JP5339840B2

JP5339840B2 - 抗ｘｄｒ−ｔｂ薬、抗ｍｄｒ−ｔｂ薬、及び併用抗結核薬

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Publication number: JP5339840B2
Application number: JP2008257664A
Authority: JP
Inventors: 良昭高橋; 雅之五十嵐; 全司岡田
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 2008-10-02
Filing date: 2008-10-02
Publication date: 2013-11-13
Anticipated expiration: 2028-10-02
Also published as: CA2739505C; CN102186872B; ES2557598T3; US9040502B2; CA2739505A1; CN102186872A; EP2345660A4; CA2873815A1; JP2010083847A; US20110237530A1; WO2010038874A1; CA2873815C; EP2345660B1; EP2345660A1

Description

本発明は、超多剤耐性結核菌（ＸＤＲ−ＴＢ）に対して有効な抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び多剤耐性結核菌（ＭＤＲ−ＴＢ）に対して有効な抗ＭＤＲ−ＴＢ薬、並びに薬剤感受性結核菌に対して有効な併用抗結核薬に関する。

結核は、世界中の感染症の中で単独の感染症として死亡者数の最も多い疾患として知られている。結核菌は、薬の服用を途中でやめてしまうなどの誤った治療で耐性が生じやすく、例えば、多剤耐性結核菌（ＭＤＲ−ＴＢ）が知られている。
前記多剤耐性結核菌は、効き目が強い第１選択薬のイソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）、及びリファンピシン（ＲＦＰ）に対して、耐性を有する菌である。

近年、前記多剤耐性結核菌の中に、上記第１選択薬に加えて、第２選択薬のフルオロキノロン系薬と、少なくともアミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、カプレオマイシン（ｃａｐｒｅｏｍｙｃｉｎ）、及びカナマイシン（ｋａｎａｍｙｃｉｎ）の１種とに対して耐性を有する超多剤耐性結核菌（ＸＤＲ−ＴＢ）が検出され、大きな問題となっている（例えば、非特許文献１〜２参照）。また、前記超多剤耐性結核菌は、日本国内においても結核患者から検出されており、前記患者は隔離せざるをえず深刻な問題となっている（例えば、非特許文献３参照）。
これまでに超多剤耐性結核菌に対して優れた薬効を有する治療薬は開発されておらず、一刻も早い治療薬の開発が求められているのが現状である。

青木正和、複十字、５、１６−１７、２００７鹿住祐子ら、Ｋｅｋｋａｋｕ、Ｖｏｌ．８２、Ｎｏ．１２：８９１−８９６、２００７中日新聞、２００６年１２月５日、夕刊、一面

本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、超多剤耐性結核菌に対して優れた薬効を有する抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び多剤耐性結核菌に対して優れた薬効を有する抗ＭＤＲ−ＴＢ薬、並びに既存の抗結核薬に感受性を有する結核菌に対して優れた薬効を有する併用抗結核薬を提供することを目的とする。

前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、本発明者らによるカプラザマイシンの誘導体の先願発明（ＷＯ２００４／０６７５４４号パンフレット）のうち、下記構造式（１）で表される化合物が、超多剤耐性結核菌、及び多剤耐性結核菌に対し、優れた抗菌活性を有すること、及び、下記構造式（１）で表される化合物と、リファンピシンを含む抗結核薬、並びに、イソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）を含む抗結核薬から選ばれる少なくとも１種とを併用すると、既存の抗結核薬に感受性を有する結核菌に対し、優れた抗菌活性を有することを見出し、下記構造式（１）で表される化合物の抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、抗ＭＤＲ−ＴＢ薬、及び併用抗結核薬としての用途発明を完成するに至った。

本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞下記構造式（１）で表される化合物を含むことを特徴とする抗ＸＤＲ−ＴＢ薬である。
＜２＞下記構造式（１）で表される化合物を含むことを特徴とする抗ＭＤＲ−ＴＢ薬である。
＜３＞下記構造式（１）で表される化合物を含む薬と、
リファンピシン（ＲＦＰ）を含む抗結核薬、及びイソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）を含む抗結核薬から選ばれる少なくとも１種の抗結核薬と、
を併用することを特徴とする併用抗結核薬である。

本発明によれば、前記従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、超多剤耐性結核菌に対して優れた薬効を有する抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び多剤耐性結核菌に対して優れた薬効を有する抗ＭＤＲ−ＴＢ薬、並びに既存の抗結核薬に感受性を有する結核菌に対して優れた薬効を有する併用抗結核薬を提供することができる。

（抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、抗ＭＤＲ−ＴＢ薬）
本発明の抗ＸＤＲ−ＴＢ薬は、下記構造式（１）で表される化合物を少なくとも含み、必要に応じて、更にその他の成分を含んでなる。
本発明の抗ＭＤＲ−ＴＢ薬は、下記構造式（１）で表される化合物を少なくとも含み、必要に応じて、更にその他の成分を含んでなる。

前記ＸＤＲ−ＴＢ（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；超多剤耐性結核菌）とは、２つの主な第１選択薬であるイソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）、及びリファンピシン（ＲＦＰ）に対して耐性を有し、かつ、第２選択薬のフルオロキノロン系薬と、少なくともアミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、カプレオマイシン（ｃａｐｒｅｏｍｙｃｉｎ）、及びカナマイシン（ｋａｎａｍｙｃｉｎ）の１種とに対して耐性を有する菌である。
前記ＭＤＲ−ＴＢ（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；多剤耐性結核菌）とは、２つの主な第１選択薬であるイソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）、及びリファンピシン（ＲＦＰ）に対して耐性を有する菌である。

−構造式（１）で表される化合物−
前記構造式（１）で表される化合物の体系的命名による名称は、（Ｓ）−２−｛［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−（５−ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−３，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｏｘｏｌａｎ−２−ｙｌ）ｏｘｙ］［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ｄｉｏｘｏ−１，２，３，４−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−１−ｙｌ）−３，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｏｘｏｌａｎ−２−ｙｌ］−（Ｓ）−ｍｅｔｈｙｌ｝−Ｎ−（４−ｂｕｔｙｌｐｈｅｎｙｌ）−１，４−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−３−ｏｘｏ−１Ｈ−１，４−ｄｉａｚｅｐｉｎｅ−５−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅである。以下、本明細書では、「ＣＰＺＥＮ−４５」と称することがある。

−−物理化学的性状−−
前記構造式（１）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩の物理化学的性状としては、次の通りである。
（１）融点：１７５℃−１７７℃（分解）
（２）比旋光度：［α］_Ｄ ^２２＋７９°（ｃ１，ＭｅＯＨ）
（３）マススペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）：ｍ／ｚ８０１［Ｍ＋ＣＦ_３ＣＯＯＨ−Ｈ］⁻
（４）^１９Ｆ−ＮＭＲスペクトル（３７６．５ＭＨｚ，重ＤＭＳＯ中、フレオン１１内部標準）：δ−７３．８６（ｓ，ＣＦ_３）
（５）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，重水中、ＴＭＳ内部標準）：図１にチャート図を示す。
（６）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５．８ＭＨｚ，重水中、ＴＭＳ内部標準）：図２にチャート図を示す。

化合物が、前記構造式（１）で表される構造を有するか否かは、適宜選択した各種の分析方法により確認することができ、例えば、前記マススペクトル、前記^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、前記^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル、等の分析を行うことにより、確認することができる。

前記ＣＰＺＥＮ−４５は、塩の状態であってもよい。前記塩としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上述のトリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、ヒドロキシ酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、安息香酸塩、酪酸塩、マレイン酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、リンゴ酸塩のようなカルボン酸塩、ハロゲン化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩のような無機酸塩、アルギニン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩のようなアミノ酸塩、メタンスルホン酸塩、p−トルエンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩等が挙げられる。

−−ＣＰＺＥＮ−４５の製造方法−−
前記ＣＰＺＥＮ−４５の製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＷＯ２００４／０６７５４４号パンフレットに記載の方法により得ることができる。
また、前記ＣＰＺＥＮ−４５の塩の製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬理学的に許容できる、上述のトリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、ヒドロキシ酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、安息香酸塩、酪酸塩、マレイン酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、リンゴ酸塩のようなカルボン酸塩、ハロゲン化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩のような無機酸塩、アルギニン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩のようなアミノ酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩などと、通常公知の方法を用いて製造することができる。

−ＣＰＺＥＮ−４５の含有量−
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬中のＣＰＺＥＮ−４５、乃至その塩の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬は、ＣＰＺＥＮ−４５、乃至その塩そのものであってもよい。

−その他の成分−
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬中のその他の成分としては、特に制限はなく、例えば、薬理学的に許容され得る担体の中から目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エタノール、水、デンプンなどが挙げられる。
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬中の前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、ＣＰＺＥＮ−４５、乃至その塩の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。

−使用−
なお、前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬は、単独で使用されてもよいし、後述するように他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用されてもよい。また、前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬は、他の成分を有効成分とする医薬中に、配合された状態で使用されてもよい。

−剤型−
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、粉末状、カプセル状、錠剤状、液状等の剤型とすることができる。これらの剤型の前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬は、常法に従い製造することができる。

−投与−
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬の投与方法としては、特に制限はなく、例えば、前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬の剤型などに応じて適宜選択することができ、経口又は非経口で投与することができる。
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬の投与量としては、特に制限はなく、投与対象個体の年齢、体重、体質、症状、他の成分を有効成分とする医薬の投与の有無など、様々な要因を考慮して適宜選択することができる。
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬の投与時期としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、及び抗ＭＤＲ−ＴＢ薬の投与対象となる動物種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、特にヒトが好適に挙げられる。

（併用抗結核薬）
本発明の併用抗結核薬は、前記構造式（１）で表される化合物（ＣＰＺＥＮ−４５）を含む薬と、既存の抗結核薬から選ばれる少なくとも１種の抗結核薬を少なくとも含み、必要に応じて、更にその他の薬を含んでなる。
本発明の併用抗結核薬は、既存の抗結核薬に感受性を有する結核菌に好適に使用することができる。

−ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬−
前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上述の抗ＸＤＲ−ＴＢ薬、抗ＭＤＲ−ＴＢ薬などが挙げられる。

−既存の抗結核薬−
前記既存の抗結核薬としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、第十五改正日本薬局方（平成１８年３月３１日厚生労働省告示第２８５号）に記載されているものなどが挙げられる。
前記第十五改正日本薬局方に挙げられている抗結核薬としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、リファンピシン（ＲＦＰ）を含む抗結核薬、リファンピシンの誘導体を含む抗結核薬、イソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）を含む抗結核薬、イソニコチン酸ヒドラジドの誘導体を含む抗結核薬が挙げられ、これらの中でも、リファンピシン（ＲＦＰ）を含む抗結核薬、イソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）を含む抗結核薬が好ましい。
前記リファンピシンの誘導体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、リファブチン、リファペンチンなどが挙げられる。
前記イソニコチン酸ヒドラジドの誘導体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、イソニコチン酸ヒドラジド・メタンスルフォン酸ナトリウム（ＩＨＭＳ）、グルクロン酸ナトリウム・イソニコチニールヒドラゾン（ＩＮＨＧ）、ピルビン酸カルシウム・イソニアゾン（ＩＰ）などが挙げられる。

−使用−
なお、前記併用抗結核薬は、上述の薬のみを併せて使用されてもよいし、他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用されてもよい。

−剤型−
前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、粉末状、カプセル状、錠剤状、液状等の剤型とすることができる。これらの剤型の前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬は、常法に従い製造することができる。
前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の剤型の組み合わせとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ＣＰＺＥＮ−４５の剤型を注射剤とし、前記既存の抗結核薬の剤型を液状とすることができる。

−投与−
前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の投与方法としては、特に制限はなく、例えば、前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の剤型などに応じて適宜選択することができ、経口又は非経口で投与することができる。
前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の投与方法の組み合わせとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ＣＰＺＥＮ−４５を非経口により投与し、前記既存の抗結核薬を経口により投与することができる。

前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の投与量としては、特に制限はなく、投与対象個体の年齢、体重、体質、症状、他の成分を有効成分とする医薬の投与の有無など、様々な要因を考慮して適宜選択することができる。
前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の投与量の組み合わせとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬の投与量を前記既存の抗結核薬の投与量より多くして投与することができる。

前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の投与時期としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の投与時期の組み合わせとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記両薬を同時期に投与することができる。

前記ＣＰＺＥＮ−４５を含む薬、及び前記既存の抗結核薬の投与対象となる動物種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、特にヒトが好適に挙げられる。

以下に実施例及び試験例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例及び試験例に何ら限定されるものではない。また、以下の実施例及び試験例中、「％」は、特に明記のない限り「質量％」を表す。

（実施例１：ＣＰＺＥＮ−４５の製造）
＜カプラザマイシン混合物からカプラゼンの合成＞
下記反応式に示すようにして、カプラザマイシンＡ〜Ｇの混合物５０．０ｇを酢酸―水（４：１）の混合溶媒５００ｍＬに溶解し、この溶液を７０℃にて３時間加熱攪拌して反応せしめた。反応液を濃縮し、得られたシロップ状の濃縮液にアセトンを加えた。生じた沈殿をろ取し、アセトンで洗浄して得られた褐色固体をメタノール―水（１：１）の混合溶媒１Ｌに溶解し、活性炭を用いて脱色した後に濃縮してカプラゼンの粗固体の２４．３ｇを得た。この固体を水−アセトン（１：２、７５０ｍＬ）から結晶化を行い、無色結晶のカプラゼンを１７．２ｇ得た。

＜カプラゼンから５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼンの合成＞
下記反応式に示すようにして、上記で得られた結晶状のカプラゼン５０．０ｇを水―ジオキサン(２：１)の混合溶媒６００ｍＬに溶解し、この溶液にトリエチルアミン１３．６ｇと二炭酸ジ−ｔ−ブチル２４．７ｇを加え、室温にて５時間攪拌した。反応液に濃アンモニア水５ｍＬを加え余剰の試薬を分解後、濃縮して無色固体の５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン（トリエチルアミンとの塩を形成）を６７．２ｇ得た。
上記５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン（トリエチルアミンとの塩を形成）の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，重ＤＭＳＯ中、ＴＭＳ内部標準）を測定したところ、以下の通りであった。
δ １．０７(９Ｈ，ｔ， (ＣＨ _３ＣＨ_２)_３Ｎ)，１．３６(９Ｈ，ｓ，（ＣＨ_３）_３Ｃ−Ｏ)，２．３２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３Ｎ−５’’’），２．９４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３Ｎ−８’’’），５．０１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１’’），５．５７（１Ｈ，ｄ，Ｈ−１’），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−５），６．３９（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｈ−３’’’），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−６）。

＜５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼンから５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン−１’’’−アミド誘導体の合成＞
下記反応式に示すようにして、上記で得られた５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン３４．８ｇを２−プロパノール−水（１９：１）の混液７００ｍＬに溶解し、この溶液に４−ブチルアニリン７．０３ｇ、及び４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド水和物２０．０ｇを加えて室温で６時間攪拌し反応せしめた。
反応液を濃縮し、得られたシロップを５％硫酸水素カリウム水溶液８００ｍＬに溶解した。この水溶液を酢酸エチルで洗浄した後、氷冷下に１０％炭酸ナトリウム水溶液３００ｍＬを加えて中和した。生じた不溶物を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後に無水硫酸ナトリウムにて乾燥し、濃縮して淡黄色固体の５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン−１’’’−アミド誘導体を３２．２ｇ得た。
上記５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン−１’’’−アミド誘導体の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，重ＤＭＳＯ中、ＴＭＳ内部標準）を測定したところ、以下の通りであった。
δ ０．８９（３Ｈ，ｔ，ＣＨ _３（ＣＨ_２）_３Ｃ_６Ｈ_４ＮＨ），１．３１（９Ｈ，ｓ，（ＣＨ_３）_３Ｃ−Ｏ），２．３５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３Ｎ−５’’’），２．９３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３Ｎ−８’’’），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−５），５．６３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１’），６．３９（１Ｈ，ｔ，Ｈ−３’’’），７．１３ａｎｄ７．５１（ｅａｃｈ２Ｈ，ｄ，ＣＨ_３（ＣＨ_２）_３Ｃ _６Ｈ _４ＮＨ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−６），１０．１２（１Ｈ，ｓ，ＣＨ_３（ＣＨ_２）_３Ｃ_６Ｈ_４ＮＨ），１１．３０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−３）。

＜５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン−１’’’−アミド誘導体からＣＰＺＥＮ−４５の合成＞
下記反応式に示すようにして、上記で得られた５’’−Ｎ−Ｂｏｃ−カプラゼン−１’’’−アミド誘導体２３．８ｇをトリフルオロ酢酸−メタノール（４：１）の混合溶媒２４０ｍＬに溶解した。この溶液を室温で２時間反応せしめてアミノ保護基の脱離を行なった。反応液を濃縮し、得られたシロップ状濃縮液にジエチルエーテルを加え、生じた沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、乾燥して淡黄色固体２７．３ｇ（ＣＰＺＥＮ−４５の２トリフルオロ酢酸塩）を得た。
前記固体を１−ブタノール１２００ｍＬに溶解し、溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液、水で順次洗浄した後、有機層を活性炭により脱色処理し、濃縮してＣＰＺＥＮ−４５のトリフルオロ酢酸塩２１．１ｇを無色固体として得た。次いで、メタノール−ヘキサンより結晶化を行なって、ＣＰＺＥＮ−４５のトリフルオロ酢酸塩の無色結晶を１７．６ｇ得た。

前記結晶として得られたＣＰＺＥＮ−４５のトリフルオロ酢酸塩の物理化学的性状を測定したところ、以下の通りであり、ＣＰＺＥＮ−４５が、下記構造式（１）で表される化合物であることが確認された。
（１）融点：１７５℃−１７７℃（分解）
（２）比旋光度：［α］_Ｄ ^２２＋７９°（ｃ１，ＭｅＯＨ）
（３）マススペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）：ｍ／ｚ８０１［Ｍ＋ＣＦ_３ＣＯＯＨ−Ｈ］⁻
（４）^１９Ｆ−ＮＭＲスペクトル（３７６．５ＭＨｚ，重ＤＭＳＯ中、フレオン１１内部標準）：δ−７３．８６（ｓ，ＣＦ_３）
（５）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，重水中、ＴＭＳ内部標準）：図１にチャート図を示す。
（６）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５．８ＭＨｚ，重水中、ＴＭＳ内部標準）：図２にチャート図を示す。

また、得られたＣＰＺＥＮ−４５について、以下の試験例１〜３を実施した。

（試験例１）
−超多剤耐性結核菌（ＸＤＲ−ＴＢ）に対するＣＰＺＥＮ−４５の有効性評価−
マウス超多剤耐性結核菌感染モデルを用い、ＣＰＺＥＮ−４５を投与して治療実験を行い、その有効性について調査した。

−−使用菌株−−
前記超多剤耐性結核菌として、臨床分離株Ｍ. ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＸＤＲ−ＴＢ（０３０６−０２０６）を用いた。前記菌の薬剤感受性について、比率法を用いて調べた結果を表１に示す。なお、ピラジナミド（ＰＺＡ）に対する感受性は、ｐｙｒａｚｉｎａｍｉｄａｓｅ（ＰＺａｓｅ）の活性の有無により判定した。ＰＺａｓｅ活性については、日本結核病学会誌ｋｅｋｋａｋｕＶｏｌ．７５，Ｎｏ．９，ｐｐ．５６１−５６２，２０００に記載の方法に準じて行った。
表１の結果から、Ｍ. ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＸＤＲ−ＴＢ（０３０６−０２０６）は、ストレプトマイシン（ＳＭ）、イソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）、リファンピシン（ＲＦＰ）、エタンブトール（ＥＢ）、カナマイシン（ＫＭ）、エチオナミド（ＴＨ）、エンビオマイシン（ＥＶＭ）、パラアミノサリチル酸（ＰＡＳ）、レボフロキサシン（ＬＶＦＸ）、及びピラジナミド（ＰＺＡ）に耐性であり、サイクロセリン（ＣＳ）に感受性であることがわかった。

−−薬剤投与−−
マウスとして、６週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを下記のグループ１から８それぞれに５匹（合計４０匹）使用した。前記マウスに、前記超多剤耐性結核菌５×１０^５ｃｆｕを静脈（ｉ．ｖ．）接種した。前記接種１日後から、薬剤を投与した。前記薬剤としては、ＣＰＺＥＮ−４５、又はストレプトマイシン（ＳＭ、対照薬）を用いた。前記薬剤の投与方法は、各薬剤を生理食塩水で溶解し、これを背部皮下４ヶ所（左上背部、右上背部、左下背部、右下背部）に０．１２５ｍＬずつ注射し、計０．５ｍＬを皮下注射した。各グループの投与薬剤、及び投与量を下記に示す。
グループ１：薬剤・・・なし、投与量・・・なし（コントロール）
グループ２：薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、投与量・・・６．３ｍｇ／ｋｇ
グループ３：薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、投与量・・・２５ｍｇ／ｋｇ
グループ４：薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、投与量・・・１００ｍｇ／ｋｇ
グループ５：薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、投与量・・・２００ｍｇ／ｋｇ
グループ６：薬剤・・・ＳＭ、投与量・・・２５ｍｇ／ｋｇ
グループ７：薬剤・・・ＳＭ、投与量・・・１００ｍｇ／ｋｇ
グループ８：薬剤・・・ＳＭ、投与量・・・２００ｍｇ／ｋｇ
前記薬剤の投与回数は、第１週目が５回（月〜金）、第２週目が５回（月〜金）、第３週目が２回（月、木）、第４週目が２回（月、木）の合計１４回投与した。

−−結核菌数（ＣＦＵ）の測定−−
前記薬剤投与開始から３０日目にマウスを屠殺（ｓａｃｒｉｆｉｃｅ）し、肺、肝、及び脾をそれぞれホモジネートし適宜希釈した後、ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ７Ｈ１１寒天培地にまき、３７℃で培養し、１４日後に出現したコロニーを数えて、薬剤のｉｎｖｉｖｏにおける超多剤耐性結核菌に対する有効性を調べた。結果を図３から図５に示す。
図３は、肺における結核菌数を測定した結果を示すグラフであり、縦軸は肺の単位重量あたりの菌数（ｃｆｕ／ｇ（ｌｏｇ））を示し、各棒グラフは、左から順に前記グループ１からグループ８の順に記載されている。図４は、肝における結核菌数を測定した結果を示すグラフであり、縦軸は肝の単位重量あたりの菌数（ｃｆｕ／ｇ（ｌｏｇ））を示し、各棒グラフは、左から順に前記グループ１からグループ８の順に記載されている。図５は、脾における結核菌数を測定した結果を示すグラフであり、縦軸は脾の単位重量あたりの菌数（ｃｆｕ／ｇ（ｌｏｇ））を示し、各棒グラフは、左から順に前記グループ１からグループ８の順に記載されている。
図３から図５の結果から、ＳＭは抗菌効果（超多剤耐性結核菌の減少）が全くなかったのに対し、ＣＰＺＥＮ−４５は濃度に依存にして超多剤耐性結核菌に対し、有意差をもって抗菌効果があることが示された。

（試験例２）
−多剤耐性結核菌（ＭＤＲ−ＴＢ）、及び超多剤耐性結核菌（ＸＤＲ−ＴＢ）に対するＣＰＺＥＮ−４５の抗菌スペクトル−
薬剤（ストレプトマイシン（ＳＭ）、イソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）、リファンピシン（ＲＦＰ）、エタンブトール（ＥＢ）、カナマイシン（ＫＭ）、エチオナミド（ＴＨ）、エンビオマイシン（ＥＶＭ）、パラアミノサリチル酸（ＰＡＳ）、レボフロキサシン(ＬＶＦＸ)等）に耐性を有する各種多剤耐性結核菌、及び超多剤耐性結核菌（ＸＤＲ−ＴＢ）に対するＣＰＺＥＮ−４５の抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、１０％ＯＡＤＣｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ７Ｈ１０寒天培地上、３７℃で培養、１４日後に、倍数希釈法により測定した。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定結果を表２に示す。
表２の結果から、ＣＰＺＥＮ−４５は、各種の多剤耐性結核菌に対する抗菌活性を有していることが判った。

（試験例３）
−薬剤感受性結核菌に対するＣＰＺＥＮ−４５と、既存抗結核薬との併用効果−
マウスＨ３７Ｒｖヒト結核菌感染モデルを用い、ＣＰＺＥＮ−４５と、既存の抗結核薬とを併用投与して治療実験を行い、その有効性について調査した。

−−使用菌株−−
前記薬剤感受性結核菌として、Ｈ３７Ｒｖヒト結核菌を用いた。

−−薬剤投与−−
マウスとして、６週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを下記のグループ１から１０それぞれに５匹（合計５０匹）使用した。前記マウスに、前記Ｈ３７Ｒｖヒト結核菌５×１０^５ｃｆｕを静脈（ｉ．ｖ．）接種した。前記接種１日後から、薬剤を投与した。前記薬剤としては、ＣＰＺＥＮ−４５、リファンピシン（ＲＦＰ）、イソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）を用いた。前記薬剤のうち、ＣＰＺＥＮ−４５は、生理食塩水で溶解し、これを背部皮下４ヶ所（左上背部、右上背部、左下背部、右下背部）に０．１２５ｍＬずつ注射し、計０．５ｍＬを皮下注射した。また、ＲＦＰ、及びＩＮＨは、それぞれ５％アラビアゴム（蒸留水に溶かしたもの）で溶解し、これを０．２ｍＬ経口ゾンデで経口食道内より注入した。各グループの投与薬剤、及び投与量を下記に示す。
グループ１（コントロール）：
薬剤・・・なし、投与量・・・なし
グループ２（ＲＦＰ）：
薬剤・・・ＲＦＰ、投与量・・・５．０ｍｇ／ｋｇ
グループ３（ＩＮＨ）：
薬剤・・・ＩＮＨ、投与量・・・１．５ｍｇ／ｋｇ
グループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）：
薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、投与量・・・２５ｍｇ／ｋｇ
グループ５（ＲＦＰ＋ＩＮＨ）：
薬剤・・・ＲＦＰ、ＩＮＨ
投与量・・・ＲＦＰ５．０ｍｇ／ｋｇ、ＩＮＨ１．５ｍｇ／ｋｇ
グループ６（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ）：
薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、ＲＦＰ
投与量・・・ＣＰＺＥＮ−４５２５ｍｇ／ｋｇ、ＲＦＰ５．０ｍｇ／ｋｇ
グループ７（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＩＮＨ）：
薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、ＩＮＨ
投与量・・・ＣＰＺＥＮ−４５２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＮＨ１．５ｍｇ／ｋｇ
グループ８（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）：
薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、ＲＦＰ、ＩＮＨ
投与量・・・ＣＰＺＥＮ−４５２５ｍｇ／ｋｇ、ＲＦＰ５．０ｍｇ／ｋｇ、
ＩＮＨ１．５ｍｇ／ｋｇ
グループ９（ＣＰＺＥＮ−４５ｌｏｗ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）：
薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、ＲＦＰ、ＩＮＨ
投与量・・・ＣＰＺＥＮ−４５６．３ｍｇ／ｋｇ、ＲＦＰ５．０ｍｇ／ｋｇ、
ＩＮＨ１．５ｍｇ／ｋｇ
グループ１０（ＣＰＺＥＮ−４５ｌｏｗ）：
薬剤・・・ＣＰＺＥＮ−４５、投与量・・・６．３ｍｇ／ｋｇ
前記薬剤の投与回数は、第１週目が５回（月〜金）、第２週目が５回（月〜金）、第３週目が２回（月、木）、第４週目が２回（月、木）の合計１４回投与した。

−−結核菌数（ＣＦＵ）の測定−−
前記薬剤投与開始から３０日目にマウスを屠殺（ｓａｃｒｉｆｉｃｅ）し、肺、肝、及び脾をそれぞれホモジネートして、ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ７Ｈ１１寒天培地にまき、３７℃で培養し、１４日後に出現したコロニーを数えて、併用薬剤のｉｎｖｉｖｏにおける薬剤感受性結核菌に対する有効性を調べた。結果を図６から図８に示す。

図６は、肺における結核菌数を測定した結果を示すグラフであり、縦軸は肺の単位重量あたりの菌数（ｃｆｕ／ｇ（ｌｏｇ））を示し、各棒グラフは、左から順に前記グループ１からグループ１０の順に記載されている。図６の結果から、グループ８（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）は、グループ５（ＲＦＰ＋ＩＮＨ）よりｓｔｕｄｅｎｔ’ｔ検定及びＴｕｒｋｅｙｋｒａｍｅｒ検定で結核菌数が有意に減少しており、ＣＰＺＥＮ−４５を併用したことによる相乗効果が出ていた。また、グループ９（ＣＰＺＥＮ−４５ｌｏｗ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）でもグループ５（ＲＦＰ＋ＩＮＨ）と比較して有意に結核菌数が減少していた。
さらに、グループ８（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）は、高濃度のＣＰＺＥＮ−４５を単独で用いたグループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）よりも有意に結核菌数が減少していた。また、グループ９（ＣＰＺＥＮ−４５ｌｏｗ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）は、低濃度のＣＰＺＥＮ−４５を単独で用いたグループ１０（ＣＰＺＥＮ−４５ｌｏｗ）よりも有意に結核菌数が減少していた。
そして、グループ７（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＩＮＨ）は、グループ３（ＩＮＨ）、及びグループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）と比較して、有意に結核菌数が減少しており、ＣＰＺＥＮ−４５を併用したことによる相乗効果が出ていた。
また、グループ６（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ）は、グループ２（ＲＦＰ）、及びグループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）と比較して、有意に結核菌数が減少していた。
以上から、肺では、ＣＰＺＥＮ−４５を、ＩＮＨと、ＲＦＰにさらに投与することにより相乗的効果が出ていた。この結果は、将来の臨床応用に重要なポイントとなると考えられる。

図７は、肝における結核菌数を測定した結果を示すグラフであり、縦軸は肝の単位重量あたりの菌数（ｃｆｕ／ｇ（ｌｏｇ））を示し、各棒グラフは、左から順に前記グループ１からグループ１０の順に記載されている。図７の結果から、グループ８（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）は、グループ５（ＲＦＰ＋ＩＮＨ）と比較して、結核菌数が有意に減少していた。また、グループ８（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）は、高濃度のＣＰＺＥＮ−４５を単独で用いたグループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）よりも有意に結核菌数が減少していた。
そして、グループ７（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＩＮＨ）は、グループ３（ＩＮＨ）、及びグループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）と比較して、結核菌数が減少していた。
また、グループ６（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＲＦＰ）は、グループ２（ＲＦＰ）、及びグループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）と比較して、相乗的に結核菌数が減少していた。
以上から、肝では、ＣＰＺＥＮ−４５と、ＲＦＰとの相乗効果が出ていた。また、ＣＰＺＥＮ−４５(２５ｍｇ／ｋｇ)を、ＩＮＨとＲＦＰにさらに投与することで、さらに結核菌数が減少することが判った。

図８は、脾における結核菌数を測定した結果を示すグラフであり、縦軸は脾の単位重量あたりの菌数（ｃｆｕ／ｇ（ｌｏｇ））を示し、各棒グラフは、左から順に前記グループ１からグループ１０の順に記載されている。図８の結果から、グループ９（ＣＰＺＥＮ−４５ｌｏｗ＋ＲＦＰ＋ＩＮＨ）は、グループ５（ＲＦＰ＋ＩＮＨ）と比較して、有意に結核菌数が減少していた。また、グループ７（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ＋ＩＮＨ）は、グループ３（ＩＮＨ）、及びグループ４（ＣＰＺＥＮ−４５ｈｉｇｈ）と比較して、有意に結核菌数が減少していた。
以上から、脾では、低濃度のＣＰＺＥＮ−４５（６．３ｍｇ／ｋｇ）を、ＩＮＨとＲＦＰにさらに投与することで、さらに有意に相乗効果が出ていた。

以上の結果から、高濃度のＣＰＺＥＮ−４５（２５ｍｇ／ｋｇ）のみならず、低濃度のＣＰＺＥＮ−４５（６．３ｍｇ／ｋｇ）でも、ＩＮＨとＲＦＰに加えて更に投与すると結核菌数減少効果の相乗効果が期待できることが判った。

本発明の抗ＸＤＲ−ＴＢ薬は、超多剤耐性結核菌に対して優れた抗菌活性を有しており、現在非常に大きな問題となっている超多剤耐性結核菌に感染した患者の治療に好適に用いることができる。
本発明の抗ＭＤＲ−ＴＢ薬は、多剤耐性結核菌に対して優れた抗菌活性を有しており、多剤耐性結核菌に感染した患者の治療に好適に用いることができる。
本発明の併用抗結核薬は、薬剤感受性の結核菌に対して優れた抗菌活性を有しており、従来の薬と比べて、治療期間の短縮などが期待できる。

図１は、ＣＰＺＥＮ−４５のトリフルオロ酢酸塩の重水中で測定した５００ＭＨｚにおける^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図２は、ＣＰＺＥＮ−４５のトリフルオロ酢酸塩の重水中で測定した１２５．８ＭＨｚにおける^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図３は、試験例１の肺における結核菌数を測定した結果を示すグラフである。図４は、試験例１の肝における結核菌数を測定した結果を示すグラフである。図５は、試験例１の脾における結核菌数を測定した結果を示すグラフである。図６は、試験例３の肺における結核菌数を測定した結果を示すグラフである。図７は、試験例３の肝における結核菌数を測定した結果を示すグラフである。図８は、試験例３の脾における結核菌数を測定した結果を示すグラフである。

Claims

下記構造式（１）で表される化合物を含むことを特徴とする抗超多剤耐性結核菌（ＸＤＲ−ＴＢ）薬。
下記構造式（１）で表される化合物を含むことを特徴とする抗多剤耐性結核菌（ＭＤＲ−ＴＢ）薬。
下記構造式（１）で表される化合物を含む薬と、
リファンピシン（ＲＦＰ）を含む抗結核薬、及びイソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）を含む抗結核薬から選ばれる少なくとも１種の抗結核薬と、
を併用することを特徴とする併用抗結核薬。