TWI407958B

TWI407958B - 經取代之唑啶酮類及其用途

Info

Publication number: TWI407958B
Application number: TW097122781A
Authority: TW
Inventors: 亞史溫; 鮑斯爾; 哈穆特; 巫理奇; 史帝芬; 葛德斯; 德費得; 迪瑞奇; 薩特曼; 茱利亞; 克勞斯; 葛諾斯; 迪爾特
Original assignee: 拜耳智慧財產有限公司
Priority date: 2007-06-20
Filing date: 2008-06-19
Publication date: 2013-09-11
Also published as: RU2481344C2; ATE527256T1; AU2008266526A1; AU2008266526B2; EP2173744A1; HK1144574A1; EP2173744B1; IL202206A0; CN101743244A; WO2008155033A1; MX2009013709A; KR20100022988A; CA2692169C; US20100261759A1; ZA200908583B; JP5537422B2; CL2008001690A1; TW200911246A; US8487111B2; PE20090314A1

Description

經取代之唑啶酮類及其用途

本發明係關於新穎之經取代的唑啶酮類、其製備方法、其用於治療及/或預防疾病之用途及其用於製備供治療及/或預防疾病、特別是血栓栓塞性病症的藥劑之用途。

血液凝結係為生物體之保護機制，其輔助迅速且可靠地“密封“在血管壁上之缺陷。因此，可避免血液流失或保持最小程度之血液流失。血管受傷後之止血主要由凝結系統達成，其中引起血漿蛋白質之酵素級聯複雜反應。此過程中涉及許多血液凝結因子，各個該等因子，在活化時，分別將下一個不具活性之前驅物轉化為其活性形式。在級聯反應結束時，出現可溶性血纖維蛋白原轉化為不溶性血纖維蛋白，導致形成血塊。於血液凝結上，傳統上區分為終止於接合反應途徑(joint reaction path)之內在與外在系統。於此，因子Xa及IIa(凝血酶)扮演主要角色。

因子Xa結合兩種凝結途徑之訊號，此係由於其均經由因子VIIa/組織因子(外在途徑)及經由多成分酶複合體(tenase complex)(內在途徑)藉由轉化因子X而形成。經活化之絲胺酸蛋白酶Xa會裂解凝血酶原為凝血酶。

經由一連串反應，凝血酶會將訊號由級聯反應傳遞至血液之凝結狀態。凝血酶會將血纖維蛋白酶原直接裂解為血纖維蛋白，其活化因子XIII(其為穩定血纖維蛋白凝結物所必須者)為因子XIIIa。此外，凝血酶為血小板凝集(經由PAR-1活化)之強力引發劑，其也相當地助長止血現象。藉由活化TAFI(凝血酶-可活化的纖維蛋白溶解抑制劑)為TAFIa，與血栓調節蛋白(thrombomodulin)複合之凝血酶會抑制血塊之溶解。因子V及VIII之活化強化凝血酶之產生且因而依次擴大凝結反應；與血栓調節複合產生之經活化蛋白質C會拮抗此增加之凝血酶產生，因此預防過度止血(血栓形成)。

除了血液中未結合之因子X及凝血酶，結合形式亦為已知者。在血纖維蛋白凝塊形成期間，凝血酶及凝血酶原(複合物中因子Xa)係與血纖維蛋白骨架連結。這些酵素分子仍具活性且可不受內源性抗凝血酶III所抑制。因此，以此方式，血塊仍具有一般凝結潛力。

在許多心血管及代謝病症過程期間，由於全身性因素，例如高脂血症、糖尿病或吸煙，由於血淤之變化，例如心房纖維顫動，或由於血管壁之病理變化，例如內皮功能障礙或動脈粥樣硬化，凝結作用及血小板活化之傾向增加。此不欲且過度止血現象可藉由形成血纖維蛋白-及小小板-富含之血栓(thrombi)而造成血栓栓塞性病症及具威脅生命狀態之血栓性併發症。

止血係受到複雜調控機制所支配，凝血系統不受控制之活化或活化過程有缺陷之抑制可導致血管(動脈、靜脈、淋巴管)或心腔中形成局部血栓或栓塞，此可導致嚴重之血栓性或血栓栓塞性病症。此外，全身性高凝血狀態在瀰漫性血管內凝血情形下可造成消耗性凝血病。此外，在微血管病變溶血性貧血、體外循環系統(例如血液透析)、以及假心臟瓣膜及支架之情形下可能遭遇血栓栓塞性併發症。

在大部分工業化國家中，血栓栓塞性病症係為患病與死亡最常見之原因[Heart Disease: A Textbook of Cardiovascular Medicine, Eugene Braunwald, 5th edition, 1997, W.B. Saunders Company, Philadelphia]。

先前技術中已知之抗凝血劑，例如用於抑制或防止血液凝結之物質，具有各種常見之重大缺點。因此，在實施上，血栓栓塞性病症之有效治療方法或預防被發現為相當困難且未令人滿意。

在血栓栓塞性病症之治療與預防上，首先使用非經腸胃或經皮下投與之肝素。由於較為有利之藥物動力學性質，近來偏好使用低分子量肝素者漸增；然而，下文敘述之肝素療法中遭遇之已知缺點在此方面並不能避免。因此，肝素經口投與無效，且只具較短之半衰期。此外，存在流血之高風險，特別是可能發生腦出血及腸胃道出血，且可能有血小板減少、藥物性禿髮或骨質疏鬆症[Pschyrembel, Klinisches Wörterbuch [Clinical Dictionary],257th edition, 1994, Walter de Gruyter Verlag, page 610，關鍵字“heparin”；Römpp Lexikon Chemie[Römpp Chemical Encyclopaedia], Version 1.5, 1998, Georg Thieme Verlag Stuttgart，關鍵字“heparin”]。低分子量肝素確實具有造成肝素-誘發的血小板減少之較低可能性；然而，其等可同樣地僅可經皮下投與，此亦適用於磺達肝癸(fondaparinux)，此為一種具有長半衰期之合成選擇性因子Xa抑制劑。

第二類抗凝血劑為維生素K拮抗劑，其等包括例如1,3-二氫茚二酮類，且特別是化合物例如沃法令(warfarin)、苯丙香豆素(phenprocoumon)、雙香豆素(dicumarol)及非選擇性地抑制肝臟中特定維生素K依賴性的凝血因子各種產物合成之其他香豆素衍生物。由於作用之機制，作用之起始非常緩慢(潛伏期至作用開始為36至48小時)。該等化合物可經口投與；然而，由於具出血之高風險及治療指標狹窄，需要複雜之個別調整及病患監控[J. Hirsh, J. Dalen, D.R. Andersonet al. ,“Oral anticoagulants: Mechanism of action, clinical effectiveness, and optimal therapeutic range”Chest 2001 ,119 , 8S-21S；J. Ansell, J. Hirsh, J. Dalenet al. ,“Managing oral anticoagulant therapy”Chest 2001 ,119 , 22S-38S；P.S. Wells, A.M. Holbrook, N.R. Crowtheret al. ,“Interactions of warfarin with drugs and food”Ann. Intern. Med. 1994 ,121 ,676-683]。此外，已敘述其他副作用例如胃腸道問題、掉髮及皮膚壞死。

此外，凝血酶抑制劑係以較小程度被使用。水蛭素(hirudin)係為一種極強效抑制凝血酶之蛋白質。在重組形式中，其以保留抗凝血劑經靜脈內投與。比伐盧定(hivalirudin)為一種水蛭素的20個胺基酸片段，其具有非常短的半衰期且同樣地不可經口服。此對於直接非肽低分子量凝血酶抑制劑阿加曲班(argatroban)亦為相同[J.H. Sohn, et al.Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001 ,57,606-613 ；T.GaldwellClin. Ther. 2002 ,24, 38-58 ；G.Escolar,Drugs of Today 2006 ,42, 223 ]。

另一種治療方法需要單獨因子Xa之抑制。根據Xa因子於血液凝結級聯反應中扮演之核心角色，其乃抗凝血活性化合物最重要標的之一者[J. Hauptmann, J. Stürzebecher,Thrombosis Research 1999 ,93 , 203；S.A.V. Raghavan, M. Dikshit,“Recent advances in the status and targets of antithrombotic agents”Drugs Fut. 2002 ,27 , 669-683；H.A. Wieland, V. Laux, D. Kozian, M. Lorenz,“Approaches in anticoagulation: Rationales for target positioning”Curr. Opin. Investig. Drugs 2003 ,4 , 264-271；U.J. Ries, W. Wienen,“Serine proteases as targets for antithrombotic therapy”Drugs Fut. 2003 ,28 , 355-370；L.-A. Linkins, J.I. Weitz,“New anticoagulant therapy”Annu. Rev. Med. 2005 ,56 , 63-77；A. Casimiro-Garciaet al. ,“Progress in the discovery of Factor Xa inhibitors”Expert Opin. Ther. Patents 2006 ,15 , 119-145]。

於此，已顯示在動物模式中胜肽與非胜肽類之各種化合物均有效作為因子Xa抑制劑。至今，已知許多數目之直接因子Xa抑制劑[J.M. Walenga, W.P. Jeske, D. Hoppensteadt, J. Fareed,“Factor Xa Inhibitors: Today and beyond”Curr. Opin. Investig. Drugs 2003,4 , 272-281；J. Ruef, H.A. Katus,“‘New antithrombotic drugs on the horizon”Expert Opin. Investig. Drugs 2003,12 , 781-797；M.L. Quan, J.M. Smallheer,“The race to an orally active Factor Xa Inhibitor： Recent advances”Curr. Opin. Drug Discovery & Development 2004,7 , 460-469]。為非胜肽、低分子量因子Xa抑制劑之唑啶酮類被敘述於WO 01/47919。

最近，已敘述其中於活體外及活體內呈不同混合比率之低分子量凝血酶與因子Xa被檢測之方法。於此，發現強的協乘性效力。泰諾吉全(Tanogitran)為一種低分子量物質，其已被敘述為可抑制凝血酶與因子Xa兩者，但其具有對凝血酶抑制之強偏好性，仍在發展中之此物質經口服並非生物有效的。

就抗血栓藥劑而言，其治療寬度具有核心之重要性：用於抑制凝血作用之治療活性劑量與其中可能發生出血之劑量間的距離應儘可能地大，以使得在最小風險型態下達到最大治療活性。

如以低分子量凝血酶與因子Xa的混合物進行之實驗所示，抑制凝血酶及因子Xa兩者之化合物藉由其雙重特性具有特別強之協乘性，因而特別有效控制血栓之形成。以此方式，化合物會抑制凝血作用級聯反應之兩種關鍵酵素、而不會完全阻斷個別之酵素。因子Xa之剩餘者及凝血酶會導致完全止血且因而為一特別有利之治療寬度。在兔子之動靜脈分流模式中，可證實共同投與僅微弱抗血栓活性劑量的選擇性因子Xa抑制劑PD0313052與選擇性凝血酶抑制劑阿加曲班會導致強超加性(superadditive)抗血栓作用。此外，當個別劑量與最大協乘作用結合時，未觀察到增加之出血現象。這些觀察獲致的結論為凝血酶與因子Xa之同時抑制會增加相關於抗血栓作用與出血風險間的距離之治療寬度(Journal of Thrombosis and Haemostasis, 4: 834-841)。

當呈物質濃度的函數之凝血酶原時間藉由與純因子Xa及凝血酶抑制劑直接比較而就時，此協乘性係特別顯著。當存在血栓形成之高風險時、或當血栓形成可導致致命的疾病時，對於凝血作用級聯反應的兩種關鍵酵素上之此強作用被認為是特別有利的。例如，在急性冠狀症候群型之動脈粥樣硬化血栓性病症或急性心肌梗塞後病狀之情況下，兩者為相關的。

另外，相較於肝素、水蛭素及維生素K拮抗劑，抑制凝血酶及因子Xa兩者之化合物亦具活性對抗結合至血纖維蛋白血塊之凝血因子。已存在的血塊之血栓潛能的限制為預防動脈阻塞之關鍵點。此可藉由抑制存在凝血酶活性及血塊中新的凝血酶形成兩者而特別有效地達成。雖然純的凝血酶抑制劑無法預防結合血塊的含因子Xa凝血酶原酶複合體產生似崩滑(avalanche-like)凝血酶且抑制效果可因而在受到大量產生的凝血酶高度刺激之凝血作用中過度補償，但純的因子Xa抑制劑不能抑制已存在之凝血酶活性。由於抑制作用同樣地不可能由生理機制達成，此結合血塊之凝血酶會存在一特別大的風險。相反地，雙重作用的化合物，亦即抑制凝血酶及因子Xa兩者之化合物，可抑制凝血酶產生及對血塊之凝血酶活性，因而也預防潛在之血塊生長。

因此，本發明之目的係在於提供雙重作用之化合物，亦即，抑制凝血酶及因子Xa兩者之化合物，其藉由抑制凝血酶產生及凝血酶對血塊之活性而預防其潛在生長，其具有用於控制人類及動物中疾病、特別是血栓栓塞性病症上寬廣的治療視窗。

本發明係提供下式之化合物，其中n代表數目0、1、2或3，R¹ 代表氯、三氟甲氧基、甲基、乙基、正丙基、甲氧基、甲氧基甲基或乙氧基甲基，R² 代表氫或甲基，及其鹽、其溶劑化物和其鹽之溶劑化物。

根據本發明之化合物係為式(I)化合物及其鹽、溶劑化物和鹽之溶劑化物、式(I)所包含之化合物、下述所提及式之化合物及其鹽、溶劑化物及鹽之溶劑化物，以及下述提及作為代表性具體實例之式(I)所包含之化合物及其鹽、溶劑化物及鹽之溶劑化物，若下述提及之式(I)所包含之化合物並非已是鹽、溶劑化物及鹽之溶劑化物。

視其結構而定，根據本發明之化合物可以立體異構物形式(鏡像異構物、非鏡像異構物)存在。因此，本發明包含鏡像異構物或非鏡像異構物及其各別之混合物。由鏡像異構物及/或非鏡像異構物之這類混合物，以已知方式分離立體異構上均一的化合物是可能的。

若根據本發明之化合物可以互變異構形式存在，本發明則包含所有互變異構形式。

在本發明之內文中，較佳的鹽類係為根據本發明的化合物之生理上可接受之鹽類。本發明亦包含其部分不合適用於醫藥應用上、但其可用於例如分離或純化根據本發明化合物之鹽類。

根據本發明的化合物之生理上可接受之鹽包括礦物酸、羧酸及磺酸之酸加成鹽，例如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸及苯甲酸。

根據本發明的化合物之生理上可接受之鹽亦包括習知鹼之鹽，舉例而言，其實例及較佳者為鹼金屬鹽(例如鈉鹽與鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鈣鹽與鎂鹽)及衍生自氨或具有1至16個碳原子之有機胺之銨鹽，舉例而言，其實例及較佳者為乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環己胺、二甲胺基乙醇,普魯卡因(procaine)、二苯甲基胺、N－甲基嗎福啉、精胺酸、離胺酸、伸乙二胺與N－甲基六氫吡啶之銨鹽。

在本發明之內文中，溶劑化物乃呈固體或液體狀態、與溶劑分子配位形成錯合物等形式之根據本發明化合物。水合物為與水配位之特定形式的溶劑化物。於本發明之內文中，較佳之溶劑化物為水合物。

此外，本發明亦包含根據本發明的化合物之前藥。“前藥”一詞包含其本身可具生物活性或不具活性、但在用於生物體內期間會轉化(例如經代謝或水解)為根據本發明化合物之化合物。

較佳者為式(I)化合物，其中n代表數目0、1或2，R¹ 代表氯、三氟甲氧基、甲基、正丙基、甲氧基或甲氧基甲基，R² 代表氫或甲基，及其鹽、其溶劑化物和其鹽之溶劑化物。

較佳者亦為式(I)化合物，其中n代表數目0、1或2，R¹ 代表甲基、甲氧基或甲氧基甲基，R² 代表氫，及其鹽、其溶劑化物和其鹽之溶劑化物。

較佳者亦為式(I)化合物，其中 n代表數目0、1或2，R¹ 代表甲基，R² 代表氫，及其鹽、其溶劑化物和其鹽之溶劑化物。

較佳者亦為式(I)化合物，其中n代表數目1或2，R¹ 代表甲基，R² 代表氫，及其鹽、其溶劑化物和其鹽之溶劑化物。

較佳者亦為式(I)化合物，其中n代表數目1或2。

較佳者亦為式(I)化合物，其中n代表數目1。

較佳者亦為式(I)化合物，其中R¹ 代表甲基。

較佳者亦為式(I)化合物，其中R² 代表氫。

較佳者亦為式(I)化合物，其中R¹ 代表甲基且R² 代表氫。

特別較佳者亦為下式之化合物5－氯－N－[((5S)－3－{4－[3－(羥基甲基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺及其鹽、其溶劑化物及其鹽之溶劑化物。該化合物係敘述於實例2中。

特別較佳者亦為下式之化合物5－氯－N－[((5S)－3－{4－[3－(2－羥基乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺及其鹽、其溶劑化物及其鹽之溶劑化物。該化合物係敘述於實例6中。

特別較佳者亦為下式之化合物5－氯－N－{[(5S)－3－{4－[3－(3－羥基丙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺及其鹽、其溶劑化物及其鹽之溶劑化物。該化合物係敘述於實例10中。

其團之各別組合或較佳組合中給予之特定基團定義係與其團各別給予之組合無關，亦可被其他組合之任何基團定義所置換。

極特別較佳的是上述較佳範圍之二或多個組合。

因此，本發明係提供一種製備式(I)化合物、或其鹽、溶劑化物或其鹽之溶劑化物之方法，其中[A]使下式之化合物在第一步驟中與下式之化合物反應其中n、R¹ 及R² 具有如上給予之意義，得到下式之化合物其中n、R¹ 及R² 具有如上給予之意義，且在第二步驟中，在光氣或光氣等同物例如羰基二咪唑(CDI)之存在下，將該化合物環化為式(I)化合物，或[B]使下式之化合物其中n、R¹ 及R² 係如上述定義，使下式之化合物反應其中X代表鹵素，較佳為溴或氯、或羥基。

若此反應期間羥基被保護，例如被一矽烷基保護基保護，其會在方法[A]或[B]已結束之後使用熟習該項技術者已知之方法除去，例如藉由與氟化四丁基銨於一溶劑例如四氫呋喃中反應、或藉由與氯化氫於甲醇中反應而得。

鹽之游離鹼可藉由例如於逆相管柱上使用乙腈/水梯度之層析、及添加鹼而得到，特別是藉由使用RP18Phenomenex Luna C18(2)管柱及二乙胺作為鹼，或藉由將鹽溶解於有機溶劑中且以鹼性鹽例如碳酸氫鈉萃取而得。

本發明進一步提供一種製備式(I)化合物或其溶劑化物之方法，其中該化合物之鹽或該化合物之鹽的溶劑化物係經由層析及添加鹼而轉化為該化合物。

第一步驟之反應一般係在惰性溶劑中、路易士酸存在下、較佳於室溫至溶劑回流的溫度範圍於大氣壓力下進行。

舉例而言，惰性溶劑為極性惰性溶劑，例如乙腈、丁腈、二氯甲烷或氯仿；較佳的是乙腈。

舉例而言，路易士酸為過氯酸鎂、三氟甲磺酸鐿(III)、溴化鋰、三氟甲磺酸鎂或三氯鋁；較佳的是過氯酸鎂。

根據方法[A]之第二步驟的反應一般係在惰性溶劑中、鹼之存在下、較佳於室溫至溶劑回流的溫度範圍於大氣壓力下進行。

舉例而言，惰性溶劑為極性惰性溶劑，例如乙腈或丁腈。

舉例而言，鹼為強三級胺鹼，例如4－Ｎ ,N －二甲基胺基吡啶。

較佳的是與作為碳酸等同物之N ,N' －羰基二咪唑與加入作為鹼之4－N ,N －二甲基胺基吡啶之反應。

若方法[B]中之X為鹵素，反應一般係在惰性溶劑中、若適當時在鹼的存在下、較佳於－30℃至50℃之溫度範圍在大氣壓力下進行。

舉例而言，惰性溶劑為四氫呋喃、亞甲基氯、吡啶、二烷或二甲基甲醯胺，較佳的是四氫呋喃或亞甲基氯。

舉例而言，鹼為三乙胺、二異丙基乙胺或N －甲基嗎福啉；較佳的是二異丙基乙胺。

若方法[B]中之X為羥基，反應一般係在惰性溶劑中、在脫水劑的存在、若適當時在鹼之存在下、較佳於－30℃至50℃之溫度範圍在大氣壓力下進行。

舉例而言，惰性溶劑為鹵化之烴類例如二氯甲烷或三氯甲烷、烴類例如苯、硝基甲烷、二烷、二甲基甲醯胺或乙腈。亦可能使用溶劑之混合物。特別較佳的是二氯甲烷或二甲基甲醯胺。

在本文中，合適之脫水劑為例如碳二亞胺類，如Ｎ ,N' －二乙基－、N,N,' －二丙基－、N,N' －二異丙基－、N,N' －二環己基碳二亞胺、N －(3－二甲基胺基異丙基)－N' －乙基碳二亞胺氫氯酸鹽(EDC)、N －環己基碳二亞胺－N｀－丙基氧基甲基－聚苯乙烯(PS－碳二亞胺)，或羰基化合物，如羰基二咪唑，或1,2－唑鎓(oxazolium)化合物，如2－乙基－5－苯基－1,2－唑鎓3－硫酸鹽或2－第三丁基－5－甲基異唑鎓過氯酸鹽，或醯基胺基化合物，如2－乙氧基－1－乙氧基羰基－1,2－二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或雙(2－酮基－3－唑啶基)磷醯氯或苯并三唑基氧基－三(二甲基胺基)六氟磷酸鏻，或O －(苯并三唑－1－基)－N,N,N' ,N' －四甲基鎓六氟磷酸鹽(HBTU)，2－(2－酮基－1－(2H)－吡啶基)－1,1,3,3－四甲基鎓四氟硼酸鹽(TPTU)或O －(7－氮雜苯并三唑－1－基)－N,N,N',N' －四甲基鎓六氟磷酸鹽(HATU)，或1－羥基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑－1－基氧基三(二甲基胺基)六氟磷酸鏻(BOP)，或N －羥基琥珀醯亞胺，或此等之混合物與鹽。

舉例而言，鹼為鹼金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉或碳酸鉀，或碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，或有機鹼，例如三烷基胺類，如三乙胺、N －甲基嗎福啉、N －甲基六氫吡啶、4－二甲基胺基吡啶或二異丙基乙胺。

以HATU或以EDC之縮合反應較佳係在HOBt存在下進行。

式(II)及(VI)化合物係為已知或可藉由已知方法由對應起始物質合成。

式(III)化合物係為已知或可藉由還原下式化合物上的硝基而製備其中n、R¹ 及R² 具有如上述給予之意義。

反應一般係使用還原劑於惰性溶劑中、較佳在室溫至溶劑回流隻溫度範圍於大氣壓力至3巴下進行。

舉例而言，還原劑為碳上鈀、二氯化錫、三氯化鈦或甲酸銨及在乙醇與乙酸乙酯的混合物中之碳上鈀；較佳的是碳上鈀或二氯化錫。

舉例而言，惰性溶劑為例如二乙醚、甲基第三丁基醚、1,2－二甲氧基乙烷、二烷、四氫呋喃、甘醇二甲基醚或二乙二醇二甲基醚，醇類例如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或第三丁醇，烴類例如苯、二甲苯、甲苯、己烷、環己烷或礦物油部分，或其他溶劑例如二甲基甲醯胺、二甲基乙醯胺、乙腈或吡啶；較佳的溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇，或在二氯化錫之情況下，二甲基甲醯胺。

式(VII)化合物係為已知，可藉由已知方法由對應起始物質合成，或可藉由類似實例部分中所述方法而製備。

式(V)化合物係為已知或可藉由自下式化合物移除酞亞胺保護基團而製備其中n、R¹ 及R² 具有上述給予之意義。

反應一般係使用甲基胺水溶液或肼水合物於乙醇之溶液、較佳使用甲基胺水溶液在溶劑回流大氣壓力下進行。

式(VIII)化合物係為已知，可如方法[A]中所述製備貨可藉由已知方法由適當起始物質而合成。

在式(III)、(IV)、(V)、(VII)及(VIII)化合物中，羥基可選擇地帶有一矽烷基保護基團，例如第三丁基(二苯基)矽烷基。

根據本發明之化合物的製備可由下列合成流程說明：

根據本發明之化合物係具有不可預見之有效藥理活性譜。

因此，該等化合物可合適作為供治療及/或預防人類及動物疾病之藥劑。

根據本發明之化合物係為凝血因子Xa及凝血酶(因子IIa)的雙重抑制劑，特別作為抗凝血劑。該等化合物會抑制凝血酶及因子Xa兩者、藉由抑制凝血酶產生及凝血、其潛力生長上之活性而預防，且其具有寬廣之治療視窗。

本發明進一步提供根據本發明的化合物用於治療及/或預防疾病、較佳血栓栓塞性病症及/或血栓栓塞性併發症之用途。

“血栓栓塞性病症”在本發明意義上係特別為病症，例如ST段上升(STEMI)與非ST段上升(non－STEMI)心肌梗塞、穩定型心絞痛、不穩定型心絞痛、冠狀動脈介入(例如氣球擴張術或冠狀動脈分流術)後之再閉塞與再狹窄、周邊動脈阻塞性疾病、肺動脈栓塞、深部靜脈栓塞與腎靜脈栓塞、短暫缺血性發作以及血栓性與血栓栓塞性中風。

因此，根據本發明之化合物亦合適用於預防及治療心臟性血栓栓塞症，舉例而言，例如具有急性、間歇性或持續性心律不整(例如心房纖維顫動)病患、進行心律電轉復(cardioversion)者、此外具有心瓣膜疾病或具有人工心瓣膜病患之腦缺血、中風及全身性血栓栓塞症及缺血。

此外，在微血管病變溶血性貧血、體外循環系統(例如血液透析)及假心臟瓣膜中可遭遇血栓栓塞性併發症。

另外，根據本發明之化合物亦適用於預防及/或治療動脈粥樣硬化性血管疾病及發炎疾病，例如運動器(locomotor apparatus)之風濕性病症，此外亦用於預防及/ 或治療阿滋海默氏症(Alzheimer's disease)。再者，根據本發明之化合物可用於抑制腫瘤生長及轉移形成、用於微血管病變、年齡相關之黃斑病變、糖尿病視網膜病變、糖尿病腎病變與其他微脈管疾病、以及也用於預防及治療血栓栓塞性併發症，例如對腫瘤病患、特別是接受重大手術介入或化學－或放射治療者之靜脈血栓性栓塞症。

再者，根據本發明之化合物亦適用於預防及/或治療肺高壓症。

“肺高壓症”一詞包括特定形式之肺高壓，例如由世界衞生組織(WHO)所明定者(Clinical Classification of Pulmonary Hypertension ,Venice 2003)。可提及之實例為肺部動脈高血壓、與左側心臟疾病相關之肺高壓症、與肺部疾病及/或組織缺氧相關之肺高壓症及由於慢性血栓栓塞症之肺高壓症(CTEPH)。

“肺部動脈高血壓”包含自發性肺部動脈高血壓(IPAH，亦被正式稱為原發性肺高壓症)、常見肺部動脈高血壓(FPAH)及關連性肺部動脈高血壓(APAH)，其與膠原酶、先天性體循環－肺循環分流缺陷、門靜脈高壓症、HIV感染、特定藥物與藥劑之攝入相關，與其他病症(甲狀腺病症、肝醣儲積症、Morbus Gaucher、遺傳性毛細管擴張、血紅素病變、骨髓增生性疾病、脾切除)相關，與具有顯著靜脈/毛細管分佈病症(例如肺靜脈阻塞病症與肺－毛細管血管瘤症、以及新生兒持續性肺高壓症)相關。

與左側心臟病症相關之肺高壓症包含不健全之左心房或心室及二尖瓣或主動脈瓣膜缺損。

與肺部疾病及/或組織缺氧相關之肺高壓症包含慢性阻塞性肺部病症、間質性肺部病症、睡眠呼吸中止症候群、肺泡換氣不足、慢性高山症及與生俱來之缺陷。

由於慢性血栓性栓塞之肺高壓症(CTEPH)包含肺動脈近端栓塞性血栓閉塞、肺動脈末梢栓塞性血栓閉塞及非血栓性肺動脈栓塞(腫瘤、寄生物、異物)。

本發明進一步提供根據本發明的化合物之用途，其用於製備供治療及/或預防與類肉瘤症、X型組織細胞增生症及淋巴血管瘤相關之肺高壓症的藥劑。

此外，根據本發明之物質也可合適用於治療肺臟及肝臟纖維變性。

再者，根據本發明之化合物亦可合適用於治療及/或預防敗血症(sepsis或septicaemia)、全身性發炎性症候群(SIRS)、敗血性器官功能障礙、敗血性器官衰竭與多重器官衰竭、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、急性肺傷害(ALI)、敗血性休克、DIC(瀰漫性血管內凝血或消耗性凝血病)及/或敗血性器官衰竭。

“敗血症”係被界定為出現感染及全身性發炎反應症候群(下文係稱為“SIRS”)。SIRS之發生與感染有關，但也與例如受傷、灼傷、休克、手術、缺血、胰臟炎、復活(reanimation)或腫瘤之其他狀況相關。1992年ACCP/SCCM Consensus Conference Committee(Crit Care Med 1992；20：864－874)之界定係敘述診斷“SIRS”所需之診斷症狀與測量參數(特別是體溫變化、脈搏增加、呼吸困難及有變化之血液檢驗結果)。後來2001年SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS國際敗血症界定會議實質上維持所有的規範，但微調細節(Levy et al.,Crit Care Med 2003；31：1250－1256)。

在敗血症期間，凝血系統可能有全身性之活化(瀰漫性血管內凝血或消耗性凝血病變，下文稱為“DIC＂)，其伴隨在各種器官中形成小血栓及續發性出血併發症。再者，可能產生內皮細胞傷害，其伴隨血管滲透性增加及液體與蛋白質滲入管外腔。當敗血症進展時，可能產生器官衰竭(例如腎衰竭、肝衰竭、呼吸衰竭、中樞神經缺損及/或心血管衰竭)或多重器官衰竭。“敗血性休克”係指需要治療之低血壓發作，該低血壓係促成進一步之器官損害並與預後惡化相關。

病原體可為細菌(革蘭氏陰性及革蘭氏陽性)、真菌、病毒及/或真核生物。入口點或初級感染可為例如肺炎、尿道感染或腹膜炎。感染可能、但非必然與菌血症相關。

DIC及/或SIRS可於敗血症期間發生，但也可能為手術、腫瘤疾病、灼傷或其他傷害之結果。於DIC中，凝血系統在受損的內皮細胞表面、異物表面或受傷之血管外組織大量活化。因此，在各種器官之小血管中有凝血現象，其伴隨相關之組組織缺氧及後續之器官功能障礙。繼發性地，產生凝血因子(例如因子X、凝血酶原與血纖維蛋白原)及血小板之消耗，其降低血液凝結能力且可導致嚴重出血。

首先，敗血症療法包括例如利用操作性地病灶重建及抗生作用繼起地消除感染之病因。其次，其在於受侵襲器官系統之暫時性加強醫療支援。舉例而言，此疾病不同階段之療法係敘述於下述出版品中(Dellinger et al.,Crit Care Med 2004；32：858－873)。對於DIC，尚無有效療法被證明。

本發明進一步提供包含根據本發明的化合物及一或多種進一步活性化合物之藥劑，特別是用於治療及/或預防上述提及之病症者。例示及較佳之活性化合物的組合物為：．抗生素療法呈計算療法(calculated therapy)(微生物診斷出現之前)或呈特效療法(specific therapy)之各種抗生素或抗真菌藥劑組合物係為合適者。

．輸液(fluid)療法例如晶體輸液或懸浮體輸液

．血管加壓素例如去甲腎上腺素類、多巴胺類或血管加壓素

．影響肌力療法例如多巴酚丁胺

．皮質類固醇類例如氫化可體松、或氟氫可體松

．重組人類活化蛋白C Xigris

．血液產物例如紅血球濃縮物、血小板濃縮物、紅血球生成素或新鮮冷凍血漿

．於敗血症誘發的急性肺傷害(ALI)或急性呼吸窘迫症候群(ARDS)情形下之人工換氣例如容許性高碳酸血症、降低單一次呼吸量(tidal volumes)

．鎮靜、止痛及神經肌肉阻斷劑鎮靜：例如苯甲二氮、氯羥去甲安定(lorazepam)、咪達唑侖(midazolam)或丙泊酚(propofol)。類鴉片劑：例如芬太尼(fentanyl)、氫嗎啡酮、嗎啡、哌替啶(meperidine)或瑞芬太尼(remifentanil)。NSAIDs：例如酮咯酸(ketorolac)、布洛芬(ibuprofen)或乙醯胺基酚。神經肌肉阻斷劑：例如潘可羅寧(pancuronium)。

．葡萄糖控制例如胰島素、葡萄糖

．腎臟替代方法例如連續性靜－靜脈血液過濾或間歇性血液透析。低劑量多巴胺供腎臟保護

．抗凝血劑例如用於預防血栓形成或用於腎臟替代方法，例如未分段之肝素、低分子量肝素、類肝素、水蛭素、比伐盧定 (bivalirudin)或阿加曲班(argatroban)。

．碳酸氫鹽療法

．壓力性潰瘍預防例如H2－受體抑制劑、制酸劑。

此外，根據本發明之化合物亦可用於預防活體外凝血，例如用於保存血液及血漿產物、用於清潔/預處理導尿管與其他醫藥助劑及儀器、用於塗覆活體內或活體外使用醫藥助劑及儀器之合成表面或用於包含因子Xa及/或因子IIa之生物樣本。

本發明進一步提供根據本發明的化合物用於治療及/或預防病症、特別是上述提及病症之用途。

本發明進一步提供根據本發明的化合物用於製備供治療及/或預防病症、特別是上述提及病症的藥劑之用途。

本發明進一步提供用於治療及/或預防病症、特別是上述提及病症之方法，其係使用抗凝血有效量之根據本發明的化合物。

本發明進一步提供用於預防試管內血液凝結(特別是在庫血或含因子Xa及/或因子IIa之生物樣本中)之方法，該方法之特徵在於添加抗凝血有效量之根據本發明的化合物。

本發明進一步提供包含根據本發明的化合物及一或多種其他活性化合物之藥劑，特別是用於治療及/或預防上述提及的病症者。藉由實例及藉由偏好性之方式，可提及的是下列活性化合物或組合物：．降血脂物質，特別是HMG－CoA－(3－羥基－3－甲基戊二醯基－輔酶A)還原酶抑制劑，舉例而言，例如洛伐他汀(lovastatin)(Mevacor；US 4,231,938)、辛伐他汀(simvastatin)(Zocor；US 4,444,784)、普拉伐他汀(pravastatin)(Pravachol；US 4,346,227)、氟伐他汀(fluvastatin)(Lescol；US 5,354,772)與阿托伐他汀(atorvastatin)(Lipitor；US 5,273,995)；．冠狀動脈治療劑/血管擴張劑，特別是ACE(血管收縮素轉化酵素)抑制劑，舉例而言，例如卡托普利(captopril)、利辛普利(lisinopril)、恩納比爾拉(enalapril)、雷米普利(ramipril)、西拉普利(cilazapril)、貝那普利(benazepril)、福辛普利(fosinopril)、喹那普利(quinapril)及培哚普利(perindopril)；或AII(血管收縮素II)受體拮抗劑，舉例而言，例如恩布沙坦(embusartan)(US 5,863,930)、洛沙坦(losartan)、纈沙坦(valsartan)、厄貝沙坦(irbesartan)、坎地沙坦(candesartan)、依普羅沙坦(eprosartan)及替米沙坦(temisartan)；或β－腎上腺素能受體拮抗劑，舉例而言，例如卡維地洛(carvedilol)、阿普洛爾(alprenolol)、比索洛爾(bisoprolol)、乙丁醯心安(acebutolol)、壓平樂(atenolol)、倍他洛爾(betaxolol)、卡替洛爾(carteolol)、美多心安(metoprolol)、萘羥心安(nadolol)、噴布洛爾(penbutolol)、心得靜(pindolol)、普萘洛爾(propanolol)及噻嗎洛爾(timolol)；或α－1－腎上腺素能受體拮抗劑，舉例而言，例如哌唑辛(prazosine)、布納唑辛(bunazosine)、多沙唑辛(doxazosine)及替拉唑辛(terazosine)；或利尿劑，舉例而言，例如氫氯噻(hydrochlorothiazide)、速尿(furosemide)、布美他尼(bumetanide)、吡咯他尼(piretanide)、托拉塞米(torasemide)、阿米洛利(amiloride)及雙肼屈(dihydralazine)；或鈣通道阻斷劑，舉例而言，例如異博停(verapamil)與帝俠鎮(diltiazem)；或二氫吡啶衍生物，舉例而言，例如尼非地平(nifedipine)(Adalat)與尼群地平(nitrendipine)(Bayotensin)；或硝基製劑，舉例而言，例如5－單硝酸異山梨酯、二硝酸異山梨酯與三硝酸甘油酯；或導致環狀鳥嘌呤核苷單磷酸鹽(cGMP)增加之物質，舉例而言，例如可溶性鳥嘌呤核苷酸環化酶激發劑(WO 98/16223、WO 98/16507、WO 98/23619、WO 00/06567、WO 00/06568、WO 00/06569、WO 00/21954、WO 00/66582、WO 01/17998、WO 01/19776、WO 01/19355、WO 01/19780、WO 01/19778、WO 07/045366、WO 07/045367、WO 07/045369、WO 07/045370、WO 07/045433)；．血纖維蛋白溶酶原(plasminogen)活化劑(血栓溶解劑/血纎維蛋白溶解劑)及促進血栓溶解/纎維蛋白溶解之化合物，例如纎溶酶原活化劑抑制劑之抑制劑(PAI抑制劑)，舉例而言，例如組織血纎蛋白溶酶原活化劑(t－PA)、鏈激酶、瑞替普酶(reteplase)及尿激酶；．抗凝血物質(抗凝血劑)，舉例而言，例如肝素(UFH)、低分子量肝素(NMH)，例如亭扎肝素(tinzaparin)、舍托肝素(certoparin)、帕肝素(parnaparin)、那屈肝素(nadroparin)、阿地肝素(ardeparin)、依諾肝素(enoxaparin)、瑞肝素(reviparin)、達肝素(dalteparin)、達那肝素(danaparoid)、AVE 5026 (Sanofi－Aventis,Company Presentation 2008,February 12)、M118 (Momenta Pharmaceuticals Inc.,Press Release 2008,February 14)、ORG42675 (Organon International Inc.,Company World Wide Website 2007,April)、及直接凝血酶抑制劑(DTI)，例如：Exanta(ximelagatran) Rendix(dabigatran) AZD－0837 [AstraZeneca Annual Report2006 ,19 March 2007] SSR－182289A [J.Lorrainet al .Jｏurnal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2003 ,304 ,567－574；J－M Altenburgeret al .Bioorg .Med .Chem .2004 ,12 ,1713－1730] TGN－167 [S.Combeet al .Blood 2005 ,106 ,abstract 1863(ASH 2005)] N －[(苄氧基)羰基]－L －苯基丙胺基－N －[(1S)－1－(二羥氧硼基)－4－甲氧丁基]－D －脯胺醯胺 [WO 2005/084685] Sofigatran [WHO Drug Information 2007 ,21 ,77] MCC－977 [Mitsubishi Pharma website pipeline2006 ,25.July 2006]MPC－0920 [Press Release：“Myriad Genetics Begins Phase 1 Trial of Anti－Thrombin Drug MPC－0920＂,Myriad Genetics Inc,02.May 2006]及TGN－255 (flovagatran) 以及直接因子Xa抑制劑，舉例而言，例如：rivaroxaban(BAY 59－7939) ：5－氯－N －({(5S )－2－酮基－3－[4－(3－酮基嗎福啉－4－基)苯基]－1,3－唑啶－5－基}甲基)噻吩－2－甲醯胺[WO 2001/47919] AX－1826 [S.Takehanaet al .Japanese Journal of Pharmacology 2000 ,82 (Suppl.1),213P；T.Kayaharaet al .Japanese Journal of Pharmacology 2000 ,82 (Suppl.1),213P]、tanogitran(BIBT－986，前藥：BIBT－1011)： N －[(1R )－1－{2－[({4－[胺基(亞胺基)甲基]－苯基}胺基)甲基]－1－甲基－1H －苯并咪唑－5－基}－1－甲基－2－酮基－2－吡咯啶－1－基乙基]甘胺酸[American Chemical Society－226th National Meeting,New York City,NY,USA,2003 ] 揭示於WO 2004/056784中之化合物，YM－150 [Y.Iwatsukiet al .Blood 2006 ,108 ,abstract 911(ASH 2006)]、N －{4－溴－2－[(5－氯吡啶－2－基)胺甲醯基]－6－羥基苯基}－1－異丙基六氫吡啶－4－甲醯胺[JP 2005/179272] 揭示於WO 2000/242270之化合物、AZ12300547： 6－[4－({(2S)－4－[(3－氯－1H －吲哚－6－基)磺醯基]－2－甲基－6－酮基六氫吡－1－基}甲基)苯基]－2－甲基嗒－3(2H )－酮[K.L Granberget al .American Chemical Society－232th National Meeting,San Francisco,USA,2006 ,MEDI 391] 揭示於WO 2007/008142之化合物、razaxaban(DPC－906)： 1－(3－胺基－1,2－苯并異唑－5－基)－N －(4－{2－[(二甲基胺基)－甲基]－1H －咪唑－1－基}－2－氟苯基)－3－(三氟甲基)－1H －吡唑－5－甲醯胺[J .Med .Chem .2005 ,48 ,1729－1744] apixaban(BMS－562247)： 1－(4－甲氧基苯基)－7－酮基－6－[4－(2－酮基六氫吡啶－1－基)苯基]－4,5,6,7－四氫－1H －吡唑并[3,4－c]吡啶－3－甲醯胺[WO 2003/026652,WO 2003/049681] BMS－691648： 3－氯－N －[(3S ,4R )－1－(甲基磺醯基)－4－{[4－(2－酮基吡啶－1(2H )－基)苯甲醯基]胺基}六氫吡啶－3－基]－1H －吲哚－6－甲醯胺[T.Gngr et al.Drugs Fut .2006 ,31 (Suppl A)：abstract P118；WO 2004/082687] DX －9065a： (2S )－3－{7－[胺基(亞胺基)甲基]－2－萘基}－2－(4－{[(3S )－1－乙亞胺醯基－吡咯啶－3－基]氧基}苯基)丙酸[T.Nagaharaet al .J .Med .Chem .1994 ,37 ,1200－1207] DU－176b [Y.Morishimaet al .Blood 2004 ,104 ,abstract 1862(ASH 2004)；T.Fukudaet al .Blood 2004 ,104 ,abstract 1852(ASH 2004)；T.Furugohriet al .Blood 2004 ,104 ,abstract 1851(ASH 2004)]、N －(5－氯吡啶－2－基)－N '－[(1S ,2R ,4S )－4－(二甲基胺甲醯基)－2－{[(5－甲基－4,5,6,7－四氫[1,3]噻唑并[5,4－c]吡啶－2－基)羰基]胺基}環己基]乙二醯胺[US 2005/0020645,WO 2005/47296] 揭示於US 2005/0020645之化合物、LY517717 ：N －{(1R )－2－[4－(1－甲基六氫吡啶－4－基)六氫吡－1－基]－2－酮基－1－苯基乙基}－1H －吲哚－6－甲醯胺[WO 2000/76971,WO 2002/100847] 813893 [Proteinase Inhibitor Design－Fourth SCI－RSC Symposium,Proteinase2004 ：Strategies for New Medicines(Part I),London]、6－氯－N －{(3S )－1－[(1S )－1－甲基－2－嗎福啉－4－基－2－酮基乙基]－2－酮基吡咯啶－3－基}萘－2－磺醯胺[N.S.Watsonet al .Bioorg .Med .Chem .Lett .2006 ,16 ,3784；WO 2002/100830；WO 2002/100886] KFA－1982(KFA－1829之前藥) [T.Koizumiet al .Journal of Thrombosis and Hemostasis 2003 ,1 Suppl 1,P2022]、EMD－503982 [Merck KGaA Annual Report 2006,48－49]、EMD－495235： 5－氯－N －[(1R )－1－(甲氧基甲基)－2－{[3－甲基－4－(3－酮基嗎福啉－4－基)－苯基]胺基}－2－酮基乙基]噻吩－2－甲醯胺[Bioorg .Med .Chem .Lett .2004 ,14 ,5817－5822] M－55113： 4－[(6－氯－2－萘基)磺醯基]－1－[(1－吡啶－4－基六氫吡啶－4－基)甲基]六氫吡－2－酮[H.Nishidaet al .Chem .Pharm .Bull .2001 ,49 ,1237－1244] M－55551/M－55555： (2R )－4－[(6－氯－2－萘基)磺醯基]－6－酮基－1－[(1－吡啶－4－基六氫吡啶－4－基)甲基]六氫吡－2－甲酸[H.Nishidaet al .Chem .Pharm .Bull .2002 ,50 ,1187－1194] M－55190： 乙基(2R )－4－[(6－氯－2－萘基)磺醯基]－6－酮基－1－[(1－吡啶－4－基六氫吡啶－4－基)甲基]六氫吡－2－甲酸酯[H.Nishidaet al .16th Int Symp Med Chem,Bologna,18－22 Sept2000, Abst PA－125] M－55532： 7－[(6－氯－2－萘基)磺醯基]－8a－(甲氧基甲基)－1'－吡啶－4－基四氫－5H －螺[1,3－唑并[3,2－a]吡－2,4'－六氫吡啶]－5－酮[H.Nishidaet al .228th ACS National Meeting,Philadelphia,August 22－26,2004 ,MEDI－251；H.Nishidaet al .Chem .Pharm .Bull .2004 ,52 ,406－412；dito 459－462] N －({7－[(5－氯－1H －吲哚－2－基)磺醯基]－5－酮基－1'－丙醯基四氫－8aH －螺[1,3－唑并[3,2－a]吡－2,4'－六氫吡啶]－8a－基}甲基)－N －甲基甘胺酸[WO 2006/106804] PRT54021 [U.Sinhaet al .Blood 2006 ,108 ,abstract 907(ASH 2006)；K.Abeet al .Blood 2006 ,108 ,abstract 901(ASH 2006)]、揭示於WO 2006/002099之化合物、otamixaban(FXV－673,RPR－130673)： (2R ,3R )－2－{3－[胺基(亞胺基)甲基]苯甲基}－3－{[4－(1－側氧基吡啶－4－基)苯甲醯基]胺基}丁酸甲酯[V.Chuet al .Thrombosis Research 2001 ,103 ,309－324；K.R.Guertinet al .Bioorg Med .Chem .Lett .2002 ,12 ,1671－1674] AVE3247 [Sanofi AventisCompany Presentation,Paris2007 ,February 13]、SAR377142(SSR－7142) [Sanofi AventisCompany Presentation,Paris2007 ,February 13]、HMR－2906 [XVIIth Congress of the International Society for Thrombosis and Haemostasis,Washington D.C.,USA,14－21 Aug1999 ；Generating greater value from our products and pipeline.Aventis SA Company Presentation,05 Feb2004 ]、idraparinux [Harry R.Blleret al .Bloo d,2006 ,108,abstract 571(ASH 2006)]及fondaparinux ；．抑制血小板凝聚之物質(血小板凝聚抑制劑，血栓細胞凝聚抑制劑)，舉例而言，例如，乙醯基水楊酸(例如阿斯匹靈)、塞氯匹定(ticlopidin)(ticlid)、氯吡格雷(clopidogrel)(plavix)及普拉格雷(prasugrel)；．血纖維蛋白酶原受體拮抗劑(醣蛋白－IIb/IIIa拮抗劑)，舉例而言，例如阿昔單抗(abciximab)、伊替巴泰(eptifibatide)、替羅非班(tirofiban)、拉米非班(Iamifiban)、來達非班(lefradafiban)及夫雷非班(fradafiban)；．以及抗心律不整劑。

本發明進一步關於藥劑，其包含至少一種根據本發明之化合物，通常加上一或多種惰性、無毒性、醫藥上合適之賦形劑；以及關於其用於上述目的之用途。

根據本發明之化合物可全身性及/或局部性地作用。為此目的，其等可以合適之方式，舉例而言，例如藉由經口、非經腸胃、經肺、鼻、舌下、舌、頰部、直腸、皮膚、經皮、結膜、耳朵途徑或以植入物或支架投與。

根據本發明之化合物可以合適用於此等投與途徑之投與形式投與。

合適用於經口投與者為根據先前技術作用及快速遞送根據本發明的化合物及/或呈改良樣式之投與形式，且其含有呈結晶及/或非晶型及/或溶解形式之根據本發明的化合物，舉例而言，例如錠劑(未塗覆或塗覆之錠劑，例如具有腸衣塗層或不溶或以延緩及控制釋放根據本發明化合物的方式溶解之塗層)、於口中快速崩解之錠劑、或薄膜/糯米紙、薄膜/凍乾物、膠囊(例如硬或軟明膠膠囊)、糖衣錠劑、粒劑、丸粒、粉劑、乳液、懸浮液、氣溶膠或溶液。

非經腸胃投與可以避免吸收步驟(例如靜脈內、動脈內、心臟內、脊椎內或腰髓內)或包含吸收(例如肌肉內、皮下、皮內、經皮膚或經腹膜內)而進行。合適用於非經腸胃投與之投與形式為，尤其是呈溶液、懸浮液、乳液、凍乾物或無菌粉劑形式用於注射與輸注用之製劑。

合適用於其他投與途徑者為，例如用於吸入(尤其是粉劑吸入器、噴霧器)之醫藥形式、鼻滴劑、溶液或噴霧液；用於經舌、舌下或頰部投與之錠劑、薄膜/糯米紙或膠囊、栓劑、用於耳部或眼部之製劑、陰道膠囊、水性懸浮液(洗劑、振盪混合物)、凍乾懸浮液、軟膏、乳霜、經皮治療系(例如貼片)、乳液、糊狀物、泡沫物、撒粉、植入物或支架。

經口或非經腸胃投與為較佳，特別是經口投與。

根據本發明之化合物可轉化為前述投與形式，此可以本身已知之方法藉由與惰性、無毒性、醫藥上合適之賦形劑混合而進行。這些賦形劑包括，尤其是載劑(例如微晶纖維素、乳糖、甘露糖醇)、溶劑(例如液體聚乙二醇類)、乳化劑與分散劑或潤濕劑(例如十二基硫酸鈉、聚氧山梨聚糖油酸酯)、黏合劑(例如聚乙烯基吡咯啶酮)、合成與天然聚合物(例如白蛋白)、安定劑(例如抗氧化劑，例如抗壞血酸)、顏料(例如無機色料，例如氧化鐵)及遮掩用調味料及/或香料。

一般已證明有利於投與之非經腸胃投與量為每公斤體重約０.001至5毫克、較佳為約0.01至1毫克，以達成有效結果，且在經口投與時，劑量為每公斤體重約0.01至100毫克、較佳為約0.01至20毫克、非常特佳為0.1至10毫克。

然而，適當時可能必須偏離上述量，特別是取決於體重、投與途徑、對活性成分之個別反應、製劑性質及進行投與的時間或間隔。因此，在一些情形下，少於前述最小量可為足夠，而於其他情形下，則必須超過所述量之上限。在投與較大量時，教這些分割成為一天多個各別劑量為適當。

下列例示之具體實例係說明本發明，本發明不受限於該等實例。

除非另外指明，否則下文試驗及實例中之百分比數據為重量百分比；份數為重量份。液體/液體溶液之溶劑比率、稀釋比率及濃度數據在各情形下係以體積為基礎。

A.實例

LC－MS及HPLC方法

方法１(HPLC)： 儀器：配有DAD檢測之HP 1100；管柱：Kromasil 100 RP－18，60毫米x 2.1毫米，3.5微米；移動相A：5毫升過氯酸(70%強度)/升水，移動相B：乙腈；梯度：0分鐘2% B，0.5分鐘2% B，4.5分鐘90% B，6.5分鐘90% B，6.7分鐘2% B，7.5分鐘2% B；流速：0.75毫升/分鐘；管柱溫度：30℃；檢測：UV 210毫微米。

方法2(HPLC )：儀器：配有DAD檢測之HP 1100；管柱：Kromasil 100 RP－18，60毫米x 2.1毫米，3.5微米；移動相A：5毫升過氯酸(70%強度)/升水，移動相B：乙腈；梯度：分鐘2% B，0.5分鐘2% B，4.5分鐘90% B，9分鐘90% B，9.2分鐘2% B，10分鐘2% B；流速：0.75毫升/分鐘；管柱溫度：30℃；檢測：UV 210毫微米。

方法3(LC－MS)： MS儀器類型：Micromass ZQ；HPLC儀器類型：Waters Alliance 2795；管柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro－RP Mercury 20毫米x 4毫米；移動相A：1公升水＋0.5毫升50%強度甲酸，移動相B：1公升乙腈＋0.5毫升50%強度甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→2.5分鐘30% A→3.0分鐘5% A→4.5分鐘5% A；流速：0.0分鐘1毫升/ 分鐘、2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2毫升/分鐘；烘箱：50℃；UV檢測：210毫微米。

方法4(LC－MS)： MS儀器類型：Micromass ZQ；HPLC儀器類型：HP 1100 Series；UV DAD；管柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro－RP Mercury 20毫米x 4毫米；移動相A：1公升水＋0.5毫升50%強度甲酸，移動相B：1公升乙腈＋0.5毫升50%強度甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→2.5分鐘30% A→3.0分鐘5% A→4.5分鐘5% A；流速：0.0分鐘1毫升/分鐘、2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2毫升/分鐘；烘箱：50℃；UV檢測：210毫微米。

方法5(LC－MS)： 配有HPLC Agilent系列1100之Micromass Quattro LCZ；管柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro－RP Mercury 20毫米x 4毫米；移動相A：1公升水＋0.5毫升50%強度甲酸，移動相B：1公升乙腈＋0.5毫升50%強度甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→2.5分鐘30% A→3.0分鐘5% A→4.5分鐘5% A；流速：0.0分鐘1毫升/分鐘、2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2毫升/分鐘；烘箱：50℃；UV檢測：208－400毫微米。

方法6(LC－MS)： MS儀器類型：Micromass ZQ；HPLC儀器類型：HP 1100 Series；UV DAD；管柱：Phenomenex Gemini 3μ 30毫米x 3.00毫米；移動相A：1公升水＋0.5毫升50%強度甲酸，移動相B：1公升乙腈＋0.5毫升50%強度甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→2.5分鐘30% A→3.0分鐘5% A→4.5分鐘5% A；流速：0.0分鐘1毫升/分鐘、2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2毫升/分鐘；烘箱：50℃；UV檢測：210毫微米。

方法7(LC－MS)： 儀器：配有HPLC Agilent 1100系列之Micromass Platform LCZ；管柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20毫米x 4毫米；移動相A：1公升水＋0.5毫升50%強度甲酸，移動相B：1公升乙腈＋0.5毫升50%強度甲酸；梯度：0.0分鐘100% A→0.2分鐘100% A→2.9分鐘30% A→3.1分鐘10% A→5.5分鐘10% A；烘箱：50℃；流速：0.8毫升/分鐘；UV檢測：210毫微米。

方法8(LC－MS)： MS儀器類型：Waters ZQ；HPLC儀器類型：Waters Alliance 2795；管柱：Phenomenex Onyx Monolithic C18，100毫米x 3毫米；移動相A：1公升水＋0.5毫升50%強度甲酸，移動相B：1公升乙腈＋0.5毫升50%強度甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→2分鐘65% A→4.5分鐘5% A→6分鐘5% A；流速：2毫升/分鐘；烘箱：40℃；UV檢測：210毫微米。

方法9(GC－MS) ：儀器：Micromass GCT，GC6890：管柱：Restek RTX－35MS，30米x 250微米x 0.25微米：固定氦氣流：0.88毫升/分鐘；烘箱：60℃；入口：250℃；梯度：60℃(維持0.30分鐘)，50℃/分鐘→120℃，16℃/分鐘→250℃，30℃/分鐘→300℃(維持1.7分鐘)。

方法10(GC－MS)： 儀器：Micromass GCT，GC6890；管柱：Restek RTX－35，15米x 200微米x 0.33微米；固定氦氣流：0.88毫升/分鐘；烘箱：70℃；入口：250℃；梯度：70℃，30℃/分鐘→310℃(維持3分鐘)。

起始化合物

實例1A 5－氯－N－[(2S)－環氧乙－2－基甲基]噻吩－2－甲醯胺

實例1A係如敘述於WO04/101557(實例6A)中之方式製備。

實例2A 3－(羥基甲基)吡啶－2(1H)－酮

在室溫(RT)下，將23.2公克(144毫莫耳)六甲基二矽烷及0.781公克(7.19毫莫耳)氯三甲基矽烷加入10.0公克(71.9毫莫耳)2－羥基菸鹼酸於100毫升甲苯之懸浮液中，且以KPG攪拌器使混合物在110℃下攪拌30分鐘。然後將混合物冷卻至－40℃，且將22.5公克(158毫莫耳)之二異丁基氫化鋁於二氯甲烷的1莫耳溶液逐滴加入該溶液中。將混合物融解至室溫、在室溫下攪拌18小時，且最終在－10℃下以稀釋之氫氯酸調整至pH＝4，並加入500毫升甲醇以使得溫度不超過－10℃。將形成之沉澱物濾出，將100毫升的水加入濾液中，使混合物在50℃下攪拌1小時且將沉澱物濾出。將濾液濃縮，得到8.55公克(95%理論值)之所欲化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：11.53(br.s,1H),7.40(d,1H),7.25(d,1H),6.19(dd,1H),5.00(t,1H),4.28(d,2H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝0.27分鐘。

MS(ESIpos,m /z )：148(M＋Na)^＋。

實例3A 3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)吡啶－2(1H)－酮

在室溫下，將0.65公克(9.59毫莫耳)咪唑、2.42公克(8.79毫莫耳)正丁基二苯基氯矽烷及0.10公克(0.80毫莫耳)DMAP加入於19毫升DMF之來自實例2A的1.00公克(7.99毫莫耳)化合物中，且使混合物攪拌18小時。然後加入180毫升水，並使混合物保持在0℃3小時。經過濾後，藉由層析法於矽膠(乙酸乙酯/乙基二甲基胺1000：1)上純化所得殘留物，此得到801毫克(27%理論值)之所欲化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：11.61(br.s,1H),7.69－7.52(m,5H),7.51－7.38(m,6H),7.30(d,1H), 6.29(dd,1H),4.51(s,2H),1.05(s,9H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝5.27分鐘。

MS(DCI,m /z )：364(M＋H)^＋。

實例4A 3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－1－(2－氯－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

在0℃下，將0.500公克(4.46毫莫耳)第三丁氧化鉀加入於21毫升DMF之來自實例3A的1.08公克(2.97毫莫耳)化合物中，且使混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入0.571公克(3.27毫莫耳)2－氯－1－氟－4－硝基苯，且將混合物在室溫下攪拌。經4.5小時後，加入200毫升水，且接著以乙酸乙酯萃取混合物三次。以水洗滌合併有機相且接著於硫酸鈉上乾燥。經過濾後，在減壓下除去溶劑。藉由層析法於矽膠上(環己烷/乙酸乙酯9：1)純化殘留物，此得到872毫克(56%理論值)之所欲化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.52(d,1H),8.32(dd,1H),7.85(d,1H),7.76(dd,1H),7.68－7.63(m,4H),7.59－7.55(m,1H),7.54－7.41(m,6H),6.54(dd,1H),4.56(br.s,2H),1.07(s,9H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝6.05分鐘。

MS(DCI,m /z )：519(M＋H)^＋。

實例5A 1－(4－胺基－2－氯苯基)－3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例4A之800毫克(1.54毫莫耳)化合物溶於48毫升THF中。然後加入50毫克(0.05毫莫耳)碳上鈀，且在室溫於氫氛圍及大氣壓力下使混合物氫化。接著將混合物過濾，以THF洗滌濾餅，且使濾液由溶劑中脫離。反應產物(純度：95%)係進一步反應而不經額外純化。

HPLC(方法1)：R_t ＝5.55分鐘。

MS(ESIpos,m /z )：489(M＋H)^＋。

實例6A N－{[(5S)－3－{4－[3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－氯－苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}－5－氯噻吩－2－甲醯胺

將來自實例1A之386毫克(1.77毫莫耳)化合物加入來自實例5A的789毫克(1.61毫莫耳)化合物於24毫升乙腈之溶液中。將540毫克(2.42毫莫耳)過氯酸鎂加入懸浮液中。經室溫下19小時後，加入來自實例1A之193毫克(0.952毫莫耳)化合物，且持續在室溫下攪拌額外30小時。然後加入523毫克(2.46毫莫耳)1,1’－羰基二咪唑及19毫克(0.09毫莫耳)DMAP，並於60℃下加熱混合物。在21小時後，以水、飽和氯化鈉水溶液及乙酸乙酯稀釋混合物。以乙酸乙酯萃取水相二次，且使合併有機相於硫酸鈉上乾燥。經過濾後，除去溶劑且藉由層析法於矽膠(環己烷/乙酸乙酯1：1)上純化殘留物，此得到533毫克(45%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.97(t,1H),7.85(dd,1H),7.73(dd,1H),7.70－7.63(m,5H),7.58(dd,1H),7.53－7.38(m,8H),7.19(d,1H),6.47(dd,1H),4.91－4.82(m,1H),4.55(br.s,2H),4.24(dd,1H),3.89(dd,1H),3.65－3.58(m,2H),1.07(s,9H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝6.07分鐘。

MS(ESIpos，m /z )：732(M＋H)^＋。

實例7A 3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－1－(2－甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H )－酮

類似於實例4A，將來自實例3A之1.50公克(4.13毫莫耳)化合物與704毫克(4.54毫莫耳)2－氟－5－硝基甲苯反應。此得到570毫克(28%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.29(d,1H),8.17(dd,1H),7.76(dd,1H),7.67－7.63(m,4H),7.57(d,1H),7.53(dd,1H),7.51－7.41(m,6H),6.52(t,1H),4.63－4.51(m,2H),2.12(s,3H),1.07(s,9H)。

HPLC(方法4)：R_t ＝3.39分鐘。

MS(ESIpos,m /z )：499(M＋H)^＋。

實例8A 1－(4－胺基－2－甲基苯基)－3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)吡啶－2(1H )－酮

將來自實例7A之555毫克(1.11毫莫耳)化合物溶於15毫升THF中，加入150毫克碳上鈀，且在氫氛圍、大氣壓力下使混合物氫化，直到理論量的氫氣已獲得。將催化劑濾出，在減壓下濃縮後得到520毫克(99%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：7.70－7.63(m,5H),7.51－7.41(m,6H),7.40－7.36(m,1H),6.78(d,1H),6.47－6.41(m,2H),6.38(t,1H),5.22(s,寬,2H),4.59－4.48(m,2H),1.81(s,3H),1.06(s,9H)。

HPLC(方法5)：R_t ＝3.20分鐘。

MS(ESIpos,m /z )：469(M＋H)^＋。

實例9A N －[((5S)－3－{4－[3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－2－酮基吡啶－1(2H )－基]－3－甲基－苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]－5－氯噻吩－2－甲醯胺

將來自實例8A之522毫克(1.11毫莫耳)化合物溶於10毫升乙腈中，且在0℃下加入來自實例1A之266毫克(1.22毫莫耳)化合物。加入373毫克(1.67毫莫耳)過氯酸鎂，且使混合物再室溫下攪拌20小時。然後加入271毫克(1.67毫莫耳)1,1’－羰基二咪唑及14毫克(0.11毫莫耳)DMAP，且使反應混合物在下加熱20小時。接著使混合物在減壓下濃縮，並加入水及第三丁基甲基醚。以乙酸乙酯萃取混合物二次，使合併有機相於硫酸鈉上乾燥及濃縮。藉由製備性HPLC純化殘留物，此得到562毫克(71%理論值)之所欲化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.97(t,1H),7.74－7.63(m,6H),7.58－7.41(m,9H),7.23(d,1H),7.19(d,1H),6.45(t,1H),4.89－4.80(m,1H),4.58－4.49(m,2H),4.21(t,1H),3.90－3.83(m,1H),3.63－3.58(m,2H),1.98(s,3H),1.07(s,9H)。

HPLC(方法4)：R_t ＝3.39分鐘。

MS(ESIpos,m /z )：712/714(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例10A 3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－1－(2－甲氧基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H )－酮

類似於實例4A，將來自實例3A之5.00公克(13.8毫莫耳)化合物與2.59公克(15.1毫莫耳)of 1－氟－2－甲氧基－4－硝基苯反應。藉由層析法於矽膠(移動相：戊烷/乙酸乙酯＝5：1)上純化產物，得到2.70公克(38%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：7.97(d,1H),7.92(dd,1H),7.74－7.70(m,1H),7.68－7.64(m,4H),7.61(d,1H),7.52－7.43(m,7H),6.46(t,1H),4.54(s,2H),3.88(s,3H),1.07(s,9H)。

HPLC(方法5)：R_t ＝3.32分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：515(M＋H)^＋。

實例11A 1－(4－胺基－2－甲氧基苯基)－3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)吡啶－2(1H )－酮

使來自實例10A之2.60公克(5.05毫莫耳)化合物以類似於實例8A之方式氫化。此得到2.40公克(95%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：7.70－7.61(m,5H),7.51－7.42(m,6H),7.34－7.31(m,1H),6.79(d,1H),6.35－6.29(m,2H),6.15(dd,1H),5.35(s,broad,2H),4.50(s,2H),3.60(s,3H),1.06(s,9H)。

HPLC(方法5)：R_t ＝3.13分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：485(M＋H)^＋。

實例12A N －[((5S )－3－{4－[3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－2－酮基吡啶－1(2H )－基]－3－甲氧基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]－5－氯噻吩－2－甲醯胺

類似於實例6A，將來自實例11A之2.30公克(4.75毫莫耳)化合物與來自實例1A之化合物反應。藉由層析法於矽膠(移動相：二氯甲烷/甲醇＝25：1)上純化產物，此得到3.10公克(88%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.98(t,1H),7.71－7.63(m,6H),7.52－7.38(m,8H),7.25(d,1H),7.20(d, 1H),7.10(dd,1H),6.40(t,1H),4.90－4.82(m,1H),4.52(s,2H),4.24(t,1H),3.89(dd,1H),3.71(s,3H),3.64－3.59(m,2H),1.07(s,9H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝3.17分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：728/730(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例13A 3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－1－[4－硝基－2－(三氟甲基)苯基]吡啶－2(1H )－酮

類似於實例4A，將來自實例3A之1.50公克(4.13毫莫耳)化合物與949毫克(4.54毫莫耳)1－氟－4－硝基－2－(三氟甲基)－苯反應。藉由層析法於矽膠(移動相：戊烷/乙酸乙酯＝5：1)上純化產物，此得到1.00公克(44%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.65(dd,1H),8.61(d,1H),7.92(d,1H),7.78－7.74(m,1H),7.67－7.63(m,4H),7.61－7.58(m,1H),7.62－7.41(m,6H),6.52(t,1H),4.58－4.50(m,2H),1.06(s,9H)。

HPLC(方法4)：R_t ＝3.40分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：553(M＋H)^＋。

實例14A 1－[4－胺基－2－(三氟甲基)苯基]－3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)吡啶－2(1H )－酮

將來自實例13A之1.00公克(1.81毫莫耳)化合物以類似於實例8A之方式氫化，此得到930毫克(98%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：7.70－7.62(m,5H),7.51－7.37(m,7H),7.04(d,1H),6.95(d,1H),6.82(dd,1H),6.37(t,1H),5.85(s,2H),4.51(s,2H),1.06(s,9H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝3.13分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：523(M＋H)^＋。

實例15A N －[((5S )－3－{4－[3－({[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}甲基)－2－酮基吡啶－1(2H )－基]－3－(三氟甲基)苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]－5－氯噻吩－2－甲醯胺

類似於實例6A，將來自實例14A之930毫克(1.78毫莫耳)化合物與來自實例1A之化合物反應。藉由製備性HPLC純化產物，此得到405毫克(28%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(4,00,MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.97(t,1H),8.11(dd,1H),7.82(dd,1H),7.75－7.71(m,1H),7.68(d,1H),7.67－7.63(m,4H),7.55(d,1H),7.53－7.41(m,7H),7.19(d,1H),6,.45(t,1H),4.93－4.85(m,1H),4.57－4.48(m,2H),4.29(dt,1H),3.98－3.92(m,1H),3.66－3.60(m,2H),1.06(s,9H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝3.25分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：766/768(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例16A 3－溴－1－(2－氯－4－硝基苯基)吡啶－2(1H )－酮

將2.00公克(11.5毫莫耳)3－溴吡啶－2(1H )－酮(O.S.Tee,M.Pavent,J.Am .Chem .Soc .1982 ,104 ,4142－4146)溶於40毫升DMF中。此混合物冷卻至0℃，且加入2.04公克 (17.2毫莫耳，95%強度)第三丁氧化鉀。在約15分鐘後，移除冰浴，且在額外30分鐘後，加入2.22公克(12.6毫莫耳)2－氯－1－氟－4－硝基苯。將混合物再室溫下攪拌4小時，然後將混合物加入水中且以乙酸乙酯萃取三次。將合併有機相與飽和氯化鈉溶液一起搖盪且於硫酸鈉上乾燥。在減壓下除去溶劑，且將殘留物懸浮於戊烷中且以抽吸濾出。使所得固體與環己烷/乙酸乙酯10：1共同煮沸。以抽吸濾出產物且以環己烷/乙酸乙酯10：1洗滌，此得到2.54公克(67%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400,MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.57(d,1H),8.37(dd,1H),8.11(dd,1H),7.94(d,1H),7.73(dd,1H),6.39(t,1H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝1.76分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：329/331(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例17A 1－(4－胺基－2－氯苯基)－3－溴吡啶－2(1H )－酮

將得自實例16A之2.00公克(6.07毫莫耳)化合物溶於80毫升甲醇中。加入6.83公克(30.3毫莫耳)氯化錫二水合物，且使混合物在回流下加熱2小時，然後使溶液濃縮。在於矽膠(移動相二氯甲烷：甲醇＝25：1)上管柱過濾後，將殘留物溶於乙酸乙酯中且與飽和碳酸氫鈉溶液一起搖盪。使有機相於硫酸鈉上乾燥且濃縮，此得到1.60毫克(87%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.00(dd,1H),7.56(dd,1H),7.08(d,1H),6.73(d,1H),6.58(dd,1H),6.22(t,1H),5.71(s,2H)。

HPLC(方法5)：R_t ＝1.69分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：299/301(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例18A N －({(5S)－3－[4－(3－溴－2－酮基吡啶－1(2H )－基)－3－氯苯基]－2－酮基－1,3－唑啶－5－基}甲基)－5－氯噻吩－2－甲醯胺

將來自實例17A之1.60公克(5.34毫莫耳)化合物最初在0℃下裝填於25毫升乙腈中，且加入來自實例1A之1.28公克(5.88毫莫耳)化合物。加入1.79公克(8.01毫莫耳)過氯酸鎂，且使混合物在室溫下攪拌20小時。然後加入來自實例1A之額外0.38公克(1.76毫莫耳)化合物及0.54公克(2.4毫莫耳)過氯酸鎂，並使混合物攪拌額外20小時。接著加入1.30公克(8.01毫莫耳)CDI及65毫克(0.53毫莫耳)DMAP。將混合物在60℃下加熱20小時，且接著於減壓下濃縮，並加入水及乙酸乙酯。除去有機相、於硫酸鈉上乾燥且濃縮。將產物由甲醇中再結晶，此得到1.32公克(45% 理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.97(t,1H),8.06(dd,1H),7.88(dd,1H),7.69(d,1H),7.66－7.56(m,3H),7.20(d,1H),6.31(t,1H),4.92－4.85(m,1H),4.25(t,1H),3.91(dd,1H),3.65－3.60(m,2H)。

HPLC(方法4)：R_t ＝2.37分鐘。

實例19A 3－烯丙基－1－(2－氯－4－硝基苯基)吡啶－2(1H )－酮

將來自實例16A之1.00公克(3.03毫莫耳)化合物、922毫克(6.07毫莫耳)氟化銫及124毫克(152毫莫耳)[1,1‘－雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀最初裝填於20毫升除氣的THF中。逐滴加入765毫克(4.55毫莫耳)之2－烯丙基－4,4,5,5－四甲基－1,3,2－二氧雜硼烷(dioxaborolane)，且使混合物在回流下加熱隔夜。加入飽和碳酸氫鈉溶液，且以乙酸乙酯萃取混合物三次。將合併有機相於硫酸鈉上乾燥且濃縮。藉由智被性HPLC純化產物，得到616毫克(70%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.54(d,1H),8.34(dd,1H),7.86(d,1H),7.50(dd,1H),7.42－7.39(m,1H),6.37(t,1H),6.01－5.90(m,1H),5.15－5.06(m,2H),3.20(d,2H)。

HPLC(方法5)：R_t ＝2.22分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：291/293(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例20A 3－烯丙基－1－(4－胺基－2－氯苯基)吡啶－2(1H )－酮

類似於實例17A，以氯化錫使來自實例19A之815毫克(2.80毫莫耳)化合物還原，此得到737毫克(99%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：7.34－7.27(m,2H),7.02(d,1H),6.72(d,1H),6.57(dd,1H),6.21(t,1H),6.00－5.89(m,1H),5.64(s,寬,2H),5.13－5.04(m,2H),3.16(d,2H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝1.70分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：261/263(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例21A N －({(5S )－3－[4－(3－烯丙基－2－酮基吡啶－1(2H )－基)－3－氯苯基]－2－酮基－1,3－唑啶－5－基}甲基)－5－氯噻吩－2－甲醯胺

類似於實例18A，將來自實例20A之735毫克(2.82毫莫耳)化合物與來自實例1A之產物反應。藉由自甲醇再結晶而純化產物，此得到826毫克(58%理論值)之所欲化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.98(t,1H),7.86(d,1H),7.69(d,1H),7.62－7.57(m,1H),7.51(d,1H),7.43－7.39(m,1H),7.37－7.34(m,1H),7.20(d,1H),6.30(t,1H),6.01－5.90(m,1H),5.14－5.07(m,2H),4.92－4.85(m,1H),4.25(t,1H),3.90(dd,1H),3.65－3.60(m,2H),3.19(d,2H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝2.22分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：504/506/508(³⁵ Cl₂ /³⁵ Cl³⁷ Cl/³⁷ Cl₂ )(M＋H)^＋。

實例22A 3－溴－1－(2－甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

將44.5公克(280毫莫耳)3－溴吡啶－2(1H)－酮溶於750毫升無水二甲亞碸中，且在室溫下每次加少量之33.4公克(298毫莫耳)第三丁氧化鉀。將懸浮液在此溫度下攪拌1小時，然後加入38.5公克(280毫莫耳)1－氟－2－甲基－4－硝基苯，並將反應溶液在80℃下加熱20小時。使此溶液冷卻且以水小心稀釋。將所得結晶沉澱物濾出、以少許水洗滌且在減壓下乾燥。此得到62公克(80%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.34(d,1H),8.21(dd,1H),8.10(dd,1H),7.71－7.63(m,2H),6.36(t,1H),2.17(s,3H)。

LC－MS(方法3)：R_t ＝1.72分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝309(M＋H)^＋。

實例23A 1－(2－甲基－4－硝基苯基)－3－乙烯基吡啶－2(1H)－酮

將來自實例22A之50公克(162毫莫耳)化合物溶於700毫升無水二烷中，加入62公克(194毫莫耳)三丁基乙烯基錫及4.7公克(4毫莫耳)四(三苯基膦)鈀，且將混合物在回流下加熱15小時。使混合物冷卻且通過矽藻土(kieseiguhr)過濾。以乙酸乙酯洗滌濾餅，且使合併濾液在減壓下蒸發至乾燥。將殘留物施用至矽膠上且使用環己烷及乙酸乙酯之梯度於800公克矽膠上層析，此得到27公克(62%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.35(d,1H),8.2(dd,1H),7.75(dd,1H),7.60(d,1H),7.55(dd,1H),6.75(dd,1H),6.45(t,1H),6.15(dd,1H),5.3(dd,1H),2.17(s,3H)。

LC－MS(方法4)：R_t ＝1.86分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝257(M＋H)^＋。

實例24A 3－(2－羥基乙基)－1－(2－甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

在冰冷卻下，於45分鐘內將40公克(326毫莫耳)9－硼二環[3.3.1]壬烷於650毫升四氫呋喃之溶液加入來自實例23A之38公克(148毫莫耳)化合物中。將混合物在此溫度下攪拌額外一小時，且接著在15分鐘時間內加入30公克(747毫莫耳)氫氧化鈉於740毫升水之溶液。加入151毫升30%強度之過氧化氫，以使溫度不超過30℃。在添加已結束後，移除冷卻且持續攪拌額外30分鐘。以乙酸乙酯重複萃取混合物，以780公克(1.63莫耳)亞硫酸氫鈉溶液洗滌合併之有機相，將有機相濾出，且再以乙酸乙酯萃取水相。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相，使其於硫酸鎂上乾燥且在減壓下蒸發至乾燥。將殘留物施用至矽膠上且使用環己烷及乙酸乙酯之梯度進行層析。將含產物之部分合併且在減壓下濃縮至乾，得到38公克(93%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.33(d,1H),8.18(d,1H),7.57(d,1H),7.48－7.40(m,2H),6.33(t,1H),4.58(t,1H),3.62－3.50(m,2H),2.62(t,2H),2.15(s,3H)。

LC－MS(方法6)：R_t ＝1.57分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝275(M＋H)^＋。

實例25A 3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－1－(2－甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例24A之38公克(138毫莫耳)化合物溶於200毫升無水N,N－二甲基甲醯胺，且12.2公克(198毫莫耳)咪唑及46公克(135毫莫耳)第三丁基(氯)二苯基矽烷係在0℃下每次少量加入。使混合物攪拌隔夜且接著以水稀釋，並以乙酸乙酯萃取三次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併有機相二次、於硫酸鎂上乾燥、過濾且在硫酸鎂上乾燥、過濾且在減壓下蒸發。將殘留物施用至矽膠上且使用環己烷及乙酸乙酯之梯度進行層析。將含產物之部分合併且在減壓下蒸發至乾，此得到62公克(88%理論值)之所欲產物。

LC－MS(方法5)：R_t ＝3.18分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝483(M＋H)^＋。

實例26A 1－(4－胺基－2－甲基苯基)－3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例25A之62公克(121毫莫耳)化合物溶於2公升乙醇與乙酸乙酯之1：1混合物中，且加入46公克(726毫莫耳)甲酸銨及0.6公克碳上鈀。使混合物在80℃下加熱，經45分鐘後，使混合物冷卻至且通過矽膠過濾。以乙酸乙酯洗滌濾餅，且將濾液在減壓下蒸發至乾，此得到36公克(61%理論值)之所欲產物。

LC－MS(方法7)：R_t ＝1.84分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝221(M＋H)^＋。

實例27A N－[((5S)－3－{4－[3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲基－苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]－5－氯噻吩－2－甲醯胺

將來自實例26A之35.6公克(74.1毫莫耳)化合物溶於800毫升無水乙腈中，且在0℃下加入來自實例1A之19公克(89毫莫耳)化合物。加入25公克(110毫莫耳)過氯酸鎂，移除冷卻，且使混合物在室溫下攪拌15小時。加入24毫克(148毫莫耳)1,1－羰基二咪唑及180毫克(1.4毫莫耳)N,N－二甲基胺基吡啶，且將混合物在回流下加熱2小時。使混合物冷卻且使溶劑在減壓下蒸餾出。然後將殘留物置於乙酸乙酯中且以水洗滌，並飽和氯化鈉溶液洗滌三次。在于硫酸鎂上乾燥後，將混合物過濾且在減壓下蒸發至乾。將殘留物施用至矽膠上且使用環己烷及乙酸乙酯之梯度進行層析。將含產物之部分合併且在減壓下蒸發至乾，此得到46.4公克(84%理論值)之所欲產物。

LC－MS(方法5)：R_t ＝3.31分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝700(M＋H)^＋。

實例28A 3－溴－1－(2－甲氧基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

將70公克(403毫莫耳)3－溴吡啶－2(1H)－酮溶於1公升無水二甲亞碸中，且在室溫下加入54公克(484毫莫耳)第三丁氧化鉀。使懸浮液在此溫度下攪拌1小時，加入69公克(403毫莫耳)1－氟－2－甲氧基－4－硝基苯，且將反應溶液在 80℃下加熱20小時。以5公升水小心地稀釋混合物，將沉澱的固體濾出、以水洗滌且在減壓下乾燥，此得到103公克(72%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.05(dd,1H),8.1(d,1H),7.95(dd,1H),7.7(d,1H),7.6(dd,1H),6.3(t,1H),3.9(s,3H)。

MS(ESIpos)：m/z＝342(M＋NH₄ )^＋。

實例29A 1－(2－甲氧基－4－硝基苯基)－3－乙烯基吡啶－2(1H)－酮

將來自實例28A之100公克(308毫莫耳)化合物溶於1.4公升無水二烷中，且加入8.9公克(7.7毫莫耳)四(三苯基膦)鈀及117公克(370毫莫耳)三丁基乙烯基錫。將混合物在回流下加熱16小時，然後使反應溶液冷卻且通過矽藻土過濾，使濾液在減壓下濃縮至乾。將殘留物於矽膠上使用環己烷及乙酸乙酯之梯度層析，將含產物之部分合併且在減壓下濃縮至乾。加入石油醚直到結晶化產生為止，將結晶濾出且在減壓下乾燥，此得到37公克(41%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.0(m,2H),7.7(m,2H),7.5(dd,1H),6.7(q,1H),6.4(t,1H),6.1(dd, 1H),5.3(dd,1H),3.9(s,3H)。

MS(ESIpos)：m/z＝273(M＋H)^＋。

實例30A 3－(2－羥基乙基)－1－(2－甲氧基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

在0℃下於45分鐘內將36公克(299毫莫耳)9－硼二環[3.3.1]壬烷於600毫升四氫呋喃之溶液加入來自實例29A之37公克(136毫莫耳)化合物中。在此溫度額外1小時候，在15分鐘期間加入27公克(680毫莫耳)氫氧化鈉(於水中1N)溶液。將混合物另外攪拌5分鐘，且接著加入125毫升30%強度的過氧化氫，以使得溫度不超過30℃。移除冷卻，且使混合物額外攪拌30分鐘。以乙酸乙酯重複萃取混合物，以730公克(1.50莫耳)硫酸氫鈉溶液洗滌合併之有機相，分離出有機相且以乙酸乙酯再萃取水相。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相、於硫酸鎂上乾燥且在減壓下蒸發至乾。使殘留物吸附於矽膠上且使用環己烷及乙酸乙酯之梯度層析。將產物部分合併且在減壓下蒸發至乾。用於結晶化，加入第三丁基甲醚。將結晶濾出且在減壓下乾燥，得到24公克(60%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.0(d,1H), 7.95(dd,1H),7.6(d,1H),7.4(d,1H),6.35(t,1H),4.6(t,1H),3.9(s,3H),3.55(m,2H),2.6(m,2H)。

MS(ESIpos)：m/z＝291(M＋H)^＋。

實例31A 3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－1－(2－甲氧基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例30A之24公克(81毫莫耳)化合物溶於200毫升無水N,N－二甲基甲醯胺，且加入7.2公克(106毫莫耳)咪唑及27公克(98毫莫耳)第三丁基(氯)二苯基矽烷。在16小時候，以1.2公升水稀釋混合物且以乙酸乙酯萃取三次。以水洗滌合併之有機相二次、於硫酸鎂上乾燥、過濾且在減壓下濃縮。用於結晶化，加入第三丁基甲醚，且將所得結晶濾出，並在減壓下乾燥，此得到30公克(67%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.0(d,1H),7.95(dd,1H),7.6－7.5(m,5H),7.5－7.4(m,8H),6.35(t,1H),3.8(m,5H),2.7(m,2H),1.0(s,9H)。

實例32A 1－(4－胺基－2－甲氧基苯基)－3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例31A之25公克(48毫莫耳)化合物溶於800毫升乙醇與乙酸乙酯之1：1混合物中，且加入18公克(286毫莫耳)甲酸銨及800毫克碳上鈀。使混合物在80℃下加熱，經60分鐘後，使混合物冷卻且通過矽膠過濾。以乙酸乙酯洗滌濾餅，且將濾液在減壓下濃縮至乾，此得到27公克(98%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝7.6(m,4H),7.4(m,6H),7.3(dd,1H),7.25(dd,1H),6.75(d,1H),6.3(d,1H),6.2(dd,1H),6.1(t,1H),5.3(b,2H),3.8(m,2H),3.6(s,3H),2.7(m,2H),1.0(s,9H)。

MS(ESIpos)：m/z＝499(M＋H)^＋。

實例33A N－{[(5S)－3－{4－[3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲氧基－苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}－5－氯噻吩－2－甲醯胺

將來自實例32A之29公克(58毫莫耳)化合物溶於600毫升無水乙腈中，且在0℃下加入來自實例1A之15公克(69毫莫耳)。加入19公克(87毫莫耳)過氯酸鎂，移除冷卻且使混合物在室溫下攪拌15小時。然後加入19.0公克(116毫莫耳)1,1－羰基二咪唑及141毫克(1.21毫莫耳)N,N－二甲基胺基吡啶，且將混合物在回流下加熱。在2小時後，使混合物冷卻，且在減壓下蒸發出溶劑。將此殘留物置於乙酸乙酯中，且以水洗滌及以飽和氯化鈉溶液洗滌三次。在於硫酸鎂上乾燥後，將混合物過濾且在減壓下蒸發至乾。使殘留物於矽膠上使用環己烷及乙酸乙酯之梯度進行層析。將含產物之部分合併且在減壓下濃縮至乾，此得到37公克(85%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ ＝9.0(t,1H),7.7(d,1H),7.6(m,4H),7.5－7.3(m,9H),7.2(m,2H),7.1(m,1H),6.2(t,1H),4.8(m,1H),4.4(t,1H),3.9(m,1H),3.8(b,2H),3.7(s,3H),3.65(m,2H),2.7(m,2H),1.0(s,9H)。

LC－MS(方法8)：Rt＝4.53分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝742(M＋H)^＋。

實例34A 2－(溴甲基)－1－氟－4－硝基苯

將186公克(1.20莫耳)2－氟－5－硝基苯溶於1.2公升四氯化碳中，且加入214公克(1.20莫耳)N－溴琥珀醯亞胺。加入19.7公克(120毫莫耳)氮雜二異丁基腈，且在回流下加熱混合物。在16小時後，使混合物冷卻、過濾且在減壓下蒸發至乾。將殘留物溶於300毫升二氯甲烷中，且加入300公克海鹽。然後將混合物再一次在減壓下濃縮至乾，並將殘留物施用於1公克矽膠管柱上。使用環己烷及乙酸乙酯20：1混合物使產物進行層析，且在減壓下將產物部分蒸發至乾。以環己烷將殘留物結晶且在減壓下乾燥，此得到92公克(32%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm )：δ ＝8.57－8.52(m,1H),8.33－8.27(m,1H),7.56(T,1H),4.62(s,2H)。

GC－MS(方法9)：R_t ＝7.79分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝154(M－Br)^＋。

實例35A 1－氟－2－(甲氧基甲基)－4－硝基苯

將來自實例34A之30公克(128毫莫耳)化合物溶於1.3公升無水甲苯中，且加入45公克(192毫莫耳)氧化銀(I)及24.6公克(769毫莫耳)無水甲醇。將混合物在60℃下加熱16小時，然後使混合物冷卻且通過矽膠過濾。產物係使用環己烷/乙酸乙酯25：1之梯度分部份洗提出。將產物部分在減壓下蒸發至乾且在減壓下乾燥，此得到17公克(72%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHZ,DMSO－d₆ ,δ/ppm)：δ＝8.41－8.36(m,1H),8.22－8.16(m,1H),7.26(t,1H),4.58(s,2H),3.49(s,3H)。

GC－MS(方法9)：R_t ＝6.52分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝154(M－OCH₃ )^＋。

實例36A 3－溴－1－[2－(甲氧基甲基)－4－硝基苯基]吡啶－2(1H)－酮

將38公克(391毫莫耳)3－溴－2－羥基吡啶溶於1250毫升無水二甲亞碸，且每次加入少量之53公克(469毫莫耳)第三丁氧化鉀。將混合物攪拌額外1小時，然後加入來自實例35A之72.4公克(391毫莫耳)化合物。在添加已結束後，將混合物在80℃下加熱3小時。然後使混合物冷卻，且在室溫下持續攪拌額外16小時。接著使反應溶液冷卻至15℃，且在此溫度下以1N氫氯酸調整pH值至pH＝3。加入4公升水，且以2公升乙酸乙酯萃取混合物三次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相，且在硫酸鎂上乾燥。然後將溶液在減壓下蒸發至乾，且加入第三丁基甲醚用於結晶化。將結晶濾出且在減壓下乾燥，此得到94公克(71%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.37(d,1H),8.33(dd,1H),8.10(dd,1H),7.73－7.67(m,2H),6.35(t,1H),4.3(q,2H),3.3(s,3H)。

LC－MS(方法6)：R_t ＝1.88分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝339(M＋H^＋ )^＋。

實例37A 1－[2－(甲氧基甲基)－4－硝基苯基]－3－乙烯基吡啶－2(1H)－酮

將來自實例36A之94公克(277毫莫耳)化合物溶於1.2公升無水二烷中，且加入8公克(6.9毫莫耳)四(三苯基膦)鈀(0)。在室溫下，緩慢加入105公克(333毫莫耳)三丁基乙烯基錫，且在添加已結束後，使混合物在回流下加熱21小時。將反應溶液冷卻且通過矽藻土過濾。以乙酸乙酯洗滌濾餅，且將合併之有機相在減壓下濃縮至乾。將剩餘的殘留物溶於二氯甲烷中，且施用至矽藻土。使用環己烷及乙酸乙酯之梯度將產物於1.2公克矽膠上進行層析。將含產物之部分合併且在減壓下濃縮至乾，此得到23公克(29%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.36(d,1H),8.31(dd,1H),7.77(dd,1H),7.67(d,1H),7.56(dd,1H),6.80－6.71(m,1H),6.45(t,1H),6.14(dd,1H),5.33(dd,1H),4.37－4.22(m,2H),3.26(s,3H)。

LC－MS(方法6)：R_t ＝2.07分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝387(M＋H^＋ )^＋。

實例38A 3－(2－羥基乙基)－1－[2－(甲氧基甲基)－4－硝基苯基]吡啶－2(1H)－酮

將來自實例37A之23公克(80毫莫耳)化合物溶於80毫升無水四氫呋喃中且冷卻至5℃。在15分鐘時間內，加入21公克(176毫莫耳)9－硼二環[3.3.1]壬烷(於四氫呋喃中0.5M溶液)。移除冷卻且使混合物在室溫下攪拌額外2小時。然後將混合物再度冷卻至5℃，並加入400毫升1N氫氧化鈉水溶液。在添加已結束後，在此溫度下每次少量加入81毫升30%強度的過氧化氫。在以500毫升乙酸乙酯稀釋後，以32毫升40%強度的硫酸氫鈉溶液洗滌混合物以破壞過氧化物。將有機相分離，且以乙酸乙酯萃取水相四次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相，於硫酸鎂上乾燥，且在過濾後，於減壓下濃縮至乾。使用環己烷及乙酸乙酯之梯度將殘留物於矽膠上進行層析，合併含產物之部分且在減壓下濃縮至乾，此得到20公克(77%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.36(d,1H),8.30(dd,1H),7.62(d,1H),7.45(d,1H),6.33(t,1H),4.60(t,1H),4.35－4.20(m,2H),3.62－3.55(m,2H),3.32(s,3H),2.62(t,2H)。

LC－MS(方法8)：R_t ＝1.60分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝305(M＋H^＋ )^＋。

實例39A 3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－1－[2－(甲氧基甲基)－4－硝基苯基]吡啶－2(1H)－酮

將來自實例38A之20公克(65毫莫耳)化合物溶於75毫升無水N,N－二甲基甲醯胺中，且在冰冷卻下首先加入5.3公克(78毫莫耳)咪唑、及接著3分鐘內每次加入少量之19公克(72毫莫耳)第三丁基二苯基氯矽烷。移除冷卻，且在室溫下攪拌混合物額外19小時。以乙酸乙酯稀釋反應溶液，且以水洗滌三次及以飽和氯化鈉溶液洗滌二次。然後將混合物於硫酸鎂上乾燥、過濾且在減壓下濃縮至乾。將第三丁基甲醚加入殘留物中，且將所得結晶濾出並於減壓下乾燥，此得到39公克(90%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.35(d,1H),8.31(dd,1H),7.65－7.35(m,13H),6.35(t,1H),4.32－4.14(m,2H),3.92－3.80(m,2H),3.32(s,3H),2.78－2.71(m,2H),0.97(s,9H)。

LC－MS(方法8)：R_t ＝4.59分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝543(M＋H^＋ )^＋。

實例40A 1－[4－胺基－2－(甲氧基甲基)苯基]－3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例39A之25公克(48毫莫耳)化合物溶於500毫升乙酸乙酯及500毫升乙醇中。加入18公克(286毫莫耳)甲酸銨及1公克碳上鈀，且使混合物在回流下加熱45分鐘。然後將反應溶液冷卻且通過矽膠過濾。將濾液在減壓下濃縮至乾，此得到25公克(100%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝7.65－7.20(m,12H),6.79(d,1H),6.68(d,1H),6.54(dd,1H),6.20(t,1H),5.46－5.25(m,2H),4.04－3.91(m,2H),3.87－3.77(m,2H),3.07(s,3H),2.75－2.68(m,2H),0.95(s,9H)。

LC－MS(方法6)：R_t ＝3.22分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝513(M＋H^＋ )^＋。

實例41A N－{[(5S)－3－{4－[3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－(甲氧基－甲基)苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}－5－氯噻吩－2－甲醯胺

將來自實例40A之25公克(47毫莫耳)化合物溶於500毫升無水乙腈鐘，且加入來自實例1A之15公克(61毫莫耳)化合物及16公克(71毫莫耳)過氯酸鎂。將混合物在室溫下攪拌5小時，且另外加入來自實例1A之1公克(4.1毫莫耳)化合物。在21小時候，加入15.3公克(95毫莫耳)羰基二咪唑及116毫克(0.65毫莫耳)4－二甲基胺基吡啶，且將混合物在回流下加熱3.5小時。然後在減壓下廚去溶劑，且將殘留物置於800毫升乙酸乙酯中。以水洗滌溶液且以飽和氯化鈉溶液洗滌二次，使其於硫酸鎂上乾燥，且接著在減壓下濃縮。使用環己烷及乙酸乙酯之梯度將殘留物於矽膠上分離。將含有產物之部分合併且在減壓下濃縮至乾，此得到26.5公克(72%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝9.00(t,1H),7.73－7.35(m,15H),7.23(d,1H),7.19(d,1H),6.28(t,1H),4.90－4.81(m,1H),4.28－3.80(m,6H),3.62(t,2H),3.11(s,3H),2.79－2.71(m,2H),0.97(s,9H)。

LC－MS(方法6)：R_t ＝3.39分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝756(M＋H^＋ )^＋。

實例42A (2－氟－5－硝基苯甲基)(三苯基)溴化鏻

將來自實例34A之20公克(85.5毫莫耳)化合物溶於250毫升無水甲苯中，且加入22.4公克(85.5毫莫耳)三苯基膦。將溶液在回流下加熱16小時，造成沉澱物之形成。使混合物冷卻，且將沉澱物濾出。在以二乙醚洗滌後，將沉澱物在減壓下乾燥，此得到39公克(92%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.30－8.23(m,1H),7.98－7.88(m,4H),7.81－7.70(m,12H),7.45(t,1H),5.32(d,2H)。

實例43A 1－氟－4－硝基－2－[丙－1－烯－1－基]苯

在10℃下，逐滴將5.99公克(32.7毫莫耳)雙(三甲基矽烷基)醯胺鈉加入來自實例42A之13.5公克(27.3毫莫耳)化合物於145毫升二烷之溶液中。將混合物在此溫度下攪拌1小時，然後加入2.40公克(54.5毫莫耳)乙醛於5毫升二烷之溶液，且使反應在室溫下攪拌1小時。接著加入400毫升水，以二氯甲烷萃取混合物三次，且以飽和氯化鈉水溶液洗滌合併之有機相二次。在於硫酸鈉上乾燥及後續過濾後，在減壓下除去溶劑。藉由於矽膠(移動相：環己烷/乙酸乙酯＝40：1)上層析而純化產物，此得到呈E/Z異構物混合物之5.2公克(100%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.47－8.05(m,2H),7.58－7.42(m,1H),6.70－6.05(m,2H),1.90－1.78(m,3H)。

GC－MS(方法10)：R_t ＝2.64及2.70分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝181(M＋H^＋ )^＋。

實例44A 3－溴－1－{4－硝基－2－[(1E)－丙－1－烯－1－基]苯基}吡啶－2(1H)－酮

將0.96公克(5.52毫莫耳)3－溴吡啶－2(1H )－酮溶於17毫升DMSO中。使混合物冷卻至0℃，且加入1.00公克(5.52 毫莫耳)第三丁氧化鉀，以使得內部溫度不超過30℃。在室溫下1小時後，加入來自實例43A之1.00公克(5.52毫莫耳)化合物於5毫升DMSO之溶液。在80℃下3小時後，加入200毫升水及50毫升氯化鈉溶液，且乙酸乙酯萃取混合物三次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相且在硫酸鈉上乾燥。在減壓下除去溶劑，且藉由於矽膠(移動相：環己烷/乙酸乙酯＝4：1)上層析而純化產物，此得到呈E/Z異構物混合物之935毫克(49%理論值)之所欲化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.52－8.27(m,1H),8.22－8.16(m,1H),8.13－8.04(m,1H),7.76－7.61(m,2H),6.65－5.90(m,3H),1.83－1.69(m,3H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝4.20分鐘。

MS(DCI,m/z )：335(M＋H)^＋。

實例45A 1－{4－硝基－2－[(1E)－丙－1－烯－1－基]苯基}－3－乙烯基吡啶－2(1H)－酮

將來自實例44A之929毫克(2.77毫莫耳)化合物溶於14毫升無水二烷中，且加入64毫克(0.06毫莫耳)四(三苯基膦)鈀(0)。在室溫下，緩慢加入1.06公克(3.33毫莫耳)三丁基乙烯基錫，且在添加已結束後，將混合物在回流下加熱 21小時。使反應溶液冷卻且通過矽藻土過濾。然後以乙酸乙酯洗滌濾餅，且使合併之有機濾液在減壓下濃縮至乾。藉由於矽膠上(移動相：環己烷/乙酸乙酯＝4：1)層析純化產物，此得到568毫克(70%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ ppm)：8.52－8.24(m,1H),8.21－8.14(m,1H),7.78－7.58(m,2H),6.79－6.68(m,1H),6.65－6.52(m,1H),6.47－6.38(m,1H),6.20－5.90(m,3H),5.39－5.28(m,1H),1.83－1.70(m,3H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝4.33分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝283(M＋H^＋ )^＋。

實例46A 3－(2－羥基乙基)－1－{4－硝基－2－[(1E)－丙－1－烯－1－基]苯基}吡啶－2(1H)－酮

將來自實例45A之452公克(1.60毫莫耳)化合物溶於1.7毫升無水四氫呋喃且冷卻至0℃。緩慢加入488毫克(176毫莫耳)9－硼二環[3.3.1]壬烷(於四氫呋喃中0.5 M溶液)，且使混合物在室溫下攪拌2小時。然後使混合物再度冷卻至0℃，且緩慢加入8毫升1N氫氧化鈉水溶液。在添加已結束後，在此溫度下逐滴加入1.6毫升30%強度之過氧化氫溶液。將混合物在0℃下攪拌30分鐘且接著以1.3毫升 40%強度之亞硫酸氫鈉洗滌，以破壞過氧化物，並以500毫升乙酸乙酯稀釋。除去有機相且以乙酸乙酯萃取水相二次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相，使其硫酸鈉上乾燥，且在過濾後，在減壓下濃縮至乾。藉由於矽膠(移動相：環己烷/乙酸乙酯＝2：1)上層析而純化產物，此得到514毫克(100%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.51－8.24(m,1H),8.22－8.14(m,1H),7.68－7.55(m,1H),7.48－7.36(m,2H),6.61－6.50(m,1H),6.37－6.26(m,1H),6.09－6.86(m,1H),4.63－4.56(m,1H),3.63－3.54(m,2H),2.65－2.56(m,2H),1.83－1.69(m,3H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝3.71分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝301(M＋H^＋ )^＋。

實例47A 1－(4－胺基－2－丙基苯基)－3－(2－羥基乙基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例46A之520毫克(1.73毫莫耳)化合物溶於10毫升THF中。加入30毫克碳上鈀，且使混合物在室溫於氫氣氛圍及大氣壓力下氫化。然後將混合物通過矽藻土過濾，以THF洗滌濾餅三次，且使濾液中除去溶劑。將反應產物進一步反應而不經額外純化，此得到471毫克(89%理論值)之所欲產物。

HPLC(方法1)：R_t ＝3.00分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝273(M＋H^＋ )^＋。

實例48A 3－烯丙基－1－(2－甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

在一個已經加熱乾燥之燒瓶中，將來自實例22A之1.50公克(4.85毫莫耳)化合物、1.44公克(9.46毫莫耳)氟化銫及0.561公克(0.48毫莫耳)四(三苯基膦)鈀(0)最初充填於30毫升除氣之THF中。逐滴加入2.04公克(12.1毫莫耳)of 2－烯丙基－4,4,5,5－四甲基－1,3,2－二氧雜硼烷於5毫升除氣THF之溶液，且將混合物在回流下加熱隔夜。然後以二氯甲烷稀釋混合物，且加入水。在相分離後，以二氯甲烷萃取水相三次。使合併之有機相於硫酸鈉上乾燥且濃縮。藉由於矽膠上層析而純化產物，得到1.18公克(62%理論值)之標題化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.31(d,1H),8.18(dd,1H),7.57(d,1H),7.46(dd,1H),7.44－7.38(m,1H),6.35(t,1H),5.96(dddd,1H),5.16－5.06(m,2H),3.20(d,2H),2.15(s,3H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝4.05分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：271(M＋H)^＋。

實例49A 3－(3－羥基丙基)－1－(2－甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

在0℃下，將18.5毫升(9.25毫莫耳)9－硼二環[3.3.1]壬烷於THF之0.5莫耳溶液逐滴緩慢加入於4毫升THF之來自實例48A的1.00公克(3.70毫莫耳)化合物中。在室溫下1小時後，使混合物再度冷卻至0℃，且逐滴加入18.5毫升(18.5毫莫耳)氫氧化鈉於水之1莫耳溶液。將混合物在0℃下攪拌額外30分鐘，且接著加入3.24毫升30%強度之過氧化氫溶液，以使得溫度不超過30℃。將混合物在冰冷卻下攪拌30分鐘，且然後加入乙酸乙酯及接著11公克(40毫莫耳)亞硫酸氫鈉。將有機相分開，且以乙酸乙酯萃取水相。以飽和氯化鈉水溶液洗滌合併之有機相，將有機相於硫酸鈉上乾燥，且接著在減壓下蒸發至乾。使殘留物於矽膠(環己烷/乙酸乙酯1：4)上層析，此得到1.03公克(83%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.31(d,1H),8.18(dd,1H),7.66－7.51(m,1H),7.47－7.38(m,2H),6.33(t,1H),4.46(t,1H),3.46－3.38(q,2H),2.52－2.45(m,2H),2.15(s,3H),1.73－1.62(m,2H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝3.51分鐘。

MS(DCI,m/z)＝289(M＋H)^＋。

實例50A 1－(4－胺基－2－甲基苯基)－3－(3－羥基丙基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例49A之475毫克(1.65毫莫耳)化合物溶於48毫升THF中。然後加入50毫克(0.05毫莫耳)碳上鈀，且在室溫於氫氣氛圍及大氣壓力下使混合物氫化。接著將混合物過濾，以THF洗滌濾餅三次，且使濾液中不含溶劑。將反應產物反應而不經額外純化。

HPLC(方法1)：R_t ＝2.82分鐘。

MS(DCI,m/z )：259(M＋H)^＋。

實例51A 3－溴－1－(2,6－二甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

將2.81公克(16.1毫莫耳)of 3－溴吡啶－2(1H )－酮(O.S.Tee,M.Pavent,J .Am .Chem .Soc .1982 ,104 ,4142－4146.)溶於100毫升DMF中。使混合物冷卻至0℃，且加入2.71公克(24.2毫莫耳)第三丁氧化鉀。移除冰浴，且使混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入3.00公克(17.7毫莫耳)1－氟－2,5－二甲基－4－硝基苯，且將混合物在80℃下攪拌18小時、在100℃下36小時且在120℃下18小時。然後將混合物加入水中並以乙酸乙酯萃取三次。使合併之有機相於硫酸鈉上乾燥，藉由於矽膠(環己烷/乙酸乙酯4：1)上層析而純化殘留物，此得到2.04公克(38%理論值)之所欲化合物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.19(s,2H),8.14(dd,1H),7.62(dd,1H),6.43(t,1H),2.11(s,6H).

HPLC(方法1)：R_t ＝4.13分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：323(M＋H)^＋。

實例52A 1－(2,6－二甲基－4－硝基苯基)－3－乙烯基吡啶－2(1H)－酮

將來自實例51A之2.00公克(6.19毫莫耳)化合物溶於31毫升無水二烷中，且加入2.36公克(7.42毫莫耳)三丁基乙烯基錫及143毫克(0.124毫莫耳)四(三苯基膦)鈀，並使混合物在100℃下攪拌5小時。使混合物冷卻且通過矽藻土過濾，以乙酸乙酯洗滌濾餅三次，且將合併之濾液在減壓下濃縮至乾。藉由於矽膠(環己烷/乙酸乙酯4：1)上層析而純化殘留物，此得到846毫克(51%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.17(s,2H), 7.78(dd,1H),7.48(dd,1H),6.75(dd,1H),6.48(dd,1H),6.14(dd,1H),5.33(dd,1H),2.10(s,6H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝4.25分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝271(M＋H)^＋。

實例53A 1－(2,6－二甲基－4－硝基苯基)－3－(2－羥基乙基)吡啶－2(1H)－酮

在冰冷卻下，將902毫克(7.40毫莫耳)9－硼二環[3.3.1]壬烷於14.8毫升四氫呋喃之溶液加入來自實例52A之800毫克(2.96毫莫耳)化合物。將混合物在室溫下攪拌3小時且接著冷卻至0℃，並在15分鐘期間內加入591毫克(14.8毫莫耳)氫氧化鈉溶液。加入2.60毫升30%強度之過氧化氫溶液，以使得溫度不超過30℃。在添加已結束後，將混合物在0℃下攪拌30分鐘。在冰冷卻下，將8.73公克(32.6莫耳)亞硫酸氫鈉於12毫升水之溶液加入反應混合物中。以50毫升乙酸乙酯稀釋混合物，將有機相除去，且以乙酸乙酯萃取水相二次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相、於硫酸鈉上乾燥且在減壓下蒸發至乾。藉由於矽膠(環己烷/乙酸乙酯1：2)上層析而純化殘留物，此得到765毫克(89%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.15(s,2H),7.46(dd,1H),7.35(dd,1H),6.37(dd,1H),4.62(dd,1H),4.25(d,1H),2.62(dd,2H),2.08(s,6H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝3.59分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝289(M＋H)^＋。

實例54A 3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－1－(2,6－二甲基－4－硝基苯基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例53A之760毫克(2.64毫莫耳)化合物及0.55毫升(3.9毫莫耳)三乙胺溶於7毫升無水N,N－二甲基甲醯胺中。加入16毫克(0.13毫莫耳)4－二甲基胺基吡啶及1.09公克(3.95毫莫耳)第三丁基(氯)二苯基矽烷，且使混合物在室溫下攪拌2小時。然後將混合物加入水中，且在相分離後，以乙酸乙酯萃取三次。以水洗滌合併之有機相、於硫酸鈉上乾燥、過濾且在減壓下蒸發。藉由於矽膠(環己烷/乙酸乙酯5：1)上層析而純化殘留物，此得到971毫克(58%理論值)之所欲產物。

HPLC(方法2)：R_t ＝5.97分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝527(M＋H)^＋。

實例55A 1－(4－胺基－2,6－二甲基苯基)－3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)吡啶－2(1H)－酮

將來自實例54A之970毫克(1.84毫莫耳)化合物溶於20毫升THF中。然後加入200毫克碳上鈀，且在氫氣氛圍及大氣壓力下使混合物氫化。接著使混合物通過矽藻土過濾，以THF洗滌濾餅三次且使濾液不含溶劑。將反應產物(1.00公克)進一步反應而不經額外純化。

HPLC(方法2)：R_t ＝4.99分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝497(M＋H)^＋。

實例56A N－[((5S)－3－{4－[3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3,5－二甲基－苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]－5－氯噻吩－2－甲醯胺

將來自實例55A之800毫克(1.61毫莫耳)化合物溶於15毫升無水乙腈中，且加入來自實例1A之385公克(1.77毫莫耳)化合物及539毫克(2.41毫莫耳)過氯酸鎂。使混合物在室溫下攪拌5.5小時，然後加入652毫克(4.03毫莫耳)1,1－羰基二咪唑及19毫克(0.16毫莫耳)N,N－二甲基胺基吡啶，且將混合物在回流下加熱18小時。使混合物冷卻且加入100毫升水及100毫升乙酸乙酯中。在相分離後，以乙酸乙酯萃取水相二次且使合併之有機相於硫酸鈉上乾燥。在過濾後，使混合物在減壓下蒸發至乾。藉由於矽膠(環己烷/乙酸乙酯1：2)上層析而純化殘留物，此得到664毫克(55%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.99(t,1H),7.70(d,1H),7.63－7.45(m,4H),7.48－7.31(m,9H),7.28(dd,1H),7.20(d,1H),6.32(t,1H),4.90－4.81(m,1H),4.22(dd,1H),3.89－3.82(m,3H),3.62(t,2H),2.76(dd,2H),1.94(s,6H),0.95(s,9H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝5.92分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝740(M＋H)^＋。

實施例

實例1 5－氯－N－{[(5S)－3－{3－氯－4－[3－(羥基甲基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}噻吩－2－甲醯胺

將367毫克(1.41毫莫耳，於THF中1莫耳濃度)四丁基氟化銨加入來自實例6A的515毫克(0.703毫莫耳)化合物於8毫升THF之溶液中。在室溫下3小時後，以水、飽和氯化鈉水溶液及乙酸乙酯稀釋混合物，以乙酸乙酯萃取水相，且將合併之有機相於硫酸鈉上乾燥。經過濾後，使混合物不含溶劑，且藉由於矽膠(二氯甲烷/甲醇20：1)上層析而純化殘留物，此得到278毫克(78%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.97(t,1H),7.87(dd,1H),7.69(d,1H),7.59(ddd,1H),7.56－7.48(m,2H),7.46－7.38(m,1H),7.20(d,1H),6.37(dd,1H),5.15(dd,1H),4.93－4.82(m,1H),4.33(br.d,2H),4.24(dd,1H),3.90(dd,1H),3.62(dd,2H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝3.88分鐘。

MS(DCI,m/z )：494(M＋H)^＋。

實例2 5－氯－N －[((5S )－3－{4－[3－(羥基甲基)－2－酮基吡啶－1(2H )－基]－3－甲基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺

將來自實例9A之530毫克(0.74毫莫耳)化合物溶於9毫升THF中。加入1.5毫升四丁基氟化銨於THF之1M溶液，且使混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入少量水，使混合物濃縮且藉由製備性HPLC純化產物，此得到335毫克(93%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：9.00(t,1H),7.70(d,1H),7.55－7.49(m,3H),7.39(d,1H),7.23(d,1H),7.20(d,1H),6.36(t,1H),5.14(s,寬,1H),4.90－4.82(m,1H),4.38－4.29(m,2H),4.22(t,1H),3.91－3.85(m,1H),3.62(t,2H),2.01(s,3H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝1.66分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：474/476(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例3 5－氯－N －[((5S )－3－{4－[3－(羥基甲基)－2－酮基吡啶－1(2H )－基]－3－甲氧基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺

類似於實例2，以於THF之四丁基氟化銨使來自實例12A之491毫克(0.67毫莫耳)化合物去矽烷基化。藉由製備性HPLC純化產物，此得到287毫克(87%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：9.02(t,1H),7.71(d,1H),7.50－7.46(m,1H),7.45(d,1H),7.34(dd,1H),7.26(d,1H),7.20(d,1H),7.12(dd,1H),6.29(t,1H),5.11(s,寬,1H),4.91－4.83(m,1H),4.30(s,寬,2H),4.25(t,1H),3.91(dd,1H),3.73(s,3H),3.65－3.60(m,2H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝1.63分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：490/492(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例4 5－氯－N －({(5S )－3－[4－[3－(羥基甲基)－2－酮基吡啶－1(2H )－基]－3－(三氟甲基)苯基]－2－酮基－1,3－唑啶－5－基}甲基)噻吩－2－甲醯胺

類似於實例2，以以於THF之四丁基氟化銨使來自實例 15A之370毫克(0.48毫莫耳)化合物去矽烷基化。藉由製備性HPLC純化產物，此得到200毫克(78%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.99(t,1H),8.13(d,1H),7.83(dt,1H),7.69(d,1H),7.56(d,1H),7.53(dd,1H),7.47－7.42(m,1H),7.20(d,1H),6.35(t,1H),5.17(t,1H),4.94－4.86(m,1H),4.33－4.27(m,3H),3.99－3.93(m,1H),3.67－3.61(m,2H)。

HPLC(方法3)：R_t ＝1.82分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：528/530(³⁵ Cl/³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例5 5－氯－N －[((5S )－3－{3－氯－4－[3－(2－羥基乙基)－2－酮基吡啶－1(2H )－基]苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺

將來自實例21A之400毫克(0.79毫莫耳)化合物溶於6毫升THF及4毫升水之混合物中。加入161毫克(0.016毫莫耳)四氧化鋨於第三丁醇之2.5 M溶液及509毫克(2.38毫莫耳)高碘酸鈉，且使混合物在室溫下攪拌20小時。然後以水稀釋混合物且以二氯甲烷萃取，使其乾燥且濃縮。將殘留物溶於4毫升THF與4毫升水之混合物中，且加入30.0毫克(0.79毫莫耳)硼氫化鈉。將混合物在室溫下攪拌1小時，且接著以水稀釋並以二氯甲烷萃取。使有機相乾燥、濃縮且藉由製備性HPLC純化，此得到47毫克(12%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d ₆ ,δ/ppm )：8.97(t,1H),7.85(d,1H),7.69(d,1H),7.62－7.56(m,1H),7.51－7.47(m,1H),7.42－7.36(m,2H),7.20(d,1H),6.27(t,1H),4.92－4.84(m,1H),4.59(t,1H),4.24(t,1H),3.90(dd,1H),3.65－3.55(m,4H),3.18－3.15(m,2H)。

HPLC(方法5)：R_t ＝1.94分鐘。

MS(ESIpos,m/z )：508/510(³⁵ Cl₂ /³⁵ Cl³⁷ Cl)(M＋H)^＋。

實例6 5－氯－N－[((5S)－3－{4－[3－(2－羥基乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺

在冰冷卻下，將於甲醇之400毫升1.25N氫氯酸加入來自實例27A之43.8公克(60.3毫莫耳)化合物中。在1小時後，以二氯甲烷稀釋混合物，且接著移除水相。以水洗滌有機相二次、於硫酸鈉上乾燥，且在過濾後，使其在減壓下濃縮至乾。將殘留物施用於矽膠上且使用環己烷及乙酸乙酯之梯度層析。將含產物之部分合併且在減壓下濃縮至乾，此得到19.6公克(66%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.98(t,1H),7.70(d,1H),7.55－7.47(m,2H),7.40(dd,1H),7.35(dd,1H),7.25－7.17(m,2H),6.26(t,1H),4.90－4.82(m,1H),4.60(t,1H),4.22(t,1H),3.92－3.84(m,1H),3.66－3.54(m,4H),2.60(t,2H),2.01(s,3H)。

LC－MS(方法5)：R_t ＝1.87分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝488(M＋H)^＋。

實例7 5－氯－N－{[(5S)－3－{4－[3－(2－羥基乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲氧基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}噻吩－2－甲醯胺

在0℃下，將來自實例33A之37公克(49毫莫耳)化合物溶於甲醇中之313毫升1.25N氫氯酸中。經1小時後，再減壓下蒸發溶液且以二氯甲烷稀釋。以水洗滌有機相二次、於硫酸鎂上乾燥，且在過濾後，使其於減壓下蒸發至乾。使用環己烷及乙酸乙酯之梯度將殘留物於矽膠上層析。將含產物之部分合併且在減壓下蒸發至乾，此得到19公克(78%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝9.00(t,1H),7.70(d,1H),7.45(d,1H),7.35(dd,1H),7.31(dd,1H),7.25(d,1H),7.20(d,1H),7.15－7.08(m,1H),6.19(t,1H),4.91－4.83(m,1H),4.60(t,1H),4.25(t,1H),3.94－3.87(m,1H),3.74(s,3H),3.66－3.53(m,4H),2.62－2.55(m,2H)。

MS(ESIpos)：m/z＝504(M＋H)^＋。

實例8 N－{[(5S)－3－{4－[3－(2－{[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基}乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－(甲氧基甲基)苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}－5－氯噻吩－2－甲醯胺

在冰冷卻下，將於甲醇之135毫升1.25N氫氯酸加入來自實例41A之27公克(34毫莫耳)化合物中。將混合物在此溫度下攪拌額外45分鐘。在冰冷卻下，使用1N氫氧化鈉水溶液調整pH值至7，且以二氯甲烷重複萃取冷溶液。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相，且於硫酸鎂上乾燥。使混合物在減壓下蒸發至乾，且使用二氯甲烷及甲醇之梯度使殘留物於矽膠上層析。合併含產物之部分且在減壓下濃縮至乾，此得到16.4公克(89%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.98(t,1H), 7.72－7.66(m,2H),7.62－7.56(m,1H),7.40(dd,1H),7.36(dd,1H),7.27(d,1H),7.20(d,1H),6.25(t,1H),4.90－4.82(m,1H),4.60(t,1H),4.27－4.08(m,3H),3.94－3.87(m,1H),3.65－3.55(m,4H),3.18(s,3H),2.60(t,2H)。

LC－MS(方法6)：R_t ＝1.96分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝518(M＋H^＋ )^＋。

實例9 5－氯－N－{[(5S)－3－{4－[3－(2－羥基乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－丙基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}噻吩－2－甲醯胺

將來自實例47A之450毫克(1.65毫莫耳)化合物溶於10毫升無水乙腈中，且加入來自實例1A之395毫克(1.82毫莫耳)化合物及552毫克(2.47毫莫耳)過氯酸鎂。將混合物在室溫下攪拌3.5小時，然後加入669毫克(4.13毫莫耳)羰基二咪唑及20毫克(0.16毫莫耳)4－二甲基胺基吡啶，且使混合物在回流下加熱3小時。在室溫下18小時後，加入10毫克(0.08毫莫耳)4－二甲基胺基吡啶，且使混合物在60℃下攪拌6小時。然後將混合物加入100毫升水中，且以50毫升乙酸乙酯稀釋。在相分離後，以50毫升乙酸乙酯萃取水相二次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相，使其於硫酸鈉上乾燥且接著在減壓下濃縮至乾。藉由使用乙腈/水混合物之製備性HPLC純化殘留物，此得到28毫克(3%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.98(t,1H),7.70(d,1H),7.54－7.45(m,2H),7.40－7.31(m,2H),7.23－7.17(m,2H),6.25(t,1H),4.90－4.81(m,1H),4.22(dd,1H),3.92－3.85(m,1H),3.65－3.50(m,4H),2.62－2.58(m,2H),2.28(t,2H),1.50－1.32(m,2H),0.77(t,3H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝4.11分鐘。

MS(DCI,m/z)＝516(M＋H)^＋。

實例10 5－氯－N－{[(5S)－3－{4－[3－(3－羥基丙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3－甲基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基]甲基}噻吩－2－甲醯胺

將來自實例50A之580毫克(2.24毫莫耳)化合物溶於12.7毫升無水乙腈中，且加入來自實例1A之538毫克(2.47毫莫耳)化合物及751毫克(3.37毫莫耳)過氯酸鎂。將混合物在室溫下攪拌3.5小時，然後加入437毫克(2.69毫莫耳)羰基二咪唑及27毫克(0.23毫莫耳)4－二甲基胺基吡啶，並使混合物在回流下加熱18小時。接著將混合物加入100毫升水且以50毫升乙酸乙酯萃取三次。以飽和氯化鈉溶液洗滌合併之有機相，於硫酸鈉上乾燥且接著在減壓下濃縮。藉由製備性HPLC純化殘留物，此得到175毫克(16%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ /ppm)：δ ＝8.99(t,1H),7.70(d,1H),7.57－7.47(m,2H),7.40－7.31(m,2H),7.23(d,1H),7.20(d,1H),6.26(t,1H),4.90－4.81(m,1H),4.46(dd,1H),4.22(t,1H),3.91－3.85(m,1H),3.62(t,2H),3.42(ddd,2H),3.31(s,1H),2.48－2.42(m,1H),2.01(s,3H),1.67(ddd,2H)。

HPLC(方法2)：R_t ＝3.92分鐘。

MS(DCI,m/z)＝502(M＋H)^＋。

實例11 5－氯－N－[((5S)－3－{4－[3－(2－羥基乙基)－2－酮基吡啶－1(2H)－基]－3,5－二甲基苯基}－2－酮基－1,3－唑啶－5－基)甲基]噻吩－2－甲醯胺

將來自實例56A之660毫克(0.891毫莫耳)化合物溶於20毫升THF中，且加入512毫克(1.96毫莫耳)四丁基氟化銨。在1小時後，將混合物在減壓下濃縮至乾。藉由於矽膠(二氯甲烷/甲醇10：1；1%三乙胺)上層析純化殘留物，此得到396毫克(85%理論值)之所欲產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ ,δ/ppm )：δ ＝8.98(t,1H),7.69(d,1H),7.42(dd,1H),7.38(d,1H),7.25(dd,1H),7.19(d,1H),6.29(t,1H),4.90－4.81(m,1H),4.60(t,1H),4.20(t,1H),3.86(dd,1H),3.64－3.52(m,4H),2.62(t,2H),1.95(s,6H)。

HPLC(方法1)：R_t ＝3.92分鐘。

MS(ESIpos)：m/z＝502(M＋H)^＋。

B.藥理活性之評估

根據本發明的化合物用於治療血栓栓塞性疾病之合適性可使用下述分析系統證實：

a)試驗說明(試管內)

a.1) 緩衝液中因子Xa 抑制作用之測量為測定上述所列物質之因子Xa抑制作用，一生物試驗系統被建構，其中因子Xa基質之轉化反應係用於測定人類因子Xa之酵素活性。在此，因子Xa會自胜肽基質裂解胺基甲基香豆素(coumarin)，其係測量螢光而得。測定係在微量滴定盤中進行。

將被測試之物質以不同濃度溶於二甲亞碸中，且與人類因子Xa(1.3毫微莫耳/公升，溶於50毫莫耳/公升Tris緩衝液[C,C,C－參(羥基甲基)胺基甲烷]、100毫莫耳/公升氯化鈉、5毫莫耳/公升氯化鈣、0.1% BSA[牛血清白蛋白]，pH 7.4)在22℃下一起培育30分鐘。然後加入基質(得自Bachem之5微莫耳/公升Boc－Ile－Glu－Gly－Arg－AMC)，經培育30分鐘後，使樣本於360 nm波長下被激發且在460 nm下測量發光。比較含測試物質的測試批次與不含測試物質(僅有二甲亞碸，而無於二甲亞碸中之測試物質)的對照組批次之發光測量值，且由濃度/活性關係計算IC₅₀ 值。

a.2)緩衝液中凝血酶抑制作用之測量 為測定上述所列物質之凝血酶抑制作用，一生物試驗系統被建構，其中凝血酶基質之轉化反應係用於測定人類凝血酶之酵素活性。在此，凝血酶會自胜肽基質裂解胺基甲基香豆素，其係測量螢光而得。測定係在微量滴定盤中進行。

將被測試之物質以不同濃度溶於二甲亞碸中，且與人類凝血酶(0.06毫微莫耳/公升，溶於50毫莫耳/公升Tris緩衝液[C,C,C－參(羥基甲基)胺基甲烷]、100毫莫耳/公升氯化鈉、0.1% BSA[牛血清白蛋白]，pH 7.4)在22℃下一起培育30分鐘。然後加入基質(得自Bachem之5微莫耳/公升Boc－Asp(OBzl)－Pro－Arg－AMC)，經培育30分鐘後，使樣本於360 nm波長下被激發且在460 nm下測量發光。比較含測試物質的測試批次與不含測試物質(僅有二甲亞碸，而無於二甲亞碸中之測試物質)的對照組批次之發光測量值，且由濃度/活性關係計算IC₅₀ 值。

a.3)選擇性之測定 為測定物質相對於凝血酶及因子Xa抑制作用之選擇性，檢測測試物質對其他人類絲胺酸蛋白酶之抑制作用，例如因子XIIa、因子XIa、胰蛋白酶及纖維蛋白溶酶(plasmin)。為測定因子XIIa(10毫微莫耳/公升，得自Kordia)、因子XIa(0.4毫微莫耳/公升，得自Kordia)、胰蛋白酶(83 mU/毫升，得自Sigma)及纖維蛋白溶酶(0.1微克/毫升，得自Kordia)之酵素活性，這些酵素被溶於50毫莫耳/公升Tris緩衝液[C,C,C－參(羥基甲基)胺基甲烷]、100毫莫耳/公升氯化鈉、0.1% BSA[牛血清白蛋白]、5毫莫耳/公升氯化鈣，pH 7.4)中，且與以不同濃度溶於二甲亞碸中之測試物質、且亦與不含測試物質之二甲亞碸一起培育15分鐘。然後，以添加適當基質(用於因子XIIa之得自Bachem的5微莫耳/公升H－Pro－Phe－Arg－AMC、用於胰蛋白酶之得自Bachem的5微莫耳/公升Boc－Ile－Glu－Gly－Arg－AMC、用於因子XIa之得自Bachem的5微莫耳/公升Boc－Glu(OBzl)－Ala－Arg－AMC、用於纖維蛋白溶酶之得自的50微莫耳/公升MeOSuc－Ala－Phe－Lys－AMC)起始酵素反應。在22℃下培育30分鐘後，測量螢光(激發：360 nm，發光：460 nm)。比較含測試物質之測試批次與不含測試物質(僅有二甲亞碸，而無於二甲亞碸中之測試物質)的對照組批次之發光測量值，且由濃度/活性關係計算IC₅₀ 值。

a.4)血漿樣本中潛在抑制劑的因子Xa－抑制活性之測定 為測定血漿樣本中因子Xa抑制作用，血漿中存在之因子X係被來自響尾蛇毒素之蛋白酶所活化。然後藉由添加顯色基質而測量因子Xa活性或其受到潛在抑制劑之抑制作用。

將被測試之不同濃度的物質溶於二甲亞碸中，且與重組水蛭素(refludan)水溶液(10微克/毫升)混合。在具有平底的清晰96－孔平板中，將30微升檸檬酸鹽血漿(Octapharma)與10微升物質稀釋液混合。然後，加入於氯化鈣水溶液緩衝液(氯化鈣最終濃度0.05 M)之20微升響尾蛇毒素溶液(魯氏蝰蛇毒(RVV)；RVV試劑：Pentapharm 121－06，最終濃度0.6 mU)或不含RVV試劑之20微升氯化鈣水溶液(氯化鈣之最終濃度0.05 M)(作為未經刺激樣本之參考物)。在添加20微升Chromozym X基質(最終濃度1.6毫莫耳/公升，Bachem L－1565，稀釋於水中)後，在20分鐘時間內每分鐘使用405 nm測量濾鏡於SpectraFluor Reader中測量樣本。當達到70%最大訊號時(約12分鐘)時，測定IC₅₀ 值。

來自此試驗之代表性活性數據係列於下述表1中：

a.5)血漿樣本中潛在抑制劑的凝血酶抑制活性之測定 將不同濃度之被測試物質溶於二甲亞碸中且以水稀釋。在具有平底之白色96孔平板中，將20微升之物質稀釋液與於Ca緩衝液(200 mM Hepes＋560 mM氯化鈉＋10 mM氯化鈣＋0.4% PEG)之20微升蝰蛇毒酶(ecarin)溶液(蝰蛇毒酶試劑，得自Sigma E－0504，每批次最終濃度20 mU)或與20微升Ca緩衝液(作為未經刺激之對照組)混合。此外，加入20微升螢光凝血素基質(得自Bachem I－1120，最終濃度50微莫耳/公升)及20微升檸檬酸鹽血漿(來自Octapharma)，且充分均質化。在20分鐘時間內每分鐘使用360 nm激發濾鏡及465 nm發光濾鏡於SpectraFluorplus Reader中測量平板。當達到70%最大訊號時(約12分鐘)時，測定IC₅₀ 值。

來自此試驗之代表性活性數據係列於下述表2中：

a.6)凝血酶產生分析(凝血酶產生曲線(thrombogram)) 測試物質對凝血酶產生曲線(根據Hemker之凝血酶產生分析)之效應係於試管內人類血漿(得自Octapharma之Octaplas)中測定。在根據Hemker之凝血酶產生分析中，在凝結血漿上凝血酶之活性係藉由測量基質I－1140(Z－Gly－Gly－Arg－AMC，Bachem)之螢光裂解產物而測定。得自Thrombinoscope之試劑(PPP試劑：30 pM重組組織因子，於HEPES之24 μM磷脂質)係用於起始凝結反應，該反應係在不同濃度之測試物質或對應溶劑之存在下進行。此外，使用得自Thrombinoscope之凝血酶校正劑，其醯胺水解活性為校正血漿樣本中凝血酶活性所必須。

此試驗係根據製造商(Thrombinoscope BV)之說明進行：4微升測試物質或溶劑、76微升血漿及20微升PPP試劑或凝血酶校正劑係在37℃下培育5分鐘。在添加20微升於20 mM Hepes、60微克/毫升BSA、102 mM氯化鈣之2.5 mM凝血酶基質後，在120分鐘時間內每20秒測量凝血酶之產生。使用得自Thermo Electron之配有390/460毫微米濾鏡對及分配器的螢光計(Fluoroskan Ascent)進行測量。使用Thrombinoscope軟體計算凝血酶產生曲線且以圖形呈現。下述參數被計算：延遲時間、到達尖峰時間、尖峰、ETP(內源凝血酶潛力)及起始尾部(start tail)。

a.7)抗凝血活性之測定 測試物質之抗凝血活性係在活體外於人類血漿、兔子血漿及大鼠血漿中測定。為此目的，使用0.11莫耳濃度檸檬酸鈉溶液作為接受劑使血液以檸檬酸鈉/血液1/9之混合比例取出。在血液已取出後，立即將其徹底混合且以約4000 g離心15分鐘，將上清液吸量管取出。

凝血酶原(prothrombin)時間 (PT，同義字：凝血活酶 (thromboplastin)時間，快速試驗)係在不同濃度的測試物質或對應溶劑之存在下使用商業試驗套組(得自Instrumentation Laboratory之Neoplastinfrom Boehringer Mannheim or HemolianceRecombiPlastin)而測定。將測試化合物與血漿在37℃下培育3分鐘，然後藉由添加凝血活酶起始凝血作用，且測定當凝血發生時之時間。測定測試物質造成凝血酶原時間雙倍之濃度。

凝血酶時間 (TT)係在不同濃度的測試物質或對應溶劑之存在下使用商業試驗套組(得自Roche之凝血酶試劑)而測定。將測試化合物與血漿在37℃下培育3分鐘，然後藉由添加凝血酶試劑起始凝血作用，且測定當凝血發生時之時間。測定測試物質造成凝血酶時間雙倍之濃度。

經活化的部分凝血活酶時間 (APTT)係在測試物質或對應溶劑之存在下使用商業試驗套組(得自Roche之PTT試劑)而測定。將測試化合物與血漿及PTT試劑(腦磷脂(cephalin)，高嶺土)在37℃下培育3分鐘，然後藉由添加25 mM氯化鈣起始凝血作用，且測定當凝血發生時之時間。測定測試物質造成APTT雙倍之濃度。

a.8)血栓彈性描記法(Thromboelastography)(血栓彈性描記圖(thromboelastogram)) 血栓彈性描記法係在得自Pentapharm之血栓彈性描記圖及其附屬物、杯及栓的輔助下進行。測量係在預先取出至得自Sarstedt的檸檬酸鈉採血管(monovettes)之全血中進行。使用搖盪器使採血管中之血液保持於運動中且在 37℃下預培育30分鐘。製備氯化鈉之2莫耳濃度貯存溶液，以0.9%強度的氯化鈉水溶液將其進行1：10稀釋。在測量上，將20微升之此200 mM氯化鈉溶液充滿於杯中(氯化鈉最中濃度為12.5 mM)。添加3.2微升之物質或溶劑，藉由添加300為升全血起始測量。在添加之後，使用移液器吸頭，將混合物快速地吸入移液器中且再度釋放而不產生氣泡。測量係在2.5小時期間內進行或當纖維蛋白溶解開始時停止。在評估上，測定下列參數：CT(凝血時間/[秒])、CFT(凝血形成時間/[秒])、MCF(最大血塊堅固度/[毫米]及α角度[°]。測量點係每3秒測定且以圖形代表，期已MCF[毫米]作為y軸且時間[秒]作為x軸。

a.9)血栓－結合的凝血因子凝血酶及因子Xa之抑制 血液凝塊形成係在以抗凝血劑治療開始之前、在治療中斷期間或非含有可有利於血栓形成進展之大量凝血因子的治療。這些凝血因子可堅固地結合至血栓且不可洗掉。在特定臨床情況下，此可導致病患之風險。在下述進行試驗中，具有生物(procoagulatory)活性之凝血酶及因子Xa可於人類血栓中証實。

活體外血栓形成血栓係在活體外由人類血漿中形成且被檢驗結合凝血因子及因子Xa之活性。為此目的，將300微升血漿與30微升脂質媒劑及30微升氯化鈉水溶液於48－孔MTP平板中混合且培育30分鐘。此及後續步驟係在37℃下且以恆定攪動(300 rpm)進行。將形成之血栓轉移至新的48－孔MTP平板中，且在10分鐘時間內以0.9%強度之氯化鈉溶液洗滌二次，在洗滌步驟期間血栓被輕拍於濾紙上。將血栓轉移至緩衝液B(Owens Veronal緩衝液，1% BSA)中，且培育15分鐘、輕拍於濾紙上且於緩衝液B內不同濃度的測試物質中培育30分鐘。然後如上所述洗滌血塊二次，將血塊輕拍且轉移至緩衝液D(240微升Owren’s Veronal Buffer、1% BSA及15.6 mM氯化鈣)中，且與或不與0.6 μM凝血酶原一起培育45分鐘。藉由添加75微升之1%EDTA溶液中止反應，凝血酶活性係各別於緩衝液A(7.5 mM Na₂ EDTAx2H₂ O，175 mM氯化鈉，1% BSA，pH 8.4)之血栓中或於得自前一步驟的上清液中測量。為此目的，基質I－1120係以50 μM最終濃度使用，且所得螢光係於螢光平板測讀儀(360/465nm)中測量。

此結合血栓之凝血酶的活性不可受到呈治療相關濃度之選擇性因子Xa抑制劑所抑制。相反地，其可以雙重因子IIa/因子Xa抑制劑或因子IIa參考抑制劑所抑制。

在添加凝血酶原後，若結合血栓之因子Xa存在(凝血酶原複合物)時，新的凝血酶形成，其由螢光受質所偵測。此凝血酶之更新形成不可受到純凝血酶抑制劑所防止；然而，其可受到雙重因子IIa/因子Xa抑制劑或受到選擇性因子Xa參考抑制劑所抑制。

結合血栓的凝血酶之生物活性係藉由添加螢光標記的血纖維蛋白原所測試，其經由具活性的凝血酶而轉換成為血纖維蛋白且結合至血栓。為此目的，血栓係如上所述形成且於250微升之以Alexa488標記的血纖維蛋白原溶液(100微克T/毫升)及30微升100 mM氯化鈣水溶液(含或不含不同濃度之測試物質)中培育。上清液之螢光係於螢光平板測讀儀中以合適波長測量。此外，在各情況下15分鐘洗滌血栓四次且藉由螢光顯微鏡評估。來自上清液之螢光減少及血栓之螢光增加可受到雙重因子IIa/因子Xa抑制劑所抑制，但不受到因子Xa參考抑制劑所抑制。

活體內形成之心腔內血栓(病患材料) 實驗係以心臟手術期間取自病患右心室的血栓重複進行。為此目的，將血栓融解且分成數塊(濕重10－100毫克)。視程序而定，血栓係在重複洗滌或未經洗滌後使用，且血栓活性係以類似於上述方法使用基質I－1 120(最終濃度100 μM)測量。

a.10)內毒素血症小鼠及大鼠中受損凝血及器官功能之特定診斷 凝血酶/抗凝血酶複合物凝血酶/抗凝血酶複合物(以下係指“TAT＂)係為經凝血活化內源性形成的凝血酶之測量值。TAT係使用ELISA分析(Enzygnost TAT micro,Dade－Behring)測定。藉由離心使血漿由檸檬酸鹽血液中得到，將50微升之TAT樣本緩衝液加入50微升血漿中，且使樣本簡略搖盪並在室溫下培育15分鐘。以抽吸使樣本濾出，且以洗滌緩衝液(300微升/孔)洗滌孔三次。在洗滌期間，藉由輕拍平板除去液體。加入共軛溶液(100微升)，且將平板在室溫下培育15分鐘。將樣本抽吸出，且以洗滌緩衝液(300微升/孔)洗滌孔三次。然後加入顯色基質(100微升/孔)，使平板在黑暗室溫下培育30分鐘，加入中止溶液(100微升/孔)且在492 nm(Saphire平板測讀儀)下測量顏色發展。

器官功能之因素測定許多因素，其允許相關於藉由投與LPS不同之內部器官功能限制獲致結論且其允許被評估的測試物質之治療功效。將檸檬酸鹽血液或適當時鋰/肝素血液離心，且由血漿測定因素。典型地，測定下述因素：肌酸酐(creatinin)、尿素、天冬胺酸胺基轉移酶(AST)、丙胺酸胺基轉移酶(ALT)、總膽紅素(bilirubin)、乳酸去青酶(LDH)、總蛋白質、總白蛋白及纖維蛋白原。這些值係提供關於腎臟、肝臟、心血管系統及血管功能之指標。

發炎之因素由內毒素引發之發炎反應程度可藉由發炎調節物之增加而檢測，例如血漿中之介白素(1、6、8及10)、腫瘤壞死因子α或單核細胞趨化蛋白－1。為此目的，可使用ELISAs或luminex系統。

b)抗血栓活性之測定(活體內)

b.1)動靜脈分流(Arteriovenous shunt)及出血模式(組合－模式大鼠) 使用Inactin(150－180毫克/公斤)將具有重量300－350公克的禁食雄性大鼠(品系：HSD CPB：WU)麻醉。根據Christopher N.Berry et al.,Br.J.Pharmacol.(1994),113, 1209－1214所述方法於動靜脈分流中開始血栓之形成。為此目的，使左頸靜脈及右總頸動脈暴露。兩個血管係使用長度為10公分的聚乙烯管(PE 60)經由體外分流而相接。在中央處，此聚乙烯管係連接至長度為3公分的其他聚乙烯管(PE 160)，其含有排列形成圈環之粗糙尼龍線、以形成血栓形成表面。體外循環係維持15分鐘，然後移除分流，且立即稱重該具有血栓之尼龍線。在實驗開始前，測定尼龍線本身之重量。

為測定流血時間，在分流循環打開前立即使用刮鬍刀將大鼠尾巴末端截斷3毫米，接著將尾巴置入保持在溫度37℃之生理食鹽水中，且於15分鐘期間內觀察自切口處之流血情況。測定的是流血停止至少30秒之時間(最初流血時間)、15分鐘期間內總流血時間(累積流血時間)及經由收集血紅素之吸光光度法測定之定量血液流失。

於建立體外循環及尾巴末端被截斷之前，經由單次靜注(single bolus)或後續持續灌注的靜注經對側頸靜脈自靜脈內或使用咽管經口服投與測試物質。

c)藥物動力學之測定(活體內)

為測定活體內藥物動力學，將測試物質溶於各種調配組成物(例如血漿、乙醇、DMSO、PEG400等)或這些增溶劑之混合物中，且經靜脈內或經口投與小鼠、大鼠、狗或猴子中。靜脈內投與係以快速注射或以灌注進行。所投與之劑量在0.1至5毫克/公斤之範圍內。利用導管抽取血液樣本或其為於至多26小時的期間在不同時間時之犠牲血漿。此外，在一些情況下，亦採取器官、組織及尿液之樣本。使用在討論的基質中調整之校正樣本，進行測試樣本中的物質之定量測定。存在樣本中之蛋白質利用以乙腈或甲醇產生沉澱而除去。然後於2300 HTLC系統(Cohesive Technologies,Franklin,MA,USA)中使用逆相管柱藉由HPLC進行樣本之分級分離。該HPLC系統經由渦輪式離子噴灑界面連接於API 3000 Triple Quadropole質譜儀(Applied Biosystems,Darmstadt,Germany)。使用經認證之動力學分析程式分析血漿濃度之時程。

物質對於轉運蛋白質之親和性係藉由於使用Caco－2細胞或於特定轉運蛋白中表現的細胞(Troutman MD,Thakker DR,Pharm.Res.20(8)1210－1224(2003)；Schwab D,Fischer H,Tabatabaei A,Poli S,Huwyler J,J.Med.Chem.46,1716－1725(2003)；Merino G,Jonker JW,Wagenaar E,Pulido MM,Molina AJ,Alvarez AI,Schinkel AH,Drug Metab.Dispos.33(5)614－618(2005))之流量分析中之活體外測試而檢測。為此目的，將細胞於24－或96－孔過濾平板上培養4至15天。為測定滲透性，將HEPES緩衝液中之物質經頂部(A)或基底(B)加入細胞中，且使混合物培育2小時。在0及2小時後，將樣本自順式－及反式－區室出取出且藉由LC－MS/MS分析。使用Schwab等人所公佈之公式計算Papp值，當Papp(B－A)/Papp(A－B)為>2或<0.5時，物質係分類為經活性轉運者。

d)內毒素血症活性之測定(活體內)

使用大鼠或小鼠進行檢驗。在小鼠模式中(NMRI，雄性)中，經腹膜內注射50毫克/公斤LPS(大腸桿菌血清型055：B5，Sigma－Aldrich)。於LPS注射至多一小時前，經由尾靜脈之靜脈內、皮下、腹膜內、或使用胃管之經口投與測試物質。在投與LPS四小時後，將動物麻醉(Ketavet/Rompun)，且以手術打開腹部。將檸檬酸鈉溶液(3.2% w/v)(配方：體重公克數/13乘以100微升)注射入下腔靜脈內，且在30秒後抽取血液樣本(約1毫升)。測定該血液的各種參數，例如細胞血液組成(特別是紅血球、白血球與血小板)、乳酸濃度、凝血活化作用(TAT)或器官功能障礙或器官衰竭等參數及死亡率。

e)用於大鼠DIC試驗的方法之說明

將LPS(大腸桿菌O55 B5，由Sigma製造，溶於PBS中)以250微克/公斤之劑量對雄性Wistar大鼠進行靜脈內投與至尾靜脈中(投與體積2毫升/公斤)。將測試物質溶於PEG 400/H₂ O 60%/40%中，且於LPS注射30分鐘前經口投與(投與體積5毫升/公斤)。在LPS注射1、5或4小時後，利用穿刺心臟末端麻醉法(Trapanal100毫克/公斤i.p.)進行動物放血，且得到檸檬酸鹽血漿以用於測定血纖維蛋白原、PT、TAT與血小板總數用。視情況而定，得到血清以用於測定肝臟酵素、腎臟功能參數及細胞激素。TNFα與IL－6係使用市售可得之ELISAs(R&D Systems)測定。

亦可測量器官功能之直接參數，例如左心室與右心室壓力、動脈壓力、尿排泄、腎臟灌注與血液氣體及酸/鹼狀態。

C.醫藥組成物之例示具體實例

根據本發明之化合物可以下述方法轉化為醫藥製劑：

錠劑：

組成物： 100毫克根據本發明之化合物、50毫克乳糖(單水合物)、50毫克玉米澱粉(原態)、10毫克聚乙烯吡咯啶酮(PVP 25)(得自BASF，Ludwigshafen,Germany)與2毫克硬脂酸鎂。

錠劑重量212毫克；直徑8毫米；曲率半徑12毫米。製備：以於水之5%強度PVP溶液(m/m)將根據本發明的化合物、乳糖與澱粉之混合物顆粒化。將顆粒乾燥，且接著與硬脂酸鎂混合5分鐘。使用習用錠劑壓合機將此混合物壓製(參見上文之錠劑格式)；作為指引，壓製所用壓縮力為15 kN。

口服懸浮液：

組成物： 1000毫克根據本發明之化合物、1000毫克乙醇(96%)、400毫克Rhodigel(黃原膠，得自FMC,Pennsylvania,USA)與99公克水。

10毫升口服懸浮液相當於100毫克根據本發明化合物之單一劑量。

製備：將Rhodigel懸浮於乙醇中，且添加根據本發明化合物至懸浮液中。於攪拌下添加水，攪拌此混合物約6小時，直到Rhodigel膨脹完全為止。

口服溶液：

組成物： 500毫克根據本發明之化合物、2.5公克聚山梨糖醇酯與97公克聚乙二醇400。20公克口服溶液相當於100毫克根據本發明之化合物之單一劑量。

製造：在攪拌下，將根據本發明之化合物懸浮於聚乙二醇與聚山梨糖醇酯之混合物中。持續攪拌直到根據本發明化合物完全溶解為止。

i.v.溶液： 將根據本發明之化合物以低於飽和溶解度之濃度溶於生理上可接受之溶劑(例如等張氯化鈉溶液、葡萄糖溶液5%及/或PEG 400溶液30%)中。藉由過濾使溶液滅菌，且將其裝填入無菌及不含熱源之注射容器中。

Claims

一種下式之化合物，其中n代表數目0、1、2或3，R¹ 代表氯、三氟甲氧基、甲基、乙基、正丙基、甲氧基、甲氧基甲基或乙氧基甲基，R² 代表氫或甲基，或其醫藥上可接受的鹽。
根據申請專利範圍第1項之化合物，其特徵在於n代表數目0、1或2，R¹ 代表氯、三氟甲氧基、甲基、正丙基、甲氧基或甲氧基甲基，R² 代表氫或甲基，或其醫藥上可接受的鹽。
根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其特徵在於n代表數目0、1或2，R¹ 代表甲基、甲氧基或甲氧基甲基，R² 代表氫，或其醫藥上可接受的鹽。
根據申請專利範圍第1至3項中任一項之化合物，其特徵在於n代表數目1或2，R¹ 代表甲基，R² 代表氫，或其醫藥上可接受的鹽。
一種用於製備根據申請專利範圍第1項之式(I)化合物或其醫藥上可接受的鹽之方法，其特徵在於[A]將下式之化合物與下式之化合物反應，其中n、R¹ 及R² 具有申請專利範圍第1項中給予之意義，得到下式之化合物其中n、R¹ 及R² 具有申請專利範圍第1項中給予之意義，且在第二步驟中，於光氣或光起等同物之存在下，將其環化而得到式(I)之化合物，或[B]將下式之化合物其中n、R¹ 及R² 具有申請專利範圍第1項中給予之意義，與下式之化合物反應，其中X代表鹵素、較佳為溴或氯，或為羥基。
根據申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物，其係用於治療及/或預防疾病。
一種根據申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物之用途，其用於製備供治療及/或預防疾病之藥劑。
一種根據申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物之用途，其用於製備供治療及/或預防血栓栓塞性病症之藥劑。
一種組成物，其包含根據申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物，以及惰性、無毒性之醫藥上可接受的助劑。
一種組成物，其包含根據申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物，以及其他活性化合物。
根據申請專利範圍第9或10項之組成物，其用於治療及/或預防血栓栓塞性病症。
一種根據申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物之用途，其用於製備供治療及/或預防全身性發炎性症候群(SIRS)、敗血性器官功能障礙、敗血性器官衰竭與多重器官衰竭、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、急性肺傷害(ALI)、敗血性休克、及/或DIC(瀰漫性血管內凝血)之藥劑。
根據申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物，其用於治療及/或預防血栓栓塞性病症之方法中。