TWI672137B - 台灣原生種土肉桂以水解技術製備抗氧成分山奈酚的方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種由台灣原生種土肉桂經由水解方式得到活性成分山奈酚的方法，其中該萃取步驟係分為六步驟。其流程為將台灣原生種土肉桂碎片第一溶劑進行高溫萃取，過濾後得到一萃取液，並將該萃取液真空濃縮得到一濃縮萃取液，將濃縮萃取液加入一酸性物質，於40℃~60℃溫度下水解6~10小時，靜置15.5~16.5小時後，加入一鹼性物質中和，得到一水解液，過濾該水解液以第二溶劑洗下濾渣，隨後真空濃縮成浸膏，製得含有山奈酚成分之水解物。

Description

台灣原生種土肉桂以水解技術製備抗氧成分山奈酚的方法

本發明係關於植物萃取領域，特別指台灣原生種土肉桂萃取山奈酚的方法。

山奈酚(Kaempferol)是一種天然黃酮類化合物，存在於茶葉、西蘭花、翠雀草、金縷梅、葡萄柚、抱子甘藍、蘋果等植物中植源性物質。病理學研究已發現，山奈酚的攝取與降低許多疾病的發生率之間存在正相關，如癌症和心血管疾病等。大量臨床前研究表明，山奈酚和部分山奈酚苷具有廣泛的藥理活性，包括抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌、保護心臟、保護神經、抗糖尿病、抗骨質疏鬆、抗雌激素、抗焦慮、止痛和抗過敏等作用(J.M.Calderon-Montano,E.Burgos-Moron,C.Perez-Guerrero,M.Lopez-Lazaro,2011)。更有研究發現，山奈酚、槲皮素和楊梅素可降低吸菸者患胰腺癌的風險與降低肺癌的發生率。

然而，現今山奈酚的萃取技術仍有許多待改進之處。中國專利CN101845467A揭示一種山奈酚的提取方法，其中使用酵素將原料中的成分轉化為山奈酚，再使用揮發性高的有機溶劑(乙酸乙酯)萃取，然而因為有機溶劑為對人體有害之成分，在萃取過程中可能造成萃取者身體上的長期危害；而台灣專利號TWI352611揭示一種土肉桂葉類黃酮糖苷成分的萃取方 法，其中使用超臨界二氧化碳流體萃取、鹽水萃取、去除鹽成分，雖然類黃酮苷成分包含山奈苷，而且該前案無使用到乙酸乙酯萃取，但是其萃取成分是否確實包含山奈酚卻不得而知，加上其萃取過程複雜，可能需要耗費大量時間與金錢成本。

因此，提供一過程簡單且安全的萃取山奈酚方法為本領域所待解決的問題。

有鑑於此，本發明的目的即是為了提供一種簡便及安全的萃取方法，係由台灣原生種土肉桂萃取以水解方式將山奈苷轉化為山奈酚。

為了達成上述發明目的，本發明提供一種台灣原生種土肉桂萃取山奈酚的方法，該方法包含以下步驟。先將台灣原生種土肉桂碎片加入第一溶劑進行高溫萃取，過濾且真空濃縮後得到濃縮萃取液，將濃縮萃取液加入酸性物質，於40℃~60℃溫度下水解6~10小時，靜置14~18小時後，加入鹼性物質中和，得到一水解液，過濾該水解液以第二溶劑洗下濾渣，並真空濃縮成浸膏，製得含有山奈酚之水解物。

其中，第一溶劑為體積百分濃度40%~60%的乙醇；第二溶劑為體積百分濃度為92~98%的乙醇。又，酸性物質係選自係選自鹽酸、醋酸及硫酸所組成之群組；鹼性物質係選自碳酸氫鈉、過碳酸鈉及碳酸鈉所組成之群組。

為了達成上述發明目的，本發明提供一種台灣原生種土肉桂萃取物，其中該台灣原生種土肉桂萃取物含山奈酚5~10mg/g。

S1~S6‧‧‧步驟流程

圖1為以台灣原生種土肉桂萃取山奈酚之方法流程圖；圖2為標準品山奈苷及山奈酚之HPLC層析圖；圖3為台灣原生種土肉桂萃取物水解前之HPLC層析圖；圖4為台灣原生種土肉桂萃取物水解後之HPLC層析圖。

本說明書中所述之所有技術性及科學術語，除非另外有所定義，皆為該所屬專業人士領域可共同瞭解的意義。

如本文中所使用，術語“萃取物”係指藉由萃取作用所製備之產物。該萃取物可以溶於溶劑中之溶液形式呈現，或萃取物可為不含或大體上不含溶劑之濃縮物或精華呈現。如下文進一步所述，萃取物亦可調配於醫藥組合物或食品中。術語萃取物可為自特定萃取步驟或一系列萃取步驟獲得之單一萃取物，或萃取物亦可為自獨立萃取步驟獲得之萃取物的組合。因此，該等經合併之萃取物亦涵蓋於術語“萃取物”。

如本文所用“原料”通常係指植物原材料，包含單獨的整個植物或植物之一個或多個組成部分之組合，包含葉、根(包括但不限於主根、尾根、及纖維根)、莖、皮、漿果、種子、及花，其中該植物或組成部分可包含原始、經乾燥、經蒸煮、經加熱或以其他方式經物理加工以利於加工之材料，其可進一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式經加工以影響該植物材料之大小及實體完整性之材料。術語「原料」可用於表示用於額外萃取製程之材料來源之萃取產物。

本發明係以下面的實施例予以示範闡明，但本發明不受下 述實施例所限制。本發明所用之材料皆市售易於取得，下列僅為示例可取得之管道。

實施例1、台灣原生種土肉桂水解製程之方法

為萃取山奈酚，其中該萃取步驟如圖1所示。S1步驟為準備台灣原生種土肉桂；於S2步驟加入第一溶劑高溫萃取得到萃取液；再於S3步驟真空濃縮得到濃縮萃取液；S4步驟為加入酸性物質水解，再加入鹼性物質，得到水解液；S5步驟為過濾水解液並以第二溶劑洗下濾渣；再以S6步驟真空濃縮成浸膏，製得含有山奈酚之水解物。

在一較佳實施例中，準備一台灣原生種土肉桂，將該台灣原生種土肉桂碎片加入體積百分濃度為40%~60%的乙醇進行高溫萃取，所選高溫溫度為60℃~90℃，過濾後得到一萃取液，並將該萃取液真空濃縮得到一濃縮萃取液，將濃縮萃取液加入一酸性物質，於40℃~60℃溫度下水解6~10小時，靜置一段時間後，加入一鹼性物質中和，得到一水解液，過濾該水解液以體積百分濃度為70%~100%的乙醇洗下濾渣，隨後真空濃縮成浸膏，製得具山奈酚成分之水解物。

在一最佳實施例中，準備台灣原生種土肉桂枝葉，並秤重1公斤，加入乙醇，取用所述體積百分比50%的乙醇(EtOH)10L，於70℃下萃取4小時後，得到萃取液，將萃取液過濾去除濾渣，過濾後的濾液真空濃縮至1L，得到濃縮萃取液。

取前述的1L的濃縮萃取液，加入之酸性物質為鹽酸，所述12N鹽酸(HCl)43.75mL，於50℃下水解8小時，室溫下靜置16小時，並且加入鹼性物質進行中和，所述鹼性物質為碳酸氫鈉，以碳酸氫鈉44.1g中 和鹽酸(HCl)，得到水解液，過濾該水解液，以體積百分濃度為95%的乙醇洗下濾渣後，將過濾後的水解液真空濃縮成浸膏，並將浸膏冷凍乾燥後得到之產物即為含有山奈酚之水解物。

實施例2、台灣原生種土肉桂水解物之山奈酚含量分析

為了解藉由本案的台灣原生種土肉桂萃取方法萃取出之台灣原生種土肉桂水解產物是否含有山奈酚，於透過高效液相層析儀(high-performance liquid chromatograph,HPLC)分析台灣原生種土肉桂水解物之山奈酚含量。

在進行HPLC以前，須將樣品先處理，將台灣原生種土肉桂水解物102.4mg用無水甲醇溶解，定量至100mL，以0.45μm濾膜過濾。

在HPLC分析中，管柱為inertsil(250×4mm,5μm)，管柱溫度35℃；而移動相係以水(0.1% TFA)、乙腈(AeCN)和甲醇(MeOH)梯度沖提(其移動相梯度表如表一所示)；流速0.5mL/min；波長342nm；進樣量10μL。

圖2顯示標準品山奈苷(kaempferitrin)及山奈酚(kaempferol)的HPLC層析圖，其中山奈苷的停留時間(retention time,RT)為42.095分鐘； 山奈酚停留時間為61.952分鐘。圖3顯示台灣原生種土肉桂萃取物在水解前山奈苷的停留時間為41.777分鐘，山奈酚則未檢出；然而台灣原生種土肉桂萃取物在水解後，則出現了山奈酚反應，其山奈苷停留時間為41.917分鐘，而山奈酚的停留時間為61.940分鐘(如圖4所示)根據此圖3與圖4顯示的結果可知，山奈酚原本不存在於台灣原生種土肉桂的天然成分中，係透過本案的台灣原生種土肉桂萃取方法以水解方式將山奈苷轉化成山奈酚。而關於其水解率以及轉化率由以下公式計算之：

其中W₁為山奈苷水解後含量(mg/g)；W₀為山奈苷水解前含量(mg/g)；

其中W₀為山奈苷水解前含量(mg/g)；W₂為山奈酚水解後含量(mg/g)；286.23為山奈酚分子量；578.52為山奈苷分子量。

由實驗結果可知，取1公斤台灣原生種土肉桂(枝、葉)，經萃取後得產物乾重55.03克，水解後得產物乾重57.48克。由表二可知，台灣原生種土肉桂水解前山奈苷含量為26.1mg/g，水解後含量為5.9mg/g。水解後測得山奈酚含量為6.52mg/g。經上述算式計算，台灣原生種土肉桂萃取物水解後，山奈苷水解率為77.3%；山奈酚轉化率為50.4%。

綜上所述，本案的萃取方法將原本不存在於台灣原生種土肉桂山奈酚，透過水解步驟將台灣原生種土肉桂萃取物中的山奈苷轉化為山奈酚，過程中不須使用酵素進一步轉化、也不須使用有機溶劑乙酸乙酯萃取，其萃取步驟較現今的山奈酚萃取方法更安全、簡易。

以上所述之實施例僅係為說明本發明之技術思想及特點，其目的使熟習此項技藝人士能夠瞭解本發明之內容並據以實施，當不能以之限定本發明之專利範圍，即凡大依本發明所揭示之精神所作之均等變化或修飾，仍應涵蓋在本發明之專利範圍內。

Claims (10)

1. 一種台灣原生種土肉桂萃取山奈酚的方法，其係由以下步驟所製備而得：步驟一：準備一台灣原生種土肉桂；步驟二：加入一體積百分濃度為50%的乙醇進行70℃的高溫萃取，過濾後，得到一萃取液；步驟三：將該萃取液真空濃縮得到一濃縮萃取液；步驟四：將該濃縮萃取液加入一12N鹽酸，於50℃溫度下水解6~10小時，靜置一段時間後，加入一碳酸氫鈉中和，得到一水解液，；步驟五：過濾該水解液以一體積百分濃度為90%的乙醇洗下濾渣；步驟六：真空濃縮該水解液成浸膏，製得含有山奈酚成分之水解物。
2. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該台灣原生種土肉桂與該第一溶劑重量體積之比例為1：5~1：20。
3. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟一的高溫萃取時間為2~6小時。
4. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟一的較佳的高溫萃取時間為3.5~4.5小時。
5. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟二較佳的水解時間為7.5~8.5小時。
6. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟二的靜置時間為14~18小時。
7. 如申請專利範圍第11項所述之方法，其中步驟二較佳的靜置時間為15.5~16.5小時。
8. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該水解液與該第二溶劑之比例為 1：5~1：20。
9. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟三可將該浸膏進一步冷凍乾燥。
10. 一種台灣原生種土肉桂萃取物，係由申請專利範圍1~9中任一項之方法獲得，其中每1公斤台灣原生種土肉桂可以獲得該台灣原生種土肉桂萃取物54.6公克-60.4公克，其中每1公克該台灣原生種土肉桂萃取物中含山奈酚5~10毫克。