TWI476281B - 具有人ｏｘ４０專一性之抗體分子 - Google Patents

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TWI476281B
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Stephen Graham Shaw
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Description

具有人OX40專一性之抗體分子
本發明是關於具有OX40之抗原決定位(antigenic determinant)專一性之抗體分子及含其之組成物。本發明也關於抗體分子、組成物的治療用途，以及製造該抗體分子之方法。
OX40(亦已知為CD134、TNFRSF4、ACT35或TXGP1L)是TNF受體超級家族的成員之一，此超級家族包括4-1BB、CD27、CD30及CD40。OX40的細胞外配位體結合功能部位是由3個完整富含半胱胺酸的功能部位(CRD)及一部分之第4個C-末端CRD所構成(Bodmeret al .,2002,Trends Biochem Sci,27,19-26)。
OX40的配位體是OX40L，且3個OX40複製體結合至三聚體配位體形成OX40-OX40L複合物(Compaan and Hymowitz,2006,Structure,14,1321-1330)。OX40是膜鑲嵌型受體，但也已偵測到可溶性的同型異構物(Taylor and Schwarz,2001,J.Immunol. Methods,255,67-72)。可溶形式的功能意義至今未知。OX40不表現在靜止的T細胞，但連接T細胞受體(TCR)後暫時表現在經活化的T細胞。OX40的配位體OX40L是TNF家族的成員，且表現在經活化的抗原呈現細胞(APC)，包括B細胞、巨噬細胞、內皮細胞及樹突細胞(DC)。
OX40連續結合CD28而為一重要的輔助刺激性受體，以及OX40是最佳T細胞增殖及存活所需。OX40連接在經活化的T細胞造成細胞激素產生增加以及CD4+與CD8+兩T細胞的增殖(Gramagliaet al .,2000,J. Immunol,165,3043-3050,Bansal-Pakalaet al .,2004,J.Immunol,172,4821-425)，以及能促成Th1及Th2兩反應的進行(Gramagliaet al .,1998,J. Immuno.,161,6510-6517,Arestideset al .,2002,Eur. J. Immunol. 32,2874-2880)。OX40輔助刺激延長T細胞存活超過免疫反應的初始效應期(effector phase)，以及透過抑制效應T細胞(effector T cell)死亡來增加記憶T細胞的數量。
當免疫活化作用過度或不受控制時，病態性過敏、氣喘、發炎、自體免疫及其他相關疾病可能發生。由於OX40作用是增強免疫反應，因此可能惡化自體免疫及發炎性疾病。
OX40/OX40L交互作用在疾病模式中的角色已於OX40踢除(knockout)小鼠被證明。在實驗性過敏性腦脊髓炎(EAE)，一多發性硬化症模式中，在OX40踢除小鼠可注意到疾病的臨床症候較不嚴重以及CNS中發炎性浸潤物減少(Carboniet al .,2003,J.Neuroimmunology,145,1-11)。以白蛋白初次接觸及挑釁之OX40踢除小鼠也呈現肺發炎減少(嗜酸性球增多症減少80-90%)、降低黏液產生以及顯著減弱氣道過度反應(Jemberet al .,2001,J. Exp.Med.,193,387-392)。對鼠類OX40配位體的單株抗體在類風濕性關節炎的膠原蛋白誘發關節炎模式(Yoshiokaet al .,2000,Eur. J. Immunol.,30,2815-2823)、EAE(Noharaet al .,2001,J. Immunol.,166,2108-2115)、非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠(Pakalaet al .,2004,Eur. J. Immunol.,34,3039-3046)、T細胞已修復小鼠之結腸炎(Malmstromet al .,2001,J. Immunol.,166,6972-6981,Totsukaet al .,2003,Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol.,284,G595-G603)以及肺炎模式(Salek-Ardakaniet al .,2003,J. Exp. Med.,198,315-3 24,Hoshinoet al .,2003,Eur.J.Immunol,33,861-869)中已顯示有益功效。對人OX40L的抗體在恆河猴(rhesus monkey)肺炎模式中已有數據概況並導致過敏原挑釁後細支氣管灌洗液中IL-5、IL-13及效應記憶T細胞量降低(Seshasayeeet al .,2007,J. Clin.Invest,117,3868-3878)。
在數種自體免疫及發炎性疾病中已注意到OX40的表現增加。此包括單離自類風濕性關節炎病患之滑液的T細胞上OX40表現增加(Brugnoni Det al .,1998,Br.J. Rheum.,37,584-585;Yoshiokaet al .,2000,Eur. J. Immunol.,30,2815-2823;Giacomelli Ret al .,2001,Clin. Exp. Rheumatol.,19,317-320)。同樣地，已注意到具有潰瘍性結腸炎及克隆氏疾病(Crohn’s disease)之病患的胃腸組織(Souzaet al .,1999,Gut,45,856-863;Stuberet al .,2000,Eur.J.Clin.Invest.,30,594-599)以及具有多發性硬化症之病患的活動性損害(Carboniet al .,2003,J.Neuroimmunology,145,1-11)中OX40表現增加。在人氣道平滑肌(ASM)上亦可偵測到OX40L，以及氣喘病患ASM細胞比健康供者對OX40L連接呈現更大的發炎反應，顯示出OX40/OX40L路徑在氣喘的作用(Burgesset al .,2004,J. Allergy Clin Immunol.,113,683-689;Burgesset al .,2005,J. Allergy Clin Immunol.,115,302-308)。也有報告單離自全身紅斑性狼瘡(SLE)病患週邊血液的CD4+T細胞，OX40量表現提高，其與疾病活性有關(Patschanet al .,2006,Clin. Exp. Immunol.,145,235-242)。
已知OX40於過敏、氣喘及與自體免疫力及發炎有關的疾病中的角色，這些疾病的療法之一是透過使用抗-OX40L抗體或拮抗性抗-OX40抗體來阻斷OX40-OX40L傳訊息。
抗-OX40L抗體已被描述，例如參照WO2006/029879。許多激動性抗-OX40抗體已被描述，但已知的拮抗性抗-OX40抗體非常少。一兔子多株抗-小鼠OX40抗體已由Stuber等人製造(1996,J.Exp.Med,183,979-989)，其阻斷OX40與OX40L之間的交互作用。結合人OX40之小鼠單株抗體131及315由Imura等人製造(1996,J.Exp.Med,2185-2195)。
WO2007/062245已有描述完全的人拮抗性抗體，這些抗體的最高親和力為對細胞表面所表現之OX40(已活化的T細胞)具有11nM的親和力。
WO2008/106116已有描述人化拮抗性抗體，以及對OX40具有最佳親和力的抗體具有0.94nM的親和力。
其他抗-OX40抗體已被描述，包括鼠類L106(US專利第6,277,962號)及可購買自eBioscience的鼠類ACT35。
因此，該技藝仍有需要適合於治療病患之經改良的抗-OX40抗體。
現今我們已確認一親和力高的拮抗性抗-OX40抗體，適用於經OX40介入或與OX40量增加有關之病態失調的治療或預防。
衍生出人化抗體之原始大鼠抗體在文中稱為CA044_00026。
人化CA044_00026通常為Fab片段或其他片段形式，稱為A26。
PEG化抗體“A26”形式示於第2圖，在文中稱為A26Fab’-PEG。
抗體可變功能部位中的殘基照慣例根據Kabat等人設計的系統編號。此系統由Kabat等人提出，1987,in Sequences of Proteins of Immunological Interest,US Department of Health and Human Services,NIH,USA(以下稱為“Kabat等人(同上)”)。除非其他指示之外，本說明書使用此編號系統。
Kabat殘基命名並未總是直接對應於胺基酸殘基的線性編號。實際的線性胺基酸序列可比對應於縮短結構成分、或插入結構成分之嚴格Kabat編號含有較少或額外的胺基酸，不論基本可變功能部位結構的骨架(framework)或互補決定區域(CDR)。對於特定抗體，可經由排比該抗體序列與“標準”Kabat編號序列之同質性殘基來決定殘基的正確Kabat編號。
根據Kabat編號系統，重鏈可變功能部位的CDR位於殘基31-35(CDR-H1)、殘基50-65(CDR-H2)及殘基95-102(CDR-H3)。但根據Chothia(Chothia,C. and Lesk,A.M. J. Mol. Biol.,196,901-917(1987))，等同於CDR-H1的環從殘基26延伸至殘基32。因此除非特別指示，文中使用之“CDR-H1”意指殘基26至35，如以Kabat編號系統與Chothia之拓撲學環定義組合所述。
根據Kabat編號系統，輕鏈可變功能部位的CDR位於殘基24-34(CDR-L1)、殘基50-56(CDR-L2)及殘基89-97(CDR-L3)。
文中使用之用語「拮抗性抗體」是敘述能抑制及/或中和OX40傳生物訊息活性之抗體，例如經由阻斷OX40至OX40配位體的結合或實質降低結合，並因此抑制OX40的活化。
用於本發明之抗體可使用習知之任何適宜的方法獲得。可使用OX40多胜肽/蛋白質，包括融合蛋白質，例如OX40-Fc融合蛋白質或(重組或天然地)表現多胜肽之細胞(例如經活化之T細胞)來製造專一辨認OX40的抗體。OX40多胜肽可為「成熟的」多胜肽或生物活性片段或其衍生物。較佳為OX40多胜肽是成熟的人多胜肽或細胞外功能部位或其片段。細胞外功能部位典型含有OX40蛋白質的胺基酸29-214(SWISS PROT登記P43489)。OX40多胜肽可經由技藝已知之方法從含有表現系統之經基因工程的宿主T細胞製造抑或他們可從天然生物源回復。在本申請案中，用語「多胜肽」包括胜肽、多胜肽及蛋白質。除非特別指定，這些用語可交互使用。在某些情形中，OX40多胜肽可為較大蛋白質(如融合蛋白質，例如融合至親和力標籤)的一部分。所產生之對抗OX40多胜肽的抗體，可使用熟知及例行操作經由對動物(較佳為非人類之動物)投與多胜肽來獲得，此處必須對動物免疫(例如參閱Handbook of Experimental Immunology,D. M. Weir(ed.),Vol 4,Blackwell Scientific Publishers,Oxford,England,1986)。許多溫血動物可被免疫，例如兔子、小鼠、大鼠、綿羊、牛、駱駝或豬。但通常以小鼠、兔子、豬及大鼠最適合。
用於本發明之抗體包括完整的抗體及功能活性片段或其衍生物，以及可包括但不限於單株、人化、完全人或嵌合型抗體。
單株抗體可經由技藝已知的任何方法製備，例如融合瘤技術(Kohler & Milstein,1975,Nature,256:495-497)、三體雜交瘤(trioma)技術、人B-cell融合瘤技術(Kozboret al ., 1983,Immunology Today,4:72)及EBV-融合瘤技術(Coleet al .,Monoclonal and Cancer Therapy,pp77-96,Alan R Liss,Inc.,1985)。
用於本發明之抗體亦可使用單一淋巴細胞抗體法來製造，經由選殖及表現產生自經由例如Babcook,J.et al .,1996,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(15):7843-78481，WO92/02551，WO2004/051268及國際專利申請案號WO2004/106377所述方法篩選製造專一抗體用之單一淋巴細胞的免疫球蛋白可變區域cDNA。
抗體的篩選可使用測量結合人OX40用之分析法及/或用於測量阻斷OX40結合其配位體OX40L之能力的分析法來進行。結合分析法之一例是ELISA，特別是使用固定於平板上之人OX40與人Fc的融合蛋白質，並使用共軛二級抗體來偵測已結合該融合蛋白質的抗-OX40抗體。阻斷分析法之一例是流動式細胞測量術為基礎之分析法，測量OX40配位體融合蛋白質結合至人CD4細胞上之OX40的阻斷。使用經螢光標記的二級抗體偵測OX40配位體融合蛋白質結合至細胞的量。此分析法是在上清液的抗體阻斷配位體融合蛋白質結合OX40時，尋找訊號的降低。阻斷分析法之另一例為該分析法中藉由塗覆於平板之OX40配位體融合蛋白質來阻斷純真人T細胞(nave human T cell)的輔助刺激，是經由測量氚化胸腺核的倂入量來測量。
人化抗體(包括CDR-嫁接之抗體)是具有一個或一個以上來自非人物種的互補決定區域(CDR)以及來自人免疫球蛋白分子之骨架(framework)區域的抗體分子(例如參閱US 5,585,089；WO91/09967)。應知可能只需要轉移CDR的專一性決定殘基，而非整個CDR(例如參閱Kashmiriet al .,2005,Methods,36,25-34)。人化抗體可選擇性進一步含有一個或一個以上衍生自非人物種的骨架(framework)殘基，而CDR是衍生自該非人物種。
嵌合型抗體是由衍生自兩不同物種的成分所組成，以至於該成分保留其起源物種的特徵。通常嵌合型抗體總是含有來自一物種(例如小鼠、大鼠、兔子或類似)的可變區域，以及來自另一物種(例如人)的恆定區域。
用於本發明之抗體的產生也能使用技藝已知的各種噬菌體展示法，且包括那些由Brinkman等人(於J. Immunol. Methods,1995,182：41-50)、Ames等人(J. Immunol. Methods,1995,184:177-186)、Kettleborough等人(Eur. J. Immunol. 1994,24:952-958)、Persic等人(Gene,19971879-18)、Burton等人(Advances in Immunology,1994,57:191-280)及WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO 93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401及US 5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743及5,969,108所揭示者。
完全人抗體是那些抗體中重鏈及輕鏈二者的可變區域及恆定區域(存在時)全部為人類起源，或實質相同於人類起源的序列，非必要來自同一抗體。完全人抗體之例可包括例如由上述噬菌體展示法製造的抗體，以及經由小鼠製造的抗體，其中鼠類免疫球蛋白可變及選擇性恆定區域基因已被置換為他們的人對應處，如一般用語敘述於EP0546073 B1、US 5,545,806、US 5,569,825、US 5,625,126、US 5,633,425、US 5,661,016、US5,770,429、EP 0438474及EP0463151。
在一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有至少一具有第1(c)圖所提供CDR-H1之SEQ ID NO:1序列的CDR，具有第1(c)圖所提供CDR-H2之SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20序列的CDR，以及具有第1(c)圖所提供CDR-H3之SEQ ID NO:3序列的CDR。
在另一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其含有重鏈，其中重鏈可變功能部位的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3至少二者是選自下列：CDR-H1之SEQ ID NO:1序列、CDR-H2之SEQ ID NO:2序列以及CDR-H3之SEQ ID NO:3序列。舉例而言，抗體可含有重鏈，其中CDR-H1具有SEQ ID NO:1序列以及CDR-H2具有SEQ ID NO:2序列。另外，抗體可含有重鏈，其中CDR-H1具有SEQ ID NO:1序列以及CDR-H3具有SEQ ID NO:3序列；或抗體可含有重鏈，其中CDR-H2具有SEQ ID NO:2序列以及CDR-H3具有SEQ ID NO:3序列。為避免疑慮，應瞭解全部置換包括在內。
在另一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的指抗性抗體，其含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有CDR-H1之SEQ ID NO:1序列、CDR-H2之SEQ ID NO:2序列以及CDR-H3之SEQ ID NO:3序列。
在另一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有CDR-H1之SEQ ID NO:1序列、CDR-H2之SEQ ID NO:20序列以及CDR-H3之SEQ ID NO:3序列。
在一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其含有輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有至少一具有第1(c)圖所提供CDR-L1之SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:21序列的CDR，具有第1(c)圖所提供CDR-L2之SEQ ID NO:5序列的CDR，以及具有第1(c)圖所提供CDR-L3之SEQ ID NO:6序列的CDR。
在另一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其含有輕鏈，其中輕鏈可變功能部位的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3至少二者是選自下列:CDR-L1之SEQ ID NO:4序列、CDR-L2之SEQ ID NO:5序列以及CDR-L3之SEQ ID NO:6序列。舉例而言，抗體可含有輕鏈，其中CDR-L1具有SEQ ID NO:4序列以及CDR-L2具有SEQ ID NO:5序列。另外，抗體可含有輕鏈，其中CDR-L1具有SEQ ID NO:4序列以及CDR-L3具有SEQ ID NO:6序列；或抗體可含有輕鏈，其中CDR-L2具有SEQ ID NO:5序列以及CDR-L3具有SEQ ID NO:6序列。為避免疑慮，應瞭解全部置換包括在內。
在另一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其含有輕鏈，其中可變功能部位含有CDR-L1之SEQ ID NO:4序列、CDR-L2之SEQ ID NO:5序列以及CDR-L3之SEQ ID NO:6序列。
在另一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其含有輕鏈，其中可變功能部位含有CDR-L1之SEQ ID NO:21序列、CDR-L2之SEQ ID NO:5序列以及CDR-L3之SEQ ID NO:6序列。
本發明之抗體分子較佳為分別含有互補的輕鏈或互補的重鏈。
因此在一具體例中，根據本發明之抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有CDR-H1之SEQ ID NO:1序列、CDR-H2之SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20序列以及CDR-H3之SEQ ID NO:3序列；以及輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有CDR-L1之SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:21序列、CDR-L2之SEQ ID NO:5序列以及CDR-L3之SEQ ID NO:6序列。
應知可對本發明提供之CDR製作一個或一個以上胺基酸取代、添加及/或刪除，而未顯著改變抗體結合至OX40以及中和OX40活性的能力。任何胺基酸取代、添加及/或刪除的影響能由熟悉該項技藝者輕易地測試，例如經由使用文中所述方法，特別是實施例，來決定OX40結合及OX40/OX40L交互作用的抑制。因此，本發明提供一種具有對人OX40專一性的抗體，其含有一個或一個以上CDR選自CDRH-1(SEQ ID NO:1)、CDRH-2(SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20)、CDRH-3(SEQ ID NO:3)、CDRL-1(SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:21)、CDRL-2(SEQ ID NO:5)及CDRL-3(SEQ ID NO:6)，其中一個或一個以上CDR中之一個或一個以上胺基酸已經另一胺基酸取代，適宜如下文定義之類似的胺基酸。在一具體例中，本發明提供一種具有對人OX40專一性的抗體，含有第1(c)圖所示之CDRH-1(SEQ ID NO:1)、CDRH-2(SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20)、CDRH-3(SEQ ID NO:3)、CDRL-1(SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:21)、CDRL-2(SEQ ID NO:5)及CDRL-3(SEQ ID NO:6)，例如一個或一個以上CDR中之一個或一個以上胺基酸已經另一胺基酸取代，例如如下文定義之類似的胺基酸。
在一具體例中，本發明之抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有3個CDR，其中CDRH-1的序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:1所給序列，CDRH-2具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:2所給序列及/或CDRH-3具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:3所給序列。在另一具體例中，本發明之抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有3個CDR，其中CDRH-1的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:1所給序列，CDRH-2具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:2所給序列及/或CDRH-3具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:3所給序列。
文中使用之「相同」表示在比對序列之任何特別位置，序列之間的胺基酸殘基相同。文中使用之「類似」表示在比對序列之任何特別位置，序列之間的胺基酸殘基是類似的種類。例如，可以白胺酸取代異白胺酸或纈胺酸。其他能常用於取代另一者之胺基酸包括但不限於：
-　苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸(具有芳香族側鏈之胺基酸)；
-　離胺酸、精胺酸及組胺酸(具有鹼側鏈之胺基酸)；
-　天冬胺酸及麩胺酸(具有酸側鏈之胺基酸)；
-　天冬醯胺酸及麩醯胺酸(具有醯胺側鏈之胺基酸)；以及
-　半胱胺酸及甲硫胺酸(具有含硫側鏈之胺基酸)。可輕易計算相同及類似的程度(Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing. Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993;Computer Analysis of Sequence Data,Part 1,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G,eds.,Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G,Academic Press,1987,Sequence Analysis Primer,Gribskov,M. and Devereux,J.,eds.,M Stockton Press,New York,1991,the BLASTTM software available from NCBI(Altschul,S.F.et al., 1990,J. Mol. Biol. 215:403-410;Gish,W. ＆ States,D.J. 1993,Nature Genet. 3:266-272. Madden,T.L.et al ., 1996,Meth. Enzymol. 266:131-141;Altschul,S.F.et al ., 1997,Nucleic Acids Res. 25:3389-3402;Zhang,J. ＆Madden,T.L. 1997,Genome Res. 7:649-656)。
在另一具體例中，本發明之抗體含有輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有3個CDR，其中CDRL-1的序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:4所給序列，CDRL-2具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:5所給序列及/或CDRL-3具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:6所給序列。在另一具體例中，本發明之抗體含有輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有3個CDR，其中CDRL-1的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:4所給序列，CDRL-2具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:5所給序列及/或CDRL-3具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:6所給序列。
在一具體例中，本文中提供之抗體是單株抗體。
在一具體例中，本文中提供之抗體是嵌合型抗體。
在一具體例中，本文中提供之抗體是含有一個或一個以上SEQ ID NOs:1、2、3、4、5、6、20或21(第1(c)圖)所提供之CDR或其變異體之CDR-嫁接之抗體分子。文中使用之用語「CDR-嫁接之抗體分子」是指一抗體分子中重鏈及/或輕鏈含有來自供者抗體(例如鼠類單株抗體)之一個或一個以上CDR(視需要包括一個或一個以上經修飾CDR)嫁接到接受者抗體(例如人抗體)的重鏈及/或輕鏈可變區域骨架(framework)。對於評論，參閱Vaughanet al ,Nature Biotechnology,16,535-539,1998。在一具體例中，並非轉移整個CDR，而是只有一個或一個以上來自上文所述之任一CDR的專一性決定殘基轉移至人抗體骨架(framework)(參閱例如Kashmiriet al .,2005,Methods,36,25-34)。在一具體例中，只有來自上文所述之一個或一個以上CDR的專一性決定殘基轉移至人抗體骨架(framework)。在另一具體例中，只有來自上文所述之每一CDR的專一性決定殘基轉移至人抗體骨架(framework)。
當嫁接CDR或專一性決定殘基時，考量供者抗體(其為CDR起源，包括小鼠、靈長類及人骨架(framework)區域)的類型/種類，可使用任何適當的接受者可變區域骨架(framework)序列。較佳為根據本發明之CDR-嫁接之抗體具有含人接受者骨架(framework)區域及上述之一個或一個以上CDR或專一性決定殘基的可變功能部位。因此在一具體例中所提供是中和性CDR-嫁接之抗體，其中可變功能部位含有人接受者骨架(framework)區域及非人供者CDR。
能用於本發明之人骨架(framework)實例為KOL、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY及POM(Kabat等人，同上)。舉例而言，能使用KOL及NEWM於重鏈，能使用REI於輕鏈，以及能使用EU、LAY及POM於重鏈及輕鏈二者。另外，可使用人類生殖種系序列，這些可得自http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/
在本發明CDR-嫁接的抗體中，接受者重鏈及輕鏈非必要必需衍生自同一抗體，且可視需要含有具有衍生自不同鏈之骨架(framework)區域的組成物鏈。
適合於本發明CDR-嫁接之抗體重鏈的骨架(framework)區域是衍生自人次組VH3序列1-3 3-07連同JH4。因此，所提供為中和性CDR-嫁接的抗體，含有至少一個非人供者CDR，其中重鏈骨架(framework)區域是衍生自人次組VH3序列1-3 3-07連同JH4。人JH4的序列如下：(YFDY)WGQGTLVTVSS(Seq ID No：22)。YFDY模體(motif)是CDR-H3的一部分且非骨架(framework)4的一部分(Ravetch,JV.et al .,1981,Cell ,27,583-591)。
適合於本發明CDR-嫁接之抗體輕鏈的骨架(framework)區域是衍生自人類生殖種系次組VK1序列2-11-02連同JK4。因此，所提供為中和性CDR-嫁接的抗體，含有至少一個非人供者CDR，其中輕鏈骨架(framework)區域是衍生自人次組序列2-11-02連同JK4。JK1序列如下：(WT)FGQGTKVEIK(Seq ID No：23)。WT模體(motif)是CDR-L3的一部分且非骨架(framework)4的一部分(Hieter,PA.,et al .,1982,J. Biol. Chem.,257,1516-1522)。
在本發明CDR-嫁接的抗體中，骨架(framework)區域也不需要有如那些接受者抗體完全相同的序列。舉例而言，不常有的殘基可能被改變為接受者鏈類型或種類較常出現的殘基。另外，接受者骨架(framework)區域中所選殘基可能被改變，以至於它們對應於供者抗體同一位置所發現的殘基(參閱Reichmannet al .,1998,Nature,332,323-324)。應保持此等改變至以所需最少來回復供者抗體的親和力。於可能需被改變之接受者骨架(framework)區域中選擇殘基的作法程序提出於WO 91/09967。
較佳為在本發明之CDR-嫁接之抗體分子中，如果接受者重鏈具有人VH3序列1-33-07連同JH4，則重鏈的接受者骨架(framework)區域，除一個或一個以上供者CDR之外，含有供者殘基位置37、73、78或94至少一個(根據Kabat等人(同上))。因此，所提供是CDR-嫁接之抗體，其中至少在重鏈可變功能部位位置37、73、78及94的殘基是供者殘基。
較佳為根據本發明之CDR-嫁接之抗體分子中，如果接受者輕鏈具有人次組VK1序列2-11-02連同JK4，則輕鏈的接受者骨架(framework)區域，除一個或一個以上供者CDR之外，含有供者殘基位置64或71至少一個。因此，所提供是CDR-嫁接之抗體，其中至少在輕鏈可變功能部位位置64及71的殘基是供者殘基。
供者殘基是來自供者抗體的殘基，亦即CDR起初衍生自該抗體。
在一具體例中，本發明之抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有第1(b)圖SEQ ID NO:9所給序列。
應知可對本發明所提供之抗體可變功能部位製作一個或一個以上胺基酸取代、添加及/或刪除，而未顯著改變抗體結合至OX40以及中和OX40活性的能力。任何胺基酸取代、添加及/或刪除的影響能由熟悉該項技藝者輕易地測試，例如經由使用文中所述方法，特別是實施例，來決定OX40結合及配位體阻斷。
在另一具體例中，本發明之抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:9所給序列。在一具體例中，本發明之抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO：9所給序列。
在一具體例中，本發明之抗體含有輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有第1(a)圖之SEQ ID NO：7所給序列。
在另一具體例中，本發明之抗體含有輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO：7所給序列。在一具體例中，本發明之抗體含有輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO：7所給序列。
在一具體例中，本發明之抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有SEQ ID NO：9所給序列，以及輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有SEQ ID NO：7所給序列。
在本發明另一具體例中，抗體含有重鏈及輕鏈，其中重鏈的可變功能部位含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO：9所給序列，以及輕鏈的可變功能部位含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO：7所給序列。較佳為抗體含有重鏈，其中重鏈的可變功能部位含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO：9所給序列，以及輕鏈，其中輕鏈的可變功能部位含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO：7所給序列。
本發明之抗體分子可含有具有全長的重鏈及輕鏈之完整的抗體分子或其片段，且可能是但不限於Fab、經修飾Fab、Fab’、經修飾Fab’、F(ab’)2 、Fv、單一功能部位抗體(例如VH或VL或VHH)、scFv、二-、三-或四-價抗體、Bis-scFv、雙鏈抗體(diabodies)、三鏈抗體(triabodies)、四鏈抗體(tetrabodies)及以上任一之結合抗原決定基(epitope)的片段(例如參閱Holliger and Hudson,2005,Nature Biotech.23(9):1126-1136;Adair and Lawson,2005,Drug Design Reviews-Online 2(3),209-217)。產生及製造這些抗體片段的方法為技藝熟知(例如參閱Verma et al.,1998,Journal of Immunological Methods,216,165-181)。用於本發明之其他抗體片段包括敘述於國際專利申請案WO2005/003169、WO2005/003170及WO2005/003171之Fab及Fab’片段。多價抗體可含有多專一性或可為單專一性(例如參閱WO92/22853及WO05/113605)。
在一具體例中,根據本案揭示之抗體是提供作為OX40結合抗體融合蛋白質,其含有免疫球蛋白部分(moiety)(例如Fab或Fab’片段)，以及直接或間接連接他的一或兩個單一功能部位抗體(dAb)，例如敘述於WO2009/040562。
在一具體例中，融合蛋白質含有兩個功能部位抗體，例如當可變重鏈(VH)及可變輕鏈(VL)配對，可選擇經由雙硫鍵連接。
在一具體例中，融合蛋白質Fab’成分的Fab對單一功能部位抗體或抗體具有相同或類似的專一性。在一具體例中，Fab或Fab’對單一功能部位抗體或抗體具有不同的專一性，也就是說該融合蛋白質是多價的。在一具體例中，根據本發明之多價融合蛋白質具有白蛋白結合位置，例如在其中之VH/VL對提供白蛋白結合位置。
本發明之抗體分子的恆定區域功能部位，若有存在，可選擇具有所提出之抗體分子的功能，特別是可能所需的效應功能。例如恆定區域功能部位可為人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM功能部位。特別是可使用人IgG恆定區域功能部位，尤其是IgG1及IgG3同型物，當需要將抗體分子作為治療用途及抗體效應功能時。另外，不需要將抗體分子作為治療目的及抗體效應功能時，例如用於簡單的阻斷OX40活性，可使用IgG2及IgG4同型物。應知亦可使用這些恆定區域功能部位的序列變異體。例如可使用IgG4分子中位置241的絲胺酸已被改變為脯胺酸，如Angalet al .,Molecular Immunology,1993,30(1),105-108所述。熟悉該項技藝者亦應瞭解抗體可經歷許多轉譯後修飾。這些修飾的類型及範圍常視用於表現抗體之宿主細胞株及培養條件而異。此等修飾可包括糖化作用、甲硫胺酸氧化作用、形成二酮哌、天冬胺酸異構化作用及天冬醯胺酸去醯胺作用之變異。較常見的修飾是因羧基胜肽酶作用而喪失羧基-末端鹼殘基(例如離胺酸或精胺酸)(敘述於Harris,RJ.Journal of Chromatography 705:129-134,1995)。因此，第1(f)圖中SEQ ID NO：15所給抗體重鏈的C-末端離胺酸可能不存在。
在一具體例中，抗體重鏈含有CH1功能部位以及抗體輕鏈含有CL功能部位，κ或λ。
在一具體例中，本發明提供之抗體是具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其中重鏈恆定區域含有經修飾樞紐區(hinge region)。因此，本發明提供抗體，其中重鏈含有或由第1(f)圖SEQ ID NO:15所給序列構成。
應知可對本發明提供之抗體可變及/或恆定功能部位製作一個或一個以上胺基酸取代、添加及/或刪除，而未顯著改變抗體結合至OX40及中和OX40活性的能力。任何胺基酸取代、添加及/或刪除的影響能由熟悉該項技藝者輕易地測試，例如經由使用文中所述方法，特別是實施例，來決定OX40結合及阻斷OX40/OX40L交互作用。
在本發明一具體例中，抗體含有重鏈，其中重鏈含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:15所給序列。較佳為抗體含有重鏈，其中重鏈含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:15所給序列。
在一具體例中，根據本發明之抗體分子含有輕鏈，其含有第1(d)圖SEQ ID NO:11所給序列。
在本發明一具體例中，抗體含有輕鏈，其中輕鏈含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:11所給序列。例如，抗體含有輕鏈，其中輕鏈含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:11所給序列。
在一具體例中，本發明提供抗體，其中重鏈含有或由SEQ ID NO:15所給序列構成，以及輕鏈含有或由SEQ ID NO:11所給序列構成。
在本發明一具體例中，抗體含有重鏈及輕鏈，其中重鏈含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:15所給序列，以及輕鏈含有序列具有至少60%相同或類似於SEQ ID NO:11所給序列。通常該抗體含有重鏈及輕鏈，其中重鏈含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:15所給序列；其中輕鏈含有序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%相同或類似於SEQ ID NO:11所給序列。
生物性分子，例如抗體或片段包含酸性及/或鹼性功能基，藉此給予分子淨正電荷或負電荷。總「觀察」電荷量將視實體的絕對胺基酸序列、3D結構中帶電基的局部環境及分子的環境條件而異。等電點(pI)是一特殊分子或溶劑可接近的表面沒攜帶淨電荷時之pH。在一具體例中，根據本揭示之抗體或片段具有至少7之等電點(pI)。在一具體例中，抗體或片段具有至少8之等電點，例如8.5、8.6、8.7、8.8或9。
本發明之OX40抗體及片段已經處理為具有適當的等電點。此可造成具有更健全性質的抗體及/或片段，特佳較佳為溶解性及/或安定性概況。
如此本發明之一態樣是提供人化OX40抗體，已經處理為具有等電點不同於原始確認的抗體CA044_00026。該抗體可例如經由置換胺基酸殘基之處理，例如以一個或一個以上鹼性胺基酸殘基置換酸性胺基酸殘基。另外，可導入鹼性胺基酸殘基或能移除酸性胺基酸殘基。另外，若該分子具有不能接受的高pI值，則視所需可導入酸性殘基來降低pI。經處理抗體或片段的標的pI，視所需可例如是8或以上如8.5或9。重要的是操作pI時必須謹慎，以保留抗體或片段的所欲活性。如此在一具體例中，經處理的抗體或片段具有相同或實質相同活性如「未修飾的」抗體或片段。
可使用程式例如**ExPASYhttp://www.expasy.ch/tools/pi_tool.html及http://www.iut-arles.up.univ-mrs.fr/w3bb/d_abim/compo-p.html來預測抗體或片段的等電點。
又本發明所提供為人OX40的專一區域或抗原決定基(epitope)，其結合本發明提供之抗體，特別是含有重鏈序列gH2(SEQ ID NO:9)及/或輕鏈序列gL8(SEQ ID NO:7)的抗體。
此人OX40多胜的專一區域或抗原決定基(epitope)可經由技藝已知的任何適合的抗原決定基(epitope)作圖法組合本發明提供的任一抗體來確認。此等方法之例包括篩選以最小片段結合至本發明抗體之衍生自OX40各種長度胜肽，該片段能專一地結合含有可經抗體辨認之抗原決定基(epitope)序列的抗體。OX40胜肽可經由合成或經由OX40多胜肽的蛋白酵素分解來產生。結合抗體的胜肽能經由例如質譜分析來確認。在另一實施例中，能使用NMR光譜或X-射線結晶來確認經本發明抗體結合之抗原決定基(epitope)。一旦經確認後，結合本發明抗體之抗原決定基片段可被使用，視需要作為免疫原以得到結合同一抗原決定基(epitope)之額外的拮抗性抗體。
交叉阻斷根據本發明之抗體結合的抗體，特別是含有重鏈序列gH2(SEQ ID NO:9)及輕鏈序列gL8(SEQ ID NO:7)的抗體，可能同樣有用於拮抗OX40活性。因此，本發明也提供對人OX40具有專一性的拮抗性抗體，交叉阻斷任一上述抗體結合至人OX40及/或經由任一這些抗體交叉阻斷結合OX40。在一具體例中，此等抗體結合至作為文中上述抗體之同一抗原決定基。在另一具體例中，交叉阻斷中和抗體結合至與文中上述抗體所結合之抗原決定基毗鄰及/或重疊的抗原決定基。在另一具體例中，本發明此態樣之交叉阻斷中和抗體並未結合至作為本發明抗體的同一抗原決定基，或與該抗原決定基毗鄰及/或重疊的抗原決定基。
能使用任何技藝適合的方法來確認交叉阻斷性抗體，例如使用競爭ELISA或BIAcore分析法，其中交叉阻斷性抗體結合至人OX40可防止本發明抗體的結合，反之亦然。
在一具體例中，提供具有對人OX40專一性的拮抗性抗體，其交叉阻斷抗體(其重鏈含有序列gH2(SEQ ID NO:9)及其輕鏈含有序列gL8(SEQ ID NO:7))結合至人OX40。在一具體例中，本發明提供之交叉阻斷性抗體以大於80%，例如以大於85%，例如以大於90%，特別是以大於95%抑制含有重鏈序列gH2(SEQ ID NO:9)及輕鏈序列gL8(SEQ ID NO:7)之抗體的結合。
另外或額外，根據本發明此態樣之拮抗性抗體可經由含有重鏈序列gH2(SEQ ID NO:9)及輕鏈序列gL8(SEQ ID NO:7)的抗體交叉阻斷結合至人OX40。又所提供為具有對人OX40專一性的拮抗性抗體分子，其經由含有重鏈序列gH2(SEQ ID NO:9)及輕鏈序列gL8(SEQ ID NO:7)的抗體交叉阻斷結合人OX40。在一具體例中，根據本發明此態樣之拮抗性抗體，經由含有重鏈序列gH2(SEQ ID NO:9)及輕鏈序列gL8(SEQ ID NO:7)之抗體以大於80%，例如以大於85%，例如以大於90%，特別是以大於95%抑制結合人OX40。
在一具體例中，根據本發明提供之交叉阻斷性抗體是完全人的。在一具體例中，根據本發明提供之交叉阻斷性抗體是經人化的。在一具體例中，根據本發明提供之交叉阻斷性抗體具有對人OX40為100pM或更佳的親和力。在一具體例中，根據本發明提供之交叉阻斷性抗體具有對人OX40為50pM或更佳的親和力。
在一具體例中，交叉阻斷性抗體具有至少7的等電點，例如至少8，例如8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0。
本發明之抗體分子適當地具有高結合親和力，特別是微微莫耳(picomolar)。可使用任何技藝適合的方法來測量親和力，包括如文中實施例所述使用經單離天然或重組OX40或適合的融合蛋白質/多胜肽之BIAcore。在一實施例中，使用如文中實施例所述重組人OX40細胞外功能部位測量親和力。在一實施例中，使用之重組人OX40細胞外功能部位是二聚體，例如Fc融合二聚體。較佳為本發明抗體分子對於經單離人OX40具有約200pM或更佳的結合親和力。在一具體例中，本發明之抗體分子具有約100pM或更佳之結合親和力。在一具體例中，本發明之抗體分子具有約50pM或更佳的結合親和力。在一具體例中，本發明之抗體分子具有約40pM或更佳的結合親和力。在一具體例中，本發明之抗體分子具有約30pM或更佳的結合親和力。在一具體例中，本發明之抗體分子是完全人或人化以及具有約100pM或更佳的結合親和力。
本發明之抗體分子對於表現在經活化T細胞表面的人OX40較佳為具有高結合親和力，例如奈米莫耳或微微莫耳親和力。可使用任何技藝適合的方法來測量親和力，包括如文中實施例所述使用活化CD4+ OX40+ 人T細胞之方法。特別是本發明之抗體分子對於細胞表面表現之人OX40具有約2nM或更佳的結合親和力。在一實施例中，本發明之抗體分子對於細胞表面表現之人OX40具有約1.5nM或更佳的結合親和力。在另一實施例中，本發明之抗體分子對於細胞表面表現之人OX40具有約1.2nM或更佳的結合親和力。在一具體例中，提供完全人或人化抗體分子，對於人細胞表面表現之OX40具有約2nM或更佳的結合親和力。
應知本發明提供之抗體的親和力，可使用技藝已知的任何適合方法改變之。因此本發明也關於本發明抗體分子之變異體，其對於OX40具有改良的親和力。此等變異體的獲得可經由許多親和力突變作法，包括CDRs(Yanget al .,J. Mol. Biol.,254,392-403,1995)、鏈改組(chain shuffling)(Markset al .,Bio/Technology,10,779-783,1992)、使用大腸桿菌(E. coli )突變株(Lowet al .,J. Mol. Biol.,250,359-368,1996)、DNA改組(Pattenet al .,Curr. Opin. Biotechnol.,8,724-733,1997)、噬菌體展示(Thompsonet al .,J. Mol. Biol.,256,77-88,1996)及性PCR(Crameriet al .,Nature,391,288-291,1998)。Vaughan等人(同上)討論親和力成熟之此等方法。
在一具體例中，本發明之抗體分子阻斷OX40與OX40L間交互作用。適於決定抗體阻斷此交互作用之能力的許多分析法敘述於文中實施例。在一具體例中，本發明提供具有對人OX40專一性的中和性抗體，其能以少於5nM的濃度抑制人OX40L(以最終濃度2μg/ml測試)結合至經活化人CD4+OX40+T細胞50%。在一具體例中，用於分析法的人OX40L是天然的人OX40。在一具體例中，用於分析法的人OX40是重組人OX40。在一具體例中，中和性抗體是人化或完全人抗體。
視需要用於本發明之抗體可共軛至一個或一個以上效應子分子。應知效應子分子可含有單一效應子分子或兩個或以上此等分子，以至經連接以形成能附著於本發明抗體之單一部分(moiety)。此處所欲為得到連接至效應子分子的抗體片段，此可經由標準化學或重組DNA程序製備，其中抗體片段直接或透過偶合劑連接至效應子分子。共軛此等效應子分子至抗體之技術為技藝熟知(參閱Hellstromet al .,Controlled Drug Delivery,2nd Ed.,Robinsonet al. ,eds.,1987,pp. 623-53;Thorpeet al. ,1982,Immunol. Rev.,62:119-58 and Dubowchiket al. ,1999,Pharmacology and Therapeutics,83,67-123)。特殊的化學程序包括例如那些敘述於WO 93/06231、WO 92/22583、WO 89/00195、WO 89/01476及WO03031581。另外，此處效應子分子是蛋白質或多胜肽，連接可使用重組DNA程序來達成，例如敘述於WO 86/01533及EP0392745。
文中使用之用語「效應子分子」包括例如抗腫瘤劑、藥、毒素、生物活性蛋白質，例如酵素、其他抗體或抗體片段、合成或天然存在之聚合物、核酸及其片段，例如DNA、RNA及其片段、放射性核種，特別是放射性碘、放射性同位素、螯合金屬、奈米顆粒及報告子(reporter)基團例如螢光化合物或可經由NMR或ESR光譜偵測之化合物。
效應子分子之例可包括細胞毒素或細胞毒性劑，包括任何對細胞有害(例如殺細胞)的試劑。實例包括卡布雷司達丁(combrestatins)、朵拉司達丁(dolastatins)、艾博黴素(epothilones)、星形孢菌素(staurosporine)、美登醇(maytansinoids)、斯朋司達丁(spongistatins)、根瘤菌素(rhizoxin)、軟海綿素(halichondrins)、軟海桿孢菌素(roridins)、哈米特林(hemiasterlins)、紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素B(cytochalasin B)、短桿菌肽D(gramicidin D)、溴化乙錠、吐根鹼(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、耶託波塞(etoposide)、天諾波塞(tenoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、秋水仙鹼(colchicin)、多柔比星(doxorubicin)、都諾魯比素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮、絲裂黃素(mitoxantrone)、光輝黴素(mithramycin)、放線菌素D、1-去氫睪酮、糖皮質素、普羅卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、林朵卡因(lidocaine)、普羅普諾醇(propranolol)、及嘌呤黴素(puromycin)及其類似物或同系物。
效應子分子也包括但不限於抗代謝物質(例如胺甲喋呤(methotrexate)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、巰基鳥嘌呤(6-thioguanine)、胞阿拉並(cytarabine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、氮烯咪胺(decarbazine))、烷化劑(例如二氯甲基二乙酸(mechlorethamine)、巰基艾帕(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、苯丙胺酸氮芥(melphalan)、咔瑪司丁(carmustine)(BSNU)及羅瑪司丁(lomustine)(CCNU)、環磷醯胺(cyclothosphamide)、巴薩凡(busulfan)、二溴甘露醇(dibromo甘露醇)、鏈佐菌素(streptozotocin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、以及順鉑(cis-dichlorodiamine platinum (II))(DDP)、西斯鉑(cisplatin))、蔥環類(anthracyclines)(例如都諾魯比素(daunorubicin)(從前的道諾黴素(daunomycin))及多柔比星(doxorubicin))、抗生素(例如放線菌素D(從前的放線菌素)、博菜黴素(bleomycin)、光輝黴素(mithramycin)、氨茴黴素(anthramycin)(AMC)、刺孢黴素(calicheamicins)或杜卡黴素(duocarmycins))、以及抗有絲分裂劑(例如長春新鹼(vincristine)及長春花鹼(vinblastine))。
其他效應子分子可包括螯合的放射性核種，例如111 In及90 Y、Lu177 、Bi213 、Cf252 、Ir192 及W188 /Re188 ；或藥例如但不限於烷基磷膽鹼、拓撲酶I抑制劑、類毒素及蘇拉明(suramin)。其他效應子分子包括蛋白質、胜肽及酵素。有興趣的酵素包括但不限於蛋白分解酵素、水解酶、解離酶、異構酶、轉移酶。有興趣的蛋白質、多胜肽及胜肽包括但不限於免疫球蛋白；毒素，例如相思豆毒素(abrin)、蓖麻毒素(ricin)A、綠膿桿菌外毒素、或白喉毒素；蛋白質，例如胰島素、腫瘤壞死因子、α-干擾素、β-干擾素、神經生長因子、血小板衍生生長因子或組織胞漿素原活化劑(tissue plasminogen activator)；栓塞劑或抗-血管新生劑，例如血管司達丁(angiostatin)或內皮司達丁(endostatin)；或生物反應調節劑(biological response modifier)，例如淋巴激素、介白質-1(IL-1)、介白質-2(IL-2)、顆粒巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、顆粒細胞群落刺激因子(G-CSF)、神經生長因子(NGF)或其他生長因子及免疫球蛋白。
其他效應子分子可包括例如可用於診斷之可偵測物質。可偵測物質之例包括各種酵素、輔基(prosthetic group)、螢光材料、發光材料、生物發光材料、放射性核種、正子射出金屬(用於正子斷層顯影術(positron emission tomography))、以及非放射性順磁性金屬離子。概括參閱美國專利第4,741,900號關於可共軛至抗體以使用作為診斷法之金屬離子。適合的酵素包括山葵過氧化酶(horseradish peroxidase)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、或乙醯膽鹼酯酶；適合的輔基(prosthetic group)包括鏈卵白素、卵白素及生物素；適合的螢光材料包括繖形花內酯(umbelliferone)、螢光素、螢光素異硫氰酸酯、若丹明(rhodamine)、二氯三基胺螢光素、丹磺醯氯及藻紅素；適合的發光材料包括發光胺(luminol)；適合的生物發光材料包括螢光素酶、蟲螢光素(luciferin)及水母素(aequorin)；以及適合的放射性核種包括125I、131I、111In及99Tc。
在另一實施例中，效應子分子可增加抗體在活體內的半衰期，及/或降低抗體的免疫原性及/或增強抗體穿越上皮屏障運送到免疫系統。適合的此型效應子分子之例包括、白蛋白、白蛋白結合蛋白或白蛋白結合化合物，例如敘述於WO05/117984者。
當效應子分子是聚合物時，通常可為合成或天然存在的聚合物，例如可選擇經取代之直鏈或分枝鏈聚伸烷基、聚伸烯基或聚氧化烯(polyoxyalkylene)聚合物或分枝鏈或未分枝鏈多醣，例如同質-或異質-多醣。
可存在於上述合成性聚合物之特定選擇性取代基包括一個或一個以上羥基、甲基或甲氧基。
合成性聚合物之特定例包括可選擇經取代之直鏈或分枝鏈聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、聚(乙烯醇)或其衍生物，尤其是可選擇經取代之聚(乙二醇)，例如甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物。
特定天然存在之聚合物包括乳糖、直鏈澱粉、葡聚糖、肝醣或其衍生物。
文中使用之「衍生物」意指包括，例如巰基-選擇性反應基，例如順丁烯二醯亞胺之類。反應基可直接或透過連接子節段連接至聚合物。應知當連接基在抗體片段及聚合物之間時，此等基之殘基在某些實例中形成產物的一部分。
聚合物的尺寸可視需要變化，但一般應在平均分子量500Da至50000Da的範圍內，例如從5000至40000Da，例如從20000至40000Da。聚合物尺寸可特別基於產物的預計用途來選擇，例如定位於某些組織(例如腫瘤)或延長循環半衰期的能力(評論請參閱Chapman,2002,Advanced Drug Delivery Reviews,54,531-545)。因此，例如當產物打算離開循環並穿過組織，例如用於腫瘤的治療時，可能有利為使用小分子量聚合物，例如分子量在5000Da左右。至於應用時之產物餘留於循環，可能有利為使用較高分子量的聚合物，例如具有分子量在20000Da至40000Da的範圍內。
適合的聚合物包括聚伸烷基聚合物，例如聚(乙二醇)，或特別是甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物，以及特別具有分子量在約15000Da至約40000Da的範圍內。
在一實施例中，用於本發明之抗體附著於聚(乙二醇)(PEG)部分。在一特別實施例中，抗體是抗體片段，以及PEG分子可透過位於抗體片段之任何可得之胺基酸側鏈或末端胺基酸官能基，例如任何游離的胺基、亞胺基、巰基、羥基或羧基來附著。此等胺基酸可天然存在於抗體片段或可使用重組DNA方法經處理至片段內(例如參閱US 5,219,996、US 5,667,425、WO 98/25971)。在一實施例中，本發明之抗體分子是經修飾Fab片段，其中修飾是添加一個或一個以上胺基酸至其重鏈的C-末端以使效應子分子附著。較佳為此附加胺基酸形成含有一個或一個以上半胱胺酸殘基之經修飾樞紐區(hinge region)，而效應子分子可附著於此。複數位置可用於附著兩個或兩個以上PEG分子。
適合的PEG分子是透過位於抗體片段之至少一半胱胺酸殘基的巰基共價連接。附著於經修飾抗體片段之每一聚合物分子可共價連接至位於片段中之半胱胺酸殘基的硫原子。通常共價連接是雙硫鍵或特別是硫-碳鍵。此處使用巰基作為經適當活化之效應子分子的附著點，例如可使用巰基選擇性衍生物，例如順丁烯二醯亞胺及半胱胺酸衍生物。可使用活化的聚合物作為如上所述聚合物-經修飾抗體片段之製備的開始材料。活化的聚合物可為任何聚合物含有巰基反應基，例如α-鹵羧酸或酯(例如碘乙醯胺)、醯亞胺(例如順丁烯二醯亞胺)、乙烯碸或二硫化物。此等開始材料可得自市售商品(例如來自Nektar，以前的Shearwater Polymers Inc.,Huntsville,AL,USA)或使用慣用化學處理程序可製備自購買的開始材料。特別的PEG分子包括20K甲氧基-PEG-胺(獲自Nektar，以前的Shearwater、Rapp Polymers及SunBio)以及M-PEG-SPA(獲自Nektar，以前的Shearwater)。
在一具體例中，抗體是經修飾Fab片段或二Fab，其經PEG化，亦即有PEG(聚(乙二醇))共價附著之，例如根據EP 0948544或EP1090037所述方法[也參閱"Poly(ethyleneglycol)Chemistry,Biotechnical and Biomedical Applications",1992,J. Milton Harris(ed),Plenum Press,New York,"Poly(etbyleneglycol) Chemistry and Biological Applications",1997,J. Milton Harris and S. Zalipsky(eds),American Chemical Society,Washington DC and "Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences",1998,M. Aslam and A. Dent,Grove Publishers,New York;Chapman,A. 2002,Advanced Drug Delivery Reviews 2002,54:531-545]。在一實施例中，PEG附著於樞紐區(hinge region)中的半胱胺酸。在一實施例中，PEG修飾之Fab片段具有順丁烯二醯亞胺基共價連接至經修飾樞紐區(hinge region)的單一巰基。離胺酸殘基可共價連接至順丁烯二醯亞胺基，以及對離胺酸殘基上的每一胺基可附著具有分子量約20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)聚合物。因此附著於Fab片段的PEG總分子量可約40,000Da。
在一具體例中，本發明提供一種對人OX40具有專一性的拮抗性抗體分子，其為經修飾Fab片段具有含有SEQ ID NO:9所給序列的重鏈以及含有SEQ ID NO:7所給序列的輕鏈，以及在其重鏈的C-末端具有含至少一附著有效應子分子之半胱胺酸殘基的經修飾樞紐區(hinge region)。較佳為效應子分子是PEG且是使用敘述於(WO98/25971及WO2004072116或WO2007/003898)的方法附著。較佳為效應子分子是以離胺醯基-順丁烯二醯亞胺基附著至位在重鏈C-末端的半胱胺酸殘基的方式附著，以及離胺醯基殘基的每一胺基具有與其共價連接之具有分子量約20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)殘基。因此附著於抗體之PEG的總分子量約40,000Da。特別的PEG分子包括N,N’-二(甲氧基聚(乙二醇)MW 20,000)經修飾離胺酸的2-[3-(N-馬來醯亞胺)丙醯胺基]乙醯胺，也知為PEG2MAL40K(獲自Nektar，以前的Shearwater)。
PEG連接子之其他來源包括NOF提供的GL2-400MA2(其中以下結構中m為5)及L2-400MA(其中m為2)以及n約450： m為2或5
換言之各PEG約為20,000Da。
又下列型態之其他PEG效應子分子可獲自Dr Reddy, NOF及Jenkem：
在一具體例中，有提供經PEG化(例如具有文中所述之PEG)的抗體，透過位在鏈中胺基酸226或約胺基酸226，例如重鏈的胺基酸226(經由連續編號)的半胱胺酸胺基酸殘基來附著。
在一具體例中，本發明提供一種對人OX40具有專一性的拮抗性抗體分子，其為經修飾Fab片段，具有含有或由SEQ ID NO：15所給序列構成之重鏈以及含有或由SEQ ID NO：11所給序列構成之輕鏈，以及具有效應子分子附著於重鏈位置226(從SEQ ID NO：15的線性編號)半胱胺酸。適合的效應子分子是PEG以及使用敘述於(WO98/25971及WO2004072116或WO2007/003898)的方法附著，離胺醯基-順丁烯二醯亞胺基附著於重鏈(SEQ ID NO：15)位置226的半胱胺酸殘基，以及離胺醯基殘基的每一胺基具有與其共價連接之具有分子量約20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)殘基。因此附著於抗體之PEG的總分子量約40,000Da。特別的PEG分子包括N,N’-二(甲氧基聚(乙二醇)MW 20,000)經修飾離胺酸的2-[3-(N-馬來醯亞胺)丙醯胺基]乙醯胺，亦知為PEG2MAL40K(獲自Nektar，以前的Shearwater)。較佳為本發明之抗體分子是PEG化修飾的Fab’片段，如第2圖所示。此PEG化分子在文中稱為A26Fab’-PEG。
在另一實施例中，使用敘述於申請案WO 2005/003169、WO 2005/003170及WO 2005/003171的方法可將效應子分子附著於抗體片段。
本發明也提供編碼本發明抗體分子之重鏈及/或輕鏈的經單離DNA序列。較佳為DNA序列編碼本發明抗體分子的重鏈或輕鏈。本發明之DNA序列可含有合成的DNA，例如經由化學方法製造之cDNA、基因體DNA或其任何組合。
編碼本發明抗體分子之DNA序列可獲自熟悉該項技藝者已知的方法。例如編碼全部或部分抗體重鏈及輕鏈的DNA序列可從已定序的DNA序列或根據對應的胺基酸序列視所欲合成。
熟悉該項技藝者可廣泛取得編碼接受者骨架(framework)序列的DNA，且能基於他們已知的胺基酸序列輕易地合成。
可使用分子生物學的標準技術來製備編碼本發明抗體分子的DNA序列。使用寡核苷酸合成技術可完全或部分地合成所欲的DNA序列。若適宜可使用定點突變及聚合酶鏈鎖反應(PCR)技術。
適宜的序列實例提供於第1(h)圖SEQ ID NO:8、第1(i)圖SEQ ID NO:10、第1(j)圖SEQ ID NO:13、第1(k)圖SEQ ID NO:14、第1(1)圖SEQ ID NO:17及第1(m)圖SEQ ID NO:18。SEQ ID NO 18中核苷酸1-63及SEQ ID NO:14中1-63編碼訊息胜肽序列OmpA，其經切割得到本發明之拮抗性抗體分子(訊息胜肽分別對應於第1(g)圖SEQ ID NO:16胺基酸殘基1-21及第1(e)圖SEQ ID NO:12之1-21)。本發明也提供編碼本發明抗體之重鏈(含有SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18)的經單離DNA序列。本發明也提供編碼本發明抗體之輕鏈(含有SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14)的經單離DNA序列。
本發明也關於含有一種或一種以上本發明DNA序列之選殖或表現載體。因此，所提供為含有一種或一種以上編碼本發明抗體之DNA序列的選殖或表現載體。較佳為選殖或表現載體含有分別編碼本發明抗體分子之輕鏈及重鏈的兩DNA序列。較佳為根據本發明之載體含有SEQ ID NO:14及SEQ ID NO:18所給序列。SEQ ID NO:18中核苷酸1-63及SEQ ID NO:14中1-63編碼來自OmpA的訊息胜肽序列(分別為SEQ ID NO:16中殘基1-21及SEQ ID NO:12中1-21)，其最適於切割而得到本發明之中和性抗體分子。在一實施例中，載體含有基因間序列(intergenic sequence)界於重鏈及輕鏈之間，例如IGS2(參閱WO03/048208)。因此，在一具體例中，本發明之載體含有第1(n)圖所給序列(SEQ ID NO:19)。
經由一般方法可構築載體，轉染法及培養法已為熟悉該項技藝者熟知。在此方面，參考文獻有“Current Protocols in Molecular Biology”,1999,F. M. Ausubel(ed),Wiley Interscience,New York以及Cold Spring Harbor Publishing製作之Maniatis Manual。
也提供者為宿主細胞，含有一種或一種以上選殖或表現載體，其含有編碼本發明抗體之一種或一種以上DNA序列。可使用任何適宜的宿主細胞/載體系統用於表現編碼本發明抗體分子之DNA序列。可使用細菌，例如大腸桿菌(E .coli )及其他微生物系統，或真核生物，例如哺乳動物，亦可使用宿主細胞表現系統。較佳之哺乳動物宿主細胞包括CHO、骨髓瘤或融合瘤細胞。
本發明也提供一種根據本發明之抗體分子的製造方法，包括在適合造成從編碼本發明抗體分子的DNA表現蛋白質之條件下培養含有本發明載體之宿主細胞，以及單離該抗體分子。
抗體分子可只含有重鏈或輕鏈多胜肽，於此情形只需使用編碼重鏈或輕鏈多胜肽的序列來轉染宿主細胞。為製造含有重鏈及輕鏈二者的產物，可以編碼輕鏈多胜肽的第一載體及編碼重鏈多胜肽之第二載體兩載體轉染細胞株。另外，可使用單一載體，該載體包括編碼輕鏈及重鏈多胜肽的序列。
根據本文揭示之抗體及片段是以最佳程度表現自宿主細胞。如此抗體及/或片段的性質是最佳化且有助於工業用加工。
由於本發明之抗體有用於病態狀況的治療及/或預防，本發明也提供含有本發明抗體分子組合一種或一種以上醫藥可接受賦形劑、稀釋劑或載劑之醫藥或診斷用組成物。因此，所提供為使用本發明之抗體於製造藥劑。通常組成物以無菌部分供給，醫藥組成物按慣例包括醫藥可接受載劑。本發明之醫藥組成物可額外含有醫藥可接受佐劑。
本發明也提供製備醫藥或診斷用組成物之方法，包括一起添加及混合本發明之抗體分子與一種或一種以上醫藥可接受賦形劑、稀釋劑或載劑。
抗體分子可為醫藥或診斷用組成物中唯一的活性成分，或可附有其他活性成分包括其他抗體成分，例如抗-TNF、抗-IL-1β、抗-T cell、抗-IFNγ或抗-LPS抗體，或非抗體成分，例如黃嘌呤。其他適合的活性成分包括能誘發耐受性的抗體，例如抗-CD3或抗-CD4抗體。
在另一具體例中，使用根據本揭示之抗體、片段或組成物組合另外的醫藥活性劑，例如皮質類固醇(例如富體松丙酸鹽(fluticasonoe propionate))及/或β-2-激動劑(例如沙丁胺醇(salbutamol)、沙美特羅(salmeterol)或福莫特羅(formoterol))或細胞生長及增殖的抑制劑(例如雷帕黴素、環磷醯胺(cyclophosphmide)、胺甲喋呤(methotrexate))或另外的CD28及/或CD40抑制劑。在一具體例中，該抑制劑是小分子。在另一具體例中，該抑制劑是專一於該標靶的抗體。
醫藥組成物較佳含有治療有效量之本發明之抗體。文中使用之用語「治療有效量」是指治療、改善或預防標靶疾病或狀況，或展現可偵測到之治療或預防效果所需之治療劑的量用。對於任何抗體，治療有效量可於細胞培養分析法或在動物模式中初步估計，通常在齧齒動物、兔子、狗、豬或靈長類動物。亦可使用動物模式決定適合的濃度範圍及投與路徑。然後此等資訊可用於決定可用於人類的劑量及投與路徑。
對於人類患者的確切治療有效量將視疾病狀態的嚴重度、患者大致的健康狀況、患者的年齡、體重及性別、飲食、投與的次數及頻率、藥物組合、對治療的反應敏感性及耐受性/反應而異。此量可由例行的實驗決定且在臨床醫生的判斷內。通常，治療有效量從0.01mg/kg至50mg/kg，例如0.1mg/kg至20mg/kg。醫藥組成物可方便地以每劑含有預定含量之本發明活性劑之單位劑型來呈現。
可對病患各別投與組成物或組合其他試劑、藥或荷爾蒙投與(例如同時、相繼或分開)。
本發明之抗體分子的投與劑量視欲治療的狀況性質、呈現的發炎程度及是否正使用該抗體分子於預防或治療現存的狀況而異。
投藥頻率視抗體分子的半衰期及其作用期間而異。如果抗體分子具有短的半衰期(例如2至10小時)，則每天可能需投藥一次或一次以上。另外，如果抗體分子具有長的半衰期(例如2至15天)，則可能只需每天投藥一次、每週一次或甚至1或2個月1次。
醫藥可接受載劑本身不應誘發產生有害於接受該組成物之個體的抗體，且不應有毒性。適宜的載劑可能是大的、緩代謝的大分子，例如蛋白質、多胜肽、微脂粒、多醣、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合性胺基酸、胺基酸共聚合物及去活性病毒顆粒。
可使用的醫藥可接受鹽，例如礦酸鹽，例如氯化氫、溴化氫、磷酸鹽及硫酸鹽；或有機酸的鹽，例如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽及苯甲酸鹽。
治療組成物中醫藥可接受載劑可額外含有液體，例如水、食鹽水、甘油及乙醇。此外，可存在輔助物質於此等組成物中，例如潤濕劑或乳化劑或pH緩衝物質。此等載劑可使醫藥組成物調配為錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液及懸浮液以給病患攝取。
適於投與的形式包括適於非經腸投與之形式，例如經由注射或灌注，例如經由團式注射(bolus injection)或持續灌注。當產物用於注射或灌注時，可採用懸浮液、溶液或乳液於油性或水性運劑(vehicle)之形式且其可含有調配劑，例如懸浮、保存、安定及/或分散劑。另外，抗體分子可於乾燥形式，使用前以適合的無菌液體復原。
一旦經調配，可對患者直接投與本發明之組成物。欲治療的患者可為動物。但於一個或一個以上具體例中，組成物已適合於投與人類患者。
較佳為在根據本揭示之調配物，最終調配物的pH不相似於抗體或片段的等電點值，例如假設調配物的pH是7，則可能適宜的pI為8-9或以上。然而不欲受限於理論，認為此可最後提供已改善安定性的最終調配物，例如抗體或片段餘留於溶液中。
在一具體例中，在pH範圍為4.0至7.0的醫藥調配物含有：1至200mg/mL根據本揭示之抗體、1至100mM的緩衝劑、0.001至1%的界面活性劑、a)10至500mM的安定劑、b)10至500mM的安定劑及5至500mM的張力劑、或c)5至500mM的張力劑。
舉例而言，約pH6的調配物可含有1至50mg/mL的抗體、20mM L-組胺酸HCl、240mM海藻糖及0.02%聚山梨醇酯20。另外，約pH5.5的調配物可含有1至50mg/mL的抗體、20mM檸檬酸鹽緩衝劑、240mM蔗糖、20mM精胺酸及0.02%聚山梨醇酯20。
本發明之醫藥組成物可經由任何數量的路徑投與，包括但不限於口服、靜脈內、肌肉內、動脈內、骨髓內、腦脊髓膜內、室內、經真皮、經皮(例如參閱WO98/20734)、皮下、腹膜內、鼻內、腸內、局部、舌下、陰道內或直腸路徑。亦可使用皮下噴射器來投與本發明之醫藥組成物。典型為該治療組成物可製備為注射用液體溶液或懸浮液。在注射前亦可製備為適於溶液或懸浮液或液體運劑(vehicle)中的固體形式。
組成物的直接運送通常由皮下、腹膜內、靜脈內或肌肉內注射來達成，或運送至組織的間隙空間。亦可將組成物投與入損害處。劑量處理可為單劑或多劑時刻表安排。
應知組成物的活性成分應是抗體分子。確切而言，其於胃腸道內應易被降解。因此，如果組成物是經由使用胃腸道的路徑來投與，則組成物應需含有保護抗體免於降解的試劑，但是一旦被從胃腸道吸收就釋出抗體。
醫藥可接受載劑的完善討論可得自Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company,N.J. 1991)。
在一具體例中，調配物以局部投與用，包括吸入劑之調配物提供。
適合的吸入性製備物，包括吸入性粉末、含有推進氣體之計量氣溶膠或不含推進氣體之吸入性溶液。根據本揭示含有活性物質之吸入性粉末可只由上述活性物質或上述活性物質與生理可接受賦形劑之混合物構成。
這些吸入性粉末可包括單醣類(例如葡萄或阿拉伯糖)，雙醣類(例如乳糖、蔗糖、麥芽糖)，寡-及多醣類(例如葡聚糖)，多元醇類(例如山梨醇、甘露醇、木糖醇),鹽類(例如氯化鈉、碳酸鈣)或這些與另一者之混合物。較佳使用單-或雙醣類，特別是使用乳糖或葡萄糖，但不排除他們水合物之形式。
沉澱於肺之顆粒需顆粒大小小於10μm，例如1-9μm，例如0.1至5μm，特別是1至5μm。活性成分(例如抗體或片段)的顆粒大小是基本的重要性。
能用於製備吸入性氣溶膠之推進氣體(propellent gases)是習知。較佳的推進氣體選自烴類，例如正丙烷、正丁烷或異丁烷，及鹵烴類例如甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、環丙烷或環丁烷的氯化及/或氟化衍生物。可使用上述推進氣體本身或其混合物。
特佳的推進氣體是選自TG 11、TG 12、TG 134a及TG227之鹵化烷衍生物。特佳為上述之鹵化烴類TG134a(1,1,1,2-四氟乙烷)及TG227(1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)及其混合物。
含推進氣體之吸入性氣溶膠亦可含有其他成分，例如助溶劑、安定劑、界面活化劑(界面活性劑)、抗氧化劑、潤滑劑及調整pH的手段。全部這些成分為習知。
根據本發明含推進氣體之吸入性氣溶膠可含有達5重量%的活性物質。根據本發明之氣溶膠含有例如0.002至5重量%、0.01至3重量%、0.015至2重量%、0.1至2重量%、0.5至2重量%或0.5至1重量%的活性成分。
另外局部投與至肺亦可以液體溶液或懸浮液調配物來投與，舉例而言使用例如噴霧器的裝置，例如連接壓縮機之噴霧器(例如連接Pari Respiratory Equipment,Inc.,Richmond,Va.製造之Pari Master(R)壓縮機的Pari LC-Jet Plus(R)噴霧器)。
本發明之抗體可分散於溶劑中運送，例如以溶液或懸浮液之形式。其可懸浮於適合的生理性溶液中，例如食鹽水或其他藥理可接受溶劑或緩衝溶液。習知之緩衝溶液每1ml水可含有0.05mg至0.15mg乙酸乙二胺二鈉(disodium edentate)、8.0mg至9.0mgNaCl、0.15mg至0.25mg聚山梨醇酯、0.25mg至0.30mg無水檸檬酸、以及0.45mg至0.55mg檸檬酸鈉以致達pH約4.0至5.0。可使用懸浮液，例如凍乾之抗體。
治療懸浮液或溶液調配物亦可含有一種或一種以上賦形劑。賦形劑為技藝熟知且包括緩衝劑(例如檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑及碳酸氫鹽緩衝劑)、胺基酸、尿素、醇類、抗壞血酸、磷脂質、蛋白質(例如血清白蛋白)、EDTA、氯化鈉、微脂粒、甘露醇、山梨醇及甘油。溶液或懸浮液可被封進於微脂粒或生物可分解性微球體內。運用無菌製造方法，通常調配物以實質無菌的形式提供。
此可包括以該技藝具有通常知識者熟悉的方法製造及經由過濾用於調配物之緩衝溶劑/溶液來消毒，無菌地懸浮抗體於無菌緩衝溶劑溶液，以及分散調配物於無菌貯存器中。
根據本揭示可提供噴霧性調配物，例如以單劑單位(例如密封之塑膠容器或小瓶)包裝於箔封套。每一小瓶含有一單位劑體積量，例如2ml的溶劑/溶液緩衝劑。
文中揭示之抗體可能適用於透過噴霧運送。
也估計本發明之抗體可使用基因療法來投與。為達此，將在適宜DNA組成分控制下編碼抗體分子之重鏈及輕鏈的DNA序列導入病患，以至從DNA序列表現抗體鏈並在原位(insitu )組裝。
本發明也提供用於控制發炎性疾病，例如急性或慢性發炎性疾病的抗體分子(或含有它之組成物)。較佳為該抗體分子(或含有它之組成物)可用於降低發炎進程或預防發炎進程。在一具體例中，有提供在活體內降低經活化之T細胞，特別是那些涉及不適當發炎性免疫反應，例如恢復鄰近/局部的此等反應。
當文中運用減少經活化之T細胞時，相較於治療前或無治療者可減少10、20、30、40、50、60、70、80、90或以上百分比。
有益為以根據本發明之抗體、片段或組成物治療，可使經活化之T細胞的量降低，而未降低病患T細胞(未經活化之T細胞)的一般量。此可造成較少的副作用，且可預防病患的T細胞用盡。
本發明也提供用於治療或預防經OX40介入或與OX40量增加有關之病態失調之本發明抗體分子。病態狀況可例如選自由感染(病毒、細菌、真菌及寄生蟲)、內毒素休克有關之感染、關節炎、類風濕性關節炎、氣喘、COPD、骨盆腔發炎症、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、發炎性腸道疾病、克隆氏疾病(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、佩洛尼氏病(Peyronie’s Disease)、乳糜瀉(coeliac disease)、膽囊病、潛毛症(Pilonidal disease)、腹膜炎、牛皮癬、血管炎、手術性沾黏、中風、第I糖尿病、萊姆病、關節炎、腦膜腦炎、自體免疫葡萄膜炎、中樞及周邊神經系統之免疫介入之發炎行疾病例如多發性硬化症、狼瘡(例如全身紅斑性狼瘡)及吉-巴氏症候群(Guillain-Barr syndrome)、異位性皮膚炎、自體免疫肝炎、纖維化肺泡炎、葛瑞夫茲氏症(Graves’disease)、IgA腎病、特發性血小板低下紫斑症(idiopathic thrombocytopenic purpura)、梅尼爾氏症(Meniere’s disease)、天皰瘡、原發性膽汁鬱積性肝硬化、類肉瘤、硬皮症、韋格納肉芽腫(Wegener’s granulomatosis)、其他自體免疫疾病、胰臟炎、創傷(手術)、移植物抗宿主病、移植排斥、心臟病包括缺血性疾病例如心肌梗塞及動脈硬化症、血管內凝血、骨之溶蝕作用、骨質疏鬆症、骨關節炎、牙周炎及胃酸過少所組之群組。
在一具體例中，使用根據本發明之抗體治療過敏、COPD、自體免疫疾病或類風濕性關節炎。
本發明也提供根據本發明的抗體分子用於治療或預防疼痛，特別是發炎有關的疼痛。
本發明進一步提供根據本發明之抗體分子、片段或組成物於製備用於治療或預防經OX40介入或與OX40量增加有關之病態失調之醫藥之用途，特別是該病態失調是類風濕性關節炎、氣喘或COPD。
本發明進一步提供根據本發明之抗體分子、片段或組成物於製備用於治療或預防一種或一種以上文中所述之醫療適應症。
本發明之抗體分子、片段或組成物可用於任何療法中，其中該療法想降低人或動物體內OX40的作用。OX40可於體內循環或以不合意高量位於體內特定位置，例如發炎的地方。
在一具體例中，使用本發明之抗體分子或含有他之組成物於控制發炎疾病，例如如文中所述者。
本發明也提供一種治療人或動物患者罹患經由OX40介入之疾病或受有風險之方法，該方法包括對患者投與有效量之本發明之抗體分子或含有他之組成物。
在一具體例中，有提供純化抗體(特別是根據本發明之抗體或片段)之方法，含有步驟：於非結合模式中進行陰離子交換層析法以至於雜質留在管柱上而抗體被溶析。
用於此方法之適合的離子交換樹脂包括Q.FF樹脂(由GE-Healthcare提供)。該步驟可例如在pH約8進行。
該方法可進一步含有運用陽離子交換層析法之初始捕獲步驟，例如在pH約4至5進行，例如4.5。陽離子交換層析法可例如運用樹脂，例如CaptoS樹脂或SP瓊脂糖凝膠FF(由GE-Healthcare提供)。然後可使用離子性鹽溶液，例如氯化鈉，例如以200mM的濃度將抗體或片段從樹脂溶析出。
如此只要適宜，層析步驟或步驟可包括一次或一次以上清洗步驟。
純化方法亦可含有一種或一種以上的過濾步驟，例如透析過濾步驟。
8以上的pI，例如8.5、8.6、8.7、8.8或9.0的抗體或片段被認為有助於純化以提供該抗體或片段“無”或“實質無”雜質，例如內毒素、DNA及宿主細胞蛋白質。
因此在一具體例中，有提供經純化的OX40抗體或片段，例如人化抗體或片段，尤其是根據本發明之抗體或片段實質經純化而特別無或實質無內毒素及/或宿主細胞蛋白質或DNA。
如上使用之經純化形意指至少90%純度，例如91、92、93、94、95、96、97、98、99% w/w或更純。
實質無內毒素通常意指每mg抗體產物有1EU內毒素含量或更少，例如每mg產物有0.5或0.1EU。
只要是適宜，實質無宿主細胞蛋白質或DNA通常意指每mg抗體產物的宿主細胞蛋白質及/或DNA含量為400μg或更少，例如每mg為100μg或更少，特別是每mg為20μg。
本發明之抗體分子也可用於診斷，例如活體內診斷及反映涉及OX40之疾病狀態。
本說明書內容中之「含有(Comprising)」意指「包括(including)」。
本發明技術適宜的具體例可經組合。
文中敘述之具體例含有某些特徵/成分。該揭示也擴大到個別由該特徵/成分構成或實質構成的具體例。
本發明僅藉由下列舉例說明之實施例並參考伴隨之圖式來進一步說明。
 實施例 第1圖詳述：
a)抗體A26的輕鏈V區域(SEQ ID NO:7)
b)抗體A26的重鏈V區域(SEQ ID NO:9)
c)抗體A26之CDRH1(SEQ ID NO:1)、CDRH2(SEQ ID NO:2)、CDRH3(SEQ ID NO:3)、CDRL1(SEQ ID NO:4)、CDRL2(SEQ ID NO:5)、CDRL3(SEQ ID NO:6)以及抗體CA044_00026之CDRH2(SEQ ID NO:20)及CDRL1(SEQ ID NO:21)。
d)抗體A26的輕鏈(SEQ ID NO:11)
e)抗體A26的輕鏈，包括訊息序列(劃底線)(SEQ ID NO:12)
f)抗體A26的重鏈(SEQ ID NO:15)
g)抗體A26的重鏈，包括訊息序列(劃底線)(SEQ ID NO:16)
h)編碼抗體A26之輕鏈可變區域的DNA(SEQ ID NO:8)
i)編碼抗體A26之重鏈可變區域的DNA(SEQ ID NO:10)
j)編碼抗體A26之輕鏈的DNA(SEQ ID NO:13)
k)編碼抗體A26之輕鏈的DNA，包括訊息序列(SEQ ID NO:14)
使用人V-區域接受者骨架(framework)及經由變化骨架(framework)區域中供者殘基的數目來設計一系列人化VL及VH區域。設計兩嫁接之VH區域(gH1及2)及8個嫁接之VL區域(gL1-8)，並經由寡核苷酸裝配及PCR突變建造基因。
使用已次選殖到大腸桿菌(E. coli )表現載體pTTOD之編碼人化可變功能部位的基因，來構築每一嫁接的抗體Fab’片段，其含有編碼人Cγ1重鏈CH1功能部位(G1m17同種異形(allotype))及人Cκ輕鏈恆定功能部位的DNA(K1m3同種異形)(如前敘述於WO 03/048208)。樞紐區(hinge region)經截斷及修飾，由從Cys-Pro-Pro-Cys改變為Cys-Ala-Ala之序列所構成以產生具有單一半胱胺酸殘基可用於PEG部分(moiety)位置專一附著的樞紐區(hinge region)(參閱實施例2)。
編碼OmpA訊息胜肽的序列附著於編碼重鏈及輕鏈二者基因的5’末端。表現時，訊息序列對準各多胜肽使運送至細菌胞外質(periplasm)。穿過細胞膜改變位置後，訊息序列被割除而留下成熟的Fab’重鏈及輕鏈。
含有各嫁接的pTTOD載體被轉形至宿主菌株大腸桿菌(E. coli )K12 W3110中，以及使用標準方法以高細胞密度培養於大腸桿菌(E. coli )產生抗體Fab’片段。使用標準方法使用陽離子交換隨後陰離子交換層析法純化抗體(Humphreyset al .,2002,Protein Expression and Purification,26,309-320)。
所產生之各種Fab’片段於本文中下述之結合及阻斷中測試，並就他們在大腸桿菌(E. coli )的表現、他們相對於親代抗體的效價、及他們用於純化及下游處理的適合性方面評估之。此導致篩選到嫁接gL8gH2，命名為A26。此嫁接之V區域序列示於第1(a)及(b)圖，以及SEQ ID NOs:7及9分別為輕鏈(gL2)及重鏈(gH2)。
重鏈接受者骨架(framework)是人類生殖種系序列VH3 1-3 3-07，含有來自人JH-區域生殖種系JH4部分的骨架(framework)4。輕鏈接受者骨架(framework)是人類生殖種系序列VK1 2-1 1-02，含有來自人JK-區域生殖種系JK4部分的骨架(framework)4。SEQ ID NO:9之重鏈中位置37、73、78及94(Kabat編號)的胺基酸是供者殘基(來自親代抗體)，已發現其為保留全效價所必需。CDRH2中殘基64自供者麩胺酸轉換為接受者離胺酸(E64K)以產生具有較高pI的分子，更有利於離子交換純化。SEQ ID NO:7之輕鏈中位置64及71(Kabat編號)的胺基酸是供者殘基，已發現其為保留全效價所必需。CDR-L1中殘基27及28自供者麩胺酸及天門冬胺酸轉換為接受者麩醯胺酸(E27Q)及絲胺酸(D28S)以產生具有較高pI的分子，更有利於離子交換純化。
此抗體之CDR示於第1(c)圖，如同原始CDRH2(SEQ ID NO:20)及CDRL1(SEQ ID NO:21)未經修飾。全長輕鏈及重鏈分別示於第1(d)及(f)圖。
gL8及gH2基因在DNA階段經再設計，包含將可變及恆定區域二者的密碼子(codon)最佳化以表現於大腸桿菌(E. coli )及表現於上述之pTTOD(Fab’)載體。編碼輕鏈及重鏈的DNA序列分別示於第1(k)圖SEQ ID NO:14及(m)SEQ ID NO:18。
此Fab’之蛋白質序列(包括恆定區域)提供於SEQ ID NOS:11及12(不含及含有OmpA訊息胜肽之輕鏈)以及SEQ ID NOS:15及16(不含及含有OmpA訊息胜肽之重鏈)。pTTOD(A26 IGS2)雙基因(dicistronic)表現載體包括提供於第1(n)圖及SEQ ID NO:19的序列。序列含有基因間序列IGS2介於輕鏈及重鏈基因(參閱WO03/048208)之間，以及OmpA引導序列在輕鏈及重鏈兩基因開始處。
實施例2：A26Fab’-PEG的製造
根據文中所述方法或WO2007/003898將大腸桿菌(E. coli )所製造及如實施例1所述純化之Fab’片段A26 PEG化。
PEG附著在重鏈(SEQ ID NO:15)位置226(線性編號)的樞紐半胱胺酸，以致於離胺醯基-順丁烯二醯亞胺基附著至重鏈(SEQ ID NO:15)位置226的半胱胺酸殘基，且離胺醯基殘基的各胺基共價連接至具有分子量約20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)殘基。因此PEG附著至抗體的總分子量約40,000Da，如第2圖所示。
實施例3:A26及A26Fab’-PEG對OX40之親和力評估
BIAcore技術即時監測生物分子間的結合，且不需要標記。當相互作用物之一稱為配位體者被直接固定或被捕獲在固定的表面上時，另一稱為分析物者流入溶液蓋過被捕獲的表面。隨著分析物結合至配位體在表面形成複合物，感應子(sensor)偵測感應子表面的質量變化念。此對應於結合過程。當分析物被緩衝劑置換時，監測分析物從配位體的解離作用。在親和力BIAcore分析法中，配位體是受試的抗體以及分析物是人OX40。
儀器 ：Biacore3000,Biacore AB,Uppsala,Sweden。
感應子晶片 ：CM5(研究級)目錄編號：BR-1001-14,Biacore AB,Uppsala,Sweden。晶片保存在4℃。
胺偶合套組 ：目錄編號：BR-1000-50,Biacore AB,Uppsala,Sweden
乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二醯亞胺氯化氫(EDC)。於蒸餾水中製造成75mg/mL並以200μL分裝保存在-70℃。
N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)。於蒸餾水中製造成11.5mg/mL並以200μL分裝保存在-70℃。
1M乙醇胺氯化氫-NaOH pH 8.5。以200μL分裝保存在－70℃。
緩衝劑 ：運行緩衝劑：HBS-EP(0.01M HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.005%界面活性劑P20)。目錄編號：BR-1001-88,Biacore AB,Uppsala,Sweden。緩衝劑保存在4oC。
固定化緩衝劑 ：乙酸鹽5.0(10mM乙酸鈉pH 5.0)。目錄編號：BR-1003-51,Biacore AB,Uppsala,Sweden。緩衝劑保存在4℃。
配位體捕獲 ：Affinipure F(ab’)2 片段山羊抗-人IgG,F(ab’)2 片段專一。Jackson ImmunoResearch Inc(Pennsylvania,USA)
目錄編號 ：109-006-097。試劑保存在4℃。
配位體 ：抗體A26及A26Fab’-PEG，保存在4℃。
分析物 ：人OX40細胞外(185aa)功能部位融合至鼠類IgG2a Fc(232aa)。(0.5mg/ml，Ancell No 513-020批號142805)，保存在4℃。
再生溶液 ：從11.6M存料(stock)溶液以蒸餾水稀釋製備40mM HCl(BDH,Poole,England。目錄編號：101254H)。從50mM存料溶液以蒸餾水稀釋製備5mM NaOH。目錄編號：BR-1003-58,Biacore AB,Uppsala,Sweden。
分析法 ：分析法格式為經由固定的抗-人F(ab’)2 捕獲抗體，然後於捕獲表面滴定人細胞外功能部位OX40，
程序之實例如下：
使用BIAcore 3000(BIAcore AB)進行BIA(生物分子交互作用分析)。透過胺偶合化學將Affinipure F(ab’)2 片段山羊抗-人IgG,F(ab’)2 片段專一(Jackson ImmunoResearch)固定在CM5感應子晶片以捕獲含量的反應單元(RUs)。使用具流動速率10μl/min之HBS-EP緩衝劑(10mM HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.005%界面活性劑P20、BIAcore AB)作為運行緩衝劑。使用0.5μg/mL的Fab’或以50μg/mL的Fab’-PEG之10μl注射液以由固定的抗-人IgG-F(ab’)2 捕獲。以各種濃度(25nM至0.78nM)、流動速率30μL/min將人OX40滴定在捕獲的抗體。以10μL之40mM HCl注射液，隨後5μL之5mM NaOH注射液、流動速率10μL/min進行表面再生。
使用BIA評估軟體(3.2版)依照標準程序分析背景相減結合曲線。從擬合演算法(fitting algorithm)決定動力參數。
決定之A26的親和力值在19-45.4pM的範圍內，以及A26Fab’-PEG在13.7-50.3pM的範圍內。
下表顯示對於未PEG化之人化Fab片段A26(fab*)及A26 Fab’-PEG Fab片段(Fab-PEG**)結合人OX40之重複製作的數據：
實施例3a：A26Fab’-PEG的細胞-系親和力及配位體-阻斷能力 細胞-系親和力
為測定A26Fab’-PEG對於細胞表面所表現之抗原的親和力，使用活化的CD4+ OX40+ T細胞及經FITC標記抗體進行飽和結合實驗。使用抗體專一結合至受體達平衡橫越一定範圍的配位體濃度來測定KD ，假定結合曲線上的任何點只有非常小部分的抗體結合至受體。
使用下述方程式說明平衡結合：
抗體與受體的解離速率=kon x[受體游離 ]x[抗體游離 ]
受體-抗體複合物的解離速率=koff x[受體-抗體]
平衡時，結合及解離速率相等且可衍生出說明結合等溫線(isotherm)之方程式；在半對數圖上結合是S形。以koff /kon 定義KD ，且當最大結合之一半出現時的濃度可從結合曲線計算出。
經由流動式細胞測量術橫越4-對數濃度範圍來測量經FITC標記之A26Fab’-PEG結合至活化的人CD4+ OX40+ T細胞。A26Fab’-PEG的代表性結合曲線示於第3圖。從3個不同供者之活化細胞上所得KD 值為1.193nM、1.071nM及1.055nM。
A26Fab’-PEG的細胞-系KD (平均1.106nM)顯著弱於以BIAcore測量之結合至重組OX40者(31.3pM)。此可能由於一些因子。A26Fab’-PEG對於以二聚體Fc融合蛋白質表現之重組OX40可具有較高的親和力，其比天然細胞表面表現之OX40具有不同的三級及四級結構，預料結合為非共價三聚體於細胞膜中(Chanet. al. ,2000)。再者，親和力可經由重組對天然OX40的不同糖化作用而改變。細胞膜的3維環境，例如膜捲旋及共定位的蛋白質亦可提供立體障礙，限制OX40對A26Fab’-PEG的可接近性。因此，細胞-系親和力可能代表活體內準確之藥物親和力的較接近測量.
方法：A26Fab’-PEG結合至人類活化之CD4 + OX40 + T細胞
在Ficoll梯度分開來單離PBMC以及以1μg/mL PHA-L在37℃、5% CO2 、100%濕度活化3天。使用磁性珠(人類用CD4+ T細胞單離套組II；Miltenyi Biotec)經由負篩選來單離CD4+ T細胞。在抗體(終濃度範圍10μg/mL-0.0006μg/mL(111nM-0.0068nM))存在下在冰上培育約1.2x105 細胞2小時。使用FACScalibur(Becton Dickinson)經由流動式細胞測量術分析前，清洗細胞。產生兩滴定曲線，一以A26Fab’-PEG以及第二以gA33 Fab’-PEG作為非專一結合對照組。使用線性回歸分析減去非專一結合，因而所產生的專一結合曲線經由非線性回歸(Graphpad Prism)分析來決定KD 。
實施例3b：配位體-阻斷能力
使用流動式細胞測量術為基礎之配位體阻斷分析法來測量A26Fab’-PEG阻斷細胞表面所表現之OX40與重組OX40L之間交互作用的能力。簡言之，以滴定A26Fab’-PEG預培育活化之人類CD4+ OX40+ T細胞。隨後添加重組OX40L至細胞使能在A26 Fab’-PEG存在下結合。然後使用經標記的二級試劑經由流動式細胞測量術偵測結合之OX40L的比例。第4圖顯示代表性抑制曲線並證明A26Fab’-PEG能完全阻斷OX40L結合。對於重組OX40L結合之抑制的平均IC50 為4.1nM(n =2供者)。
方法：經由A26Fab’-PEG抑制OX40L結合至人類活化之CD4 + OX40 + T細胞
在Ficoll梯度分開來單離PBMC以及以1μg/mL PHA-L在37℃、5% CO2 、100%濕度活化3天。在抗體(終濃度範圍20μg/mL-0.0003μg/mL(229nM-0.0035nM))存在下在冰上培育2.5x105 細胞10分鐘。以終濃度為2μg/ml添加OX40L(生物素化CD252 muCD8，Ancell)並進一步在冰上培育30分鐘。使用FACScalibur(Becton Dickinson)經由流動式細胞測量術分析之前，清洗細胞並與PE-經標記的鏈卵白素(Jackson Immunoresearch)培育來偵測OX40L結合。使用gA33 Fab’-PEG作為非專一對照組。經由非線性回歸(Graphpad Prism)分析抑制曲線來決定IC50 。所顯示之數據是來自兩代表性供者之一者。
實施例4：A26Fab’-PEG於人功能分析法之效價
評估A26 Fab’-PEG在細胞交互作用期間阻斷內生性OX40-OX40L結合的效力，於一範圍之抗原驅動之人類T細胞反應中測試A26 Fab’-PEG。
實施例4a：混合淋巴細胞反應
1964年首次開發(Bachet al., 1964,Science 143,813-814)之同種異體混合淋巴細胞反應(MLR)是活體外模式之異體反應性T細胞活化及增殖(O’Flahertyet al., 2000,Immunology,100,289-299)，使用來自兩個無關係之供者的全部週邊血液單核細胞(PBMCs)。透過無關係之供者刺激劑PBMC上的同種異體主要組織相容性複合物(MHC)抗原的辨識來活化供者T細胞，導致細胞增殖及製造細胞激素(Lukacset al., 1993,Am J Pathology,143,1179-1188)。T淋巴細胞異體反應已顯示是由同種異體MHC抗原及結合之胜肽二者來驅動(Shermanet al., 1993,Annu. Rev. Immunol,11,385-402)，此暗示MLR反應可能反抗刺激劑同種異體MHC抗原及結合之胜肽。MLR反應的大小與反應者-刺激劑對之間的MHC錯誤配對程度有關聯性(Forresteret al., 2004,Corneal Transplantation：An Immunological Guide to the Clinical Problem,Imperial College Press,66-67)。MLR反應導致來自反應性供者細胞的增殖及TH 1(IL-2、IFN-γ及TNF-α)與TH 2(IL-4、IL-5、IL-10及IL-13)兩T細胞衍生之細胞激素的產生。MLR中萃取之細胞激素概況被認為專一於反應者-刺激劑配對(Jordanet al., 2002,J. Immunol. Methods,260,1-14)。MLR分析法已被廣泛用於學術研究以細察T細胞活化路徑及篩選免疫抑制性藥，以及在臨床環境中評估後天性免疫缺陷徵候群(AIDS)病患的免疫功能以及預測移植接受者可能的供者器官排斥(Bromelowet al., 2001,J. Immunol. Methods,247,1-8)。
使用實質如O’Flaherty等人，2000所述MLR分析法來檢查A26Fab’-PEG對活體外人異體反應性T細胞活化及增殖的功效。在存在及缺乏A26Fab’-PEG下一起培養來自兩個無關係之供者的PBMC，並經由倂入3 H-胸腺嘧啶來測量細胞增殖。如第5圖所示，A26 Fab’-PEG以劑量依賴性方式抑制T細胞增殖，具有2.149nM(0.1877μg/mL)的IC50 值及57%的最大抑制作用。在中尺度發現(MSD)人細胞激素分析法中分析來自人MLR的上清液，以研究A26Fab’-PEG對細胞激素製造的影響。A26Fab’-PEG化部分抑制MLR(數據未示)中IFN-γ(55%抑制)、IL-13(50%抑制)及IL-5(80%抑制)的製造。
方法：經由A26Fab’-PEG之人類同種異體的單向全部PBMC MLR增殖反應的抑制作用
從全部血液單離來自兩個無關係之供者的人PBMC。經由γ-照射將來自一供者的細胞去活性以產生刺激劑族群。來自剩餘供者的細胞形成反應者族群。以1:1比例(1x105 細胞/供者)混合刺激劑與反應者族群，並在A26Fab’-PEG(1ng-100μg/mL)存在下培養6天。利用A33 Fab’-PEG(自行研發試劑)作為對照組試劑。在第6天經由倂入3 H-胸腺嘧啶(0.5μCi/細胞)來測量細胞增殖。數據以在缺乏生物試劑下相對於反應者加刺激劑反應的抑制百分比來表示，且為來自10個不同供者配對(平均± SEM)的組合數據。使用Graphpad Prism軟體計算IC50 值。結果示於第5圖。
實施例4b：破傷風類毒素反應
破傷風類毒素(TT)在接種疫苗的個體中誘發強烈的T細胞專一免疫反應。在活體外，可經由監測PBMC的增殖及細胞激素產生(TH 1與TH 2)來偵測對於TT挑釁之抗原-專一回憶反應(Bishop等人，2005)。A26 Fab’-PEG T細胞增殖，具有2.149nM(0.1877μg/mL)的IC50 值及57%的最大抑制作用。
A26Fab’-PEG以劑量依賴性方式抑制增殖及IL-5、IL-13、IFN-γ與TNF-α產生(數據未示)，增殖的最大抑制達38%。對於增殖的IC50 值，計算2供者為0.58nM(0.051μg/mL)及1.11nM(0.097μg/mL)。第6圖顯示1供者之A26Fab’-PEG增殖抑制曲線。
方法：A26 Fab’-PEG抑制接觸破傷風類毒素之PBMC的增殖
在Ficoll梯度分開來單離PBMC並在A26Fab’-PEG(濃度範圍5μg/mL至0.001μg/mL)存在下於96井圓底平板中每井200μL終體積中接觸1μg/mL破傷風類毒素(Calbiochem)。在37℃、5% CO2 、100%濕度培育5天後，經由倂入3 H-胸腺嘧啶(0.5μCi/井)至積極分開的細胞中來測量細胞增殖。呈現來自單一代表性供者的結果。使用Graphpad Prism軟體計算IC50 值。
實施例4c：居家塵蟎反應
嚴重的急性氣喘可經由吸入抗原例如居家塵蟎(Tillie-Leblondet al., 2005,Allergy,60,(1),23-29)引起，包括來自塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus )屬的物種。在遺傳性過敏症(apotic)病患中，此等過敏原經由週邊血液細胞及TH 2極化之細胞激素產生而誘發增殖性反應，但非遺傳性過敏症病患則無(Linget al., 2004,Lancet,363,608-615)。已建立一活體外分析法來測定OX40阻斷回應抗原挑釁之TH 2細胞激素IL-13製造的效果。PBMC取自具有過敏原-專一IgE(RAST)計分在3及5間(分數0至6)的遺傳性過敏症者，並在A26Fab’-PEG或對照組抗體存在下以塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus )抗原刺激。A26Fab’-PEG抑制IL-13產生達60%的最大值，具有1.23nM的IC50 值(第7圖)。再者，於此分析法中A26Fab’-PEG也有效力地抑制細胞激素IL-4、IL-5及TNF-α的產生，但增加調節性細胞激素IL-10的量(第8圖)。
方法第7圖：A26Fab’-PEG抑制已接觸塵蟎 (Dermatophagoides pteronyssinus ) 過敏原萃取物之PBMC產生IL-13
在Ficoll梯度分開來單離來自過敏自願者之PBMC。在測試抗體(濃度範圍10μg/mL至0.0005μg/mL)存在下於96井圓底平板中每井200μL終體積中，將純化之PBMC接觸25μg/mL塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus )過敏原萃取物(Greer)。在37℃、5% CO2 、100%濕度培育6天後，收取上清液並以ELISA(Biosource)分析IL-13含量。該圖表表示從3供者(平均±SEM)匯集的數據。使用Graphpad Prism軟體計算IC50 值。
方法第8圖：A26Fab’-PEG調節接觸塵蟎 (Dermatophagoides pteronyssinus) 過敏原萃取物之PBMC的細胞激素製造
在Ficoll梯度分開來單離來自過敏自願者之PBMC。在10μg/mL A26Fab’-PEG(114nM)或對照組(TN3 Fab’-PEG)存在下於96井圓底平板中每井200μL終體積中，將純化之PBMC接觸25μg/mL塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus )過敏原萃取物(Greer)。在37℃、5% CO2 、100%濕度培育6天後，收取上清液並以多點分析法(MSD)分析細胞激素含量。該圖表表示從3供者(平均±SEM)匯集的數據。
總結
A26Fab’-PEG於人功能分析法之IC50 值總結於表2。A26Fab-PEG的效力在全部三分析法是類似的，以及與1.106nM的細胞-系親和力測量值據有相當的關連性。在這些分析法中，細胞增殖及/或多發炎性細胞激素的產生被顯著抑制，證明A26Fab’-PEGy極度地抑制T細胞活化。破傷風類毒素及居家塵蟎分析法皆經由記憶T細胞測量回憶反應，此意味A26Fab’-PEG能抑制對各種抗原已建立的T細胞反應。
對居家塵蟎抗原的遺傳性過敏症記憶TH 2反應提供對過敏性氣喘有關的活體外分析法，此數據暗示A26Fab’-PEG在此適應症中可能是有效的療法。先前已知OX40共刺激與肺炎有關連，此暗示其在過敏原-專一純真(nave)CD4+ T細胞分化為發炎性TH 2細胞以及記憶TH 2細胞的回憶反應扮演角色(Wang & Liu,2007,J. Clin. Invest,117(12),3655-3657)。過敏性發炎期間，受壓力之上皮細胞所產生固有的細胞激素胸腺基質淋巴細胞生成素(TSLP)驅動人樹突細胞的成熟，以及誘發OX40L的表現。OX40L作用為促進TH 2極化為具增強TNF-α的發炎性表現型但不產生IL-10之CD4+ T細胞(Itoet al ,2005,J. Exp. Med,202(9),1213-1223)。在HDM反應中，A26 Fab’-PEG有效抑制典型TH 2細胞激素IL-13、IL-5及IL-4以及TNF-α。再者，四過敏性供者中有兩個的A26Fab’-PEG增強IL-10產生。因此，A26Fab’-PEG可能具有抑制過敏性反應的能力，也可能有調節它們朝向調節性表現型的能力。
實施例5： 於Hu-SCID模式中A26Fab’-PEG抑制CD4+及CD8+T細胞增殖
Hu-SCID模式包括以人PBMC復原SCID小鼠，然後引起對抗宿主小鼠的強烈異種反應。此反應因人類T細胞於小鼠中增殖所致。使用實驗測定之A26Fab’-PEG的PK數據，設計一投與療程導致穩定狀態之8、23及34μg/ml A26Fab’-PEG的血漿濃度。第9圖的數據證明經由以之維持A26Fab’-PEG在8、23及34μg/ml穩定狀態的血漿程度，CD4+ 及CD8+ T細胞被極度抑制。
方法：於Hu-SCID模式中A26Fab’-PEG抑制CD4+及CD8+T細胞增殖
在第2天以皮下注射載入劑量0.825、2.475或8.25mg/kg於小鼠，然後每天分別皮下注射0.25、0.75或2.5mg/kg的維持劑量。小鼠在第0天轉移8百萬之人PBMC到腹膜腔的前1天，經由投與TMβ1來耗盡NK細胞。然後在第14天終止此實驗，然後分析血液、腹膜灌洗液及脾臟均質物的CD4+ 及CD8+ 細胞。第14天以頸椎脫臼法殺死小鼠並以心臟穿刺取血。然後以FACS分析測定人CD4+ 及CD8+ 細胞的數目。數據(n=10)以平均±SEM表現。投與A26Fab’-PEG後血液中CD4+ 及CD8+ 細胞的減少示於第9圖。
實施例6:A26Fab’-PEG與非-人靈長類動物OX40的交叉反應性
為有效使用A26Fab’-PEG於非-人靈長類動物(NHP)疾病模式及臨床前毒理學，於人與NHP細胞比較其相對親和力及功能性效力。
對NHP細胞之細胞-系親和力
從週邊血液單離獼猴(Cynomolgus)或恆河猴(rhesus)CD4+ T細胞，並活化以表現高程度的OX4O。以平衡結合曲線的非線性回歸分析如第3圖所示測量A26Fab’-PEG的親和力。相較於人類，A26Fab’-PEG顯示對於獼猴或恆河猴CD4+ T細胞的親和力小於2-倍的減少，此表示其為高交叉反應性(表3)。
在淋巴細胞分離液(Lympholyte)(VH Bio)梯度分開NHP PBMC，在37℃、5%CO2 、100%濕度以1μg/mL PHA-L活化3天，以及使用磁珠經由負篩選單離CD4+ T細胞(非-人靈長類動物用之CD4+ T細胞單離套組II，MiltenyiBiotec)。如實施例3a所述測量親和力(第3圖)。
實施例7：獼猴CIA模式之效力研究 研究的基本原理及研究設計
獼猴膠原蛋白誘發關節炎是人體實驗前用瞭解有潛能之抗-關節炎藥概況的標準模式。在我們操控中，此模式對應用於對抗TNFα及IL-6之治療有反應。這些數據與臨床RA具等效之抗人療法的結果一致。
在獼猴誘發關節炎需要以膠原蛋白II經3週的分開期間進行兩次免疫步驟。關節炎症狀(一個或一個以上關節腫脹及觸痛)在第二次免疫後任何時間會變明顯，使用關節炎計分每週評估。實驗共進行11週。OX40是共刺激分子且因此的功能干擾預期應對此模式的免疫相有影響。評估以A26 Fab’-PEG的三劑療程。第一組僅在第一次免疫日之前接受一次A26Fab’-PEG(100mg/kg)。第二組僅在第二次免疫日之前接受一次A26 Fab’-PEG(100mg/kg)，第三組在第一次及第二次免疫前一天接受A26 Fab’-PEG(100mg/kg)。對照組動物接受乙酸鹽緩衝運劑(vehicle)。處以運劑(vehicle)之組的疾病開始的特徵是血清中急性相蛋白質C-反應性蛋白質(CRP)及結合球蛋白(haptoglobin)升高(臨床RA試驗測量用之生物記號)。以x-射線及組織檢查評估關節完整性。
結果及結論
第一次免疫日前處以A26Fab’-PEG的動物，關節炎嚴重度通常低於處以運劑(vehicle)之組。這些關節炎計分的差異在第49、63及76天有統計上意義。第10圖顯示臨床計分以曲線下面積表示之個別動物的數據全體總結。骨頭腐蝕至關節的X射線評估也降低(表4)如組織病理性改變(第11圖)。CRP及結合球蛋白的濃度傾向低於對照組。類似結果得自第一次免疫前一天及第二次免疫前一天投與A26Fab’-PEG的動物組。但於僅在第二次免疫日之前接受一次A26Fab’-PEG的動物，沒有觀察到具說服力的抗關節炎效果。這些數據顯示抗OX40治療於獼猴CIA的抗關節炎效果，並證明OX40對致病性免疫反應開始的重要性。
第10圖：A26 Fab’-PEG於獼猴CIA之關節炎計分的抑制
數據顯示個別動物對於臨床計分數據的曲線下面積(AUC)：第一次及第二次免疫前接受乙酸鹽緩衝劑的對照組動物(Ac Ac)、第一次免疫前接受的動物(A26 Ac)、第二次免疫前接受A26 Fab’-PEG的動物(Ac A26)以及第一及第二次免疫前接受A26 Fab’-PEG的動物(A26 A26)。橫槓是中位數。
Ac Ac動物接受乙酸鹽緩衝劑運劑(vehicle)，A26 Ac動物為第一次免疫前接受A26Fab’-PEG，Ac A26動物為第二次免疫前接受A26 Fab’-PEG，以及A26 A26動物為第一及第二次免疫前接受A26 Fab’-PEG。平均±s.e.m.,*p<0.05,**p<0.01Wilcoxin’s測試。
方法第11圖：經由A26Fab'-PEG之獼猴CIA的總組織計分降低
數據顯示個別動物在研究終了的總組織計分(倂入軟骨及骨頭的退化、纖維化、肉芽組織及增殖)。Ac Ac動物接受乙酸鹽緩衝劑運劑(vehicle)，A26 Ac動物為第一次免疫前接受A26 Fab’-PEG，Ac A26動物為第二次免疫前接受A26Fab’-PEG，以及A26 A26動物為第一及第二次免疫前接受A26 Fab’-PEG。橫槓是中位數。
當然應瞭解本發明經由實施例僅為了說明，決不表示受此限制，且可製作的細部修飾落於文後的申請專利範圍內。本發明每一具體例的較佳特徵相同如作了適當修正的其他各具體例。全部刊物，包括但不限於本說明引用的專利及專利申請案皆倂入文中作為參考，猶如每一個別刊物是特別且獨立被指出倂入文中作為參考，儘管是充分列舉。
第1圖顯示根據揭示關於抗體之某些胺基酸或DNA序列。
第2圖顯示A26 Fab’-PEG格式之抗體的概略圖畫。
第3圖顯示A26 Fab’-PEG抗體對於細胞表面OX40的細胞系親和力。
第4圖顯示經由A26 Fab’-PEG抗體抑制OX40L結合至經活化之T細胞的百分比。
第5圖顯示在人MLR中經由A26 Fab’-PEG抗體抑制T細胞增殖的百分比。
第6圖顯示A26 Fab’-PEG抑制已接觸破傷風類毒素之PBMC的增殖。
第7圖顯示A26 Fab’-PEG抑制已接觸塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus)過敏原萃取物之PBMC製造IL-13的百分比。
第8圖顯示A26 Fab’-PEG抑制已接觸塵蟎(Dermatophagoides pteronyssinus)過敏原萃取物之PBMC製造細胞激素的百分比。
第9圖顯示在Hu-SCID模式中A26 Fab’-PEG抑制CD4+及CD8+ T細胞增殖。
第10圖顯示在活體內模式中經由A26 Fab’-PEG之關節炎計分(如曲線下面積)的抑制。
第11圖顯示在一關節炎之活體內模式的總組織學計分。

Claims (28)

  1. 一種結合人OX40之拮抗性抗體，含有重鏈及輕鏈，其中重鏈的可變功能部位含有：具有CDR-H1之SEQ ID NO：1序列的CDR、具有CDR-H2之SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：20序列的CDR以及具有CDR-H3之SEQ ID NO：3序列的CDR；以及其中輕鏈的可變功能部位含有：具有CDR-L1之SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：21序列的CDR、具有CDR-L2之SEQ ID NO：5序列的CDR以及具有CDR-L3之SEQ ID NO：6序列的CDR。
  2. 如申請專利範圍第1項之拮抗性抗體，其中重鏈含有SEQ ID NO：9所給序列。
  3. 如申請專利範圍第1項之拮抗性抗體，其中輕鏈含有SEQ ID NO：7所給序列。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之拮抗性抗體，其中該抗體是選自以下所組群組：具有全長的重鏈及輕鏈之完整的抗體分子或其片段，如Fab、經修飾Fab、Fab’、Fab’、F(ab’)2 、Fv、VH、VL或scFv片段。
  5. 一種結合人OX40之拮抗性抗體，具有含有SEQ ID NO：9所給序列之重鏈以及含有SEQ ID NO：7所給序列之輕鏈。
  6. 一種結合人OX40之拮抗性抗體，具有含有SEQ ID NO：15所給序列之重鏈以及含有SEQ ID NO：11所給序列之輕鏈。
  7. 如申請專利範圍第1、5或6項之拮抗性抗體，具有附著 它之效應子(effector)或報告子分子。
  8. 如申請專利範圍第7項之拮抗性抗體，其中效應子分子含有一個或一個以上聚合物。
  9. 如申請專利範圍第8項之拮抗性抗體，其中一個或一個以上聚合物是可選擇經取代之直鏈或分枝鏈聚伸烷基、聚伸烯基或聚氧化烯聚合物或分枝鏈或未分枝鏈多醣。
  10. 如申請專利範圍第9項之拮抗性抗體，其中一個或一個以上聚合物是甲氧基聚(乙二醇)或聚(乙二醇)。
  11. 如申請專利範圍第10項之拮抗性抗體，具有附著至位在重鏈C-末端的半胱胺酸殘基之一之離胺醯基-順丁烯二醯亞胺基或離胺醯基雙-順丁烯二醯亞胺，其中離胺醯基殘基的每一胺基具有與其共價連接之具有分子量約20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)殘基。
  12. 一種具有對人OX40專一性之拮抗性抗體，其為經修飾Fab片段，具有含有SEQ ID NO：15所給序列之重鏈以及含有SEQ ID NO：11所給序列之輕鏈，以及具有附著至重鏈位置226的半胱胺酸之離胺醯基-順丁烯二醯亞胺基，其中離胺醯基殘基的各胺基具有與其共價連接之具有分子量約20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)殘基。
  13. 一種經單離DNA序列，編碼如申請專利範圍第1至12項中任一項之拮抗性抗體的重鏈及/或輕鏈。
  14. 一種選殖或表現載體，含有一種或一種以上如申請專利範圍第13項之DNA序列。
  15. 如申請專利範圍第14項之載體，其中該載體含有SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：18所給序列。
  16. 如申請專利範圍第14項之載體，其中該載體含有SEQ ID NO：19所給序列。
  17. 一種宿主細胞，含有一種或一種以上如申請專利範圍第14至16項中任一項之選殖或表現載體。
  18. 一種如申請專利範圍第1至12項中任一項之拮抗性抗體之製造方法，包括培養如申請專利範圍第17項之宿主細胞以及單離抗體。
  19. 一種醫藥組成物，含有如申請專利範圍第1至12項中任一項之拮抗性抗體，其與一種或一種以上的醫藥可接受賦形劑、稀釋劑或載劑組合。
  20. 如申請專利範圍第19項之醫藥組成物，另含有一種以上的選自由抗-TNF、抗-IL-1β、抗-T cell、抗-IFNγ、抗-LPS、抗-CD3或抗-CD4抗體、黃嘌呤、皮質類固醇、β-2-激動劑、細胞生長及增殖抑制劑、CD28抑制劑、及CD40抑制劑所構成之群組中之其他活性成分。
  21. 一種如申請專利範圍第1、5、6或12項之拮抗性抗體於製備用於治療或預防經OX40介入或與OX40量增加有關之病態失調之醫藥之用途。
  22. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該病態失調為感染。
  23. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該病態失調為移 植物抗宿主病(graft-versus-host disease)或移植排斥。
  24. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該病態失調為過敏、COPD、氣喘、自體免疫疾病、或類風濕性關節炎。
  25. 一種OX40結合抗體融合蛋白質，其包含一結合OX40及兩個功能部位抗體之免疫球蛋白部分，其中結合OX40之免疫球蛋白部分為如申請專利範圍第1項之拮抗性抗體。
  26. 如申請專利範圍第25項之融合蛋白質，其中該免疫球蛋白部分為Fab或Fab’。
  27. 如申請專利範圍第25或26項之融合蛋白質，其中該兩個功能部位抗體為經由雙硫鍵所連接之可變重鏈(VH)及可變輕鏈(VL)配對。
  28. 如申請專利範圍第27之融合蛋白質，其中該VH及VL配對結合白蛋白。
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ZA (1) ZA201105500B (zh)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI1008692B8 (pt) 2009-02-17 2021-05-25 Ucb Biopharma Sprl anticorpo antagonista tendo especificidade para ox40 humano, sequência de dna isolado, vetor de clonagem ou de expressão, célula hospedeira, processo para a produção do referido anticorpo, composição farmacêutica, uso do 5 referido anticorpo e proteína de fusão
GB0920127D0 (en) 2009-11-17 2009-12-30 Ucb Pharma Sa Antibodies
ES2630328T3 (es) 2010-08-23 2017-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Anticuerpos anti-OX40 y procedimientos de uso de los mismos
EP2655409A4 (en) 2010-12-22 2015-07-01 Univ Leland Stanford Junior SUPERAGONISTS AND ANTAGONISTS OF INTERLEUKIN-2
JP6261499B2 (ja) * 2011-07-11 2018-01-17 グレンマーク ファーマシューティカルズ， エセ．アー． Ｏｘ４０と結合する抗体およびその使用
CA2845810C (en) * 2011-08-23 2017-03-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-ox40 antibodies and methods of using the same
GB201116092D0 (en) 2011-09-16 2011-11-02 Bioceros B V Antibodies and uses thereof
UA112203C2 (uk) * 2011-11-11 2016-08-10 Юсб Фарма С.А. Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини
EP2776466B1 (en) 2011-11-11 2017-08-23 UCB Biopharma SPRL Albumin binding antibodies and binding fragments thereof
US20130149351A1 (en) * 2011-12-09 2013-06-13 University Of Southern California Polymer scaffolds and their use in the treatment of vision loss
CN104968364A (zh) 2012-12-03 2015-10-07 百时美施贵宝公司 强化免疫调变性Fc融合蛋白的抗癌活性
MX2015013288A (es) 2013-03-18 2016-04-07 Biocerox Prod Bv Anticuerpos anti-cd134 (ox40) humanizados y usos de los mismos.
CA2925421C (en) 2013-09-24 2023-08-29 Medicenna Therapeutics, Inc. Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
KR101844596B1 (ko) * 2014-03-18 2018-04-05 한국과학기술원 당화 vegf 디코이 수용체 융합 단백질을 포함하는 안질환 치료용 조성물
EP3126386A1 (en) 2014-03-31 2017-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists
EP3134102B1 (en) 2014-04-24 2019-07-03 The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University Superagonists, partial agonists and antagonists of interleukin-2
SG11201609721WA (en) 2014-05-28 2016-12-29 Agenus Inc Anti-gitr antibodies and methods of use thereof
TW201619200A (zh) * 2014-10-10 2016-06-01 麥迪紐有限責任公司 人類化抗－ｏｘ４０抗體及其用途
DK3623386T3 (da) 2015-01-08 2022-07-04 BioNTech SE Agonistiske tnf-receptor-bindingsmidler
US9512229B2 (en) * 2015-03-03 2016-12-06 Kymab Limited Synergistic combinations of OX40L antibodies for the treatment of GVHD
BR112017015880A2 (pt) 2015-03-03 2018-07-31 Kymab Ltd anticorpos, usos e métodos
EP3268037B1 (en) 2015-03-09 2022-08-31 Celldex Therapeutics, Inc. Cd27 agonists
GB201506868D0 (en) 2015-04-22 2015-06-03 Ucb Biopharma Sprl Method for protein purification
MY189692A (en) 2015-05-07 2022-02-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
US9644032B2 (en) 2015-05-29 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against OX40 and uses thereof
MA43017A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Anticorps bispécifiques spécifiques d'un récepteur de co-stimulation du tnf
WO2017063162A1 (zh) * 2015-10-15 2017-04-20 苏州丁孚靶点生物技术有限公司 抗ox40抗体及其应用
IL299072A (en) 2015-12-02 2023-02-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies and methods for using them
WO2017123673A2 (en) 2016-01-11 2017-07-20 Inhibrx Lp Multivalent and multispecific ox40-binding fusion proteins
WO2017134292A1 (en) * 2016-02-04 2017-08-10 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Anti-ox40 antagonistic antibodies for the treatment of atopic dermatitis
EP3471753A1 (en) 2016-06-20 2019-04-24 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
JP2019530434A (ja) 2016-08-05 2019-10-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド アゴニスト活性を有する多価及び多重エピトープ抗体ならびに使用方法
DK3347379T5 (da) 2016-08-17 2020-06-15 Compugen Ltd Anti-tigit-antistoffer, anti-pvrig-antistoffer og kombinationer deraf
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
WO2018089628A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof
EP3630180A1 (en) 2017-06-01 2020-04-08 Compugen Ltd. Triple combination antibody therapies
CA3067909A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Medicenna Therapeutics Inc. Uses and methods for il-2 superagonists, agonists, and fusions thereof
EP3762400A4 (en) * 2018-03-08 2022-03-16 Magenta Therapeutics, Inc. ANTI-CD252 ANTIBODIES, CONJUGATES AND METHODS OF USE
AU2019287765A1 (en) 2018-06-15 2021-01-07 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors
TW202019968A (zh) 2018-08-13 2020-06-01 美商英伊布里克斯公司 Ox40結合多肽及其用途
WO2020070288A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and systems for controlling the agonistic properties of antibody variable domains by light
US10442866B1 (en) * 2019-01-23 2019-10-15 Beijing Mabworks Biotech Co. Ltd Antibodies binding OX40 and uses thereof
WO2020227159A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity
EP3766481A1 (en) * 2019-07-19 2021-01-20 Ichnos Sciences SA Liquid antibody formulation
AU2020407208A1 (en) 2019-12-17 2022-06-02 Amgen Inc. Dual interleukin-2 /tnf receptor agonist for use in therapy
JP2023509359A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド 鉄依存性細胞分解の誘導物質との併用抗癌療法
EP4172323A1 (en) 2020-06-29 2023-05-03 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer
EP4263600A1 (en) 2020-12-18 2023-10-25 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity
KR20230165276A (ko) 2021-03-31 2023-12-05 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이, 인크. 타노트랜스미션 폴리펩티드 및 암의 치료에서의 이의 용도
AU2022303363A1 (en) 2021-06-29 2024-01-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
WO2023064958A1 (en) 2021-10-15 2023-04-20 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
WO2023198851A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for controlling the tumor cell killing by light
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer
US20240209107A1 (en) * 2022-12-19 2024-06-27 Sanofi Cd28/ox40 bispecific antibodies
US20240269251A1 (en) 2023-01-09 2024-08-15 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200846367A (en) * 2007-02-27 2008-12-01 Genentech Inc Antagonist OX40 antibodies and their use in the treatment of inflammatory and autoimmune diseases
CN101331150A (zh) * 2005-11-25 2008-12-24 麒麟医药株式会社 人单克隆抗体人cd134(ox40)及其制备方法和应用

Family Cites Families (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4741900A (en) * 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
DK336987D0 (da) 1987-07-01 1987-07-01 Novo Industri As Immobiliseringsmetode
GB8719042D0 (en) 1987-08-12 1987-09-16 Parker D Conjugate compounds
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) * 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
AU4308689A (en) 1988-09-02 1990-04-02 Protein Engineering Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5223409A (en) * 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8907617D0 (en) 1989-04-05 1989-05-17 Celltech Ltd Drug delivery system
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
JP3068180B2 (ja) 1990-01-12 2000-07-24 アブジェニックス インコーポレイテッド 異種抗体の生成
US5427908A (en) * 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) * 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
ES2315612T3 (es) 1991-04-10 2009-04-01 The Scripps Research Institute Genotecas de receptores heterodimericos usando fagemidos.
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
GB9113120D0 (en) 1991-06-18 1991-08-07 Kodak Ltd Photographic processing apparatus
GB9120467D0 (en) 1991-09-26 1991-11-06 Celltech Ltd Anti-hmfg antibodies and process for their production
PT1024191E (pt) 1991-12-02 2008-12-22 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
US5733743A (en) * 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5821332A (en) 1993-11-03 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Receptor on the surface of activated CD4+ T-cells: ACT-4
JPH09506262A (ja) 1993-12-08 1997-06-24 ジェンザイム・コーポレイション 特異的抗体の製造方法
ES2247204T3 (es) 1994-01-31 2006-03-01 Trustees Of Boston University Bancos de anticuerpos policlonales.
US6242566B1 (en) * 1994-02-10 2001-06-05 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Ligand (ACT-4-L) to a receptor on the surface of activated CD4+ T-cells
FR2716640B1 (fr) 1994-02-28 1996-05-03 Procedes Machines Speciales Dispositif de centrage et de blocage d'une pièce en vue de son rodage à l'aide d'un rodoir à expansion.
US5516637A (en) * 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
GB9812545D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
GB0123276D0 (en) 2001-09-27 2001-11-21 Imp College Innovations Ltd Uses of agents that bind immune-system components
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
GB0124317D0 (en) * 2001-10-10 2001-11-28 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0129105D0 (en) 2001-12-05 2002-01-23 Celltech R&D Ltd Expression control using variable intergenic sequences
AU2002365814A1 (en) 2001-12-18 2003-07-30 J And J Research Pty Ltd Method of treating asthma
US7291331B1 (en) * 2002-09-11 2007-11-06 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Methods of treating OX40 medicated recall immune responses
US20040146948A1 (en) 2002-10-18 2004-07-29 Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology Compositions and methods for targeting antigen-presenting cells with antibody single-chain variable region fragments
US7993864B2 (en) 2002-12-03 2011-08-09 Ucb Pharma S.A. Assay for identifying antibody producing cells
GB0303337D0 (en) * 2003-02-13 2003-03-19 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0312481D0 (en) 2003-05-30 2003-07-09 Celltech R&D Ltd Antibodies
GB0315457D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
PT1644412E (pt) 2003-07-01 2015-12-23 Ucb Biopharma Sprl Fragmentos de anticorpos fab modificados
GB0315450D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
ITRM20030601A1 (it) * 2003-12-24 2005-06-25 Lay Line Genomics Spa Metodo per l'umanizzazione di anticorpi e anticorpi umanizzati con esso ottenuti.
GB0411186D0 (en) 2004-05-19 2004-06-23 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0412181D0 (en) 2004-06-01 2004-06-30 Celltech R&D Ltd Biological products
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
CA2528903C (en) * 2004-12-20 2008-01-15 Honda Motor Co., Ltd. Braking device for motorcycle
US7592429B2 (en) * 2005-05-03 2009-09-22 Ucb Sa Sclerostin-binding antibody
ITRM20050290A1 (it) * 2005-06-07 2006-12-08 Lay Line Genomics Spa Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato.
GB0513852D0 (en) 2005-07-06 2005-08-10 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0514779D0 (en) 2005-07-19 2005-08-24 Celltech R&D Ltd Biological products
WO2007065433A2 (en) 2005-12-05 2007-06-14 Symphogen A/S Anti-orthopoxvirus recombinant polyclonal antibody
JP2009530391A (ja) 2006-03-22 2009-08-27 インペリアル・イノベ−ションズ・リミテッド 免疫系の因子の調節に関連する組成物および方法
US20070224627A1 (en) * 2006-03-23 2007-09-27 Lawrence Horowitz Facilitation of translocation of molecules through the gastrointestinal tract
EP2195341B1 (en) 2007-09-26 2017-03-22 UCB Biopharma SPRL Dual specificity antibody fusions
JP5761997B2 (ja) 2007-12-14 2015-08-12 ブリストル−マイヤーズ・スクイブ・カンパニー ヒトｏｘ４０受容体に対する結合分子
BRPI1008692B8 (pt) * 2009-02-17 2021-05-25 Ucb Biopharma Sprl anticorpo antagonista tendo especificidade para ox40 humano, sequência de dna isolado, vetor de clonagem ou de expressão, célula hospedeira, processo para a produção do referido anticorpo, composição farmacêutica, uso do 5 referido anticorpo e proteína de fusão
EP2475682B1 (en) * 2009-09-10 2018-01-31 UCB Biopharma SPRL Multivalent antibodies
GB0920127D0 (en) * 2009-11-17 2009-12-30 Ucb Pharma Sa Antibodies
GB201000467D0 (en) * 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
JP6261499B2 (ja) * 2011-07-11 2018-01-17 グレンマーク ファーマシューティカルズ， エセ．アー． Ｏｘ４０と結合する抗体およびその使用
UA112203C2 (uk) * 2011-11-11 2016-08-10 Юсб Фарма С.А. Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101331150A (zh) * 2005-11-25 2008-12-24 麒麟医药株式会社 人单克隆抗体人cd134(ox40)及其制备方法和应用
TW200846367A (en) * 2007-02-27 2008-12-01 Genentech Inc Antagonist OX40 antibodies and their use in the treatment of inflammatory and autoimmune diseases

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Publication number Publication date
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