TWI410408B - 苯磺醯胺衍生物及其醫藥組合物 - Google Patents

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TWI410408B TW099107557A TW99107557A TWI410408B TW I410408 B TWI410408 B TW I410408B TW 099107557 A TW099107557 A TW 099107557A TW 99107557 A TW99107557 A TW 99107557A TW I410408 B TWI410408 B TW I410408B
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Purzer Pharmaceutical Co Ltd
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Description

苯磺醯胺衍生物及其醫藥組合物
本發明係關於一種苯磺醯胺衍生物及其醫藥組合物，尤指一種適用於治療固態瘤之細胞週期標的抑制劑之苯磺醯胺衍生物及其醫藥組合物。
由於講求精緻飲食且環境污染日益惡化，加上吸煙人口之不斷增加，癌症在台灣，乃至全世界所有先進國家的罹患率都相當高。根據美國癌症協會(American Cancer Society)統計資料顯示，癌症是現今僅次於心臟疾病的主要公眾衛生問題。另根據行政院衛生署的相關數據顯示，自民國七十一年起，癌症年年高踞台灣十大死因的第一位，且惡性腫瘤死因排名前三項的肺癌、肝癌及結腸直腸癌這三類固態癌死亡的人數則可達總癌症死亡人數約50%。自從發現如etoposide及cisplatin等抗癌新藥後，對於治療白血病、淋巴癌的效果良好，但化學療法對於肺癌、胃癌及結腸癌等固態癌之療效仍十分有限。
目前，一般治療癌症的治療方法，除了對固態癌(例如胃癌)實施外科手術將癌細胞及局部淋巴腺切除的外科療法外，也發展出其他的治療方法，例如放射線治療法、化學治療法、生物及免疫療法等。近年來，化學治療法已研發出多種利用新抗癌機制之治療製劑，並在臨床上證實能有效提高病人生存率。而這些藥物的作用原理，多是採用抑制細胞週期運行、血管新生(angiogenesis)、脂肪酸轉移酵素(farnesyl transferase)、酪胺酸激酶(tyrosine kinases)等方式，對於腫瘤細胞進行治療。其中針對抑制細胞週期的藥物，例如wortmanni、5-fluorouracil、daunomycin及colchicine等，為近年來研究治療癌症藥物中的主要發展方向之一。
目前，衛采(Eisai)公司已有兩種苯磺醯胺衍生物進入臨床試驗中，此兩種苯磺醯胺衍生物為：
此兩種苯磺醯胺衍生物皆為細胞週期抑制劑，使得細胞凋亡。E7010於老鼠體內抗腫瘤活性試驗方面，有顯著的效果，目前進行第二期臨床實驗。而E7070在這類衍生物中抗腫瘤效果最佳，用於抑制人類之結腸癌細胞(colon 38)其IC50 為0.26μM(Owaet.al.,J. Med. Chem. 1999 ,42 ,3789-3799)，且目前已進入第二期臨床實驗。然而，雖已進入臨床實驗中，但將來是否能真正應用於實際癌症治療中，仍屬一個未知數。
目前臨床上已有幾種用於治療固態瘤的藥物，不過針對不同部位的癌細胞、不同的患者及所產生的副作用等，並非所有的藥物皆能有效的發揮其效用。有鑑於癌症高居國人十大死因之冠，且固態瘤更為癌症死因之首，發展出抑制固態瘤的藥物仍然是當務之急。因此，本發明希望能發展出一種能有效治療固態瘤的新藥，期望這些藥物對腫瘤細胞能具有良好的抑制能力。
本發明之主要目的係在提供一種苯磺醯胺衍生物，俾能有效針對固態瘤達到抑制效果，且對於胃癌細胞(TSGH)、肝癌細胞(Hepa G2)、大腸癌細胞(HT29)、及鼻咽癌細胞(KB)等腫瘤細胞具有良好的療效。
因此，本發明係提供一種苯磺醯胺衍生物，其結構如式(I)所示：
其中，R1 為氫、或C1-6 烷基；R2 與R3 分別為氫、、或共同鍵結為；D為、或；R4 為氫、或硝基；X、Y、每一R5 係各自獨立為氫、或C1-6 烷基；每一R6 係各自獨立為氫、鹵素、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、經鹵素取代之C1-6 烷基、經鹵素取代之C1-6 烷氧基、硝基、-NR8 R9 、或-SO2 NR10 R11 ；R7 係為氫、或鹵素；R8 、R9 、R10 與R11 係各自獨立為氫、或C1-6 烷基；以及i、n係各自獨立為0-3之整數。
於本發明之苯磺醯胺衍生物中，R8 、R9 、R10 、R11 較佳可為氫，而R1 較佳可為氫、或C1-3 烷基，且R1 更佳可為氫、甲基、乙基、丙基、或異丙基。
於本發明之一實施態樣中，R1 可為氫、或C1-3 烷基，D為，且R6 可為氫、鹵素、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、硝基、-NH2 、或-SO2 NH2 。於此實施態樣中，R6 較佳為氫、氯、甲基、甲氧基、硝基、-NH2 、或-SO2 NH2 。此外，R2 與R3 較佳共同鍵結為、或；或R2 與R3 均為氫；或R2 為氫，而R3 為。
於本發明之另一實施態樣中，R1 可為氫、或C1-3 烷基，D為，且R6 可為氫、經鹵素取代之C1-6 烷基、或經鹵素取代之C1-6 烷氧基。於此實施態樣中，R6 較佳為-CF3 。此外，R2 與R3 較佳共同鍵結為、或。
於本發明之再一實施態樣中，R1 可為氫，D可為，且R6 可為氫、鹵素、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、硝基、-NH2 、或-SO2 NH2 。於此實施態樣中，R6 較佳為硝基。此外，R2 與R3 較佳係共同鍵結為、或；或R2 與R3 均為氫。
於本發明之更一實施態樣中，R1 可為氫、或C1-3 烷基，D可為，且R7 可為氫、或鹵素。於此實施態樣中，R1 較佳為氫、或甲基，且R7 較佳為氯；且R2 與R3 較佳係共同鍵結為、或。
「烷基」一詞係指一直鏈或支鏈之非芳香碳氫基圍。
「烷氧基」一詞係指一直鏈或是分支，飽和或是不飽和，包含一氧基之非芳香碳氫基團。
「鹵素」一詞係指包含氟、氯、溴、或碘之鹵素基團。
上述之苯磺醯胺衍生物，主要是透過作為細胞週期標的抑制劑，而具有治療固態瘤的功效。此外，此苯磺醯胺衍生物，更具有抑制胃癌細胞、肝癌細胞、大腸癌細胞、及鼻咽癌細胞等腫瘤細胞之功效。
綜合以上所述，本發明之另一目的係在提供一種作為細胞週期標的抑制劑之醫藥組合物，包括至少一有效劑量之式(I)化合物、其鹽類、或其前驅藥物，及醫藥可接受之稀釋液、載體、或賦型劑，以達成治療固態瘤之目的。
「治療」一詞係指投予一種或多種如式(I)之苯磺醯胺衍生物、其鹽類、或其前驅藥物於一個患有上述疾病之個體，以達治療的效果，例如，治癒、減緩、改變、影響、或是改善。
「有效劑量」一詞係指一種或多種苯磺醯胺衍生物、其鹽類、或其前驅藥物，對接受治療之病患有治療效果所需之量。有效劑量係決定於化合物、投藥途徑、疾病種類、患者年齡、及體重等等。
一含有式(I)化合物之醫藥組合物可以口服、非經腸道、或以吸入劑形式投藥。
以口服方式投予的組合物可以是任何一種可接受的口服方式，包含但不限於：膠囊，錠劑，乳狀液以及水樣懸浮液，分散液及液體等。常用的錠劑載體包含：乳糖與玉米澱粉。潤滑劑如硬脂酸鎂，也常被應用於錠劑中。以膠囊型式口服時，有效稀釋劑為乳糖與乾玉米澱粉。在以水樣懸浮液或乳狀液型式提供口服時，可利用乳化法或懸浮劑將活性物質懸浮或稀釋於油相中。如有需要，可添加入特定的甜味劑，風味劑或著色劑。
非經腸道一詞係指皮下的、皮內的、脈內的(例如：靜脈內)、肌肉內的、脊椎內的、顱內以及其他之輸注技術。無菌注射組合物的製備可以是一無菌注射液或懸浮液，含無毒性、經由非腸道途徑可接受的稀釋液或溶劑，例如1,3-丁二醇溶液。在這些可接受的載體與溶劑中，可利用的為甘露糖醇，水，Ringer’s溶液，以及等張氯化鈉溶液。此外，不易揮發的油在習知係作為溶劑或懸浮介質(如合成之單甘油酯或雙甘油酯)。脂肪酸，如油酸及其甘油衍生物也有助於注射劑的製備，為天然的醫藥上可接受油脂，例如橄欖油或蓖麻油，尤其是在其為聚氧化乙烯的形式下。這些油脂液體或懸浮液也可包含一長鏈的醇類稀釋劑，分散劑，羧甲基纖維素或是其他相似的分散劑。其他一般使用的介面活性劑如Tweens或是Spans或其他相似的乳化劑或是一般醫藥製造業所使用於醫藥可接受之固態、液態或其他可用於劑型開發目的之劑量型式的生物可利用增強劑。
一吸入劑組合物可依醫藥配方之技藝中習知之技術製備，如製成食鹽水溶液之組成物，使用苯甲醇或其他適合之防腐劑，增加生體可用率之吸收促進劑，氟碳化合物，及/或其他技藝中已知之溶解劑或分散劑。
醫藥組成物之載體必須為「可接受」，意為與配方中之活性成分相容(且較佳是使配方安定)及對接受治療之病患無害。一或多種安定劑可用以作為醫藥賦形劑，以遞送一具活性之7-雜氮吲哚化合物。其他載體之實例包括膠狀二氧化矽，硬酯酸鎂，纖維素，十二烷基硫酸鈉，及D&C黃色10號。
本發明之苯磺醯胺衍生物，其合成反應機制大致如流程圖I所示。
流程圖I
本發明於合成化合物時，所使用之分析儀器與鑑定方法如下：熔點測定：使用Laboratory Devices，INC. USA所製造之熔點測定儀(Box 6402,HOLLISTON,MA 01740-6402. USA)進行熔點分析。
核磁共振光譜分析：使用Brucker AMX-400光譜儀或Brucker DPX-200 spectrometer光譜儀進行化合物1~7之1 H及13 C核磁共振光譜分析，化學位移以ppm(ppm,δ)表示。
質譜測定：分為低解析及高解析質譜。低解析質譜均採電子撞擊游離法，使用JEOL JMS-SX102A氣相/液相層析質譜儀進行分析。高解析質譜也採電子撞擊游離法，使用MAT-95XL HRMS高效能質譜儀進行分析。
元素分析測定：C、H、及N等元素之測定，使用Haraeus CHN-O Rapid Elemental Anallyzer之快速元素分析儀，容許誤差值為±0.4%。
薄層色層分析：以表層被覆矽膠(Kieselgel 60F254,Merck)之薄層展開，並經由UV燈源照射顯示，以確定反應完全。
管柱層析分析：使用矽膠管柱(Merck Kieselgel 60 230-400 or 70-230 mesh)進行纯化。
實施例1 ：製備化合物5a(N-(1H-吲哚-7-基)苯磺醯胺,N-(1H-Indol-7-yl) benzenesulfonamide) (1)　製備例1：製備化合物1a及1b(丙酮酸乙酯o -硝基苯基腙,Ethyl pyruvateo -nitrophenylhydrazone)
首先在冰浴中先製備重氮鹽(diazonium salt)溶液：將2-硝基苯胺(2-nitroaniline,25.47g,0.18mmol)加入水(64.6mL)後再與濃鹽酸(76.4mL)均勻混合，攪拌十分鐘。逐滴加入由水(50mL)與亞硝酸鈉(13.37g)所組成的亞硝酸鈉水溶液。滴入後有氣泡生成，攪拌至溶液成黃褐色澄清，且無氣泡生成。另在冰浴中將3-氧代-2甲基丁酸乙酯(2-methyl-3-oxobutyric acid ethyl ester,26.10g,0.14mmol)溶在乙醇(191mL)中，再緩緩加入由氫氧化鉀(32.47g)所組成的50%氫氧化鉀水溶液，接著倒入冰水(380mL)攪拌十分鐘，再到入先前所製備的重氮鹽溶液，當兩溶液混合後，立即有鮮黃色固體生成。攪拌十分鐘，將溶液過濾。並用純水洗至濾液經石蕊試紙測試呈中性後，取固體乾燥，再用乙醇作再結晶。即可得鮮黃色針狀的化合物1(30.00g,85%)，此為Z(1a)及E(1b)兩種型態異構物之混合物。
1a :mp 93-94℃(lit. 94-95.5℃);1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ1.38(t,J =7.0Hz,3H,CH3 ),2.24(s,3H,CH3 ),4.37(q,J =7.2Hz,2H,CH2 ),6.92(t,J =7.2Hz,ArH,1H),7.54(t,J =7.2Hz,1H,ArH),8.18(dd,J =1.4,7.2Hz,1H,ArH),8.18(d,J =7.2Hz,1H,ArH),13.85(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ10.9,14.8,62.0,116.8,120.5,122.6,130.1,130.6,131.1,131.4,133.9,161.2;MS(EI) m/z 252(M+1,100%),251(M+ ,84%),136(M-115,58%).
1b :mp 113-114℃(lit. 117-118℃);1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ1.37(t,J =7.0Hz,3H,CH3 ),2.21(s,3H,CH3 ),4.33(q,J =7.2Hz,2H,CH2 ),6.96(dt,J =1.2,7.7Hz,ArH,1H),7.58(t,J =7.2Hz,ArH,1H),8.00(d,J =8.6Hz,ArH,1H),8.15(dd,J =1.4,8.6Hz,ArH,1H),10.91(s,1H,NH);13 C NMR(100MHz,CDCl3 )δ11.6,14.2,61.6,116.8,120.2,125.7,132.7,136.2,139.2,140.6,164.5;MS(EI) m/z 251(M+ ,100%),43(M-208,63%).
(2)　製備例2：製備化合物2(7-硝基-1H -吲哚-2-羧酸乙酯,Ethyl 7-nitro-1H -indole-2-carboxylate)
將已經乾燥的化合物1a及1b(12.00g,47.76mmol)倒入三頸瓶(250mL)中，再倒入聚磷酸(64.56g,191.05mmol)。首先加熱至70℃使溶液攪拌均勻後，再將溫度上升至80℃。反應12小時經TLC確定反應完全，趁熱將黑色黏稠溶液倒入冰水(400g)中，攪拌至聚磷酸完全水解，此時溶液成黑色，且有棕黑色固體生成。將溶液過濾、取棕黑色固體將之乾燥，再使用連續萃取裝置，以石油醚(bp 60-90℃)當溶劑萃取十二小時後，將石油醚溶液濃縮，可得一黃色固體。經乙醇作再結晶，即可得淡黃色針狀結晶之化合物2(10.5g,94%)。
mp 92-93℃(lit. 91-93℃);1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ1.41(t,J =7.2Hz,3H,CH3 ),4.42(q,J =7.2Hz,2H,CH2 ),7.20(t,J =7.9Hz,1H,ArH),7.28(d,J =2.1Hz,1H,ArH),7.97(d,J =7.8Hz,1H,ArH),8.21(d,J =8.0Hz,1H,ArH),10.25(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ14.8,62.0,109.7,120.5,122.6,130.0 130.6,131.1,131.3,133.8,161.1;MS(EI) m/z 235(M+1,100%),234(M+ ,69%),189(M-45,38%).
(3)　製備例3：製備化合物3(7-硝基-1H -吲哚-2-羧酸,7-Nitro-1H-indole-2-carboxylic acid)
取化合物2(13.79g,58.88mmol)倒入錐形瓶(250mL)中，再加入40℃的乙醇(72.7mL)於錐形瓶攪拌五分鐘，接著加入由氫氧化鉀(7.25g,189.59mmol)與水(17.40g)所調配的氫氧化鉀水溶液，攪拌五分鐘後溶液呈紅棕色澄清。待溫度緩緩下降，開始有黃褐色固體沈澱，持續攪拌三小時後，加入熱水(295mL)將黃褐色固體溶解，此時溶液呈紅棕色澄清狀態。再取3N稀鹽酸緩緩加入溶液，即有乳黃色固體沉澱生成，攪拌十分鐘，直至乳黃色固體不再生成，將溶液過濾。用水沖滌乳黃色固體後取固體乾燥，用乙醇作再結晶，即可得到淡黃色棉絮狀的化合物3(11.57g,96%)。
mp 269-271℃(lit. 269-272℃);1 H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ7.35(t,J =8.0Hz,1H,ArH),7.40(d,J =2.0Hz,1H,ArH),8.22(d,J =7.8Hz,1H,ArH),8.27(dd,J =0.8,8.0Hz,1H,ArH),11.16(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ109.6,110.0,120.6,122.3,130.1,131.3,131.8,134.0,161.6;MS(EI)m/z 206(M+ ,100%),188(M-18,65%),142(M-64,49%),114(M-92,43%).
(4)　製備例4：製備化合物4(7-硝基-1H -吲哚,7-Nitro-1H -indole)
取化合物3(1.63g,7.91mmol)溶在喹啉(quinoline,13mL)中，再加入氧化銅(0.19g)。攪拌均勻後加熱至194℃。加熱過程中有氣體生成，待反應兩小時後不再有氣體生成，且經TLC測試反應完全時。將溶液倒入由濃鹽酸(21.3mL)加入冰水(42.6mL)所組成的鹽酸水溶液中，攪拌後溶液有黑色固體生成。將溶液過濾，分別用乙醚將黑色沈澱物與濾液進行萃取。收集兩相之萃取液，再分別經飽和的碳酸氫鈉水溶液與純水清洗，取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾、濃縮，得一黃色固體。取固體用乙醇作再結晶，即可得到淡黃色針狀的化合物4(0.87g,69%)。
mp 96-97℃(lit.71 95-96℃);1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ6.63(dd,J =2.2,1.0Hz,1H,ArH),7.08-7.18(m,1H,ArH),7.32(t,J =3.0Hz,1H,ArH),7.90(d,J=7.8Hz,1H,ArH),8.08(d,J =8.1Hz,1H,ArH),9.88(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ103.7,118.9,119.2,128.4,129.1,129.3,132.9,133.5;MS(EI) m/z 162(M+ ,100%),116(M-46,87%),104(M-58,41%),89(M-73,53%).
(5)　製備例5：製備化合物5a(N-(1H-吲哚-7-基)苯磺醯胺,N-(1H-Indol-7-yl)benzenesulfonamide)
將化合物4(1.44g,8.88mmol)溶於異丙醇(25mL)中，再加入由氯化氨(0.10g,1.87mmol)加水(4mL)所組成的氯化氨水溶液與鐵粉(1.50g,26.86mmol)，攪拌均勻後升溫至60℃，加熱兩小時後，經TLC確定反應完全，再加入活性碳攪拌三分鐘，然後將溶液過濾，並使用乙酸乙酯沖洗濾質至濾液達100mL。隨即將苯磺醯氯(benzenesulfonyl chloride,1.90g,10.76mmol)與吡啶(pyridine,4.0mL,49.68mmol)依次加入溶液。在室溫下攪拌十小時，經TLC確定反應完全，再加入乙酸乙酯稀釋至200mL，將溶液依次經1N的稀鹽酸、純水、飽和的碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水清洗，清洗後有機層呈紅棕色。加入硫酸鈉脫水後過濾，將濾液濃縮後得一固體，取固體以乙醇作再結晶，即可得白色針狀結晶之化合物5a(2.28g,94%)。
mp 178-179℃;1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ6.41(d,J =7.4Hz,1H,ArH),6.54(dd,J =2.2,3.1Hz,1H,ArH),6.86(t,J =7.8Hz,1H,ArH),6.90(s,1H,NH),7.24-7.26(m,2H,ArH),7.31-7.32(m,1H,ArH),7.34-7.36(m,1H,ArH),7.50(d,J =8.0Hz,1H,ArH),7.54-7.59(m,2H,ArH),9.20(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ103.2,118.5,120.2,120.3,120.4,125.8,127.9,129.5,130.6,132.4,133.7,138.3;MS(EI) m/z 272(M+ ,63%),131(M-141,100%),104(M-168,94%),77(M-195,85%);HRMS(m/z) for C14 H12 N2 O2 S(M+ ):Calcd,272.0620;Found,272.0617.Anal.(C14 H12 N2 O2 S):Calcd,C,61.75;H,4.44;N,10.29;Found,C,61.48;H,4.52;N,10.22.
實施例2： 製備化合物5b(N-(1H -吲哚-7-基)-4-甲基苯磺醯胺,N-(1H -Indol-7-yl)-4-methylbenzenesulfonamide)
將實施例1中之化合物4(2.00g,12.33mmol)溶於異丙醇(25mL)中，再加入由氯化氨(0.13g,2.43mmol)加水(7mL)所組成的氯化氨水溶液與鐵粉(2.07g,37.06mmol)。於60℃加熱三小時三十分後，經TLC確定反應完全，再加入活性碳攪拌三分鐘，將溶液過濾，用乙酸乙酯沖洗濾質至濾液達100mL。隨即加入由4-甲基苯磺醯氯(4-methylbenzenesulfonyl chloride,3.29g,17.26mmol)與吡啶(3.00mL,37.27mmol)所配置的溶液。在室溫下攪拌三小時後，經TLC確定反應完全，以乙酸乙酯稀釋至250mL，再依次經1N的稀鹽酸、純水、飽和的碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水清洗，清洗後有機層呈紅棕色。加入硫酸鈉脫水後過濾，將濾液濃縮後得一固體，取固體以乙醇作再結晶，即可得白色針狀結晶之化合物5b(2.27g,64%)。
mp 159-160℃(lit. 157-159℃);1 H NMR(200MHz,acetone-d6 )δ2.34(s,1H,CH3 ),6.47(dd,J =3.1,2.0Hz,1H,ArH),6.73(dd,J =7.6,1.2Hz,1H,ArH),6.84(dt,J =7.6,1.6Hz,1H,ArH),7.26(dd,J =4.0,0.4Hz,2H,NH),7.34-7.41(m,2H,ArH),7.57(t,J =1.8Hz,1H,ArH),7.61(t,J =1.6Hz,1H,ArH),8.71(s,1H,NH),10.10(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ21.4,102.9,117.7,119.4,120.0,122.3,126.2,128.1,130.2,131.0,132.4,137.7,144.3;MS(EI) m/z 286(M+ ,56%),131(M-155,100%),104(M-182,38%).
實施例3： 製備化合物5c(N-(1H -吲哚-7-基)-4-甲氧基苯磺醯胺,N-(1H -Indol-7-yl)-4-methoxybenzenesulfonamide)
將實施例1中之化合物4(2.00g,12.33mmol)溶於異丙醇(25mL)中，再加入由氯化氨(0.13g,2.47mmol)加水(7mL)所配置的氯化氨水溶液與鐵粉(2.07g,37.00mmol)。於60℃加熱兩小時後，經TLC確定反應完全，加入活性碳攪拌三分鐘，將溶液過濾，用乙酸乙酯沖洗濾質至濾液達150mL。隨即加入由4-甲氧基苯磺醯氯(4-methoxybenzenesulfonyl chloride,3.56g,17.23mmol)與吡啶(4.00mL,49.70mmol)所配置的溶液。在室溫下攪拌三小時後經TLC確定反應完全，加入乙酸乙酯稀釋至250mL，再依次經1N的稀鹽酸、純水、飽和的碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水清洗，清洗後有機層呈紅棕色。加入硫酸鈉脫水後過濾，將濾液濃縮後得一固體，取固體以乙醇作再結晶，即可得黃色片狀結晶化合物5c(1.54g,30%)。
mp 161-162℃(lit.62 161-162℃);1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ3.7(s,3H,CH3 ),6.43-6.46(m,2H,ArH),6.72(s,1H,ArH),6.76(s,1H,ArH),6.78(t,J =7.6Hz,1H,ArH),7.05(s,1H,NH),7.16(t,J =2.6Hz,1H,ArH),7.39(d,J=7.4Hz,1H,ArH),7.52(s,1H ArH),7.56(s,1H ArH),9.23(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ56.0,103.0,114.6,118.1,120.1,120.5,125.5,125.7,129.8,123.0,130.4,132.1,163.6;MS(EI) m/z 302(M+ ,59%),131(M-171,100%),104(M-182,51%).
實施例4： 製備化合物5d(4-氯-N-(1H -吲哚-7-基)苯磺醯胺,4-Chloro-N-(1H -indol-7-yl) benzenesulfonamide)
將實施例1中之化合物4(2.48g,15.30mmol)溶於異丙醇(45mL)中，再加入由氯化氨(0.16g,9mmol)加水(9mL)所組成的氯化氨水溶液與鐵粉(2.56g,45.8mmol)。於60℃加熱兩小時後，經TLC確定反應完全，加入活性碳攪拌三分鐘，將溶液過濾，用乙酸乙酯沖洗濾質至濾液達150mL。隨即加入4-氯苯磺醯氯(4-chlorobenzenesulfonyl chloride,3.38g,16.00mmol)與吡啶(3.70mL,45.97mmol)所配置的溶液。在室溫下攪拌七小時三十分後經TLC確定反應完全，以乙酸乙酯稀釋至250mL，再依次經1N的稀鹽酸、純水、飽和的碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水清洗，清洗過程中有嚴重乳化現象，清洗後有機層呈紅棕色。取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，將濾液濃縮後得一固體，取固體以乙醇作再結晶，即可得針狀白色結晶之化合物5d(3.13g,67%)。
mp 163-164℃(lit. 163-164.5℃);1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ6.44(d,J =7.4Hz,1H,ArH),6.54(dd,J =2.2.3.0Hz,1H,ArH),6.84(t,J =7.6Hz,1H,ArH),6.96(s,1H,NH),7.34-7.41(m,2H,ArH),7.46-7.55(m,2H,ArH),7.64-7.69(m,2H,ArH),9.28(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ103.2,118.7,119.8,120.2,120.7,125.8,129.3,129.7,130.7,132.3,136.6,140.2;MS(EI) m/z 306(M+ ,25%),131(M-171,90%),104(M-182,100%).
實施例5： 製備化合物5e(N-(1H -吲哚-7-基)-4-硝基苯磺醯胺,N-(1H -Indol-7-yl)-4-nitrobenzenesulfonamide)
將實施例1中之化合物4(1.36g,8.39mmol)溶於異丙醇(25mL)中，再加入由氯化氨(0.09g,1.68mmol)加水(5mL)所配置的氯化氨水溶液與鐵粉(1.40g,25.16mmol)。於60℃加熱一小時三十分後，經TLC確定反應完全，加入活性碳攪拌三分鐘，將溶液過濾，用乙酸乙酯沖洗濾質至濾液達100mL。隨即依次加入4-硝基苯磺醯氯(4-nitrobenzenesulfonyl chloride,2.60g,11.74mmol)與吡啶(3.00mL,33.55mmol)。在室溫下攪拌三小時後，以乙酸乙酯稀釋至200mL，並依次經1N的稀鹽酸、純水、飽和的碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水清洗溶液，清洗後有機層呈紅棕色。取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，將濾液濃縮得一固體，取固體以乙醇作再結晶，即可得黃色片狀結晶之化合物5e(1.93g,73%)。
mp 185-186℃(lit. 188-189℃);1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ6.54(dd,J =3.1,2.1Hz,2H,ArH),6.64(d,J =7.4Hz,1H,ArH),6.84(t,J =7.7Hz,1H,ArH),7.26-7.28(m,2H,ArH,NH),7.41-7.52(m,2H,ArH),7.58-7.70(m,2H,ArH),7.87(d,J =7.9,1.2Hz,1H ArH),9.06(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ103.3,118.8,119.5,120.1,121.1,125.7,125.8,130.7,131.9,132.6,133.0,134.5;MS(EI) m/z 317(M+ ,37%),206(M-111,58%),131(M-186,100%),104(M-213,79%);HRMS(m/z) for C14 H11 N3 O4 S(M+ ):Calcd,317.0470;Found,317.0470.Anal.(C14 H11 N3 O4 S):Calcd,C,52.99;H,3.49;N,13.24;Found,C,52.99;H,3.51;N,13.07.
實施例6: 製備化合物5g(N-(1H-吲哚-7-基)-4-磺醯按基苯磺醯按,N-(1H-Indol-7-yl)-4-sulfamoylbenzenesulfonamide)
(1)製備化合物10(4-硫醯苯磺醯氯,4-Sulfamoylbenzenesulfonyl chloride) 流程圖II
如流程圖II所示，首先先製備化合物9之水溶液，取化合物8(6.4g,37.2mmol)在冰浴中加入水(12.5mL)及濃鹽酸(6.30mL,205.68mmol)攪拌均勻，再加入由亞硝酸鈉(2.65g,38.41mmol)與水(10mL)所組成的水溶液，待溶液由含白色固體轉為黃色澄清時，化合物9水溶液製備完成。另取錐形瓶加入冰醋酸(35mL)通入二氧化硫氣體40分鐘，加入無水氯化銅(cupric chloride dehydrate,1.5g,13.74mmol)攪拌十分鐘後，逐滴加入先前所配置化合物9水溶液，加入後立即有白色沉澱與氣體產生。攪拌十分鐘，將顏色呈蘋果綠的溶液過濾，可得一乳白色固體。用水沖洗固體後取固體乾燥。即可得純的化合物10(4.37g,46%)。
mp 152-153℃(lit.74 153-156℃)；1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ5.12(s,2H,NH2),8.18(d,J =0.6Hz,4H,ArH);3 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ128.2,144.9;MS(EI)m/z 220(M+ ,100%),156(M-64,60%),76(M-144,57%).
(2)製備例2：製備化合物5g(N-(1H-吲哚-7-基)-4-磺醯胺基苯磺醯胺)
將本實施例中製備例1之化合物4(2.00g,12.33mmol)溶於異丙醇(25mL)中，再加入由氯化氨(0.13g,2.43mmol)加水(9mL)所組成的氯化氨水溶液與鐵粉(2.07g,37.20mmol)。於60℃加熱一小時三十分後，經TLC確定反應完全，加入活性碳攪拌三分鐘，再將溶液過濾，用乙酸乙酯沖洗濾質至濾液達150mL。隨即依次加入化合物10(3.31g,13.3mmol)與吡啶(3.00mL,33.55mmol)。在室溫下攪拌十小時後，經TLC確定反應完全，經乙酸乙酯稀釋至250mL，再依次經1N的稀鹽酸、純水、飽和的碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水清洗溶液，洗後有機層呈紅棕色。取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，將濾液濃縮得一固體，取固體以乙醇作再結晶，即可得針狀白色結晶之化合物5g(2.13g,66%)。
mp 215-216℃;1 H NMR(200MHz,acetone-d6 )δ6.45(d,J =4.2Hz,1H,ArH),6.69(d,J =7.2Hz,1H,ArH),6.79(s,1H,N H),6.83(t,J =7.6Hz,1H,ArH),7.34(t,J =2.6Hz,1H,ArH),7.42(d,J =7.8Hz,1H,ArH),7.85(d,J =8.4Hz,2H,ArH),7.95(d,J =8.8Hz,2H,ArH),7.99(s,1H,NH),8.98(s,1H,NH),10.15(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ102.5,117.7,119.6,121.2,125.82,126.0,127.1,128.4,130.7,140.2,143.2,148.3;MS(EI) m/z 351(M+ ,53%),131(M-220,100%),104(M-247,47%).
實施例7：製備化合物5h(N-(1H -吲哚-7-基)-2-硝基苯磺醯胺,N-(1H -Indol-7-yl)-2-nitrobenzenesulfonamide)
將實施例1中之化合物4(2.00g,12.33mmol)溶於異丙醇(25mL)中，再加入由氯化氨(0.13g,2.43mmol)加水(9mL)所組成的氯化氨水溶液與鐵粉(2.07g,37.20mmol)。於60℃加熱一小時三十分後，經TLC確定反應完全，加入活性碳攪拌三分鐘，再將溶液過濾，用乙酸乙酯沖洗濾質至濾液達150mL。隨即加入2-硝基苯磺醯氯(2-nitrobenzenesulfonyl chloride,3.83g,17.26mmol)與吡啶(4.00mL,44.70mmol)。溶液顏色由淡黃褐色轉變成深紫，在室溫下攪拌三小時後，經TLC確定反應完全，溶液經乙酸乙酯稀釋至250mL，再依次經1N的稀鹽酸、純水、飽和的碳酸氫鈉水溶液與飽和食鹽水清洗溶液，洗後有機層呈黑褐色。取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，將濾液濃縮得一固體，取固體以乙醇作再結晶，即可得片狀黃色結晶之化合物5h(1.61g,41%)。
mp 187-188℃;1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ6.55(dd,J =0.8,2.2Hz,1H,ArH),6.62(d,J =7.4Hz,1H,ArH),6.84(t,J =7.8Hz,1H,ArH),7.26(s,1H,NH),7.27(t,J =3.0Hz,1H,ArH),7.41-7.53(m,2H,ArH),7.58-7.71(m,2H,ArH),7.87(dd,J =7.0,0.8Hz,1H,ArH),9.04(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ103.3,118.8,119.4,120.1,121.1,125.7,125.8,130.7,131.9,132.6,132.9,134.5;MS(EI) m/z 317(M+ ,35%),131(M-186,88%),104(M-213,100%),77(M-240,26%);HRMS(m/z) for C14 H11 N3 O4 S(M+ ):Calcd,317.0470;Found,317.0476. Anal.(C14 H11 N3 O4 S):Calcd,C,52.99;H,3.49;N,13.24;Found,C,52.69;H,3.59;N,13.13.
實施例8： 製備化合物6a(N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)苯磺醯胺,N -(5,8-Dimethyl-9H -carbazol-1-yl) benzenesulfonamide)
取三頸瓶加入化合物5a(0.85g,3.12mmol)與乙醇(25mL)均勻混合後，再加入對甲苯磺酸(p -toluene sulfonic acid,0.30g,1.56mmol)與2,5-己二酮(hexane-2,5-dione,0.71g,6.24mmol)。加熱迴流四小時三十分，經TLC確認起始物不再減少，將紫色之乙醇溶液抽乾，加入乙酸乙酯以水萃取，取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，取濾液抽乾乙酸乙酯可得一固體。以管柱層析法(矽膠；ψ 4cm x 16cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=7/5)進行分離。收集液體(Rf =0.61,己烷/乙酸乙酯=7/5)濃縮即可得白色固體之化合物6a(0.47g,43%)。
mp 237-238℃;1 H NMR(200MHz,acetone-d 6 )δ2.52(s,3H,CH3 ),2.76(s,3H,CH3 ),6.89(d,J =3.6Hz,1H,ArH),7.01-7.08(m,3H,ArH),7.38-7.54(m,3H,ArH),7.73-7.78(m,2H,ArH),7.98(d,J=3.8Hz,1H,ArH),8.82(s,1H,NH),9.83(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ17.0,20.8,118.3,118.8,119.4,119.8,121.6,122.3,122.6,127.2,127.3,127.9,129.3,129.7,131.2,136.6,139.6,140.3.
實施例9： 製備化合物6b(N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)-4-甲基苯磺醯胺,N -(5,8-Dimethyl-9H -carbazol-l-yl)-4-methylbenzenesulfon amide)
取三頸瓶加入化合物5b(1.00g,3.49mmol)與乙醇(25mL)均勻混合後，再加入對甲苯磺酸(0.33g,1.75mmol)與2,5-己二酮(0.80g,6.98mmol)。加熱迴流三十六小時，經TLC確認反應完全後，將乙醇溶液抽乾，加入乙酸乙酯以水萃取。取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，取濾液抽乾乙酸乙酯可得一固體，以管柱層析(矽膠；ψ 4cm x 13cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=7/5)進行分離，收集液體(R f =0.57,己烷/乙酸乙酯=7/5)濃縮即可得白色固體之化合物6b(1.26g,99%)。
mp 185-186℃;1 H NMR(400MHz,CDCl3 )δ2.33(s,3H,CH3 ),2.52(s,3H,CH3 ),2.79(s,3H,CH3 ),6.71(d,J =3.8Hz,1H,ArH),6.92(d,J =3.6Hz,1H,ArH),6.97(t,J =3.9Hz,1H,ArH),7.01(s,1H,NH),7.15(t,J =4.1Hz,3H,ArH),7.59(d,J =4.1Hz,2H,ArH),7.98(d,J =7.8Hz,1H,ArH),9.07(s,1H,NH);13 C NMR(100MHz,CDCl3 )δ16.5,20.4,21.5,117.9,119.1,119.214,121.113,121.2,121.3,121.5,126.6,126.6,127.5,129.7,130.7,134.9,135.7,139.1,144.2;MS(EI) m/z 364(M+ ,23%),209(M-155,100%),28(M-336,37%);HR MS(m/z) for C21 H20 N2 O2 S(M+ ):Calcd,364.1245;Found,364.1247.Anal.(C21 H20 N2 O2 S):Calcd,C,69.20;H,5.53;N,7.69;Found,C,69.23;H,5.53;N,7.56.
實施例10： 製備化合物6c(N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)-4-甲氧基苯磺醯按,N -(5,8-Dimethyl-9H -carbazol-1-yl)-4-methoxybenzenesulfonamide)
取三頸瓶加入化合物5c(0.70g,2.32mmol)與乙醇(25mL)均勻混合後，再加入對甲苯磺酸(0.22g,1.16mmol)與2,5-己二酮(0.53g,4.63mmol)，加熱迴流六小時，經TLC確認起始物不再減少，將乙醇抽乾，加入乙酸乙酯溶解並以水萃取，取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，取濾液抽乾乙酸乙酯可得一固體，以管柱層析(矽膠；ψ4cm x 11cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=7/5)進行分離。收集液體(R f =0.56,己烷/乙酸乙酯=7/5)濃縮即可得白色固體之化合物6c(0.20g,23%)。
mp 180.5-181℃;1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ2.54(s,3H,CH3 ),2.80(s,3H,CH3 ),3.77(s,3H,OCH3 ),6.69(d,J =7.6Hz,1H,ArH),6.79(s,1H,ArH),6.84(s,1H,ArH),6.90(s,1H,NH),6.96(dd,J =7.6,7.8Hz,2H,ArH),7.14(d,J =7.4Hz,1H,ArH),7.60(t,J =2.0Hz,1H,ArH),7.63(t,J =2.0Hz,1H,ArH),7.99(d,J =8.0Hz,1H,ArH),9.09(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ21.0,24.8,60.2,119.0,122.7,124.2,125.0,125.1,125.9,126.1,130.8,131.4,134.4,135.3,136.4,139.5,144.1,168.1;MS(EI) m/z 380(M+ ,55%),209(M-171,100%). Anal.(C21 H20 N2 O3 S):Calcd,C,66.29;H,5.30;N,7.36;Found,C,66.05;H,5.37;N,7.06.
實施例11： 製備化合物6d(4-氯-N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)苯磺醯胺,4-Chloro-N -(5,8-dimethyl-9H -carbazol-1-yl) benzenesulfona mide)
取三頸瓶加入化合物5d(1.00g,3.26mmol)與乙醇(25mL)均勻混合後，再加入對甲苯磺酸(0.30g,1.60mmol)與2,5-己二酮(0.74g,6.52mmol)。加熱迴流九小時，經TLC確認起始物不再減少，將乙醇溶液抽乾，加入乙酸乙酯溶解並以水萃取。取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，取濾液抽乾乙酸乙酯可得一固體，以管柱層析(矽膠；ψ4cm x 15cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=7/5)進行分離。收集液體(R f =0.57,己烷/乙酸乙酯=7/5)濃縮即可得白色固體之化合物6d(0.67g,53.25%)。
mp 217-218℃;1 H NMR(200MHz,acetone-d 6 )δ2.52(s,3H,CH3 ),2.77(s,3H,CH3 ),6.90(d,J =7.2Hz,1H,ArH),7.05-7.17(m,3H,ArH),7.46-7.53(m,2H,ArH),7.72(t,J =2.1Hz,1H,ArH),7.75(m,1H,ArH),7.89(dd,J =7.3,1.6Hz,1H,ArH),8.88(s,1H,NH),9.84(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ16.8,20.5,118.5,120.0,121.2,121.5,121.8,122.0,126.7,127.3,128.1,129.8,131.2,133.7,135.6,139.9,140.6;MS(EI) m/z 384(M+ ,27%),209(M-175,100%),28(M-356,60%);HRMS(m/z) for C20 H17 ClN2 O2 S(M+ ):Calcd,384.0699;Found,384.0700. Anal.(C20 H17 ClN2 O2 S):Calcd,C,62.41;H,4.45;N,7.28;Found,C,62.42;H,4.48;N,7.14.
實施例12: :製備化合物6e(N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)-4-硝基苯磺醯胺,N -(5,8-Dimethyl-9H -carbazol-1-yl)-4-nitrobenzenesulfonamide)
取三頸瓶加入化合物5e(1.00g,3.15mmol)與乙醇(25mL)均勻混合後，再加入對甲苯磺酸(0.30g,1.58mmol)與2,5-己二酮(0.72g,6.30mmol)。加熱迴流五小時，經TLC確認起始物不再減少且反應已達平衡，將乙醇溶液抽乾，加入乙酸乙酯溶解並以水萃取，取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，取濾液抽乾乙酸乙酯可得一固體，以管柱層析(矽膠；ψ4cm x 10cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=3/1)進行分離，收集液體(R f =0.34,己烷/乙酸乙酯=3/1)濃縮即可得黃色固體之化合物6e(0.31g,79%)，並回收液體(R f =0.26,己烷/乙酸乙酯=3/1)濃縮即可得化合物5e(0.21g)。
mp202-203℃;1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ2.55(s,3H,CH3 ),2.79(s,3H,CH3 ),6.89(dd,J =7.7,1.0Hz,1H,ArH),6.92-7.03(m,2H,ArH),7.16(d,J =7.2Hz,1H,ArH),7.31(s,1H,NH),7.42(ddd,J =1.2,7.4,7.9Hz,1H,ArH),7.58(dd,J =7.9,1.4Hz,1H,ArH),7.66(ddd,J =1.6,8.5,6.9Hz,1H,ArH),7.87(dd,J =8.0,1.2Hz,1H,ArH),8.02(dd,J =1.0,2.8Hz,1H,ArH),8.88(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ17.0,20.8,118.3,118.5,119.8,121.6,121.8,122.3,122.9,125.6,127.3,131.2,131.9,132.6,132.9,134.6,136.7,139.5,148.6,161.8;MS(EI) m/z 396(M+1,38%),395(M+ ,12%),209(M-186,100%). Anal.(C20 H17 N3 O4 S):Calcd,C,60.75;H,4.33;N,10.63;Found,C,60.46;H,4.29;N,10.37.
實施例13： 製備化合物6f(4-胺基-N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)苯磺醯胺,4-Amino-N -(5,8-dimethyl-9H -carbazol-1-yl) benzenesulfona mide)
將化合物6e(0.15g,0.38mmol)溶於異丙醇(25mL)中，再加入由氯化氨(4.1mg,0.07mmol)加水(0.5mL)所組成的氯化氨水溶液與鐵粉(64mg,1.14mmol)。於60℃加熱一小時後，經TLC確定反應完全，加入活性碳攪拌三分鐘，將溶液過濾，用乙酸乙酯沖洗濾質，取濾液抽乾乙酸乙酯可得一固體，以管柱層析(矽膠；ψ1.5cm x 10cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=3/1)進行分離，收集液體(R f =0.24,己烷/乙酸乙酯=2/1)濃縮即可得黃色固體之化合物6f(0.08g,58%)。
mp 254-255℃;1 H NMR(200MHz,acetone-d 6 )δ2.51(s,3H,CH3 ),2.74(s,3H,CH3 ),3.12(s,2H,NH2 ),6.87(d,J =7.0Hz,1H,ArH),7.04-7.17(m,3H,ArH),7.97-8.01(m,3H,ArH),8.24-8.28(m,2H,ArH),9.14(s,1H,NH),9.95(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ17.0,20.8,118.2,118.4,119.4,121.6,121.9,122.4,122.9,125.6,127.3,131.2,131.9,132.7,133.0,134.5,136.6,139.5,148.6,161.8.
實施例14： 製備化合物6g(N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)-4-磺醯胺基苯磺醯胺，N -(5,8-Dimethyl-9H -carbazol-1-yl)-4-sulfamoylbenzenesulf onamide)
取三頸瓶加入化合物5g(1.00g,2.85mmol)與乙醇(25mL)均勻混合後，再加入對甲苯磺酸(0.27g,1.43mmol)與2,5-己二酮(0.65g,5.70mmol)。加熱迴流五小時，經TLC確認反應完全，將乙醇溶液抽乾，加入乙酸乙酯溶解並以水萃取，取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，取濾液抽乾乙酸乙酯可得一固體，以管柱層析(矽膠；ψ4cm x 7cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=3/1)進行分離。收集液體(R f =0.39,己烷/乙酸乙酯=2/1)濃縮即可得白色固體之化合物6g(1.06g,86%)。
mp 290-291℃;1 H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ2.50(s,3H,CH3 ),2.69(s,3H,CH3 ),6.85(d,J =7.2Hz,1H,ArH),7.05(t,J =8.0Hz,1H,ArH),7.09(d,J =7.2Hz,1H,ArH),7.24(d,J =7.6Hz,1H,ArH),7.47(s,2H,NH2 ),7.84(d,J =7.6Hz,1H,ArH),7.90(d,J =8.0Hz,2H,ArH),7.87(d,J =8.0Hz,2H,ArH),8.00(d,J =8.4Hz,2H,ArH),10.22(s,1H,NH),10.63(s,1H,NH);13 C NMR(100MHz,DMSO-d 6 )δ16.5,20.3,116.2,117.4,119.5,120.1,120.3,124.8,126.3,126.6,127.9,129.1,138.6,147.7;MS(EI) m/z 429(M+ ,55%),209(M-220,100%),28(M-401,50%);HRMS(m/z) for C20 H19 N3 O4 S(M+ ):Calcd,429.0817;Found,429.0816. Anal.(C20 H19 N3 O4 S):Calcd,C,55.93;H,4.46;N,9.78;Found,C,55.77;H,4.57;N,9.64.
實施例15 ：製備化合物6h(N -(5,8-二甲基-9H -咔唑-1-基)-2-硝基苯磺醯胺,N -(5,8-Dimethyl-9H -carbazol-1-yl)-2-nitrobenzenesulfonamide)
取三頸瓶加入化合物5h(0.60g,1.89mmol)與乙醇(25mL)均勻混合後，再加入對甲苯磺酸(0.18g,0.95mmol)與2,5-己二酮(0.43g,3.78mmol)。加熱迴流三小時後，有乳黃色固體生成。反應二十小時，經TLC確認起始物不再減少且反應已達平衡，將乙醇溶液過濾，取濾液抽乾，加入乙酸乙酯溶解並以水清洗。取有機層加入硫酸鈉脫水後過濾，取濾液加入活性碳加熱攪拌後過濾，將濾液抽乾可得一綠色固體，以管柱層析(矽膠；ψ4cm x 15cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=3/1)進行分離。收集液體(R f =0.67,己烷/乙酸乙酯=3/1)濃縮即可得黃色固體之化合物6h(0.48g,65%)。
mp 202-203℃;1 H NMR(200MHz,acetone-d 6 )δ2.53(s,3H,CH3 ),2.76(s,3H,CH3 ),6.90(d,J =7.2Hz,1H,ArH),7.05-7.14(m,2H,ArH),7.23(dd,J =1.2,3.9Hz,1H,ArH),7.31(s,1H,NH),7.63(dt,J =1.4,7.6Hz,1H,ArH),7.76-7.85(m,2H,ArH),7.95(dt,J =1.2,8.2Hz,1H,ArH),8.04(dd,J =0.8,7.7Hz,1H,ArH),9.10(s,1H,NH),9.96(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ16.4,20.2,118.2,119.6,119.8,121.5,121.7,125.3,126.5,127.1,130.8,131.9,132.2,132.6,135.0,136.0,140.0,148.7;MS(EI) m/z 395(M+ ,17%),209(M-186,100%);HRMS(m/z) for C20 H17 N3 O4 S(M+ ):Calcd,395.0940;Found,395.0941. Anal.(C20 H17 N3 O4 S):Calcd,C,60.75;H,4.33;N,10.63;Found,C,60.66;H,4.41;N,10.40.
實施例16： 製備化合物7a(4-氯-N -[3-(4-硝基苯偶氮)-1H -吲哚-7-基]苯磺醯胺,4-Chloro-N -[3-(4-nitrophenylazo)-1H -indol-7-yl]benzenesu lfonamide) 流程圖III
如流程圖III所示，首先先製備化合物12之水溶液，將化合物11(4-硝基苯胺，4-nitrophenylamine,1.15g,8.29mmol)於冰浴中加入濃鹽酸(9.29mL)，加水稀釋至100mL後。再逐滴加入由亞硝酸鈉(0.95g,13.80mmol)與水(25mL)所組成的水溶液，待溶液變成黃色澄清狀時，化合物12之水溶液即製備完成。另在冰浴中，將化合物5d(2g,6.52mmol)加入冰水(20g)攪拌，再加入由氫氧化鉀(1.90g,33.90mmol)與水(280mL)所配置的氫氧化鉀水溶液，待攪拌至溶液完全溶解呈澄清狀後，逐滴加入先前所配置的化合物12之水溶液中。加入後立即有深紅色沉澱生成，攪拌十分鐘，將溶液過濾，取暗紅色固體乾燥。經管柱層析(矽膠；ψ 4cmx18cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=7/5)分離。收集液體(R f =0.48,己烷/乙酸乙酯=7/5)濃縮得紅棕色之之化合物7a(0.63g,21%)。
mp 217-218℃；1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ6.78(d,J =7.9Hz,1H,ArH),7.24-7.38(m,4H,ArH),7.57-7.70(m,3H,ArH),8.00(d,J =8.0Hz,2H,ArH),8.33(d,J =8.1Hz,2H,ArH),9.81(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,acetone-d 6 )δ104.1,115.5,122.0,123.3,124.9,125.2,126.4,129.4,129.7,129.8,131.7,138.6,139.3,143.2,148.7,157.1;MS(EI) m/z 455(M+ ,44%),280(M-175,85%),234(M-221,66%),130(M-325,52%);HRMS(m/z) for C20 H14 ClN5 O4 S(M+ ):Calcd,455.0455;Found,455.0424. Anal.(C20 H14 ClN5 O4 S):Calcd,C,52.69;H,3.10;N,15.36;Found,C,52.44;H,3.17；N,15.08.
實施例17： 製備化合物7b(4-甲基-N -(3-苯偶氮-1H -吲哚-7-基)苯磺醯胺,4-Methyl-N -(3-phenylazo-1H -indol-7-yl)benzenesulfonamide) 流程圖IV
如流程圖IV所示，首先先製備化合物14之溶液，將化合物13(苯胺,phenylamine,0.15g,1.63mmol)於冰浴中加入濃鹽酸(1.83mL)，並加水稀釋至20mL。再逐滴加入由亞硝酸鈉(0.19g,2.72mmol)與水(5mL)所組成的水溶液，待溶液變成黃色澄清狀時，化合物14之溶液即製備完成。另在冰浴中，將化合物5b(0.36g,1.26mmol)加入冰水(5g)中攪拌，再加入由氫氧化鉀(0.36g,6.42mmol)與水(54mL)所配置的氫氧化鉀水溶液，攪拌至完全溶解呈澄清狀後，逐滴加入先前所配置的化合物14溶液。加入後立即有深紅色沉澱生成，攪拌十分鐘後將溶液過濾，取暗紅色固體乾燥。固體經管柱層析(矽膠；ψ 4cm x 13cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=3/1)分離。收集液體(R f =0.56,己烷/乙酸乙酯=3/1)濃縮得橘紅色之24b(0.24g,55%)，回收液體(R f =0.39,己烷/乙酸乙酯=3/1)濃縮得化合物7b(0.04g,0.14mmol)。
mp 212-213℃;1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ2,30(s,3H,CH3 ),6.82(d,J =8.0Hz,1H,ArH),7.14(d,J =8.0Hz,2H,ArH),7.40-7.34(m,2H,ArH),7.42-7.55(m,3H,ArH),7.60(d,J =8.0Hz,1H,ArH),7.64(s,1H,ArH),7.68(s,1H,ArH),7.83(s,1H,NH),7.93(t,J =1.4Hz,1H,ArH),7.96(t,J =1.8Hz,1H,ArH),9.65(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ22.0,104.0,116.9,121.2,122.8,123.0,123.5,127.8,128.8,129.48,130.3,130.9,132.4,135.2,143.8,145.0,153.8;MS(EI) m/z 390(M+ ,58%),235(M-155,100%),28(M-362,86%).
實施例18： 製備化合物7c(4-氯-N -(3-苯偶氮-1H -吲哚-7-基)苯磺醯胺,4-Chloro-N -(3-phenylazo-1H -indol-7-yl) benzenesulfonamid e) 流程圖V
如流程圖V所示，首先先製備化合物14之溶液，將化合物13(0.18g,1.91mmol)於冰浴中加入濃鹽酸(2.14mL)，加水稀釋至20mL後，再逐滴加入由亞硝酸鈉(0.21g,3.05mmol)與水(5mL)所組成的水溶液，待溶液變成黃色澄清狀時，化合物14溶液即製備完成。另在冰浴中，將化合物5d(0.45g,1.26mmol)加入冰水中(5g)攪拌，再加入由氫氧化鉀(0.42g,7.49mmol)與水(63mL)所配置的氫氧化鉀水溶液，攪拌至溶液完全溶解呈澄清狀後，加入本製備例中先前所配置的化合物14溶液，加入後立即有棕紅色沉澱生成，攪拌十分鐘後將溶液過濾，取暗紅色固體乾燥，經管柱層析(矽膠；ψ4cm x 21cm；沖提液：己烷/乙酸乙酯=3/1)分離。收集液體(R f =0.40,己烷/乙酸乙酯=3/1)濃縮得化合物7c(0.23g,54%)，回收液體(R f =0.31,己烷/乙酸乙酯=3/1)濃縮得化合物5d(0.13g,0.42mmol)。
mp 110-111℃;1 H NMR(200MHz,CDCl3 )δ6.70(d,J =8.0Hz,1H,ArH),7.34(d,J =8.6Hz,3H,ArH),7.34-7.50(m,5H,ArH,NH),7.62(d,J =8.2Hz,3H,ArH),7.94(d,J =8.6Hz,2H,ArH),9.42(s,1H,NH);13 C NMR(50MHz,CDCl3 )δ103.2,119.5,120.8,121.0,121.3,121.5,126.3,126.8,127.6,129.3,130.7,133.2,139.4,140.1,145.1,154.7;MS(EI)m/z 410(M+ ,33%),235(M-175,100%),130(M-280,48%),111(M-299,55%);HRMS(m/z) for C20 H15 ClN4 O2 S(M+ ):Calcd,410.0604;Found,410.0607.
實施例19： 製備化合物6i(N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-3,4,5-三甲氧基-苯磺醯胺,N-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-3,4,5-trimethoxy-benzenesulfonamide)
於氫氣氛下，將化合物4(0.5g,3.08mmol)及10% Pd/C(0.2g)混合物於甲醇(30mL)中攪拌1小時。過濾移除Pd/C後，將濾液於真空下乾燥，可得油狀物。將乙酸乙酯(30mL)及3,4,5-三甲氧基苯磺醯氯(3,4,5-trimethoxybenzene-sulfonyl chloride)(0.9g,3.38mmol)加至油狀物中，並於50℃下攪拌1小時。將反應物通過填充有矽膠之漏斗進行粗過濾，而後以乙酸乙酯清洗之。於真空下乾燥濾液後，將反應粗產物及己二酮(acetonylacetone)(0.5mL,4.38mmol)，在對甲苯磺酸(p-toluenesulfonic acd)(0.7g,4.06mmol)之存在下，以乙醇(20mL)迴流3小時進行反應。最後，使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.20,己烷/乙酸乙酯=4/1)，經由乙醇再結晶後，可得到一白色固體化合物6i(0.66g,48%)。
mp=205-207℃;ESI(M-H+ )439.1;1 H NMR(200Hz,DMSO-d 6 )δ2.07(s,3H,CH 3 ),2.68(s,3H,CH 3 ),3.43(s,3H,OCH 3 ),3.62(s,6H,OCH 3 ),6.82(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),6.95(s,2H,ArH ),7.00-7.15(m,2H,ArH ),7.37(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),7.87(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),7.72(s,1H,NH ),10.51(s,1H,NH );13 C NMR(50Hz,DMSO-d 6 )δ16.37,20.07,55.99,59.87,104.24,117.27,118.38,119.12,119.31,120.32,120.56,121.15,124.77,126.15,129.82,132.85,133.96,138.45,140.67,152.50.
Anal.(C23 H24 N2 O5 S):Calcd,C,62.71;H,5.49;N,6.36;S,7.28;Found,C,62.75;H,5.69;N,6.59;S,7.10.
實施例20： 製備化合物6j(N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-3-三氟甲基-苯磺醯胺,N-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-3-trifluoromethyl-benzenesulfonamide)
於氫氣氛下，將化合物4(0.5g,3.08mmol)及10% Pd/C(0.2g)混合物於甲醇(30mL)中攪拌1小時。過濾移除Pd/C後，將濾液於真空下乾燥，可得油狀物。將乙酸乙酯(30mL)及3-三氟甲基苯磺醯氯(3-trifluoromethylbenzenesulfonyl chloride)(0.8g,3.27mmol)加至油狀物中，並於50℃下攪拌1小時。將反應物通過填充有矽膠之漏斗進行粗過濾，而後以乙酸乙酯清洗之。於真空下乾燥濾液後，將反應粗產物及己二酮(acetonylacetone)(0.5mL,4.38mmol)，在對甲苯磺酸(p-toluenesulfonic acd)(0.7g,4.06mmol)之存在下，以乙醇(20mL)迴流3小時進行反應。最後，使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.15,己烷/乙酸乙酯=8/1)，可得到一白色固體化合物6j(2.01g,78%)。
mp=217-218℃;ESI(M-H+ ) 417.1;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ2.43(s,3H,CH 3 ),2.66(s,3H,CH 3 ),6.82(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.05-7.11(m,2H,ArH ),7.27(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),7.62(t,J =8.0Hz,1H,ArH ),7.86(t,J =7.6Hz,2H,ArH ),7.92(d,J =8.0Hz,1H,ArH ),8.13(s,1H,ArH ),9.97(s,1H,ArH ),10.50(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ16.28,19.98,111.40,118.71,119.07,119.73,120.18,120.32,120.60,121.88,123.39,123.43,123.47,124.59,124.96,126.20,129.49,129.60,129.64,129.77,129.82,130.56,130.80,132.99,138.56,140.52.
Anal.(C21 H17 F3 N2 O2 S):Calcd,C,60.28;H,4.10;N,6.69;F,13.62;S,7.66;Found,C,75.89;H,5.88;N,12.76.
實施例21： 製備化合物6k(5-氯-噻吩-2-磺酸(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-醯胺,5-Chloro-thiophene-2-sulfonic acid(5,8-dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-amide)
於氫氣氛下，將化合物4(0.5g,3.08mmol)及10% Pd/C(0.2g)混合物於甲醇(30mL)中攪拌1小時。過濾移除Pd/C後，將濾液於真空下乾燥，可得油狀物。將乙酸乙酯(30mL)及5-氯-噻吩-2-磺醯氯(5-Chloro-thiophene-2-sulfonyl chloride)(0.7g,3.24mmol)加至油狀物中，並於室溫下攪拌1小時。將反應物通過填充有矽膠之漏斗進行粗過濾，而後以乙酸乙酯清洗之。於真空下乾燥濾液後，將反應粗產物及己二酮(acetonylacetone)(0.5mL,4.38mmol)，在對甲苯磺酸(p-toluenesulfonic acd)(0.7g,4.06mmol)之存在下，以乙醇(20mL)迴流3小時進行反應。最後，使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.33,己烷/乙酸乙酯=8/1)，可得到一白色固體化合物6k(0.87g,72%)。
mp=232-234℃;ESI(M-H+ ) 389.0;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ2.71(s,3H,CH 3 ),6.86(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.07-7.16(m,3H,ArH ),7.31(d,J =8.0Hz,1H,ArH ),7.37(d,J =4.0Hz,1H,ArH ),10.20(s,1H,NH ),10.57(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ16.49,20.05,117.51,117.84,119.14,119.61,120.37,120.40,120.64,124.99,126.24,127.87,129.83,132.63,132.71,135.32,138.08,138.60.
Anal.(C18 H15 ClN2 O2 S2 ):Calcd,C,55.31;H,3.87;N,7.17;S,16.41;Found,C,55.37;H,3.60;N,7.45;S,16.27.
實施例22： 製備化合物61(3,5-二氯-4-(2-氯-4-硝基-苯氧基)-N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-苯磺醯按,3,5-Dichloro-4-(2-chloro-4-nitro-phenoxy)-N-(5,8-dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-benzenesulfonamide)
於氫氣氛下，將化合物4(1.0g,6.16mmol)及10% Pd/C(0.2g)混合物於甲醇(30mL)中攪拌1小時。過濾移除Pd/C後，將濾液於真空下乾燥，可得油狀物。將CH2 Cl2 (30mL)及3,5-二氯-4-(2-氯-4-硝基-苯氧基)-苯磺醯氯(3,5-Dichloro-4-(2-chloro-4-nitro-phenoxy)-benzenesulfony l chloride)(2.6g,6.26mmol)加至油狀物中，並於室溫下攪拌1小時。將反應物通過填充有矽膠之漏斗進行粗過濾，而後以乙酸乙酯清洗之。於真空下乾燥濾液後，將反應粗產物及己二酮(acetonylacetone)(0.7mL,6.62mmol)，在對甲苯磺酸(p-toluenesulfonic acid)(1.10g,6.39mmol)之存在下，以乙醇(20mL)迴流3小時進行反應。最後，使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.24,己烷/乙酸乙酯=6/1)，經由乙醇再結晶後，可得到一白色固體化合物61(1.85g,51%)。
mp=249℃;ESI(M-H+ ) 588.1;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ2.43(s,3H,CH 3 ),2.71(s,3H,CH 3 ),6.07(d,J =8.8Hz,1H,ArH ),6.89(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.09(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.14(t,J =8.0Hz,1H,ArH ),7.28(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),7.59(dd,J =8.8Hz,2.4Hz,1H,ArH ),7.89(s,2H,ArH ),7.95(d,J =8.0Hz,1H,ArH ),8.41(d,J =2.4Hz,1H,ArH ),9.96(s,1H,NH ),10.56(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ16.49,20.07,113.74,117.58,119.35,119.70,120.43,120.50,120.84,122.06,124.14,125.05,126.42,126.60,128.35,128.66,129.97,133.94,138.62,139.25,143.13,138.05,155.27.
Anal.(C26 H18 Cl3 N3 O5 S):Calcd,C,52.85;H,3.07;N,7.11;C1,18.00;S,5.43;Found,C,53.10;H,3.27;N,7.36;S,5.68.
實施例23： 製備化合物14a(1-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-3-苯基-尿素,1-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-3-phenyl-urea)
於氫氣氛下，將化合物4(1.0g,6.16mmol)及10% Pd/C(0.2g)混合物於甲醇(30mL)中攪拌1小時。過濾移除Pd/C後，將濾液於真空下乾燥，可得油狀物。將CH2 Cl2 (30mL)及苯基異氰酸鹽(phenylisocyanate)(0.7mL,6.42mmol)加至油狀物中，並於室溫下攪拌1小時。所得之懸浮液過濾，可得一灰色固體。反應粗產物及己二酮(acetonylacetone)(0.7mL,6.62mmol)，在對甲苯磺酸(p-toluenesulfonic acid)(1.10g,6.39mmol)之存在下，以乙醇(20mL)迴流3小時進行反應。最後，使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.20,己烷/乙酸乙酯=4/1)，經由乙醇再結晶後，可得到一白色固體化合物14a(1.12g,55%)。
mp 300-301℃;ESI(M-H+ ) 328.8;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ2.54(s,3H,CH 3 ),2.74(s,3H,CH 3 ),6.89(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),6.97(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.08-7.16(m,2H),7.29(d,J =7.7Hz,2H,ArH ),7.51(d,J =8.3Hz,2H,ArH ),7.60(d,J =7.7Hz,1H,ArH ),7.82(d,J =7.84Hz,1H,ArH ),8.53(s,)H,NH ),8.82(s,1H,NH ),10.65(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ16.81,20.16,117.04,117.64,118.31,119.10,120.44,120.99,121.79,123.51,124.81,125.92,128.79,129.65,131.89,138.81,139.92,153.07.
Anal.(C21 H19 N3 O‧0.125C2 H5 OH):Calcd,C,76.15;H,5.94;N,12.54;Found,C,75.89;H,5.88;N,12.76.
實施例24： 製備化合物14b(1-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-3-(4-甲氧基-苯基)-尿素,1-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-3-(4-methoxy-phenyl)-urea)
於氫氣氛下，將化合物4(1.0g,6.17mmol)及10% Pd/C(0.2g)混合物於甲醇(30mL)中攪拌1小時。過濾移除Pd/C後，將濾液於真空下乾燥，可得油狀物。將CH2 Cl2 (30mL)及4-甲氧基苯基異氰酸鹽(4-methoxyphenylisocyanate)(0.8mL,6.17mmol)加至油狀物中，並於室溫下攪拌1小時。所得之懸浮液過濾，可得一灰色固體。反應粗產物及己二酮(acetonylacetone)(0.7mL,6.62mmol)，在對甲苯磺酸(p-toluenesulfonic acid)(1.10g,6.39mmol)之存在下，以乙醇(20mL)迴流3小時進行反應。最後，使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.20,己烷/乙酸乙酯=3/1)，經由乙醇再結晶後，可得到一白色固體化合物14b(0.83g,37%)。
mp 262-263℃;ESI(M-H+ ) 358.9;1 H NMR(200Hz,DMSO-d 6 )δ2.54(s,3H,CH 3 ),2.74(s,3H,CH 3 ),3.71(s,3H,CH 3 ),6.80-6.91(m,3H),7.07-7.16(m,2H),7.42(d,J =8.8Hz,2H,ArH ),7.60(d,J =7.0Hz,1H,ArH ),7.80(d,J =7.4Hz,1H,ArH ),8.50(s,1H,NH ),8.72(s,1H,NH ),10.68(s,1H,NH );13 C NMR(50Hz,DMSO-d 6 )δ16.85,20.21,55.18,114.02,116.73,116.79,117.65,119.14,120.13,120.45,121.01,123.83,124.78,125.91,129.67,131.68,132.97,138.81,153.26,154.46,221.88.
Anal.(C22 H21 N3 O2 ‧0.125C2 H5 OH):Calcd,C,73.18;H,6.00;N,11.51;Found,C,72.98;H,5.92;N,11.94.
實施例25： 製備化合物15c(N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-4-甲氧基-N-甲基-苯磺醯胺,N-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-4-methoxy-N-methyl-benzenesulfonamide)
將化合物6c(0.5g,1.315mmol)、KOH(1顆)、及乙醇(20mL)之溶液，於70℃下攪拌15分鐘。添加甲基碘(methyl iodide)(3.0mL)至溶液後，於70℃下攪拌1小時。使用管柱層析純化混合溶液，並收集液體(R f =0.30,己烷/乙酸乙酯=6/1)，可得到化合物15c(0.38g,73%)。
mp=88-89℃;ESI(M-H+ ) 365.1;1 H NMR(200Hz,acetone.-d 6 )δ2.60(s,3H,CH 3 ),2.80(s,3H,CH 3 ),3.29(s,3H,CH 3 ),3.91(s,3H,CH 3 ),6.64(d,J =7.8Hz,1H,ArH ),6.92(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.03-7.18(m,4 H,ArH ),7.59(d,J =8.8Hz,2H,ArH ),8.10(d,J =8.0Hz,1H,ArH ),10.23(s,1H,NH );13 C NMR(50Hz,acetone-d 6 )δ17.14,20.65,39.86,56.15,114.92,118.87,119.58,119.58,121.68,122.82,122.90,126.85,126.90,126.97,127.50,129.57,131.09,131.14,139.22,140.21,164.21.
Anal.(C22 H22 N2 O3 S):Calcd,C,66.98;H,5.62;N,7.10;S,8.13;Found,C,75.89;H,5.88;N,12.76.
實施例26： 製備化合物15j(N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-N-甲基-3-三氟甲基-苯磺醯胺,N-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-N-methyl-3-trifluoromethyl-benzenesulfona mide)
將化合物6j(0.5g,1.08mmol)、KOH(1顆)、及乙醇(20mL)之溶液，於70℃下攪拌15分鐘。添加甲基碘(methyl iodide)(3.0mL)至溶液後，於70℃下攪拌1小時。使用管柱層析純化混合溶液，並收集液體(R f =0.20,己烷/乙酸乙酯=5/1)，可得到化合物15j(0.37g,79%)。
mp=192-194℃;ESI(M-H+ ) 431.1;1 H NMR(200Hz,DMSO-d 6 )δ2.57(s,3H,CH 3 ),2.73(s,3H,CH 3 ),3.33(s,3H,CH 3 ),6.59(d,J =7.8Hz,1H,ArH ),6.87(d,J =7.3Hz,1H,ArH ),7.59(t,J =7.8Hz,1H,ArH ),7.11(d,J =7.3Hz,1H,ArH ),7.70-8.13(m,5H,ArH ),11.12(s,1H,NH );13 C NMR(50Hz,DMSO-d 6 )δ17.27,20.27,118.22,118.55,120.57,120.68,122.46,122.53,124.42,124.57,125.69,126.76,129.74,130.98,131.86,137.83,138.23,139.13.
Anal.(C22 H19 FN2 O2 S):Calcd,C,61.10;H,4.43;N,6.48;S,7.41;Found,C,61.39;H,4.49;N,6.97;S,7.42.
實施例27： 製備化合物15k(5-氯-噻吩-2-磺酸(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-甲基-醯按,5-Chloro-thiophene-2-sulfonic acid(5,8-dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-methyl-amide)
將化合物6k(0.25g,0.64mmol)、KOH(1顆)、及乙醇(20mL)之溶液，於70℃下攪拌15分鐘。添加甲基碘(methyl iodide)(3.0mL)至溶液後，於70℃下攪拌1小時。使用管柱層析純化混合溶液，並收集液體(R f =0.30,己烷/乙酸乙酯=12/1)，可得到化合物15k(0.22g,84%)。
mp=179-181℃;ESI(M-H+ ) 403.1;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ2.57(s,3H,CH 3 ),2.74(s,3H,CH 3 ),3.34(s,3H,CH 3 ),6.83(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),6.88(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.07-7.13(m,2H,ArH ),7.36(d,J =4.0Hz,1H,ArH ),7.47(d,J =4.0Hz,1H,ArH ),8.08(d,J =7.8Hz,1H,ArH ),11.11(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ17.20,20.18,118.11,118.67,120.50,120.55,121.93,122.36,124.60,125.55,126.62,128.43,129.61,133.12,135.54,137.79,139.04. Anal.(C19 H17 ClN2 O2 S2 ):Calcd,C,56.36;H,4.23;N,6.92;S,15.84;Found,C,56.26;H,4.35;N,7.06;S,15.49.
實施例28： 製備化合物16c(N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-N-乙基-4-甲氧基-苯磺醯胺,N-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-N-ethyl-4-methoxy-benzenesulfonamide)
將化合物6c(0.5g,1.31mmol)、KOH(1顆)、及乙醇(20mL)之溶液，於70℃下攪拌15分鐘。添加乙基碘(ethyl iodide)(3.0mL)至溶液後，於70℃下攪拌1小時。使用管柱層析純化混合溶液，並收集液體(R f =0.36,己烷/乙酸乙酯=6/1)，可得到化合物16c(0.37g,69%)。
mp=151-152℃;ESI(M-H+ )407.1;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ0.97(t,J=6.8Hz,3H,CH 3 ),2.58(s,3H,CH 3 ),2.73(s,3H,CH 3 ),3.82(s,3H,OCH 3 ),6.56(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),6.87(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.01(t,J =7.6Hz,1H,ArH ),7.06-7.11(m,3H,ArH ),7.58(d,J =8.8Hz,2H,ArH ),8.04(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),10.91(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ13.21,17.33,20.22,46.06,55.67,114.24,118.09,118.47,120.49,120.56,122.06,122.39,123.28,125.26,126.57,129.62,129.83,139.01,139.42,162.60.
Anal.(C23 H24 N2 O3 S):Calcd,C,67.62;H,5.92;N,6.86;Found,C,67.40;H,6.18;N,6.55.
實施例29： 製備化合物17c(N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-4-甲氧基-N-丙基-苯磺醯胺,N-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-4-methoxy-N-propyl-benzenesulfonamide)
將化合物6c(0.5g,1.31mmol)、KOH(1顆)、及乙醇(20mL)之溶液，於70℃下攪拌15分鐘。添加溴丙烷(bromopropane)(2.0mL)至溶液後，於70℃下攪拌1小時。使用管柱層析純化混合溶液，並收集液體(R f =0.44,己烷/乙酸乙酯=8/1)，可得到化合物17c(0.28g,50%)。
mp=60-62℃;ESI(M-H+ ) 421.1;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ0.79(t,J=7.4Hz,3H,CH 3 ),2.58(s,3H,CH 3 ),2.73(s,3H,CH 3 ),3.35(s,2H,CH 2 ),3.81(s,3H,OCH 3 ),6.60(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),6.87(d,J =7.3Hz,1H,ArH ),7.01(t,J =7.7Hz,1H,ArH ),7.09-7.11(m,3H,ArH ),7.57(d,J =8.8Hz,2H,ArH ),8.04(d,J =7.8Hz,1H,ArH ),10.76(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ11.07,17.28,20.21,21.12,52.89,55.64,114.21,118.06,118.51,120.52,120.56,121.99,122.89,123.35,125.33,126.58,129.60,129.69,129.85,138.97,139.05,162.60.
Anal.(C24 H26 N2 O3 S):Calcd,C,68.22;H,6.20;N,6.63;S,7.59;Found,C,68.43;H,6.05;N,6.66;S,7.26.
實施例30 ：製備化合物18c(N-(5,8-二甲基-9H-咔唑-1-基)-N-異丙基-4-甲氧基-苯磺醯按,N-(5,8-Dimethyl-9H-carbazol-1-yl)-N-isopropyl-4-methoxy-benzenesulfonamide)
將化合物6c(0.5g,1.31mmol)、KOH(1顆)、及乙醇(20mL)之溶液，於70℃下攪拌15分鐘。添加2-溴丙烷(2-bromopropane)(3.0mL)至溶液後，於70℃下攪拌1小時。使用管柱層析純化混合溶液，並收集液體(R f =0.39,己烷/乙酸乙酯=8/1)，可得到化合物18c(0.22g,40%)。
mp=222-224℃;ESI(M-H+ ) 421.1;1 H NMR(400Hz,acetone-d 6 )δ1.12(t,J=6.6Hz,6H,CH 3 ),2.56(s,3H,CH 3 ),2.81(s,3H,CH 3 ),2.85(s,2H,CH 2 ),3.87(s,3H,OCH 3 ),4.78(m,1H,CH ),6.79(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),6.92(d,J =7.3Hz,1H,ArH ),7.03-7.15(m,4H,ArH ),7.66(d,J =8.9Hz,2H,ArH ),8.18(d,J =7.9Hz,1H,ArH ),10.02(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,acetone-d 6 )δ17.15,20.64,21.86,22.20,23.32,53.17,56.09,114.83,118.77,119.18,120.27,121.74,122.06,123.69,126.90,127.49,128.51,130.73,131.08,133.77,140.06,141.98,163.87.
Anal.(C24 H26 N2 O3 S):Calcd,C,68.22;H,6.20;N,6.63;S,7.59;Found,C,68.12;H,6.43;N,6.45;S,7.25.
實施例31： 製備化合物20(1-硝基-9H-咔唑,1-Nitro-9H-carbazole)
將化合物咔唑19(1g,5.98mmol)及乙酸(10mL)之混合物於70℃下攪拌20分鐘。添加硝酸(0.3mL)至混合物後，於70℃下攪拌1小時。利用水將反應淬息，經過濾後得一黃色固體。使用管柱層析純化粗產物，並收集液體(R f =0.5,己烷/乙酸乙酯=12/1)，可得到黃色固體化合物20(0.45g,35%)。
mp 195-196℃;ESI(M-H+ ) 211.0;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ7.27-7.37(m,2H,ArH ),7.51(t,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.75(d,J =8.0Hz,1H,ArH ),8.23(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),8.30(d,J =7.7Hz,1H,ArH ),8.60(d,J =7.2Hz,1H,ArH ),12.16(s,1H,NH );3 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ112.64,118.36,120.65,120.70,121.53,121.72,127.14,127.35,128.08,131.70,132.93,140.68.
Anal.(C12 H8 N2 O2 ):Calcd,C,67.92;H,3.80;N,13.20;Found,C,67.94;H,3.95;N,13.21.
實施例32： 製備化合物21a(N-(9H-咔唑-1-基)-4-甲氧基-苯磺醯胺,N-(9H-Carbazol-1-yl)-4-methoxy-benzene-sulfonamide)
於氫氣氛下，將化合物20(0.5g,2.35mmol)、Pd/C(0.1g)、甲醇(30mL)之混合溶液於室溫下攪拌1小時。過濾移除Pd/C固體後，於真空下乾燥溶劑，可得一油狀物。添加4-甲氧基苯磺醯氯(4-methoxybenzenesulfony chloride)(0.5g,2.42mmol)、三乙基胺(triethylamine)(1.0mL)、及乙酸乙酯(50mL)至粗產物後，於50℃下攪拌2小時。使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.30,己烷/乙酸乙酯=3/1)，可得到一白色固體化合物21a(0.43g,54%)。
mp 204-206℃;ESI(M-H+ ) 351.0;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ3.74(s,3H,OCH 3 ),6.90-7.02(m,4H,ArH ),7.14(t,J =7.2Hz,1H,ArH ),7.38(t,J =7.6Hz,1H,ArH ),7.57(d,J =8.0Hz,1H,ArH ),7.67(d,J =8.8Hz,1H,ArH ),7.88(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),8.05(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),9.80(s,1H,NH ),10.94(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ55.58,111.50,114.22,117.77,118.64,118.88,119.91,120.20,121.00,122.27,123.99,125.85,129.12,131.14,134.59,139.49,162.40.
Anal.(C19 H16 N2 O3 S):Calcd,C,64.76;H,4.58;N,7.95;S,9.10;Found,C,64.79;H,4.75;N,7.88;S,8.47.
實施例33： 製備化合物21b(N-(9H-咔唑-1-基)-3-三氟甲基-苯磺醯胺,N-(9H-Carbazol-1-yl)-3-trifluoromethyl-benzene-sulfonamide)
於氫氣氛下，將化合物20(0.5g,2.35mmol)、Pd/C(0.1g)、甲醇(30mL)之混合溶液於室溫下攪拌1小時。過濾移除Pd/C固體後，於真空下乾燥溶劑，可得一油狀物。添加3-三氟甲基苯磺醯氯(3-trifluoromethylbenzenesulfony chloride)(0.6g,2.45mmol)、三乙基胺(triethylamine)(1.0mL)、及乙酸乙酯(50mL)至粗產物後，於50℃下攪拌2小時。使用管柱層析純化混合物，並收集液體(R f =0.21,己烷/乙酸乙酯=8/1)，可得到一白色固體化合物21b(0.54g,59%)。
mp 188-190℃;ESI(M-H+ ) 389.0;1 H NMR(400Hz,DMSO-d 6 )δ6.75(d,J =7.6Hz,1H,ArH ),6.96(t,J =7.7Hz,1H,ArH ),7.14(t,J =7.5Hz,1H,ArH ),7.38(t,J =7.7Hz,1H,ArH ),7.54(d,J =8.1Hz,1H,ArH ),7.74(d,J =7.7Hz,1H,ArH ),7.94-7.79(m,4H,ArH ),8.06(d,J =7.7Hz,1H,ArH ),10.08(s,1H,NH ),11.02(s,1H,NH );13 C NMR(100Hz,DMSO-d 6 )δ111.51,118.61,118.93,119.02,119.82,120.32,121.49,122.22,123.60,124.30,124.73,126.07,129.66,129.89,130.79,131.01,135.65,139.69,140.62.
Anal.(C19 H13 F3 N2 O2 S):Calcd,C,58.46;H,3.36;N,7.18;F,14.60;S,8.21;Found,C,72.98;H,5.92;N,11.94.
《藥理活性研究》
將上述實施例所合成出來的苯磺醯胺衍生物化合物，進行苯磺醯按衍生物對於TSGH(胃癌細胞)、Hepa G2(肝癌細胞)、HT 29(人類大腸癌細胞)、KB(鼻咽癌細胞)、AGS(人類胃癌細胞)、MCF-7(人類乳癌細胞)、A549(肺癌細胞)、PC-3(前列腺癌細胞)等腫瘤細胞作體外毒性試驗，以探討腫瘤細胞生長抑制活性與化學結構的相關性。
MTT測試
將上述腫瘤細胞以10%胎牛血清的RPMI培養液培養於含有5%二氧化碳37℃培養箱內。而後，將細胞以苯磺醯胺衍生物化合物處理72小時，而後以0.4mg/mL之MTT試劑於37℃下培養2小時。移除培養基後，使用DMSO溶解MTT沉澱物。使用微量盤偵測系統(Thermomax microplaye reader,Molecular devices,Sunnyvale,CA)偵測540nm處的吸光度，以得到細胞動態變化(cell proliferation)，並藉此計算出苯磺醯胺衍生物之IC50 。
SRB測試
將上述腫瘤細胞以10%胎牛血清的RPMI培養液培養於含有5%二氧化碳37℃培養箱內。24小時後，將部份槽中之細胞以10%三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)處理，以表示藥物添加時間(T0 )。接著，將剩餘之槽中細胞以苯磺醯胺衍生物化合物處理48小時後，以10% TCA終止反應(Tx )。以PBS緩衝液清洗並風乾後，加入0.4% sulforhodamine B溶液(溶於1%乙酸中)，於室溫下反應10中。而後，以1%乙酸將未進入細胞之sulforhodamine B移除，經風乾後，加入10mM之Tris-base(Trizma,Sigma)水溶液將固定細胞溶解。最後，使用微量盤偵測系統(Thermomax microplaye reader,Molecular devices,Sunnyvale,CA)偵測515nm處的吸光度，以得到細胞動態變化(cell proliferation)。藉此，可計算出苯磺醯胺衍生物之半抑制濃度GI50 。
測試結果如下表1至表4所示。
由表1得知，化合物6a~6h幾乎都比其相對應的5a~5h對各個腫瘤細胞有更強的生長抑制活性。例如6b對TSGH、HepaG2、HT-29及KB腫瘤細胞的IC50 各為2.1、1.7、1.1及2.5μM，而相對應5b的IC50 則為9.4、7.9、7.9及>20μM。此外，在所有化合物中，尤以在苯環第四位置有甲氧基取代的6c抑制效果最好，其對TSGH、HepaG2、HT-29及KB腫瘤細胞的IC50 分別達到0.5、0.4、0.4及0.8μM，然而根據文獻所知(Owaet.al .,J. Med. Chem. 1999 ,42 ,3789-3799)，目前進入臨床實驗階段之E7070(衛采公司製造)藥物，其對KB(鼻咽癌)、colon 38(結腸癌)及P388(小鼠白血病)腫瘤細胞的IC50 分別達到11.4、0.3及1.2μM。由此知本發明所設計的化合物6c對KB腫瘤細胞的抑制活性比E7070更佳。另因在對位位置上具有取代基之化合物6b-6g，都比無取代基之6a對各種腫瘤細胞更具抑制活性，因此，對位位置有一取代基的存在更有利於增強對腫瘤細胞的抑制活性。
另外，化合物7a-7c的初步活性試驗也呈現有抑制腫瘤細胞的能力，且7a及7c與相對應的5d比較也有增強抑制腫瘤細胞活性的現象。例如7a對TSGH、HepaG2、HT-29、KB腫瘤細胞的IC50 各為3.6、9.1、5.9及4.5μM，而相對應5d的IC50 則為35.6、14、19.8及20μM。依據以上初步探討，證明化合物7a-7c對腫瘤生長抑制亦有發展潛力。
由上述之藥理活性研究結果可知，本發明之苯磺醯胺衍生物確實有抑制腫瘤細胞的功效。其中尤以化合物6c的效果最佳。此外，本發明知苯磺醯胺化合物，能確實利用細胞週期的特性，抑制腫瘤細胞使之凋亡，因此可進一步用於臨床治療固態瘤上。
接下來，將詳細描述本發明之苯磺醯胺衍生物抗腫瘤活性之體外和活體試驗評估結果。在此，係以化合物6c進行實驗，且往後將稱化合物6c為GM119。
A549細胞體外遷移試驗
A549肺腺癌細胞(BCRC 60074;BCRC)以10%胎牛血清的RPMI培養液培養於含有5%二氧化碳37℃培養箱內。所有細胞株於每週進行兩次繼代培養。
在此，所謂之體外遷移分析試驗，係在單層細胞層上機械性方式造成一直線細胞剝落的刮痕，此機械性刮痕可誘導產生創傷區域的細胞層進行癒合。
當單層A549細胞在細胞量達飽和後，以200微毫升的黃色微量吸管之尖端對細胞層進行細胞傷痕試驗，以誘導細胞遷移之進行。進行細胞傷痕之細胞分別處理18小時的GM119，濃度分別為0、0.5或者10μM。經顯微鏡觀察分析細胞遷移的作用，可發現當GM119濃度越高，對於A549細胞遷移的抑制能力越強。
同時，分別取以不同GM119濃度下處理的A549細胞之細胞質萃取物25微毫克，以西方點墨法進行分析。於經10% SDS-PAGE分離與轉漬後，以anti-p53、anti-p-p53和anti-肌動蛋白的抗體辨識分析。
血管內皮細胞抑制測試
第一天將共同培養之臍靜脈內皮細胞與人類纖維母細胞更換新的培養液並培養於含有5%二氧化碳37℃培養箱內。待穩定一天後，處理(25ng/ml) VEGF作為正控制組、使用(25nM)生長因子結抗劑(suramin)作為負控制組或處理GM119(0.1、1、或10μM)。分別於在藥物處理後第3、6和8天更換含有不同藥物之新培養液。在第11天，以anti-CD31的抗體辨識新生生成之臍靜脈內皮細胞血管管樣結構，並以軟體分析臍靜脈內皮細胞管樣結構的面積。
利用位相差顯微鏡分析後，可發現GM119能有效地抑制經VEGF誘發臍靜脈內皮細胞的新生血管之管樣結構。同時，比較施予濃度為10μM之GM119以及濃度為10μM之生長因子結抗劑(suramin)之抑制結果，可發現GM119的效用與生長因子結抗劑相當。
對4T1乳腺癌細胞的體外細胞毒殺作用測試
在此，係使用穩定帶有表達生物性冷光酵素luciferase基因的4T1-Luc乳腺癌細胞細胞。將4T1乳腺癌細胞細胞在含有G418與10%胎牛血清的RPMI培養液，培養於含有5%二氧化碳37℃培養箱內。所有細胞株於每週進行兩次繼代培養。
在96-孔盤中每個槽(well)以2,500或5,000個細胞開始進行，癌細胞先培養於正常濃度血清(10%)或無血清的培養基中，再分別處理48小時的0、0.01、0.1、1或10μM GM119。其後細胞先以10%三氯乙酸固定，經水洗滌後，以sulforhodamine B進行染色，再以1%乙酸洗滌，並加入Tris緩衝液。以自動化的微量盤偵測系統偵測515毫微米處的吸光度，結果由四次獨立實驗組成，吸光度計量以無藥物處理組別的吸光度作為百分之百的細胞存活率，細胞存活率以控制組之吸光度作為百分之百、經計算後以平均值±標準偏差的百分比來表示。
實驗結果係如圖1所示。顯示不論在正常濃度血清或無血清的培養基中，僅需0.01μM GM119即可達到抑制4T1乳腺癌細胞生長之效果。同時，當GM119為10μM時，抑制4T1乳腺癌細胞生長之效果更加顯著。
體外細胞形態分析試驗
GM119處理4T1-Luc乳腺癌細胞後，以位相差顯微鏡觀察分析乳腺癌細胞的體外細胞形態改變。在6-孔盤中放入玻璃蓋玻片，將每個well以50,000個細胞開始進行玻片培養，癌細胞先培養於正常濃度10%血清的培養基中，再分別處理36小時的0、0.01、0.1、1或10μM GM119。細胞以Giemsa染色方式(Giemsa溶液：0.38克Giemsa粉末、15%甲醇和5%甘油)處理。細胞玻片經洗滌脫水封片後，以位相差顯微鏡擷取影像。
由位相差顯微鏡之觀察結果顯示，僅需0.01μM GM119即可達到抑制4T1乳腺癌細胞生長之效果。同時，當GM119為10μM時，抑制4T1乳腺癌細胞生長之效果更加顯著。
西方點墨法分析試驗
以0、0.01、0.1、1或10μM GM119處理4T1-Luc乳腺癌細胞36小時後，將細胞經離心後收集，細胞以超音波震盪方式破碎(冰上15秒)，離心後收集上層細胞質萃取物。蛋白質濃度以Bradford dye-binding(BioRad，美國)的含量分析。取等量(25μg)的細胞質萃取物進行電泳與轉漬、再以anti-p53、anti-p-p53和anti-肌動蛋白的抗體辨識分析各分子的變化量。
GM119活體試驗評估 A.　短期給予GM-119(25mg/kg)繼以給予Taxol(10mg/kg)對具4T1乳腺癌細胞移植之小鼠的乳腺腫瘤之影響。
將在matrigel內的4T1乳腺癌細胞懸浮液透過手術直接注射在乳腺脂肪塊上，以建立含有luciferase的腫瘤移植老鼠。腫瘤大小在給予GM119之前每天以NightOWL的活體影像分析裝置分析。當腫瘤大小達到大約200-500毫米立方，腫瘤移植老鼠以每組(n≧5)的數量分別接受每天腹腔注射0或25mg/kg的GM119(GM119溶於cremophor中、每隻老鼠給予50微毫升的注射體積)，GM119持續給予五天；接下來以每2天給予一次腹腔注射0或10mg/kg的Taxol、持續給予至老鼠犧牲。每天記錄老鼠重量與數目，用以分析老鼠重量改變和老鼠存活時間；在給予藥物後以每2天的間距分析腫瘤移植老鼠體內的生物性冷光以評估老鼠體內的腫瘤大小。
圖2係短期給予藥物對老鼠存活時間之統計結果圖。由圖2結果可知，單獨使用GM119、或與Taxol合併使用，皆可達到與單獨使用Taxol之相似效果，而可大幅提升老鼠存活率。此外，經生物性冷光以評估老鼠體內的腫瘤大小顯示，無論是使用GM119、Taxol、或合併使用，均可達到抑制腫瘤大小成長之效果。
B.　長期同時給予GM-119(25mg/kg)以及Taxol(10mg/kg)對具4T1乳腺癌細胞移植之小鼠的乳腺腫瘤之影響。
將在matrigel內的4T1乳腺癌細胞懸浮液透過手術直接注射在乳腺脂肪塊上，以建立含有luciferase的腫瘤移植老鼠。腫瘤大小在給予GM119之前每天以NightOWL的活體影像分析裝置分析。當腫瘤大小達到大約200-500毫米立方，腫瘤移植老鼠以每組(n≧5)的數量分別接受每天腹腔注射0/0或0/25或10/25或10/0mg/kg的Taxol/GM119(溶於cremophor中、每隻老鼠給予50微毫升的注射體積)，以每2天給予一次腹腔注射、持續給予至老鼠犧牲。每天記錄老鼠重量與數目，用以分析老鼠重量改變和老鼠存活時間；在給予藥物後以每2天的間距分析腫瘤移植老鼠體內的生物性冷光以評估老鼠體內的腫瘤大小。
圖3係長期給予藥物對老鼠存活時間之統計結果圖。由圖3結果可知，雖長期給予Taxol已可達到提升老鼠存活率之效果，但同時並用Taxol及GM119更可進一步提升老鼠存活率。特別是，僅單獨長期投予GM119，可使老鼠存活時間最長。此外，經生物性冷光以評估老鼠體內的腫瘤大小顯示，無論是使用GM119、Taxol、或合併使用，均可達到抑制腫瘤大小成長之效果。
上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。
圖1係本發明之GM119對4T1乳腺癌細胞的體外細胞毒殺作用測試結果圖。
圖2係短期給予藥物對老鼠存活時間之統計結果圖。
圖3係長期給予藥物對老鼠存活時間之統計結果圖。

Claims (15)

  1. 一種苯磺醯胺衍生物，其結構如式(I)所示： 其中，R1 為C1-6 烷基； R2 為氫、R3 為、或R2 以及R3 共同鍵結為 D為、或；其中，當R2 為氫、R3 為時，D為、或，當R2 以及 R3 共同鍵結為時，D為R4 為氫、或硝基；X、Y、每一R5 係各自獨立為C1-6 烷基； 每一R6 係各自獨立為氫、鹵素、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、經鹵素取代之C1-6 烷基、經鹵素取代之C1-6 烷氧基、硝基、-NR8 R9 、或-SO2 NR10 R11 ；R7 係為氫、或鹵素；R8 、R9 、R10 與R11 係各自獨立為氫、或C1-6 烷基；以及i為0、1、或2之整數；n為0、1、2、或3之整數。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R8 與R9 為氫。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R10 與R11 為氫。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R1 為C1-3 烷基，D為，且R6 係為氫、鹵素、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、硝基、-NH2 、或-SO2 NH2 。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R6 係為氫、氯、甲基、甲氧基、硝基、-NH2 、或-SO2 NH2 。
  6. 如申請專利範圍第4項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R2 為氫，R3 為
  7. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R1 為C1-3 烷基，D為，且R6 係為氫、經鹵素取代之C1-6 烷基、或經鹵素取代之C1-6 烷氧基。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R1 為C1-3 烷基，D為，且R6 係為氫、鹵素、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、硝基、-NH2 、或-SO2 NH2 。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R6 係為硝基。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R1 為C1-3 烷基，D為，且R7 係為氫、或鹵素。
  11. 如申請專利範圍第10項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R1 為甲基，且R7 係為氯。
  12. 如申請專利範圍第10項所述之苯磺醯胺衍生物，其中，R2 與R3 共同鍵結為
  13. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其係作為細胞週期標的抑制劑。
  14. 如申請專利範圍第1項所述之苯磺醯胺衍生物，其具有抑制胃癌細胞(TSGH)、肝癌細胞(Hepa G2)、大腸癌細胞(HT29)、及鼻咽癌細胞(KB)等腫瘤細胞之功效。
  15. 一種作為細胞週期標的抑制劑之醫藥組合物，其包括一有效劑量之式(I)化合物， 其中，R1 為C1-6 烷基；R2 為氫、R3 為、或R2 以及R3 共同鍵結為 D為、或；其中，當R2 為氫、R3 為時，D為、或，當R2 以及R3 共同鍵結為時，D為R4 為氫、或硝基；X、Y、每一R5 係各自獨立為C1-6 烷基；每一R6 係各自獨立為氫、鹵素、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、經鹵素取代之C1-6 烷基、經鹵素取代之C1-6 烷氧基、硝基、-NR8 R9 、或-SO2 NR10 R11 ；R7 係為氫、或鹵素；R8 、R9 、R10 與R11 係各自獨立為氫、或C1-6 烷基；以及i為0、1、或2之整數；n為0、1、2、或3之整數。
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