TWI491399B - 中藥組成物水萃取物於製備抑制肺癌細胞生長之藥物上之用途 - Google Patents

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中藥組成物水萃取物於製備抑制肺癌細胞生長之藥物上之用途
本發明係關於抑制癌細胞生長之中藥組成物及其中藥萃取物，尤指抑制肺癌細胞生長之中藥組成物及其中藥萃取物。
癌症係位於十大死因之一，已連續二十七年為居十大死因之榜首。引發癌症起因主要為：細胞變成異常，且持續的自行分裂，形成更多的異常細胞，就是癌症。
一般腫瘤細胞中，潛存些許具有幹細胞特性的癌細胞，此種癌細胞雖然數量不多，但卻類似幹細胞，可以不斷的進行癌細胞分裂及分化，因此稱之為癌幹細胞。由於癌幹細胞具有極高的抗藥性，西方醫學化學治療藥物難以將之毒殺，因此，常聽到許多經過化療的病㊣患，體內癌症復發的情形，目前生物醫學已知的標準癌症療法，對癌幹細胞根本束手無策。
況且，目前西醫療法所使用之手術、放射線治療、化學療法、賀爾蒙療法、生物製劑療法等，常常對於患者身體產生強烈副作用，因此，若能使用比較溫和，且能抑制癌幹細胞分化之療法，進行癌症治療，對於病㊣患而言將是一大福音。
現今，民眾普遍認以中藥對患者進行治療，屬於比較溫和之治療方法，且具有相當高之市場接受度。因此，若能發展出一種中藥組成物，其經實驗證實後，確實可 抑制癌細胞，或阻止癌幹細胞進行分裂，勢必可對於癌症治療具有相當之幫助。
本發明之主要目的係在提供中藥組成物及其中藥萃取物，俾能抑制如肺癌等癌細胞生長。
為達成上述目的，本發明之一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：龍膽草(Gentiana scabra Bunge)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、梔子(Gardenia jasminoides Ellis)、當歸(Angelica sinensis Diels)、生地(Rehmannia glutinosa Libosch.f.hueichingensis(Chao et Schih)Hsiao)、木通(Hocquartia manshuriensis (Kom.)Nakai)、北柴胡(Bupleurum falcatum Linne)、車前子(Plantago asiatica Linne)、蒼朮(Atractylodes lancea De Candolle)、澤瀉(Alisma plantago-aquatica L.var.orientale SAM.)以及甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將龍膽草、黃芩、梔子、當歸、生地、木通、北柴胡、車前子、蒼朮、澤瀉以及甘草混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該龍膽草為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該梔子為1.5至6重量份、該當歸為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該木通為1.5至6重量份、該北柴胡為1.5至6重量份、該車前子為1.5至6重量份、該 蒼朮為2至8重量份、該澤瀉為2至8重量份以及該甘草為2.5至10重量份。
更佳而言，該龍膽草為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該梔子為2至4重量份、該當歸為2至4重量份、該生地為2至4重量份、該木通為2至4重量份、該北柴胡為2至4重量份、該車前子為2至4重量份、該蒼朮為3至6重量份、該澤瀉為3至6重量份以及該甘草為4至7重量份。
本發明另一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：連翹(Forsythia suspense (Thunb.)Vahl)、薄荷(Mentha haploclyx BRIQ.)、梔子(Gardenia jasminoides Ellis)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、竹葉(Lophatherum gracile Brongniart)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、大黃(Rheum palmatum Linne)、朴硝(Na2 SO4 )以及蒼朮(Atractylodes lancea De Candolle)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將連翹、薄荷、梔子、黃芩、竹葉、甘草、大黃、朴硝以及蒼朮混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該連翹為1.5至6重量份、該薄荷為1.5至6重量份、該梔子為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該竹葉為1.5至6重量份、該甘草為1.5至6重量份、該大黃為0.5至2重量份、該朴硝為0.5至2重量份以及該蒼朮為2至8重量份。
更佳而言，該連翹為2至4重量份、該薄荷為2至4重量份、該梔子為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該竹葉為2至4重量份、該甘草為2至4重量份、該大黃為0.75至1.5重量份、該朴硝為0.75至1.5重量份以及該蒼朮為3至6重量份。
本發明再另一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：當歸(Angelica sinensis Diels)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hortorum)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、生地(R.glutinosa Libosch.f.hueichingensis(Chao et Schih.)Hsiao)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、地骨皮(Lycium chinense Mill.Root)、丹皮(Paeonia suffruticosa Andr.Root)以及蒼朮(Atractylodes lancea De Candolle)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將當歸、川芎、赤芍、生地、甘草、黃芩、地骨皮、丹皮以及蒼朮混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該當歸為1.5至6重量份、該川芎為1.5至6重量份、該赤芍為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該甘草為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該地骨皮為2.5至10重量份、該丹皮為2.5至10重量份以及該蒼朮為2至8重量份。
更佳而言，該當歸為2至4重量份、該川芎為2至4重量份、該赤芍為2至4重量份、該生地為2至4重量份、該甘草為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該地骨皮為4 至7重量份、該丹皮為4至7重量份以及該蒼朮為2至8重量份。
本發明還有一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：當歸(Angelica sinensis Diels)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hortorum)、白芍(Paeonia lactiflora Pall.)、生地(R.glutinosa Libosch.f.hueichingensis(Chao et Schih.)Hsiao)、白朮(Atractylodes ovata De Canndolle)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、續斷(Dipsacus asper Wall.)、杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)、山藥(Dioscorea opposita Thunb.)以及艾草(Artemisia argyi Levl.et Vant.)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將當歸、川芎、白芍、生地、白朮、甘草、續斷、杜仲、黃芩、山藥以及艾草混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該當歸為1.5至6重量份、該川芎為1.5至6重量份、該白芍為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該白朮為1.5至6重量份、該甘草為1.5至6重量份、該續斷為1.5至6重量份、該杜仲為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該山藥為2.5至10重量份以及該艾草為2.5至10重量份。
更佳而言，該當歸為2至4重量份、該川芎為2至4重量份、該白芍為2至4重量份、該生地為2至4重量份、該白朮為2至4重量份、該甘草為2至4重量份、該續斷為2至 4重量份、該杜仲為2至4重量份、該黃芩為2至4重量份、該山藥為4至7重量份以及該艾草為4至7重量份。
本發明另外一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：玉桂(Cinnamomum cassia Presl.)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fischer et DC)、生薑(Zingiber officinale Roscoe)、黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)以及紅棗(Ziziphus jujuba Mill.)。將此中藥組成物進行萃取，亦即將玉桂、赤芍、甘草、生薑、黃芩以及紅棗混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該玉桂為2.5至10重量份、該赤芍為2.5至10重量份、該甘草為2.5至10重量份、該生薑為2.5至10重量份、該黃芩為1.5至6重量份以及該紅棗為2.5至10重量份。
更佳而言，該玉桂為4至7重量份、該赤芍為4至7重量份、該甘草為4至7重量份、該生薑為4至7重量份、該黃芩為2至4重量份以及該紅棗為4至7重量份。
本發明再另外一態樣提供一種抑制癌細胞生長之中藥組成物，包括：升麻(Cimicifuga heracleifolia Kam)、生地(R.glutinosa Libosch.F.hueichingensis(Chao et Schich.)Hsiao)、赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)、丹皮(P.suffruticosa Andr.Root)以及黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)。此中藥組成物進行萃取，亦即將升麻、生地、 赤芍、丹皮以及黃芩混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物，同樣可以達到抑制癌細胞生長的功效。
較佳而言，該升麻為1至4重量份、該生地為7.5至30重量份、該赤芍為5至20重量份、該丹皮為5至20重量份以及該黃芩為5至20重量份。
更佳而言，該升麻為1.5至3重量份、該生地為10至20重量份、該赤芍為8至15重量份、該丹皮為8至15重量份以及該黃芩為8至15重量份。
此外，上述中藥組成物及其中藥萃取物中，水的加熱溫度及時間、水添加的重量及水的濃縮比例沒有特別限定，較佳如下所述：加熱係將水加熱至90-100℃且持續60分鐘至90分鐘；水的重量為所萃取藥材總重量之5至15倍；以及加熱萃取係將水濃縮至原始重量的1/2至1/4。
以下係藉由特定的具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝之人士，可由本說明書所揭示之內容，輕易地了解本發明之其他優點與功效，亦可瞭解以下實施例僅為說明用，並非用於限制本發明範圍。本發明亦可藉由其他不同的具體實施例加，以施行或應用，本說明書中的各項細節，亦可基於不同觀點與應用，在不悖離本發明之精神下進行各種修飾與變更。
實施例1
取藥材龍膽草11.25克、黃芩11.25克、梔子11.25克、當歸11.25克、生地11.25克、木通11.25克、北柴胡11.25 克、車前子11.25克、蒼朮15克、澤瀉15克以及甘草18.75克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例2
取藥材連翹11.25克、薄荷11.25克、梔子11.25克、黃芩11.25克、竹葉11.25克、甘草11.25克、大黃3.75克、朴硝3.75克以及蒼朮15克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例3
取藥材當歸11.25克、川芎11.25克、赤芍11.25克、生地11.25克、甘草11.25克、黃芩11.25克、地骨皮18.75克、丹皮18.75克以及蒼朮15克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例4
取藥材當歸11.25克、川芎11.25克、白芍11.25克、生地11.25克、白朮11.25克、甘草11.25克、續斷11.25克、杜仲11.25克、黃芩11.25克、山藥18.75克以及艾草18.75克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例5
取藥材玉桂18.75克、赤芍18.75克、甘草18.75克、生薑18.75克、黃芩11.25克以及紅棗18.75克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
實施例6
取藥材升麻7.5克、生地56.25克、赤芍37.5克、丹皮37.5克以及黃芩37.5克，分別進行切片後，加入水1200克並加熱至90℃以上，持續萃取60至90分鐘後成400克，濾除藥渣便可獲得萃取物。
測試例
研究指出癌細胞中，存在一群展現幹細胞特性的癌幹細胞，因此，倘若只針對一般癌細胞進行治療，腫瘤中續存的癌幹細胞，因為具有幹細胞的特性，仍可分化成一般的癌細胞而形成惡性腫瘤，造成治療後癌症復發的情況；反之，假使針對癌幹細胞進行治療的話，則腫瘤中沒有續存的癌幹細胞，可以持續分化並補充一般癌細胞的數量，如此便可抑制腫瘤。
根據文獻報導，已有學者自A549肺癌細胞株中，分離出具有幹細胞特性的癌幹細胞族群，因此本發明於下述實施例中，利用A549肺癌細胞株，分析本發明中藥組成物之萃取物，對細胞存活率之影響，並以流式細胞儀，檢測細胞週期是否受本發明中藥組成物阻斷，也以染色分析法，研究本發明中藥組成物之萃取物，促進細胞自戕之作用，再以流式細胞儀、雙螢光染色法，判斷本發明中藥組成物之萃取物，對癌細胞毒殺效果。
測試例1 細胞存活率測試
分別以10%、20%及100%濃度之實施例1至6萃取物，針對A549肺癌細胞處理72小時後，以MTT法測定細胞存活率，實驗結果如下表1所示。
上述表1之結果顯示，隨著醫藥組成物之用量越高，A549細胞在72小時處理後之細胞存活率越低。
測試例2 處理時程對細胞存活的影響
由測試例1之結果，可推知實施例5的半抑制劑量為35 μl，使用此半抑制劑量處理A549肺癌細胞，分別於24、48及72小時三個時間點，以MTT法檢測A549肺癌細胞的存活情形，其結果如圖1所示。
圖1之結果顯示，相較於未經實施例5處理之對照組A549肺癌細胞，經實施例5處理24、48及72小時之A549肺癌細胞，其存活率有顯著的降低，且隨著時間增加，存活率差異程度越大。
測試例3 細胞週期阻斷測試 (1)PI染色
取半抑制劑量35 μl之實施例5，處理A549肺癌細胞24、48及72小時後，進行PI染色，而後以流式細胞儀檢測肺癌細胞之DNA含量，經定量統計後結果如圖2所示，其中，橫軸之G0/G1、S、G2/M分別代表細胞週期，而縱軸則代表各週期細胞所佔之比率。
本測試係觀測A549肺癌細胞在實施例5(半抑制劑量)不同時間的處理下，細胞週期的分布情形。圖2之結果顯示，相較於未經實施例5處理之對照組A549肺癌細胞，經實施例5處理之A549肺癌細胞，無論是經過24、48或72小時，其G0/G1期之細胞比率均有顯著上升，此表示實施例5可能造成A549肺癌細胞停滯在G0/G1之細胞週期。
(2)PI及Ki67抗體共染色
取半抑制劑量35 μl之實施例5，處理A549肺癌細胞72小時後，進行PI及Ki67抗體共染，而後以流式細胞儀檢測，以測量G0期A549肺癌細胞之細胞比率，經定量統計後結果如圖3所示。
圖3之結果顯示，相較於未經實施例5處理之A549肺癌細胞，經實施例5處理之A549肺癌細胞中，處於G0期之 細胞比率有顯著的上升，此結果表示經由實施例5處理後，有較多的A549肺癌細胞離開細胞週期，進入不分裂之G0期。
由上述測試例之結果，可知本發明所提供之中藥組成物及其中藥萃取物，可達到抑制癌細胞生長之功效，也可讓癌細胞進入分裂停滯期，進而阻止癌細胞持續分裂。
上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。
圖1係本發明實施例5之處理時間與A549肺癌細胞之存活率的關係圖，其中＊＊＊ 表示經過學生氏t檢測(Student’s t test)分析後，p 值小於0.001。
圖2顯示A549肺癌細胞經過本發明實施例5不同時間的處理後，各週期之細胞所佔比率，其中＊ 、＊＊ 及＊＊＊ 分別表示經過學生氏t檢測分析後，p 值小於0.05、0.01及0.001。
圖3顯示A549肺癌細胞經過本發明實施例5處理後，週期為G0期之A549肺癌細胞的比率，其中＊＊＊ 表示經過學生氏t檢測(Student’s t test)分析後，p 值小於0.001。

Claims (4)

  1. 一種中藥組成物水萃取物於製備抑制肺癌細胞生長之藥物上之用途，該中藥組成物包括：將當歸、川芎、白芍、生地、白朮、甘草、續斷、杜仲、黃芩、山藥以及艾草混合後，以水加熱萃取後濾除藥渣所得之萃取物；其中，該當歸為1.5至6重量份、該川芎為1.5至6重量份、該白芍為1.5至6重量份、該生地為1.5至6重量份、該白朮為1.5至6重量份、該甘草為1.5至6重量份、該續斷為1.5至6重量份、該杜仲為1.5至6重量份、該黃芩為1.5至6重量份、該山藥為2.5至10重量份以及該艾草為2.5至10重量份。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該加熱係將水加熱至90-100℃且持續60分鐘至90分鐘。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該水的重量為所萃取藥材總重量之5至15倍。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該加熱萃取係將該水濃縮至原始重量的1/2至1/4。
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鄭雅文碩士論文「中草藥對引發癌細胞細胞程式凋亡及抑制生長之研究」摘要, 87年度 程錦宜博士論文「阿魏酸對腦缺血-再灌流損傷大鼠之抗癌症、抗氧化作用及其機轉之探討」摘要, 97年度 謝長奇博士論文「補益方劑及活性成分致癌細胞凋亡，及其對荷瘤老鼠之免疫調節作用」摘要, 90年度 Clinical and experimental pharmacology & physiology 35:2 2008 Feb 141-147 尤敏如碩士論文「免疫調節中藥之研究 第二報 白朮」摘要, 83年度 中國腫瘤,2003年第12卷第11期,665-667 Agric. Chem. Biotechnol. 49(4), 140-142 (2006) 林景屏碩士論文「黃芩對於第六型介白質誘發肺癌細胞株(H23)二氫二醇去氫酶基因表現之影響」摘要, 91年度 羅翠芬碩士論文「不同品系山藥貯存性蛋白質Dioscorin對人類呼吸道上皮細胞保護之研究」摘要, 96年度 中國中西醫結合雜誌, 2003年10月第23卷第10期,797-800 ANTICANCER RESEARCH 27:3891-3898(2007) *

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