TWI526214B - 缺乏一種以上致血栓因子的血漿製品之製備方法 - Google Patents
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Description
本發明係關於一種製備缺乏一或多種致血栓因子的血漿製品之方法。本發明更關於以此方法獲得的血漿製品。
人類血漿中包括大量的化合物,其可能對治療及/或預防有所幫助,例如,凝血因子、免疫球蛋白或白蛋白。這就是為什麼目前已利用不同的技術發展出許多純化血漿製品的方法。
在所使用的技術中,乙醇分級分離可選擇性地分離血漿中的不同成分,在乙醇與低溫條件下,產生沉殿(參照Cohn et al.1946,J.AM.Chem.Soc.68,459)。然而,此增加在治療標準中仍需要進行額外的純化步驟,以移除可能誘發對接受患者有害或致病的過敏性反應的污染物。在血漿製品的額外純化步驟中,最常使用沉澱與層析分離技術。
例如其中一種技術為,在辛酸(caprylic acid)(亦稱為Octanoic acid)的存在下,進行蛋白質沉澱,以移除血漿中免疫球蛋白以外的大部分蛋白(參照Steinbuch et al.,Rev.Franç.Et.Clin.Et Biol.1969,XIV,1054)。
目前已發展各種利用層析技術以增加製品純度的方法。特別是可參照專利申請案EP 0703922與WO 99/64462,其揭露合併至少2個連續的層析步驟,一個使用陰離子交
換法,另一個使用陽離子交換法。此方法之特徵為在一般條件下使用陰離子交換,因此不會殘留IgG,但會固定在預純化步驟(pre-purification)的過程中共純化出來的其它大部分蛋白。
本申請人所申請之專利申請案WO 02/092632揭露一種血漿來源之人類免疫球蛋白濃縮物的製備方法,包括乙醇分級分離步驟,利用辛酸、磷酸三鈣或膨潤土使脂質及蛋白質污染物的沉澱步驟,以及利用鹼性陰離子交換者的層析分離,使免疫球蛋白吸附於層析擔體上。專利申請案WO 02/092632所述之方法也包括一病毒去活化步驟以及一濃縮步驟,經過濾、凍乾以獲得免疫球蛋白濃縮物。
本申請人所申請之專利申請案WO 2007/077365亦揭露一種製備缺乏抗-A與抗-B抗體之IgG濃縮物,包括親和性層析,其擔體含有與血型A與B抗原性相似之寡聚醣,且包括一病毒過濾步驟。以專利申請案WO 2007/077365方法所獲得之IgG濃縮物,以Coombs檢測間接試管內(in vitro)抗-A與抗-B抗體含量為陰性結果,以降低因這些抗體或其反應所造成的溶血及不良影響。
本發明關於血漿製品,如特定免疫球蛋白、多價免疫球蛋白、酵素、用於麻醉或重症看護之蛋白如白蛋白、纖維蛋白原或抗凝血酶。
已知經純化之血漿製品仍可能在治療與給予時會產生不良影響,特別是,原則上仍不認為這些製品完全不含有致血栓因子。當血漿製品在給予至病患時,這些致血栓凝
血因子FXII、FX、FIX、FVII、FVIII及/或FXI與其活性形式的存在可能會導致血栓的形成,甚至在某些極端例子中會導致病患死亡。在習知的方法中,沒有一種令人滿意可移除這些致血栓因子的方法,血栓因子的理化特性與其活性形式可能非常近似於含有治療特性,如免疫球蛋白的血漿製品。
因此,亟須一種純化方法製備源自於人類血漿之血漿製品,致血栓因子,如凝血因子FXI、FXII、FX、FIX、FVII及/或FVIII,特別是FXI及其活性形成的最終濃度為零或非常低,以此純化之血漿製品來治療患者並不會對患者的健康產生任何風險。
本發明人開發一種方法,其可有效地製備缺乏一或多種致血栓因子的血漿製品。
當致血栓因子為污染物存在於血漿製品中時,致血栓因子很可能會導致血栓的形成。特別是,致血栓因子可為凝血因子。特別是,凝血因子FVII、FVIII、FIX、FX、FXI與FXII及其活性形式為致血栓因子。
在一較佳實施例中,由本發明所獲得的血漿製品缺乏一或多種致血栓因子。特別是,此血漿製品缺乏凝血因子FVII、FVIII、FIX、FX、FXI及/或FXII及其活性形式。特別是,由本發明所獲得的血漿製品缺乏凝血因子FVII、FX、FXII與FXI及其活性形式。更特別是,本發明的血漿
製品缺乏凝血因子FVII及其活性形式FVIIa。更特別是,本發明的血漿製品缺乏凝血因子FX及其活性形式FXa。更特別是,本發明的血漿製品缺乏凝血因子FXI及其活性形式FXIa。更特別是,本發明的血漿製品缺乏凝血因子FXII及其活性形式FXIIa。
本發明驚人地發現在合併施行乙醇分級分離、以深層過濾器進行過濾-吸附、辛酸沉澱、以及層析法之中的至少二步驟,可有效地使血漿製品缺乏一或多種致血栓因子及其活性形式。
本發明更包括一種缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括組合下列至少兩個步驟,較佳至少三個步驟:- 乙醇分級分離步驟;- 過濾-吸附步驟;- 辛酸沉澱步驟;以及- 離子交換樹酯之層析步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:乙醇分級分離步驟;以及一過濾-吸附步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:乙醇分級分離步驟;以及辛酸沉澱步驟;
之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:乙醇分級分離步驟;以及離子交換樹酯之層析步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:過濾-吸附步驟;以及乙醇分級分離步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:過濾-吸附步驟;以及辛酸沉澱步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:過濾-吸附步驟;以及離子交換樹酯之層析步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:辛酸沉澱步驟,以及
離子交換樹酯之層析步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:乙醇分級分離步驟;過濾-吸附步驟;以及辛酸沉澱步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:過濾-吸附步驟;乙醇分級分離步驟;以及辛酸沉澱步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:乙醇分級分離步驟;辛酸沉澱步驟;以及。
離子交換樹酯之層析步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:乙醇分級分離步驟;過濾-吸附步驟;以及
離子交換樹酯之層析步驟;之連續步驟。
本發明之製備方法較佳包括一或複數個層析步驟,更佳地包括一或複數個使用離子交換樹酯之層析步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:過濾-吸附步驟;辛酸沉澱步驟;以及離子交換樹酯之層析步驟;之連續步驟。
在一特別實施例中,本發明之缺乏致血栓因子的血漿製品之製備方法,包括:乙醇分級分離步驟;過濾-吸附步驟;辛酸沉澱步驟;以及離子交換樹酯之層析步驟;之連續步驟;或者由下列步驟所構成:過濾-吸附步驟;乙醇分級分離步驟;辛酸沉澱步驟;以及離子交換樹酯之層析步驟。
在一特別實施例中,此過濾-吸附步驟在一包含纖維素、珍珠石(perlites)及帶電樹酯的深層過濾器下進行。
用於此述過濾-吸附步驟的過濾器較佳具有0.1至0.4 μm的過濾等級,更佳為0.2至0.4 μm,再更佳為0.25至0.35 μm,又再佳為0.3 μm的過濾等級。
在一特別實施例中,本發明之製備方法包括一或二個額外步驟,擇自於病毒去活化步驟,較佳使用溶劑-洗滌劑法(solvent-detergent),以及病毒去除步驟,較佳使用奈米過濾(nanofiltration)。
在一特別實施例中,本發明之製備方法包括一或二個額外步驟,其擇自於病毒去活化步驟,較佳為溶劑-洗滌劑法(solvent-detergent),以及具有包含與血型A與B抗原性相似之寡聚醣之擔體的親和性層析法。
在一特別實施例中,本發明之製備方法包括一最終濃縮、過濾與添加藥學上可接受穩定劑的步驟,接著進行無菌溶液包裝,並選擇性地冷凍(freezing)與凍乾(lyophilisation)。
為了讓本發明之特徵和優點能更明顯易懂,下文特舉較佳實施例,作詳細說明如下。
在本發明中,所述之“血漿製品”係意指任何由人類血漿純化出之化合物、任何蛋白質,例如,免疫球蛋白或白蛋白、纖維蛋白原或抗凝血酶、或任何蛋白混合物。例如,此製品可為特定之免疫球蛋白、多價免疫球蛋白、酵素、用於麻醉或重症看護之蛋白,例如,白蛋白、纖維蛋
白原或抗凝血酶。本發明之血漿製品較佳有關於免疫球蛋白G(或IgG)、免疫球蛋白A(或IgA)、免疫球蛋白M(或IgM)、免疫球蛋白E(或IgE)或其一或複數個的混合,以及以溶液或濃縮形式呈現。在一特別實施例中,本發明之血漿製品有關於專一性針對特定抗原之免疫球蛋白的濃縮物,例如,抗-恆河猴或抗-D細胞毒性抗體。在另一實施例中,本發明之血漿製品亦有關於多價免疫球蛋白的混合物,含97%的IgG,且針對廣泛多樣的抗原。在另一實施例中,本發明之血漿製品也有關於白蛋白、纖維蛋白原或抗凝血酶。
本發明中所述“由本發明之方法所獲得之製品”係意指任何以本發明或可由此方法直接或間接所獲得之製品或血漿製品。
一般來說,當提及致血栓因子時,係指此因子的非活性形式與活性形式。實際上,當此因子為活性形式時,此因子的致血栓效果非常顯著。另人驚訝地,本發明之方法可移除致血栓因子,特別是當其為活性形式時。特別是,當本發明提及“凝血因子XI”或“FXI”時,係意指非活性形式之凝血因子XI與活性形式之凝血因子XI(亦以FXI表示)。同樣地,本發明其它致血栓因子也以同樣方式類推。
本發明中所述“乙醇分級分離”係意指以不同的血漿乙醇分級分離步驟所獲得的血漿分餾部分,如習知技術所述。
在本發明中,“致血栓因子的缺乏”係意指以本發明所獲得之血漿製品不再含有任何致血栓因子,或僅含有非常微量。因此,本發明之血漿製品在病患體內不會因致血栓因子的存在促使凝集而導致血栓形成。
本發明中所述“凝血因子FVII、FVIII、FIX或FX及/或FXII的缺乏”係意指由本發明方法所獲得之血漿製品不再含有凝血因子FVII、FVIII、FIX、FX及/或FXII或僅含有微量殘留。因此,由本發明方法所獲得之血漿製品不會因凝血因子FVII、FVIII、FIX、FX及/或FXII任一種的存在促使凝集而導致血栓形成。
在一較佳實施例中,以本發明方法所獲得之血漿製品缺乏凝血因子FVII及/或缺乏凝血因子FX。
在一較佳實施例中,以本發明方法所獲得之血漿製品缺乏凝血因子FXI。本發明所述“缺乏凝血因子FXI之血漿製品”係意指一血漿製品,特別是一多價免疫球蛋白之血漿製品,其含有至少0.8 mU FXI /mg Ig,較佳為至少0.5 mU FXI/mg Ig。
在另一較佳實施例,以本發明方法所獲得之血漿製品缺乏凝血因子FXII。本發明所述“缺乏凝血因子”係意指一血漿製品,特別是一多價免疫球蛋白之血漿製品,其含有至少20 μU的FXII/mg Ig,較佳至少10 μU的FXII/mg Ig。
在本發明一特別實施例中,此缺乏一種或以上致血栓因子血漿製品可為液態或凍乾形式,及/或含有適當的穩定劑,也可被保存備用。所添加的穩定劑可有效地確保血漿
的穩定性,且做成凍乾形式可避免在凍乾與儲存的期間變性。本發明中所使用之穩定劑可參照發明人的專利申請案WO 2004/091656,即醣醇、甘胺酸與非離子型洗滌劑的混合。
本發明純化之血漿製品可用於治療且可透過全身性、口服、非經腸道、經靜脈、經肌肉、經皮、經鼻、經舌、經直腸、經眼或經呼吸道給予至個體。為達成此目的,本發明之缺乏一種或以上致血栓因子之血漿製品具有病毒安全性,例如,使用傳統的病毒去活化處理(例如,溶劑-洗滌劑處理)及/或病毒移除處理(例如奈米過濾)。
在一較佳實施例中,當血漿製品要純化為免疫球蛋白時,可使用陰離子交換樹酯,較佳為二乙基胺乙基(DEAE)、三甲基胺乙基(TMAE)或四級胺(QAE)樹酯進行層析分離。
在本發明一特別實施例中,本發明之方法包括額外的純化步驟,例如,親和性層析法或疏水性層析法。
若本發明經純化之血漿製品有關於免疫球蛋白,則本發明之方法包括一額外的親和性層析分離步驟,於含有與血型A與B抗原性相似之寡聚醣的層析擔體上進行。此額外的純化步驟可有效地移除由先前步驟所獲得的經純化之血液製品中的抗-A型與抗-B型抗體。此移除可參照專利申請案W0 2007/077365中所述之方法來進行。
在一特別實施例中,本發明之方法也包括至少一感染性物質,如病毒或普利昂(prions)的去活化及/或移除步驟。較佳以熱處理或化學處理,如溶劑-洗滌劑處理進行病
毒去活化。溶劑-洗滌劑處理可使用例如三正丁基磷酸鹽(TnBP)及選自Triton X-100或Tween 80的洗滌劑。也可使用紫外線或γ射線照射經純化之血漿製品進行病毒去活化。病毒的移除較佳使用孔隙100 nm至15 nm的奈米濾膜進行奈米過濾。此奈米過濾步驟可有效地移除在溶劑-洗滌劑處理中可能未被移除的病原菌(例如,病毒或普利昂)。病毒的移除可使用任何適合的濾膜進行,較佳為Planova 35 nm、Planova 20 nm及/或Planova 15 nm濾膜。奈米過濾,當可實施時,可在該純化的血漿製品視需要濃縮及/或超過濾步驟後而進行。
在一特別實施例中,本發明之方法也可包括該純化後的血漿製品之濃縮及/或超過濾步驟。此經純化之血漿製品也可經無菌過濾步驟及/或冷凍或凍乾步驟,也可被保存備用。此添加的穩定劑可有效地確保血漿的穩定性,且凍乾形式可避免在儲存的期間變性(denaturation)。穩定劑可參照發明人的專利申請案WO 2004/091656,即醣醇、甘胺酸與非離子型洗滌劑的混合。
在一較佳實施例中,本發明之方法包括:乙醇分級分離步驟;過濾-吸附步驟;以及辛酸沉澱步驟;之連續步驟。
或包含:過濾-吸附步驟;
乙醇分級分離步驟;以及辛酸沉澱步驟;之連續步驟。
這些步驟的組合可有效地移除血漿製品中的致血栓因子,特別是凝血因子FVII、FVIII、FIX、FX、FXI及/或FXII。
這些步驟的組合更特別可有效地移除凝血因子FXI、FVII,FX及/或FXII,使其濃度低於各自的偵測極限。
明顯地,本發明不限於所揭示之例子與實施例,此技藝人士可進行多種改變。
下列實施例用於說明本發明,但不用於限制其範圍。
【實施例】
於4℃至10℃之間進行不同的過濾步驟。將帶電濾膜以7.5 mL/h/cm2流速進行最低每過濾面積6 mL平衡緩衝溶液(CTS 2.94 g/L、Na2HPO4 1.79 g/L、KH2PO4 0.7 g/L、NaCl 3.5 g/L)的沖洗。以冷沈澱上清液的變動體積(variable volume)進行過濾。在過濾的最初5分鐘後的流速為初始流速。根據此測試,在注射原料與變動體積之平衡緩衝液後潤濕濾膜,以檢測濾膜潤濕對凝血因子XI的殘留及對非吸附蛋白的回收的影響。為了分析過濾-吸附的殘留效率(retention efficacy),以沖提緩衝液沖提凝血因子FXI。獲得均質起始分層(fractions)、濾液、沖提液的
樣本,接著等分(aliquote)、鑑定及儲存於-70℃或以下的溫度。
對上述測試濾膜的過濾測試所得的結果如下表所示,顯示含有纖維素、珍珠石(perlites)及帶電樹酯之深層過濾器,如Sartoclear® P 24cm2濾膜的凝血因子FXI殘留能性,此濾膜具有0.1至0.4 μm的過濾等級。
於4℃至10℃之間進行不同的過濾步驟。
在以0.22 μm Millipak進行濾清後,將冷沈澱上清液(cryoprecipitation supernatant)注入含有經平衡緩衝液(CTS 2.94 g/L、Na2HPO4 1.79 g/L、KH2PO4 0.7 g/L、NaCl 3.5 g/L)平衡之膠體的管柱中。接著以相同的緩衝液沖洗此膠體,直到回復至基準值。
為了測試層析法的殘留效率,在無預沖洗膠體步驟下,以具有非常高離子強度的沖提緩衝液沖提凝血因子FXI,以移除與膠體弱結合的蛋白。
收集、均質化分層(fractions)以獲得樣本,並經等分
(aliquot)、鑑定及儲存於-70℃或更低的溫度直到要進行生化分析。
以不同層析管柱進行層析測試的結果如下表所示。
1 kg乙醇沉澱物為起始材料,獲自血漿,依據Cohn方法或Kistler與Nitschmann’s方法(1962,Vox Sang,7,414)分為“分層I+分層II+分層III”。將此沉澱物重新懸浮於pH 4.7-4.9乙酸鹽緩衝液(乙酸鈉-乙酸)中,於20℃下攪動。
將辛酸添加至該重新懸浮的沉澱物中。於室溫下緩慢地添加。添加過濾佐劑至此混合物中,且利用壓濾器分離
沉澱物。
回收此濾液、澄清、及以超過濾濃縮,接著進行0.45 μm至0.2 μm的無菌過濾。接著,使用Neurath與Horowitz(美國專利號US 4,764,369)中所述之溶劑/洗滌劑進行病毒去活化處理。使用Triton X100/TnBP之混合物。
將此混合物調整至含有64 g/l的蛋白質,pH 6.5。在4與25℃維持4至6小時。以NaOH調整pH至pH 9。接著,此混合物進行陰離子交換柱層析。使用TMAE Fractogel®作為陰離子交換物質,充填至層析管柱中,使用甘胺酸-NaCl緩衝液(glycine 0.676 g/l-NaCl 0.526 g/l)於pH 9下平衡。以每1 L膠體50 g蛋白質的比例將此混合物注入管柱中。在注入後,以pH 9的甘胺酸-NaCl緩衝液(與平衡步驟相同)沖洗管柱。偵測流出物在280 nm的吸光值。在回復至基準值後,以pH 6.2的磷酸緩衝液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉)沖提管柱。調整含有免疫球蛋白的沖提液的pH值至pH 4.5,並進行超過濾,使用卡匣。
接著,將此溶液進行0.22μm的無菌過濾,之後利用3個不同系列及具有100、50與20 nm的殘留閾值之三種濾膜進行奈米過濾。之後進行超過濾,使用卡匣,以獲得濃度為120-150 g/l的最終溶液。
實施例3A方法所製備之免疫球蛋白濃縮物與市售免疫球濃縮物的比較。
實施例3A方法所製備之IgIV濃縮物的凝血因子XI含量低於0.5 mU/mg Ig,而其它市售免疫球蛋白的凝血因子XI含量大於0.8 mU/mg Ig,且有些凝血因子XI的含量大於2 mU/mg Ig。
凝血因子XII的含量也分析。市售免疫球蛋白的凝血因子XII含量大於20 μU/mg Ig,有些則大於30 μU/mg Ig,而以實施例1方法所製備之IgIV濃縮物的凝血因子XII含量低於10 μU/mg Ig。
偵測實施例3A所述方法實施前、後的凝血因子VII與X的含量。
血漿中含量(在包含乙醇分級分離法、辛酸沉澱法與層析法的方法實施前)為6個4500 L血漿批次的平均分析值。
在實施乙醇分級分離法、辛酸沉澱法與層析法之步驟後,凝血因子FVII抗原的含量低於偵測極限。
在實施包含乙醇分級分離法、辛酸沉澱法與層析法之步驟的方法中,P1/plasma比例降低3個logs以上。
如同凝血因子VII,在經過乙醇分級分離法、辛酸沉澱法與層析法之後,凝血因子FX抗原的含量低於偵測極限。
在實施含有乙醇分級分離法、辛酸沉澱法與層析法之步驟的方法中,P1/plasma比例降低約4個logs。
實施例3C清楚地顯示含有乙醇分級分離法、辛酸沉澱法與層析法之步驟的本發明之方法,可獲得缺乏致血栓因子的血漿製品。
將冷沈澱上清液以含有纖維素、珍珠石(perlites)及帶電樹酯,如Sartoclear® P 24cm2濾膜,該濾膜的過濾等級為0.1至0.4 μm,進行過濾。
濾液進行乙醇分級分離法,之後進行Cohn或Kistler與Nitschmann’s方法(1962,Vox Sang,7,414)。乙醇沉澱物“分層I+分層II+分層III”重新懸浮於pH 4.7-4.9乙酸鹽緩衝液(乙酸鈉-乙酸)中,於20℃下攪動。
將辛酸添加至此重新懸浮的沉澱物中。於室溫下緩慢地添加。添加過濾佐劑至此混合物中,且利用壓濾器分離
沉澱物。
回收此濾液、澄清、及以超過濾濃縮,接著以0.45 μm至0.2 μm進行無菌過濾。
偵測進行實施例4A所述方法前、後的凝血因子VII與X的含量。
實施此方法前的含量為6個4500 L血漿批次的平均分析值。
在過濾、乙醇分級分離法與辛酸沉澱法之步驟後,凝血因子FVII抗原的含量低於偵測極限。
在含有過濾、乙醇分級分離法與辛酸沉澱法之步驟的方法中,P1/plasma比例降低3個logs以上。
如同凝血因子VII,在經過乙醇分級分離法、辛酸沉澱法與層析法之後,凝血因子FX抗原的含量低於偵測極限。
在含有過濾、乙醇分級分離法與辛酸沉澱法之步驟的方法中,P1/plasma比例降低4個logs以上。
實施例4B清楚地顯示本發明之含有過濾、乙醇分級分離法與辛酸沉澱法之步驟的方法可獲得缺乏致血栓因子的血漿製品。
Claims (9)
- 一種缺乏致血栓因子的免疫球蛋白溶液之製備方法,包括依序為過濾-吸附步驟;乙醇分級分離步驟;以及辛酸沉澱步驟;之連續步驟,其中,該致血栓因子FX和FVII的含量低於偵測極限。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法,更包括離子交換樹酯層析法之額外步驟。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法,其中,該過濾-吸附步驟在一包含纖維素、珍珠石(perlites)及帶電樹酯的深層過濾器中進行,該過濾器具有0.1至0.4μm的過濾等級。
- 如申請專利範圍第3項所述之方法,其中,該過濾器具有0.2至0.4μm的過濾等級。
- 如申請專利範圍第4項所述之方法,其中,該過濾器具有0.25至0.35μm的過濾等級。
- 如申請專利範圍第5項所述之方法,其中,該過濾器具有0.3μm的過濾等級。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法,其特徵在於,更包括額外的病毒去活化步驟及/或額外的病毒移除步驟。
- 如申請專利範圍第7項所述之方法,其中,該額外的病毒去活化步驟使用溶劑-洗滌劑(solvent-detergent) 法,該額外的病毒移除步驟使用奈米過濾(nanofiltration)。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法,其特徵在於,包括額外的具有包含與血型A與B抗原性相似之寡聚醣之擔體的親和性層析法。
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