TWI681719B - 茶發酵物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物。本發明之組成物係具有優異的能量代謝亢進作用、交感神經活動亢進作用、脂肪燃燒促進作用、抗肥胖(體重增加的抑制或體重的減少)作用、體溫上升作用，可期待例如體溫上升、虛冷性改善、抗肥胖、內臟脂肪減低、美容、新陳代謝促進、免疫賦活、抗疲勞、抗鬱等效果。

Description

茶發酵物
本發明係關於茶發酵物。更詳細而言，係關於含有屬茶發酵物的兒茶素代謝物之各種組成物、該組成物之製造方法、使用藉由該製造方法所獲得之組成物之飲食品之製造方法及該飲食品。
在德島縣所生產之阿波番茶、高地縣所生產之基石茶等經微生物發酵而成之茶中係已知各式各樣的效果效能，其中，有其係顯示出比綠茶更高的效果之報告(非專利文獻1、2)。在非專利文獻1中已報告阿波番茶係顯示出比綠茶更高的能量代謝亢進作用。雖然被認為牽涉到使能量代謝有所亢進、以及使體溫上升、甚至虛冷症改善、抗肥胖、新陳代謝上升等各式各樣的健康情形，但針對微生物發酵茶中之該效能成分卻幾乎不瞭解。另一方面，在非專利文獻3中已報告在微生物發酵茶中係包含表沒食子兒茶素(epigallocatechin)經還原性開環而成之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。迄今為止已知1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3- (2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇係由某種腸內細菌所產生(非專利文獻4)，但並沒有針對其生理活性之報告。
〔先前技術文獻〕 〔非專利文獻〕
〔非專利文獻1〕 YAKUGAKU ZASSHI 128(7) 1037-1044 (2008)
〔非專利文獻2〕 The Journal of Medical Investigation vol.56, p42-48 (2009)
〔非專利文獻3〕 Jpn. J. Food Chem. Safety, Vol. 18(1) (2011)
〔非專利文獻4〕 J. Agric. Food Chem. 58, 1313-1321 (2010)
本發明之課題係在於提供含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、體溫上升用組成物。
更進一步地，本發明之課題係在於提供含有前述有效成分之組成物之製造方法、使用藉由該製造方法所獲得之組成物之飲食品及其製造方法。
本發明係關於下述〔1〕~〔8〕。
〔1〕一種能量代謝亢進用組成物，其係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇而成。
〔2〕一種交感神經活動亢進用組成物，其係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇而成。
〔3〕一種脂肪燃燒促進用組成物，其係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇而成。
〔4〕一種抗肥胖用組成物，其係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇而成。
〔5〕一種體溫上升用組成物，其係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇而成。
〔6〕一種含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物之製造方法，其特徵為包含將茶萃取液以屬於戊糖乳酸桿菌(Lactobacillus pentosus)之菌進行發酵之步驟。
〔7〕一種飲食品之製造方法，其特徵為使用藉由前述〔6〕所記載之製造方法所獲得之組成物作為飲食品之原料。
〔8〕一種飲食品，其係含有藉由前述〔6〕所記載之製造方法所獲得之組成物而成。
本發明之能量代謝亢進用組成物係顯現出能量代謝亢進作用優異之優異的效果。本發明之交感神經活動亢進用組成物係顯現出交感神經活動亢進作用優異之優異的效果。本發明之脂肪燃燒促進用組成物係顯現出脂肪燃燒促進作用優異之優異的效果。本發明之抗肥胖用組成物係顯現出抗肥胖作用優異之優異的效果。本發明之體溫上升用組成物係顯現出體溫上升作用優異之優異的效果。
此外，由於藉由本發明之製造方法所獲得之組成物係以高濃度含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇，故而顯現出能量代謝亢進作用優異、交感神經活動亢進作用優異、脂肪燃燒促進作用優異、抗肥胖作用優異、體溫上升作用優異之優異的效果。
〔圖1〕圖1係示出顯示茶萃取物的發酵液中之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的生成之代表性HPLC圖表的結果之圖(A：發酵兒茶素精製品、B：發酵前之茶萃取物、C：發酵後之茶萃 取物(使用TUA4337L培養72小時後))。
〔圖2〕圖2係示出茶萃取物的發酵液中之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的經時生成量之圖。
〔圖3〕圖3係示出各種乳酸菌所引發之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的生成結果之圖。
〔圖4〕圖4係示出1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇所引發之交感神經活動的亢進結果之圖。
〔圖5〕圖5係示出1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的連續投予中之投予第4日的消耗卡路里之圖(＊：p<0.05，t-檢定)。
〔圖6〕圖6係示出1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇所引發之呼吸商的變化之圖(＊：p<0.05，t-檢定)。
〔圖7〕圖7係示出1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇所引發之體溫上升的結果之圖(＊：p<0.05，t-檢定)。
〔圖8〕圖8係示出1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇所引發之體重增加的抑制結果之圖(†：p<0.1，t-檢定)。
本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物之特徵為含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分。即，本發明之組成物亦為分別以1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分之能量代謝亢進劑、交感神經活動亢進劑、脂肪燃燒促進劑、抗肥胖劑、或體溫上升劑。在本說明書中，「能量代謝」係意味ATP轉換成ADP時將游離之能量轉換成肌收縮、神經傳達、物質構成、體溫調節等之過程，可以能量消耗量之形式由氧消耗量及二氧化碳排出量予以算出。「交感神經」係意味屬熱產生組織的褐色脂肪組織中之交感神經，其牽涉到使交感神經活動有所亢進以及使能量代謝有所亢進、體溫上升、脂肪燃燒、甚至抗肥胖等。「脂肪燃燒」係意味以屬二氧化碳排出量相對於氧消耗量之體積比的呼吸商為指標，呼吸商越降低則越燃燒脂肪。「抗肥胖」係意味體重的增加受到抑制或體重減少。
1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇係具有以下式(I)所示之構造者：
Figure 105107201-A0202-12-0007-1
其係已知為屬兒茶素之一種的表沒食子兒茶素之代謝產物。
1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇可依照公知的有機化學合成方法予以調製，例如，可將表沒食子兒茶素作為材料藉由利用鉑族觸媒之氫化予以調製。此外，已知1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇係藉由生物學轉換而由表沒食子兒茶素生成(非專利文獻4)。本發明中，可藉由例如使用茶萃取物培養屬於戊糖乳酸桿菌之菌而獲得。
作為屬於戊糖乳酸桿菌之菌，只要是公知者，即無特別限定，例如，可適當地使用以識別標示NRIC 0883、受託番号NITE BP-1479之形式，於國際受託日2012年12月10日寄存於日本獨立行政法人製品評估技術基礎機構專利微生物寄存中心(日本國千葉縣木更津市上總鎌足2-5-8)之戊糖乳酸桿菌TUA4337L株。以下，將戊糖乳酸桿菌TUA4337L株略記為TUA4337L株。
另外，對於所獲得之處理物，亦可依所期望依照公知的方法施行過濾、離心分離、濃縮、超過濾、凍結乾燥、粉末化、分餾等處理。因此，可例如將含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物分別提供作為本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物之有效成分。
依以上之方式所獲得之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇可為了刺激褐色脂肪組織之交感神經活動以發揮褐色脂肪組織的活性化，例如能量代謝亢進作用、體溫上升作用、脂肪燃燒作用、甚至抗肥胖作用而加以使用。
本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物，其投予形態並無限定。另外，在本說明書中，投予係指以包含投予、攝取、服用、飲用之所有態樣之形式使用。
作為本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的投予所引發之效能，只要是藉由該等的投予所表現出之效能，即無特別限定。可例示例如體溫上升、虛冷性改善、抗肥胖、內臟脂肪減低、美容、新陳代謝促進、免疫賦活、抗疲勞、抗鬱等。
本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經 活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物亦可例如在1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇中，依所期望加入溶劑、分散劑、乳化劑、緩衝劑、安定劑、賦形劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑等，並依照公知的方法，予以製劑化成錠劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等固形劑、或通常液劑、懸浮劑、乳劑等液劑等。
此外，前述形態中之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的含量係考慮其投予形態、投予方法等，只要是可獲得本發明所期望之效果的表現之量即可，並無特別限定。作為1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的含有比率(含量)，通常為0.0001~100重量%，較佳為0.001~30重量%，更佳為0.01~5重量%左右。另外，1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的含量可依照公知的方法予以測定，例如，可藉由供至HPLC而予以測定。
本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物係藉由配合其形態之適當的投予方法進行投予。舉例而言，可藉由內用、外用及注射進行投予。在內用之情況，可例如藉由經口而攝取，在注射之情況，可例如投予至靜脈內、肌肉內、皮下、皮內等，在外用之情況，只要例如以栓劑等外用劑之形式，藉由其 所適合的投予方法進行投予即可。
本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的投予量係依其形態、投予方法、使用目的及屬該組成物之投予對象的人類或患獸的年齡、體重、症狀而適宜設定，並無一定。舉例而言，作為本發明中之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的有效人類攝取量，體重50kg的人類每1日較佳為1mg~10g，更佳為10mg~3g，再佳為100mg~1g左右。此外，投予係在所期望之投予量範圍內，在1日內以單次、或分成數次施行皆可。投予期間亦為任意。
在本說明書中，本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物之投予對象係指較佳為治療或預防上需要能量代謝的亢進、交感神經活動的亢進、脂肪的燃燒、體重增加的抑制或體重減少、或者體溫的上升之作用表現之人類，亦可為牛、馬、山羊等家畜動物、犬、貓、兔等寵物動物、或小鼠、大鼠、豚鼠、猴等實驗動物。此外，作為投予對象，不僅包含需要能量代謝的亢進之個體，亦包含雖然能量代謝並不低，但需要抑制體重的上升之個體、需要抑制虛冷之個體、需要抑制內臟脂肪的增加之個體、需要抑制新陳代謝的降低之個體、欲治療或預防感冒之個體、需要美容的維持之個 體、需要抑制疲勞之個體。
本發明復提供能量代謝之亢進方法、交感神經活動之亢進方法、脂肪燃燒之促進方法、體重增加之抑制或體重減少方法、或者體溫之上升方法，其係包含對需要能量代謝的亢進、交感神經活動的亢進、脂肪燃燒的促進、體重增加的抑制或體重減少、或者體溫的上升之個體投予其治療有效量之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇、或者含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物。另外，需要能量代謝的亢進、交感神經活動的亢進、脂肪燃燒的促進、體重增加的抑制或體重減少、或者體溫上升之個體係指與前述之本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、體溫上升用組成物之投予對象同樣者。
此外，在本說明書中，治療有效量係指在將1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇投予至上述個體之情況，相較於未進行投予之個體而言，使能量代謝有所亢進之量、使交感神經活動有所亢進之量、促進脂肪燃燒之量、抑制體重增加或使體重減少之量、或者使體溫上升之量。作為具體的有效量，係依投予形態、投予方法、使用目的及個體的年齡、體重、症狀等而適宜設定，並無一定。
在本發明之治療方法中，可依成為前述治療 有效量之方式，依原樣投予1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3.(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇、且及含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物。此外，投予方法亦無限定，例如，可藉由經口投予而進行投予。
根據本發明之治療方法，能夠在不會發生副作用之情形下，使能量代謝有所亢進、使交感神經活動有所亢進、促進脂肪燃燒、抗肥胖(抑制體重增加或使體重減少)、或者使體溫上升。
此外，作為本發明之組成物，可列舉例如藉由其特徵為包含將茶萃取液以屬於戊糖乳酸桿菌之菌進行發酵之步驟之製造方法所獲得之組成物作為適當例。另外，有時亦將前述製造方法記載為本發明之製造方法。
在茶葉中係包含各種兒茶素類，已知在阿波番茶或基石茶等在發酵桶中經自然發酵而成之所謂的微生物發酵茶葉(後發酵茶葉)中亦包含前述式(I)所示之化合物。然而，產生前述式(I)所示之化合物之微生物種係未知，其並非使用特定的微生物種進行發酵，而是如前述後發酵茶葉般藉由自然發酵而無效率地與其他化合物共同地生成前述式(I)所示之化合物。此外，後發酵茶葉係使原料保持固體狀態進行發酵(固體發酵)，最終發酵而成之固體(茶葉)係成為製品，故而在飲用時需要另行萃取出萃取物，此時會有前述式(I)所示之化合物無法順利地萃取、或受到分解之可能性。本發明者等人意外 地初次發現藉由使屬於戊糖乳酸桿菌之菌接觸來自茶葉之萃取液，可獲得以高含有率包含前述式(I)所示之化合物之組成物，該組成物係具有能量代謝亢進作用。即，作為本發明之一態樣，係基於本發明者等人發現藉由將茶萃取液以屬於戊糖乳酸桿菌之菌進行發酵，可促進由表沒食子兒茶素朝向1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之代謝。由於使來自茶葉之萃取液進行發酵，故而與在飲用時另行萃取出萃取物之後發酵茶葉並不相同，可依原樣使用發酵液，並可輕易地攝取1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。以下，有時亦將使用茶萃取液所獲得之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇記載為本發明之發酵兒茶素，此外，將含有使用茶萃取液所獲得之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物記載為本發明之含有發酵兒茶素之組成物。
作為本發明中所使用之茶萃取液，可使用例如藉由將茶葉以公知的溶媒進行萃取所獲得者。此外，在本發明中，從產生更多本發明之發酵兒茶素之觀點而言，亦可使用大量含有屬本發明之發酵兒茶素之前驅物的表沒食子兒茶素之萃取液。
本說明書中之「茶葉」係可列舉綠茶、紅茶、烏龍茶等茶葉。作為茶葉的種類，可列舉茶樹科之植物，例如山茶屬之茶(Camellia sinensis)的葉。在本發 明中，其可為茶葉本身，亦可為粉碎品。
作為溶媒，可列舉例如水、乙醇、異丙醇等親水性有機溶劑之任一者或適宜組合此等而成者。
萃取條件係配合所使用之裝置或使用量而並非一概地予以設定，例如，萃取溫度為30~100℃，較佳為40~80℃。另外，在本發明中，亦可使用市售品作為茶萃取液。
作為此處所使用之屬於戊糖乳酸桿菌之菌，可同樣地使用前述者。
另外，作為本發明中之菌株，可列舉屬於戊糖乳酸桿菌之菌(生菌及死菌)本身、含有該乳酸菌之物、乳酸菌處理物等各種形態。生菌可由該乳酸菌培養液等含有乳酸菌之物獲得。死菌可藉由例如對生菌施行加熱、紫外線照射、福馬林處理、酸處理等而獲得。所獲得之生菌、死菌可進一步藉由磨碎或破碎等，而作成處理物。另外，前述各形態中之乳酸菌只要是作用於表沒食子兒茶素而產生本發明之發酵兒茶素，則雖然較佳為生菌，但亦可混雜死菌。
作為利用前述菌之發酵條件，只要是在茶萃取液中之發酵，其他條件並無特別限制，例如，亦可添加包含碳源、氮源、無機鹽類、有機營養素等之添加物進行發酵。具體而言，例如，可將屬藉由酵素或熱水等之處理對酵母中之成分進行萃取而得之萃取物的酵母萃取物作為氮源添加至茶萃取液中。發酵溫度較佳為10℃以上，更佳 為15℃以上，再佳為28℃以上，且較佳為45℃以下，更佳為40℃以下，再佳為38℃以下。此外，茶萃取液的pH值較佳為pH 3.0~12.5，更佳為pH 3.5~10.0，再佳為pH 4.0~7.0。發酵時間係配合發酵溫度或試料量而並非一概地予以決定，例如為16~96小時。如此，藉由將茶萃取液使用屬於戊糖乳酸桿菌之菌進行發酵，雖然屬習知傳統微生物發酵茶的阿波番茶係將茶葉進行桶漬使其自然發酵而需要10日至3週左右的調製時間，但能夠縮短大幅的時間，使生產性提升。
藉由將該種茶萃取液以前述之屬於戊糖乳酸桿菌之菌進行發酵，可獲得含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物。
所獲得之含有發酵兒茶素之組成物中之本發明之發酵兒茶素的含量係取決於茶萃取液或菌的種類、發酵條件、後述之隨後的處理條件等而無法一概地予以設定，但較佳為0.13mg/mL以上，更佳為0.5mg/mL以上，再佳為1.0mg/mL以上。
此外，在本發明中，藉由屬於戊糖乳酸桿菌之菌，可促進由表沒食子兒茶素朝向本發明之發酵兒茶素之代謝，故而在本發明之含有發酵兒茶素之組成物中，表沒食子兒茶素與發酵兒茶素之含有重量比(表沒食子兒茶素/發酵兒茶素)較佳為50/50以下，更佳為40/60以下，再佳為30/70以下，再佳為20/80以下，再佳為10/90以下。此外，亦可促進代謝至實質上不含表沒食子 兒茶素之程度。另外，在本說明書中，「實質上不含」係指例如只要在後述實施例所示之測定方法中成為檢測極限以下即可，含量為0.01mg/mL以下。
已知後發酵茶葉相較於綠茶葉而言表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯係顯著地減少，而在本發明中，表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯的減少係比較緩慢，亦可期待就表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯而言之效果。本發明之含有發酵兒茶素之組成物中之表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯的含量較佳為0.16mg/mL以上，更佳為0.5mg/mL以上，再佳為1.0mg/mL以上。
此外，在本發明之含有發酵兒茶素之組成物中，發酵兒茶素與表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯之含有重量比(發酵兒茶素/表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯)較佳為20/80以上，更佳為40/60以上，再佳為45/55以上。
本發明之含有發酵兒茶素之組成物，除了發酵兒茶素或前述之化合物以外，亦可含有咖啡因、沒食子酸、表兒茶素、表兒茶素-3-O-沒食子酸酯、兒茶素、沒食子兒茶素、沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯、焦性沒食子酚(pyrogallol)等。該等的含量只要是在不會損及本發明之效果之範圍內，即無特別限定。另外，在本說明書中，式(I)所示之化合物、表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、及其他化合物可依照後述實施例所示之測定方法予以測定。
此外，對於所獲得之本發明之含有發酵兒茶素之組成物，亦可依照公知的方法施行選自過濾、離心分離、濃縮、超過濾、凍結乾燥、粉末化、及分餾所組成群組之1種或2種以上的處理，亦可依原樣予以製劑化、或調製成能夠用於飲食品(健康食品)等之原材料之形態。因此，作為本發明之含有發酵兒茶素之組成物之一態樣，係包含前述處理物。
作為本發明之一態樣，係將本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物作為飲食品，作為另一態樣，係將藉由本發明之製造方法所獲得之本發明之含有發酵兒茶素之組成物作為原料之飲食品。
在將本發明之含有發酵兒茶素之組成物作為原料之飲食品之情況，作為其製造方法，含有發酵兒茶素之組成物的使用量、添加時期、添加方法並無特別限定，除此之外，所添加摻合之成分亦可無限定地使用，其使用量或添加方法亦可依照公知技術而適宜選擇。具體而言，例如，可在達成本發明之目的之範圍內適宜摻合在製劑領域或食品領域等中通常使用之載體、基劑、及/或添加劑等。此外，亦可在現成之公知的飲食品中，添加本發明之含有發酵兒茶素之組成物，並加以溶解及/或懸浮而進行調製。另外，公知的飲食品亦可為原本即含有前述式(I)所示之化合物者。
在本發明之飲食品中，1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的含量通常為0.00002~100重量%，較佳為0.0002~30重量%，更佳為0.002~5重量%左右。
作為屬本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的飲食品、以及藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品的形態，並無特別限定，可例示例如碳酸飲料、天然果汁、果汁飲料、清涼飲料水(亦包含加有果汁者)、果肉飲料、加有果粒之果實食品、蔬菜系飲料、豆乳/豆乳飲料、咖啡飲料、茶飲料、膠凍飲料、粉末飲料、濃縮飲料、運動飲料、營養飲料、酒精飲料等嗜好飲料類、營養食品、補充品、丸劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、錠劑〔包含素錠、糖衣錠、口腔內速崩解錠、可咀嚼錠(口嚼錠)、發泡錠、口含劑、膜衣錠等〕等。另外，此等只要是在調製本發明之含有發酵兒茶素之組成物時或調製後對現成之飲食品進行添加而成者即可，針對添加時期或添加方法並無特別限定。
藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品係與屬本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的飲食品同樣地含有式(I)所示之化合物。因此，藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品能夠使交感神經活動有所亢進，例如顯現出能量代謝亢進作用、 脂肪燃燒的促進作用、體重增加的抑制或體重減少作用、體溫上升作用等生理作用，故而配合其目的，藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品可用作能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、體溫上升用組成物。從而，本發明復提供以藉由本發明之飲食品之製造方法所獲得之飲食品之形式，含有本發明之含有發酵兒茶素之組成物而成之飲食品。另外，在本說明書中，「能量代謝」係意味ATP轉換成ADP時將游離之能量轉換成肌收縮、神經傳達、物質構成、體溫調節等之過程，可以能量消耗量之形式由氧消耗量及二氧化碳排出量予以算出。「交感神經」係意味屬熱產生組織的褐色脂肪組織中之交感神經，其牽涉到使交感神經活動有所亢進以及使能量代謝有所亢進、體溫上升、脂肪燃燒、甚至抗肥胖等。「脂肪燃燒」係意味以屬二氧化碳排出量相對於氧消耗量之體積比的呼吸商為指標，呼吸商越降低則越燃燒脂肪。「抗肥胖」係意味體重的增加受到抑制或體重減少。
藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品係與屬本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的飲食品同樣地可適當地使用於例如需要發揮能量代謝亢進作用、體溫上升作用、脂肪燃燒作用、抗肥胖作用之症狀。具體而言，可適當地使用於例如體溫上升、虛冷性改善、抗肥胖、內臟脂肪減低、美容、新陳 代謝促進、免疫賦活、抗疲勞、抗鬱等。
此外，屬本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的飲食品、以及藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品係藉由具有交感神經活動亢進作用，而對於需要發揮能量代謝亢進作用、體溫上升作用、脂肪燃燒作用、甚至抗肥胖作用之症狀的改善、預防極為有用。即，屬本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的飲食品、以及藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品係以附有目的為預防或改善上述症狀之保健機能食品或健康食品之形式、或者以附有關於1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇所具有之機能的機能性標示之食品之形式，成為例如不僅對於需要能量代謝的亢進之個體而言，亦對於雖然能量代謝並不低，但需要抑制體重的上升之個體、需要抑制虛冷之個體、需要抑制內臟脂肪的增加之個體、需要抑制新陳代謝的降低之個體、欲治療或預防感冒之個體、需要美容的維持之個體、需要抑制疲勞之個體等而言極為有用的組成物。
屬本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的飲食品、以及藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品係設為可標示其用途。作為標 示之內容，可列舉例如源於乳酸菌發酵處理物或1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇所具有之機能之用途。該標示可附於飲食品自身，亦可附於飲食品的容器或包裝。
屬本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、或體溫上升用組成物的飲食品、以及藉由本發明之製造方法所獲得之飲食品的攝取量係依其形態、攝取方法、攝取目的、及屬該飲食品之攝取對象的人類的年齡、體重、症狀而適宜設定，並無一定，例如，可在1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇量成為體重50kg的人類每1日較佳為1mg~10g，更佳為10mg~3g，再佳為100mg~1g左右之量內適宜設定。此外，在所期望之攝取量範圍內，在1日內以單次或以複數次使用皆可，使用時間、期間亦為任意。
〔實施例〕
以下，示出實施例而具體地說明本發明，但本發明不受下述實施例所限制。
(實施例1)
使用TUA4337L株使茶萃取物進行發酵而生成1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。具體而言，係如下。另外，將1-(3’,4’,5’-三羥基 苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇記載為發酵兒茶素。
<發酵程序>
(1)將TUA4337L自甘油儲備液中植菌1v/v%於MRS(10mL)
(2)培養(30℃，20小時)
(3)離心(8,000rpm，5分鐘，4℃)後，去除上清液
(4)以與培養液同量的滅菌水洗淨(×2次)
(5)使用滅菌水以成為OD660=10之方式調製菌液
(6)在添加10w/v%茶粉末(Cargill Japan公司製)至滅菌水中並懸浮後之離心(8,000rpm，5分鐘)後之上清液(Bx 11.9)中，添加酵母萃取物(BD公司製)0、0.04、0.2、1w/v%，並添加(5)所調製之菌液1v/v%
(7)培養(35℃)
將所獲得之培養液以純水稀釋，再以40%乙腈稀釋2倍後，以0.45μm的過濾器進行處理，並供至以下分析。將HPLC的代表性圖表示於圖1，並將發酵兒茶素的生成結果示於圖2。
<HPLC分析條件>
管柱：capcell pak C18，4.6mmψ×150mm，5μm(資生堂公司製)
移動相：A 0.05%TFA/H2O，B 90%CH3CN、0.05%TFA/H2O
梯度：B 5→35v/v%(0→13分鐘)、B 35→70v/v%(13→20分鐘)、B 70v/v%(20→25分鐘)
流速：1.0mL/分鐘
檢測：A225nm
注入量：10μL
由圖1及2，藉由使用TUA4337L使茶萃取物進行發酵，表沒食子兒茶素(EGC)係經時性減少，生成發酵兒茶素。此外，藉由添加酵母萃取物，生成速度係加快。另外，藉由NMR確認圖1中之C的新穎尖峰為發酵兒茶素。
(實施例2)
對利用屬於乳酸菌之各種株之發酵兒茶素的生成進行檢討。
使用各式各樣的戊糖乳酸桿菌(L.pentosus)及胚芽乳酸桿菌(L.plantarum)之菌株作為乳酸菌並與JCM基準株共同地檢討發酵兒茶素的生產性。作為戊糖乳酸桿菌，係檢討TUA4337L、AF43、AF48、AF51、AF64、JCM基準株1558T，作為胚芽乳酸桿菌，係檢討AF70、AF71、AF62、AF63、JCM基準株1149T。使用此等乳酸菌，以與實施例1同樣的程序評估發酵兒茶素的生產性(在添加有酵母萃取物0w/v%及1w/v%之茶萃取物 中進行檢討)。具體而言，對培養72小時後之培養液中之發酵兒茶素的濃度進行定量。將結果示於圖3。
由圖3，戊糖乳酸桿菌係不取決於菌株而生成發酵兒茶素，而在另一方面，胚芽乳酸桿菌在所有菌株中皆無法生成發酵兒茶素。
(實施例3)
對實施例1所獲得之發酵兒茶素所引發之褐色脂肪組織之交感神經活動亢進作用進行檢討。另外，實施例1所獲得之發酵兒茶素係指由實施例1中之培養液單離出發酵兒茶素的尖峰部分並濃縮後，藉由凍結乾燥所析出者。
具體而言，於實驗中係在每12小時明暗週期下(自8時起點燈12小時)使飼育1週之體重約300g的Wistar系雄性大鼠(約9週齡，各組n=3)絕食3小時並進行胺基甲酸乙酯麻醉，插入十二指腸投予用之套管，然後，以銀電極挑起肩甲間褐色脂肪組織之交感神經的離心支，測定該神經之電氣活動。在此神經的測定值平穩之時期(大約13時)，將各試驗樣品1mL(對照組：滅菌水，發酵兒茶素：1μg/mL水分散液)以套管進行十二指腸投予，在電生理學上測定褐色脂肪組織之交感神經活動的變化。將結果示於圖4。
由圖4，在BAT-SNA值中，發酵兒茶素若與對照組相比，可見到顯著的上升。從而，可認為發酵兒茶素係使褐色脂肪組織中之交感神活動有所亢進。此外，可 認為此交感神經活動的亢進係成為使能量代謝有所亢進之機制，因而以下係進行其實證。
(實施例4)
對實施例1所獲得之發酵兒茶素所引發之能量代謝亢進作用及脂肪燃燒促進作用進行檢討。另外，發酵兒茶素係使用與實施例3同樣地調製而成者。
具體而言，在C57BL/6J小鼠(7週齡，雄)中持續進行滅菌水250μL的經口投予5日，使其習慣於經口投予。然後，以在體重的平均值上無法產生差異之方式分組成對照組及發酵兒茶素組(各n=4)。在能量代謝測定裝置(Oxymax，Bio Research Center公司)之腔室中放入小鼠2日並使其習慣於環境後，將餌更換成高脂肪飲食(60kcal%脂肪，Research Diet公司)，開始各小鼠的氧消耗量(VO2(mL/kg/小時))及排出二氧化碳排出量(VCO2(mL/kg/小時))之測定。對各小鼠每1日經口投予試驗樣品250μL(對照組：滅菌水，發酵兒茶素：5mg/mL水分散液)，持續投予11日。消耗卡路里及呼吸商係藉由以下計算式予以算出。
消耗卡路里：VO2×(RER×1.232+3.815)/1000
此處，RQ(呼吸商)=VCO2/VO2
藉由投予發酵兒茶素，相較於對照組而言，可見到消耗卡路里的增加。將直至11日為止之消耗卡路里進行比較，將投予前及第4日之數據示於圖5。此為將 明期(安靜期：AM 7：00~PM 19：00)之消耗卡路里進行解析而得之結果，發酵兒茶素組中消耗卡路里係顯著地增加。由於此為在安靜期之效果，因而可認為其係顯示出基礎代謝因發酵兒茶素而提升，可確認有能量代謝亢進作用。此外，為了驗證在發酵兒茶素的投予前後之脂肪燃燒效果的變化，係施行呼吸商之測定。呼吸商係指在某個時間內於生物體內營養素被分解並轉換成能量為止之二氧化碳排出量相對於氧消耗量之體積比。其係廣泛用作營養素係於體內以何種比例進行燃燒之概要理解的指標。亦即，呼吸商係反映出經消耗之能量源，一般而言，呼吸商顯示出最高值者係糖質(RQ=1.0)，顯示出最低值者係脂質(RQ≒0.7)。即，在使脂肪大量燃燒時二氧化碳的排出量相對於氧的消耗量係較少，呼吸商之值係減少。此值越低，則表示脂肪越燃燒，可視為脂肪燃燒效果高。在圖6中係示出投予前、投予第11日之呼吸商之差異，相較於對照組而言，在投予發酵兒茶素之情況，呼吸商更加降低，可認為脂肪燃燒效果受到促進。
(實施例5)
對實施例1所獲得之發酵兒茶素所引發之體溫上升作用進行檢討。另外，發酵兒茶素係使用與實施例3同樣地調製而成者。
具體而言，對在2週間以高脂肪飲食(60kcal%脂肪)飼育之C57BL/6J小鼠(10週齡，雄)每1 日經口投予試驗樣品250μL(對照組：滅菌水，發酵兒茶素：1.6mg/mL水分散液)(各n=11~12)。自經口投予起5分鐘及60分鐘後，使用微探針溫度計(BAT-12，muromachi公司)分別測定直腸溫，算出直腸溫的變化幅度。將結果示於圖7。
由圖7，發酵兒茶素相對於對照組而言係使直腸溫顯著地上升。從而，可認為發酵兒茶素係具有體溫上升作用。
(實施例6)
對實施例1所獲得之發酵兒茶素所引發之抗肥胖作用進行檢討。另外，發酵兒茶素係使用與實施例3同樣地調製而成者。
具體而言，在2週間以高脂肪飲食(60kcal%脂肪)飼育C57BL/6J小鼠(7週齡，雄)。其間，持續進行滅菌水250μL的經口投予5日，使其習慣於經口投予。然後，以在體重的平均值上無法產生差異之方式分組成對照組及發酵兒茶素投予組(各n=4)。對各小鼠每1日經口投予試驗樣品250μL(對照組：滅菌水，發酵兒茶素：5mg/mL水分散液)，經時地施行體重測定。將體重增加的推移示於圖8。
由圖8，可認出藉由投予發酵兒茶素而使體重增加受到抑制之傾向，可認為發酵兒茶素係具有抗肥胖作用。作為此作用機制，與體溫上升效果同樣地，可認為係 能量代謝亢進作用。
以下，例示本發明之組成物之具體的配方。此等組成物可依照公知的方法予以調製。
(配方例：綠茶飲料1)
將實施例1之培養液進行乾燥後，與9倍量的糊精進行混合，調製發酵兒茶素混合物，在上述混合物及粉末茶中加入水並進行混合後，於121℃進行滅菌20分鐘而調製綠茶飲料。
(配方例：咖啡飲料)
在咖啡豆(L值：27)200g中加入約10重量倍的沸騰水而獲得Bx. 2.6的咖啡萃取液2000g。在此萃取液中，混合上述綠茶飲料時所調製之混合物、砂糖、牛乳、pH調整劑而調製咖啡飲料。
(配方例：碳酸飲料)
將上述綠茶飲料時所調製之混合物溶解於水中後，使用磷酸將pH值調整至3.8，各自適量加入抗氧化劑、香料、酸味料、甜味料、焦糖色素並貯藏約24小時。其間，適量添加碳酸氣體，然後，經由過濾/裝瓶/殺菌(於65℃以上加熱10分鐘)之步驟，而獲得碳酸飲料。
(配方例：綠茶飲料2)
由實施例1之培養液中單離出發酵兒茶素並進行乾燥後，與9倍量的糊精進行混合，調製發酵兒茶素混合物，在上述混合物及粉末茶中加入水並進行混合後，於121℃進行滅菌20分鐘而調製綠茶飲料。
從而，在本發明中，亦包含以下態樣。
〔1〕一種能量代謝亢進劑，其係以1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分。
〔2〕一種能量代謝亢進劑，其係以含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物作為有效成分。
〔3〕一種交感神經活動亢進劑，其係以1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分。
〔4〕一種交感神經活動亢進劑，其係以含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物作為有效成分。
〔5〕一種脂肪燃燒促進劑，其係以1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分。
〔6〕一種脂肪燃燒促進劑，其係以含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物作為有效成分。
〔7〕一種抗肥胖劑，其係以1-(3’,4’,5’-三羥基苯 基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分。
〔8〕一種抗肥胖劑，其係以含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物作為有效成分。
〔9〕一種體溫上升劑，其係以1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇作為有效成分。
〔10〕一種體溫上升劑，其係以含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物作為有效成分。
〔產業上之可利用性〕
本發明之能量代謝亢進用組成物、交感神經活動亢進用組成物、脂肪燃燒促進用組成物、抗肥胖用組成物、體溫上升用組成物係具有優異的能量代謝亢進作用、交感神經活動亢進作用、脂肪燃燒促進作用、抗肥胖(體重增加的抑制或體重的減少)作用、體溫上升作用，可期待例如體溫上升、虛冷性改善、抗肥胖、內臟脂肪減低、美容、新陳代謝促進、免疫賦活、抗疲勞、抗鬱等效果。此外，藉由本發明之製造方法所獲得之含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物係具有優異的能量代謝亢進作用、交感神經活動亢進作用、脂肪燃燒促進作用、體重增加的抑制或體重的減少作用、體溫上升作用，可期待例如體溫上升、虛 冷性改善、抗肥胖、內臟脂肪減低、美容、新陳代謝促進、免疫賦活、抗疲勞、抗鬱等效果。
【生物材料寄存】
Figure 105107201-A0202-12-0031-12
主張利用生物材料：
Figure 105107201-A0202-12-0031-13
須寄存生物材料者：
國外生物材料【格式請依：寄存國家、機構、日期、號碼順序註記】
1.日本；NPMD；2012/12/10；NITE BP-1479

Claims (12)

  1. 一種將組成物用於能量代謝亢進用組成物之用途，該組成物係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。
  2. 一種將組成物用於交感神經活動亢進用組成物之用途，該組成物係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。
  3. 一種將組成物用於脂肪燃燒促進用組成物之用途，該組成物係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。
  4. 一種將組成物用於抗肥胖用組成物之用途，該組成物係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。
  5. 一種將組成物用於體溫上升用組成物之用途，該組成物係含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇。
  6. 一種含有1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇之組成物之製造方法，其特徵為包含將茶萃取液以屬於戊糖乳酸桿菌(Lactobacillus pentosus)之菌進行發酵之步驟。
  7. 如請求項6之製造方法，其中，組成物中之1-(3’,4’,5’-三羥基苯基)-3-(2”,4”,6”-三羥基苯基)-丙-2-醇的含量為0.13mg/mL以上。
  8. 一種飲食品之製造方法，其特徵為使用藉由請求項 6或7之製造方法所獲得之組成物作為飲食品之原料。
  9. 如請求項8之製造方法，其中，飲食品係能量代謝亢進用。
  10. 一種飲食品，其係含有藉由請求項6或7之製造方法所獲得之組成物。
  11. 如請求項10之飲食品，其係能量代謝亢進用。
  12. 如請求項10或11之飲食品，其係附有起因於藉由請求項6或7之製造方法所獲得之組成物的機能標示。
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JP5568276B2 (ja) * 2009-10-21 2014-08-06 三井農林株式会社 カテキン代謝物の製造方法

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Junko Yokota, "The influence of Goishi tea on adipocytokines in obese mice", Food Chemistry, Vol. 138, No. 4, 2013, Pages 2210-2218.
Tanaka Takashi, "Isolation of 1,3-diphenylpropan-2-ols, identical to tea catechin metabolites produced by intestinal bacteria, and pyrogallol from Japanese post-fermented tea", Japanese Journal of Food Chemistry and Safety, Vol. 18, No. 1, 2011, Pages 6-11.
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