JP2022514089A - 胃腸疾患の治療のためのｊａｋ１経路阻害剤 - Google Patents

Abstract

本開示は、ＪＡＫ１経路阻害剤、及び潰瘍性大腸炎などの胃腸疾患または障害を治療する際のそれらの使用に関する。

Description

本開示は、ＪＡＫ１経路阻害剤、及び胃腸疾患または障害を治療する際のそれらの使用に関する。

潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、世界中の炎症性腸疾患の最も一般的な形態である。それは、典型的には直腸に及びかつ近位に広がって結腸にも及ぶ、粘膜の慢性、特発性、再発性の疾患であり、びまん性易出血性及び出血を伴うびらんをもたらす。疾患程度及び症状重症度の間にいくらかの相関があるが、疾患の経過は多くの患者において軽度である（Ｓｏｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２００９；４４：４３１－４４０）。ほとんどの患者において、疾患は、症状のフレアアップ及び寛解の期間によって特徴付けられ、患者はまた、経時的に疾患延長を経験し得る。

ＵＣを有する患者は、典型的には、しばしば痙攣性腹痛及びテネスムスに関連する、直腸出血及び下痢の再発エピソードを経験する。特徴的な臨床像は、下痢、直腸出血、粘液の排出、テネスムス、便意切迫、及び腹痛を含む。患者はまた、特により重度の症例では、疲労、発熱、体重減少、及び脱水を経験する場合もある。死亡率は一般にＵＣでは増加しないが、疾患は生命を脅かす劇症大腸炎として存在し得る。ほとんどの患者は、疾患寛解の期間によって分離された疾患活動性の増大の期間を伴う慢性断続的な経過に従う。初期診断後、およそ半数の患者が任意の単一の時点で活動性疾患を有し、およそ９０％が間欠的なフレアによって特徴付けられる疾患経過を有するであろう。

発展途上国におけるＵＣの発生率は、２０世紀半ばから着実に増加している。ＵＣの年間発症率は１０万人あたり１．２～２０．３症例であり、最も高い発症率は北欧及び北米の集団において見られる（Ｌｏｆｔｕｓ ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２００４；１２６：１５０４－１５１７）。ＵＣの典型的な発症は、１５～３０歳の間に生じる（Ａｎｄｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．１９９９；２８：２５５－２８１）。男性及び女性は、同等の割合で罹患するようである。西洋化された環境及びライフスタイルは、炎症性腸疾患に対するリスク因子として認識される。

ＵＣに対する現在の療法は、メサラミン、グルココルチコイド、チオプリン、ならびにＴＮＦα及びα４β７インテグリンの阻害剤を含む。多くの患者は、これらの療法に対する応答を有しないか、または持続的でない応答を有する。

これらの治療オプションにもかかわらず、ＵＣ患者の顕著な割合は、難治性、重度の劇症疾患のため、またはいくつかの場合では、がん予防のために結腸切除術を依然として必要とする。ＵＣを有する患者は、しばしば直腸切除及び肛門温存大腸切除術によって治癒すると見なされるが、生活の質は不良であり、手術は、女性の妊孕力の低下及び回腸嚢炎の発症を含む、短期及び長期の合併症に関連し得る。

現在、現在の薬理学的療法は、ＵＣに対する治療法を提供することができない。主な治療目標は、寛解を誘導し、次いで、その状態を維持することである。

したがって、潰瘍性大腸炎などの胃腸疾患または障害の治療のために新しい療法を開発する必要がある。本出願は、この必要性及び他のものに対処する。

２５ｍｇの単回用量での化合物１の投与後の個々の最大便濃度の平均値に対する平均血漿濃度－時間プロファイルを示す。 ２５ｍｇの単回用量での化合物１の投与後の便濃度の個々の血漿濃度－時間プロファイルを示す。 １時間のインキュベート後の健常対象及び潰瘍性大腸炎対象からの結腸における［^１４Ｃ］化合物１濃度を示す。 実施例３に記載されるような、患者における化合物１治療群（ＰＤ評価可能対象）によるＩＬ－６及びＴＰＯ誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の変化を示す。 実施例３に記載されるような、患者におけるＳＴＡＴ３のリン酸化のＩＬ－６刺激性阻害と有効性の尺度（ベースラインからの、医師による静的全体評価（ｓＰＧＡ）ならびに乾癬面積及び重症度指標（ＰＡＳＩ）の変化）との間の相関関係を示す。 実施例３に記載されるような、個体における１５日目のサイクル１上のＩＬ－６誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の変化を示す。 実施例３に記載されるような、個体における１５日目のサイクル１上のＴＰＯ誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の変化を示す。 １日２回の化合物１治療（３０ｍｇ／ｋｇ）が、自発性大腸炎のＩＬ－１０ノックアウトマウスモデルにおいて、症状（図７Ａ）、肉眼的組織異常（図７Ｂ）、及び組織病理学的証拠（図７Ｃ～７Ｄ）を低減することを示す。データは、平均値＋標準誤差、１治療群あたりｎ＝９～１０を表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 １日２回の化合物１治療（３０ｍｇ／ｋｇ）が、オキサゾロン誘導性大腸炎のマウスモデルにおいて、症状（図８Ａ）、組織損傷（図８Ｂ）、及び炎症性腫脹（図８Ｃ）を低減することを示す。データは、平均値＋標準誤差、１治療群あたりｎ＝８を表す。大腸炎疾患及び肉眼的評価のためのＤｕｎｎ検定を伴う非パラメトリック両側Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ。結腸重量分析のためのＨｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ検定を伴うパラメトリック両側ＡＮＯＶＡ ＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１。 経口的（図９Ａ）、または結腸内注射を介して（図９Ｂ）投与された１日２回の化合物１治療が、マウスにおけるＴＮＢＳ誘導性大腸炎モデルにおいて、疾患重症度を有意に低減したことを示す。データは、平均値＋標準誤差、１治療群あたりｎ＝３～８を表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。 ３０ｍｇ／ｋｇでの化合物１を用いた１日２回の治療の結果が、自発性大腸炎のＩＬ－１０ノックアウト（ＫＯ）マウスモデルにおいて疾患発症を阻害したことを示す。データは、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝９～１０を表し、ｐ値はＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線分析を使用して計算された。ＳＥＭ、平均値の標準誤差。 経口的（図１１Ａ）、または結腸内注射を介して（図１１Ｂ）のいずれかの化合物１を用いた１日２回の治療が、マウスにおけるＴＮＢＳ誘導性大腸炎モデルにおいて、疾患重症度を有意に低減したことを示す。高用量経口（図１１Ｃ）及び低用量結腸内（図１１Ｄ）は、ＩＣ_５０適用範囲を上回る持続的な薬物曝露を達成した。データは、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８を表す。ＩＢＤ、炎症性腸疾患；ＳＥＭ、平均値の標準誤差。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。 自発性大腸炎マウスモデルにおける化合物１の経口投与後のＩＬ－１０ ＫＯマウス結腸における差異的発現遺伝子の火山プロットを示す。 自発性大腸炎マウスモデルにおけるビヒクル群と比較して、化合物１治療マウスにおける統計学的に有意な差異的発現遺伝子を示す。 炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のオキサゾロン誘導性マウスモデルにおける全身的かつ局在化された結腸内化合物１送達の結果を示す。１日２回の化合物１治療は、経口的（図１３Ａ、１３Ｃ）、または結腸内（図１３Ｂ、１３Ｄ）投与され、マウスにおけるオキサゾロン誘導性大腸炎モデルにおいて、有意に大便硬さを改善し、便潜血スコアを低減した。データは、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８を表す。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のオキサゾロン誘導性マウスモデルにおける全身的かつ局在化された結腸内化合物１送達の結果を示す。１日２回の化合物１治療は、経口的（図１３Ａ、１３Ｃ）、または結腸内（図１３Ｂ、１３Ｄ）投与され、マウスにおけるオキサゾロン誘導性大腸炎モデルにおいて、有意に大便硬さを改善し、便潜血スコアを低減した。データは、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８を表す。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のオキサゾロン誘導性マウスモデルにおける全身的かつ局在化された結腸内化合物１送達の結果を示す。１日２回の化合物１治療は、経口的（図１３Ａ、１３Ｃ）、または結腸内（図１３Ｂ、１３Ｄ）投与され、マウスにおけるオキサゾロン誘導性大腸炎モデルにおいて、有意に大便硬さを改善し、便潜血スコアを低減した。データは、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８を表す。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のオキサゾロン誘導性マウスモデルにおける全身的かつ局在化された結腸内化合物１送達の結果を示す。１日２回の化合物１治療は、経口的（図１３Ａ、１３Ｃ）、または結腸内（図１３Ｂ、１３Ｄ）投与され、マウスにおけるオキサゾロン誘導性大腸炎モデルにおいて、有意に大便硬さを改善し、便潜血スコアを低減した。データは、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８を表す。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ビヒクルと比較して、経口または直接結腸に投与された化合物１から生じる結腸短縮の代表的な画像を示す。経口（図１４Ｂ）及び結腸内（図１４Ｄ）化合物１治療は、オキサゾロン誘導性マウス大腸炎モデルにおけるそれぞれのビヒクル治療対照（図１４Ａ、１４Ｃ）と比較して、結腸短縮を有意に改善した。結腸長データ（図１４Ｅ）は、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８としてグラフ化される。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ビヒクルと比較して、経口または直接結腸に投与された化合物１から生じる結腸短縮の代表的な画像を示す。経口（図１４Ｂ）及び結腸内（図１４Ｄ）化合物１治療は、オキサゾロン誘導性マウス大腸炎モデルにおけるそれぞれのビヒクル治療対照（図１４Ａ、１４Ｃ）と比較して、結腸短縮を有意に改善した。結腸長データ（図１４Ｅ）は、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８としてグラフ化される。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ビヒクルと比較して、経口または直接結腸に投与された化合物１から生じる結腸短縮の代表的な画像を示す。経口（図１４Ｂ）及び結腸内（図１４Ｄ）化合物１治療は、オキサゾロン誘導性マウス大腸炎モデルにおけるそれぞれのビヒクル治療対照（図１４Ａ、１４Ｃ）と比較して、結腸短縮を有意に改善した。結腸長データ（図１４Ｅ）は、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８としてグラフ化される。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ビヒクルと比較して、経口または直接結腸に投与された化合物１から生じる結腸短縮の代表的な画像を示す。経口（図１４Ｂ）及び結腸内（図１４Ｄ）化合物１治療は、オキサゾロン誘導性マウス大腸炎モデルにおけるそれぞれのビヒクル治療対照（図１４Ａ、１４Ｃ）と比較して、結腸短縮を有意に改善した。結腸長データ（図１４Ｅ）は、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８としてグラフ化される。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ビヒクルと比較して、経口または直接結腸に投与された化合物１から生じる結腸短縮の代表的な画像を示す。経口（図１４Ｂ）及び結腸内（図１４Ｄ）化合物１治療は、オキサゾロン誘導性マウス大腸炎モデルにおけるそれぞれのビヒクル治療対照（図１４Ａ、１４Ｃ）と比較して、結腸短縮を有意に改善した。結腸長データ（図１４Ｅ）は、平均値＋ＳＥＭ、１治療群あたりｎ＝８としてグラフ化される。ＳＥＭ：平均値の標準誤差。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 全身的化合物１送達が、ＩＬ－１０ ＫＯマウスにおける結腸形態に対する有意な保護効果と関連付けられることを示す。図１５Ａは代表的な結腸を示し、図１５Ｂはヘマトキシリン／エオシン染色結腸切片を示す。図１５Ｂにおける白い矢印は、単核細胞浸潤の面積を示す。２０倍拡大率、バー＝１００μｍ。

胃腸疾患または障害の治療を必要とする対象における、それを行うための方法は、本明細書に提供され、治療有効量のＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を該対象に投与することを含む。

胃腸疾患または障害の治療を必要とする対象におけるそのためのＪＡＫ１経路阻害剤が、本明細書に提供される。

胃腸疾患または障害の治療を必要とする対象における、それを行うことにおける使用のための薬剤の製造のためのＪＡＫ１経路阻害剤の使用が、本明細書に提供される。

本発明は、とりわけ、胃腸疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを行うための方法を提供し、治療有効量のＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を該対象に投与することを含む。

本明細書に記載される方法は、ＪＡＫ１経路阻害剤、特にＪＡＫ１選択的阻害剤を利用する。ＪＡＫ１選択的阻害剤は、他のＪａｎｕｓキナーゼよりも優先的にＪＡＫ１活性を阻害する化合物である。ＪＡＫ１は、調節不全の際に疾患状態をもたらすか、または疾患状態に寄与することができる、いくつかのサイトカイン及び増殖因子シグナル伝達経路において中心的な役割を果たす。ＪＡＫ１は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を含む多くの炎症性障害に関連するいくつかの炎症性サイトカインのシグナル伝達を媒介するために他のＪＡＫと協働することが示されている。複数のＵＣ関連サイトカイン経路を標的とすることによるＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達の阻害は、主要免疫細胞の炎症、細胞活性化、及び増殖を同時に低減する可能性を有し、したがって、ＵＣの治療のための有望な治療戦略を表す。ＵＣの治療のためのトファシチニブは、最近ＦＤＡによって承認された。しかしながら、全身作用性の汎ＪＡＫ阻害剤として、トファシチニブ療法は、免疫抑制の増加したリスクを伴うようである（Ｓａｎｄｂｏｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ． Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１７；３７６：１７２３－１７３６）。

ＪＡＫ１経路阻害剤、具体的には化合物１（すなわち、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、表１を参照されたい）は、持続放出形態で、かつ全身的療法のために使用されるものよりも低い用量で投与される際に、全身的曝露を最小化しながら結腸曝露を最大化する（例えば、実施例１を参照されたい）。結果として、ＪＡＫ１経路阻害剤の有効性は、全身的というよりむしろ、主に局所的なＪＡＫ１阻害を通じて媒介されるように予想される。

さらに、胃腸疾患を有する患者は、ＪＡＫ１阻害、特に選択的ＪＡＫ１経路阻害から利益を得る場合がある。ＪＡＫ１の選択的阻害剤は、他のＪＡＫキナーゼを阻害することの不必要かつ潜在的に望ましくない作用を回避する一方で有効であり得る。

したがって、対象における胃腸関連疾患または障害を治療するための方法が提供され、該方法は、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、ＪＡＫ１経路阻害剤を投与した後のＪＡＫ１経路阻害剤の最大便濃度は約２５ｎＭ以上であり、ＪＡＫ１経路阻害剤を投与した後の最大総血漿濃度（Ｃ_ｍａｘ）は約４５０ｎＭ未満である。

最大便濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後の期間（例えば、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後０～約４８時間）にわたって、例えば、タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析と共に液体クロマトグラフィーを使用して便濃度を測定することによって決定され得る。化合物１の便濃度を測定することは、本明細書の実施例Ｃに記載される方法によって行われ得る。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大便濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に、約２５ｎＭ、約３０ｎＭ、約３５ｎＭ、約４０ｎＭ、約４５ｎＭ、約５０ｎＭ、約５５ｎＭ、約６０ｎＭ、約６５ｎＭ、約７０ｎＭ、約７５ｎＭ、約８０ｎＭ、約８５ｎＭ、約９０ｎＭ、約９５ｎＭ、または約１００ｎＭ以上である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大便濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約５０ｎＭ以上である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大便濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約２５ｎＭ～１００ｎＭである。

最大総血漿濃度（すなわち、Ｃ_ｍａｘ）は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後の期間（例えば、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後０～約４８時間）にわたって、例えば、タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析と共に液体クロマトグラフィーを使用して血漿濃度を測定することによって決定され得る。化合物１の血漿濃度を測定することは、本明細書の実施例Ｃに記載される方法によって行われ得る。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大総血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に、約４５０ｎＭ、約４２５ｎＭ、約４００ｎＭ、約３７５ｎＭ、約３５０ｎＭ、約３２５ｎＭ、約３００ｎＭ、約２７５ｎＭ、約２５０ｎＭ、約２２５ｎＭ、約２００ｎＭ、約１７５ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１２５ｎＭ、約１００ｎＭ、約７５ｎＭ、または約５０ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大総血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に、約１５０ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大総血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に、約１４１ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大総血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に、約１００ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、最大総血漿濃度は、約２５ｎＭ～１００ｎＭである。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大非結合型血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約１５０ｎＭ以下である。最大非結合型血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大総血漿濃度（例えば、実施例Ｃを参照されたい）及びインビトロタンパク質結合に由来でき、平衡透析によって決定され得る。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大非結合型血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に、約１５０ｎＭ、約１２５ｎＭ、約１００ｎＭ、約７５ｎＭ、約５０ｎＭ、または約２５ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大非結合型血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約１００ｎＭ以下である。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤の最大非結合型血漿濃度は、ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約５０ｎＭ以下である。

いくつかの実施形態では、最大便濃度に対する最大非結合型血漿濃度の比は、約６、約５、約４、約３、約２、または約１以下である。いくつかの実施形態では、最大便濃度に対する最大非結合型血漿濃度の比は、約２以下である。いくつかの実施形態では、最大便濃度に対する最大非結合型血漿濃度の比は、約１～約６である。

本明細書に提供される方法のいくつかの実施形態では、胃腸関連疾患または障害は、潰瘍性大腸炎、クローン病、及びセリアック病から選択される。

いくつかの実施形態では、胃腸疾患は、再発性、難治性、または再発性かつ難治性の潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、対象は、潰瘍性大腸炎のための以前に投与された治療に応答できなかった。他の実施形態では、対象は、潰瘍性大腸炎のための以前に投与された治療に対して不耐性である。いくつかの実施形態では、以前に投与された治療は、（ａ）経口コルチコステロイド、（ｂ）ＡＺＡもしくは６－ＭＰ、または（ｃ）インフリキシマブもしくはアダリムマブなどの生物学的療法から選択される。

Ｉ．ＪＡＫ１経路阻害剤
本明細書に記載される方法は、ＪＡＫ１経路阻害剤を利用する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２（すなわち、ＪＡＫ１選択的阻害剤）よりもＪＡＫ１に対して選択的である。例えば、本明細書に記載される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２のうちの１つ以上よりもＪＡＫ１を優先的に阻害する。いくつかの実施形態では、化合物は、ＪＡＫ２よりも優先的にＪＡＫ１を阻害する（例えば、１超のＪＡＫ２／ＪＡＫ１ ＩＣ_５０比を有する）。いくつかの実施形態では、化合物または塩は、ＪＡＫ２よりもＪＡＫ１に対して約１０倍より選択的である。いくつかの実施形態では、化合物または塩は、１ｍＭのＡＴＰでＩＣ_５０を測定することによって計算されるように、ＪＡＫ２よりもＪＡＫ１に対して約３倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、または約２０倍より選択的である（例えば、実施例Ａを参照されたい）。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、表１の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。表１における化合物は、選択的ＪＡＫ１阻害剤（すなわち、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２よりも選択的である、ＪＡＫ１経路阻害剤）である。１ｍＭ ＡＴＰで実施例Ａの方法によって得られたＩＣ_５０値が、表１に示される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルアジピン酸塩である。

｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル及びそのアジピン酸塩の合成ならびに調製は、例えば、２０１１年３月９日出願に出願された米国特許公開第２０１１／０２２４１９０号、２０１２年９月６日に出願された米国特許公開第２０１３／００６００２６号、及び２０１４年３月５日出願された米国特許公開第２０１４／０２５６９４１号に見いだされ得、これらの各々はその全体の参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、４－［３－（シアノメチル）－３－（３’，５’－ジメチル－１Ｈ，１’Ｈ－４，４’－ビピラゾール－１－イル）アゼチジン－１－イル］－２，５－ジフルオロ－Ｎ－［（１Ｓ）－２，２，２－トリフルオロ－１－メチルエチル］ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、４－［３－（シアノメチル）－３－（３’，５’－ジメチル－１Ｈ，１’Ｈ－４，４’－ビピラゾール－１－イル）アゼチジン－１－イル］－２，５－ジフルオロ－Ｎ－［（１Ｓ）－２，２，２－トリフルオロ－１－メチルエチル］ベンズアミドリン酸塩である。

４－［３－（シアノメチル）－３－（３’，５’－ジメチル－１Ｈ，１’Ｈ－４，４’－ビピラゾール－１－イル）アゼチジン－１－イル］－２，５－ジフルオロ－Ｎ－［（１Ｓ）－２，２，２－トリフルオロ－１－メチルエチル］ベンズアミド及びそのリン酸塩の合成ならびに調製は、例えば、２０１４年５月１６日に出願された米国特許公開第２０１４／０３４３０３０号に見いだされ得、これはその全体の参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、（（２Ｒ，５Ｓ）－５－｛２－［（１Ｒ）－１－ヒドロキシエチル］－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｄ］チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、（（２Ｒ，５Ｓ）－５－｛２－［（１Ｒ）－１－ヒドロキシエチル］－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｄ］チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセトニトリル一水和物である。

（（２Ｒ，５Ｓ）－５－｛２－［（１Ｒ）－１－ヒドロキシエチル］－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｄ］チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセトニトリルの合成、ならびにその無水形態及び一水和物形態の特徴付けは、２０１３年１０月３１日に出願された米国特許公開第２０１４／０１２１１９８号、及び２０１５年４月２９日に出願された米国特許公開第２０１５／０３４４４９７号に記載され、これらの各々はその全体の参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、表１の化合物は、２０１１年３月９日に出願された米国特許公開第２０１１／０２２４１９０号、２０１４年５月１６日に出願された米国特許公開第２０１４／０３４３０３０号、２０１３年１０月３１日に出願された米国特許公開第２０１４／０１２１１９８号、２０１０年５月２１日に出願された米国特許公開第２０１０／０２９８３３４号、２０１０年８月３１日に出願された米国特許公開第２０１１／００５９９５１号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８１号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８２号、２０１２年６月１９日に出願された米国特許公開第２０１３／００１８０３４号、２０１２年８月１７日に出願された米国特許公開第２０１３／００４５９６３号、及び２０１３年５月１７日に出願された米国特許公開第２０１４／０００５１６６号に記載され、これらの各々はその全体の参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、２０１１年３月９日に出願された米国特許公開第２０１１／０２２４１９０号、２０１４年５月１６日に出願された米国特許公開第２０１４／０３４３０３０号、２０１３年１０月３１日に出願された米国特許公開第２０１４／０１２１１９８号、２０１０年５月２１日に出願された米国特許公開第２０１０／０２９８３３４号、２０１０年８月３１日に出願された米国特許公開第２０１１／００５９９５１号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８１号、２０１１年１１月１８日に出願された米国特許公開第２０１２／０１４９６８２号、２０１２年６月１９日に出願された米国特許公開第２０１３／００１８０３４号、２０１２年８月１７日に出願された米国特許公開第２０１３／００４５９６３号、及び２０１３年５月１７日に出願された米国特許公開第２０１４／０００５１６６号の化合物またはその薬学的に許容される塩から選択され、これらの各々はその全体の参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、式Ｉの化合物

またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨであり、
Ｌは、Ｃ（＝Ｏ）またはＣ（＝Ｏ）ＮＨであり、
Ａは、各々、１つまたは２つの独立して選択されるＲ^１基で任意選択で置換されるフェニル、ピリジニル、またはピリミジニルであり、
各Ｒ^１は、独立して、フルオロ、またはトリフルオロメチルである。

いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、４－｛３－（シアノメチル）－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－１－イル｝－Ｎ－［４－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン－１－カルボキサミド、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、［３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］－１－（１－｛［２－（トリフルオロメチル）ピリミジン－４－イル］カルボニル｝ピペリジン－４－イル）アゼチジン－３－イル］アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は式ＩＩの化合物

またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ^２は、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_３－６シクロアルキル、またはＣ_３－６シクロアルキル－Ｃ_１－３アルキルであり、該Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－６シクロアルキル、及びＣ_３－６シクロアルキル－Ｃ_１－３アルキルは、各々、フルオロ、－ＣＦ_３、及びメチルから独立して選択された１つ、２つ、または３つの置換基で任意選択で置換され、
Ｒ^３は、Ｈまたはメチルであり、
Ｒ^４は、Ｈ、Ｆ、またはＣｌであり、
Ｒ^５は、ＨまたはＦであり、
Ｒ^６は、ＨまたはＦであり、
Ｒ^７は、ＨまたはＦであり、
Ｒ^８は、Ｈまたはメチルであり、
Ｒ^９は、Ｈまたはメチルであり、
Ｒ^１０は、Ｈまたはメチルであり、
Ｒ^１１は、Ｈまたはメチルである。

いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物は、４－［３－（シアノメチル）－３－（３’，５’－ジメチル－１Ｈ，１’Ｈ－４，４’－ビピラゾール－１－イル）アゼチジン－１－イル］－２，５－ジフルオロ－Ｎ－［（１Ｓ）－２，２，２－トリフルオロ－１－メチルエチル］ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、式ＩＩＩの化合物

またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｃｙ^４は、ＣＮ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３ハロアルキル、シアノ－Ｃ_１－３アルキル、ＨＯ－Ｃ_１－３アルキル、アミノ、Ｃ_１－３アルキルアミノ、及びジ（Ｃ_１－３アルキル）アミノから独立して選択された１つまたは２つの基で任意選択で置換されるテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン環であり、該Ｃ_１－３アルキル及びジ（Ｃ_１－３アルキル）アミノは、Ｆ、Ｃｌ、Ｃ_１－３アルキルアミノスルホニル、及びＣ_１－３アルキルスルホニルから独立して選択される１つ、２つ、または３つの置換基で任意選択で置換され、
Ｒ^１２は、－ＣＨ_２－ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ_３）－ＯＨ、または－ＣＨ_２－ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３である。

いくつかの実施形態では、式ＩＩＩの化合物は、（（２Ｒ，５Ｓ）－５－｛２－［（１Ｒ）－１－ヒドロキシエチル］－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｄ］チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、遊離塩基ベースで約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約３ｍｇ～約１００ｍｇ、約５ｍｇ～約１００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、約１０ｍｇ～約７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～約７５ｍｇの１日量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、遊離塩基ベースで約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約３ｍｇ～約１００ｍｇ、約５ｍｇ～約１００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、約１０ｍｇ～約７５ｍｇ、または約２５ｍｇ～約７５ｍｇの１日量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤は、遊離塩基ベースで約１０ｍｇ～約１００ｍｇの１日量で投与される。したがって、いくつかの実施形態では、選択的ＪＡＫ１経路阻害剤は、遊離塩基ベースで約１ｍｇ、約３ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、または約１００ｍｇの１日量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇ～約５０ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇ～約７５ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約２ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約２．５ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約３ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約５ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約１５ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約３０ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約１００ｍｇの１日用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇの用量で１日１回投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量で（例えば、１日１回または２回用量として）投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇの１日用量で（例えば、１日１回または２回用量として）投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約６ｍｇ／ｋｇの総１日投与のために、約３ｍｇ／ｋｇの１日２回（ＢＩＤ）用量として投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約６ｍｇ／ｋｇの総１日投与のために、約３ｍｇ／ｋｇの１日２回（ＢＩＤ）結腸内用量として投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約６０ｍｇ／ｋｇの総１日投与のために、約３０ｍｇ／ｋｇの１日２回（ＢＩＤ）用量として投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約６０ｍｇ／ｋｇの総１日投与のために、約３０ｍｇ／ｋｇの１日２回（ＢＩＤ）経口用量として投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇの総１日投与のために、約２５ｍｇの用量で１日２回投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇの用量で１日１回投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約１００ｍｇの総１日投与のために、約５０ｍｇの用量で１日２回投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、約１００ｍｇの用量で１日１回投与される。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を各々含む１つ以上の持続放出剤形として投与される。

対象における胃腸疾患を治療するための方法は、本明細書に提供され、約２５ｍｇ～１００ｍｇのＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩の１日用量を対象に投与することを含み、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を含む１つ以上の持続放出剤形として投与される。

本明細書に記載される実施形態は、実施形態が多項従属請求項であるかのように、任意の好適な組み合わせにおいて組み合わされるように意図される（例えば、選択的ＪＡＫ１経路阻害剤及びその用量に関連する実施形態、最大血漿濃度（総または非結合）に関連する実施形態、本明細書に開示される化合物の任意の塩形態に関連する実施形態、胃腸関連疾患の個々のタイプに関連する実施形態、ならびに組成物及び／または投与に関連する実施形態は、任意の組み合わせにおいて組み合わされ得る）。

炎症性腸障害、潰瘍性大腸炎、自発性大腸炎、クローン病、及びセリアック病からなる群から選択される胃腸疾患を治療するための方法もまた、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、胃腸疾患は、潰瘍性大腸炎、クローン病、及びセリアック病からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、胃腸疾患は、炎症性腸障害、及び自発性大腸炎からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、胃腸疾患は、自発性大腸炎である。

例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病、及びセリアック病からなる群から選択される胃腸疾患の治療を必要とする対象においてそれを行うための方法が本明細書に提供され、方法は、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－｛３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルの最大便濃度は、約２５ｎＭ超であり、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－｛３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニルの最大総血漿濃度は、約１５０ｎＭ未満である。

対象における潰瘍性大腸炎、クローン病、及びセリアック病からなる群から選択される胃腸疾患を治療するための方法もまた本明細書に提供され、方法は、遊離塩基ベースで約２５ｍｇ～約１００ｍｇの｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩の１日１回用量を対象に投与することを含み、用量は、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－［７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を各々含む１つ以上の持続放出剤形を含む。

対象における潰瘍性大腸炎、クローン病、及びセリアック病からなる群から選択される胃腸疾患を治療するための方法もまた本明細書に提供され、方法は、遊離塩基ベースで約２５ｍｇの｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩の１日２回用量を対象に投与することを含み、用量は、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－［７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を各々含む１つ以上の持続放出剤形を含む。

対象における潰瘍性大腸炎、クローン病、及びセリアック病からなる群から選択される胃腸疾患を治療するための方法もまた本明細書に提供され、方法は、遊離塩基ベースで約５０ｍｇの｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩の１日２回用量を対象に投与することを含み、用量は、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－［７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を各々含む１つ以上の持続放出剤形を含む。

｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩の持続放出剤形（表１、化合物１）は、２０１４年８月６日に出願された米国公開第２０１５－００６５４８４号に見いだされ得、これはその全体の参照により本明細書に組み込まれる。以下の実施例Ｂも参照されたい。

全ての可能な組み合わせは、簡潔さのためだけに本明細書に別個に列挙されない。

本明細書に記載される化合物は、非対称であり得る（例えば、１つ以上の立体中心を有する）。エナンチオマー及びジアステレオマーなどの全ての立体異性体が、別段示されない限り意図される。非対称的に置換された炭素原子を含有する化合物は、光学的に活性な、またはラセミ形態で単離され得る。光学的に不活性な出発材料から光学的に活性な形態を調製する仕方に関する方法は、ラセミ混合物の分割または立体選択的合成などによって当該技術分野で既知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体もまた、本明細書に記載される化合物に存在し得、全てのかかる安定な異性体は、本発明において企図される。本発明の化合物のシス及びトランスの幾何異性体は、記載され、異性体の混合物として、または分離された異性体形態として単離され得る。

いくつかの実施形態では、化合物は、（Ｒ）配置を有する。いくつかの実施形態では、化合物は、（Ｓ）配置を有する。

化合物のラセミ混合物の分割は、当該技術分野で既知の多数の方法のいずれかによって行われ得る。例示的な方法は、光学的に活性な塩形成有機酸であるキラル分割酸を使用する分画再結晶化を含む。分画再結晶化方法のための好適な分割剤は、例えば、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、またはβ－カンファースルホン酸などの様々な光学的に活性なカンファースルホン酸のＤ及びＬ形態などの光学的に活性な酸である。分画結晶化方法に好適な他の分割剤は、α－メチルベンジルアミンの立体異性体的に純粋な形態（例えば、Ｓ及びＲ形態、またはジアステレオマー的に純粋な形態）、２－フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ－メチルフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２－ジアミノシクロヘキサンなどを含む。

ラセミ混合物の分割はまた、光学的に活性な分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラム上での溶出によって行われ得る。好適な溶出溶媒組成物は、当業者によって決定され得る。

本明細書に記載される化合物はまた、互変異性形態を含む。互変異性形態は、プロトンの同時移動を一緒に伴う、隣接する二重結合との単結合の交換から生じる。互変異性形態は、同じ実験式及び総電荷を有する異性体的プロトン化状態であるプロトトロピー互変異性体を含む。プロトトロピー互変異性体の例は、ケトン－エノール対、アミド－イミド酸対、ラクタム－ラクチム対、エナミン－イミン対、ならびにプロトンが複素環系の２つ以上の位置を占めることができる環状形態、例えば、１Ｈ－及び３Ｈ－イミダゾール、１Ｈ－、２Ｈ－及び４Ｈ－１，２，４－トリアゾール、１Ｈ－及び２Ｈ－イソインドール、ならびに１Ｈ－及び２Ｈ－ピラゾールを含む。互変異性形態は、平衡であり得るか、または適切な置換によって１つの形態に立体的に固定され得る。

本明細書に記載される化合物はまた、本開示の同位体標識された化合物を含み得る。「同位体的」または「放射性標識された」化合物は、１つ以上の原子が、自然界において典型的に見いだされる（すなわち、天然に生じる）原子質量もしくは質量数とは異なる原子質量もしくは質量数を有する原子によって置き換えられるか、または置換される、本開示の化合物である。本開示の化合物に組み込まれ得る好適な放射性核種は、^２Ｈ（重水素についてはＤとも記述される）、^３Ｈ（トリチウムについてはＴとも記述される）、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^８２Ｂｒ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ及び^１３１Ｉを含むがこれらに限定されない。例えば、本開示の化合物における１つ以上の水素原子は、重水素原子によって置き換えられ得る（例えば、式（Ｉ）、（ＩＩ）、もしくは（ＩＩＩ）のＣ_１－６アルキル基または表１の化合物の１つ以上の水素原子は、－ＣＨ_３に置換されている－ＣＤ_３などの、重水素原子で任意選択で置換され得る）。

本明細書で使用される「化合物」という用語は、名称が特定の立体異性体を示さない限り、示される構造の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び同位体を含むように意味される。１つの特定の互変異性形態として名称または構造によって特定される本明細書の化合物は、別段指定されない限り、他の互変異性形態を含むように意図される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物、またはその塩は、実質的に単離される。「実質的に単離される」によって、化合物が形成または検出された環境から少なくとも部分的または実質的に分離されることが、意味される。部分的な分離は、例えば、本明細書に記載される化合物が濃縮された組成物を含むことができる。実質的な分離は、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、もしくは少なくとも約９９重量％の本明細書に記載される化合物、またはその塩を含むことができる。化合物及びそれらの塩を単離するための方法は、当該技術分野において慣用である。

全ての化合物及びその薬学的に許容される塩は、水及び溶媒などの他の物質と一緒に見いだされ得る（例えば、水和物及び溶媒和物）か、または単離され得る。固体状態にあるとき、本明細書に記載される化合物及びその塩は、様々な形態で生じ得、例えば、水和物を含む溶媒和物の形態をとることができる。化合物は、多形または溶媒和物などの任意の固体状態の形態であり得るため、別段明確に示されない限り、本明細書における化合物及びそれらの塩への参照は、化合物の任意の固体状態の形態を包含するものとして理解されるべきである。

「薬学的に許容される」という語句は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、合理的な利益／リスクの比に釣り合う、そのような化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すために本明細書で用いられる。

本発明はまた、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩を含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、開示される化合物の誘導体を指し、親化合物は、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって修飾される。薬学的に許容される塩の例は、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などを含むが、これらに限定されない。本発明の薬学的に許容される塩は、例えば、非毒性の無機または有機酸から形成される親化合物の非毒性塩を含む。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成され得る。一般に、かかる塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、水中もしくは有機溶媒中、または２つの混合物中の適切な塩基または酸の化学量論的量と反応させることによって調製され得、一般に、エーテル、酢酸エチル、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、またはブタノール）またはアセトニトリル（ＭｅＣＮ）のような非水性培体が好まれる。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７^ｔｈ Ｅｄ．，（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，１９８５），ｐ．１４１８、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６（１），１－１９、及びＳｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｗｉｌｅｙ， ２００２）に見いだされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、Ｎ－オキシド形態を含む。

「個体」、「患者」、及び「対象」という用語は、交換可能に使用され、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、及び最も好ましくはヒトを含む、任意の動物を指す。

「治療有効量」という語句は、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって求められている組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて生物学的または医薬的応答を誘発する、活性化合物または薬学的薬剤の量を指す。

「治療する」または「治療」という用語は、（１）疾患を阻害すること、例えば、疾患、状態もしくは障害の病理または症状を経験あるいは示している個体において、疾患、状態または障害を阻害すること（すなわち、病理及び／または症状のさらなる発症を停止させること）、及び（２）疾患を改善すること、例えば、疾患の重症度を減少させることなどの、疾患、状態もしくは障害の病理または症状を経験しているかまたは示している個体において、疾患、状態または障害を改善すること（すなわち、病理及び／または症状を好転させること）のうちの１つ以上を指す。一実施形態では、治療することまたは治療は、疾患を予防するか、または疾患を発症するリスクを低減すること、例えば、疾患、状態もしくは障害の素因があり得るが、疾患の病理もしくは症状をまだ経験していないか、または示していない個体において、疾患、状態もしくは障害を発症するリスクを予防または低減することを含む。

「例えば」及び「などの」という用語、ならびにそれらの文法的等価物については、別段明示的に記載されない限り、「かつ限定なく」という語句が続くものと理解される。

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別段明確に指示しない限り、複数の参照対象を含む。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、「およそ」（例えば、示された値のプラスまたはマイナス約１０％）を意味する。

併用療法
本明細書に記載される方法は、１つ以上の追加の治療剤を投与することをさらに含むことができる。これらの治療剤は、抗炎症剤、ステロイド、免疫抑制剤、または治療用抗体を含む。

例えば、本明細書に記載される方法は、経口メサラミン（５－ＡＳＡ）、経口コルチコステロイド、アザチオプリン（ＡＺＡ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、及びメトトレキサート、インフリキシマブ、ベドリズマブ、粘膜アドレシン細胞接着分子（ＭＡＤＣＡＭ１）阻害剤、及び便移植などの現在のＵＣ療法と組み合わせて使用され得る。

例えば、経口５－ＡＳＡ（メサラミン、例えば、約１６００ｍｇ／日～約２４００ｍｇ／日）またはスルファサラジン（最大、例えば、約１０００ｍｇ／日～４０００ｍｇ／日）は、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのためのＪＡＫ１経路阻害剤と共に投与され得る。

別の例として、経口コルチコステロイド（例えば、約０．５ｍｇ／日～約６０ｍｇ／日のプレドニゾンまたは経口コルチコステロイド当量の）は、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのためのＪＡＫ１経路阻害剤と共に投与され得る。

別の例として、約５０ｍｇ／日～約２２５ｍｇ／日のアザチオプリン、最大、例えば、約３０ｍｇ／日～約１１２．５ｍｇ／日の６－メルカプトプリン、または最大、例えば、約２５ｍｇのメトトレキサートもまた、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのためのＪＡＫ１経路阻害剤と共に投与され得る。いくつかの実施形態では、アザチオプリンは、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのためのＪＡＫ１経路阻害剤と共に、約５０ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日で投与される。他の実施形態では、６－メルカプトプリンは、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのためのＪＡＫ１経路阻害剤と共に、約３０ｍｇ／日～約５０ｍｇ／日で投与される。

別の例として、一連の、誘導及び維持のための２～１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、５ｍｇ／ｋｇのインフリキシマブは、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのためのＪＡＫ１経路阻害剤と共に投与され得る。いくつかの実施形態では、インフリキシマブは、５ｍｇ／ｋｇで、０、２、及び６週間で、次いで、その後８週間毎に投与される。

別の例として、約２００～約４００ｍｇ、例えば、３００ｍｇの用量のベドリズマブは、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのためのＪＡＫ１経路阻害剤と共に投与され得る。いくつかの実施形態では、ベドリズマブは、０、２、及び６週間で投与され、次いで、その後８週間毎に投与される。

２つ以上の医薬品が対象に投与される場合、それらは、同時に、順次に、または組み合わせて（例えば、３つ以上の薬剤について）投与され得る。

組成物
化合物は、薬学的組成物の形態で投与され得る。これらの組成物は、薬学的分野において周知の様式で調製され得、局所的または全身的治療が示されるかどうかに、かつ治療される領域に応じて、多様な経路によって投与され得る。投与は、局所（経皮的、表皮的、点眼的を含み、かつ鼻腔内、膣内、及び直腸送達を含む粘膜に対する）、肺（例えば、噴霧器によることを含む粉末もしくはエアロゾルの吸入または吹送による、気管内または鼻腔内）、経口または非経口であり得る。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内もしくは筋肉内の注射もしくは注入、または頭蓋内、例えば、髄腔内もしくは脳室内投与を含む。非経口投与は、単回ボーラス投薬の形態にあり得るか、または例えば、連続灌流ポンプによるものであり得る。局所投与のための薬学的組成物及び製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐剤、スプレー、液体及び粉末を含み得る。従来の薬学的担体、水性、粉末または油性の基剤、増粘剤などは、必要または望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、投与は、経口である。いくつかの実施形態では、投与は、結腸内である。

薬学的組成物は、活性成分として、化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて含有できる。いくつかの実施形態では、組成物は、局所投与に好適である。組成物を作製する際に、活性成分は、典型的に賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈されるか、または例えば、カプセル、小袋、紙、もしくは他の容器の形態でかかる担体に封入される。賦形剤が希釈剤として機能する際、それは、活性成分のためのビヒクル、担体もしくは媒体として作用する固体、半固体、または液体の材料であり得る。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、舐剤、小袋、カシェー、エリキシル、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体中）、例えば、最大１０重量％の活性化合物を含有する軟膏、軟質及び硬質ゼラチンカプセル、坐薬、無菌注入溶液、ならびに無菌パッケージ化粉末の形態にあり得る。

製剤を調製する際、活性化合物は、他の成分と組み合わせる前に適切な粒径を提供するために粉砕され得る。活性化合物が実質的に不溶性である場合、それは、２００メッシュ未満の粒径に粉砕され得る。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、例えば、約４０メッシュの製剤中の実質的に均一な分布を提供するために、粉砕によって調整され得る。

化合物は、錠剤形成及び他の製剤タイプに適切な粒径を得るために、湿式粉砕などの既知の粉砕手順を使用して粉砕され得る。本発明の化合物の細分化された（ナノ粒子）調製物は、当該技術分野において既知のプロセスによって調製され得、例えば、ＷＯ２００２／０００１９６を参照されたい。

好適な賦形剤のいくつかの例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ及びメチルセルロースを含む。製剤は、追加的に、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油などの潤滑剤、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、メチル安息香酸塩及びプロピルヒドロキシ安息香酸塩などの保存剤、ならびに甘味剤及び香味料を含むことができる。本発明の組成物は、当該技術分野において既知の手順を用いることによる患者への投与後に、活性成分の迅速、持続、または遅延放出を提供するように製剤化され得る。

薬学的組成物を製剤化するために使用される構成要素は、高純度のものであり、潜在的に有害な汚染物質を実質的に含まない（例えば、少なくともＮａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｄグレード、一般には少なくとも分析グレード、及びより典型的には少なくとも医薬品グレード）。特にヒトの消費のために、組成物は、好ましくは、米国食品医薬品局の適用規制に定義される、適正製造規範規則の下で製造または製剤化される。例えば、好適な製剤は、滅菌であり得、及び／または実質的に等張であり得、及び／または米国食品医薬品局の全ての適正製造規範規制に完全に準拠し得る。

活性化合物は、広い投与量範囲にわたって有効であり得、一般に治療有効量で投与される。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、通常、治療される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、患者の症状の重症度などを含む関連状況に従って、医師によって決定されることが理解されよう。

本発明の化合物の治療投与量は、例えば、治療が行われる特定の使用、化合物の投与の様式、患者の健康及び状態、ならびに処方医師の判断に従って変化できる。薬学的組成物中の本発明の化合物の割合または濃度は、投与量、化学的特徴（例えば、疎水性）、及び投与経路を含むいくつか因子に応じて変化できる。

錠剤などの固体組成物を調製するために、主たる活性成分は、本発明の化合物の均質な混合物を含有する固体の事前製剤組成物を形成するために薬学的賦形剤と混合される。これらの事前製剤組成物を均質なものとして参照する際、活性成分は、典型的には、組成物が錠剤、丸剤及びカプセルなどの等しく有効な単位剤形に容易に細分化され得るように、組成物全体にわたって均一に分散される。次いで、この固体の事前製剤は、例えば、約０．１～約１０００ｍｇの本発明の活性成分を含有する、上記のタイプの単位剤形に細分化される。

本発明の錠剤または丸剤は、長期作用の利点をもたらす剤形を提供するために、コーティングまたは他の方法で配合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内側投薬量及び外側投薬量構成要素を含むことができ、後者は、前者を覆う外被の形態にある。２つの構成要素は、胃において崩壊に抵抗するように機能して、内側構成要素を無傷で十二指腸を通過させるか、または放出を遅延させることができる、腸溶性層によって分離され得る。多様な材料が、かかる腸溶性層またはコーティングのために使用され得、かかる材料は、いくつかのポリマー酸、ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコール及び酢酸セルロースなどの材料との混合物を含む。

本発明の化合物及び組成物が経口または注射による投与のために組み込まれ得る液体形態は、エリキシル剤及び類似の薬学的ビヒクルと同様に、水溶液、好適に香味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、ならびに綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油などの食用油との香味付けされた乳濁液を含む。

患者に投与される化合物または組成物の量は、投与されるもの、予防または療法などの投与の目的、患者の状態、投与の様式などに応じて変化するであろう。治療用途では、組成物は、疾患及びその合併症の症状を治癒するか、または少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で、すでに疾患に罹患している患者に投与され得る。有効用量は、疾患の重症度、患者の年齢、体重、及び一般状態などの因子に応じて、担当臨床医の判断と同様に、治療されている疾患状態に依存するであろう。

患者に投与される組成物は、上記の薬学的組成物の形態にあり得る。これらの組成物は、従来の滅菌技法によって滅菌され得るか、または滅菌濾過され得る。水溶液は、そのままでの使用のためにパッケージ化または凍結乾燥され得、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌水性担体と組み合わされる。化合物調製物のｐＨは、典型的には、３～１１、より好ましくは５～９、最も好ましくは７～８となるであろう。前述の賦形剤、担体または安定剤のいくつかの使用は薬学的塩の形成を生じることが、理解されるであろう。

キット
本出願はまた、有用な薬学的キットを含み、治療有効量の化合物を含む薬学的組成物を含有する１つ以上の容器、またはそれらの実施形態のうちのいずれかを含む。かかるキットは、当業者に容易に明らかとなるように、例えば、１つ以上の薬学的に許容される担体を含む容器、追加の容器などの様々な従来の薬学的キット構成要素のうちの１つ以上をさらに含むことができる。投与される構成要素の量を示す、挿入物としてもしくはラベルとしてのいずれかの説明書、投与についてのガイドライン、及び／または構成要素を混合するためのガイドラインもまた、キットに含まれ得る。

本発明は、特定の実施例を用いてより詳細に記載されるであろう。以下の実施例は例示の目的のために提供され、いかなる様式でも本発明を限定することは意図されていない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすように変更または修正され得る、様々な重要でないパラメータを容易に認識するであろう。

実施例Ａ：インビトロＪＡＫキナーゼアッセイ
サイトカイン関連疾患または障害の治療のために使用され得るＪＡＫ１経路阻害剤は、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９９，２６９，９４－１０４に記載される以下のインビトロアッセイに従うＪＡＫ標的の阻害活性について試験される。Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するヒトＪＡＫ１（ａ．ａ．８３７－１１４２）、ＪＡＫ２（ａ．ａ．８２８－１１３２）及びＪＡＫ３（ａ．ａ．７８１－１１２４）の触媒ドメインは、昆虫細胞中でバキュロウイルスを使用して発現され、精製される。ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、またはＪＡＫ３の触媒活性を、ビオチン化ペプチドのリン酸化を測定することによってアッセイした。リン酸化したペプチドを、均質時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によって検出した。化合物のＩＣ_５０は、１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、及び０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）のＢＳＡを有する５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）緩衝液中で酵素、ＡＴＰ及び５００ｎＭのペプチドを含有する４０μＬの反応物における各キナーゼについて測定される。１ｍＭのＩＣ_５０測定について、反応物中のＡＴＰ濃度は、１ｍＭである。反応を、室温で１時間行い、次いで、アッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）中の２０μＬの４５ｍＭのＥＤＴＡ、３００ｎＭのＳＡ－ＡＰＣ、６ｎＭのＥｕ－Ｐｙ２０で中止させた。ユーロピウム標識された抗体への結合は４０分間起こり、ＨＴＲＦシグナルは融合プレート読み取り機（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）上で測定された。表１中の化合物を、このアッセイにおいて試験し、表１におけるＩＣ_５０値を有するように示した。

実施例Ｂ：化合物１の持続放出製剤の調製
化合物１を含む持続放出錠剤を、賦形剤を以下の表に示される量にある賦形剤と共に調製した。プロトコルＡをＳＲ１錠剤に対して使用し、プロトコルＢをＳＲ２剤に対して使用し、プロトコルＣをＳＲ３錠剤及び２５ｍｇのＳＲ錠剤に対して使用し、プロトコルＤをＳＲ４剤に対して使用した。これらの手順は、米国特許公開第２０１５／００６５４８４号に開示され、化合物１の持続放出剤形に関する。

プロトコルＡ：
ステップ１．化合物１のアジピン酸塩、微結晶セルロース、ヒプロメロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ１００ ＬＶ及びＭｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ４Ｍ）、及びラクトース一水和物を個別にスクリーニングする。
ステップ２．ステップ１からのスクリーニングした材料を好適なブレンダーに移し、混合する。
ステップ３．ステップ２からのブレンドを好適な造粒機に移し、混合する。
ステップ４．混合しながら精製水を添加する。
ステップ５．ステップ４からの顆粒を好適な乾燥機に移し、ＬＯＤが３％未満になるまで乾燥させる。
ステップ６．ステップ５からの顆粒をスクリーニングする。
ステップ７．スクリーニングしたステアリン酸マグネシウムを、好適なブレンダー中でステップ６の顆粒と混合する。
ステップ８．好適な回転錠剤プレス上でステップ７の最終ブレンドを圧縮する。

プロトコルＢ：
ステップ１．式Ｉの化合物のアジピン酸塩、微結晶セルロース、ヒプロメロース及びアルファ化デンプンを個別にスクリーニングする。
ステップ２．ステップ１からのスクリーニングした材料を好適なブレンダーに移し、混合する。
ステップ３．ステップ２からのブレンドを好適な造粒機に移し、混合する。
ステップ４．混合しながら精製水を添加する。
ステップ５．ステップ４からの顆粒を好適な乾燥機に移し、ＬＯＤが３％未満になるまで乾燥させる。
ステップ６．ステップ５からの顆粒をスクリーニングする。
ステップ７．ｐｏｌｙｏｘ、ブチル化ヒドロキシトルエン及びコロイド状二酸化ケイ素を個別にスクリーニングした。
ステップ８．ステップ６からの顆粒及びステップ７からの材料を好適なブレンダーに移し、混合する。
ステップ９．ステップ８の材料にスクリーニングしたステアリン酸マグネシウムを添加し、ブレンドを続ける。
ステップ１０．好適な回転錠剤プレス上でステップ９の最終ブレンドを圧縮する。

プロトコルＣ：
ステップ１．好適なスクリーンを通じて、ラクトース一水和物、式Ｉの化合物のアジピン酸塩、微結晶セルロース、及びヒプロメロースを個別にスクリーニングする。
ステップ２．ステップ１からのスクリーニングした材料を好適なブレンダーに移し、混合する。
ステップ３．ステップ２からのブレンドを好適な造粒機に移し、混合する。
ステップ４．混合しながら精製水を添加する。
ステップ５．好適なスクリーンを通じて湿潤顆粒をスクリーニングする。
ステップ６．ステップ５から顆粒を好適な乾燥機に移し、ＬＯＤが３％未満になるまで乾燥させる。
ステップ７．ステップ６から顆粒を粉砕する。
ステップ８．スクリーニングしたステアリン酸マグネシウムを、好適なブレンダー中でステップ７の顆粒と混合する。
ステップ９．好適な回転錠剤プレス上でステップ８の最終ブレンドを圧縮する。

プロトコルＤ：
ステップ１．好適なスクリーンを通じて、アルファ化デンプン、式Ｉの化合物のアジピン酸塩、ヒプロメロース、及び必要とされる微結晶セルロースの一部を個別にスクリーニングする。
ステップ２．ステップ１からのスクリーニングした材料を好適なブレンダーに移し、混合する。
ステップ３．ステップ２からのブレンドを好適な造粒機に移し、混合する。
ステップ４．混合しながら精製水を添加する。
ステップ５．好適なスクリーンを通じて湿潤顆粒をスクリーニングする。
ステップ６．ステップ５から顆粒を好適な乾燥機に移し、ＬＯＤが３％未満になるまで乾燥させる。
ステップ７．ステップ６から顆粒を粉砕する。
ステップ８．微結晶セルロースの残りの部分及び重炭酸ナトリウムの半分をスクリーニングする。
ステップ９．ステップ７からの粉砕された顆粒、及びステップ８からのスクリーニングされた材料を好適なブレンダーに移し、混合する。
ステップ１０．重炭酸ナトリウムの残りの部分をスクリーニングし、ステップ９のブレンドと混合する。
ステップ１１．ステアリン酸マグネシウムをスクリーニングし、ステップ１０のブレンドと混合する。
ステップ１２．好適な回転錠剤プレス上でステップ１１の最終ブレンドを圧縮する。

実施例Ｃ：血漿及び便中の化合物１生体分析
２つの異なるアッセイは、ＪＡＫ１阻害の機能的活性を理解するために使用され得る。第１のものは標準的な細胞ベースのアッセイであり、その他のものは全血を使用している。前者は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用して実施され、簡潔には、細胞は、ＪＡＫ１活性を増加させるためにＩＬ－６で刺激され、リン酸化したＳＴＡＴ３を介して測定される。増加濃度の化合物１が添加されるにつれて、リン酸化したＳＴＡＴ３の対応する減少が観察される。このアッセイは、血清タンパク質、例えば、便試料を欠く試料中の化合物１のＪＡＫ１活性及び／または阻害活性を評価するのに適切である。

血清豊富な培地、例えば、血漿または全血における化合物１の阻害活性を評価するために、アッセイは全血を使用して実施され、簡潔には、全血試料がＩＬ－６で刺激され、リン酸化したＳＴＡＴ３のレベルが決定される。このアッセイは、インビトロ（ヒト血液試料が化合物１でスパイクされる）またはエクスビボ（全血試料が化合物１を投与されたヒト対象から回収される）のいずれかで実施され得る。

Ｉ．ヒト血漿中の化合物１
ヒト血漿中の化合物１を分析するために使用される方法が、検証されている。簡潔には、５０μＬのヒト血漿試料が、９６ウェルプレートに配置される。５０μＬの内部標準物（５０：５０のアセトニトリル：水に溶解した）のアリコートが添加された後、１００μＬの０．１ＭのＮａＨＣＯ３のアリコートが添加される。次いで、８００μＬのメチル－ｔ－ブチルエーテル（ＭｔＢＥ）が添加され、試料は、覆われ、ボルテックスされる。遠心分離後、７００μＬのＭｔＢＥ層は、清潔な９６ウェルプレートに移される。次いで、試料は、窒素下でおよそ５０℃で乾燥される。次いで、２５０μＬの再構成溶液（アセトニトリル：水、５０：５０、ｖ／ｖ）のアリコートが、各試料に添加される。プレートは、オートサンプラートレイに配置され、分析のためにＬＣ－ＭＳ／ＭＳに注入される。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析は、ＨＰＬＣポンプ及びオートサンプラーを組み合わせたＡＢ Ｓｃｉｅｘ ４０００またはＳｃｉｅｘ ６５００ ＱＴＲＡＰ質量分析器を用いて実施される。クロマトグラフィー分離は、イソクラティック溶出を用いて、Ｗａｔｅｒｓ Ｔ３（５０ｍｍ×２．１ｍｍ）ＨＰＬＣカラム上で達成される。質量分析器は、正のＥＳＩモードで操作される。多重反応モニタリング（ＭＲＭ）遷移は、化合物１についてｍ／ｚ ５５４．１→１８６．０、かつ内部標準についてｍ／ｚ ５５８．１→１９０．０である。ピーク面積積分は分析ソフトウェアを使用して実行され、濃度はＷａｔｓｏｎ ＬＩＭＳにおいて計算される。濃度は、以下の式に従って、加重線形回帰を伴う５ｎＭ～５０００ｎＭの範囲の１０の濃度レベルを使用して計算される：
ｙ＝ａｘ＋ｂ（加重因子＝１／ｘ^２）
式中、ｘ＝ｎＭでの化合物１濃度、ｙ＝ピーク面積比、ａ＝傾き、及びｂ＝切片。

定量の下限は５ｎＭであり、較正曲線は、ヒト血漿中の化合物１について５ｎＭ～５０００ｎＭの範囲である。

ＩＩ．ヒト便中の化合物Ｉ
ヒト便中の化合物１を分析するために使用される方法は、適格な方法である。ヒト便試料は、臨床部位で１：１ホモジネート［１部の水（ｍＬ）：１部の便（ｇ）］で回収される。試料分析の前に、追加の水を試料ホモジネートに添加して、較正標準及びＱＣ試料として１：１９での便対水の最終比を達成する。最終ホモジネートは、加工され、較正標準及びＱＣ試料と共に分析される。

ヒトホモジネート分析のために、簡潔には、１００μＬの便ホモジネート（ブランク、ＱＣ及び研究試料）は、試験管に配置される。２０μＬの内部標準物のアリコートが添加及び混合された後、２００μＬの０．１ＭのＮａＨＣＯ_３のアリコートは添加及びボルテックスされる。次いで、２ｍＬのＭｔＢＥは添加され、試料はボルテックスされる。遠心分離後、ＭｔＢＥ層は、清潔な試験管に移される。次いで、試料を窒素下で約４０℃で乾燥させた。次いで、１ｍＬの再構成溶液（アセトニトリル：水、５０：５０、ｖ／ｖ）のアリコートを、各試料に添加し、ボルテックスした。次いで、１０μＬの試料を、清潔な試験管において３ｍＬの再構成溶液で希釈した。試料はオートサンプラーバイアルに移され、１０μＬが分析のためにＬＣ－ＭＳ／ＭＳに注入される。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析は、ＨＰＬＣポンプ及びオートサンプラーを組み合わせたＡＢ Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ ４０００またはＡＰＩ ４０００ ＱＴｒａｐ質量分析器を用いて実施される。クロマトグラフィー分離は、勾配溶出を用いた、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ Ｃ８ ５０×４．６ｍｍ、５μｍ ＨＰＬＣカラム上で達成される。質量分析器は、正のＥＳＩモードで操作される。ＭＲＭ遷移は、化合物１についてｍ／ｚ ５５４．３→１８６．２、内部標準についてｍ／ｚ ５５８．４→１９０．２である。ピーク面積積分は分析ソフトウェアを使用して実行され、濃度はＷａｔｓｏｎ ＬＩＭＳにおいて計算される。ヒト便ホモジネートの濃度は、以下の式に従って、加重線形回帰を有する１μｇ／ｇ～３００μｇ／ｇ（１．８μＭ～５４２μＭ）の範囲の８つの濃度レベルを使用して計算される：
ｙ＝ａｘ＋ｂ（加重因子＝１／ｘ^２）
式中、ｘ＝ヒト便ホモジネート中のμｇ／ｇでの化合物１濃度、ｙ＝ピーク面積比、ａ＝傾き、及びｂ＝切片。

実施例１：潰瘍性大腸炎の治療のための、選択的ＪＡＫ１阻害剤である化合物Ｉについての投薬戦略
化合物１は、腫瘍疾患及び自己免疫疾患のために現在開発中のＪＡＫ１阻害剤である。臨床及びエクスビボ研究を、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）について重要である結腸消失を理解するために実施した。

方法：血漿及び便中の化合物１濃度（結腸代用物）を、単一の持続放出２５ｍｇ経口投薬後に決定した（例えば、実施例Ｂ、２５ｍｇのＳＲ組成物を参照されたい）。単回１００ｍｇ投薬後の血漿中の化合物１濃度もまた、別個の研究で決定された（例えば、血漿中の化合物１の濃度を測定するための実施例Ｃを参照されたい）。エクスビボ研究：健常及びＵＣ対象（２／群）からの結腸組織試料を、垂直Ｕｓｓｉｎｇ拡散チャンバ上にマウントした。［^１４Ｃ］化合物１を、１００及び１０００ｎＭでチャンバの上側に適用し、１時間インキュベートした。試料を、化合物１濃度の決定のために、ドナー及びレシーバー側から回収した。結腸組織を、定量的オートラジオグラフィーのために瞬間凍結した。

結果：化合物１は持続放出製剤として送達され、用量の２７．１％は便中の変化しない化合物１として除去される（例えば、便中の化合物１の濃度を測定するための実施例Ｃを参照されたい）。化合物１の単回２５ｍｇ投薬後、１２名の患者のうちの８名は、ＪＡＫ１阻害に対するインビトロＩＣ_５０を超える最大便濃度（すなわち、５８ｎＭ）を有した（図１及び２）。最大便ＰＫ平均値（ＳＤ）、ＧＭ＝９３．４ｎＭ（４１．４ｎＭ）、８５．５ｎＭ、ここで、ＰＫは薬物動態であり、ＳＤは標準偏差であり、ＧＭは幾何平均である。最大便濃度を、観察された便データから直接採取し、例えば、便中の濃度を０～２４時間から回収した。

全身濃度は、いずれかの用量について全血中のＪＡＫ１阻害に対するＩＣ_５０を下回り、平均値（ＳＤ）Ｃ_ｍａｘ＝２５ｍｇについて１８．９（７．４６）ｎＭ、かつ１００ｍｇについて８４．４（４５．８）ｎＭであった（図１及び下の表）。

標準的な非コンパートメント薬物動態方法を、化合物１血漿濃度を分析するために使用した。Ｃ_ｍａｘ（最大血漿濃度）及びＴ_ｍａｘ（最大血漿濃度が生じる時間）を、観察された血漿濃度データから直接採取した。終末相消失速度定数（λ_ｚ）を終末消失相における濃度データの対数直線回帰を使用して推定し、ｔ_１／２をｌｎ（２）／λ_ｚとして推定した。ＡＵＣ_ａｌｌは、増加する濃度について線形台形規則かつ減少する濃度について対数台形規則を使用して計算される時間０から最後の観察までの血漿濃度－時間曲線下の面積として定義される。ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}をＡＵＣ_０－ｔ＋Ｃ_ｔ／λ_ｚとして計算し、ＡＵＣ_０－ｔは、時間０から最後の測定可能な濃度までの血漿濃度－時間曲線下の面積として定義され（また、線形アップ／対数ダウン台形ルールを使用して計算された）、Ｃ_ｔは、最後の測定可能な濃度である。Ｃｌ／Ｆは、見かけのクリアランスであり、用量／ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}として計算される。Ｖｚ／Ｆは、用量／（λ_ｚ＊ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}）として計算された終末相に基づいた分布の見かけの体積である。

エクスビボでは、化合物１関連放射能は、レシーバー側から検出されなかった。化合物１は、濃度依存的様式で粘膜層、かつより小さな程度で粘膜下層に浸透した（実施例２を参照されたい）。

要約：約２５ｍｇ～約１００ｍｇのＢＩＤ（１日２回）または約２５ｍｇ～約２００ｍｇのＱＤ（１日１回）の用量範囲は、全身的曝露に対する可能性を最小化する一方で結腸曝露を最大化するための、ＵＣ患者における研究のために推奨される。

実施例２：マイクロオートラジオグラフィー（ＭＡＲＧ）及び定量的オートラジオルミノグラフィー（ＱＡＲＬ）による、健常な潰瘍性大腸炎対象からの結腸における［^１４Ｃ］化合物１の組織浸透及び分布分析
Ｉ．目的
本研究の目的は、定量的オートラジオルミノグラフィー（ＱＡＲＬ）及びマイクロオートラジオグラフィー（ＭＡＲＧ）を使用して、健常な結腸及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）ヒト対象から回収された結腸試料中の［^１４Ｃ］化合物１関連放射能の組織分布を決定することであった。

ＩＩ．材料及び方法
Ａ．試料提出
２名の健常対象及びＵＣ対象からの２つの結腸試料の小片（合計８つの試料）は、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）によって提供され、使用まで－７０℃で保存した。

Ｂ．投薬製剤
投薬製剤、すなわち、１００ｎＭ及び１０００ｎＭを、研究における全ての組織について実験の日に調製した。［^１４Ｃ］化合物１（１．０６ｍｇ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；１．５１４ｍＬ）に溶解して、１ｍＭのストック液（０．７ｍｇ／ｍＬ）を生成した。ストック液（２０μＬ）を、クレブス－リンガー重炭酸塩（ＫＲＢ）緩衝液（２０ｍＬ）で希釈して、１０００ｎＭの最終濃度に達した。１０００ｎＭの投薬製剤（２ｍＬ）を、ＫＲＢ緩衝液（１８ｍＬ）で希釈して、１００ｎＭの最終濃度に達した。両方の投薬製剤のｐＨは、およそ５．５であった。

投薬製剤をインキュベーションの前に分析して、放射能濃度及び均質性を決定した。１００μＬのアリコートを、製剤容器の上部、中間部、及び下部から採取し、各々を、放射能分析のために秤量し、ＤＭＳＯで１０ｍＬに希釈した。各１０ｍＬ希釈の３反復アリコートを、液体シンチレーション計数（ＬＳＣ）によって分析した。

Ｃ．インキュベーション及び試料回収
腸組織透過研究を、健常組織のために垂直Ｕｓｓｉｎｇ拡散チャンバシステム（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して実行した。凍結された組織を、周囲温度に解凍し、投薬製剤のために使用される予め温められたＫＲＢ緩衝液ですすいだ後、装置上に穏やかに配置した。透過を、粘膜側に添加されたＫＲＢ緩衝液中で試験物を用いて３７℃で１時間粘膜から漿膜まで実施した。ブランクのＫＲＢ緩衝液を含有するＵｓｓｉｎｇチャンバのレシーバー側を、曝気装置による気泡で撹拌した。試料の限定された利用能により、ＵＣ組織を、両端が切開されたポリプロピレンチューブの一端上にマウントし（粘膜側を上に）、漿膜側を撹拌バーを有するバイアル中でブランクのＫＲＢ緩衝液に配置した。試験物を含有するＫＲＢをチューブに添加し、したがって、組織の粘膜側をインキュベーション中に試験物に曝露した。３７℃での１時間インキュベート後、試料（１００～５００μＬ）を、ドナー及びレシーバー側の両方から採取し、次いで、透過を評価するために１．５ｍＬチューブに移した。組織試料を、チャンバ（健康組織）またはチューブ（ＵＣ組織）から穏やかに除去し、液体窒素で冷却したイソペンタン中におよそ３０秒間瞬間凍結した。個々の凍結された健常かつＵＣ結腸試料をクライオゲル培地に埋め込み、より大きな健常組織試料を、一次試料及び二次試料用に１／２に分割した。

Ｄ．試料分析
［^１４Ｃ］ドナー及びレシーバー側の両方における化合物１濃度を、ＬＳＣによって分析した。定量の下限（ＬＬＯＱ）を、バックグラウンド（２１ｄｐｍ）の２倍として決定した。

組織試料を、各切片に表される粘膜層から漿膜層までの、組織が断面で切片化されることを可能にするであろう様式で切片化するようにマウントした。

試料を、４０μｍで（ＱＡＲＬについて）、かつ６～８μｍで（ＭＡＲＧについて）およそ－２０℃で低温切片化し、解凍マウント、続いてスライドウォーマー上で熱固定することによってガラス顕微鏡スライド上に回収した。およそ３つの組織切片を、ＱＡＲＬについて各試料から得た。ＱＡＲＬ切片化後、およそ１０組の３つの切片／スライドを、ＭＡＲＧについて得た。

Ｅ．ＱＡＲＬ
４０μｍの切片を有するスライドを、ダンボール裏材上にマウントし、プラスチックラップで覆い、［１４Ｃ］スパイク血液較正基準（０．０００３０μＣｉ／ｇ～７．７２μＣｉ／ｇの範囲の３反復の１０の濃度）と共にリン造影スクリーンに共曝露した。造影プレート、切片、及び較正基準を、室温で４日間の曝露のために、銅ライニングされた鉛の保管庫中の光密閉曝露カセットに配置した。造影プレートを、Ｔｙｐｈｏｏｎ ＦＬＡ ９５００画像取得システム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用してスキャンし、結果として生じた画像を専用のＱＰＳコンピュータサーバー上に保存した。［１４Ｃ］スパイクされた血液較正標準によって生成された画像を使用して、画像分析ソフトウェア（マイクロコンピュータ造影デバイス（ＭＣＩＤ Ｉｍａｇｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｉｎｔｅｒｆｏｃｕｓ Ｉｍａｇｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｌｉｎｔｏｎ，ＵＫ））を使用して、画像較正曲線を作成した。

Ｆ．ＭＡＲＧ
全ての組織切片を、暗所で写真用乳剤で事前コーティングされ、スライドウォーマー上で熱固定された、下塗りされた（ｓｕｂｂｅｄ）ガラス顕微鏡スライド上に解凍マウントした。次いで、スライドを、乾燥剤を含む黒いスライドボックスに配置した。スライドボックスを、黒色の電気テープでテーピングし、４℃で鉛ライニングされた容器に配置した。スライドを、写真用乳剤に７２時間、１週間、１０日、２週間、４週間、６週間、及び８週間曝露した。スライドを、Ｋｏｄａｋ Ｄ１９ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ現像液及びＫｏｄａｋ定着液を用いて現像した。スライドを、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。代表的な結果の検査及びデジタル顕微鏡写真を、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５１顕微鏡上に搭載されたデジタルカメラを使用して得た。放射能の位置は、放射性試験物に曝露された乳剤から生成された銀沈殿物の小さな黒色の粒としてスライド上で可視化される。観察及び結論は、全ての試料の評価に基づいている。定量的組織濃度に関する結論は、ＭＡＲＧ画像を使用して出され得ない。

Ｇ．データ分析
画像分析較正のために決定された全ての応答曲線を、加重一次多項線形方程式（１／ＭＤＣ／ｍｍ^２）を使用して生成した。当てはまりの良さの数的推定値を相対誤差によって与え、各較正標準の相対誤差に対する絶対値は、受け入れられる０．２５０以下であった。

標準曲線計算：
応答（ＭＤＣ／ｍｍ^２）＝ａ_１×濃度（μＣｉ／ｇでの密度標準）＋ａ_０
ここで、
密度標準＝μＣｉ／ｇでの濃度
ＭＤＣ／ｍｍ２＝分子動的計数／組織の面積 ａ_１＝傾き
ａ_０＝ｙ切片
各標準に対する相対誤差を、以下に従って標準曲線を使用して計算した。

ＬＬＯＱを、各パネルの平均バックグラウンドの３倍として決定した。１０の標的領域をサンプリングして、各パネルについての平均値を決定した。

健常組織についてのＬＬＯＱ＝３×（０．００１１１）＝０．００３３μＣｉ／ｇ ＵＣ組織についてのＬＬＯＱ＝３×（０．００１０６）＝０．００３２μＣｉ／ｇ

組織濃度データを、プロファイル画像分析サンプリング技法を使用して得た。

プロファイル造影は、ＭＣＩＤ「プロファイル」機能を使用することによって提供されるリボンタイプサンプリング面積を使用して、各セクションの画像全体にわたって一定間隔（５０μｍの）で濃度データを収集することを伴った。濃度データは、切片を通じて連続的に得られ、各試料の標識された層に対応した。

ＩＩＩ．結果
Ａ．投薬製剤分析
投薬製剤中の放射能の濃度は、投薬当日の投与前アリコートについて４．５３及び４８．７ｎＣｉ／ｍＬ（８０．７及び８６８ｎＭ）の平均であった。各々が３反復で分析された、製剤の３反復アリコートの分析のための変動係数は、それぞれ１．５％及び０．７％であり、製剤が均質であることを示した（表、以下）。

投与前及び投与後の製剤の放射線純度は９６％超であった。

Ｂ．透過研究
健常及びＵＣ対象からの１時間インキュベーション後の結腸における［^１４Ｃ］化合物１の透過結果が、以下の表に列挙される（表中、ＩＮＣＢ０３９１１０は、化合物１である）。

群２の対象２の組織の内側は、組織を有するポリプロピレンチューブの一端をしっかりと覆おうとしている間に破損し、ＵＣ状態からの延長性の喪失による場合がある。群４の対象２の透過結果は１時間のインキュベーション中の漏れにより決定されなかったが、この組織試料をＱＡＲＬ及びＭＡＲＧのために使用した。基底外側部側（レシーバー区画）における全ての［^１４Ｃ］化合物１濃度は、ＬＬＯＱ未満であった。

Ｃ．オートラジオグラフィー分析
ＱＡＲＬ
試料層を通じた個々の試料濃度プロファイルデータの要約が、図３にプロットされ、以下の表に列挙される（表中、ＩＮＣＢ０３９１１０は、化合物１である）。

回収されたピークは、結腸組織層の変動性を表した。［^１４Ｃ］化合物１は、主に粘膜層に分布したが、粘膜下層を通じて検出された（７つの組織のうち５つ）。

ＭＡＲＧ
ＭＡＲＧ反応は、スライドの第１のセット（７２時間の試料）において観察されず、その後のスライドは、４～８週間に定常に達した反応を展開した。薬物由来の放射能の相対濃度は、試料、薬物濃度、ならびに健常状態及びＵＣ状態の間の組織層にわたって一貫していた。最も高い濃度は、全ての試料にわたって絨毛及び関連するクリプトに存在し、その後に粘膜下層が続いた。放射能は、筋肉層においてほとんどまたは全く観察されなかった。筋肉層の外側は、バックグラウンドにあった。

実施例３：ＩＬ－６媒介性ＳＴＡＴ３リン酸化及びＪＡＫ１
インターロイキン－６（ＩＬ－６）は、共通のｇｐ１３０受容体及び特異的なＩＬ－６Ｒα共受容体を通じてシグナル伝達して、Ｊａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）シグナル伝達及び転写活性化因子（ＳＴＡＴ）シグナル伝達経路を活性化する（Ｈｅｉｎｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｊｏｕｒｎａｌ．２００３；３７４：１－２０）。潰瘍性大腸炎生検は、腸の炎症領域内での優位なサイトカインとしてＩＬ－６を特定しており、その濃度は、Ｍａｙｏ内視鏡スコアと相関する（参照：Ｂｅｒｎａｄｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。異常な炎症性ＩＬ－６／ＳＴＡＴ３経路活性化は、関節リウマチ患者（ＲＡ）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において記載されており（Ｉｓｏｍａｋｉ， Ｐ ｅｔ ａｌ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ５４，Ｉｓｓｕｅ ６，１ Ｊｕｎｅ ２０１５，１１０３－１１１３）、抗ＩＬ－６療法は、顕著な臨床有効性を実証する（Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７ Ｊｕｎ；１３（６）：５３５－５５１、Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇ Ｔｒｅａｔ．２０１８ Ｓｅｐ；２９（６）：５６９－５７８）。プラーク乾癬（Ｐｓ）の病因は、ＩＬ－２３媒介性Ｔヘルパー１７（Ｔｈ１７）／ＩＬ－１７炎症（参照）によって促進される。ＩＬ－６は、ＩＬ－２３受容体のＳＴＡＴ３依存的誘導を促進する際に重要な役割を果たし、次に、Ｔｈ１７細胞に完全なエフェクター機能を付与するために不可欠である（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７；８：９６７－９７４、Ｈｉｒｏｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００７；２０４：４１－４７、Ｃａｌａｕｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．２０１８ Ｊａｎ；１９（１）：１７１）。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を通じたシグナル伝達の阻害は、サイトカイン促進細胞ベースのアッセイにおいて間接的に測定され得る。リン酸化したＳＴＡＴの評価は、しばしば組換えヒトＩＬ－６を用いて、ＪＡＫ１の刺激に応答して測定される。

化合物１の全身的効果は、自己免疫疾患ＲＡ及びＰｓにおいて研究されている。ＪＡＫ１阻害のマーカーであるＩＬ－６、及びＪＡＫ２阻害のマーカーであるＴＰＯを用いた刺激後のＳＴＡＴ３のリン酸化の阻害を、両方の研究において測定した。Ｐｓを有する患者において、１００ｍｇのＱＤ、２００ｍｇのＱＤ、２００ｍｇのＢＩＤ、及び６００ｍｇのＱＤの用量が、研究された。エクスビボでのＩＬ－６刺激に応答して、ｐＳＴＡＴ３の化合物１濃度依存性阻害が存在した。しかしながら、ＴＰＯに応答して、１００ｍｇのＱＤ、２００ｍｇのＱＤ、及び２００ｍｇのＢＩＤの用量でのｐＳＴＡＴ３の顕著な阻害はなかった（図４）。また、２８日目にベースラインｓＰＧＡからの主要有効性測定値平均変化における用量依存的応答があった（以下の表を参照されたい）。

２００ｍｇのＢＩＤ（ｐ＝０．０５３）及び６００ｍｇのＱＤ（ｐ＝０．００３）の用量は、ベースラインからの臨床的に有意義な変化を実証したが、一方で、１００ｍｇまたは２００ｍｇのＱＤの用量は、そうでなく、プラセボとは統計学的には異ならなかった（それぞれ、ｐ＝０．２７０、ｐ＝０．１１８）。エクスビボＩＬ－６刺激性ＳＴＡＴ３の阻害の薬物動態マーカーと有効性エンドポイントとの間に良好な相関がある（図５）。好中球減少は認められず、ＪＡＫ２の顕著な阻害（ＴＰＯ刺激性ｐＳＴＡＴ３阻害から決定される）が１００ｍｇのＱＤ、２００ｍｇのＱＤ、及び２００ｍｇのＢＩＤの用量では認められなかったという観察と一致し、好中球減少及び他の血球減少は、骨髄抑制を誘発するＪＡＫ２阻害の特異的な結果であると考えられている（Ｂｉｓｓｏｎｎｅｔｔｅ Ｒ ｅｔ ａｌ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇ Ｔｒｅａｔ，２０１６ ２７（４）３３２－３３８、Ｍａｓｃａｒｅｎｈａｓ ｅｔ ａｌ．Ｈａｅｍａｔｏｌｇｉｃａ ２０１７ １０２（２）：３２７－３３５．）。

ＲＡ患者では、１００ｍｇのＱＤ及びＢＩＤ、２００ｍｇのＢＩＤ、３００ｍｇのＱＤ、４００ｍｇのＢＩＤ、ならびに６００ｍｇのＱＤの用量が研究され、再びＩＬ－６誘導性ｐＳＴＡＴ３の用量依存的阻害の一般的な傾向が観察された（図６Ａ及び６Ｂ）。増加するＴＰＯ誘導性ｐＳＴＡＴ３阻害の一般的な傾向もまた、観察された。しかしながら、最大の阻害は、２００ｍｇのＢＩＤ投薬後に観察されたようである。また注目すべきは、１００ｍｇのＱＤ用量は、プラセボよりも小さなＴＰＯ誘導性ｐＳＴＡＴ３阻害を有したことである。本研究では、減少したＡＮＣのいくつかの症例があったが、用量依存的傾向は観察されなかった。有効性に関して、用量依存的傾向は、８４日目の訪問（主要エンドポイント訪問）での６００ｍｇのＱＤ治療群について、化合物１とプラセボとの間のＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、及びＡＣＲ７０応答における統計学的有意差以外、用量範囲にわたって明らかでなかった。

総合的に考えると、ＲＡ及びＰｓ患者からの臨床データは、１００ｍｇのＱＤ用量が、集積した安全性、有効性、及びバイオマーカーデータに基づいて最小限の全身的効果を有することを示唆する。５０ｍｇのＢＩＤ後の毎日の曝露は、化合物１が用量に関して超線形ＰＫを示すことを考慮すると、１００ｍｇのＱＤ未満であるように予想される。

実施例４：中等度から重度の潰瘍性大腸炎における化合物１の安全性及び有効性を評価するためのオープンラベル延長を伴う第２相、二重盲検、用量範囲、プラセボ対照研究
Ｉ．目的
本研究は、中等度から重度の活動性ＵＣを有する参加者における経口化合物１の安全性及び有効性を評価する。化合物１は、ＳＲ製剤中で投与されるであろう。ヒトにおける化合物１の経口生物学的利用能は中程度であり、投与された用量の約３０％は、便中の親化合物として無傷で排泄される。ＳＴＡＴ３のＩＬ－６刺激性リン酸化の抑制は、ＪＡＫ１阻害の尺度である。５０ｍｇのＢＩＤ化合物１の用量は、ＰＢＭＣ（５８ｎＭ）中のＳＴＡＴ３のＩＬ－６刺激性リン酸化の抑制に対するインビトロＩＣ_５０値を超過する便濃度（約２００ｎＭ）をもたらすことが予想される。しかしながら、この用量に関連する対応する血漿濃度は低く、エクスビボ全血ＩＣ_５０値の１４１ｎＭをはるかに下回るＣ_ｍａｘ値（５１ｎＭ）を有することが予想される。結果として、化合物１の有効性は、全身的というよりむしろ、主に局所的なＪＡＫ１阻害を通じて媒介されることが予想される。

選択的かつ局所的に作用するＪＡＫ１阻害剤として、化合物１は、貧血または好中球減少の関連リスクを有しない他のＪＡＫ阻害剤と共に見られる抗炎症特性を保有し得る。選択された用量範囲における化合物１の好ましい安全性プロファイルを考慮すると、免疫抑制性ＵＣ療法（ＡＺＡ、６－ＭＰ、及びメトトレキサート）の同時使用が許容されることになる。

ＩＩ．全体設計
およそ２０６名の参加者は、全体としてパートＡ（ｎ＝３０）及びパートＢ（ｎ＝１７６）に１２週間登録されることになる。パートＡ及びパートＢは、両方とも無作為化、二重盲検、プラセボ対照、及び平行設計である。

パートＡでは、３０名の参加者は無作為に割り当てられて、５０ｍｇのＢＩＤまたはプラセボを２：１の分配比で受けることになる。パートＡ参加者は、４週目に一晩の診療所内訪問を完了することになる。この訪問では、便薬物濃度分析のための２４時間の大便試料及び血漿薬物濃度のＰＫ分析のための連続血液試料が得られることになる。ベースライン及び１２週目に内視鏡検査を受けることに加えて、パートＡ参加者（のみ）は、４週目に内視鏡検査を受けることになる。パートＡは、２：１比で５０ｍｇのＢＩＤでのメカニズムの証明を確立するように意図され、パートＢは、ＱＤまたはＢＩＤのいずれかを与えられた２５～１００ｍｇの総１日用量の用量の範囲の臨床有効性を評価するように意図される。パートＢにおいて使用される用量レジメンは、パートＡの後に選択されることになる。パートＡまたはパートＢのいずれか、及び１２週目での内視鏡検査を含む全ての関連する研究手順を完了した参加者は、研究の対応する４０週間のＯＬＥ期間に入る資格がある。

パートＢでは、１７６名の参加者は、化合物１錠剤の３用量レベルまたはプラセボのうちの１つに１：１：１：１比で無作為化されることになる。プラセボに加えて、パートＢに含まれる用量は、２５ｍｇのＢＩＤ、５０ｍｇのＢＩＤ、及び１００ｍｇのＱＤである。パートＢの用量レジメンは、パートＡの結論で確認されることになる（ＱＤまたはＢＩＤを投与された２５～１００ｍｇの総１日用量範囲内）。パートＢ参加者は、ベースライン及び１２週目に内視鏡検査を受けることになる。加えて、合計２４名のパートＢ参加者（各治療群から６名）は、４週目に一晩の診療所内訪問を完了することになる。この訪問では、便薬物濃度のための２４時間の大便採取及びＰＫ分析のための連続血液試料が得られることになる。

パートＡ及びパートＢの両方におけるＵＣのバックグラウンド安定療法は、１２週目の評価が完了するまで、スクリーニング及び二重盲検治療期間中に変更されてはならない。

この期間中にＵＣの新しい療法の開始を必要とする参加者は、内視鏡検査を受け、治験責任医師の裁量で与えられる適切な標準的なケア治療を受けて研究を中止するべきである。１２週目の内視鏡検査後、１日あたりのコルチコステロイド用量は、治験責任医師の裁量で増加または減少し得る。パートＡ及びパートＢからの１２週目のデータの分析に加えて、本研究について計画された３つの追加の中間分析がある：
１．第１の中間分析は、パートＡに無作為化された１５名の参加者が利用可能な４週目のデータを有する際に実行されることになる。非盲検化ＰＫ／ＰＤチームは、全身的曝露を評価し、化合物１がＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路に対する影響を有するかどうかを確認するために予備的バイオマーカー分析を実行することになる。
２．第２の中間分析は、これらの１５名の参加者が１２週目に達する際に実行されることになる。ＰＫ／ＰＤ結果を考慮することに加えて、このセクションにおいて実証された有効性の不十分な証拠がある場合、研究は終了され得る。
３．第３の中間分析は、パートＢに無作為化された８８名の参加者が利用可能な１２週目のデータを有する後に実行されることになる。研究は、有効性の不十分な証拠がある場合に終了され得る。

パートＡの結論で、ＳＲＣ（研究依頼者の研究チームのメンバーで構成される）は、パートＢに進むか、または研究を終了するかどうかを決定するために、パートＡの最終的な分析を実施して、非盲検化ベースで全ての安全性及びＰＤデータを見直すことになる。パートＢについての用量レジメンの選択は、データのこの分析によって通知されることになる。パートＢ用量レジメンは、２５～１００ｍｇの総１日用量を用いるＱＤまたはＢＩＤのいずれかとなる。加えて、パートＡ及びパートＢのＯＬＥ期間における用量レジメンは、パートＡ結果に基づいて研究依頼者の研究チームによって修正され得る）。パートＡ ＯＬＥにおける用量は、５０ｍｇのＢＩＤである。パートＢ ＯＬＥ期間における用量は、同じ用量範囲（２５ｍｇ～１００ｍｇの総１日用量）内で後に修正され得る。

８８名の参加者がパートＢの１２週目を完了する際に、ＤＭＣは、研究を継続するよう推奨し得る（現在の安全性分析の結果に関する詳細は次のスケジュールされた分析の前に明らかにされないことになる）か、または（有効性の欠如または任意の安全性所見に基づいて）研究を中止することを推奨し得る。ＤＭＣはまた、パートＢに対するＯＬＥ用量の修正に関して推奨し得る。

二重盲検期間の最終分析は、全てのパートＢ参加者が１２週目を完了した際に実施されることになる。

最終研究分析は、全ての参加者が３０日間のフォローアップ期間を含む研究のＯＬＥ期間を完了した後に生じることになる。
ＩＩＩ．研究治療

ＩＶ．有効性評価
Ｍａｙｏスコアに基づく有効性エンドポイントの定義は、以下に定義され、プロトコル全体を通して使用されることになる。
Ａ．Ｍａｙｏスコアに基づく有効性エンドポイントの定義のリスト

Ｂ．内視鏡検査
内視鏡検査（好ましくは結腸内視鏡検査）は、ベースライン及び１２週目で必要とされる。加えて、内視鏡検査（施設の裁量での結腸内視鏡検査または柔軟なＳ状結腸内視鏡検査）は、４週目に、全てのパートＡ参加者のみに対して必要とされる。この手順は、任意の易出血性が少なくとも２のスコアをもたらすｍＭＥＳを含む３構成要素Ｍａｙｏスコアを確立するために実行されることになる（Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ．２０１６． ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／Ｄｒｕｇｓ／ＧｕｉｄａｎｃｅＣｏｍｐｌｉａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／ＵＣＭ５１５１４３．ｐｄｆ）。内視鏡検査と予定された訪問との間の時間の持続期間は、１４日を超えるべきでない。内視鏡検査はまた、ピンチ生検が粘膜組織におけるＰＤ効果を評価することを可能にする。

訓練を受けた内視鏡医が、内視鏡検査を実行すべきである。可能であれば、同じ内視鏡医が全ての訪問時に内視鏡検査を実行すべきである。全ての結果は、研究マニュアルに記載されるように一元的に読み取られ、判定される。

内視鏡検査中に得られた生検標本の組織学的評価はまた、別個の手順書に記載されるように、訓練を受けた病理学者によって見直され得る。

Ｃ．炎症性腸疾患アンケート（ＩＢＤＱ）
ＩＢＤＱは、ＵＣを含む炎症性腸疾患を有する参加者における疾患特異的な生活の質を測定するための、心理測定的に検証された患者報告アウトカム手段である。ＩＢＤＱは、３２項目を含み、４次元に群化され、以下のようにスコア化される：
・排便症状：１０～７０。
・全身症状：５～３５。
・感情機能：１２～８４。
・社会機能：５～３５。

合計ＩＢＤＱスコアは、３２～２２４の範囲である。総スコア及び各ドメインについて、より高いスコアはより良い生活の質を示す。少なくとも１７０のスコアは臨床的寛解に対応し、少なくとも１６ポイントの増加は臨床的に有意義な改善を示すと見なされる。

ＩＢＤＱは、ベースライン及び各指定された研究訪問時に評価されることになる。

Ｄ．３構成要素Ｍａｙｏスコア
３構成要素Ｍａｙｏスコアは、本研究におけるＵＣの疾患活動性を測定するために使用されることになる。３構成要素Ｍａｙｏスコア（ＰＧＡを有しないＭａｙｏスコアは、０～９ポイントの範囲である）は、以下の３つのサブスコアからなり、各々は０～３から格付けされ、より高いスコアはより重度の疾患を示す。
・大便頻度（０～３）
・直腸出血（０～３）
・ｍＭＥＳ（０～３）

３構成要素Ｍａｙｏスコアは、ベースライン及び各指定された研究訪問時に、中央判定者によって評価されるような内視鏡検査結果を組み込むことに基づいて決定されることになる。中央内視鏡検査結果が欠落した場合、治験責任医師によって決定されるような内視鏡サブスコアが、計算に使用されることになる。

３構成要素Ｍａｙｏスコアは、訪問前の最新の３日間の利用可能なデータからの大便頻度及び直腸出血データを使用して計算される。以下の期間から回収されたデータは、この計算には含まれないことになる：
・便秘または下痢に対する薬物療法がおこなわれた日
・大便頻度または血液含有量に影響する手順または手順の準備（例えば、浣腸、他の下剤、清澄流動食）の日。
・腸運動抑制剤（例えば、ロペラミド）の使用後４８時間。
・内視鏡検査後４８時間。

Ｅ．医師による全体評価
ＰＧＡは、３構成要素Ｍａｙｏスコアとは別に計算されることになる。ＰＧＡは、以下の３つの基準を認める：
・参加者の腹部不快感の毎日の記憶、及び
・参加者の一般的な健康状態、及び
・身体所見及び参加者のパフォーマンス状態などの、参加者のその他の観察結果。
ＰＧＡ基準は、以下のようにスコア化されることになる：
・０＝正常
・１＝軽度疾患
・２＝中等度疾患
・３＝重度疾患
ＰＧＡは、ベースライン及び各指定された研究訪問時に評価されることになる。

Ｖ．薬物動態評価
Ａ．血液及び大便試料回収
ＰＫ訪問（２週目及び１２週目）では、参加者は、研究施設に到着する前に研究薬物の服用を控えなければならない。投与前ＰＫ試料は、回収されるべきである。投与前ＰＫ試料の回収後、化合物１が投与され、その後の定期試料が参加者から回収されることになる。ＰＫ分析のための血液回収、研究薬物の最終用量、及び採血の前の最後の２回の食事（例えば、前夜の夕食及びその朝の朝食）の日時が、記録されることになる。

４週目に、パートＡにおける全ての参加者及びパートＢ参加者のサブセット（ｎ＝約２４）は、一晩の入院クリニック訪問を完了することになる。この訪問では、参加者は、大便中の化合物１便濃度を決定するために２４時間の大便試料を回収し、血漿薬物濃度の分析のための連続血液試料が得られることになる（例えば、実施例Ｃを参照されたい）。内視鏡検査（結腸内視鏡検査または軟性Ｓ状結腸内視鏡検査）は、参加者がＣＲＵから退院し中央判定者によって評価される前に実行されることになる。

ＶＩ．目的及びエンドポイント

実施例５．自発性大腸炎の前臨床マウスモデル
インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）ノックアウト（ＫＯ）マウスモデルは、ＩＬ－１０ ＫＯマウス、ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＴａｃ－Ｉｌ１０^{ｅｍ７Ｔａｃ}が大腸炎を自発的に発症するため、潰瘍性大腸炎及びクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の多因子性質を反映する。ＩＬ－１０ ＫＯマウスにおける大腸炎は、ＣＤ４^＋Ｔヘルパー１様Ｔ細胞の異常な応答、ならびにＪａｎｕｓキナーゼ／シグナル伝達及び転写活性化因子（ＪＡＫ／ＳＴＡＴ）経路を通じてシグナル伝達する炎症促進性サイトカインの過剰な分泌から生じる。化合物１は、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴＹＫ２に対して２２～５００倍超の選択性を有する強力なＪＡＫ１阻害剤であり、現在、中等度から重度の潰瘍性大腸炎の臨床試験における単剤療法として調査されている。

ＢＡＬＢ／ｃ株バックグラウンド上の雌ＩＬ－１０ホモ接合体ノックアウトマウスが、Ｔａｃｏｎｉｃ（ＵＳＡ）によって提供された。６週齢から、化合物１及びビヒクル（１０ｍＬ／ｋｇ）を、１日２回、経口経管栄養によって投与した。下痢を、０～３の評価尺度上で定量化した（０＝正常、１＝軟らかいが依然として形を成す、２＝非常に軟らかい、３＝下痢）。マウスを、ＣＯ_２窒息によって安楽死させ、結腸の長さ及び重量を測定した。組織病理を、以下の基準に基づいて０～１０の尺度上でスコア化した。リンパ球は、粘膜及び粘膜固有層／粘膜下層に位置する腸関連リンパ系組織、粘膜びらん／潰瘍、及び全層性炎症に浸潤する。体重、大便硬さ、便潜血、及び直腸出血を、スコア化した。直腸脱の発生率を記録した。

顕著な改善が、図７Ａに示されるような総疾患負荷、及び図７Ｂに示されるような重度疾患のマーカーとしての直腸脱の発症に関して観察された。エクスビボにおいて、化合物１で治療したマウスの結腸組織を、図７Ｃ～７Ｄに示されるような低減した組織病理によって特徴付けた。３０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の経口１日２回の投与は、大腸炎の発症を有意に（ｐ＜０．００１）遅らせ、疾患関連重量減少を調節した。累積臨床疾患スコアは、ビヒクル対照と比較して、化合物１で治療された動物において有意に（ｐ＜０．０００１）低減した。直腸脱の発生率もまた、有意に（ｐ＜０．０１）低かった。化合物１の投与は、結腸構造病理において有意な（ｐ＜０．０１）低減をもたらした。リンパ球浸潤及び全層性炎症もまた、ビヒクル対照に対して化合物１で治療されたマウスにおいて有意に（ｐ＜０．０１）減少した。図１０に示されるように、化合物１が、顕著により遅い疾患発症によって証明されるように、ＩＬ－１０ ＫＯマウスモデルにおける自発性大腸炎を改善すること、ならびに化合物１治療が、図１２Ａ～１２Ｂに示されるように、ビヒクル対照と比較して、ＩＬ－１０ ＫＯマウスの結腸における差次的遺伝子発現プロファイルをもたらすこともまた、見いだされた。図１５Ａ～１５Ｂに示されるように、全身的化合物１送達は、ＩＬ－１０ ＫＯマウスにおける結腸形態に対する顕著な保護効果と関連付けられた。

これらのデータは、化合物１が、ＩＢＤ（例えば、自発性大腸炎）の治療のための治療剤として有用であり得ることを示唆する。

実施例６．マウスモデルにおいて実験的に誘導された炎症性腸疾患
潰瘍性大腸炎及びクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、免疫系と消化管の組織との間の複雑な相互作用から生じる特発性慢性及び再発性炎症性状態の一群である。Ｊａｎｕｓキナーゼ／シグナル伝達及び転写活性化因子経路を通じたＩＢＤシグナルの病因における複数のサイトカイン及び増殖因子。

ＩＢＤの前臨床モデルを、以下に記載されるように、２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）または４－エトキシメチレン－２－フェニル－２－オキサゾリン－５－オン（オキサゾロン）の結腸内注射によってＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて確立して、免疫応答を誘発した。体重、大便硬さ、及び便血を、スコア化した。追加の読み出された情報は、結腸重量対長さ比及び組織学的評価を含んだ。血液を、薬物動態分析のために回収した。

マウスオキサゾロン誘導性大腸炎モデル
雄のＢＡＬＢ／ｃマウスを、商業的に購入した（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。０日目に、マウスを、オキサゾロン（１５０μＬ、アセトン／オリーブオイル、４：１ ｖ／ｖ中３％）をそれらの予め剃られた吻側背部に塗布することによって感作させた。動物を、５日目にオキサゾロンで再感作させた。マウスを、直腸内オキサゾロン負荷の前に絶食させた。遠位大腸炎を、オキサゾロン溶液（０．１ｍＬの４０％エタノール中１ｍｇ）の結腸内滴下によって誘導し、その後、動物を、溶液が結腸に残ることを確実にするために、３０秒間垂直位置に維持した。偽対照マウスは、０．１ｍＬの４０％エタノールを単独で受けた。化合物１及びビヒクル（１０ｍＬ／ｋｇ）を、１日２回、経口経管栄養によって投与した。下痢を、０～３の評価尺度上で定量化した（０＝正常、１＝軟らかいが依然として形を成す、２＝非常に軟らかい、３＝下痢）。便潜血を、Ｓ－Ｙ潜血用紙（Ｓｈｉｈ－Ｙｕｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｔａｉｗａｎ）を使用して０～３の尺度上で検出した（０＝陰性、１＝陽性、２＝可視血痕、３＝直腸出血）。８日目に、マウスを、ＣＯ_２窒息によって安楽死させ、結腸の長さ及び重量を測定した。さらに、腹腔が開かれた際、結腸と他の臓器との間の接着が、各結腸の除去及び秤量後の結腸潰瘍の存在として認められた。肉眼的スコア化を、表Ａに示されるように、０～１２の尺度上で実行した。正規化された結腸重量は、偽対照マウスに対する組織の増加を表す。

エタノールビヒクル中のオキサゾロンの直腸内投与は、直接的な組織損傷を誘発し、遠位結腸における粘膜炎症、上皮微小潰瘍及び組織病理学的変化をもたらす免疫応答を誘導することは、ヒト潰瘍性大腸炎を暗示する（例えば、Ｋｏｊｉｍａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２００４，９６（３）：３０７－３１３を参照されたい）。後者の炎症相は、ＩＬ－４、ＩＬ－５及びＩＬ－１３分泌などのＴｈ２サイトカインの産生によって促進される（例えば、Ｒａｎｄｈａｗａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１４，１８（４）：２７９－２８８を参照されたい）。

毎日の化合物１治療（３０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ）は、図８Ａに示されるように下痢及び直腸出血からの回復を加速し、図８Ｂに示されるように肉眼組織病理を改善し、図８Ｃに示されるように炎症性腫脹の代替の読み出された情報として正規化された結腸重量を低減するのに有効であった。これらのデータは、トファシチニブがオキサゾロン誘導性大腸炎を阻害することを実証する公開された結果と一致し（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．（Ｌｏｎｄ）．２０１７，４４：２８を参照されたい）、抗炎症有効性の顕著な割合がＪＡＫ１阻害によって促進されることを示唆する。加えて、１日２回の化合物１治療（経口または結腸内）は、ビヒクル治療対照と比較して、顕著に大便硬さを改善し、便潜血スコアを低減し（図１３Ａ～１３Ｄを参照されたい）、化合物１治療は、それぞれのビヒクル治療対照と比較して、結腸短縮を顕著に改善した（図１４Ａ～１４Ｅを参照されたい）。

ＴＮＢＳ誘導性大腸炎モデル
雄のＢＡＬＢ／ｃマウスを購入し（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、遠位大腸炎をＴＮＢＳ（２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸溶液、０．１ｍＬの５０％エタノール中１ｍｇ）の結腸内滴下によって誘導した。化合物１治療を、経口経管栄養（ＰＯ）による３０ｍｇ／ｋｇ、または結腸内注射（ＩＣ）による３ｍｇ／ｋｇで１日２回（ＢＩＤ）投与した。下痢を、ＴＮＢＳ感作後３～５日目に、０～３の評価尺度上で定量化した（０＝正常、１＝軟らかいが依然として形を成す、２＝非常に軟らかい、３＝下痢）。

図９Ａに示されるような、ビヒクル治療された動物と比較した経口化合物１治療の顕著な下痢症状。このデータは、図８Ａに示されるオキサゾロン誘導性モデルデータと一致する。結腸に直接送達される低用量化合物１治療はまた、図９Ｂに示されるように、疾患回復を増強する際に非常に有効であった。例えば、オキサゾロンモデルにおいて、３０ｍｇ／ｋｇでの化合物１のＰＯ ＢＩＤは、結腸短縮（図１４Ａ～１４Ｂ及び１４Ｅを参照されたい）及び重量増加の有意な（ｐ＜０．０５）低減を示した。３ｍｇ／ｋｇでの化合物１のＩＣ ＢＩＤはまた、結腸短縮を有意に（ｐ＜０．０５）低減した（図１４Ｃ～１４Ｅを参照されたい）。

３０ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇでの化合物１の結腸内用量の１日２回の経口投薬（ＰＯ）は、対照と比較して、大便硬さを有意に（ｐ＜０．０５）改善した。加えて、便血スコアの有意な（ｐ＜０．０５）減少は、３ｍｇ／ｋｇのＩＣ ＢＩＤで達成された。さらに、投与の両方の経路（経口、ＩＣ）は、大便硬さ及び便血スコアの有意な（ｐ＜０．０５）改善をもたらした。３ｍｇ／ｋｇでの化合物１のＩＣ ＢＩＤは、総結腸肉眼的損傷を改善した。化合物１の結腸内投薬は、ＪＡＫ１ ＩＣ_５０未満の全身的薬物曝露を維持したが、実験用ＩＢＤの同等の阻害を達成した。まとめると、これらのデータは、化合物１が、ＩＢＤの治療のための治療剤として有用であり得ることを示唆する。

ハプテン化剤（ＴＮＢＳ）の直腸内投与は、結腸タンパク質を宿主免疫系に対して免疫原性にし、それによって、ＣＤ４＋Ｔ細胞、好中球、及びマクロファージでの粘膜固有層の浸潤に特徴付けられるＴヘルパー（Ｔｈ）１媒介性免疫応答を開始する。化合物１を、３０ｍｇ／ｋｇで経口投与するか、または３ｍｇ／ｋｇで結腸に直接投与して、局在化されたＪＡＫ１阻害が有効であるかどうかを決定した。オキサゾロンモデルと一致して、経口化合物１は、図１１Ａに示されるように、ビヒクル治療動物と比較して疾患スコア回復を加速させた。結腸に直接投与された低用量化合物１は、図１１Ｂに示されるように、回復をより迅速に誘導し、より大きな治療応答を媒介するようであった。

さらなる研究では、循環及び組織薬物濃度の定量化は、局所的対全身的ＪＡＫ１標的阻害を明確に区別した。経口投薬は、図１１Ｃに示されるように、結腸濃度と同様であるおよそ１１μＭのピーク循環薬物レベルをもたらした。対照的に、局在化された化合物１送達は、図１１Ｄに示されるように、およそ０．０４μＭの最小のピーク全身濃度によって特徴付けられたが、結腸組織中の０．４５μＭ以上の持続的曝露を持続した。したがって、炎症の胃腸組織内でのＪＡＫ１阻害剤の戦略的標的化または放出は、改善された利益－リスクプロファイルを潜在的に達成できる。

腸炎症の部位に直接投与される低用量化合物１はＴＮＢＳ誘導性大腸炎において非常に有効であり、化合物１血漿濃度が最小であったため、この治療応答は全身的ＪＡＫ１阻害とは独立していた。このデータは、局在化されたＪＡＫ阻害が、治療応答を達成するのに十分であり得、それによって全身的免疫抑制の必要性を回避するという理論的根拠を強く支持する。理論に束縛されるものではないが、これらのデータは、ＪＡＫ１が病原体を活発にする支配的なメカニズムであることも示唆していると考えられる。

本明細書に記載されるものに加えて、本発明の様々な修正は、前述の記載から当業者に明らかとなるであろう。かかる修正はまた、添付の特許請求の範囲の範囲内に該当するように意図される。本出願に引用される全ての特許、特許出願、及び刊行物を含む各参考文献は、その全体の参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (25)

1. 対象における胃腸疾患または障害を治療するための方法であって、ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含み、前記ＪＡＫ１経路阻害剤を投与した後の前記ＪＡＫ１経路阻害剤の最大便濃度が約２５ｎＭ超であり、前記ＪＡＫ１経路阻害剤を投与した後の最大総血漿濃度が約１５０ｎＭ未満である、前記方法。
2. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤が、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴｙｋ２よりもＪＡＫ１に対して選択的である、請求項１に記載の方法。
3. 前記胃腸疾患または障害が、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記胃腸疾患または障害が、クローン病である、請求項１または２に記載の方法。
5. 前記胃腸疾患または障害が、セリアック病である、請求項１または２に記載の方法。
6. 前記胃腸疾患または障害が、自発性大腸炎である、請求項１または２に記載の方法。
7. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの１日用量で投与される、請求項１に記載の方法。
8. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約２５ｍｇ～約７５ｍｇの１日用量で投与される、請求項１に記載の方法。
9. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約２５ｍｇの１日用量で投与される、請求項１に記載の方法。
10. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約５０ｍｇの１日用量で投与される、請求項１に記載の方法。
11. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約１００ｍｇの１日用量で投与される、請求項１に記載の方法。
12. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約２５ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
13. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約５０ｍｇの総１日投与のために、約２５ｍｇの用量で１日２回投与される、請求項１に記載の方法。
14. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約５０ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
15. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約１００ｍｇの総１日投与のために、約５０ｍｇの用量で１日２回投与される、請求項１に記載の方法。
16. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、約１００ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
17. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を各々含む１つ以上の持続放出剤形として投与される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤が、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤が、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルアジピン酸塩である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤の最大便濃度が、前記ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約５０ｎＭ超である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤の最大総血漿濃度が、前記ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約１５０ｎＭ未満である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記ＪＡＫ１経路阻害剤の最大総血漿濃度が、前記ＪＡＫ１経路阻害剤の投与後に約１４１ｎＭ未満である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 対象における胃腸疾患を治療するための方法であって、約２５ｍｇ～１００ｍｇのＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩の１日用量を前記対象に投与することを含み、前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩が、前記ＪＡＫ１経路阻害剤、またはその薬学的に許容される塩を含む１つ以上の持続放出剤形として投与される、前記方法。
24. 潰瘍性大腸炎、クローン病及びセリアック病からなる群から選択される胃腸疾患の治療を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含み、
    ｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルの最大便濃度が、約２５ｎＭ超であり、
    ｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を投与した後の｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリルの最大総血漿濃度が、約１５０ｎＭ未満である、前記方法。
25. 対象における潰瘍性大腸炎、クローン病、及びセリアック病からなる群から選択される胃腸疾患を治療するための方法であって、遊離塩基ベースで約２５ｍｇ～約１００ｍｇの｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩の１日１回用量を前記対象に投与することを含み、前記用量が、｛１－｛１－［３－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン－４－イル｝－３－［４－［７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］アゼチジン－３－イル｝アセトニトリル、またはその薬学的に許容される塩を各々含む１つ以上の持続放出剤形を含む、前記方法。

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