘。歷經30分鐘加入LiOH溶液之第二均等部分且攪拌反應混合物2小時。加入乙酸(5.6 g，93 mmol)且將反應混合物轉移至2 L圓底燒瓶中。向燒瓶中加入ACN (500 mL)且在減壓下蒸餾混合物以移除600 mL溶劑。重複該程序兩次及第三次蒸餾繼續乾燥。將所得固體溶解於含2% ACN之水(350 mL)中且以90 mL分批藉由逆相層析法(450 g C-18二氧化矽管柱，流速40 mL/min，溶劑A：含0.5%乙酸之水；溶劑B：ACN，梯度：總共110分鐘(時間(min)/%B )：0/2、10/2、100/28、110/28接著洗滌90% B)純化。合併產物溶離份，重複程序3次且使合併之溶離份濃縮至約600 mL並冷凍乾燥以獲得呈固體狀之標題化合物(11.2 g，60%產率，99%純度)。HPLC方法A滯留時間7.95分鐘。實例 2 ： (2S ,3S ,4S ,5R ,6S )-6-(2- 胺基 -4-((((2-(4-(((3R ,4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-N - 甲基 -7H - 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲醯胺基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯氧基 )-3,4,5- 三羥基四氫 -2H - 哌喃 -2- 甲酸 (3)

(a) 三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(2-胺基-4-((((2-(4-(((3R,4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(15) 向三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(14) (1.55 g，1.65 mmol)於EtOH (50 mL)中之溶液中加入氫氧化鈀/碳(11.57 mg，0.08 mmol)。在氫氣下在室溫下攪拌反應溶液3天，經由矽藻土墊過濾，用EtOH洗滌並真空濃縮。粗物質經分離呈褐色泡沫狀且不經進一步純化即使用。(m/z )： C₄₂ H₅₃ N₉ O₁₄ 之[M+H]⁺ 計算值908.37，實驗值：908.8。 (b) (2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-6-(2-胺基-4-((((2-(4-(((3R,4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H -哌喃-2-甲酸(3) 向先前步驟之產物(0.95 g，1.05 mmol)於MeOH (3.49 mL)、THF (3.49 mL)及水(3.49 mL)之1:1:1混合物的溶液中加入LiOH (63 mg，2.62 mmol)且在室溫下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮反應溶液且藉由逆相管柱層析法純化粗物質以得到呈白色固體之標題化合物(96 mg，12%產率)。HPLC方法B滯留時間0.85分鐘。製劑 4 ： 4-(((3R ,4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲酸 4- 硝基苯基 酯 (13)

向3-((3R, 4R )-4-甲基-3-(甲基(7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)胺基)哌啶-1-基)-3-側氧基丙腈(2) (0.75 g，2.40 mmol)於DCM (12 mL)中之溶液中加入氫氧化鈉(0.29 g，7.20 mmol)於水(4.00 mL)及四丁基銨溴化物(0.08 g，0.24 mmol)中之溶液。緩慢加入氯甲酸4-硝基苯基酯(0.97 g，4.80 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物1小時，用DCM萃取且有機層經飽和氯化銨溶液及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由管柱層析法(含0-100% EtOAc之己烷)純化粗殘餘物以得到呈淡黃色固體狀之標題化合物(0.94 g，82%)。(m/z )：C₂₃ H₂₃ N₇ O₅ 之[M+H]⁺ 計算值為478.18，實驗值：478.2。製劑 5 ： 三乙酸 (2S ,3S ,4S ,5R ,6S )-2-( 甲氧羰基 )-6-(4-((( 甲基 (2-( 甲胺基 ) 乙基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯氧基 ) 四氫 -2H - 哌喃 -3,4,5- 三基酯 (18)

(a) 三乙酸(2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-2-(甲氧羰基)-6-(4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(17) 向三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-(羥基甲基)苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(16) (27.0 g，61.3 mmol)及Et₃ N (25.5 mL，17.0 mmol)於DCM (250 mL)中之溶液中緩慢加入氯甲酸對硝苯基酯(18.53 g，91.9 mmol)於DCM (100 mL)中之溶液。在室溫下攪拌溶液1小時，用水(100 mL)稀釋且用DCM (3×100 mL)萃取。在減壓下濃縮合併之有機層且藉由管柱層析法(含35% EtOAc之己烷)純化粗殘餘物以得到標題化合物(37.0 g，56%產率)。 (b) 三乙酸(2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-2-(甲氧羰基)-6-(4-(((甲基(2-(甲胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(18) 在室溫下向三乙酸(2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-2-(甲氧羰基)-6-(4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(17) (0.50 g，0.83 mmol)於DCM (8.26 mL)中之溶液中加入N¹ ,N² -二甲基乙烷-1,2-二胺(0.44 mL，4.13 mmol)。1.5小時後，過濾反應溶液並用DCM洗滌。在真空中濃縮濾過物且藉由管柱層析(含0-10%MeOH之DCM)純化殘餘物以得到呈著色固體狀之標題化合物(354 mg，77%產率)。(m/z )：C₂₅ H₃₄ N₂ O₁₂ 之[M+H]⁺ 計算值555.21，實驗值：555.6。藉由類似於製劑5之製程製備以下中間物：

實例 3 ： (2S ,3S ,4S ,5R ,6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R ,4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-N - 甲基 -7H - 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲醯胺基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯氧基 )-3,4,5- 三羥基四氫 -2H - 哌喃 -2- 甲酸 (4)

(a) 三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)-(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(22) 向三乙酸(2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-2-(甲氧羰基)-6-(4-(((甲基(2-(甲胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(18) (0.35 g，0.63 mmol)及4-(((3R,4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-硝基苯基酯(13) (0.30 g，0.63 mmol)於DMF (5.05 mL)中之溶液中加入Et₃ N (0.13 mL，0.95 mmol)且在40℃下攪拌所得混合物。在1.5小時之後，LC/MS指示純淨產物形成。將反應溶液冷卻至室溫且在真空中濃縮。粗產物經分離呈黃色殘餘物，其不經進一步純化即使用。(m/z )：C₄₂ H₅₂ N₈ O₁₄ 之[M+H]⁺ 計算值893.36，實驗值：893.9。 (b) (2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H -哌喃-2-甲酸(4) 向先前步驟之產物(0.56 g，0.63 mmol)於MeOH (2.10 mL)、THF (2.10 mL)及水(2.10 mL)之1:1:1混合物中的溶液中加入LiOH (40 mg，1.70 mmol)且在室溫下攪拌溶液，在真空中濃縮且藉由逆相管柱層析法純化粗殘餘物以得到呈白色固體之標題化合物(0.12 g，27%)。(m/z )：C₃₅ H₄₄ N₈ O₁₁ 之[M+H]⁺ 計算值753.31，實驗值：753.8。HPLC方法B滯留時間0.98分鐘。實例 4 ： (2S ,3S ,4S ,5R ,6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R ,4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-N - 甲基 -7H - 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲醯胺基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 甲基苯氧基 )-3,4,5- 三羥基四氫 -2H - 哌喃 -2- 甲酸 (5)

(a) 三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)-(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-2-甲基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(23) 向三乙酸(2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-2-(甲氧羰基)-6-(2-甲基-4-(((甲基(2-(甲胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(19) (0.46 g，0.81 mmol)於DCM (8.00 mL)中之溶液中緩慢加入4-(((3R,4R)-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-硝基苯基酯(13 ) (0.39 g，0.81 mmol)於DCM (3.00 mL)中之溶液且在室溫下攪拌溶液1.5小時，在真空中濃縮且黃色固體不經進一步純化即使用。(m/z )：C₄₃ H₅₄ N₈ O₁₄ 之[M+H]⁺ 計算值907.38，實驗值：907.6。 (b) (2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-2-甲基苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H -哌喃-2-甲酸(5) 向先前步驟之產物(0.73 g，0.81 mmol)於MeOH (29 mL)中之冰冷溶液中緩慢加入LiOH (4.04 mL，4.04 mmol)水性溶液。在0℃下攪拌1.5小時之後，藉由緩慢添加1 N HCl將反應溶液調整至pH 5-6。在真空中濃縮反應溶液且藉由逆相管柱層析法純化粗物質以得到呈白色固體之標題化合物(0.47 g，76%產率)。(m/z )：C₃₆ H₄₆ N₈ O₁₁ 之[M+H]⁺ 計算值767.33，實驗值：767.8。HPLC方法B滯留時間1.02分鐘。實例 5 ： (2S ,3S ,4S ,5R ,6S )-6-(2- 氯 -4-((((2-(4-(((3R ,4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-N - 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲醯胺基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯氧基 )-3,4,5- 三羥基四氫 -2H - 哌喃 -2- 甲酸 (6)

(a) 三乙酸( 2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(2-氯-4-((((2-(4-(((3R,4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(24) 向三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(2-氯-4-(((甲基(2-(甲胺基)乙基)-胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(20) (0.33 g，0.57 mmol)及4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-硝基苯基酯(13) (0.27 g，0.57 mmol)於DMF (4.52 mL)中之溶液中加入Et₃ N (0.12 mL，0.85 mmol)且在40℃下攪拌所得溶液。在1小時之後，在真空中濃縮溶液。產物經分離呈黃色殘餘物，其不經進一步純化即使用。(m/z )：C₄₂ H₅₁ N₈ O₁₄ 之[M+H]⁺ 計算值927.32，實驗值：927.7。 (b) (2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-6-(2-氯-4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H -哌喃-2-甲酸(6) 向三乙酸(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-氯-4-((((2-(4-(((3R, 4R)-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(0.52 g，0.57 mmol)於MeOH (1.88 mL)、THF (1.88 mL)及水(1.88 mL)之1:1:1混合物中的溶液中加入LiOH (40 mg，1.53 mmol)且在室溫下攪拌溶液2小時。在真空中濃縮反應溶液且藉由逆相管柱層析法純化粗物質以得到呈白色固體之最終產物(0.22 g，49%)。(m/z )：C₃₅ H₄₃ N₈ O₁₁ 之[M+H]⁺ 計算值787.27，實驗值：787.8。HPLC方法B滯留時間1.04分鐘。實例 6 ： (2S , 3S , 4S , 5R , 6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R , 4R )-1-(2- 氰乙醯基 )-4- 甲基哌啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-N - 甲基 -7H - 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -7- 甲醯胺基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 甲氧基苯氧基 )-3,4,5- 三羥基四氫 -2H - 哌喃 -2- 甲酸 (7)

(a) 三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-2-甲氧基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(25) 向三乙酸(2S, 3R, 4S, 5S, 6S )-2-(2-甲氧基-4-(((甲基(2-(甲胺基)乙基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氫-2H -哌喃-3,4,5-三基酯(21) (0.60 g，1.02 mmol)於DCM (10.00 mL)中之溶液中緩慢加入4-(((3R,4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-硝基苯基酯(13) (0.49 g，1.02 mmol)於DCM (3.00 mL)中之溶液且在室溫下攪拌所得混合物1.5小時。在真空中濃縮反應溶液且所得黃色固體不經進一步純化即使用。(m/z )：C₄₃ H₅₄ N₈ O₁₅ 之[M+H]⁺ 計算值923.37，實驗值：924.1。 (b) (2S, 3S, 4S, 5R, 6S )-6-(4-((((2-(4-(((3R, 4R )-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N -甲基-7H -吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-2-甲氧基苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H -哌喃-2-甲酸(7) 向先前步驟之產物(0.94 g，1.02 mmol)於MeOH (36.80 mL)中之冰冷溶液中緩慢加入LiOH (5.12 mL，5.12 mmol)水性溶液。在0℃下攪拌反應混合物2小時之後藉由緩慢添加1 N HCl將溶液之pH調整至5至6。在真空中濃縮混合物且藉由逆相管柱層析法純化粗殘餘物以得到呈白色固體之標題化合物(0.46 g，57%產率)。(m/z )：C₃₆ H₄₆ N₈ O₁₂ 之[M+H]⁺ 計算值783.32，實驗值：783.8。HPLC方法B滯留時間0.99分鐘。實例 C-1

(a)化合物C-5 向燒瓶中加入化合物C-3 (285 mg，0.497 mmol)及化合物C-4 (445 mg，1.289 mmol)之TFA鹽，接著加入DMF (2.485 mL)及三乙胺(0.416 mL，2.98 mmol)。第二天藉由旋轉蒸發濃縮反應混合物並藉由正相管柱層析法(含0-15% MeOH之DCM歷經15分鐘，隨後連續15%歷經5分鐘)純化以獲得標題化合物(90 mg)。 (b) 化合物C-1 將先前步驟之產物(45 mg，0.061 mmol)及碳酸鉀(33.8 mg，0.244 mmol)溶解於MeOH (0.8 mL)及水(0.4 mL)中且在室溫下攪拌。在2小時之後，添加MeOH以形成與水之共沸物，且加入DCM (0.4 mL)接著TFA (0.4 mL，5.19 mmol)。反應混合物藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於1:1水:ACN中，過濾且藉由製備型HPLC純化以獲得呈灰白色粉末狀之標題化合物(17.7 mg，97%純度)。(m/z )：C₂₆ H₃₀ N₄ O₁₅ 之[M+H]⁺ 計算值639.17，實驗值：639.2。製備化合物 C-7

在0℃下向化合物C-6 (300 mg，0.374 mmol)溶解於DCM (3.74 mL)中之溶液中一次性加入N,N' -二甲基伸乙基二胺(159 µl，1.495 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物30分鐘，在DCM (15 mL)中稀釋並用水(3×10 mL)洗滌。有機層經鹽水洗滌，分離，經硫酸鈉乾燥並過濾以獲得呈黃色油狀物之標題中間物(其不經進一步純化即使用)。(m/z )：C₃₃ H₄₁ N₃ O₁₇ 之[M+H]⁺ 計算值752.24，實驗值：752.4。製備化合物 C-8

向氫化鈉(36.4 mg，0.9105 mmol)溶解於THF (3.372 mL)及DMF (1.686 mL)之混合物溶液中加入碳酸雙(2,4-二硝基苯基)酯(299 mg，0.759 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物1小時且接著緩慢加入2-(5-氟-4-甲基吡啶-3-基)-5-(4-甲基-6-(甲磺醯基)吡啶-3-基)-1H -吲哚(化合物C-2M ) (200 mg ,0.506 mmol)溶解於THF (1.2 mL)之溶液且使反應混合物升溫至室溫。在9小時之後，加入飽和碳酸氫鈉且用鹽水洗滌反應混合物。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。藉由管柱層析法(用含0-80% EtOAc之己烷溶離)純化粗殘餘物以獲得呈褐色油狀之標題中間物(109 mg)。(m/z )：C₂₈ H₂₀ FN₅ O₈ S之[M+H]⁺ 計算值606.10，實驗值：606.3。實例 C-2

(a) 化合物C-9 向化合物C-8 (250 mg，0.413 mmol)於DCM (4.13 mL)中之溶液中加入化合物C-9 (310 mg，0.413 mmol)，接著加入4-二甲胺基吡啶(22 mg，0.180 mmol)。在40℃下攪拌反應混合物1小時，冷卻至室溫且濃縮以獲得不經純化即直接用於下一步驟的標題中間物。(m/z )：C₅₅ H₅₇ FN₆ O₂₀ S之[M+H]⁺ 計算值1173.33，實驗值：1173.4。 (b) 化合物C-2 向溶解於THF (4.13 mL)之先前步驟產物(485 mg，0.413 mmol)之脫氣溶液中加入肆(三苯基膦)鈀(0) (47.7 mg，0.041 mmol)及嗎啉(360 µL，4.13 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物45分鐘且接著加入水並分離各層。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由製備型HPLC純化粗殘餘物且冷凍乾燥以獲得呈白色粉末狀之標題化合物(136 mg，99%純度)。(m/z )：C₄₀ H₄₁ FN₆ O₁₄ S之[M+H]⁺ 計算值881.24，實驗值：881.2。生物學分析 已在以下生物分析中之一或多者中表徵本發明之化合物。在分析描述中，式1 化合物可替代地參考作為化合物1 及類似本發明之額外化合物。分析 1 ： 生物化學 JAK 激酶分析 將四種LanthaScreen JAK生物化學分析之組(JAK1、2、3及Tyk2)載於常見激酶反應緩衝液(50 mM HEPES，pH 7.5，0.01% Brij-35，10 mM MgCl₂ ，及1 mM EGTA)中。重組GST標記之JAK酶及GFP標記之STAT1肽受質獲自Life Technologies。使連續稀釋之化合物與四種JAK酶中之每一者及受質在白色384孔微量培養盤(Corning)中一起在環境溫度下預培育1小時。隨後添加總體積為10 μL、具有1% DMSO之ATP以引發激酶反應。 JAK1、2、3及Tyk2之最終酶濃度分別為4.2 nM、0.1 nM、1 nM及0.25 nM；使用之相應Km ATP濃度為25 μM、3 μM、1.6 μM及10 μM；而用於所有四個分析之受質濃度均為200 nM。亦在1 mM ATP濃度下測試JAK1激酶活性。在環境溫度下使激酶反應進行1小時，之後加入EDTA (10 mM最終濃度)及Tb抗pSTAT1 (pTyr701)抗體(Life Technologies，2 nM最終濃度)於TR-FRET稀釋緩衝液(Life Technologies)中之10 μL製劑。在環境溫度下將培養盤培育1小時，之後在EnVision讀取器(Perkin Elmer)上讀取。記錄且使用發射比信號(520 nm/495 nm)，以基於DMSO及背景對照計算抑制百分比值。對於劑量反應分析，相較於化合物濃度繪製抑制百分比資料，且用Prism軟體(GraphPad Software)自4參數穩固擬合模型測定IC₅₀ 值。結果表示為pIC₅₀ (IC₅₀ 之負對數)，且隨後使用Cheng-Prusoff等式變換為pK_i (解離常數Ki之負對數)。表1彙總化合物1 及托法替尼(化合物2 )之結果。表 1 酶效能

分析 2 ： 化合物 1 在來自大腸桿菌之 β - 葡萄糖醛酸酶中之代謝穩定性 為表徵化合物1 在存在β-葡萄糖醛酸酶之情況下的中間代謝物及最終產物，在37℃下在存在來自大腸桿菌(100 單位/毫升於0.1 M磷酸鉀緩衝液中)之β-葡萄糖醛酸酶的情況下培育化合物1 (30 μM於DMSO中)時程0至90分鐘。在時間點0、1、2、3、5、10、15、30、60及90分鐘時藉由添加100 µL ACN淬滅培育。樣本經水+1%甲酸(4次)稀釋且使用Thermo Q-Exactive^TM LC-MS系統分析。藉由與使用與該等樣本相同的稀釋液所測定之標準曲線相比來定量化合物1 及托法替尼濃度。化合物1 快速消失(半衰期＜5分鐘)伴有快速且暫時形成糖苷配基中間產物(方案2中之化合物b )。觀測糖苷配基中間產物至其後續二胺中間產物(化合物d )及最終活性代謝物(托法替尼)的轉化為更慢速的判定步驟。觀測到托法替尼之濃度在歷經90分鐘時程之實驗逐漸增加至最終濃度約20 µM。為證實觀測之化合物1 至托法替尼的轉化係歸因於葡萄糖醛酸酶相互作用，將化合物1 (30 µM)與β-葡萄糖醛酸酶(45單位/毫升)及已知細菌性b-葡萄糖醛酸酶抑制劑阿莫沙平(amoxapine) (100 µM)一起培育。在60分鐘培育之後，與7 µM (無抑制劑)相比，在抑制劑存在的情況下托法替尼之最終濃度為1 µM。分析 3 ： 自大鼠上部及下部腸道內含物製備之勻漿的代謝穩定性 在自剛殺死大鼠分離的不同GI節段製備的腸內腔內含物中評估化合物1 至托法替尼的轉化。以1:10杜貝克氏磷酸緩衝液生理鹽水(DPBS)溶液稀釋來自十二指腸、空腸、回腸及結腸之內含物的各節段。將化合物1 之10 mM DMSO儲備液在DPBS中經稀釋以得到10 µM之最終受質濃度。在37℃下在水浴中進行培育且採集時間點0、5分鐘、10分鐘、20分鐘、40分鐘及60分鐘時。總培育體積為400 µL且在每個時間點取用40 µL等分試樣並在160 µL之97% ACN +3%甲酸+內標物中稀釋。該等樣本以2200 rcf離心10分鐘且將50 µL上清液在150 µL水+1%甲酸中稀釋。在API 4000質譜儀上分析該等樣本中之化合物1 及托法替尼。針對化合物1 之消失所測定之半衰期彙總於下表中。表 2

分析 4 ： 化合物 1 在大鼠中之口服藥物代謝動力學 此研究之目的為在同時口服給藥之後比較化合物1 及托法替尼之胃腸黏膜與血漿藥物代謝動力學。藉由將3 mg/kg之化合物1 及標準化劑量1.2 mg三氘標記之托法替尼(D₃ -托法替尼)調配成5% DMSO + 1%羥丙基甲基纖維素於水中之溶液經由口服管飼向雄性史泊格多利大鼠(n=3/時間點)給藥。在每個時間點(0.5小時、1小時、3小時、6小時、8小時及24小時)處，藉由心臟打孔採集血漿樣品且收集以下組織：胃、上部胃腸道(大致分割成三段[U-1、U-2、U-3])、盲腸及下部胃腸道(大致分割成半邊[L-1、L-2])。各組織樣本經水沖洗，拍乾，轉移至配衡容器，稱重，經3倍組織重量/體積(w/v)且酸化的水稀釋，以6500 RPM (3×45秒)均質化且冷凍。按以下測定各組織樣本中自化合物1 釋放之托法替尼與D₃ -托法替尼的濃度。該等組織樣本經渦旋，與50 µL等分試樣之大鼠血漿組合，用200 µL含有內標物之ACN萃取且藉由LC-MS對照內標物定量。可在3小時與8小時之間的血漿中、在經由8小時的胃及區段U-1、U-2及U-3中、且在3小時與24小時之間的盲腸及區段L-1及L-2中量測自化合物1 釋放的托法替尼濃度。可在0.5小時與8小時之間的血漿中、在經由8小時的胃及區段U-1、U-2及U-3中及3小時與24小時之間的盲腸及區段L-1及L-2中量測D₃ -托法替尼的濃度。在表3中報告所得標準藥物代謝動力學參數、C_max (最大濃度)及AUC (0-t) (濃度比時間之曲線下面積，整合至所量測之最後的時間點)。表 3 ：大鼠中托法替尼與 D₃ - 托法替尼濃度

分析 5 ：化合物 1 在食蟹獼猴中之口服藥物代謝動力學 此研究之目的為在同時口服給藥之後比較化合物1 與托法替尼之結腸及血漿藥物代謝動力學。藉由將3 mg/kg化合物1 及2.1 mg/kg三氘標記之托法替尼(D₃ -托法替尼)調配成98.5% pH 6檸檬酸酯緩衝液+1%羥丙基甲基纖維素+0.5% Tween 20溶液經由口服管飼給藥雄性食蟹獼猴(n=1/時間點)。在每個時間點(0.5小時、1小時、3小時、6小時、9小時及24小時)處，自股靜脈採集血漿樣品且收集以下組織：胃、上部胃腸道(大致分割成三段[U-1、U-2、U-3])、盲腸、近端結腸、末端結腸及直腸。各組織樣本經水沖洗，拍乾，轉移至配衡容器，稱重，快速冷凍，粉碎並儲存於-70℃下。大致2 g等分試樣經3倍組織重量/體積(w/v)且含對照大鼠血漿之水稀釋、均質化並儲存於-70℃下。按以下測定各組織樣本中自化合物1 釋放之托法替尼與D₃ -托法替尼的濃度。該等樣本經渦旋，且50 µL等分試樣之血漿或製備之組織樣本經200 µL含有內標物之ACN萃取且藉由LC-MS對照內標物定量。可在0.5小時與24小時之間的血漿及所有組織樣本中量測自化合物1 釋放之托法替尼的濃度。可在0.5小時與9小時之間的血漿及胃中，及0.5小時與24小時之間的所有其他組織區段中量測D₃ -托法替尼的濃度。在表4中報告所得標準藥物代謝動力學參數、C_max (最大濃度)及AUC (0-t) (濃度比時間之曲線下面積，整合至所量測之最後的時間點)。表 4 ：獼猴中托法替尼與 D₃ - 托法替尼濃度

分析 6 ：噁唑酮 誘導之結腸炎之小鼠模型 噁唑酮誘導之結腸炎為與人類潰瘍性結腸炎組織學類似之實驗模型(Heller等人，Immunology ，2002 ，17 ，629-638)。在分析中使用來自BioNeeds(印度)之成年BALB/C小鼠(25-28 g，9-12週齡)。在第1天，用異氟醚輕度麻醉動物，且謹慎地移除肩部之間的毛髮，之後針對皮膚敏感化緩慢施用噁唑酮(6毫克/鼠，100 µL，4:1丙酮:橄欖油調配物)或媒劑溶液。在皮膚敏感化之後的六天，使小鼠禁食整夜，藉由氯胺酮麻醉且IP投與甲苯噻嗪，且將填充有噁唑酮溶液在1 mL注射器小心地插入至鼠結腸約3.8 cm。使動物保持頭向下的位置且歷經一分鐘非常緩慢地經直腸滴注噁唑酮(0.5 mg/50 µL/鼠之50 %乙醇)或50%乙醇/生理鹽水。將小鼠垂直固持(頭向下)額外一分鐘以確保全部噁唑酮溶液保留在結腸內部。在噁唑酮直腸內(IR)激發之前的晚上，開始藥物處理(PO，BID或TID)或媒劑。在噁唑酮直腸內激發後的第一(第1天)及第二(第2天)天，藉由針對各老鼠之不知情治療實驗根據以下單項得分來評定疾病活性指數(DAI)：大便稠度(0，正常；2，鬆軟；4，腹瀉)、總出血及大便潛血測試(0，不存在；2；帶血絲；4，明顯存在血液)，及重量減輕(0，無；1，1%-5%；2，6%-10%；3，11%-15%；4，大於15%)；DAI =(大便稠度+血液存在度+重量減輕得分)之平均值。在實驗過程期間進行基於全部DAI得分之曲線下面積(AUC)計算以追蹤疾病進展。按AUC=[ (第1天-第0天)×平均(第0天及第1天之DAI得分)]+[ (第2天-第1天)×平均(第1天及第2天之DAI得分)]計算各實驗組之AUC。斯圖登氏t檢驗(Student'st - test)比較媒劑/媒劑與媒劑/噁唑酮組之DAI AUC得分以評估在噁唑酮治療之後是否誘發疾病。此後接藉由鄧尼特後測試(Dunnett'spost hoc test )之單向ANOVA以比較媒劑/噁唑酮與測試化合物/噁唑酮組之DAI AUC得分。由α水準設定為p＜0.05定義統計顯著性。在噁唑酮誘導之急性結腸炎模型中，式1 化合物(3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg及60 mg/kg，PO，BID)產生噁唑酮誘導之結腸炎的顯著逆轉，與藉由托法替尼(30 mg/kg及60 mg/kg，PO，BID)獲得之逆轉程度類似。在噁唑酮模型之獨立實驗中，式4 化合物(3 mg/kg、10 mg/kg及30 mg/kg，PO，BID)產生噁唑酮誘導之結腸炎的顯著逆轉，與藉由托法替尼(30 mg/kg，PO，BID)獲得之逆轉程度類似。分析 7 ： 在鼠脾自然殺手 (NK) 細胞中之免疫抑止效應 鼠脾細胞之損耗為免疫抑止之實驗模型(Kudlacz 等人，Am. J. of Transplantation ，2004 ，4 ，51-57)。在與噁唑酮誘導子結腸炎模型(分析6)中所使用之相同治療範例之後，在鼠脾細胞模型中評定化合物1 。來自Harlan之成年雄性Balb/C小鼠(12-14週齡)用於該研究。向naïve小鼠經口給藥化合物1 (1 mg/kg、3 mg/kg及10 mg/kg，BID)及托法替尼(10 mg/kg、30 mg/kg及60 mg/kg，BID)三天。最後劑量後30分鐘或3小時收集脾且立即壓碎以用於細胞亞型染色。固定之前，將用於CD19 (FITC；B細胞)、CD3e (PE；pan T細胞)及DX5 (APC；NK細胞)之螢光團標記之抗體與來自各動物之脾細胞樣本一起培育，以使得可在流式細胞儀上進行同步的多種亞型%分析。各動物之總脾細胞數量由Scepter™ 2.0手持型自動細胞計數器量測。自各亞型之百分比乘以各動物之總脾細胞來計算淋巴細胞亞型群體(例如，脾B、T及NK細胞)之絕對數。鄧尼特事後測試(Dunnett'spost hoc test )下之單向ANOVA用以比較媒劑及測試化合物組之脾淋巴細胞數目。α水準設定在p ＜ 0.05下。對於各組，資料呈現為平均值± SEM。托法替尼(10 mg/kg、30 mg/kg及60 mg/kg；PO，TID)劑量依賴性地且顯著地減少脾NK細胞計數。在相同研究中，脾NK細胞計數不受化合物1 以PO (BID)劑量至多10 mg/kg(最大劑量測試)影響。對於使用任一化合物之B及T細胞群體，未觀測到治療效應。此資料結合化合物1 在噁唑酮誘導之結腸炎(分析6)的小鼠模型中的抗結腸炎效應使功能性治療指數經計算如下文在表5中所報告。表 5 ：功能性治療指數

* 與其媒劑相比，有效劑量在噁唑酮模型中展示可比性藥理學效應分析 8 ： 大鼠結腸糞便勻漿穩定性 此研究之目的為測定本發明化合物在大鼠結腸糞便勻漿中之穩定性，亦即，在大鼠結腸糞便中存在β-葡萄糖醛酸酶的情況下用於分解的半衰期。在藉由心臟打孔放血殺死naïve雄性大鼠(約300 g)之後，接合且移除結腸至厭氧腔室中(AS-580，厭氧菌系統)。在腔室內移除糞便內含物並經1:10 (1公克比9 mL磷酸緩衝液)稀釋且接著使用手持型Omni Tissue Master試劑均質化。糞便勻漿以2000 g離心10分鐘以移除塊狀且移除上清液並用以培育。測試物品及陽性對照(柳氮磺胺吡啶)製備為10 mM DMSO儲備液。各分析之最終受質濃度為10 µM (化合物5 為30 µM)。藉由添加5 µL等分試樣之經稀釋測試化合物儲備液至300 µL大鼠糞便上清液勻漿中來開始反應。在反應開始後0、15分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘及120分鐘，藉由3%甲酸及內標分子將50 µL等分試樣移至200 µL乙腈中。所有樣本以2000 g離心10分鐘，之後將50 µL上清液在150 µL水中稀釋以在LC-MS系統上分析。如下計算缺失前藥之活體外半衰期：(T¹ /₂ =0.693/消除速率常數)。表 6. 活體外結腸穩定性

分析 9 ：老 鼠之口服藥物代謝動力學 此研究之目的為在口服給藥小鼠之後評定本發明之前藥向托法替尼之血漿與結腸轉化。雄性Balb/c小鼠(n=2/時間點)接受單一PO口服管飼劑量(含5 mg/kg之5% DMSO與1% HPMC的1:20混合物)之測試化合物。在給藥後2小時及6小時，經由心臟打孔放血殺死小鼠，將所得血液樣本置放在含有NaF之Microtainer®導管中並接著置放在冰上。在4℃下藉由以大致12,000 rpm離心(eppendorf離心機，5804R) 4分鐘獲得血漿。自經放血的小鼠移除結腸並平緩地移除結腸糞便內容物。該等結腸經生理鹽水沖洗並拍乾。隨後在大致4℃下使用Precellys均勻器在3倍體積之無菌水中均質化該等結腸。所有樣本儲存於-80℃下用以隨後生物分析。如下測定各組織樣本中自前藥釋放之托法替尼的濃度：血漿及結腸勻漿樣本經渦旋，與50 µL等分試樣之大鼠血漿組合，經200 µL含有內標物之ACN萃取且藉由LC-MS對照內標物定量。針對血漿及結腸測試化合物及釋放之托法替尼計算濃度曲線下的面積(AUC_0-6 _小時 )。評定適用性之關鍵參數為托法替尼結腸/血漿AUC比。表 7 ：老鼠之托法替尼濃度

分析 10 ：大鼠之口服藥物代謝動力學 此研究之目的為在口服給藥大鼠之後評定本發明之前藥向托法替尼之血漿與結腸轉化。雄性史泊格多利大鼠(n=2/時間點)接受單一PO口服管飼劑量(含5 mg/kg之5% DMSO與1% HPMC的1:20混合物)之測試化合物。在給藥後0.5小時、1小時、3小時、6小時及24小時，經由心臟打孔放血殺死大鼠，將所得血液樣本置放在含有NaF之Microtainer®導管中並接著置放在冰上。在4℃下藉由以大致12,000 rpm離心(Eppendorf離心機，5804R) 4分鐘獲得血漿。自經放血的大鼠移除結腸並平緩地移除結腸糞便內容物。該等結腸經生理鹽水沖洗並拍乾。隨後在大致4℃下使用Precellys均勻器在3倍重量之無菌水中均質化該等結腸。所有樣本儲存於-80℃下用以隨後生物分析。如下測定各組織樣本中自前藥釋放之托法替尼的濃度：血漿及結腸樣本經渦旋，與50 µL等分試樣之大鼠血漿組合，經200 µL含有內標物之ACN萃取且藉由LC-MS對照內標物定量。針對血漿及結腸測試化合物及釋放之托法替尼計算濃度曲線下的面積(AUC_0-6hr )。評定適用性之關鍵參數為托法替尼結腸/血漿AUC比。表 8 ： 大鼠之托法替尼濃度

分析 11 ：大鼠結腸內含物中之對比化合物的代謝穩定性 自naïve雄性史泊格多利大白鼠採集結腸糞便內含物且經1:10 (1公克比9 mL磷酸緩衝液)稀釋且接著使用手持型Omni Tissue Master試劑均質化。測試化合物、對比化合物C-1 及C-2 以及本發明之化合物、化合物1 製備為10 mM DMSO儲備溶液且在磷酸緩衝液中稀釋成10 µM之最終受質濃度。將5 µL等分試樣之經稀釋測試化合物摻入至300 µL大鼠結腸內含物勻漿中以在37℃下開始反應。在以下時間點(0、15分鐘、50分鐘、85分鐘及120分鐘)自培育移除等分試樣(50 µL)且藉由3%甲酸及內標分子加入至200 µL ACN中。使用與該等樣本相同之基質及稀釋程序製作各代謝物、托法替尼、5-ASA (化合物C-1M )及CRAC抑制劑(化合物C-2M )的標準曲線。所有樣本以2000×g離心10分鐘，之後將50 µL上清液在150 µL水中稀釋且使用Thermo Q-Exactive LC-MS系統分析。使用格拉夫帕德稜鏡(GraphPad Prism)及Microsoft Excel列表顯示且繪製資料。在培育之後，在受質濃度為10 µM時，在大鼠結腸內含物中，該等比較化合物以及本發明之化合物皆展示母體分子在培育中的快速缺失(半衰期＜15分鐘)。然而，在量測各前藥之活性代謝物後，僅化合物1 產生可量測水準之其活性代謝物(托法替尼)。在120分鐘培育之後量測托法替尼濃度為8.8 µM。相比之下，化合物C-1 及C-2 未能產生任何可量測量之其活性代謝物(對應的化合物C-1M 及C-2M )。歷經120分鐘代謝物產生之時程圖示於圖1中。雖然本發明已參考其特定態樣或實施例進行描述，但一般熟習此項技術者應瞭解，可進行各種變化或可代入等效物，而不偏離本發明之真實精神及範疇。另外，在由適用之專利狀況及規定允許之程度上，本文中所引用之所有公開案、專利及專利申請案以全文引用之方式併入本文中，該引用之程度如同將各文件單獨地以引用之方式併入本文中一般。

圖1說明作為藉由大鼠結腸內含物培育本發明之化合物(化合物1 )及對比化合物C-1 及C-2 的結果，活性代謝物、托法替尼及化合物C-1M 及C-2M 分別隨時間變化之濃度。

Claims

一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，
其中n為0、1或2；R¹係選自氫、C_1-4烷基、C_1-3烷氧基、胺基、硝基、鹵基、氰基、羥基及三氟甲基；各個R²(若存在)係獨立地選自C_1-4烷基、C_1-3烷氧基、胺基、硝基、鹵基、氰基、羥基及三氟甲基；R³為氫、甲基或乙基；R⁴為氫、甲基或乙基。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹為氫。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹為硝基。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹為胺基。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為0。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為1。
一種式(II)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，
其中R¹係選自氫、C_1-4烷基、C_1-3烷氧基、胺基、硝基、鹵基、氰基、羥基及三氟甲基。
如請求項7之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹係選自氫、甲基、甲氧基、胺基、硝基及氯基。
如請求項7之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹為氫。
如請求項7之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹為胺基。
一種式1化合物或其醫藥學上可接受之鹽，
如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-(4-(((3R,4R)-1-(2-氰乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)胺基)-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)-氧基)甲基)-2-硝基苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸。
如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中在與β-葡糖醛酸酶接觸之後，產生式2化合物或其鹽：
一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑及如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
一種如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造供治療哺乳動物之胃腸發炎性疾病用之藥物。
如請求項15之用途，其中該胃腸發炎性疾病為潰瘍性結腸炎。
如請求項15之用途，其中該胃腸發炎性疾病為克羅恩氏病(Crohn's disease)。
如請求項15之用途，其中該胃腸發炎性疾病為與免疫檢查點抑制劑療法相關聯之結腸炎。
一種製備如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之方法，該方法包括由式(I-A)化合物或其鹽脫除保護基：
其中R¹、R²、R³、R⁴及n如請求項1中所定義；各個PG^a獨立地為羥基保護基；且PG^b為羧基保護基；以獲得式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項19之方法，其中R¹為硝基；R³及R⁴為甲基；各個PG^a為乙醯基；PG^b為甲基；且n為0。
一種用於製備如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之方法，該方法包含：(a)使式12'化合物或其鹽、其中各個PG^a獨立地為羥基保護基
與式13化合物反應：
以獲得式14'化合物：
以及(b)脫除式14'化合物之保護基以獲得式1化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
一種式13化合物或其鹽，