TWI631118B - 治療分枝桿菌疾病之組合療法 - Google Patents

治療分枝桿菌疾病之組合療法 Download PDF

Info

Publication number
TWI631118B
TWI631118B TW102125826A TW102125826A TWI631118B TW I631118 B TWI631118 B TW I631118B TW 102125826 A TW102125826 A TW 102125826A TW 102125826 A TW102125826 A TW 102125826A TW I631118 B TWI631118 B TW I631118B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
compound
formula
pharmaceutically acceptable
mycobacterium
pyrazinamide
Prior art date
Application number
TW102125826A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201418246A (zh
Inventor
克里斯多夫 菲利浦 樂奇
尤塞夫 拉費列 伯納尼
安 羅林 葛瑞洛
哈德溫 歐多
艾曼紐 裴洛拉
堤蘭 亞諾德 勒
保羅 查瑞弗森
Original Assignee
思沛羅三南公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 思沛羅三南公司 filed Critical 思沛羅三南公司
Publication of TW201418246A publication Critical patent/TW201418246A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI631118B publication Critical patent/TWI631118B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/132—Amines having two or more amino groups, e.g. spermidine, putrescine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4168—1,3-Diazoles having a nitrogen attached in position 2, e.g. clonidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/421—1,3-Oxazoles, e.g. pemoline, trimethadione
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本發明係關於式(I)化合物： 或其醫藥上可接受之鹽，其中X及R係如本文中所定義。該等式(I)化合物可用作用於治療細菌感染之旋轉酶(gyrase)及/或拓撲異構酶IV抑制劑。該等式(I)化合物擁有寬範圍之抗細菌活性及有利毒理學性質或係具有該活性之化合物之前藥。

Description

治療分枝桿菌疾病之組合療法
結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)係引起結核病(TB)之細菌，儘管已使用多藥物組合相對有效地進行治療，但其仍係世界上死亡之主要病因，此係由治療可及性之缺乏、HIV共感染及冗長治療時間所致。需要多種藥物之組合來預防藥物抗性之出現且有效治療感染。使用異菸肼(isoniazid)、利福平(rifampicin)、吡嗪醯胺(pyrazinamide)及乙胺丁醇(ethambutol)或鏈黴素(streptomycin)治療藥物敏感性TB。重要的係，存在許多與藥物有關之副效應，從而使得難以順從且較難耐受。舉例而言，在與利福平組合使用時，異菸肼在一些人中引起周邊神經系統病症且誘導嚴重肝功能障礙；利福平可引起肝功能障礙或肝臟疾病、不適、藥物過敏，且其與諸如HIV蛋白酶抑制劑等其他藥物之共同使用會因P450相關性酶誘導而受損。總而言之，耐受性仍係當前TB藥物治療方案之主要難題。
研發新藥物治療及藥物組合之復興工作已由醫療慈善事業及公私夥伴之協同努力所鼓舞。此外，儘管TB病例之總數量在大部分國家有所降低，但缺乏多藥物抗性(MDR-TB)及廣泛藥物抗性(XDR-TB)之治療可及性以及出現極端藥物抗性(XXDR-TB)或全藥物抗性(TDR-TB)引起關於當前控制措施之持久性之全球性問題。另外，仍存在極少可縮短藥物敏感性及藥物抗性TB感染之治療時間(當前分別為6個月 至兩年)之組合，此對於治療順從性及預防藥物抗性之出現始終至關重要。另外，當前用於臨床研發中之化合物具有機械學及化學冗餘且大部分藥物種類具有安全性缺陷，從而反映了大膽創新方式之缺乏。舉例而言，階段3臨床試驗中之兩種氟喹諾酮(fluroquinolone)不能解決XDR-TB之問題且可增大藥物抗性；已證實階段2臨床試驗中之三種噁唑啶酮不能縮短治療時間；且臨床研發中之兩種硝基咪唑可與一些前線治療藥物不相容。因此，總體而言，仍缺乏用於治療結核病之藥物候選者；參見WGND渠道，例如參照http：//www.newtbdrugs.org/pipeline.php。
因需要克服藥物抗性細菌及增加之可用藥物失效，故研究新抗生素之興趣有所復蘇。一種用於研發新抗生素之具有吸引力之策略係抑制DNA旋轉酶(gyrase)及/或拓樸異構酶IV，該等酶係DNA複製所需及由此細菌細胞生長及分裂所需之細菌酶。旋轉酶及/或拓樸異構酶IV活性亦與DNA轉錄、修復及重組中之事件有關。旋轉酶係一種拓樸異構酶，拓樸異構酶係催化DNA之拓樸異構體之互變之酶群(通常參見Kornberg及Baker，DNA Replication，第2d版，第12章，1992,W.H.Freeman and Co.；Drlica,Molecular Microbiology,1992,6,425；Drlica及Zhao，Microbiology and Molecular Biology Reviews,1997,61，第377-392頁)。旋轉酶自身控制DNA超螺旋並減輕在複製過程期間親代雙鏈之DNA鏈解開時出現之拓撲應力。旋轉酶亦催化鬆弛之閉合環狀雙鏈DNA向負超螺旋形式之轉化，此將更有利於重組。超螺旋反應之機制涉及旋轉酶圍繞DNA之一個區域纏繞，使該區域中之雙鏈斷裂，該DNA之第二區域穿過該斷裂，及再連結斷裂鏈。此一裂解機制係II型拓樸異構酶之特性。藉由ATP與旋轉酶之結合來驅動超螺旋反應。然後ATP在反應期間水解。此ATP結合及隨後水解使得在結合DNA之旋轉酶中發生其活性所需之構形變化。亦已發現，DNA超螺 旋(或鬆弛)之程度取決於ATP/ADP比率。在不存在ATP下，旋轉酶僅能夠鬆弛超螺旋DNA。
細菌DNA旋轉酶係由兩個A亞單位(GyrA)及兩個B亞單位(GyrB)組成之400千道耳頓(kilodalton)蛋白質四聚體。DNA之結合及裂解與GyrA有關，而藉由GyrB蛋白結合及水解ATP。GyrB係由具有ATPase活性之胺基-末端結構域及與GyrA及DNA相互作用之羧基-末端結構域組成。與之相比，真核II型拓樸異構酶係可鬆弛負超螺旋及正超螺旋但不能引入負超螺旋之同源二聚體。理想地，基於抑制細菌DNA旋轉酶及/或拓樸異構酶IV之抗生素可選擇用於該等酶且其對於真核II型拓樸異構酶係相對惰性。
拓撲異構酶IV主要在DNA複製結束時解開連接之染色體二聚體。
廣泛使用之喹諾酮(quinolone)抗生素抑制細菌DNA旋轉酶(GyrA)及/或拓樸異構酶IV(ParC)。喹諾酮之實例包含早期化合物(例如萘啶酸(nalidixic acid)及奧索利酸(oxolinic acid))以及後來之更強力氟喹諾酮(例如諾氟沙星(norfloxacin)、環丙沙星(ciprofloxacin)及曲伐沙星(trovafloxacin))。該等化合物與GyrA及/或ParC結合並穩定裂解之複合物，由此抑制總體旋轉酶功能並導致細胞死亡。氟喹諾酮抑制旋轉酶(GyrA)及/或拓樸異構酶IV(Par C)之催化亞單位(參見Drlica及Zhao，Microbiology and Molecular Biology Reviews,1997,61,377-392)。然而，亦將藥物抗性視為此類化合物之問題(WHO報導，「Use of Quinolones in Food Animals and Potential Impact on Human Health」,1998)。如同其他種類之抗生素，在使用喹諾酮時，暴露於較早化合物之細菌通常對於相同種類中之更強力化合物快速產生交叉抗性。負責經由ATP水解供應酶之催化轉換/復位所需之能量之有關亞單位分別係GyrB(旋轉酶)及ParE(拓撲異構酶IV)(參見Champoux,J.J.,Annu. Rev.Biochem.,2001,70，第369-413頁)。靶向GyrB及ParE亞單位中之該等相同ATP結合位點之化合物可用於治療各種細菌感染(參見Charifson等人，J.Med.Chem.,2008,51，第5243-5263頁)。
存在較少與GyrB結合之已知抑制劑。實例包含香豆素(coumarin)、新生黴素(novobiocin)及香豆黴素A1(coumermycin A1)、環噻利丁(cyclothialidine)、西諾丁(cinodine)及殺郭蟲菌素(clerocidin)。香豆素已展示極其緊密地結合至GyrB。舉例而言，新生黴素與蛋白質及若干疏水性觸點構成氫鍵網絡。儘管新生黴素及ATP似乎在ATP結合位點內結合，但該兩種化合物之結合取向具有最小重疊。重疊部分係新生黴素之糖單元及ATP腺嘌呤(Maxwell,Trends in Microbiology,1997,5,102)。
對於香豆素抗性細菌而言，大部分常見點突變位於結合至香豆素環之羰基之表面精胺酸殘基(大腸桿菌(E.coli)GyrB中之Arg136)處。儘管具有此突變之酶展示較低超螺旋及ATPase活性，但其亦對於香豆素藥物抑制較不敏感(Maxwell,Mol.Microbiol.,1993,9,681)。
儘管香豆素係旋轉酶超螺旋之強力抑制劑，但其尚未廣泛用作抗生素。其通常因低細菌滲透性、真核毒性及較差水溶性而並不適宜(Maxwell,Trends in Microbiology,1997,5,102)。期望克服該等缺點且較佳地其活性並不依賴於與Arg136之結合之新有效GyrB及ParE抑制劑。此一抑制劑將成為具有吸引力之抗生素候選者，且並無困擾其他種類抗生素之抗性問題史。
因對於抗生素之細菌抗性已變為重要之公共健康問題，故持續需要研發更新且更強力之抗生素。更特定而言，需要代表先前並未用於治療細菌感染之新化合物種類之抗生素。靶向GyrB(旋轉酶)及ParE(拓撲異構酶IV)亞單位中之ATP結合位點之化合物可用於治療各種細菌感染。該等化合物尤其可用於治療醫院(其中抗性細菌之形成 及傳播變得愈加普遍)中之院內感染。另外，需要具有廣譜活性以及有利毒理學性質之新抗生素。
本發明係關於控制、治療分枝桿菌疾病或減小其發展、嚴重性或效應之方法，其包括向有需要之患者投與治療有效量之下式之旋轉酶及/或拓撲異構酶IV抑制劑： 其中R係氫或氟；X係氫、-PO(OH)2、-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係醫藥上可接受之單價陽離子；且D2+係醫藥上可接受之二價陽離子；或其醫藥上可接受之鹽；該化合物可與一或多種抗生素化合物進行組合，該一或多種抗生素化合物包括：二芳基喹諾酮(diarylquinolone)、利福噴汀(rifapentine)、利福拉齊(rifalazil)、硝基咪唑、苯并噻嗪酮、卷麯黴素(capreomycin)、氯法齊明(clofazimine)、環絲胺酸(cycloserine)、胺苯碸(dapsone)、硫脲(thiocarbamide)、乙胺丁醇、DC-159a、硝基苯并噻唑、蘇特唑利德(sutezolid)(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(posizolid)(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、己尿啶黴素(capuramycin)、卡普拉哲核苷(caprazene nucleoside)、異噻唑并喹諾酮(isothiazoloquinolone)、硫利達嗪(thioridazine)、縮胺硫胺 (thiacetazone)、地紅黴素(dirithromycin)、羅紅黴素(roxithromycin)、泰利黴素(telithromycin)、阿奇黴素(azithromycin)、克拉黴素(clarithromycin)、紅黴素(erythromycin)、阿米卡星(amikacin)、卡那黴素(kanamycin)、鏈黴素、左氧氟沙星(levofloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、利奈唑胺(linezolid)、利福拉齊、美羅培南(meropenem)、克拉維酸鹽(clavulanate)或異菸肼，前提係在一或多種抗生素化合物係硫利達嗪、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼時，則其他抗生素亦存在於組合中。
在一實施例中，一或多種抗生素化合物包括貝達喹啉(bedaquiline)(TMC-207)、地拉米德(delaminid)(OPC67683)、PA 824、TBA-354、SKLB-TB37、BTZ-043、SQ-641、環絲胺酸、胺苯碸、乙硫異菸胺(ethionamide)、丙硫異菸胺(prothionamide)、對胺基水楊酸、CPZEN45、ACH-702或ACH-710。在另一實施例中，一或多種抗生素化合物包括貝達喹啉、利福噴汀、莫西沙星、利奈唑胺、地拉米德或PA 824。在再一實施例中，一或多種抗生素化合物包括莫西沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽、吡嗪醯胺或異菸肼。在一些實施例中，組合進一步包括吡嗪醯胺。
在一實施例中，分枝桿菌疾病係由以下細菌引起：結核分枝桿菌、胞內禽型分枝桿菌(M.avium intracellulare)、潰瘍分枝桿菌(M.ulcerans)、堪薩斯分枝桿菌(M.kansasii)、偶發分枝桿菌(M.fortuitum)、膿腫分枝桿菌(M.abcesses)、麻風分枝桿菌(M.leprae)、非洲分枝桿菌(M.africanum)、海洋分枝桿菌(M.marinum)、禽型副結核分支桿菌(M.avium paratuberculosis)、或牛分枝桿菌(M.bovis)、龜分枝桿菌(M.chelone)、瘰癧分枝桿菌(M.scrofulaceum)、蟾分枝桿菌 (M.xenopi)、胞內分枝桿菌(M.intracellulare)或田鼠分枝桿菌(M.microti)。在再一實施例中，分枝桿菌疾病係結核病。在一些實施例中，將式(I)化合物與僅一種選自利福噴汀、TMC-207、SQ-109、硝基咪唑及噁唑啶酮之抗生素一起投與。
在一實施例中，本發明係關於抑制藥物敏感性及藥物抗性分枝桿菌細胞之生長之方法，其中分枝桿菌細胞係藥物敏感性及藥物抗性結核分枝桿菌、藥物抗性結核分枝桿菌、胞內禽型分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶發分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、麻風分枝桿菌、非洲分枝桿菌、海洋分枝桿菌、禽型副結核分支桿菌或牛分枝桿菌。
圖1係化合物12之兩個對稱獨立分子之熱橢圓體繪圖。
圖2係化合物23之兩個對稱獨立分子之熱橢圓體繪圖。
本發明係關於旋轉酶及/或拓撲異構酶IV抑制劑及其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素及視情況吡嗪醯胺之組合。
本發明提供有效治療及預防藉由微生物(包含但不限於分枝桿菌)引起之疾病之方法及組合物，其包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合。特定而言，本發明之方法及組合物有效抑制微生物結核分枝桿菌之生長。
如本文中所使用，術語「結核病」包括通常與藉由分枝桿菌物種(包括複合結核分枝桿菌)引起之感染有關之疾病狀態。術語「結核病」亦與藉由除結核分枝桿菌外之分枝桿菌(MOTT)引起之分枝桿菌感染有關。其他分枝桿菌物種包含胞內禽型分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶發分枝桿菌、龜分枝桿菌、麻風分枝桿菌、非洲分枝桿菌、及田鼠分枝桿菌、禽型副結核分支桿菌、胞內分枝桿菌、瘰癧分枝桿 菌、蟾分枝桿菌、海洋分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌。
本發明進一步提供可用於治療傳染病之方法及組合物，該傳染病包含但不限於結核病、麻風病、克羅恩氏病(Crohn's Disease)、獲得性免疫缺陷症候群、萊姆病(Lyme disease)、貓抓病、洛基山斑疹熱(Rocky Mountain Spotted Fever)及流感。
在一實施例中，一或多種抗生素化合物包括二芳基喹諾酮、利福噴汀、利福拉齊、硝基咪唑、苯并噻嗪酮、卷麯黴素、氯法齊明、環絲胺酸、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇、DC-159a、硝基苯并噻唑、蘇特唑利德(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、己尿啶黴素、卡普拉哲核苷、異噻唑并喹諾酮、硫利達嗪、縮胺硫胺、地紅黴素、羅紅黴素、泰利黴素、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼，前提係在一或多種抗生素化合物係硫利達嗪、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼時，則其他抗生素亦存在於組合中。
本發明組合可有效用於藉由傳染性有機體(包含分枝桿菌)引起之疾病。本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。
本發明之另一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之方法及組合物，該等組合物對分枝桿菌有機體之MIC值為50μM或更低。本發明之另一實施例包括對分枝桿菌有機體之MIC值為25μM或更低之組合物。本發明之又一實施例包括對分枝桿菌有機體之MIC值為12.5μM或更低之組合物。本發明之另一實施例包括對分枝桿菌有機體之MIC值為 5μM或更低之組合物。在本發明之另一實施例中，該等方法及組合物包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之HTS Luc活性為10%或更大之組合。
本發明涵蓋動物(包含但不限於人類)之治療。因此，本發明之一目標係提供用於治療及預防藉由分枝桿菌引起之疾病(例如結核病)之方法及組合物。
本發明之又一目標係提供用於治療及預防傳染病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物。
本發明之另一目標係提供用於治療及預防分枝桿菌疾病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物。
本發明之再一目標係提供用於治療及預防結核病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物。
本發明之另一目標係提供用於治療及預防結核病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物，其中該組合物具有50μM或更小之MIC值。
本發明之另一目標係提供用於治療及預防結核病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物，其中該組合物具有25μM或更小之MIC值。
本發明之另一目標係提供用於治療及預防結核病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物，其中該組合物具有12.5μM 或更小之MIC值。
本發明之再一目標係提供用於治療及預防結核病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物，其中該組合物具有5μM或更小之MIC值。
本發明之又一目標係提供用於治療及預防結核病之方法及組合物，其使用包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種抗生素藥劑及視情況吡嗪醯胺之組合之組合物，其中該組合物具有10%或更大之HTS/Luc活性。
本發明之又一目標係提供用於用以治療及預防分枝桿菌疾病之治療性調配物之組合物。
本發明之另一目標係提供用於用以治療及預防藉由分枝桿菌物種引起之分枝桿菌疾病之治療性調配物之組合物，該等分枝桿菌物種包括複合結核分枝桿菌、胞內禽型分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶發分枝桿菌、龜分枝桿菌、麻風分枝桿菌、非洲分枝桿菌、田鼠分枝桿菌、牛分枝桿菌BCG或牛分枝桿菌。
本發明之再一目標係提供用於治療或預防藉由偶發分枝桿菌、海洋分枝桿菌、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)及白色念珠菌(Candida albicans)引起之傳染病之組合物及方法。
如本文中所使用，術語「與……組合」及「組合」係指在一個治療中使用兩種或更多種藥劑，不管該等藥劑係存於單一調配物中抑或存於多個調配物中。術語「與……組合」及「組合」之使用並不限制投與治療藉由分枝桿菌引起之疾病之個體治療的順序。多種藥劑可同時或依序投與。第一治療可在涉及投與第二或第三治療之任一循環方案之前、同時、之後或期間投與患有藉由分枝桿菌引起之疾病或病 狀的個體。舉例而言，一種治療可在一或多種治療之前之以下時刻投與：5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週；或一種治療可在一或多種治療之後之以下時刻投與：5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週。該等治療包含(例如)投與具有式I之化合物與吡嗪醯胺及一或多種抗生素藥劑之組合。
如本文中所使用，術語「鹵素」意指F、Cl、Br或I。
除非另有所述，否則本文所繪示之結構亦意欲包含該結構之所有立體化學形式，亦即每一不對稱中心之R及S組態。因此，本發明化合物之單一立體化學異構體以及對映異構體及非對映異構體混合物屬於本發明範圍內。
本文亦包含式(I)化合物之同位素標記形式，其中一或多個原子由原子質量或質量數不同於自然界中通常發現之原子質量或質量數之原子代替。可納入本發明化合物中之同位素之實例包含氫、碳、氮、氧及氟之同位素，例如2H、3H、13C、14C、15N、18O及17O。該等同位素標記及穩定同位素標記之化合物可用作(例如)具有改良治療特徵之研究或診斷工具或旋轉酶及/或拓樸異構酶IV抑制劑。若適宜，則該等結構亦涵蓋化合物或鹽之兩性離子形式。
本發明之旋轉酶及/或拓撲異構酶IV抑制劑可由式(I)或其鹽代表： 其中R係氫或氟；X係氫、-PO(OH)2、-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係醫藥上可接受之單價陽離子；且D2+係醫藥上可接受之二價陽離子。該等式(I)化合物擁有寬範圍之抗細菌活性及有利毒理學性質或係具有該活性之化合物之前藥。
本發明之旋轉酶及/或拓撲異構酶IV抑制劑可由式(IA)或代表： 其中R係氫或氟。式(IA)化合物擁有寬範圍之抗細菌活性及有利毒理學性質。
本發明之旋轉酶及/或拓撲異構酶IV抑制劑可由式(IB)或代表： 其中X係-PO(OH)2、-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係醫藥上可接受之單價陽離子；且D2+係醫藥上可接受之二價陽離子。式(IB)化合物係化合物(R)-1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲之磷酸酯前藥，其擁有寬範圍之抗細菌活性及有利毒理學性質。
在一實施例中，式(I)化合物包含式(IC)化合物： 其中R係如上文所定義。
在另一實施例中，式(I)化合物包含如下文所闡述之式(ID)及(IE)化合物：
(R)-1-乙基-3-(5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲或其醫藥上可接受之鹽；及
(R)-1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲或其醫藥上可接受之鹽。除非另有所述，否則片語「式(I)化合物」意欲包含如本文所闡述由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之其他式。
式(IB)化合物係其母體化合物1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲之前藥。因此，在投與前藥後展現之活性主要係由存在源於前藥裂解之母體化合物所致。
本發明之其他目標提供一或多種抗生素化合物包括以下物質之實施例：二芳基喹諾酮、利福噴汀、利福拉齊、硝基咪唑、苯并噻嗪 酮、卷麯黴素、氯法齊明、環絲胺酸、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇、DC-159a、硝基苯并噻唑、蘇特唑利德(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、己尿啶黴素、卡普拉哲核苷、異噻唑并喹諾酮、硫利達嗪、縮胺硫胺、地紅黴素、羅紅黴素、泰利黴素、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼，前提係在一或多種抗生素化合物係硫利達嗪、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼時，則其他抗生素亦存在於組合中。在一實施例中，其他抗生素係吡嗪醯胺。
在一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括二芳基喹諾酮、利福噴汀、利福拉齊或硝基苯并噻唑之實施例。在另一態樣中，吡嗪醯胺亦可存在於組合中。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。在一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括硝基咪唑、苯并噻嗪酮、卷麯黴素、氯法齊明、環絲胺酸、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇、DC-159a或硝基苯并噻唑之實施例。在另一態樣中，吡嗪醯胺亦可存在於組合中。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括硝基咪唑、苯并噻嗪酮、卷麯黴素、氯法齊明、環絲胺酸、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇或DC-159a之實施例。在另一態樣中，吡嗪醯胺亦可存在於組合中。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括卷麯黴 素、氯法齊明、環絲胺酸、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇、DC-159a或硝基苯并噻唑之實施例。在另一態樣中，吡嗪醯胺亦可存在於組合中。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括二芳基喹諾酮、利福噴汀、利福拉齊、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇、DC-159a或硝基苯并噻唑之實施例。在另一態樣中，吡嗪醯胺亦可存在於組合中。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在另一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括以下物質之實施例：蘇特唑利德(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、己尿啶黴素、卡普拉哲核苷、異噻唑并喹諾酮、硫利達嗪、縮胺硫胺、地紅黴素、羅紅黴素、泰利黴素、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼，前提係在一或多種抗生素化合物係硫利達嗪、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼時，則其他抗生素亦存在於組合中。在另一態樣中，其他抗生素係吡嗪醯胺。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在另一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括蘇特唑利德(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、己尿啶黴素、卡普拉哲核苷、異噻唑并喹諾酮、縮胺硫胺、地紅黴素、羅紅黴素或泰利黴素之實施例。在另一 態樣中，吡嗪醯胺亦可存在於組合中。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在另一態樣中，本發明提供一或多種抗生素化合物包括硫利達嗪、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼之實施例。在另一態樣中，吡嗪醯胺亦可存在於組合中。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在一實施例中，一或多種抗生素包括貝達喹啉(TMC-207)、地拉米德(OPC67683)、PA 824、TBA-354、BTZ-043、SQ-641、環絲胺酸、胺苯碸、乙硫異菸胺、丙硫異菸胺、對胺基水楊酸、CPZEN45、ACH-702或ACH-710。
本發明之其他目標提供一或多種抗生素藥劑係吡嗪醯胺與莫西沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼之組合之實施例。
在另一實施例中，噁唑啶酮可為利奈唑胺、蘇特唑利德(PNU-100480)、2-噁唑啶酮、特力唑利德(torezolid)、泊西唑利德、依哌唑胺(eperezolid)、雷得唑來(radezolid)、AZD-5847或彼等闡述於美國專利第5981528號及第6605630號中者。
在另一實施例中，二芳基喹啉係貝達喹啉(TMC-207)。
在再一實施例中，硝基咪唑可為PA 824、地拉米德(OPC-67683)或TBA-354。
在再一實施例中，一或多種適用於本申請案之組合之抗生素包括貝達喹啉(TMC-207)、地拉米德(OPC67683)、PA 824、TBA-354、BTZ-043、SQ-641、環絲胺酸、胺苯碸、乙硫異菸胺、丙硫異菸胺、對胺基水楊酸、CPZEN45、ACH-702或ACH-710。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與TMC-207之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與利福噴汀之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與噁唑啶酮之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與硝基咪唑之組合之方法及組合物。在再一實施例中，硝基咪唑係地拉米德。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與SQ-109之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與TMC-207及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與利福噴汀及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與噁唑啶酮及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式 (I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與硝基咪唑及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在另一實施例中，硝基咪唑係地拉米德。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與吡嗪醯胺及SQ-109之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與TMC-207、SQ-109及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與克拉維酸鹽及美羅培南之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與利福噴汀、SQ-109及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與噁唑啶酮、SQ-109及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與硝基咪唑、SQ-109及吡嗪醯胺之組合之方法及組合物。在再一實施例中，硝基咪唑係地拉米德。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本發明之一實施例提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與克拉維酸鹽、美羅培南及SQ-109之組合之方法及組合物。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在另一實施例中，本發明提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與以下物質中之一或多者之組合之方法及組合物：縮胺硫胺、地紅黴素、羅紅黴素、泰利黴素、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素及左氧氟沙星。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在另一實施例中，本發明提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與吡嗪醯胺及一下物質中之一或多者之組合之方法及組合物：縮胺硫胺、地紅黴素、羅紅黴素、泰利黴素、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素及左氧氟沙星。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
在另一實施例中，本發明提供包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與吡嗪醯胺及以下物質中之一或多者之組合之方法及組合物：阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素及左氧氟沙星。在再一實施例中，式(I)化合物包含由式(I)(包含式(IA)、(IB)、(IC)、(ID)及(IE))涵蓋之化合物。
本文所用之術語「己尿啶黴素」係指可用於基於己尿啶黴素治 療細菌感染之抗生素種類。己尿啶黴素(通式C23H31O12N5)係藉由有效抵抗肺炎鏈球菌之灰色鏈黴菌(Streptomyces griseus)446-S3及恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis)ATCC 607產生之核苷抗生素且具有下列結構： 適用於本申請案之組合之己尿啶黴素之實例包含己尿啶黴素及己尿啶黴素類似物SQ-641。
如本文中所使用，術語「胺基香豆素(aminocoumarin)」係指藉由抑制涉及細菌中之細胞分裂之DNA旋轉酶發揮作用之抗生素種類。其衍生自鏈黴菌(Streptomyces)屬。胺基香豆素抗生素之實例包含新生黴素、氯新生黴素(cloroblocin)、香豆黴素、飛盧比星(ferulobiocin)、3-氯庫羅比星(3-chlorocoumarobiocin)及8'-去氯-3-氯庫羅比星(8'-dechloro-3-chlorocoumarobiocin)。適用於本發明組合之其他胺基香豆素包含彼等闡述於Li,S.M.及Heide L.Curr.Med.Chem.12：419-27(2005)及Friedman,M.等人，Biochem.,46：8462-71(2007)中者。
適用於本發明組合之異噻唑并喹諾酮包含ACH-710、ACH-702(闡述於Pucci,M.J.等人，Antimicrob.Agents Chemother.,55：2860-71(2011)中)及彼等揭示於美國申請公開案第2012/0114601號中者。
本文所用之術語「苯并噻嗪酮」係指基於結構： 或結構： 之化合物種類，其可用於治療分枝桿菌感染。適於本發明組合之苯并噻嗪酮之實例包含BTZ 043、SKLB-TB37及彼等揭示於EP 2468746及CN102276598中者。
適用於本發明組合之氯苯吩嗪(Riminophenazine)抗生素包含氯法齊明(B663)及B669。本文所用之術語「二芳基喹諾酮」係指可用於治療分枝桿菌之化合物種類且包含但不限於貝達喹啉(TMC-207)及R207910。貝達喹啉具有IUPAC名稱(1R,2S)-1-(6-溴-2-甲氧基-3-喹啉基)-4-二甲基胺基-2-(1-萘基)-1-苯基-丁烷-2-醇且可根據WO2004/011436及WO2006/125769中所揭示之方法來合成。
本文所用之術語「利福噴汀」係指可用於治療細菌感染之抗生素。利福噴汀之IUPAC名稱為乙酸(7S,9E,11S,12R,13S,14R,15R,16R,17S,18S,19E,21Z,26E)-26-{[(4-環戊基六氫吡嗪-1-基)胺基]亞甲基}-2,15,17,29-四羥基-11-甲氧基-3,7,12,14,16,18,22-七甲基-6,23,27-三側氧基-8,30-二氧雜-24-氮雜四環[23.3.1.14,7.05,28]三十-1(28),2,4,9,19,21,25(29)-七烯-13-基酯且其可在商業上購得(例如Sigma-Aldrich；目錄編號：R0533)。
本文所用之術語「利福平(rifampin或rifampicin)」係指可用於治療細菌感染之抗生素。利福平IUPAC名稱：乙酸(7S,9E,11S,12R,13S,14R,15R,16R,17S,18S,19E,21Z)-2,15,17,27,29-五羥基-11-甲氧基-3,7,12,14,16,18,22-七甲基-26-{(E)-[(4-甲基六氫吡嗪-1- 基)亞胺基]甲基}-6,23-二側氧基-8,30-二氧雜-24-氮雜四環[23.3.1.14.7.05.28]三十-1(28),2,4,9,19,21,25(29),26-八烯-13-基酯且其可在商業上購得(例如Fisher BioReagents(目錄編號：BP2679-1)或Sigma-Aldrich(目錄編號：R3501))。
下表提供一些適用於本申請案之組合之抗生素化合物之結構及來源。
對於式(I)化合物而言，劑量值介於約0.01mg/kg體重/天與約100mg/kg體重/天之間、較佳地介於0.5mg/kg體重/天與約75mg/kg體重/天之間及最佳地介於約1mg/kg體重/天與50mg/kg體重/天之間之活性成份化合物可用於單一療法中以用於預防及治療細菌感染。
通常，本發明之醫藥醫藥組合物每天投與約1次至5次，或另一選擇為以連續輸注形式投與。另一選擇為，可以脈動調配物形式投與本發明組合物。該投與可用作慢性或急性療法。可與載劑材料組合以產生單一劑型之活性成份的量應端視所治療主體及特定投與模式而有所變化。典型製劑含有約5%至約95%之活性化合物(w/w)。較佳地，該等製劑含有約20%至約80%之活性化合物。
在本發明組合物包括式(I)化合物及一或多種其他治療性或預防性藥劑之組合時，化合物及其他藥劑二者應以介於在單一療法方案中通常所投與劑量之約10%至80%之間之劑量值存在。
當患者病狀好轉時，若需要，則可投與維持劑量之本發明化合物、組合物或組合。隨後，可根據症狀將投與劑量或投與頻率或二者降低至可保持病狀好轉之程度，在症狀已減輕至期望程度時，應停止治療。然而，在產生任一復發或疾病症狀後，患者可能需要長期間歇治療。
如熟習此項技術者所瞭解，可能需要低於或高於彼等列舉於上文中之劑量的劑量。任一特定患者之具體劑量及治療方案應視各種因素而定，包含所用具體化合物之活性、年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、投與時間、排泄速率、藥物組合、疾病之嚴重性及病程及患者對疾病之部署及治療醫師之判斷。
根據另一實施例，本發明提供治療或預防細菌感染或疾病狀態之方法，其包括向患者投與本文所闡述任一化合物、醫藥組合物或組合之步驟。本文所用之術語「患者」意指動物，較佳係哺乳動物，且最佳係人類。
美國健康與人類服務部疾病控制與預防中心(The U.S.Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention)已公開用於治療結核病之推薦。Centers for Disease Control and Prevention.Treatment of Tuberculosis,American Thoracic Society,CDC,and Infectious Diseases Society of America.MMWR 2003；52(No.RR-11)：1-80，其如同完全闡述於本文中一般以引用方式併入本文中。在該推薦中，揭示各種用於治療TB之一線及二線藥物以及包含已知化合物之組合之推薦治療方案、用於成人及兒童之推薦間隔及劑量及總劑量範圍。此外，提供用於TB及活性、培養陰性肺TB及惰性TB之治療方案以及對於復發、治療失效及藥物抗性之管控。出於本發明目的，可將式(I)化合物作為一線或二線藥物添加至本文所闡述之具體治療方案中或替代治療方案中所列示組份中之一者。
所推薦治療方案在很大程度上係基於來自臨床試驗之證據且基於由美國公共健康服務中心(United States Public Health Service，USPHS)及美國傳染病學會(Infection Diseases Society of America，IDSA)研發之系統進行評定。該評定系統包含指示推薦強度之字母(A、B、C、D或E)及指示支持推薦之證據等級之羅馬數字(I、II或III)(表2)。
存在4種用於治療由藥物敏感性有機體引起之TB患者之推薦方案，如2003指導文件中所闡述。每一方案皆具有2個月之初始階段，隨後選擇用於4或7個月持續階段之若干選項。所推薦方案以及由方案所指定之劑量數闡述於表3中。初始階段由數字(1、2、3或4)表示且與初始階段相關之持續階段由數字加字母符號(a、b或c)表示。藥物劑量展示於表4、5及6中。
表2a-基於證據等級之治療推薦強度之美國傳染病學會/美國公共健康服務中心評定系統
兩次]持續階段。
¶總是藉由DOT給予每週5天之投與。5天/週方案之評定係AIII。
#並不推薦用於CD4+細胞計數<100個細胞/μl之HIV感染患者。
**選項1c及2b應僅用於在完成2個月療法時具有陰性唾液塗片且在初始初始胸片中並不具有空泡之HIV陰性患者(參見正文)。對於始於此方案且發現自2個月樣品具有陽性培養物之患者而言，治療應再延長3個月。
知。
§§並未批准在兒童及青少年中長期(長於數週)使用加替沙星，此乃因具有關於骨及軟骨生長之效應問題。最佳劑量未知。
術語「前藥」係指作為藥物前體之化合物，其在投與及吸收後在活體內經由一些代謝過程釋放藥物。一般而言，前藥之生物活性小於其母體藥物。前藥亦可改良母體藥物之物理性質及/或其亦可改良總體藥物效能，例如藉由控制其吸收、血液濃度、代謝分佈及細胞攝取來減小藥物之毒性及不期望效應。
術語「母體化合物」或「母體藥物」係指經由代謝或分解代謝過程之酶作用或經由在投與前藥後之化學過程釋放之生物活性實體。母體化合物亦可為用於製備其相應前藥之起始材料。
由M+定義之單價陽離子包含銨、鹼金屬離子(例如鈉離子、鋰離子及鉀離子)、二環己基胺離子及N-甲基-D-葡萄糖胺離子。由D2+定義之二價陽離子包含鹼土金屬離子，例如鋁離子、鈣離子及鎂離子。亦包含胺基酸陽離子，例如精胺酸、離胺酸、鳥胺酸等之離子。若M+係單價陽離子，則應認識到，若存在定義2M+，則每一M+可相同或不同。此外，類似地，應認識到，若存在定義2M+，則可代之以存在二價陽離子D2+。另外，可使用諸如以下試劑將鹼性含氮基團四級銨化：低碳烷基鹵化物，例如甲基、乙基、丙基及丁基之磷化物、溴化物及碘化物；硫酸二烷基酯，例如二甲基、二乙基、二丁基、二戊基之硫酸酯；長鏈鹵化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂基之氯化物、溴化物及碘化物；芳烷基鹵化物，例如苄基溴及其他。
本發明之各種實施例包含如下文所闡述之式(IB)之化合物或鹽：(1)X係以下基團之化合物：(a)-PO(OH)O-M+；(b)-PO(O-)2˙2M+；或(c)-PO(O-)2˙D2+；(2)M+係以下基團之化合物：(a)Li+、Na+、K+、N-甲基-D-葡萄糖胺或N(R9)4 +；或(b)Na+；(c)每一R9獨立地係氫或C1-C4烷基；(3)D2+係以下基團之化合物：(a)Mg2+、Ca2+及Ba2+；或(b)Ca2+；(4)化合物磷酸(R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基酯；及(5)化合物(R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基磷酸二鈉。
應理解，可根據上文(1)至(3)中所列示替代實施例中之一或多者之需要來選擇式(IB)之化合物或鹽的各種替代實施例。舉例而言，可藉由組合以下各項來獲得本發明之其他實施例：(1)(a)及(2)(a)；(1)(a)及(2)(b)；(1)(c)及(3)(a)；(1)(c)及(3)(b)；(1)(b)及(2)(a)；(1)(b)及(2)(b)；及諸如此類。
本發明之前藥之特徵在於格外高之水溶性。此溶解性促進較高劑量前藥之投與，從而在每單位劑量中得到較大藥物載量。
「醫藥上可接受之衍生物或前藥」意指本發明化合物之任一醫藥上可接受之鹽、酯、酯鹽或其他衍生物，其在投與接受者後能夠直接或間接提供本發明化合物或其抑制活性代謝物或殘餘物。尤其有益 之衍生物或前藥係彼等在將該等化合物投與哺乳動物時增加本發明化合物之生物可用性(例如藉由使經口投與之化合物更易於吸收至血液中)或相對於母體物質增強母體化合物至生物腔室(例如腦或淋巴系統)之遞送者。
本發明化合物之醫藥上可接受之前藥包含但不限於酯、胺基酸酯、磷酸酯、金屬鹽及磺酸酯。
本發明化合物之醫藥上可接受之鹽包含彼等源自醫藥上可接受之無機酸與鹼及有機酸與鹼者。適宜酸鹽之實例包含乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、雙葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、羥乙酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、已酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。其他酸(例如草酸)儘管自身並非醫藥上可接受，但亦可用於製備在本發明化合物及其醫藥上可接受之酸加成鹽之獲得中用作中間體的鹽。
衍生自適宜鹼之鹽包含鹼金屬(例如鈉及鉀)鹽、鹼土金屬(例如鎂)鹽、銨鹽及N+(C1-4烷基)4鹽。本發明亦構想本文所揭示化合物之任一鹼性含氮基團之四級銨化作用。藉由該四級銨化作用，可獲得水或油可溶性或可分散性產物。
本發明之醫藥組合物包括式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。該等組合物可視情況包括其他治療劑。該等藥劑包含但不限於抗生素、抗發炎劑、基質金屬蛋白酶抑制劑、脂氧合 酶抑制劑、細胞激素拮抗劑、免疫阻抑劑、抗癌劑、抗病毒劑、細胞激素、生長因子、免疫調節劑、前列腺素或抗血管過度增生化合物。
術語「醫藥上可接受之載劑」係指可與本發明化合物一起投與患者且並不破壞其藥理學活性之無毒載劑。
可用於本發明之醫藥組合物中之醫藥上可接受之載劑包含但不限於離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(例如人類血清白蛋白)、緩衝物質(例如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠質二氧化矽、三矽酸鎂)、聚乙烯基吡咯啶酮、基於纖維素之物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、羊毛脂及自乳化藥物遞送系統(SEDDS)(例如α-生育酚、聚乙二醇1000琥珀酸酯)或其他類似聚合遞送基質)。
術語「醫藥有效量」或「治療有效量」係指治療或改善患者之細菌感染之有效量。術語「預防有效量」係指預防或實質上減弱患者之細菌感染之有效量。
下列定義闡述本文所使用之術語及縮寫：
實例1 2-(2-硝基苯基)-2,5-二氫呋喃及2-(2-硝基苯基)-2,3-二氫呋喃(3a及3b)之製備。
混合1-溴-2-硝基-苯(1)(600g,99%,2.941mol,Alfa Aesar A11686)、1,3-雙(二苯基膦基)丙烷(62.50g,97%,147.0mmol,Alfa Aesar A12931)、1,4-二噁烷(2.970L,Sigma-Aldrich 360481)、碳酸鉀(812.9g,5.882mol,JT-Baker 301201)及2,3-二氫呋喃(2)(1.041kg,99%,1.124L,14.70mol,Aldrich 200018)。使氮流鼓泡通過攪拌混合物4hr，隨後添加乙酸鈀(II)(16.51g,73.52mmol,Strem 461780)且繼續再去氧10分鐘。將反應混合物在回流及氮下攪拌過夜(經處理等分試樣之NMR展示芳基溴完全消耗)。將其冷卻，使用己烷(1L)稀釋，經由Florisil®短塞(500g，-200網目)過濾，並使用EtOAc洗脫。在減壓下濃縮濾液(2-(2-硝基苯基)-2,3-二氫呋喃在高真空下可揮發且可能在室溫下輕微不穩定)以得到暗褐色油狀物形式之(3a)及(3b)之混合物(654.0g)。將粗製材料儲存於冰箱中且未經進一步純化即繼續使用。
實例2 2-四氫呋喃-2-基-苯胺(4)之製備.
在氮下將5%碳載鈀(16.3g，50%濕潤，3.83mmol,Aldrich 330116)置於帕爾瓶(Parr bottle)中，隨後添加MeOH(100mL,JT-Baker 909333)。添加溶於MeOH(389mL)中之2-(2-硝基苯基)-2,5-二氫呋喃及2-(2-硝基苯基)-2,3-二氫呋喃(3a及3b))(163g)之粗製混合物，隨後添加NEt3(237.6mL,1.705mol,Sigma-Aldrich 471283)。將器皿置於帕爾振盪器上並使用H2使其達到飽和。添加30psi H2並振盪直至完全消耗為止(LCMS及NMR展示反應完成)。使用氮吹掃反應混合物，經由矽藻土TM(CeliteTM)過濾並使用EtOAc沖洗。在旋轉蒸發儀上濃縮濾液以得到褐色油狀物。以相同規模重複反應三次以上且合併 各批次以用於純化。將粗產物真空蒸餾(約15托)且在108-129℃下收集蒸餾物以得到透明微黃色油狀物(4)(427.9g，平均產率為84%；GCMS純度為98%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：163.95(1.46min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)：δ 7.15-7.04(m,2H),6.77-6.62(m,2H),4.85-4.77(m,1H),4.18(s,2H),4.12-4.02(m,1H),3.94-3.85(m,1H),2.25-1.95(m,4H)ppm。
實例2a (R)-2-(四氫呋喃-2-基)苯胺(4a)之製備.
將33g化合物(4)溶於MeOH(265ml)中以得到大約125mg/ml之濃度。經由0.2微米膜過濾器過濾混合物，然後在對掌性Pak® IC管柱(30mm×150mm，管柱溫度：35℃，Chiral Technologies)上於100巴下使用Berger multigram超臨界流體層析系統實施層析。流動相係(90：10)CO2：CH3OH，以350ml/min洗脫且在220奈米下進行UV監測。獲得15.64g綠色油狀物形式之期望產物(4a)。分析型SFC([90：10]CO2：CH3OH，5ml/min，在ChiralPak IC管柱(4.6×100mm)上，保持於35℃下並在100巴壓力下運行，且在220nm下進行UV監測)展示95.5%對映異構體過量以及95%總純度。
實例3 4-溴-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(5)之製備.
向存於甲基第三丁基醚(MTBE,641.4mL)及乙腈(213.8mL)中且冷卻至2℃之2-四氫呋喃-2-基-苯胺(4)(53.45g,327.5mmol)之攪拌溶液中分4份添加N-溴琥珀醯亞胺(58.88g,99%,327.5mmol,Aldrich B81255)，同時將內部溫度維持於約8℃以下。攪拌反應混合物同時使用冰-水浴冷卻30分鐘(經處理等分試樣之NMR展示起始材料完全消耗)。添加1N Na2S2O3水溶液(330mL)，去除冷浴並攪拌20分鐘。使用EtOAc稀釋混合物且分離各層。使用NaHCO3飽和水溶液(2×)、水、鹽水洗滌有機相，藉由MgSO4乾燥，經由二氧化矽短塞過濾，使用EtOAc洗脫，並在減壓下濃縮以得到極暗琥珀色油狀物(5)(82.25g，HPLC純度為77-94%)。其未經進一步純化即使用。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：242.10(2.89min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.22(d,J=2.3Hz,1H),7.16(dd,J=8.4,2.3Hz,1H),6.54(d,J=8.4Hz,1H),4.79-4.73(m,1H),4.15(s,2H),4.10-4.01(m,1H),3.93-3.85(m,1H),2.26-2.13(m,1H),2.12-1.97(m,3H)ppm。
實例4 N-(4-溴-2-硝基-6-四氫呋喃-2-基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醯胺(6)之製備.
經由加料漏斗在約15分鐘內(反應溫度升至14℃)，向在2℃下攪 拌之三氟乙酸酐(455.3mL,3.275mol,Sigma-Aldrich 106232)中緩慢添加稠油狀物形式之4-溴-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(5)(79.29g,327.5mmol)。使用無水2-甲基四氫呋喃(39.6mL,Sigma-Aldrich 414247)將剩餘油狀物沖洗至反應混合物中。去除冷浴且添加硝酸銨(34.08g,425.8mmol,Aldrich 467758)。經約30分鐘將反應溫度升至40℃，此時使用冷水浴控制放熱且使反應達到室溫。然後去除冷浴並再繼續攪拌40分鐘(HPLC展示極少剩餘非硝化材料)。將反應混合物緩慢傾倒至碎冰(800g)之攪拌混合物中。藉由過濾收集固體沈澱物，使用水、NaHCO3飽和水溶液(至pH 8)、水(再次)及己烷洗滌。將濕潤固體首先在50℃下於對流烘箱中乾燥若干小時且然後在減壓及40℃下於烘箱中乾燥過夜以得到淺褐色固體(6)(77.86g，產率為62%；HPLC純度為98%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：383.19(3.27min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 9.81(s,1H),8.08(d,J=2.2Hz,1H),7.73(d,J=2.2Hz,1H),4.88(dd,J=9.0,6.5Hz,1H),4.17-4.08(m,1H),4.03-3.95(m,1H),2.45-2.34(m,1H),2.17-2.06(m,2H),1.96-1.83(m,1H)ppm。
實例5 4-溴-2-硝基-6-四氫呋喃-2-基-苯胺(6a)之製備.
將N-(4-溴-2-硝基-6-四氫呋喃-2-基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醯胺(6)(54.00g,140.9mmol)溶於1,4-二噁烷(162mL)中並添加6M NaOH水溶液(70.45mL,422.7mmol,JT-Baker 567202)。將反應混合物在回流下 攪拌2天(HPLC展示完全轉化)，將其冷卻，使用MTBE(800mL)稀釋，使用水(2×200mL)、NH4Cl飽和水溶液、水及鹽水洗滌。藉由MgSO4乾燥混合物，過濾，並在減壓下濃縮以得到暗琥珀色油狀物(6a)(40.96g，產率為93%；HPLC加NMR總純度為92%)。LCMS(C18管柱，經3-5分鐘使用10-90% MeOH/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：287.28(3.44min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.24(d,J=2.4Hz,1H),7.41(d,J=2.3Hz,1H),6.91(s,2H),4.80(t,J=7.2Hz,1H),4.14-4.05(m,1H),3.98-3.90(m,1H),2.36-2.19(m,1H),2.15-2.01(m,3H)ppm。
實例6 2-[5-(4-胺基-3-硝基-5-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(8)之製備.
混合4-溴-2-硝基-6-四氫呋喃-2-基-苯胺(6a)(40.40g,92%,129.5mmol)、1,4-二噁烷(260mL,Sigma-Aldrich 360481)、2-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(7)(41.05g,155.4mmol)及2.7M Na2CO3水溶液(143.9mL,388.5mmol)。使氮流鼓泡通過攪拌混合物1hr，隨後添加四(三苯基膦)鈀(0)(7.48g,6.47mmol,Strem 462150)。將反應混合物在回流下攪拌2hr(HPLC展示完全反應)，將其冷卻，使用EtOAc稀釋，使用水、NH4Cl飽和水溶液、鹽水洗滌，藉由MgSO4乾燥，並經由使用EtOAc洗脫之Florisil®短塞過 濾。在減壓下濃縮濾液以得到暗褐色油狀物。溶於CH2Cl2中並經由矽膠短塞使用CH2Cl2洗脫且然後使用EtOAc洗脫。在旋轉蒸發儀上濃縮期望部分直至形成沈澱物為止以得到稠褐色漿液，使用MTBE研磨該稠褐色漿液。藉由過濾收集固體，使用MTBE洗滌，並在高真空下乾燥以得到黃色固體(8)(35.14g，HPLC純度為99+%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：345.00(2.69min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.88(s,2H),8.36(d,J=2.2Hz,1H),7.56(d,J=2.1Hz,1H),7.09(s,2H),4.92(t,J=7.2Hz,1H),4.62(s,1H),4.20-4.11(m,1H),4.03-3.94(m,1H),2.39-2.26(m,1H),2.23-2.08(m,3H),1.64(s,6H)ppm。進一步濃縮濾液並藉由使用0-80% EtOAc/己烷洗脫之ISCO矽膠層析純化以得到琥珀色固體形式之第二批產物(8)(4.46g，總產率為88%；HPLC純度為88%)。
實例7 2-[5-(4-胺基-3-硝基-5-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(8)之替代製備.
混合N-(4-溴-2-硝基-6-四氫呋喃-2-基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醯胺(6)(19.00g,49.59mmol)、2-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(7)(14.41g,54.55mmol)、2.7M碳酸鈉水溶液(73.48mL,198.4mmol)及1,4-二噁烷(190mL,Sigma-Aldrich 360481)。使氮流鼓泡通過攪拌混合物40分鐘，隨後添加1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀二氯甲烷加合物(2.025g,2.480mmol,Strem 460450)。將反應混合物在回流及N2下攪拌7hr，再添加50mL碳酸鈉飽和水溶液，並再回流16hr。將混合物冷卻，然後使用EtOAc(500mL)及水(200mL)稀釋。分離各層並使用EtOAc(200mL)萃取水相。使用水(500mL)、鹽水(500mL)洗滌合併之有機相，藉由Na2SO4乾燥，經由Florisil®塞過濾，並在旋轉蒸發儀上濃縮以得到粗製橙色油狀物(8)。藉由使用20-90% EtOAc/己烷洗脫之ISCO矽膠層純化粗產物析以得到橙色固體(8)(15.00g，產率為87%；純度為81-88%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：345.35(2.68min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.88(s,2H),8.36(d,J=2.2Hz,1H),7.56(d,J=2.1Hz,1H),7.09(s,2H),4.92(t,J=7.2Hz,1H),4.62(s,1H),4.20-4.11(m,1H),4.03-3.94(m,1H),2.39-2.26(m,1H),2.23-2.08(m,3H),1.64(s,6H)ppm。
實例8 2-[5-(3,4-二胺基-5-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(9)之製備.
在氮下於帕爾瓶中，向2-[5-(4-胺基-3-硝基-5-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(8)(30.10g,87.41mmol)及THF(90mL)之懸浮液中添加存於MeOH(90mL,JT-Baker 909333)中之5%碳載鈀(3.01g，50%濕潤，0.707mmol，Aldrich 330116)之漿液，隨後添加NEt3 (24.37mL,174.8mmol,Sigma-Aldrich 471283)。將器皿置於帕爾振盪器上並使用H2使其達到飽和。添加45psi H2並振盪直至完全消耗為止(HPLC展示完全轉化)。使用氮吹掃反應混合物，經由矽藻土TM過濾並使用EtOAc沖洗。經由夾於兩張P5紙之間之0.5微米玻璃纖維過濾紙再過濾濾液，並在減壓下濃縮以得到淺褐色發泡體(9)(28.96g，產率為98%；NMR純度為93%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：315.32(1.54min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.83(s,2H),6.92(d,J=1.8Hz,1H),6.88(d,J=1.8Hz,1H),4.90(dd,J=7.9,6.2Hz,1H),4.72(s,1H),4.18(s,2H),4.17-4.08(m,1H),3.99-3.89(m,1H),3.46(s,2H),2.34-2.19(m,1H),2.17-2.05(m,3H),1.63(s,6H)ppm。
實例9 1-乙基-3-[5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-四氫呋喃-2-基-1H-苯并咪唑-2-基]脲(11)之製備.
向存於1,4-二噁烷(160.5mL,Sigma-Aldrich 360481)中之2-[5-(3,4-二胺基-5-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(9)(32.10g,102.1mmol)之攪拌溶液中添加pH 3.5緩衝劑(240.8mL)，該緩衝液係藉由將NaOAc三水合物(34.5g)溶於1N H2SO4水溶液(240mL)中製得。添加1-乙基-3-(N-(乙基胺甲醯基)-C-甲基硫基-亞胺羰基)脲(10) (28.46g,122.5mmol,CB Research and Development)並在回流下攪拌過夜(HPLC展示起始二胺消耗99%)。將反應混合物冷卻至室溫並逐份傾倒(起泡)至NaHCO3飽和水溶液(480mL)及水(120mL)之攪拌溶液中以得到pH 8-9。將其攪拌30分鐘，藉由過濾收集固體，使用水充分洗滌至中性pH，且然後使用極少EtOH洗滌。在減壓下乾燥固體以得到灰白色固體(11)(34.48g，產率為82%；HPLC純度為99.4%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：411.41(1.73min)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ 9.02(s,2H),7.62(s,1H),7.37(s,1H),5.31(s,1H),4.23(dd,J=14.5,7.3Hz,1H),4.01(dd,J=15.0,7.1Hz,1H),3.38-3.28(m,2H),2.58-2.46(m,1H),2.16-2.05(m,2H),2.02-1.88(m,1H),1.63(s,6H),1.22(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
實例10 1-乙基-3-[5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(12)之對掌性層析分離.
在使用DCM/MeOH/TEA(60/40/0.1)在35℃下洗脫之CHIRALPAK® IC®管柱(Chiral Technologies)上拆分1-乙基-3-[5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-四氫呋喃-2-基-1H-苯并咪唑-2-基]脲(11)(24.60g)之外消旋試樣以得到白色固體形式之期望對映異構體 (12)(11.35g，產率為45%；HPLC純度為99+%，99+%對映異構體過量)。分析型對掌性HPLC之滯留時間為6.2min(CHIRALPAK® IC® 4.6×250mm管柱，1mL/min流速，30℃)。
藉由單晶x射線繞射分析證實12之結構及絕對立體化學。在配備有密封管Cu Kα源(Cu Kα放射，γ=1.54178Å)及Apex II CCD檢測器之Bruker Apex II繞射儀上獲取單晶繞射數據。選擇尺寸為1/2×0.05×0.05mm之晶體，使用礦物油清洗，安裝於MicroMount上並定中心於Bruker APEXII系統上。獲得在倒易空間中分離之3批40個框架以提供取向矩陣及初始晶胞參數。獲得最終晶胞參數並在完成數據收集之後基於全資料集進行精修。基於系統消光及強度統計學，在離心P21空間群中拆分及精修結構。
使用0.5°步長以0.9Å之解析度使用60s暴露獲得每一框架中倒易空間之繞射數據集合在100(2)K下收集數據。使用APEXII軟體對強度進行積分並精修晶胞參數在數據收集之後，觀察到晶體並未展示分解跡象。如圖1中所展示，在結構中存在兩個對稱獨立性分子且該兩個對稱獨立性分子皆係R異構體。
收集數據，使用Apex II軟體進行精修並簡化。使用SHELXS97(Sheldrick,1990)程式拆分結構且使用SHELXL97(Sheldrick,1997)程式精修結構。晶體展示具有P21空間群之單斜晶胞。晶格參數為a=9.8423(4)Å，b=10.8426(3)Å，c=19.4441(7)Å，β=102.966(3)°。體積=2022.09(12)Å3。
實例11 1-乙基-3-[5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(13)之甲烷磺酸鹽之製備.
使用冰-水浴冷卻存於無水乙醇(93.2mL)中之1-乙基-3-[5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(12)(9.32g,22.71mmol)之攪拌懸浮液。添加甲烷磺酸(1.548mL,23.85mmol,Sigma-Aldrich 471356)，去除冷浴並在室溫下攪拌20分鐘。將其在35℃下於旋轉蒸發儀上濃縮至稠漿液，使用EtOAc稀釋，藉由過濾收集固體，使用EtOAc洗滌，並在減壓下乾燥以得到初始批白色固體(13)(8.10g)。在旋轉蒸發儀上濃縮濾液以得到黃色玻璃狀發泡體，將其溶於EtOH中，濃縮至固體漿液，使用EtOAc/Et2O研磨，並藉由過濾收集。使用EtOAc/Et2O洗滌固體，與第一批合併，並在減壓下乾燥以得到白色固體(13)(9.89g，產率為86%；HPLC純度為99+%，99+%對映異構體過量)。分析型對掌性HPLC展示一種對映異構體且滯留時間為6.3min(使用DCM/MeOH/TEA(60/40/0.1)洗脫，在CHIRALPAK® IC® 4.6×250mm管柱上，使用1mL/min流速，在30℃下)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：411.53(1.74min)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ 9.07(s,2H),7.79(s,1H),7.62(s,1H),5.30(t,J=7.3Hz,1H),4.24(dd,J=14.6,7.3Hz,1H),4.04(dd,J=15.0,7.6Hz,1H),3.40-3.30(m,2H),2.72(s,3H),2.65-2.54(m,1H),2.20-2.07(m,2H),2.04-1.90(m,1H),1.64(s,6H),1.23(t,J= 7.2Hz,3H)ppm。
實例12 2-(2-氟-6-硝基-苯基)-2,3-二氫呋喃(15A)及2-(2-氟-6-硝基-苯基)-2,5-二氫呋喃(15B)之製備.
將2-溴-1-氟-3-硝基-苯(14)(200.3g,98%,892.3mmol,Bosche F6657)、1,4-二噁烷(981.5mL,Sigma-Aldrich 360481)及2,3-二氫呋喃(2)(341.1mL,99%,4.462mol,Aldrich 200018)裝填於反應燒瓶中，隨後裝填N,N-二異丙基乙基胺(155.4mL,892.3mmol,Sigma-Aldrich 550043)及溴(三-第三丁基膦)鈀(I)二聚體(6.936g,8.923mmol,Johnson Matthey C4099)。將混合物在回流下攪拌2hr(HPLC展示98%之起始芳基溴消耗掉)。將其冷卻，藉由過濾去除沈澱物，使用EtOAc沖洗，並在真空中將濾液濃縮成暗紅褐色半固體油狀物。將此油狀物溶於CH2Cl2中，經由二氧化矽塞使用CH2Cl2洗脫，並在真空中濃縮以得到15A及15B之暗琥珀色油狀物形式之混合物(291.3g)。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟。主要產物係2-(2-氟-6-硝基-苯基)-2,3-二氫呋喃(15A)(96%)：LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：210.23(3.13min)；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.54(dt,J=8.0,1.2Hz,1H),7.43(td,J=8.2,5.2Hz,1H),7.32(ddd,J=9.7,8.3,1.3Hz,1H),6.33(dd,J=4.9,2.4Hz,1H),5.80(t,J=10.9Hz,1H),5.06(q,J=2.4Hz,1H),3.18-3.07(m,1H),2.94-2.82(m,1H)ppm。次要產物係2-(2-氟-6-硝基-苯基)-2,5-二氫呋喃(15B)(4%)：GCMS(Agilent HP-5MS，30m×250μm×0.25μm管柱，在60℃下加熱2min，在15min內加熱至300℃，使用1 mL/min之流速)M+1：210(11.95min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.47(d,J=8.0Hz,1H),7.43-7.34(m,1H),7.30-7.23(m,1H),6.21-6.15(m,1H),6.11-6.06(m,1H),5.97-5.91(m,1H),4.89-4.73(m,2H)ppm。
實例13 3-氟-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(16)之製備.
在氮下將5%碳載鈀(37.3g，50%濕潤，8.76mmol,Aldrich 330116)置於帕爾瓶中，隨後添加MeOH(70mL,JT-Baker 909333)。添加溶於MeOH(117mL)中之2-(2-氟-6-硝基-苯基)-2,3-二氫呋喃及2-(2-氟-6-硝基-苯基)-2,5-二氫呋喃(15A及15B)(186.6g,892.1mmol)之粗製混合物，隨後添加NEt3(124.3mL,892.1mmol,Sigma-Aldrich 471283)。將器皿置於帕爾振盪器上並使用H2使其達到飽和。在添加45psi H2後，振盪反應混合物直至起始材料完全消耗為止(HPLC及LCMS展示反應已完成)。使用氮吹掃反應混合物，經由矽藻土TM過濾並使用EtOAc沖洗。在旋轉蒸發儀上濃縮濾液以得到褐色油狀物，將該褐色油狀物溶於Et2O中並使用水(2×)洗滌。使用1N HCl水溶液(5×250mL)萃取乙醚相，使用Et2O(3×)洗滌且然後使用6N NaOH水溶液鹼化至pH 12-14。使用CH2Cl2(4×)萃取鹼性水相，並使用NH4Cl飽和水溶液洗滌合併之有機萃取物，藉由MgSO4乾燥，並經由使用CH2Cl2至25% EtOAc/己烷洗脫之二氧化矽墊過濾。在減壓下濃縮期望濾液以得到淺褐色油狀物16(121.8g，84%之GCMS加NMR純度)。GCMS(Agilent HP-5MS，30m×250μm×0.25μm管柱，在60℃下加熱2min，在15min內加熱至300℃，使用1mL/min之流速)M+1：182.0 (11.44min)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：182.10(2.61min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 6.97(td,J=8.1,6.3Hz,1H),6.43-6.35(m,2H),5.21-5.13(m,1H),4.54(s,2H),4.16-4.07(m,1H),3.90-3.81(m,1H),2.23-2.00(m,4H)ppm。如下所述獲得其他批次：使用NaHCO3飽和水溶液、鹽水洗滌合併之乙醚相，藉由Na2SO4乾燥，傾析，並在減壓下濃縮。將油狀物真空蒸餾(約15托)，在101-108℃下收集餾出物。在2℃下，向存於EtOH(1體積)中之蒸餾油狀物之攪拌溶液中緩慢添加存於iPrOH中之5M HCl(1當量)。使所得懸浮液達到室溫，使用EtOAc(3體積，vol/vol)稀釋，並攪拌2hr。藉由過濾收集白色固體，使用EtOAc洗滌，並在減壓下乾燥以得到第二批HCl鹽形式之產物。將母液濃縮成漿液，使用EtOAc稀釋並藉由過濾收集固體，使用EtOAc洗滌，並在真空中乾燥以得到HCl鹽作為第三批產物。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：182.10(2.58min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 10.73(br.s,3H),7.66(d,J=8.1Hz,1H),7.33(td,J=8.2,5.9Hz,1H),7.13-7.05(m,1H),5.26(dd,J=9.0,6.5Hz,1H),4.38-4.28(m,1H),4.00-3.91(m,1H),2.59-2.46(m,1H),2.30-1.95(m,3H)ppm。三批之總產率為76%。
實例14 4-溴-3-氟-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(17)之製備.
向存於甲基第三丁基醚(1.456L)及乙腈(485mL)中且冷卻至-20℃ 之3-氟-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(16)(131.9g,92%,669.7mmol)之攪拌溶液中分3份添加N-溴琥珀醯亞胺(120.4g,99%,669.7mmol,Aldrich B81255)，同時將反應溫度維持於約-15℃以下。在完成添加之後，在-15℃至-10℃下繼續攪拌30分鐘。經處理等分試樣之1H NMR展示96%之起始苯胺得以消耗，因此另外添加4.82g NBS並在-10℃下再攪拌30分鐘。向反應混合物中添加1N Na2S2O3水溶液(670mL)。去除冷浴，將混合物攪拌20分鐘，然後使用EtOAc稀釋。分離各層且使用NaHCO3飽和水溶液(2×)、水、鹽水洗滌有機相，藉由Na2SO4乾燥，傾析，並在減壓下濃縮以得到暗琥珀色油狀物。使用己烷稀釋殘餘物並經由使用25% EtOAc/己烷至50% EtOAc/己烷洗脫之短二氧化矽塞進行洗脫。在真空中濃縮期望濾液以得到暗琥珀色油狀物17(182.9g，產率為90%；NMR純度為86%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：260.12(3.20min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.15(dd,J=8.6,7.6Hz,1H),6.30(dd,J=8.7,1.3Hz,1H),5.19-5.12(m,1H),4.58(s,2H),4.16-4.07(m,1H),3.90-3.81(m,1H),2.23-1.99(m,4H)ppm。
實例15 N-(4-溴-3-氟-6-硝基-2-四氫呋喃-2-基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醯胺(18)之製備.
經由加料漏斗在約20分鐘內(反應溫度升至13℃)，向在2℃下攪拌之三氟乙酸酐(565.3mL,4.067mol,Sigma-Aldrich 106232)中緩慢添加稠油狀物形式之純淨4-溴-3-氟-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(17)(123.0 g,86%,406.7mmol)。使用無水THF(35mL)將剩餘油狀物沖洗至反應混合物中。去除冷浴且將反應液加熱至35℃，隨後經2.5hr逐份添加NH4NO3(4.88g×20份，1.22mol,Sigma-Aldrich A7455)，同時使用冰-水浴(僅根據需要，用以控制放熱)將反應溫度維持於30℃與41℃之間。完成添加後，將反應混合物再攪拌10分鐘(HPLC展示反應完成99%)。將其緩慢傾倒至碎冰(1.23kg)中並攪拌1hr以使得形成可過濾固體沈澱物，收集該可過濾固體沈澱物並使用水、少量NaHCO3飽和水溶液及水(再次)洗滌(至pH 7)。將產物在40℃下於對流烘箱中乾燥過夜且然後在50℃及減壓下於烘箱中乾燥過夜以得到灰棕色固體18(152.5g，產率為90%；HPLC純度為96%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：401.30(3.41min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 10.56(s,1H),8.19(d,J=6.6Hz,1H),5.22(dd,J=10.3,6.4Hz,1H),4.22(dd,J=15.8,7.2Hz,1H),3.99(dd,J=16.1,7.5Hz,1H),2.50-2.38(m,1H),2.22-2.11(m,2H),1.86-1.71(m,1H)ppm。
實例16 4-溴-3-氟-6-硝基-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(19)之製備.
向反應燒瓶中裝填N-(4-溴-3-氟-6-硝基-2-四氫呋喃-2-基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醯胺(18)(242.3g,604.1mmol)、1,4-二噁烷(1.212L)、2M硫酸水溶液(362.4mL,724.9mmol)，並在回流下攪拌5天(HPLC展示轉化98%)。冷卻，使用EtOAc稀釋，使用NaHCO3飽和水溶液中和，分離各層，並使用EtOAc(2×)再萃取水相。使用鹽水(2×)洗滌合 併之有機相，藉由MgSO4乾燥，過濾並在真空中濃縮以得到綠褐色固體19(181.7g，產率為94%；HPLC純度為95%)。產物未經進一步純化即用於下一步驟。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：305.20(3.63min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.35(d,J=7.3Hz,1H),7.45(s,2H),5.23-5.16(m,1H),4.23-4.14(m,1H),3.93-3.84(m,1H),2.31-1.96(m,4H)ppm。
實例17 2-[5-(4-胺基-2-氟-5-硝基-3-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(20)之製備.
向4-溴-3-氟-6-硝基-2-四氫呋喃-2-基-苯胺(19)(525.0g,1.721mol,Bridge Organics公司)於1,4-二噁烷(4.20L,Sigma-Aldrich 360481)中之攪拌溶液中添加NaHCO3之1.2M水溶液(4.302L,5.163mol)。將氮流鼓泡通過攪拌混合物2hr，隨後添加2-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(7)(545.4g,2.065mol,Bridge Organics公司)及1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀二氯甲烷加合物(42.16g,51.63mmol,Strem 460450)。將反應混合物在回流下攪拌過夜，冷卻，使用EtOAc(8.4L)稀釋，且分離各層。使用NH4Cl飽和水溶液洗滌有機相且然後使用鹽水洗滌。使用EtOAc(4L)再萃取水相並使用鹽水洗滌此有機萃取物。藉由MgSO4乾燥合併之有機相，經由Florisil®短塞過濾，使用EtOAc洗脫，並在旋轉蒸發儀上濃縮濾液以得 到暗褐色濕潤固體。將此固體溶於CH2Cl2中，裝載於矽膠墊上，使用己烷洗脫，然後使用25% EtOAc/己烷洗脫，且然後使用50% EtOAc/己烷洗脫。將期望濾液在旋轉蒸發儀上濃縮成稠懸浮液，且藉由過濾收集固體，使用MTBE研磨，並在真空中乾燥以得到亮黃色固體20(產率為55.8%，HPLC純度為90-97%)。濃縮濾液且重複上述純化以得到第二批亮黃色固體20(產率為19.7%)。再次濃縮濾液以得到暗褐色油狀物且將此暗褐色油狀物裝載於具有甲苯及極少CH2Cl2之二氧化矽管柱上。使用EtOAc/己烷(0%至50%)將其洗脫。將期望部分濃縮成漿液並使用MTBE/己烷稀釋。藉由過濾收集固體並使用極少MTBE洗滌以得到第三批亮黃色固體20(產率為4.9%)，其中來自三批之總產率為80%。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：363.48(2.95min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.84(d,J=1.6Hz,2H),8.27(d,J=8.0Hz,1H),7.62(s,2H),5.31-5.24(m,1H),4.63(s,1H),4.27-4.18(m,1H),3.97-3.87(m,1H),2.33-2.05(m,4H),1.64(s,6H)ppm。
實例18 2-[5-(4,5-二胺基-2-氟-3-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(21)之製備.
在氮下，將5%碳載鈀(14.21g，50%濕潤，3.339mmol,Aldrich 330116)置於帕爾瓶中，隨後添加MeOH(242mL,JT-Baker 909333)及NEt3(46.54mL,333.9mmol,Sigma-Aldrich 471283)。將2-[5-(4-胺基- 2-氟-5-硝基-3-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(20)(121.0g,333.9mmol)溶於熱THF(360mL)中，冷卻，添加至反應混合物中，並使用另一部分THF(124mL)沖洗。將器皿置於帕爾振盪器上並使用H2使其達到飽和。添加45psi H2並振盪直至完全消耗為止(HPLC及LCMS展示反應完成)。使用氮吹掃反應混合物，經由矽藻土TM過濾並使用EtOAc沖洗。經由濾紙(玻璃微纖維)再過濾並在真空中濃縮濾液。以相同規模重複反應三次以上且合併各批次以得到褐色固體21(447g，產率為99%；HPLC純度為93%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：333.46(1.79min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 8.81(d,J=1.4Hz,2H),6.69(d,J=7.3Hz,1H),5.27-5.20(m,1H),4.73(s,1H),4.70(s,2H),4.23-4.14(m,1H),3.94-3.86(m,1H),3.22(s,2H),2.32-2.22(m,1H),2.18-1.99(m,3H),1.63(s,6H)ppm。
實例19 1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-四氫呋喃-2-基-1H-苯并咪唑-2-基]脲(22)之製備.
向2-[5-(4,5-二胺基-2-氟-3-四氫呋喃-2-基-苯基)嘧啶-2-基]丙烷-2-醇(21)(111.3g,334.9mmol)及1,4-二噁烷(556.5mL,Sigma-Aldrich 360481)之攪拌懸浮液中依次添加1-乙基-3-(N-(乙基胺甲醯基)-C-甲基 硫基-亞胺羰基)脲(10)(93.36g,401.9mmol,CB Research and Development))、pH 3.5緩衝劑(1.113L)(藉由將NaOAc三水合物(158.1g)溶於1N H2SO4水溶液(1.100L)中製得)。將反應混合物在回流下攪拌過夜(HPLC展示轉化完全)，冷卻至室溫，並逐份傾倒(起泡)至NaHCO3飽和水溶液(2.23L)之攪拌溶液中以得到pH 8-9。將其攪拌30分鐘，藉由過濾收集固體，使用水充分洗滌至中性pH，且然後使用極少EtOH洗滌。在減壓下乾燥固體以得到灰白色/黃色固體22(135.2g，產率為94%；HPLC純度為99%)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：429.58(2.03min)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ 8.95(d,J=1.6Hz,2H),7.45(d,J=6.5Hz,1H),5.38(br.s,1H),4.27(dd,J=14.9,7.1Hz,1H),4.01(dd,J=15.1,7.0Hz,1H),3.37-3.29(m,2H),2.55(br.s,1H),2.19-2.07(m,2H),2.02-1.82(br.s,1H),1.63(s,6H),1.21(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
實例20 1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(23)之對掌性層析分離.
在使用DCM/MeOH/TEA(60/40/0.1)在25℃下洗脫之CHIRALPAK® IC®管柱(Chiral Technologies)上拆分1-乙基-3-[6-氟-5- [2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-四氫呋喃-2-基-1H-苯并咪唑-2-基]脲(22)(133.60g)之外消旋試樣以得到灰白色固體形式之期望對映異構體23(66.8g，產率為45%；HPLC純度為99.8%，99+%對映異構體過量)。分析型對掌性HPLC之滯留時間為7.7min(CHIRALPAK® IC® 4.6×250mm管柱，1mL/min流速，30℃)。將固體懸浮於2：1 EtOH/Et2O(5體積)中，攪拌10分鐘，藉由過濾收集，使用2：1 EtOH/Et2O洗滌，並在減壓下乾燥以得到白色固體(60.6g)。
藉由單晶x射線繞射分析證實23之結構及絕對立體化學。在配備有密封管Cu Kα源(Cu Kα放射，γ=1.54178Å)及Apex II CCD檢測器之Bruker Apex II繞射儀上獲取單晶繞射數據。選擇尺寸為0.15×0.15×0.10mm之晶體，使用礦物油清洗，安裝於MicroMount上並定中心於Bruker APEXII系統上。獲得在倒易空間中分離之3批40個框架以提供取向矩陣及初始晶胞參數。獲得最終晶胞參數並在完成數據收集之後基於全資料集進行精修。基於系統消光及強度統計學，在離心P21空間群中拆分及精修結構。
使用0.5°步長以0.85Å之解析度使用30s暴露獲得每一框架中倒易空間之繞射數據集合在100(2)K下收集數據。使用APEXII軟體對強度進行積分並精修晶胞參數在數據收集之後，觀察到晶體並未展示分解跡象。如圖2中所展示，在結構中存在兩個對稱獨立性分子且該兩個對稱獨立性分子皆係R異構體。
收集數據，使用Apex II軟體進行精修並簡化。使用SHELXS97(Sheldrick,1990)程式拆分結構且使用SHELXL97(Sheldrick,1997)程式精修結構。晶體展示具有P21空間群之單斜晶胞。晶格參數為a=9.9016(2)Å，b=10.9184(2)Å，c=19.2975(4)Å，β=102.826(1)°。體積=2034.19(7)Å3。
實例21 1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(23A)之甲烷磺酸鹽之製備.
向存於二氯甲烷(60mL,J.T.Baker 931533)及無水乙醇(15mL,Pharmco-AAPER 111000200)中之1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(23)(15.05g,35.13mmol)之攪拌懸浮液中添加甲烷磺酸(2.392mL,36.89mmol,Sigma-Aldrich 471356)。在室溫下攪拌直至觀察到透明溶液為止。經約1hr緩慢添加庚烷(300mL)並藉由過濾(在Whatman GF/F玻璃微纖維濾紙頂部使用Whatman 3號定性濾紙)收集固體沈澱。在減壓及40℃下於真空烘箱中乾燥(使用硫酸鈣及氫氧化鉀乾燥)過夜以得到白色固體23A(13.46g，HPLC純度為99+%，99+%對映異構體過量)。分析型對掌性HPLC展示一種對映異構體且滯留時間8.6min(使用CH2Cl2/MeOH/TEA(60/40/0.1)洗脫，在對掌性PAK® IC® 4.6×250mm管柱上，使用1mL/min流速，在30℃下)。自濾液獲得第二批白色固體產物23A(4.36g，HPLC純度為98%，99+%對映異構體過量)。LCMS(C18管柱，經5分鐘使用10-90% CH3CN/水梯度洗脫，使用甲酸改質劑)M+1：429.58(2.03min)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ 9.00(d,J=1.6Hz,2H),7.67(d,J=6.1Hz,1H),5.39(t,J=7.7Hz,1H),4.30(dd,J=14.9,6.9Hz,1H),4.03(dd,J=14.8,7.7Hz,1H), 3.40-3.31(m,2H),2.72(s,3H),2.70-2.60(m,1H),2.21-2.08(m,2H),1.98-1.84(m,1H),1.65(s,6H),1.22(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
然後可根據下文所闡述之反應圖將(R)-1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲23轉化成磷酸酯或磷酸鹽前藥。
試劑及條件：(a)二苄基N,N-二異丙基亞磷醯胺，四唑，23℃，DMF；(b)mCPBA，0-23℃，DMF；(c)H2，Pd/C，M+OH-或D2+(OH-)2，EtOH，H2O；(d)H+水溶液；(e)M+OH-水溶液。
可如反應圖1中所展示自化合物23製備式(IB)化合物。在步驟1中，依次使用二苄基N,N-二異丙基亞磷醯胺及四唑以及間-氯過氧苯甲酸(mCPBA)處理化合物23以提供磷酸二苄基酯24。在步驟2中，在M+OH-或D2+(OH-)2存在下對24實施氫解以提供二陰離子形式之式(IB)化合物(X=-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+)。可藉由使用酸水溶液處理該二陰離子形式來獲得游離酸形式之式(IB)化合物(X=PO(OH)2)。可藉由使用一當量M+OH-處理游離酸形式來獲得單陰離子形式之式(IB)化合物(X=PO(OH)O-M+)。
試劑及條件：(a)Boc2O，DMF，23℃；(b)二苄基N,N-二異丙基亞磷醯胺，四唑，23℃，DMF；(c)mCPBA，0-23℃，DMF；(d)TFA，H2O，MeOH，DCM，23℃；(e)H2，Pd/C，M+OH-或D2+(OH-)2，EtOH，H2O；(f)H+水溶液；(g)M+OH-水溶液。
另一選擇為，可如反應圖2中所展示自化合物23來製備式(IB)化合物。在步驟1中，使用二碳酸二-第三丁基酯(Boc2O)處理化合物23以提供經保護苯并咪唑化合物25。在步驟2中，依次使用二苄基N,N-二異丙基亞磷醯胺及四唑以及mCPBA處理化合物25以提供經保護磷 酸二苄基酯26。在步驟3中，使用三氟乙酸(TFA)處理化合物26以去除保護基團並提供磷酸二苄基酯24。在步驟4中，在M+OH-或D2+(OH-)2存在下對24實施氫解以提供二陰離子形式之式(IB)化合物(X=-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+)。可藉由使用酸水溶液處理該二陰離子形式來獲得游離酸形式之式(IB)化合物(X=PO(OH)2)。可藉由使用一當量M+OH-處理游離酸形式來獲得單陰離子形式之式(I)化合物(X=PO(OH)O-M+)。
試劑及條件：(a)Boc2O，DMAP，DMF，23℃；(b)二苄基N,N-二異丙基亞磷醯胺，四唑，23℃，DMF；(c)mCPBA，0-23℃，DMF；(d)TFA，DCM；(e)M+OH-或D2+(OH-)2水溶液；(f)H+水溶液；(g)M+OH-水溶液。
亦可如反應圖3中所展示自化合物23來製備式(IB)化合物。在步驟1中，使用2當量Boc2O在N,N-二甲基胺基吡啶(DMAP)存在下處理化合物23以提供雙保護苯并咪唑化合物28。在步驟2中，依次使用二苄基N,N-二異丙基亞磷醯胺及四唑以及mCPBA處理化合物28以提供雙保護磷酸二苄基酯29。在步驟3中，使用TFA處理化合物29以去除保護基團。使用M+OH-或D2+(OH-)2水溶液處理所得中間體以提供二陰離子形式之式(IB)化合物(X=-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+)。可藉由使用酸水溶液處理該二陰離子形式來獲得游離酸形式之式(IB)化合物(X=PO(OH)2)。可藉由使用一當量M+OH-處理游離酸形式來獲得單陰離子形式之式(I)化合物(X=PO(OH)O-M+)。
實例22 磷酸(R)-二苄基酯2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基酯(24)之製備.
在N2及23℃下於1L圓底燒瓶中，向1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基- 1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(23)(10.24g,23.66mmol)中添加DMF(200mL)，隨後添加四唑溶液(105.2mL，0.45M，存於MeCN中，47.32mmol)，隨後添加N-二苄基氧基磷基-N-異丙基-丙烷-2-胺(12.26g,11.93mL,35.49mmol)。在4.5h之後，添加額外之N-二苄基氧基磷基-N-異丙基-丙烷-2-胺(4mL)。在進一步攪拌16h之後，將反應液冷卻至0℃(冰-水浴)，然後使用mCPBA(15.17g,61.52mmol)處理。將混合物在0℃下攪拌30min，然後在23℃下攪拌30min，隨後將反應混合物分配於水(400mL)與EtOAc(700mL)之間。分離有機層，使用碳酸氫鈉飽和水溶液(500mL)、10%亞硫酸氫鈉水溶液(500mL)、碳酸氫鈉飽和水溶液(500mL)及鹽水(500mL)洗滌，然後乾燥(硫酸鎂)，過濾並濃縮。藉由MPLC使用ISCO COMBIFLASH品牌急驟層析純化系統(330g管柱，使用存於DCM中之0-10% EtOH線性梯度於16.5個管柱體積內在200mL/min流速下洗脫)純化殘餘物。在真空中濃縮之後，獲得白色固體形式之磷酸(R)-二苄基酯2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基酯(24)(13.89g,20.17mmol,85.27%)。ESMS(M+1)=689.5；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ 8.88(d,J=1.6Hz,2H),7.37(d,J=6Hz,1H),7.30(m,10H),5.38-5.33(m,1H),5.12-5.01(m,4H),4.24(dd,J=6.8,14.9Hz,1H),3.98(dd,J=6.9,15.1Hz,1H),3.35-3.27(m,3H),2.52(q,J=5.9Hz,1H),2.14-2.05(m,2H),1.91(s,6H)and 1.22-1.14(m,3H)ppm。
實例23 (R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基磷酸二鈉(W)之製備.
向1L帕爾器皿中裝填水(200mL)、Pd/C(4g，10wt%乾基，濕潤，Degussa型)、磷酸(R)-二苄基酯2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基酯(24)(13.89g,20.17mmol)、EtOH(400mL)及1M NaOH水溶液(40.34mL,40.34mmol)。在50psi H2下於帕爾振盪器裝置上對所得混合物實施氫化40min。經由0.22μm聚醚碸(PES)膜過濾反應混合物以得到暗色濾液。水沖洗得到穿過過濾膜之更暗材料。使所得濾液通過矽藻土墊且暗材料並不洗脫出直至使用水沖洗墊為止。使用三體積之EtOH(2100mL)稀釋所得暗溶液(大約700mL)，經由0.22μm PES膜(使用4個一次性Corning聚苯乙烯過濾系統，編號：431098)過濾並在真空中濃縮濾液。將所得殘餘物溶於水(100mL)及EtOH(300mL)中，經由0.22μm PES膜過濾以得到透明黃色溶液，然後通過矽藻土塞(26mm直徑×60mm高度，使用EtOH預潤濕)，使用EtOH(50mL)沖洗且然後濃縮濾液。將所得殘餘物溶於1L圓底燒瓶中之水(250mL)中，然後經15min在攪拌下緩慢添加1M HCl水溶液(40mL)以得到白色固體漿液。在完成HCl添加後20分鐘時，經由使用0.22μm PES膜進行過濾來收集固體。使用水(100mL)洗滌所收集固體，然後轉移(仍濕潤)至1L圓底燒瓶中且在MeOH(150mL)中經30min製成漿液。經由過濾收集所得精 細白色沈澱，然後在真空中乾燥過夜。使用水(80mL)處理所得游離酸(9.17g,18.0mmol)，然後使用1.0N NaOH水溶液(36.0mL，2當量)處理。將所得溶液冷凍並凍乾以得到具有一致分析數據之淺乳色固體形式之[1-[5-[2-(乙基胺甲醯基胺基)-6-氟-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-5-基]嘧啶-2-基]-1-甲基-乙基]磷酸二鈉(W)(10.206g,18.08mmol,89.66%)。ESMS(M+1)=509.4；1H NMR(300MHz,D2O)δ 8.58(s,2H),6.92(d,J=6.3Hz,1H),5.13(t,J=7.5Hz,1H),3.98-3.81(m,2H),3.04(q,J=7.2Hz,2H),2.26(t,J=5.7Hz,1H),1.97-1.92(m,2H),1.67(s,6H)and 1.01(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
實例24 Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(25)之製備.
在23℃下，向存於DMF(250mL)中之1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(23)(10.72g,25.02mmol)之溶液/懸浮液中添加Boc2O(6.11g,28.00mmol)。在2小時之後，添加存於MeOH中之2M氨(2mL)以淬滅任何過量Boc2O。將驟冷反應混合物分配於EtOAc與水(各400mL)之間，分離有機層，使用水(2×400mL)及鹽水(400mL)洗滌，然後藉由MgSO4乾燥，過濾並濃縮以得到Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1- 甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(25)(12.69g,23.58mmol,94.26%)，該產物未經進一步純化即使用。ESMS(M+1)=529.3；1H NMR(300.0MHz,CDCl3)δ 9.50(s,1H),9.02(t,J=5.3Hz,1H),8.91(d,J=1.6Hz,2H),7.74(d,J=6.5Hz,1H),5.58(t,J=7.8Hz,1H),4.64(s,1H),4.22(q,J=7.4Hz,1H),4.05(td,J=7.8,4.3Hz,1H),3.47(td,J=7.2,4.3Hz,2H),2.42-2.35(m,2H),2.28-2.16(m,2H),1.75(s,9H),1.68(s,6H)and 1.31(t,J=7.3Hz,3H)ppm。
實例25 Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲二苄基磷酸鹽(26)之製備.
在N2及23℃下，向Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(25)(12.69g,23.58mmol)及四唑(3.304g,47.16mmol)中添加DCM(240mL)，隨後添加N-二苄基氧基磷基-N-異丙基-丙烷-2-胺(9.775g,9.509mL,28.30mmol)。在23℃下保持3小時之後，將反應液冷卻至0℃，然後添加mCPBA(6.977g,28.30mmol)。將所得溶液在0℃下攪拌45min，然後在23℃下攪拌20min。然後將反應混合物分配於DCM(50mL)與碳酸 氫鈉飽和水溶液(400mL)之間。分離有機層，然後依次使用亞硫酸氫鈉(63g，存於350mL中)水溶液及碳酸氫鈉飽和水溶液(400mL)洗滌，然後藉由硫酸鎂乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由MPLC使用ISCO COMBIFLASH品牌急驟層析純化系統(330g二氧化矽管柱，使用存於己烷中之0-100% EtOAc線性梯度在16個管柱體積內在200mL/min下洗脫)純化殘餘物。在真空中蒸發含有產物之部分以得到Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲二苄基磷酸鹽(26)(11.92g,15.11mmol,64.09%)。ESMS(M+1)=789.2；1H NMR(300.0MHz,CDCl3)δ 9.51(s,1H),9.03(t,J=5.4Hz,1H),8.91(d,J=1.6Hz,2H),7.73(d,J=6.5Hz,1H),7.37-7.28(m,10H),5.58(t,J=7.8Hz,1H),5.17-5.05(m,4H),4.23(t,J=7.5Hz,1H),4.05(td,J=7.8,4.3Hz,1H),3.53-3.44(m,2H),2.39(dd,J=7.9,14.5Hz,2H),2.28-2.15(m,2H),1.98(s,6H),1.72(m,9H)及1.31(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
實例26 磷酸(R)-二苄基酯2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基酯(24)之製備.
在23℃下，向存於DCM(300mL)中之Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2- (1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲二苄基磷酸鹽(26)(11.9g,15.09mmol)之溶液中添加水(2.325mL,129.1mmol)，然後添加TFA(3.441g,2.325mL,30.18mmol)。在1h之後，藉由tlc觀察到僅發生部分轉化，因此添加額外之TFA(3.441g,2.325mL,30.18mmol)。再過2.5h之後，添加MeOH(2mL)且將混合物進一步攪拌18小時。使用1：1鹽水：碳酸氫鈉飽和水溶液(200mL)洗滌反應混合物。使用DCM(150mL)再萃取水層，合併有機層，然後乾燥(藉由硫酸鎂)，過濾並在真空中濃縮。將所得殘餘物再溶於EtOAc(200mL)中，使用水(150mL)及鹽水(100mL)洗滌，然後乾燥(硫酸鎂)，過濾並濃縮以得到白色固體形式之磷酸(R)-二苄基酯2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基酯(24)(10.21g,14.83mmol,98.27%)。ESMS(M+1)=689.4；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ 8.88(d,J=1.6Hz,2H),7.37(d,J=6Hz,1H),7.30(m,10H),5.38-5.33(m,1H),5.12-5.01(m,4H),4.24(dd,J=6.8,14.9Hz,1H),3.98(dd,J=6.9,15.1Hz,1H),3.35-3.27(m,3H),2.52(q,J=5.9Hz,1H),2.14-2.05(m,2H),1.91(s,6H)及1.22-1.14(m,3H)ppm。
實例27 (R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基磷酸二鈉(W)之製備.
向1L圓底燒瓶中裝填磷酸(R)-二苄基酯2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基酯(24)(9.37g,13.61mmol)、EtOH(300mL)、水(150mL)、Pd/C(10wt%乾基，濕潤，Degussa型，3g)及1M NaOH水溶液(27.22mL,27.22mmol)。將懸浮液抽真空3min(針至幫浦)，然後置於氫氣氣氛(氛圍)下。在23℃下攪拌2.5h之後，經由0.22μm PES膜(一次性Corning過濾系統，1L，聚苯乙烯，編號：431098)過濾反應液以去除觸媒並使用EtOH(50mL)洗滌。濃縮所得溶液，將殘餘物溶於水(80mL)中，使用MeCN(80mL)處理，然後冷凍並凍乾以得到白色固體形式之(R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基磷酸二鈉(W)(7.10g,12.81mmol,94.12%)。ESMS(M+1)=509.3；1H NMR(300MHz,D2O)δ 8.58(s,2H),6.92(d,J=6.3Hz,1H),5.13(t,J=7.5Hz,1H),3.98-3.81(m,2H),3.04(q,J=7.2Hz,2H),2.26(t,J=5.7Hz,1H),1.97-1.92(m,2H),1.67(s,6H)及1.01(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
實例28 二Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(28)之製備.
向存於DMF(30mL)中之1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(23)(1.333g,3.111mmol)之溶液/懸浮液中添加DMAP(38.01mg,0.3111mm01)，隨後添加Boc2O(1.426g,1.501mL,6.533mmol)。在30min之後，使用水及EtOAc(各300mL)稀釋反應混合物，分離有機層，使用水及鹽水(各300mL)洗滌，然後藉由硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。藉由MPLC使用ISCO COMBIFLASH品牌急驟層析純化系統(80g二氧化矽管柱，使用存於己烷中之0-60% EtOAc線性梯度於20個管柱體積內在60mL/min流速下洗脫)純化殘餘物。合併期望產物部分並蒸發以得到透明發泡體形式之二Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(28)(1.43g,2.275mmol,73.11%)。ESMS(M+1)=629.3；1H NMR(300.0MHz,CDCl3)δ 8.95(d,J=1.6Hz,2H),8.31-8.27(m,1H),8.05(d,J=6.5Hz,1H),5.80-5.68(m,1H),4.70(s,1H),4.21-4.09(m,1H),3.98(d,J=6.4Hz,1H),3.42-3.37(m,2H),2.45-2.00(m,4H),1.65(s,6H),1.62(s,9H),1.37(s,9H)及1.28-1.21(m,3H)ppm。
實例29 二Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲二苄基磷酸鹽(29)之製備.
在23℃及N2下，向二Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲(28)(1.13g,1.797mmol)及四唑(251.8mg,3.594mmol)中添加DCM(30mL)，隨後添加N-二苄基氧基磷基-N-異丙基-丙烷-2-胺(744.7mg,724.4μL,2.156mmol)。在攪拌18h之後，將反應液冷卻至0℃，然後使用mCPBA(531.5mg,2.156mmol)處理。將反應液在0℃下攪拌15min，然後在23℃下攪拌30min。然後將所得溶液分配於EtOAc與碳酸氫鈉飽和水溶液(各300mL)之間，分離有機層，然後使用10%亞硫酸氫鈉水溶液、碳酸氫鈉飽和水溶液及鹽水(各300mL)洗滌，然後藉由硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。藉由MPLC使用ISCO COMBIFLASH品牌急驟層析純化系統(80g二氧化矽管柱，使用存於己烷中之0-80% EtOAc線性梯度於20個管柱體積內在60mL/min流速下洗脫)純化殘餘物。合併期望產物部分並蒸發以得到透明玻璃油狀物形式之二Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲二苄基磷酸鹽(29)(1.03g,1.159mmol,64.50%)。ESMS(M+1)=889.5；1H NMR(300.0MHz,CDCl3)δ 8.93(d,J=1.5Hz,2H),8.31(s,1H),8.04(d,J=6.4Hz,1H),7.36-7.26(m,10H),5.83-5.70(m,1H),5.16-5.05(m,4H),4.24-4.18(m,1H), 4.03-3.97(m,1H),3.42-3.36(m,2H),2.43-2.05(m,4H),1.98(s,6H),1.64(s,9H),1.40(s,9H)及1.26(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
實例30 (R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基磷酸鈉(W)之製備.
在23℃下，向存於DCM(10mL)中之二Boc-1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲二苄基磷酸鹽(29)(121mg,0.1361mmol)之溶液中添加TFA(5mL)。在2h之後，在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物溶於MeOH(6mL)中並使用大約0.5mL存於MeOH中之2M NH3處理(以完全溶解材料)。以6次注入在製備型HPLC(反相，Sunfire prep C18 OBD 5μM管柱19×100mm；使用10-90%MeCN水溶液以及0.1% TFA之緩衝液，線性梯度，15min，在20mL/min流速下)上純化所得溶液。彙集含有產物之部分並凍乾。將所得材料懸浮於MeOH(3mL)中，在23℃下攪拌30min，然後經由使用塑膠料進行過濾來收集沈澱。使用MeOH漿液(3mL)再處理所得白色固體，然後經由過濾收集以在乾燥之後得到68mg白色固體。使用0.10M NaOH水溶液(2.68mL，2當量NaOH)處理白色固體以得到溶液，然後使該溶液通過具有0.45μm PTFE膜之Acrodisc CR 13mm注射筒過濾器，使用水(2mL)沖洗。使用MeCN(3mL)處理所得溶液，冷凍並凍乾以得到白色粉末形式之(R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基磷酸鈉(W)。ESMS(M+1)=509.2；1H NMR(300MHz,D2O)δ 8.58(s,2H),6.92(d,J=6.3Hz,1H),5.13(t,J=7.5Hz,1H),3.98-3.81(m,2H),3.04(q,J=7.2Hz,2H),2.26(t,J=5.7Hz,1H),1.97-1.92(m,2H),1.67(s,6H)及1.01(t,J=7.2Hz,3H)ppm。
實例31 液體培養基中之敏感性測試
藉由敏感性測試在液體培養基中測試本發明化合物之抗微生物活性。在指導該等實踐之最新CLSI文件之導則：「M07-A8 Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically；認可標準--第8版(2009)」下實施該等分析。其他公開資料(例如「Antibiotics in Laboratory Medicine」(由V.Lorian,Publishers Williams及Wilkins編輯，1996))提供實驗室抗生素測試中之基本實踐技術。所用具體方案如下：
方案4.用於分枝桿菌物種之MIC測定程序 材料
圓底96孔微量滴定板(Costar 3788)或類似物
膜板密封件(PerkinElmer，TopSeal-A，編號：6005250，或類似物)
含有0.2%甘油之Middlebrook 7H10培養液
含有0.2%甘油之Middlebrook 7H10瓊脂
Middlebrook OADC增菌液(Enrichment)
用於結核分枝桿菌之接種物製備：
1. 使用儲存於-70℃下之所製備冷凍結核分枝桿菌原料。使結核分枝桿菌在7H10培養液+10% OADC中生長，然後以100 Klett或5×107cfu/ml之濃度冷凍。
2. 藉由取出1ml冷凍原料且將其添加至19ml 7H10培養液+10% OADC中來製備1：20稀釋液(最終濃度為2.5×106cfu/ml)。
3. 自此稀釋液製備第二1：20稀釋液，取出1ml且將其添加至19ml新鮮培養液中。此係添加至96孔板中之最終接種物。
用於堪薩斯分枝桿菌、禽型分枝桿菌、膿腫分枝桿菌及奴卡氏菌屬(Nocardia spc.)之接種物製備：
1. 使用濃度為10 Klett或5×107/ml之生長於7H10培養液中之培養物或新鮮培養物之所製備冷凍原料。
2. 藉由取出1.0ml培養物原料且將其添加至19ml 7H10培養液中來製備1：20稀釋液(最終濃度為2.5×106cfu/ml)。
3. 自此稀釋液製備1：20稀釋液，取出1ml且將其添加至19ml新鮮培養液中(最終懸浮液)。
板製備：
1. 對板進行標記。
2. 將50μl 7H10培養液+10% OADC添加至所有用於使用多通道電子移液器進行MIC測定之孔中。
3. 製備擬測試藥物之原液(例如1mg/ml濃度)。
4. 解凍並使用7H10培養液+10% OADC稀釋冷凍原液以獲得4×最大測試濃度之工作溶液(例如最終濃度為32μg/ml，最高測試濃度為8μg/ml)。自原液製備稀釋液。為自1μg/ml之濃度開始，製備4μg/ml藥物，從而起始濃度為1μg/ml。取出25μl 1mg/ml原料並添加至6.2ml培養液中。在培養液中製備藥物之所有稀釋液。
5. 將50μl 4×工作溶液添加至指定列之第一孔中。繼續進行所有 擬測試化合物。使用多通道電子移液器，在第11孔中混合4×連續稀釋化合物。棄除剩餘之50μl。使用第12孔作為陽性對照。
6. 在37℃下培養板，對於結核分枝桿菌而言培養約18天；對於禽型分枝桿菌及堪薩斯分枝桿菌而言培養約7天；對於奴卡氏菌及膿腫分枝桿菌而言培養約4天；使用膜密封件。
7. 以目測方式進行讀數並記錄結果。記錄MIC作為觀察不到生長之最低藥物濃度(孔中之光學透明度)。
方案5.用於結核分枝桿菌血清移位MIC分析之方案 材料及試劑：
Costar 3904號黑邊平底96孔微量滴定板
含有0.2%甘油之Middlebrook 7H9培養液(BD271310)
Middlebrook OADC增菌液
胎牛血清
過氧化氫酶(Sigma C1345)
右旋糖
NaCl2
BBL Prompt接種系統(Fisher b26306)
帶有經劃線用於單一菌落之細菌的瓊脂板(含有0.2%甘油及OADC增菌液之Middlebrook 7H11)
無菌DMSO 培養基製備：
1. 為獲得血清移位之MIC，需要三種不同培養基，其皆具有7H9+0.2%甘油之基質。重要的係，在分析MIC之前對所有培養基及補充物進行滅菌。
2. 製備下文之所有培養基且如下一部分中所闡述進行接種。使用每一培養基針對Mtb測試所有化合物。
a. 7H9+0.2%甘油+10% OADC(「標準」MIC培養基)。
b. 7H9+0.2%甘油+2g/L右旋糖+0.85g/L NaCl+0.003g/L過氧化氫酶(0% FBS)。
c. 2×7H9+0.2%甘油+2g/L右旋糖+0.85g/L NaCl+組合有等體積胎牛血清之0.003g/L過氧化氫酶(50% FBS)。
接種物製備：
1. 使用BBL Prompt，挑選出5-10個充分分離之菌落且在套組中之1ml無菌鹽水中接種。通常，在用於此分析時，板為二至三週齡(因該有機體在培養物中之緩慢生長)。
2. 使孔渦旋，然後在水浴中超音波處理30sec以提供約108個細胞/ml之懸浮液。可藉由平鋪此懸浮液之稀釋液來證實實際密度。
3. 在三種培養基調配物中之每一者中藉由1/200稀釋BBL Prompt懸浮液(例如：將0.2ml細胞轉移至40ml培養基中)以獲得約106個細胞/ml之起始細胞密度來製備接種物。
4. 使用100μl細胞(約5×104個細胞)接種每一含有1μl存於DMSO中之藥物之微量滴定孔(參見下文)。
藥物稀釋、接種、MIC測定：
1. 在100% DMSO中製備10mM之對照藥物原料異菸肼及新生黴素，而分別在50% DMSO及100% DMSO中製備1mM之環丙沙星及利福平。製備稀釋液-將100μL原液分配至96孔板之第一行中。在列中藉由將50μl自1行轉移至第2行中之50μl DMSO中來製備每一化合物之11步2倍連續稀釋液。繼續自第2行至第11行轉移50μL同時在每一行中混合且更換尖端。將僅具有DMSO之第12行作為對照。
2. 將1μl每一稀釋液轉移至空微量滴定孔中，然後添加100μl細胞。在稀釋至培養基+細胞中之後異菸肼及新生黴素之起始濃度為100μM；在稀釋至培養基+細胞中之後環丙沙星及利福平之起始濃度為10 μM。在移動穿過微量滴定板之列之2×個步驟中化合物濃度發生降低。在三個培養基條件中之每一者中測定所有MIC。
3. 化合物測試組通常在10mM及50μL體積下。
4. 使用多通道移液器，自母板之每一行取出所有體積且轉移至新96孔微量滴定板之第一行中。針對母板之每一行化合物重複進行，且轉移至新96孔板之第1行中。
5. 如上所述，對於對照化合物而言，使用DMSO作為稀釋劑生成每一化合物之2倍11點稀釋液。在所有情形下，將僅含DMSO之第12行用作對照。對於對照化合物而言，在完成所有稀釋後，同樣將1μl每一稀釋液轉移至空微量滴定孔中，然後添加100μl細胞。
6. 使用100μl經稀釋細胞懸浮液對所有孔實施接種(參見上文)。
7. 在添加接種物之後，藉由輕微敲擊板之側面來混合板。
8. 將板在增濕37℃室中培育9天。
9. 在9天後，向每一孔中添加25μl 0.01%無菌刃天青(resazurin)。在492nm激發、595nm發射下量測背景螢光且將板返回培育器中再保持24小時。
在24小時之後，在492nm激發、595nm發射下量測每一孔之螢光。
給定化合物之抑制百分比計算如下：抑制百分比=100-([孔螢光-平均背景螢光]/[DMSO對照-平均背景螢光]×100)。對所有三種培養基條件下之MIC進行評分，其係在給定培養基條件下抑制刃天青減少(「抑制%」)信號70%之最低化合物濃度。
表7展示所選本發明化合物之MIC分析結果。
在表7及隨後之表及實例中，「化合物12」對應於1-乙基-3-[5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲且「化合物13」係關於化合物12之甲磺酸鹽。類似地，「化 合物23」對應於1-乙基-3-[6-氟-5-[2-(1-羥基-1-甲基-乙基)嘧啶-5-基]-7-[(2R)-四氫呋喃-2-基]-1H-苯并咪唑-2-基]脲且「化合物23A」係關於化合物23之甲磺酸鹽。該等相同編號用於鑑別如上文實例中所使用之該等化合物及鹽。
實例32 大鼠中之7天口服(管飼)毒性及毒物動力學研究
此研究之目標係：1)評估化合物13及化合物23A在連續7天藉由管飼經口投與雄性大鼠時之潛在毒性；及2)評價化合物13及化合物23A在第一及第七劑量之後之毒物動力學。
動物 物種、來源、歷史及驗證
自Stone Ridge,NY之查理士河實驗室(Charles River Laboratories)獲得Crl：CD(SD)大鼠。在實驗室飼餵動物且其係首次用於實驗。選擇大鼠，此乃因其係常用於非臨床毒性評估之物種。
數量、性別、年齡及體重範圍
訂購40只大鼠(20只未插插管之雄性大鼠及20只具有頸靜脈插管 之雄性大鼠)。自該等動物，使用15只未插插管之雄性動物及15只具有插管之雄性動物。動物之年齡儘可能一致。在開始投藥時，大鼠處於青春期前至未成熟階段(大約9週齡)。在研究記錄中保留其由供應商所計算之出生日期。在分派組時動物之重量範圍為218.5-306.3g。
研究設計
如下表8中所展示來分派大鼠。藉由口服管飼連續7天使動物接受測試物或媒劑且在完成投藥之次日終止。將投藥之第一天確定為研究之第1天。如下文所闡述評估動物之臨床體徵、體重及其他參數之變化。
途徑/劑量
藉由口服管飼連續7天每天一次分別以10mL/kg體重之劑量體積(對於組A及組B-D而言)投與媒劑及測試物。藉由口服管飼連續7天每天兩次(大約相隔8小時)分別以10mL/kg體重之劑量體積(對於組E及組F而言)投與測試物及媒劑。計算投與每一動物之實際體積且基於每一 動物之最新體重進行調節。
生命內觀察及量測 觀察
在整個研究中，至少在上午一次及下午一次(至少相隔4小時)觀察動物之生存力。在治療時段期間，每天進行籠邊觀察且在投藥前及投藥後(僅在第一劑量後)進行記錄。基於來自先前研究之兩種化合物之Cmax/Tmax，在治療期間進行之投藥後觀察發生於下列時間：對於組A-F而言，在投藥後1小時。
在屍檢當天進行一次籠邊觀察。
非預定觀察
將在除預定觀察時間外之時間所觀察到之任何發現記錄於非預定觀察或Provantis中；然而，在整個研究中並未觀察到異常。Provantis係業內常用之電子數據收集、管控及報導系統。
體重
在開始投藥之前，在第1天量測體重以用於隨機分組。在治療期間，在第1天及第7天量測體重。此外，在屍檢之前量測禁食體重以用於計算器官重量/體重比。
食物消耗
在整個研究中，自開始投藥之前3天開始每天量測食物消耗。
臨床病理學評估
在屍檢之前，自所有動物之眼窩後神經叢(在CO2/O2麻醉，對於主要研究動物而言)或頸靜脈插管(對於毒物動力學動物而言)收集用於評估血液學、凝血及血清化學參數之血樣。因用於保持專用於毒物動力學動物之插管之殘餘肝素，來自該等大鼠之凝血試樣不能加以分析。在血液收集之前將動物禁食過夜。在收集血液以用於臨床病理學分析之日，並不對動物進行屍檢直至在收集血液且判斷試樣為臨床病 理學組可接受之後。
血液學
將適當量之血液收集於含有EDTA之管中。分析全血試樣之下表9中所指示之參數。
凝血
將適當量血液收集於含有檸檬酸鈉之管中且然後離心以獲得用於測定凝血酶原時間(PT)及活化部分促凝血酶原激酶時間(APTT)之血漿。
血清化學
將適當量血液收集於並無抗凝血劑之管中。使試樣凝結且然後離心以獲得血清。分析血清之下表10中所指示之參數。
毒物動力學
在投藥之第1及第7天，在下文所列示時間點自所有毒物動力學動物之頸靜脈插管將血樣(大約0.5mL/試樣)收集至含有K3EDTA之管中。來自對照組(組F)之毒物動力學動物僅自每一收集日在1小時時間點(在收集日之第一劑量投與後)進行單一血液收集採樣。在每一收集之前，自插管取出少量血液試樣(具有肝素阻斷溶液)並棄除。將新注射器置於插管上，且獲取方案所需試樣。取出具有血樣之注射器，且將具有鹽水之新注射器附接至插管。將該體積血樣替換為等體積之鹽水且然後將阻斷溶液置於插管中。將每一動物返回其籠中直至下一收集時間點為止。
將在此研究期間收集之所有試樣置於經標記容器中。每一標記含有下列資訊：1)研究編號，2)動物數量，3)收集間隔，4)組及性別，及5)收集日期。
藉由倒轉立即混合血樣，然後置於濕冰上並冷離心(約1500g，約10分鐘，約5℃)以獲得血漿。將血漿作為2個等分試樣分至具有可刺穿TPE capcluster經檢定無RNase、DNase帽蓋之96孔1.4-mL聚丙烯管中並冷凍儲存(-70℃)。
1 所有試樣皆係在收集窗內收集。
2 僅在第1天投藥後。
3 在PM劑量投與之前自組E及F獲得。
4 僅在第7天投藥後。
終止
在研究期間沒有動物被視為處於瀕死狀態。在方案預定之治療天數後，使所有研究動物安樂死並實施屍檢。藉由放血(在深度CO2/O2麻醉下切斷腹部主動脈)來終止所有動物。
屍檢
對在研究期間終止之所有動物實施收集組織之屍檢。屍檢包含檢驗以下各項：屠體及肌肉/骨骼系統；所有外部表面及孔口；腦之顱腔及外部表面；具有有關器官及組織之頸；及具有有關器官及組織之胸腔、腹腔及骨盆腔。闡述及記錄所有異常。
器官重量
對於所有進行預定屍檢之安樂死動物而言，對腎、肝及前列腺進行稱重。在稱重後，稱取約1克肝及腎試樣，轉移至Precellys 7mL CK28組織均質化管(目錄編號：0904-01)中，快速冷凍，並分析。
使用在屍檢之前獲得之終末禁食體重計算器官重量/體重比。
組織保存及骨髓收集
自所有動物收集下表12中所指示之組織及器官且保存於10%中性 緩衝福爾馬林(formalin)中(睪丸、附睪及眼睛除外)。將睪丸、附睪及附有視神經之眼睛固定於改質戴維森溶液(Modified Davidson’s Solution)中保持約24-48小時，使用水沖洗，且然後轉移至10%中性緩衝福爾馬林中進行儲存。
a 稱取附有甲狀旁腺之甲狀腺。
組織病理學
對於所有預定用於終末屍檢之動物而言，將腎、肝及前列腺包埋於石蠟中，切片且使用蘇木精及伊紅染色以用於進一步藉由光顯微術進行檢驗。對於僅組A、D、E及F而言，將上文所列示之其餘組織包埋於石蠟中，切片且使用蘇木精及伊紅染色以用於進一步藉由光顯微術進行檢驗。
統計學分析
若適宜，則對動物數值數據進行統計學評估。
對於對比統計學而言，將組A(對照組)與組B及C(治療組，QD投藥)進行比較且將組F(對照組，BID投藥)與組E(治療組，BID投藥)進行比較。使用Levene測試(用於評估方差同質性)及Shapiro-Wilks測試(用於評估分佈正態性)評估數據，且顯著性為p 0.05。藉由方差分析(ANOVA)評估經測定同質且具有正態分佈之數據。若ANOVA驗證了p 0.05下之顯著性，則使用參數測試(鄧奈特測試(Dunnett Test))成對比較每一治療組與各別對照組以確定統計學差異(p 0.05)。使用Kruskal-Wallis測試評估經測定非同質或非正態分佈之數據之組因子顯著性。若在各組之間存在顯著性(p 0.05)，則使用非參數測試(Wilcoxonwith Bonferroni-Holm)對治療組與對照組進行比較。自適宜時間段排除發生溢出之動物之食物消耗數據。食物消耗數據之對比統計學限於鄧奈特測試(參數性)。並不對測試前食物消耗(第4天至第1天)實施統計學分析。
結果
不同劑量量之化合物23A及化合物13之暴露具有劑量相關性。在使用化合物13或化合物23A治療之動物中並未觀察到關於平均體重之不良觀察或效應。對於使用化合物13(100mg/kg或200mg/kg)每天一次及使用化合物23A(300mg/kg)每天兩次治療之動物而言，在研究之不同間隔期間減小平均食物消耗。然而，因在化合物13及化合物23A組中降低食物消耗與體重變化無關，故該等效應並不視為不良效應或生物學顯著。平均鈣離子濃度(CA)在統計學上較低，而每天兩次投與300mg/kg化合物23A之大鼠組之平均ALT及AST在統計學上高於每天兩次進行治療之對照。對於以任一劑量方案接受化合物13或化合物23A之動物而言，並未注意到測試物相關性組織病理學發現。
在此研究範圍內且基於不存在體重、臨床病理學及組織病理學 之變化，經7天每天一次經由管飼經口投與雄性大鼠之化合物13之NOEL(無可觀察到之效應量)為200mg/kg(844μg*hr/ml第7天AUC)，而每天一次投與之化合物23A之NOEL為100mg/kg(82μg*hr/ml AUC)。經7天每天兩次經由管飼經口投與雄性大鼠之化合物23A之NOAEL(無可觀察到之不良效應量)為300mg/kg(291μg*hr/ml AUC)。
因此，在研究範圍內分別於至高200mg/kg/天及600mg/kg/天之劑量值下，化合物13及23A並不顯示不良毒性。
實例33 雄性食蟹猴中之口服範圍發現毒性及毒物動力學研究
此研究之目標係：1)評估化合物23在連續7天藉由管飼經口投與雄性食蟹猴時之潛在毒性；及2)評價化合物23在第一及第七劑量之後之毒物動力學。
動物 物種、來源、歷史及驗證
自PinCourt,Quebec,Canada.之Primus Bio-Resources公司獲得食蟹猴(Macaca Fascicularis)。選擇食蟹猴，此乃因其係常用於非臨床毒性評估之非齧齒類動物物種。
數量、性別、年齡及體重範圍
在研究中使用8只(2只原始及6只非原始)雄性動物。在起始投藥時，該等動物處於青春期且體重介於2kg至4kg之間。
研究設計
如下表13中所展示來分派動物。連續7天每天一次藉由口服管飼使動物接受化合物23或媒劑且在完成投藥之次日終止。將投藥之第一天確定為研究之第1天。計算投與每一動物之實際體積且基於每一動物之最新體重進行調節。
生命內觀察及量測 觀察
在研究期間至少每天一次記錄籠邊臨床體徵(不健康、行為變化等)。
體重
在分組之前及在第1天(在投藥之前)、第3天及第7天以及在屍檢之前終止時(禁食)記錄所有動物之體重。
心電圖(ECG)
在治療前時段期間一次及在第7天(投藥後)再次獲得所有猴之心電圖(雙極肢導聯I、II及III及加強單極導聯aVR、aVL及aVF)。
評價跡線之指示心電功能障礙之總體變化。測定涉及心率(導聯II)、竇性節律及房室節律或電導率之異常之潛在存在。量測心率、PR間隔、QRS持續時間、QT及QTc間隔值。
毒物動力學
在第1天及第7天於下列時間點自每一猴收集7個血樣(各自大約0.5mL)之系列：投藥前、投藥後30分鐘及2小時、3小時、6小時、12小時及24小時。出於此目的，藉由靜脈穿刺對每一猴進行抽血且將試 樣收集至含有抗凝血劑K2EDTA之管中。將管置於濕冰上直至準備用於處理為止。
臨床病理學
在開始治療之前及在第8天終止之前對所有動物實施實驗室探究(血液學、凝血、臨床化學及尿分析)。
在由至少12小時但不超過20小時組成之食物剝奪過夜時段後，藉由靜脈穿刺收集血樣。自過夜(至少12小時但不超過20小時)剝奪食物及水之動物收集尿。
血液學
量測收集至EDTA抗凝血劑中之血樣之下列參數：紅血球計數、平均雪球血紅蛋白(計算)、血細胞比容(計算)、平均雪球體積、血紅蛋白、細胞形態、白血球計數、血小板計數、白血球分離計數(絕對值)、網狀球(絕對值及百分比)及平均雪球血紅蛋白濃度(計算)。
凝血
量測收集至檸檬酸鹽抗凝血劑中之血樣之活化部分促凝血酶原激酶時間及凝血酶原時間。
臨床化學
量測收集至含有凝結活化劑之管中之血樣之下列參數：a/g比率(計算)、肌酸酐、丙胺酸胺基轉移酶、球蛋白(計算)、白蛋白、葡萄糖、鹼性磷酸酶、磷(無機)、天門冬胺酸胺基轉移酶、鉀、膽紅素(總數)、鈉、鈣、總蛋白質、氯化物、甘油三酯、膽固醇(總數)、脲、γ麩胺醯轉移酶及山梨醇去氫酶。
尿分析
量測尿試樣之下列參數：膽紅素、蛋白質、血液、沉渣顯微術、顏色及外觀、比重、葡萄糖、尿膽素原、酮、體積及pH。
終止
在第8天完成治療時段後於無食物過夜時段之後使所有動物安樂死。使用氯胺酮(Ketamine)將猴預麻醉且然後藉由靜脈內過劑量之戊巴比妥鈉(sodium pentobarbital)使其安樂死，隨後藉由切斷主血管進行放血。
屍檢
對在研究期間終止之所有動物實施收集組織之屍檢。屍檢包含檢驗以下各項：屠體及肌肉/骨骼系統；所有外部表面及孔口；腦之顱腔及外部表面；具有有關器官及組織之頸；及具有有關器官及組織之胸腔、腹腔及骨盆腔。
闡述及記錄所有異常。
組織保存
在完成肉眼檢驗及所需器官稱重後，如下表14中所述來保存組織及器官。除非另有所指，否則使用中性緩衝10%福爾馬林進行固定及保存。
組織病理學
對於所有動物而言，將上文所指示之所有組織包埋於石蠟中，切片且使用蘇木精及伊紅染色並藉由光顯微術進行檢驗。
結果
不同劑量量之化合物23之暴露具有劑量相關性。
並無可歸因於投與至多200mg/kg/天劑量之化合物23之臨床體徵或體重、心電圖參數、臨床病理學參數或器官重量之變化。類似地，並無可明確歸因於投與至多200mg/kg/天劑量之化合物23之宏觀或微 觀發現。經測定化合物23在雄性食蟹猴中之無可觀察到之效應量(NOEL)為200mg/kg/天。
實例34 藥物動力學研究
在下文所闡述之實驗中測定所選本發明化合物之藥物動力學參數：採用如下一般分析程序及具體實驗方案：
一般分析程序
在下文所闡述之藥物動力學實驗中採用下列一般分析程序：試樣分析。使用高效液相層析/串連質譜(HPLC/MS/MS)方法測定血漿中之化合物23及化合物W之濃度。在提取之前，端視劑量值或調配物，視需要，使用空白血漿將血漿試樣稀釋2倍、4倍、5倍或10倍。自(稀釋)血漿藉由使用乙腈進行直接蛋白質沈澱(1：4之血漿/乙腈比率)各提取100μL化合物23及化合物W以及內部標準(IS)。在離心之後，將上清液提取物(10μL)注入LC/MS/MS系統上。HPLC系統包含Waters Xterra MS C18管柱(5微米，2.1mm直徑×50mm長，使用由存於水或乙腈中之0.1%甲酸組成之流動相梯度洗脫)。
藉由MS/MS使用大氣壓化學離子化(APCI)以多反應監測(MRM)模式來檢測分析物。端視試樣稀釋因子，量化下限(LLOQ)為1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、5ng/mL、10ng/mL或20ng/mL。分析之線性範圍為1ng/mL至5000ng/mL。同日間及異日間分析準確度在標稱值之2%內。同日間及異日間分析變化度<10%。
端視劑量值或調配物，使用HPLC/UV方法在使用DMSO：乙腈：水(33：33：33)稀釋10倍至500倍或1000倍之後分析化合物W之劑量懸浮液調配物之試樣。端視劑量值或調配物，使用HPLC/UV方法在使用DMSO：水(50：50)稀釋10倍、50倍、100倍或500倍之後分析化合物W之劑量溶液調配物之試樣。
藥物動力學數據分析。藉由無房室藥物動力學方法使用WinNonlin®專業版軟體5.1.1版(Pharsight公司，Mountain View，CA)分析化合物23及化合物W之血漿濃度-時間特徵。
測定主要藥物動力學參數，包含AUC全、AUCextrap、Cmax、tmax、Cl_obs、Vss_obs及t1/2。
統計學數據分析。使用WinNonlin軟體5.1.1版或Microsoft Excel 2000計算血漿濃度及藥物動力學參數估計值之闡述性統計學數據，包含平均值、標準偏差(SD)及變化係數(%CV)。
猴口服研究
藉由管飼向雄性食蟹猴(n=3/劑量組)投與3mg/kg、30mg/kg及300mg/kg化合物W之單一標稱口服劑量。將化合物W調配於0.5% MC(微晶纖維素)中。在投藥之前及之後，使動物自由獲取食物及水。
在投藥之前及在投藥後0(投藥前)、0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時、48小時經由頸動脈導管收集血樣(各自大約0.25mL)。將每一血樣收集至保持於濕冰上且含有EDTA鉀作為抗凝血劑之管中。分離血漿並儲存於大約-70℃下直至分析。
使用液相層析/串聯質譜(LC/MS/MS)方法分析血漿試樣以測定化合物23及化合物W之濃度，其中端視試樣稀釋因子量化下限(LLOQ)為1ng/mL至20ng/mL。對血漿濃度與時間數據實施無房室藥物動力學(PK)分析。此分析之結果提供於表15中。
猴靜脈內研究
經由頸靜脈插管向雄性食蟹猴(n=3/劑量組)投與1mg/kg化合物W之單一標稱靜脈內濃注劑量。將化合物W調配於D5W(5%右旋糖水溶液)中。在投藥之前及之後，使動物自由獲取食物及水。
在投藥之前及在投藥後0(投藥前)、5min、10min、0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時、48小時經由頸動脈導管收集血樣(各自大約0.25mL)。將每一血樣收集至保持於濕冰上且含有EDTA鉀作為抗凝血劑之管中。分離血漿並儲存於大約-70℃下直至分析。
使用液相層析/串聯質譜(LC/MS/MS)方法分析血漿試樣以測定化合物23及化合物W之濃度，其中端視試樣稀釋因子量化下限(LLOQ)為1ng/mL至20ng/mL。對血漿濃度與時間數據實施無房室藥物動力學(PK)分析。此分析之結果提供於表16中。
大鼠口服研究
藉由管飼向雄性斯普拉-道來氏大鼠(Sprague Dawley rat)組(n=3/劑量組)投與3mg/kg、10mg/kg、30mg/kg、300mg/kg化合物W之單一標稱口服劑量。將化合物W調配於0.5% MC(微晶纖維素)或20%環糊精、1% HPMC-AS(乙醯基琥珀酸羥丙基甲基纖維素)、1% PVP(聚乙烯基吡咯啶酮)中。在投藥之前及之後，使動物自由獲取食物及水。在投藥之前及在投藥後0(投藥前)、0.25小時、0.5小時、1小時、1.5小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時經由頸動脈導管收集血樣(各自大約0.25mL)。將每一血樣收集至保持於濕冰上且含有EDTA鉀作為抗凝血劑之管中。分離血漿並儲存於大約-70℃下直至分析。
使用液相層析/串聯質譜(LC/MS/MS)方法分析血漿試樣以測定化合物23及化合物W之濃度，其中端視試樣稀釋因子量化下限(LLOQ)為1ng/mL至20ng/mL。對血漿濃度與時間數據實施無房室藥物動力學(PK)分析。此分析之結果提供於表17中。
大鼠靜脈內研究
經由頸靜脈插管向雄性斯普拉-道來氏大鼠組(n=3/劑量組)投與1mg/kg及5mg/kg化合物W之單一標稱靜脈內濃注劑量。將化合物W調配於D5W中。在投藥之前及之後，使動物自由獲取食物及水。在投藥之前及在投藥後0(投藥前)、5min、10min、0.25小時、0.5小時、1小時、1.5小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時經由頸動脈導管收集血樣(各自大約0.25mL)。將每一血樣收集至保持於 濕冰上且含有EDTA鉀作為抗凝血劑之管中。分離血漿並儲存於大約-70℃下直至分析。
使用液相層析/串聯質譜(LC/MS/MS)方法分析血漿試樣以測定化合物23及化合物W之濃度，其中端視試樣稀釋因子量化下限(LLOQ)為1ng/mL至20ng/mL。對血漿濃度與時間數據實施無房室藥物動力學(PK)分析。此分析之結果提供於表18中。
小鼠口服研究
藉由管飼向雌性CD-1小鼠組(n=3/劑量組)投與10mg/kg、30mg/kg、100mg/kg化合物W之單一標稱口服劑量。將化合物W調配於0.5% MC中。在投藥之前及之後，使動物自由獲取食物及水。在投藥之前及在投藥後0(投藥前)、0.25小時、0.5小時、1小時、1.5小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時自頜下靜脈收集血樣(各自大約0.025mL)。將每一血樣收集至保持於濕冰上且含有EDTA鉀作為抗凝血劑之管中。分離血漿並儲存於大約-70℃下直至分析。
使用液相層析/串聯質譜(LC/MS/MS)方法分析血漿試樣，其中端 視試樣稀釋因子量化下限(LLOQ)為1ng/mL至20ng/mL。對血漿濃度與時間數據實施無房室藥物動力學(PK)分析。此分析之結果提供於表19中。
上述研究顯示，化合物W至少在大鼠、狗及猴中在活體內轉化成化合物23。
實例35 酶學研究
在下文所闡述之實驗中測定所選本發明化合物之酶抑制活性：
DNA旋轉酶ATPase分析
藉由使ADP之產生(經由丙酮酸激酶/乳酸去氫酶)與NADH之氧化偶合來量測金黃色葡萄球菌DNA旋轉酶之ATP水解活性。先前已闡述此方法(Tamura及Gellert,1990,J.Biol.Chem.,265,21342)。
在30℃下於含有100mM TRIS pH 7.6、1.5mM MgCl2、150mM KCl之緩衝溶液中實施ATPase分析。偶合系統含有(最終濃度)2.5mM磷酸烯醇-丙酮酸酯、200μM菸醯胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、1mM DTT、30ug/ml丙酮酸激酶及10ug/ml乳酸去氫酶。添加酶(90nM之最終濃度)及所選化合物之DMSO溶液(3%之最終濃度)。將反應混合物在30℃下培育10分鐘。藉由添加ATP至最終濃度為0.9mM來開始反應，且在340奈米下於10分鐘過程中監測NADH之消失速率。自速率對濃度特徵曲線測定Ki及IC50值。
發現所選本發明化合物可抑制金黃色葡萄球菌DNA旋轉酶。表20展示該等化合物在金黃色葡萄球菌DNA旋轉酶抑制分析中之抑制活性。
DNA Topo IV ATPase分析
使ATP至ADP之轉化(藉由金黃色葡萄球菌TopoIV酶)與NADH至NAD+之轉化偶合，且藉由340nm下之吸光度變化量測反應之進展。將TopoIV(64nM)與所選化合物(最終3%之DMSO)在30℃下於緩衝液中一起培育10分鐘。緩衝液由以下部分組成：100mM Tris 7.5、1.5mM MgCl2、200mM麩胺酸鉀、2.5mM磷酸烯醇丙酮酸酯、0.2mM NADH、1mM DTT、5μg/mL線性化DNA、50μg/mL BSA、30μg/mL丙酮酸激酶及10μg/mL乳酸去氫酶(LDH)。使用ATP開始反應，且在30℃下於20分鐘內在Molecular Devices SpectraMAX板讀數儀上連續監測速率。自速率對所選化合物之濃度之圖線(擬合至用於緊密結合抑制劑之莫裏森方程式(Morrison Equation))測定抑制常數Ki及IC50。
發現所選本發明化合物可抑制金黃色葡萄球菌DNA Topo IV。表21展示該等化合物在金黃色葡萄球菌DNA旋轉酶抑制分析中之抑制活性。
實例36 水性溶解度研究
根據下列程序測定化合物23及W之水溶性。
試樣製備。如下所述來製備每一化合物之水性試樣。將化合物稱取(20-30mg化合物)至4ml透明小瓶中，然後添加水(0.5mL)並藉由磁力攪拌器攪拌。向懸浮液中添加1.0N HCl以將pH調節至期望範圍。在室溫下攪拌96小時之後，經由0.22微米過濾器(Millipore，Ultrafree離心過濾器，Durapore PVDF，0.22μm，編號：UFC30GVNB)過濾懸浮液。收集濾液並使用pH計量測pH。將含有化合物W之濾液稀釋10倍以提供用於HPLC分析之適當濃度。含有化合物23之濾液無需稀釋。
標準溶液之製備。根據下列程序製備每一化合物之標準溶液。將1mg至2mg每一化合物準確稱取至10mL容量瓶中且添加水(對於化合物W而言)或1：1甲醇：0.1N HCl(對於化合物23而言)以完全溶解化合物。對化合物23實施超音波處理以有助於其溶於1：1甲醇：0.1N HCl中。在所有固體皆溶解後，添加額外溶劑以將每一溶液之體積調節至10ml。充分混合所得溶液以得到每一化合物之標準溶液。然後使用溶劑將每一標準溶液稀釋2倍、10倍及100倍。
溶解度分析。藉由HPLC分析(Agilent 1100，注入體積為10μL，波長為271nm，管柱為5μm XTerra® Phenyl，4.6×50mm，部件編號：186001144，流動相：A：於水中之0.1% TFA，於AcN中之0.1% TFA)分析每一試樣及每一標準溶液之等分試樣。將每一標準溶液注入三次，且將每一試樣注入兩次。藉由對來自HPLC之峰面積平均值對標準溶液之濃度繪圖來獲得標準曲線(其中基於如藉由元素分析所測定之固體之總水含量來對標準之重量進行適當校正)。自來自HPLC結果之水性試樣之峰面積及標準曲線之斜率及截距來計算每一試樣的濃度。自試樣濃度與試樣稀釋因子之乘積來衍生下表22中所列示之溶解 度值。
實例37 肝臟及肝S9細胞中之活體內代謝研究
在來自大鼠、狗、猴及人類之肝及腸S9部分中研究化合物W至化合物23之轉化。將化合物W以0.1μM、0.3μM、1μM、3μM、10μM、20μM、40μM、100μM、200μM、300μM在肝S9部分中培育且以1μM、3μM、10μM、20μM、100μM、300μM、500μM、1000μM在腸S9部分中培育進行培育0、5、10、15、30、45或60分鐘。藉由LC/MS-MS量化化合物23之形成且將數據擬合至米-門二氏方程式(Michaelis Menten equation)。下表23中之數據指示，化合物W在該等肝臟及腸S9部分中快速轉化成化合物23。
實例38 小鼠結核分枝桿菌(Erdman)肺感染模型
動物：自Jackson實驗室(Bar Harbor,ME)獲得雌性Balb/c小鼠(5-7週齡；6只/組)且根據實驗動物管理及使用導則(Guide to the Care and Use of Experimental Animals)收納並維持於生物安全等級3(BSL3)設施中。
細菌菌株及原料
自ATCC(Manassas,VA,USA)獲得結核分枝桿菌ATCC 35801(菌株Erdman)。將有機體在37℃下於旋轉振盪器上在含有10% OADC(油酸、白蛋白、右旋糖、過氧化氫酶)增菌液(BBL Microbiology Systems,Cockeysville,MD,USA)及0.05% Tween 80之改質7H10培養液(pH 6.6；去除瓊脂及孔雀綠之7H10瓊脂調配物)之20個管中生長5-10天。彙集培養物且稀釋至100 Klett單位[等效於5×107菌落形成單位(cfu)/mL](Photoelectric Colorimeter；Manostat公司，New York,NY,USA)。將培養物等分且在-70℃下冷凍。在感染當天，將培養物解凍且測定最終接種物。藉由稀釋至5×10-2且一式三份將0.1mL平鋪於補充有10% OADC增菌液之7H10瓊脂板(BBL Microbiology Systems)上來測定最終接種物大小。將板在37℃下於環境空氣中培育4週。
小鼠結核分枝桿菌(Erdman)感染模型
對於鼻內感染而言，藉由經肌內遞送泰拉瑞(telazol)(45mg/kg)/甲苯噻嗪(xylazine)(7.5mg/kg)混合劑(分別來自Lederle Parenterals,Carolina,Puerto Rico及Bayer公司，Shawnee Mission,KS,USA)使小鼠組麻醉且隨後經鼻內使用20μL體積之約102活結核分枝桿菌使其感染。實驗之時間表如下：在第0研究日，實施鼻內感染，且然後在第24研究日，將早期對照處死以用於肺負荷測定且開始治療。在開始治療後28天(感染後52天)，將所有治療小鼠及晚期對照處死以用於肺負荷測定。
對於細菌負荷測定而言，藉由CO2窒息將小鼠處死。以無菌方式取出右肺且在密封組織均質器(IdeaWorks！Laboratory Devices,Syracuse,NY,USA)中研磨。藉由連續稀釋且在7H10瓊脂板上滴定來 測定活有機體之數量。將板在37℃下於環境空氣中培育4週，然後進行計數。
使用結核分枝桿菌(Erdman；ATCC)以1×102cfu/小鼠IN(經鼻內)攻擊Balb/c小鼠(6只/組)。在24天之後，使單一小鼠組(早期對照(EC))安樂死且收穫肺，均質化並平鋪以量化結核分枝桿菌負荷。經由口服管飼使用10ml/kg媒劑(10% VitE-TPGS；晚期對照，LC)或使用化合物23A(以10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg投與，BID，28天)來治療其他經感染小鼠組。使用以100mg/kg(QD)投與之莫西沙星治療其他對照組。在28天治療之後，使各組安樂死且收穫肺，均質化並平鋪以量化結核分枝桿菌負荷。記錄每一小鼠之右肺負荷及每一小鼠組之中值且匯總於上表23a中。
結果：總而言之且如上文在表23a中所展示，化合物23A之每天兩次口服投藥在Balb/c小鼠中展現針對實驗誘導之肺結核分枝桿菌感染之活體內效能。使用30mg/kg或100mg/kg化合物23A之28天治療可 較早期對照減小肺負荷。此外，與媒劑治療之對照相比，莫西沙星提供肺負荷減小。在以10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg投與時，化合物23A較媒劑對照(晚期)顯示0.13 log、1.09 log及1.98對數減小之劑量依賴性減小。此外，30mg/kg及100mg/kg劑量之化合物23A較早期對照將細菌負荷減小0.7-1.5 log，從而表明化合物23A具有殺菌活性。100mg/kg(QD)之強力抗結核藥物莫西沙星較早期及晚期對照提供如先前所公開之肺負荷減小。該等減小類似於彼等由以100mg/kg投與之化合物23A所提供者，從而指示化合物23A針對結核分枝桿菌具有殺菌活性。
使用結核分枝桿菌(Erdman；ATCC)以1×102cfu/小鼠IN(經鼻內)攻擊Balb/c小鼠(6只/組)。在24天之後，使單一小鼠組(早期對照(EC))安樂死且收穫肺，均質化並平鋪以量化結核分枝桿菌負荷。經由口服管飼使用10ml/kg媒劑(10% VitE-TPGS；晚期對照，LC)或使用化合物W(以10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg投與，BID，28天)來治療其他經感染小鼠組。使用以100mg/kg(QD)投與之莫西沙星治療其他對照組。在28天治療之後，使各組安樂死且收穫肺，均質化並平 鋪以量化結核分枝桿菌負荷。記錄每一小鼠之右肺負荷及每一小鼠組之中值且匯總於上表23b中。
結果：總而言之且如上文在表23b中所展示，化合物W在Balb/c小鼠中展現針對實驗誘導之結核分枝桿菌肺感染之強效活體內效能。在以30mg/kg及100mg/kg(BID)治療28天之後，與早期及時間匹配之媒劑對照相比細菌密度有所降低。在以10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg投與時，化合物W較媒劑對照顯示0.2 log、1.36 log及2.02對數減小之劑量依賴性減小。此外，10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg劑量(BID)之化合物W較早期對照將細菌負荷減小0.64-2.63 log，從而表明化合物W針對結核分枝桿菌具有殺菌活性。100mg/kg(QD)之強力抗結核藥物莫西沙星較早期及晚期對照提供如先前所公開之肺負荷減小。該等減小小於彼等藉由以100mg/kg投與之化合物W所提供者且類似於彼等由30mg/kg(BID)化合物W所提供者，從而指示化合物W在此分析中展現等於或優於莫西沙星之抗結核活性。
實例39 活體外藥物組合研究
為評估其他潛在2藥物組合，首先在活體外棋盤實驗(在接種有對數期生長之結核分枝桿菌H37Rv之完全7H9培養液或全血中實施)中對該等組合進行比較。測試每一化合物之0、0.25×MIC、MIC、4×MIC及(若臨床相關)16×MIC之濃度。亦可在pH 6.0下檢驗吡嗪醯胺組合，其中其MIC為50μg/ml。對於具有可觀結果之組合而言，可在PBS中針對營養匱乏之結核分枝桿菌實施類似棋盤實驗以探究該組合針對非複製型有機體之活性。每一濃度對使用相同孔。藉由在培育0及7天之後實施之定量CFU計數來評價活性。在平鋪之前使用PBS洗滌試樣。
實例40 使用全血分析之活體外藥物組合研究
亦在全血培養分析中比較所選2藥物組合針對細胞內桿菌之活性，其中對來自健康志願者之血液接種結核分枝桿菌之等分試樣且以類似於上述形式之棋盤形式增加藥物濃度。測試每一藥物之0、0.25×MIC、MIC、4×MIC及(若臨床相關)16×MIC之藥物濃度。在培育0天及3天之後藉由以下方式估計活CFU計數：洗滌細胞，以滲透方式將其裂解，將裂解物接種至MGIT液體培養瓶中並在MGIT系統上培育培養物，其中將時間積極性結果應用至標準曲線以估計治療組與治療前及無藥物對照之log CFU變化。
實例41 使用中空纖維濾筒系統之活體外藥物組合研究
自FiberCell(Frederick,MD)購買中空纖維濾筒系統(HFS)且使用其來量測藥物組合之殺菌及滅菌活性。使用7.5 log10 CFU之對數期生長之結核分枝桿菌接種HFS之周邊腔室且在37℃及5% CO2下培育。在第0、7、14、21及28天對每一HFS之周邊腔室進行採樣且使用生理鹽水將試樣洗滌兩次以去除任何遺留藥物。將細菌培養物接種於補充有10% OADC之Middlebrook 7H10瓊脂上以列舉總桿菌群體，且接種於補充有藥物或實驗化合物之瓊脂上以測定抗性子群體。
經由電腦控制之注射幫浦將藥物及實驗化合物投與每一HFS之中央腔室中。為達成藥物動力學匹配，同時投與藥物及實驗化合物以在1h時達成異菸肼及利福平之峰濃度。在前48h期間對HFS之中央腔室採樣12次且然後量測藥物及實驗化合物濃度。
殺菌效應實驗之結果可用於設計用於量測滅菌效應之實驗。藥物動力學及統計學分析使用ADAPT 5程式，其經由最大期望演算法達成最大近似解。利用使用一階輸入及消除之單腔室模型且使用利用Bonferroni測試後校正之雙向方差分析(ANOVA)在GraphPad Prism 5.00版(GraphPad Software，CA)中比較每一時間點處來自三份HFS之細菌負荷。
實例42 活體內小鼠結核分枝桿菌(Erdman)肺感染模型
動物：自Jackson實驗室(Bar Harbor,ME)獲得雌性BALB/c小鼠(5-7週齡；6只/組)且根據實驗動物管理及使用導則收納並維持於BSL3設施中。
細菌菌株及原料
自ATCC(Manassas,VA,USA)獲得結核分枝桿菌ATCC 35801(菌株Erdman)。將有機體在37℃下於旋轉振盪器上在含有10% OADC(油酸、白蛋白、右旋糖、過氧化氫酶)增菌液(BBL Microbiology Systems,Cockeysville,MD,USA)及0.05% Tween 80之改質7H10培養液(pH 6.6；去除瓊脂及孔雀綠之7H10瓊脂調配物)之20個管中生長5-10天。彙集培養物且稀釋至100 Klett單位[等效於5×107菌落形成單位(cfu)/mL](Photoelectric Colorimeter；Manostat公司，New York,NY,USA)。將培養物等分且在-70℃下冷凍。在感染當天，將培養物解凍且測定最終接種物。藉由稀釋至5×10-2且一式三份將0.1mL平鋪於補充有10% OADC增菌液之7H10瓊脂板(BBL Microbiology Systems)上來測定最終接種物大小。將板在37℃下於環境空氣中培育4週。
小鼠結核分枝桿菌(Erdman)感染模型
藉由經肌內遞送泰拉瑞(45mg/kg)/甲苯噻嗪(7.5mg/kg)混合劑(分別來自Lederle Parenterals,Carolina,Puerto Rico and Bayer公司，Shawnee Mission,KS,USA)使鼻內感染小鼠組麻醉且隨後經鼻內使用20μL體積之約102活結核分枝桿菌使其感染。實驗之時間表如下：在第0天，實施鼻內感染，在第24研究日，將早期對照處死以用於肺負荷測定且開始治療。在開始治療後56天及感染後80天，將一組治療小 鼠及晚期對照處死以用於肺負荷測定(治療階段末期)。在開始治療後112天(感染後136天；觀察階段)，將第二組小鼠及晚期對照處死以用於肺負荷測定。
對於細菌負荷測定而言，藉由CO2窒息將小鼠處死。以無菌方式取出右肺且在密封組織均質器(IdeaWorks！Laboratory Devices,Syracuse,NY,USA)中研磨。藉由連續稀釋且在7H10瓊脂板上滴定來測定活有機體之數量。將板在37℃下於環境空氣中培育4至6週，然後進行計數。
用於三化合物組合研究之組：
早期對照
晚期對照
25mg/kg TMC-207+150mg/kg吡嗪醯胺+10mg/kg利福噴汀
25mg/kg TMC-207+100mg/kg化合物W+150mg/kg吡嗪醯胺
25mg/kg TMC-207+100mg/kg莫西沙星+150mg/kg吡嗪醯胺
100mg/kg化合物W+10mg/kg利福噴汀+150mg/kg吡嗪醯胺
100mg/kg莫西沙星+10mg/kg利福噴汀+150mg/kg吡嗪醯胺
100mg/kg化合物W+100mg/kg莫西沙星+150mg/kg吡嗪醯胺
100mg/kg化合物W+100mg/kg利奈唑胺+150mg/kg吡嗪醯胺
100mg/kg化合物W+100mg/kg PA-824+150mg/kg吡嗪醯胺
100mg/kg化合物W+20mg/kg氯法齊明+150mg/kg吡嗪醯胺
調配物製備：
3號組：將TMC-207調配於20%羥丙基-B-環糊精中並在上午進行治療。在下午，在一個管中合併小鼠組之所有其他化合物(在投藥之間至少2hr)且藉由首先添加50%聚乙二醇直至溶解且然後添加50%雙蒸餾H2O進行溶解。
表24. 組合實驗1。在與已知TB抗生素組合使用時化合物W在TB
結果：總而言之且如上文在表24及25中所展示，化合物W在BALB/c小鼠中展現針對實驗誘導之結核分枝桿菌肺感染之活體內效能。在以100mg/kg BID治療56天後，與早期及時間匹配之媒劑對照相比結核病感染已滅菌，從而表明化合物W針對結核分枝桿菌具有殺菌活性。
使用結核分枝桿菌(Erdman；ATCC)以1×102cfu/小鼠之劑量經 鼻內攻擊BALB/c小鼠(6只/組)。在24天之後，使單一小鼠組(早期對照(EC))安樂死且收穫肺，均質化並平鋪以量化結核分枝桿菌負荷。在28天內以10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg(BID)投與化合物。在28天治療之後，使各組安樂死且收穫肺，均質化並平鋪以量化結核分枝桿菌負荷。
參考文獻
Combinations of antibiotics and nonantibiotic drugs enhance antimicrobial efficacy.Ejim L, Farha MA, Falconer SB, Wildenhain J, Coombes BK, Tyers M, Brown ED, Wright GD.Nat Chem Biol. 2011年6月； 7(6):348-50。
Selection of a moxifloxacin dose that suppresses drug resistance in Mycobacterium tuberculosis, by use of an in vitro pharmacodynamic infection model and mathematical modeling.Gumbo T, Louie A, Deziel MR, Parsons LM, Salfinger M, Drusano GL. J Infect Dis.2004年11月1日； 190(9):1642-51。
Pharmacokinetics and whole-blood bactericidal activity against Mycobacterium tuberculosis of single doses of PNU-100480 in healthy volunteers. Wallis RS, Jakubiec WM, Kumar V, Silvia AM, Paige D, Dimitrova D, Li X, Ladutko L, Campbell S, Friedland G, Mitton-Fry M, Miller PF.J Infect Dis.2010年9月1日； 202(5):745-51。
實例43 化合物在小鼠中之抗結核活性之評估 階段1-針對小鼠中之確立TB評估作為單一療法之化合物 方法
實驗方案呈現於表26中。使用約100CFU之毒性結核分枝桿菌H37Rv對BALB/c小鼠實施感染以在開始治療5週後(第0天或D0)於肺中 產生具有約106個結核分枝桿菌有機體之穩定感染。在適當媒劑中製備藥物。除非需要皮下注射，否則每天(每週5天)藉由食管管飼投與治療劑。在治療4週之後，獲得肺CFU計數結果。一式兩份在富集OADC之7H11瓊脂培養基上對肺試樣實施定量培養。使用單向ANOVA利用鄧奈特後測試(Dunnett’s post-test)(GraphPad Prism 4)比較肺CFU計數之組平均差異以調節多個對比。
治療組闡釋
未治療：此係陰性對照組。分別在感染結核分枝桿菌次日(D-34)及在治療開始之日(D0)將5只小鼠處死以測定植入桿菌之數量及自D-35至D0之繁殖程度。將其他小鼠處死並保持4週以用於天然感染史之微生物表徵。
異菸肼(INH)：此對照組中之小鼠接受已知對活躍繁殖有機體具有強殺菌活性但對非活躍繁殖有機體具有減小活性之此一線藥物。
利福平(RIF)：此對照組中之小鼠接受已知對非活躍繁殖有機體具有強殺菌活性之此一線藥物。
吡嗪醯胺(PZA)：此對照組中之小鼠接受已知在輕微酸性環境條件下對活躍複製有機體具有強而低殺菌活性之此一線藥物。
測試化合物W(W)：此組中之小鼠以3個劑量中之一者接受化合物W(「W」)。
結果
在此模型中，發現化合物W在30mg/kg及100mg/kg下具有優於無治療之劑量依賴性活性(p<0.01，單向ANOVA，使用鄧奈特後測試)。
實驗亦包含PK研究以測定在第2治療週期間感染小鼠中每一測試化合物及劑量之24小時血清及肺PK特徵。根據表28中之方案處死小鼠，其中在第2治療週期間於週三或週四投與劑量。對於每一藥物及劑量而言，在投與藥物之前及之後之指示時間點處死三隻小鼠。在處死時，利用異氟烷使用點滴法將小鼠麻醉，且心臟穿刺進行放血。收穫血清且在-80℃下冷凍。收穫右肺，充分均質化且在-80℃下冷凍。
為實施兩種藥物之所有3種劑量之血清及肺PK研究，總共需要108只小鼠。
階段2-與現有TB藥物之組合中之化合物活性之評估 1)鑑別用於測試化合物之最佳配對藥物之實驗
首先在2個活體外模型中評估化合物A及/或B與現有TB藥物之相互作用以獲知使用3藥物及/或4藥物組合之長期組合療法研究之設計，該等長期組合療法研究利用復發率作為穩定癒合之量度且由此促進了有限資源之最有效使用。
方法 活體外棋盤分析
首先在活體外棋盤實驗(在接種有對數期生長結核分枝桿菌H37Rv之完全7H9培養液或全血中實施)中對潛在2藥物組合進行比較。測試每一藥物之0、0.25×MIC、MIC、4×MIC及(若臨床相關)16×MIC之藥物濃度。在正常pH下評估PZA，其中其針對結核分枝桿菌H37Rv之MIC為250μg/ml。其亦可在pH 6.0下進行檢驗，其中其MIC為50μg/ml。對於具有可觀結果之組合而言，可在PBS中針對營養匱乏之結核分枝桿菌實施類似棋盤實驗以探究該組合針對非複製型有機體之活性。
用於棋盤實驗之試樣實驗方案呈現於表29中。每一濃度對使用相同孔。藉由在培育0及7天之後實施之定量CFU計數來評價活性。在平鋪之前使用PBS洗滌試樣。
活體外全血分析
在全血培養分析中比較所選2藥物組合針對細胞內桿菌之活性，其中對來自健康志願者之血液接種結核分枝桿菌之等分試樣且以類似於上述形式之棋盤形式增加藥物濃度。測試每一藥物之0、0.25×MIC、MIC、4×MIC及(若臨床相關)16×MIC之藥物濃度，如表29中所示。在培育0天及3天之後藉由以下方式估計活CFU計數：洗滌細胞，以滲透方式將其裂解，將裂解物接種至MGIT液體培養瓶中並在 MGIT系統上培育培養物，其中將時間積極性結果應用至標準曲線以估計治療組與治療前及無藥物對照之log CFU變化。
用於擬測試藥物之原理。
異菸肼(INH)：已知對活躍繁殖有機體具有強殺菌活性但對非活躍繁殖有機體具有減小活性之一線藥物。
利福平(RIF)：已知對活躍繁殖有機體具有中等活性但對非活躍繁殖有機體具有強殺菌活性(滅菌活性)之一線藥物。
吡嗪醯胺(PZA)：已知對活體外結核分枝桿菌具有pH依賴性活性但在小鼠中(可能)對活化巨噬細胞內部之結核分枝桿菌具有顯著滅菌活性之一線藥物。
莫西沙星(MXF)：已知對活躍繁殖有機體具有強殺菌活性但對非活躍繁殖有機體具有減小活性之主要二線藥物。在臨床試驗中研究MXF以評估其是否屬於一線TB藥物。
利奈唑胺(LZD)：常用於補救療法中以用於頑抗性藥物抗性TB之二線藥物。LZD亦可在臨床研發中用作新噁唑啶酮之替代者。
化合物A(A)：測試化合物A。
化合物B(B)：測試化合物B。
2)評估包含式(I)之測試化合物之新穎組合之滅菌活性的實驗。
當前，用於量測小鼠模型中方案之滅菌活性之黃金標準係評價在中止療法之後的復發。使用可用方案作為標準對比，該等實驗需要7-10個月完成，此乃因需要3個月之無治療隨訪期以測定發生培養陽性復發之小鼠比例。因該等實驗之時間及成本消耗性質，必須儘可能利用最有效研究設計。藉由確立各種2藥物結構單元在上述短期感染模型中之相對活性，可在1或2個基於復發之研究中實施最可觀方案以對該等方案之活性與標準一線方案之活性及/或更有效實驗方案之活性進行比較。
試樣實驗方案展現於表30中。在此實例中，檢驗將測試化合物A添加至一線方案中或使用其替代INH之效應，同樣在包括現有藥物之理想化二線方案中使用測試化合物B替代乙胺丁醇或阿米卡星。在每一情形下，在減小持續時間之治療之後縮短所論述方案以顯示納入測試化合物是否可具有治療縮短效應。主要端點係在中止療法之後3個月具有陽性培養(亦即復發)之小鼠之比例。在第14天藉由氣溶膠途徑使用大約4 log10 CFU對小鼠實施感染。將感染培育14天，然後將小鼠隨機分配至所指示治療組且開始治療。如上文所闡述實施指示方案。藉由單向ANOVA利用邦弗朗尼後測試(Bonferroni’s post-test)比較組平均肺CFU計數以調節多個對比。在完成各種治療持續時間之後且在處死用於復發測定之前，將15只小鼠之其他組保持3個月。將整個肺均質物平鋪於7H11瓊脂上。使用費雪爾正確性測試(Fisher’s Exact test)同時針對多個校正進行調節來比較具有培養陽性復發之小鼠之比例。
治療組闡釋
2RHZ/3RH：一線方案對照，其由2個月之RIF、INH及PZA以及隨後3個月之RIF及INH組成。
2RHZA/3RHA：將測試化合物A添加至一線方案中之測試方案。
2RAZ/3RA：使用測試化合物A替代一線方案中之INH之測試方案。
2MEZAmk/4ME：二線方案對照，其由2個月之MXF、乙胺丁醇、PZA及阿米卡星以及隨後4個月之MXF及乙胺丁醇組成。
2MBZAmk/4MB：使用測試化合物B替代二線方案中之乙胺丁醇之測試方案。
2MEZB/4ME：使用測試化合物B替代二線方案中之阿米卡星之測試方案。
實例44 化合物23A在結核分枝桿菌(「Mtb」)細菌培養液中針對不同Mtb分離物及各種分枝桿菌物種之最小抑制濃度(MIC)
為測定化合物23A之MIC，使用96孔微量滴定板(Corning編號： 3904)在含有ADC增菌液之Middlebrook 7H9培養液(BD271310)中培養結核分枝桿菌，同時使用瓊脂板繼代培養經劃線用於單一菌落之Mtb之各種分離物。在超音波處理後製備含有約108個細胞/ml之細胞懸浮液且然後藉由將0.2ml細胞轉移至40ml具有ADC補充物之無菌7H9培養液中來進行1/200稀釋(最終濃度為約106個細胞/ml)。然後將100μl Mtb細胞(約5×104個細胞)添加至每一含有1μl存於DMSO中之測試化合物之微量滴定孔中(參見下文)。將微量滴定板在增濕37℃室中培育9天且藉由以下方式量測細菌生長：目測檢查或向每一孔中添加30μl 0.01%無菌刃天青且在24小時之後於492nm激發/595nm發射下量測背景螢光。最小抑制濃度(MIC)定義為抑制70%之細菌生長之最低抗微生物劑濃度。
結論：化合物23A可有效抵抗不同範圍之Mtb物種。
表32. 化合物23A在培養液中之藥物抗性分枝桿菌中之MIC
結核分枝桿菌LevoR 2D及結核分枝桿菌Levo/GatR 2C係實驗室衍生之結核分枝桿菌Erdman抗性菌株；其係單一藥物抗性菌株。結核分枝桿菌5係XDR菌株。
結論：化合物23A亦可有效抵抗藥物抗性Mtb
結論：化合物23A可有效抵抗不同範圍之Mtb菌株及分離物。
類似於MIC來測定最小殺菌濃度(MBC)分析。在MIC分析結束時，選擇包含與Mtb一起培育之化合物之細胞培養孔且一式兩份將50uL試樣添加於6孔瓊脂板上(對於每一孔更換尖端)。將板在增濕37℃室中培育2-3週且然後對菌落形成單位(cfu)進行計數以用於MBC。對於含有200個以上菌落之孔而言，不能測定MBC，此乃因菌落過多以致不能計數。然而，每孔含有5-50菌落範圍之孔可用於計算CFU。MBC係相對於第0天背景CFU發生99%殺滅(2 log標度)之濃度。
結論：化合物23A對結核分枝桿菌之H37Rv及Erdman分離物展現良好殺菌活性。與莫西沙星相比，化合物23A在延長時間段內具有改良殺菌活性。
實例45 低氧回收分析(Low-Oxygen-Recovery Assay，LORA)中之非複製型結核分枝桿菌之MIC測定
通常僅針對活躍複製細菌來篩選新抗微生物劑。然而，現已廣為接受，非複製持久性(NRP)之生理學狀態在許多細菌感染中負責抗微生物耐性。在結核病中，縮短6個月方案之關鍵在於靶向此NRP子群體。因此，在基於螢光之高通量低氧回收分析(LORA)中測試化合物23A，該測試經研發以篩選抵抗NRP結核分枝桿菌之抗微生物劑，如藉由Cho等人，2007.Cho SH,Warit S,Wan B,Hwang CH,Pauli GF,Franzblau SG；「Low-Oxygen-Recovery Assay for High-Throughput Screening of Compounds against Nonreplicating Mycobacterium tuberculosis」Antimicrob Agents Chemother.2007年4月；51(4)：1380-1385 doi：10.1128/AAC.00055-06所闡述。
結果：
化合物23A之LORA MIC為0.25ug/mL，從而指示測試化合物保留抵抗非複製持久性結核分枝桿菌之活性。與之相比，莫西沙星係惰 性(MIC>40ug/ml)且加替沙星為其活性之1/10(MIC=3.6ug/ml)。
實例46 針對胞內結核分枝桿菌之效能
在37℃及靜態培育下，將表現螢光素酶之重組結核分枝桿菌(Mtb)之培養物維持於補充有0.05% Tween 80、10% ADC及20ug/ml卡那黴素之7H9培養液(25ml，存於具有過濾蓋之125ml塑膠Erlenmeyer燒瓶中)中。在即將感染巨噬細胞或細胞系之前，將Mtb培養物在懸浮液中實施10秒之超音波處理並稀釋至8×105個細胞/ml之密度以達成2：1之多重性感染(MOI)。在結核分枝桿菌感染之前，將PMA活化THP-1或J774細胞在補充有10% FBS、L-麩醯胺酸及0.05mM b-巰基乙醇之25mM HEPES緩衝RPMI-1640培養基(無酚紅；2號培養基)中調節至2-3×105個細胞/ml之細胞密度。
以存於1μl體積DMSO中之期望濃度(最終0.5% DMSO)將測試化合物分配至無菌圓底96孔組織培養板中。在即將使用化合物處理感染Mtb之細胞之前，自每一孔去除含有未被攝入Mtb之上清液且替換為100μl新鮮培養基。將剩餘板之細胞培養物在37℃、5% CO2下於增濕室中培育且在感染之後5天(120小時)藉由以下方式測定所有測試及對照板之端點螢光素酶：向每一孔中添加100ul Bright Glow試劑，在室溫下培育10分鐘，使用黏著頂密封件覆蓋並在Tecan Spectrafluor+中以150之增益於最大積分時間下讀取螢光。IC50定義為將胞內細菌之生長抑制50%之抗微生物劑濃度。
結果：在兩種不同細胞類型(THP-1及J774)及三種不同Mtb菌株(Erdman、H37Ra及CDC1551)中檢驗化合物23A對Mtb胞內複製之效應。使用三種其他旋轉酶靶向抗生素作為對照。化合物23A在兩種細胞類型中可有效抵抗所有三種胞內Mtb菌株。
表36.
使用Mtb H37Ra作為測試菌株。數據展示，化合物23A與經批准抗TB藥劑至少具有等效功效。
實例47 化合物23A與經批准TB藥劑之組合之效能
使用棋盤方式且使用培養液及胞內分析來測定共投與化合物23A與經批准抗TB藥劑之效應。為評價該等效應係拮抗性、加和性抑或協同性，如下所述來計算分級抑制濃度(FIC)指數：
若FIC指數大於4，則組合視為拮抗性，若FIC指數介於0.5與4之間，則組合視為中性或加和性，且若該指數小於0.5，則組合視為協同性。結果製錶於下文中且展示，化合物23A通常對於經批准抗TB藥劑之效應具有加和性且在與TMC207及氯法齊明組合使用時可具有協同性。所用藥物組合並不展示拮抗效應。
實例48 非複製型(NRP)結核分枝桿菌H37Ra(螢光素酶)之培養
將結核分枝桿菌(H37Ra，pMV361，具有螢光素酶)細胞在平蓋125ml塑膠Erlenmeyer燒瓶中於補充有0.2%甘油、0.05% Tween 80、10% ADC及20μg/ml卡那黴素之7H9培養液中生長。向燒瓶中添加亞甲藍作為氧化還原指示劑(以得到1.5μg/mL之最終濃度)以監測氧空乏。將燒瓶置於磁力攪拌器上，並使用磁性珠粒以180rpm於37℃培育器中攪拌，直至亞甲藍指示劑完全去色為止(約14天)。將NRP Mtb轉移至1.5ml離心管中，充分混合並調節至0.02之光學密度(OD600)， 此等效於大約108個細胞/ml。然後藉由將0.2ml細胞轉移至40ml具有10% ADC補充物之無菌7H9培養液中(約5×105個細胞/ml)來將懸浮液1/200稀釋並添加至含有實驗及對照化合物之組織培養板(Thermo編號：260251)中。使用手動式多通道移液器將每一孔充分混合且使用密封膜(Axygen編號：BF-400-S)覆蓋板，並在37℃下於含有2 EZ厭氧藥囊(BD)之增濕低氧箱中培育7天。在7天之後，自板去除密封膜，混合每一孔並將細胞上清液轉移至新1.5ml離心管中。以13,000rpm將管離心5分鐘，棄除上清液並替換為1ml具有10% ADC補充物之7H9培養液。將100ul每一細胞懸浮液轉移至無菌組織培養板(Costar3903)中且製備用於不同時間點之每一板之6至8個複製物。向每一孔添加中100μl Steady-Glo檢測試劑，在室溫下培育15分鐘，使用黏著頂密封件覆蓋並在BioTek Synergy 2上以165之增益讀取螢光。在第3、7、10及14天量測端點螢光素酶。表示為在第14天讀取之IC50之結果展示於下表39中。
結論：化合物23A可有效抵抗非複製型結核病。

Claims (41)

  1. 一種以下物質之用途，(a)下式之化合物：
    Figure TWI631118B_C0001
    其中R係氫或氟；X係氫、-PO(OH)2、-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係醫藥上可接受之單價陽離子；且D2+係醫藥上可接受之二價陽離子；或其醫藥上可接受之鹽；其與以下物質組合：(b)一或多種抗生素化合物，其包括二芳基喹諾酮(diarylquinolone)、利福噴汀(rifapentine)、利福拉齊(rifalazil)、硝基咪唑、苯并噻嗪酮、噁唑啶酮(oxazolidinone)、卷麯黴素(capreomycin)、氯法齊明(clofazimine)、環絲胺酸(cycloserine)、胺苯碸(dapsone)、硫脲(thiocarbamide)、乙胺丁醇(ethambutol)、DC-159a、硝基苯并噻唑、蘇特唑利德(sutezolid)(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(posizolid)(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、SQ-641、己尿啶黴素(capuramycin)、卡普拉哲核苷(caprazene nucleoside)、異噻唑并喹諾酮(isothiazoloquinolone)、硫利達嗪(thioridazine)、縮胺硫胺(thiacetazone)、地紅黴素(dirithromycin)、羅紅黴素(roxithromycin)、泰利黴素(telithromycin)、阿奇黴素(azithromycin)、克拉黴素(clarithromycin)、紅黴素(erythromycin)、阿米卡星(amikacin)、卡那黴素(kanamycin)、鏈黴素(streptomycin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、利奈唑胺(linezolid)、利福拉齊(rifalazil)、美羅培南(meropenem)、克拉維酸鹽(clavulanate)、吡嗪醯胺(pyrazinamide)、乙硫異菸胺(ethionamide)、丙硫異菸胺(prothionamide)或異菸肼(isoniazid)，其用以製造用於控制、治療分枝桿菌(mycobacterium)疾病或減小其發展、嚴重性或效應之醫藥，前提係在該一或多種抗生素化合物係硫利達嗪、阿奇黴素、克拉黴素、紅黴素、阿米卡星、卡那黴素、鏈黴素、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼時，則其他抗生素亦存在於該組合中。
  2. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物包括貝達喹啉(bedaquiline)(TMC-207)、地拉米德(delaminid)(OPC67683)、PA 824、TBA-354、SKLB-TB37、BTZ-043、SQ-641、環絲胺酸、胺苯碸、乙硫異菸胺(ethionamide)、丙硫異菸胺(prothionamide)、對胺基水楊酸、CPZEN45、ACH-702或ACH-710。
  3. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物包括貝達喹啉、利福噴汀、莫西沙星、利奈唑胺、地拉米德或PA 824。
  4. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物包括莫西沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽、吡嗪醯胺或異菸肼。
  5. 如請求項1之用途，其中該等抗生素中之至少一者係吡嗪醯胺。
  6. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)化合物係下式之化合物：
    Figure TWI631118B_C0002
    其中R係氫或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
  7. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)化合物係下式之化合物：
    Figure TWI631118B_C0003
    其中X係-PO(OH)2、-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係醫藥上可接受之單價陽離子；且D2+係醫藥上可接受之二價陽離子；或其醫藥上可接受之鹽。
  8. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)化合物係下式之化合物：
    Figure TWI631118B_C0004
    其中R係氫或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
  9. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)化合物係(R)-1-乙基-3-(5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲或其醫藥上可接受之鹽。
  10. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)化合物係(R)-1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲或其醫藥上可接受之鹽。
  11. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)鹽係(R)-1-乙基-3-(5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲之甲烷磺酸鹽。
  12. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)鹽係(R)-1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲之甲烷磺酸鹽。
  13. 如請求項1至5中任一項之用途，其中X係-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係選自由Li+、Na+、K+、N-甲基-D-葡萄糖胺及N(R9)4 +組成之群；其中每一R9獨立地係氫或C1-C4烷基；D2+係選自由Mg2+、Ca2+及Ba2+組成之群。
  14. 如請求項13之用途，其中X係-PO(OH)O-M+或-PO(O-)2˙2M+；M+係選自由Li+、Na+、K+、N-甲基-D-葡萄糖胺及N(R9)4 +組成之群，其中每一R9獨立地係氫或C1-C4烷基。
  15. 如請求項13之用途，其中X係-PO(O-)2˙2M+；M+係選自由Li+、Na+、K+、N-甲基-D-葡萄糖胺及N(R9)4 +組成之群，其中每一R9獨立地係氫或C1-C4烷基。
  16. 如請求項13之用途，其中M+係Na+。
  17. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該式(I)化合物係(R)-2-(5-(2-(3-乙基脲基)-6-氟-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)嘧啶-2-基)丙烷-2-基磷酸二鈉。
  18. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該分枝桿菌疾病係由以下細菌引起：結核分枝桿菌(M.tuberculosis)、胞內禽型分枝桿菌(M.avium intracellulare)、潰瘍分枝桿菌(M.ulcerans)、堪薩斯分枝桿菌(M.kansasii)、偶發分枝桿菌(M.fortuitum)、膿腫分枝桿菌(M.abcesses)、麻風分枝桿菌(M.leprae)、非洲分枝桿菌(M.africanum)、海洋分枝桿菌(M.marinum)、禽型副結核分支桿菌(M.avium paratuberculosis)、或牛分枝桿菌(M.bovis)、龜分枝桿菌(M.chelone)、瘰癧分枝桿菌(M.scrofulaceum)、蟾分枝桿菌(M.xenopi)、胞內分枝桿菌(M.intracellulare)或田鼠分枝桿菌(M.microti)。
  19. 如請求項1之用途，其中將該式(I)化合物與僅一種抗生素一起投與，其中該抗生素係利福噴汀、TMC-207、SQ-109、硝基咪唑或噁唑啶酮。
  20. 如請求項19之用途，其中該抗生素係利福噴汀。
  21. 如請求項19之用途，其中該抗生素係TMC-207。
  22. 如請求項19之用途，其中該抗生素係SQ-109。
  23. 如請求項19之用途，其中該抗生素係硝基咪唑。
  24. 如請求項19之用途，其中該抗生素係噁唑啶酮。
  25. 如請求項19至24中任一項之用途，其進一步包括投與吡嗪醯胺。
  26. 如請求項19至24中任一項之用途，其中該式(I)化合物係(R)-1-乙基-3-(6-氟-5-(2-(2-羥基丙烷-2-基)嘧啶-5-基)-7-(四氫呋喃-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)脲或其醫藥上可接受之鹽。
  27. 一種以下物質之用途，(a)式(I)化合物：
    Figure TWI631118B_C0005
    其中R係氫或氟；X係氫、-PO(OH)2、-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係醫藥上可接受之單價陽離子；且D2+係醫藥上可接受之二價陽離子；或其醫藥上可接受之鹽；其與以下物質組合：(b)一或多種抗生素化合物，其包括二芳基喹諾酮、利福噴汀、利福拉齊、硝基咪唑、苯并噻嗪酮、卷麯黴素、氯法齊明、環絲胺酸、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇、DC-159a、硝基苯并噻唑、蘇特唑利德(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、己尿啶黴素、卡普拉哲核苷、異噻唑并喹諾酮、硫利達嗪、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼，其用以製造用於治療結核病之醫藥，前提係在該一或多種抗生素化合物係硫利達嗪、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼時，則其他抗生素亦存在於該組合中。
  28. 一種以下物質之用途，(a)式(I)化合物：
    Figure TWI631118B_C0006
    其中R係氫或氟；X係氫、-PO(OH)2、-PO(OH)O-M+、-PO(O-)2˙2M+或-PO(O-)2˙D2+；M+係醫藥上可接受之單價陽離子；且D2+係醫藥上可接受之二價陽離子；或其醫藥上可接受之鹽；其與以下物質組合：(b)一或多種抗生素化合物，其包括二芳基喹諾酮、利福噴汀、利福拉齊、硝基咪唑、苯并噻嗪酮、卷麯黴素、氯法齊明、環絲胺酸、胺苯碸、硫脲、乙胺丁醇、DC-159a、硝基苯并噻唑、蘇特唑利德(PNU-100480)、AZD-5847、泊西唑利德(AZD-2563)、對胺基水楊酸、SQ-109、SQ-609、己尿啶黴素、卡普拉哲核苷、異噻唑并喹諾酮、硫利達嗪、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼，其用以製造用於抑制藥物敏感性及藥物抗性分枝桿菌細胞之生長之醫藥，其中該分枝桿菌細胞係藥物敏感性及藥物抗性結核分枝桿菌、藥物抗性結核分枝桿菌、胞內禽型分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶發分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、麻風分枝桿菌、非洲分枝桿菌、海洋分枝桿菌、禽型副結核分支桿菌、牛分枝桿菌或其混合物；前提係在該一或多種抗生素化合物係硫利達嗪、莫西沙星、加替沙星、利奈唑胺、利福拉齊、美羅培南、克拉維酸鹽或異菸肼時，則其他抗生素亦存在於該組合中。
  29. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係TMC-207及吡嗪醯胺。
  30. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係利福噴汀及吡嗪醯胺。
  31. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係噁唑啶酮及吡嗪醯胺。
  32. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係硝基咪唑及吡嗪醯胺。
  33. 如請求項32之用途，其中該硝基咪唑係地拉米德。
  34. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係吡嗪醯胺及SQ-109。
  35. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係TMC-207、SQ-109及吡嗪醯胺。
  36. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係SQ-109、克拉維酸鹽及美羅培南。
  37. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係利福噴汀、SQ-109及吡嗪醯胺。
  38. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係噁唑啶酮、SQ-109及吡嗪醯胺。
  39. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係硝基咪唑、SQ-109及吡嗪醯胺。
  40. 如請求項39之用途，其中該硝基咪唑係地拉米德。
  41. 如請求項1之用途，其中該一或多種抗生素化合物係克拉維酸鹽、美羅培南及SQ-109。
TW102125826A 2012-07-18 2013-07-18 治療分枝桿菌疾病之組合療法 TWI631118B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261673109P 2012-07-18 2012-07-18
US61/673,109 2012-07-18
US201361782496P 2013-03-14 2013-03-14
US61/782,496 2013-03-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201418246A TW201418246A (zh) 2014-05-16
TWI631118B true TWI631118B (zh) 2018-08-01

Family

ID=48916184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW102125826A TWI631118B (zh) 2012-07-18 2013-07-18 治療分枝桿菌疾病之組合療法

Country Status (3)

Country Link
US (2) US9572809B2 (zh)
TW (1) TWI631118B (zh)
WO (1) WO2014014845A1 (zh)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2012205420B2 (en) * 2011-01-14 2016-12-08 Spero Therapeutics, Inc. Process of making gyrase and topoisomerase IV inhibitors
RU2013137753A (ru) * 2011-01-14 2015-02-20 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Твердые формы ингибитора гиразы (r)-1-этил-3-[5-[2-(1-гидрокси-1-метилэтил)пиримидин-5-ил]-7-(тетрагидрофуран-2-ил)-1н-бензимидазол-2-ил]мочевины
BR112013017985B1 (pt) * 2011-01-14 2021-06-29 Spero Therapeutics Inc. Formas sólidas de inibidor de girase (r)-1-etil-3-[6-flúor-5-[2-(1-hidróxi-1-metil-etil)pirimidin- 5-il]-7-(tetra-hidrofuran-2-il)-1h-benzimidazol-2-il]ureia, seu sal de ácido clorídrico, método de preparação das mesmas e composição farmacêutica que os compreende
RU2609259C2 (ru) * 2011-01-14 2017-01-31 Сперо Тринем, Инк. Пиримидиновые ингибиторы гиразы и топоизомеразы iv
EP2721026B1 (en) * 2011-06-20 2016-03-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phosphate esters of gyrase and topoisomerase inhibitors
TWI595002B (zh) 2012-07-18 2017-08-11 思沛羅三南公司 （Ｒ）－２－（５－（２－（３－乙基脲基）－６－氟－７－（四氫呋喃－２－基）－１Ｈ－苯并［ｄ］咪唑－５－基）嘧啶－２－基）丙烷－２－基磷酸二氫鹽之固體形式及其鹽
US9572809B2 (en) 2012-07-18 2017-02-21 Spero Trinem, Inc. Combination therapy to treat Mycobacterium diseases
BR112016018048A2 (pt) 2014-02-03 2017-08-08 Spero Gyrase Inc Método para o tratamento ou prevenção de uma infecção bacteriana, uso de um inibidor de topoisomerase tipo ii bacteriana em combinação com uma polimixina ou derivado de polimixina no tratamento ou prevenção de uma infecção bacteriana, uso de um inibidor de topoisomerase tipo ii bacteriana em combinação com uma polimixina ou derivado de polimixina na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma infecção bacteriana, método para melhorar a atividade antibacteriana de um inibidor de topoisomerase tipo ii bacteriana, método para melhorar a eficácia bactericida de um inibidor de topoisomerase tipo ii bacteriana, composição, agente antibacteriano, processo, e, composto
EP2913330A1 (en) * 2014-02-27 2015-09-02 Laboratoire Biodim Condensed derivatives of imidazole useful as pharmaceuticals
JP2017533220A (ja) 2014-11-03 2017-11-09 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 結核処置のための多剤療法
WO2017066964A1 (en) * 2015-10-22 2017-04-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxazolidinone compounds and methods of use thereof as antibacterial agents
BR112018067922B1 (pt) * 2016-03-07 2024-02-06 The Global Alliance For Tb Drug Development, Inc Compostos antibacterianos, usos dos mesmos e composições farmacêuticas
CN106565744B (zh) * 2016-10-31 2019-04-12 瑞阳制药有限公司 Pa-824化合物的晶型及其制备方法
CN109387594B (zh) * 2017-08-08 2021-01-19 武汉武药科技有限公司 一种分离和分析贝达喹啉光学异构体的方法
CN109781899A (zh) * 2019-03-08 2019-05-21 无锡微色谱生物科技有限公司 一种采用气相色谱-串联质谱法筛查及测定葱、姜、蒜中54种农药多残留的方法
WO2021188186A2 (en) * 2020-03-18 2021-09-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Detection of gene polymorphisms
CN111870594B (zh) * 2020-08-27 2022-03-22 首都医科大学附属北京胸科医院 苯乙肼在制备抗偶发分枝杆菌感染的药物中的应用
CN116808028B (zh) * 2023-08-25 2023-11-14 深圳市第三人民医院(深圳市肝病研究所) 一种苯并噻唑衍生化合物作为抗结核化合物的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200503708A (en) * 2003-01-31 2005-02-01 Vertex Pharma Gyrase inhibitors and uses thereof

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2015676A1 (de) 1970-04-02 1971-10-21 Farbenfabriken Bayer Ag, 5090 Leverkusen Neue Imine der 2-Formyl-chinoxalindi-N-oxidcarbon-säure-(3) und deren Salze, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als antimikrobielle Mittel
US4174400A (en) 1978-09-13 1979-11-13 Merck & Co., Inc. Anthelmintic benzimidazoles
US4512998A (en) 1980-10-20 1985-04-23 Schering Corporation Anthelmintic benzimidazole carbamates
CA2028530A1 (en) 1989-11-21 1991-05-22 Christian Hubschwerlen Substituted pyrimidobenzimidazole derivatives
US5283248A (en) 1989-11-21 1994-02-01 Hoffmann-La Roche Inc. Amino substituted pyrimido[1,6-2]benzimidazoles
DE19514313A1 (de) 1994-08-03 1996-02-08 Bayer Ag Benzoxazolyl- und Benzothiazolyloxazolidinone
HRP960159A2 (en) 1995-04-21 1997-08-31 Bayer Ag Benzocyclopentane oxazolidinones containing heteroatoms
US5643935A (en) 1995-06-07 1997-07-01 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of combatting infectious diseases using dicationic bis-benzimidazoles
GB9702213D0 (en) 1996-02-24 1997-03-26 Zeneca Ltd Chemical compounds
GB9717807D0 (en) 1997-08-22 1997-10-29 Zeneca Ltd Chemical compounds
TW538046B (en) 1998-01-08 2003-06-21 Hoechst Marion Roussel Inc Aromatic amides having antiobiotic activities and the preparation processes, intermediates and pharmaceutical composition thereof
CA2346813A1 (en) * 1998-10-15 2000-04-20 Sarawak Medichem Pharmaceuticals Incorporated Method and composition for treating and preventing tuberculosis
AUPP873799A0 (en) 1999-02-17 1999-03-11 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Pyridine compounds
GB9911594D0 (en) 1999-05-19 1999-07-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
GB9912413D0 (en) 1999-05-28 1999-07-28 Pfizer Ltd Compounds useful in therapy
GB9928499D0 (en) 1999-12-03 2000-02-02 Zeneca Ltd Chemical processes and intermediates
HUP0303494A3 (en) 2000-12-15 2009-08-28 Vertex Pharma Parmaceutical compositions containing bacterial gyrase inhibitors and uses thereof
US6951961B2 (en) 2002-05-17 2005-10-04 Marina Nikolaevna Protopopova Methods of use and compositions for the diagnosis and treatment of infectious disease
CA2485586A1 (en) 2002-05-17 2003-11-27 Sequella, Inc. Methods of use and compositions for the diagnosis and treatment of infectious disease
KR101052433B1 (ko) 2002-06-13 2011-07-29 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 자이라제 및/또는 토포이소머라제 ⅳ 억제제로서의 2-우레이도-6-헤테로아릴-3ｈ-벤조이미다졸-4-카복실산 유도체 및 이를 포함하는 세균 감염 치료용 약제학적 조성물
SI2301544T1 (sl) 2002-07-25 2013-01-31 Janssen Pharmaceutica, N.V. Derivati kinolina kot vmesne spojine za mikobakterijske inhibitorje
TWI347946B (en) 2002-10-11 2011-09-01 Otsuka Pharma Co Ltd 2,3-dihydro-6-nitroimidazo[2,1-b]oxazole compound
MY145079A (en) 2002-10-15 2011-12-15 Otsuka Pharma Co Ltd 1-substituted-4-nitroimidazole compound and method for preparing the same
US7569591B2 (en) 2003-01-31 2009-08-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gyrase inhibitors and uses thereof
US8193352B2 (en) 2003-01-31 2012-06-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gyrase inhibitors and uses thereof
US7618974B2 (en) 2003-01-31 2009-11-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gyrase inhibitors and uses thereof
US7582641B2 (en) 2003-01-31 2009-09-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gyrase inhibitors and uses thereof
US8404852B2 (en) 2003-01-31 2013-03-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gyrase inhibitors and uses thereof
JP4787529B2 (ja) 2004-04-09 2011-10-05 大塚製薬株式会社 医薬組成物
KR20070107123A (ko) 2005-02-16 2007-11-06 아칠리온 파르마세우티칼스 인코포레이티드 항-감염제들로서의 새로운 이소티아졸로퀴놀론들 및 관련화합물들
CA2606675C (en) 2005-05-25 2013-02-19 Janssen Pharmaceutica N.V. Process for preparing (alpha s, beta r)-6-bromo-alpha-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-methoxy-alpha-1-naphthalenyl-beta-phenyl-3-quinolineethanol
EP1948635A1 (en) 2005-11-07 2008-07-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Benzimidazole derivatives as gyrase inhibitors
TWI386401B (zh) 2006-03-27 2013-02-21 Daiichi Seiyaku Co 醫藥用水合物
GB0724349D0 (en) 2007-12-13 2008-01-30 Prolysis Ltd Antibacterial agents
US8481544B2 (en) 2006-06-22 2013-07-09 Biota Europe Limited Antibacterial compositions
GB0612428D0 (en) 2006-06-22 2006-08-02 Prolysis Ltd Antibacterial agents
JP5253168B2 (ja) 2006-08-15 2013-07-31 公益財団法人微生物化学研究会 抗菌剤及びそれを含むヨーネ病治療剤
EP2102199B1 (en) 2006-12-04 2011-04-27 AstraZeneca AB Antibacterial polycyclic urea compounds
GB0724342D0 (en) 2007-12-13 2008-01-30 Prolysis Ltd Anitbacterial compositions
WO2009156966A1 (en) 2008-06-25 2009-12-30 Ranbaxy Laboratories Limited Benzothiazoles and aza-analogues thereof use as antibacterial agents
JP5339840B2 (ja) 2008-10-02 2013-11-13 公益財団法人微生物化学研究会 抗ｘｄｒ−ｔｂ薬、抗ｍｄｒ−ｔｂ薬、及び併用抗結核薬
WO2011031926A1 (en) * 2009-09-11 2011-03-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions of n-benzyl-3-(4-chlorophenyl)-2-[methyl-[2-oxo-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl) acetyl]amino]-n-[3-(4-pyridyl)-1-[2-[4-pyridyl)ethyl]propanamide and uses thereof
EP2475666A2 (en) 2009-09-11 2012-07-18 Trius Therapeutics, Inc. Gyrase inhibitors
CA2777741A1 (en) 2009-10-16 2011-04-21 Rib-X Pharmaceuticals, Inc. Antimicrobial compounds and methods of making and using the same
US9181234B2 (en) 2010-10-08 2015-11-10 Biota Europe Ltd. Antibacterial compounds
EP2468746A1 (en) 2010-12-23 2012-06-27 The University of Queensland Benzothiazinone compounds and their use as anti-tuberculosis agents
RU2609259C2 (ru) 2011-01-14 2017-01-31 Сперо Тринем, Инк. Пиримидиновые ингибиторы гиразы и топоизомеразы iv
BR112013017985B1 (pt) 2011-01-14 2021-06-29 Spero Therapeutics Inc. Formas sólidas de inibidor de girase (r)-1-etil-3-[6-flúor-5-[2-(1-hidróxi-1-metil-etil)pirimidin- 5-il]-7-(tetra-hidrofuran-2-il)-1h-benzimidazol-2-il]ureia, seu sal de ácido clorídrico, método de preparação das mesmas e composição farmacêutica que os compreende
AU2012205420B2 (en) 2011-01-14 2016-12-08 Spero Therapeutics, Inc. Process of making gyrase and topoisomerase IV inhibitors
RU2013137753A (ru) * 2011-01-14 2015-02-20 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Твердые формы ингибитора гиразы (r)-1-этил-3-[5-[2-(1-гидрокси-1-метилэтил)пиримидин-5-ил]-7-(тетрагидрофуран-2-ил)-1н-бензимидазол-2-ил]мочевины
CN102276598B (zh) 2011-05-27 2014-11-05 四川大学 苯并噻嗪硫酮衍生物及其制备方法和用途
EP2721026B1 (en) * 2011-06-20 2016-03-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phosphate esters of gyrase and topoisomerase inhibitors
JP2015514063A (ja) 2012-03-22 2015-05-18 ビオタ ヨーロッパ リミテッドＢｉｏｔａ Ｅｕｒｏｐｅ Ｌｔｄ 抗菌化合物
US9572809B2 (en) 2012-07-18 2017-02-21 Spero Trinem, Inc. Combination therapy to treat Mycobacterium diseases
TWI595002B (zh) 2012-07-18 2017-08-11 思沛羅三南公司 （Ｒ）－２－（５－（２－（３－乙基脲基）－６－氟－７－（四氫呋喃－２－基）－１Ｈ－苯并［ｄ］咪唑－５－基）嘧啶－２－基）丙烷－２－基磷酸二氫鹽之固體形式及其鹽

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200503708A (en) * 2003-01-31 2005-02-01 Vertex Pharma Gyrase inhibitors and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
WO2014014845A1 (en) 2014-01-23
US20140045791A1 (en) 2014-02-13
US20170128471A1 (en) 2017-05-11
TW201418246A (zh) 2014-05-16
US9572809B2 (en) 2017-02-21
US9937192B2 (en) 2018-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI631118B (zh) 治療分枝桿菌疾病之組合療法
AU2012205415B2 (en) Pyrimidine gyrase and topoisomerase IV inhibitors
US9018216B2 (en) Solid forms of (R)-2-(5-(2-(3-ethylureido)-6-fluoro-7-(tetrahydrofuran-2-yl)-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)pyrimidin-2-yl)propan-2-yl dihydrogen phosphate and salts thereof
Anderson et al. Antibacterial agents: chemistry, mode of action, mechanisms of resistance and clinical applications
DE60131015T2 (de) Bakterielle gyrase-hemmer und deren verwendung
EP2721026B1 (en) Phosphate esters of gyrase and topoisomerase inhibitors
KR20170008320A (ko) 니코틴아미드 리보시드 유사체 및 그의 제약 조성물 및 용도
ES2705923T3 (es) Formas sólidas de inhibidor de girasa (R)-1-etil-3-[6-fluoro-5-[2-(1-hidroxi-1-metil-etil)pirimidin-5-il]-7-(tetrahidrofuran-2-il)-1H-bencimidazol-2-il]urea
MX2007001053A (es) Analogos de fosfonato de compuestos inhibidores de vih.
NZ612961B2 (en) Pyrimidine gyrase and topoisomerase iv inhibitors
NZ612912A (en) Solid forms of gyrase inhibitor (r)-1-ethyl-3-[5-[2-{ 1-hydroxy-1-methyl-ethyl} pyrimidin-5-yl]-7-(tetrahydrofuran-2-yl} -1h-benzimidazol-2-yl]urea
NZ612912B2 (en) Solid forms of gyrase inhibitor (r)-1-ethyl-3-[5-[2-{1-hydroxy-1-methyl-ethyl}pyrimidin-5-yl]-7-(tetrahydrofuran-2-yl}-1h-benzimidazol-2-yl]urea