TWI421088B - 中藥組成物水萃取物於製備抑制肺癌細胞生長之藥物上之用途 - Google Patents

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Description

中藥組成物水萃取物於製備抑制肺癌細胞生長之藥 物上之用途
本發明係關於抑制癌細胞生長之中藥組成物及其中藥萃取物，尤指抑制肺癌細胞生長之中藥組成物及其中藥萃取物。
癌症係位於十大死因之一，已連續二十七年為居十大死因之榜首。引發癌症起因主要為：細胞變成異常，且持續的自行分裂，形成更多的異常細胞，就是癌症。
一般腫瘤細胞中，潛存些許具有幹細胞特性的癌細胞，此種癌細胞雖然數量不多，但卻類似幹細胞，可以不斷的進行癌細胞分裂及分化，因此稱之為癌幹細胞。由於癌幹細胞具有極高的抗藥性，西方醫學化學治療藥物難以將之毒殺，因此，常聽到許多經過化療的病患，體內癌症復發的情形，目前生物醫學已知的標準癌症療法，對癌幹細胞根本束手無策。
況且，目前西醫療法所使用之手術、放射線治療、化學療法、賀爾蒙療法、生物製劑療法等，常常對於患者身體產生強烈副作用，因此，若能使用比較溫和，且能抑制癌幹細胞分化之療法，進行癌症治療，對於病患而言將是一大福音。
現今，民眾普遍認以中藥對患者進行治療，屬於比較溫和之治療方法，且具有相當高之市場接受度。因此，若能發展出一種中藥組成物，其經實驗證實後，確實可抑制癌細胞，或阻止癌幹細胞進行分裂，勢必可對於癌症治療具有相當之幫助。
本發明之主要目的係在提供中藥組成物及其中藥萃取物，俾能抑制如肺癌等癌細胞生長。
為達成上述目的，本發明之一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：龍膽草(Gentiana scabra Bunge)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、梔子(Gardenia jasminoides Ellis)、當歸(Angelica sinensis Diels)、生地(Rehmannia glutinosa Libosch. f. hueichingensis(Chao et Schih)Hsiao)、木通(Hocquartia manshuriensis (Kom.)Nakai)、北柴胡(Bupleurum falcatum Linne)、車前子(Plantago asiatica Linne)、蒼朮(Atractylodes lancea De Candolle)、澤瀉(Alisma plantago-aquatica L. var. orientale SAM.)以及甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將龍膽草、黃芩、梔子、當歸、生地、木通、北柴胡、車前子、蒼朮、澤瀉以及甘草混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該龍膽草為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該梔子為1.5至6重量份、該當歸為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該木通為1.5至6重量份、該北柴胡為1.5至6重量份、該車前子為1.5至6重量份、該蒼朮為2至8重量份、該澤瀉為2至8重量份以及該甘草為2.5至10重量份。
更佳而言，該龍膽草為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該梔子為2至4重量份、該當歸為2至4重量份、該生地為2至4重量份、該木通為2至4重量份、該北柴胡為2至4重量份、該車前子為2至4重量份、該蒼朮為3至6重量份、該澤瀉為3至6重量份以及該甘草為4至7重量份。
本發明另一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：連翹(Forsythia suspense (Thunb.)Vahl)、薄荷(Mentha haploclyx BRIQ.)、梔子(Gardenia jasminoides Ellis)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、竹葉(Lophatherum gracile Brongniart)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、大黃(Rheum palmatum Linne)、朴硝(Na2 SO4 )以及蒼朮(Atractylodes lancea De Candolle)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將連翹、薄荷、梔子、黃芩、竹葉、甘草、大黃、朴硝以及蒼朮混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該連翹為1.5至6重量份、該薄荷為1.5至6重量份、該梔子為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該竹葉為1.5至6重量份、該甘草為1.5至6重量份、該大黃為0.5至2重量份、該朴硝為0.5至2重量份以及該蒼朮為2至8重量份。
更佳而言，該連翹為2至4重量份、該薄荷為2至4重量份、該梔子為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該竹葉為2至4重量份、該甘草為2至4重量份、該大黃為0.75至1.5重量份、該朴硝為0.75至1.5重量份以及該蒼朮為3至6重量份。
本發明再另一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：當歸(Angelica sinensis Diels)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hortorum)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、生地(R. glutinosa Libosch. f. hueichingensis(Chao et Schih.)Hsiao)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、地骨皮(Lycium chinense Mill. Root)、丹皮(Paeonia suffruticosa Andr. Root)以及蒼朮(Atractylodes lancea De Candolle)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將當歸、川芎、赤芍、生地、甘草、黃芩、地骨皮、丹皮以及蒼朮混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該當歸為1.5至6重量份、該川芎為1.5至6重量份、該赤芍為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該甘草為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該地骨皮為2.5至10重量份、該丹皮為2.5至10重量份以及該蒼朮為2至8重量份。
更佳而言，該當歸為2至4重量份、該川芎為2至4重量份、該赤芍為2至4重量份、該生地為2至4重量份、該甘草為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該地骨皮為4至7重量份、該丹皮為4至7重量份以及該蒼朮為2至8重量份。
本發明還有一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：當歸(Angelica sinensis Diels)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hortorum)、白芍(Paeonia lactiflora Pall.)、生地(R. glutinosa Libosch. f. hueichingensis(Chao et Schih.)Hsiao)、白朮(Atractylodes ovata De Canndolle)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、續斷(Dipsacus asper Wall.)、杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、山藥(Dioscorea opposita Thunb.)以及艾草(Artemisia argyi Levl. et Vant.)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將當歸、川芎、白芍、生地、白朮、甘草、續斷、杜仲、黃芩、山藥以及艾草混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該當歸為1.5至6重量份、該川芎為1.5至6重量份、該白芍為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該白朮為1.5至6重量份、該甘草為1.5至6重量份、該續斷為1.5至6重量份、該杜仲為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該山藥為2.5至10重量份以及該艾草為2.5至10重量份。
更佳而言，該當歸為2至4重量份、該川芎為2至4重量份、該白芍為2至4重量份、該生地為2至4重量份、該白朮為2至4重量份、該甘草為2至4重量份、該續斷為2至4重量份、該杜仲為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該山藥為4至7重量份以及該艾草為4至7重量份。
本發明另外一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：玉桂(Cinnamomum cassia Presl.)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、生薑(Zingiber officinale Roscoe)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)以及紅棗(Ziziphus jujuba Mill.)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將玉桂、赤芍、甘草、生薑、黃芩以及紅棗混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該玉桂為2.5至10重量份、該赤芍為2.5至10重量份、該甘草為2.5至10重量份、該生薑為2.5至10重量份、該黃芩為1.5至6重量份以及該紅棗為2.5至10重量份。
更佳而言，該玉桂為4至7重量份、該赤芍為4至7重量份、該甘草為4至7重量份、該生薑為4至7重量份、該黃芩為2至4重量份以及該紅棗為4至7重量份。
本發明再另外一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：升麻(Cimicifuga heracleifolia Kam)、生地(R. glutinosa Libosch. F. hueichingensis(Chao et Schich.)Hsiao)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、丹皮(P. suffruticosa Andr. Root)以及黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)。此中藥組成物進行萃取，亦即將升麻、生地、赤芍、丹皮以及黃芩混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該升麻為1至4重量份、該生地為7.5至30重量份、該赤芍為5至20重量份、該丹皮為5至20重量份以及該黃芩為5至20重量份。
更佳而言，該升麻為1.5至3重量份、該生地為10至20重量份、該赤芍為8至15重量份、該丹皮為8至15重量份以及該黃芩為8至15重量份。
此外，上述中藥組成物及其中藥萃取物中，水的加熱溫度及時間、水添加的重量及水的濃縮比例沒有特別限定，較佳如下所述：加熱係將水加熱至90-100℃且持續60分鐘至90分鐘；水的重量為所萃取藥材總重量之5至15倍；以及加熱萃取係將水濃縮至原始重量的1/2至1/4。
以下係藉由特定的具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝之人士，可由本說明書所揭示之內容，輕易地了解本發明之其他優點與功效，亦可瞭解以下實施例僅為說明用，並非用於限制本發明範圍。本發明亦可藉由其他不同的具體實施例加，以施行或應用，本說明書中的各項細節，亦可基於不同觀點與應用，在不悖離本發明之精神下進行各種修飾與變更。
實施例1
取藥材龍膽草11.25克、黃芩11.25克、梔子11.25克、當歸11.25克、生地11.25克、木通11.25克、北柴胡11.25克、車前子11.25克、蒼朮15克、澤瀉15克以及甘草18.75克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例2
取藥材連翹11.25克、薄荷11.25克、梔子11.25克、黃芩11.25克、竹葉11.25克、甘草11.25克、大黃3.75克、朴硝3.75克以及蒼朮15克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例3
取藥材當歸11.25克、川芎11.25克、赤芍11.25克、生地11.25克、甘草11.25克、黃芩11.25克、地骨皮18.75克、丹皮18.75克以及蒼朮15克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例4
取藥材當歸11.25克、川芎11.25克、白芍11.25克、生地11.25克、白朮11.25克、甘草11.25克、續斷11.25克、杜仲11.25克、黃芩11.25克、山藥18.75克以及艾草18.75克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例5
取藥材玉桂18.75克、赤芍18.75克、甘草18.75克、生薑18.75克、黃芩11.25克以及紅棗18.75克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例6
取藥材升麻7.5克、生地56.25克、赤芍37.5克、丹皮37.5克以及黃芩37.5克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
測試例
研究指出癌細胞中，存在一群展現幹細胞特性的癌幹細胞，因此，倘若只針對一般癌細胞進行治療，腫瘤中續存的癌幹細胞，因為具有幹細胞的特性，仍可分化成一般的癌細胞而形成惡性腫瘤，造成治療後癌症復發的情況；反之，假使針對癌幹細胞進行治療的話，則腫瘤中沒有續存的癌幹細胞，可以持續分化並補充一般癌細胞的數量，如此便可抑制腫瘤。
根據文獻報導，已有學者自A549肺癌細胞株中，分離出具有幹細胞特性的癌幹細胞族群，因此本發明於下述實施例中，利用A549肺癌細胞株，分析本發明中藥組成物之萃取物，對細胞存活率之影響，並以流式細胞儀，檢測細胞週期是否受本發明中藥組成物阻斷，也以染色分析法，研究本發明中藥組成物之萃取物，促進細胞自戕之作用，再以流式細胞儀、雙螢光染色法，判斷本發明中藥組成物之萃取物，對癌細胞毒殺效果。
測試例1　細胞存活率測試
分別以10%、20%及100%濃度之實施例1至6萃取物，針對A549肺癌細胞處理72小時後，以MTT法測定細胞存活率，實驗結果如下表1所示。
上述表1之結果顯示，隨著醫藥組成物之用量越高，A549細胞在72小時處理後之細胞存活率越低。
測試例2　處理時程對細胞存活的影響
由測試例1之結果，可推知實施例5的半抑制劑量為35μl，使用此半抑制劑量處理A549肺癌細胞，分別於24、48及72小時三個時間點，以MTT法檢測A549肺癌細胞的存活情形，其結果如圖1所示。
圖1之結果顯示，相較於未經實施例5處理之對照組A549肺癌細胞，經實施例5處理24、48及72小時之A549肺癌細胞，其存活率有顯著的降低，且隨著時間增加，存活率差異程度越大。
測試例3　細胞週期阻斷測試 (1)PI染色
取半抑制劑量35μl之實施例5，處理A549肺癌細胞24、48及72小時後，進行PI染色，而後以流式細胞儀檢測肺癌細胞之DNA含量，經定量統計後結果如圖2所示，其中，橫軸之G0/G1、S、G2/M分別代表細胞週期，而縱軸則代表各週期細胞所佔之比率。
本測試係觀測A549肺癌細胞在實施例5(半抑制劑量)不同時間的處理下，細胞週期的分布情形。圖2之結果顯示，相較於未經實施例5處理之對照組A549肺癌細胞，經實施例5處理之A549肺癌細胞，無論是經過24、48或72小時，其G0/G1期之細胞比率均有顯著上升，此表示實施例5可能造成A549肺癌細胞停滯在G0/G1之細胞週期。
(2)PI及Ki67抗體共染色
取半抑制劑量35μl之實施例5，處理A549肺癌細胞72小時後，進行PI及Ki67抗體共染，而後以流式細胞儀檢測，以測量G0期A549肺癌細胞之細胞比率，經定量統計後結果如圖3所示。
圖3之結果顯示，相較於未經實施例5處理之A549肺癌細胞，經實施例5處理之A549肺癌細胞中，處於G0期之細胞比率有顯著的上升，此結果表示經由實施例5處理後，有較多的A549肺癌細胞離開細胞週期，進入不分裂之G0期。
由上述測試例之結果，可知本發明所提供之中藥組成物及其中藥萃取物，可達到抑制癌細胞生長之功效，也可讓癌細胞進入分裂停滯期，進而阻止癌細胞持續分裂。
上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。
圖1係本發明實施例5之處理時間與A549肺癌細胞之存活率的關係圖，其中***表示經過學生氏t檢測(Student’s t test)分析後，p 值小於0.001。
圖2顯示A549肺癌細胞經過本發明實施例5不同時間的處理後，各週期之細胞所佔比率，其中*、**及***分別表示經過學生氏t檢測分析後，p 值小於0.05、0.01及0.001。
圖3顯示A549肺癌細胞經過本發明實施例5處理後，週期為G0期之A549肺癌細胞的比率，其中***表示經過學生氏t檢測(Student’s t test)分析後，p 值小於0.001。

Claims (4)

  1. 一種中藥組成物水萃取物於製備抑制肺癌細胞生長之藥物上之用途，該中藥組成物水萃取物包括：將龍膽草、黃芩、梔子、當歸、生地、木通、北柴胡、車前子、蒼朮、澤瀉以及甘草混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物；其中，該龍膽草為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該梔子為1.5至6重量份、該當歸為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該木通為1.5至6重量份、該北柴胡為1.5至6重量份、該車前子為1.5至6重量份、該蒼朮為2至8重量份、該澤瀉為2至8重量份以及該甘草為2.5至10重量份。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該加熱係將水加熱至90-100℃且持續60分鐘至90分鐘。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中，該水的重量為所萃取藥材總重量之5至15倍。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中，該加熱萃取係將該水濃縮至原始重量的1/2至1/4。
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