KR20100022988A - 치환된 (옥사졸리디논―５―일―메틸)―２―티오펜―카르복스아미드 및 혈액 응고 분야에서의 그의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 치환된 옥사졸리디논, 그의 제조 방법, 질병, 특히 혈전색전성 질환의 치료 및/또는 예방에 있어서의 그의 용도, 및 질병, 특히 혈전색전성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제를 제조하기 위한 그의 용도에 관한 것이다.

<화학식 I>

옥사졸리디논, 혈전색전성 질환, 혈액 응고, 트롬빈, 인자 Xa, 이중 억제제

Description

치환된 (옥사졸리디논―５―일―메틸)―２―티오펜―카르복스아미드 및 혈액 응고 분야에서의 그의 용도 {SUBSTITUTED (OXAZOLIDINON-5-YL-METHYL)-2-THIOPHENE-CARBOXAMIDES AND USE THEREOF IN THE FIELD OF BLOOD COAGULATION}

본 발명은 신규한 치환된 옥사졸리디논, 그의 제조 방법, 질병, 특히 혈전색전성 질환의 치료 및/또는 예방에 있어서의 그의 용도, 및 질병, 특히 혈전색전성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제를 제조하기 위한 그의 용도에 관한 것이다.

혈액 응고는 혈관벽의 결손을 신속하고 확실하게 "봉인(seal)"하는 것을 돕는 유기체의 보호 메카니즘이다. 따라서, 혈액 손실을 피하거나, 최소로 유지할 수 있다. 혈관 상해 후의 지혈은 혈장 단백질의 복합 반응의 효소적 연속단계가 유발되는 응고계에 의해 주로 이루어진다. 상기 과정에 수반되는 수많은 혈액 응고 인자는 각각의 인자의 활성화시 후속 불활성 전구체를 그의 활성형으로 각각 전환시킨다. 연속단계의 최종 단계에서 가용성 피브리노겐은 불용성 피브린으로 전환되어, 응혈이 형성된다. 혈액 응고에서, 전통적으로 내인성계 및 연대 반응 경로의 끝인 외인성계는 구별된다. 여기서, 인자 Xa 및 IIa (트롬빈)는 핵심 역할을 수행한다.

인자 Xa는 인자 VIIa/조직 인자 (외인성 경로) 및 인자 X의 전환에 의한 텐 아제 복합체(tenase complex) (내인성 경로) 둘 모두를 통해 형성되기 때문에, 두 개의 응고 경로의 신호를 연결한다. 활성화된 세린 프로테아제 Xa는 프로트롬빈을 트롬빈으로 절단한다.

한 다발의 반응을 통해, 트롬빈은 연속단계로부터 혈액의 응고 상태에까지 신호를 전달한다. 트롬빈은 피브리노겐을 직접 피브린으로 절단한다. 이는 인자 XIII를 인자 XIIIa로 활성화하는데, 이는 피브린 덩어리를 안정화하는데 요구된다. 또한, 트롬빈은 (PAR-1 활성화를 통해) 혈소판 응집을 강력하게 유발시키고, 이는 또한 지혈에 상당히 기여한다. TAFI (트롬빈-활성화가능 섬유소용해 억제제)를 TAFIa로 활성화하는 것에 의해, 트롬보모듈린과의 복합체 내의 트롬빈은 덩어리의 용해를 억제한다. 인자 V 및 VIII의 활성화는 트롬빈의 생산을 유도하여 차례로 응집 반응을 증폭시킨다; 트롬보모듈린과의 복합체 내에서 생산된 활성화된 단백질 C는 이와 같이 증가된 트롬빈 생산과 반대로 작용하여 지나친 지혈 (혈전증)을 방지한다.

혈액 중의 비결합 인자 X 및 트롬빈에 더하여, 결합된 형태도 공지되어 있다. 피브린 덩어리가 형성되는 동안, 트롬빈 및 프로트롬빈 분해효소 (복합체 내의 인자 Xa)는 피브린 골격에 결합한다. 이들 효소 분자는 여전히 활성이 있으며, 내인성 항트롬빈 III에 의해 억제될 수 없다. 즉, 이러한 방식으로, 덩어리는 일반적인 응고 잠재력을 여전히 갖는다.

전신성 인자 (예컨대 고지혈증, 당뇨병 또는 흡연)의 결과로, 울혈이 있는 혈액에서의 변화 (예컨대 심방세동)로 인해, 또는 혈관벽의 병리학적 변화 (예컨대 내피세포 기능부전 또는 죽상동맥경화증)로 인해, 많은 심혈관 및 대사 질환의 경과 동안 응고 및 혈소판 활성화가 증가되는 경향이 있다. 이와 같은 원치않는 지나친 지혈은 피브린- 및 혈소판-풍부 혈전의 형성에 의해 목숨을 위협하는 혈전색전성 질환 및 혈전성 합병증을 야기할 수 있다.

지혈은 복합적인 조절 메커니즘이다. 응고계의 조절되지 않은 활성 또는 활성화 과정의 불완전한 억제는 관 (동맥관, 정맥관, 림프관) 또는 심장 강(cardiac cavity)에서 국소적인 혈전 형성 또는 색전증을 유발시킬 수 있다. 이는 심각한 혈전성 또는 혈전색전성 질환을 야기할 수 있다. 또한, 전신성 응고항진 (hypercoagulability)은 산포된 혈관내 응고와 관련하여 소모성 응고장애를 야기할 수 있다. 추가로, 혈전색전성 합병증으로 미세혈관병성 용혈성 빈혈, 체외 순환계, 예컨대 혈액 투석 및 또한 인공 심장 판막 및 스텐트와 직면하게 된다.

혈전색전성 질병은 대부분의 산업화된 국가에서 가장 흔한 질병 및 사망 원인이다 (문헌 [Heart Disease: A Textbook of Cardiovascular Medicine, Eugene Braunwald, 5th edition, 1997, W.B. Saunders Company, Philadelphia]).

종래부터 공지되어 있는 항응고제, 예를 들어 혈액 응고를 억제하거나 방지하는 물질은 다양하고 종종 심각한 단점을 가진다. 따라서, 실제로 혈전성/혈전색전성 질병의 유효한 치료 방법 또는 예방 방법은 매우 어렵고 불만족스러운 것으로 나타난다.

혈전색전성 질환의 치료 및 예방에 있어서, 비경구 또는 피하 투여되는 헤파린이 먼저 사용된다. 보다 바람직한 약동학적 특성 때문에 오늘날 저분자량 헤파 린이 더욱 바람직한 것으로 거론되지만, 이와 같은 방식으로는 헤파린 요법이 직면하고 있는, 이하에서 기재하는 공지된 단점을 피할 수 없다. 즉, 헤파린은 경구적으로 이용이 불가하며, 단지 비교적 짧은 반감기를 가진다. 또한, 이는 출혈의 위험이 크고, 특히 뇌출혈 및 위장관 출혈을 일으킬 수 있으며, 혈소판감소증, 약물 유도 탈모증 또는 골다공증을 일으킬 수 있다 (문헌 [Pschyrembel, Klinisches Worterbuch [Clinical Dictionary], 257th edition, 1994, Walter de Gruyter Verlag, page 610, keyword "Heparin"]; [Rompp Lexikon Chemie, Version 1.5, 1998, Georg Thieme Verlag Stuttgart, keyword "Heparin"]). 저분자량 헤파린은 헤파린-유도 저혈소판증 발생을 야기할 가능성이 적지만, 이것 역시 피하로만 투여가 가능하다. 또한, 이는 긴 반감기를 갖는 합성 선택적 인자 Xa 억제제인 폰다파리눅스(fondaparinux)에도 적용된다.

항응고제의 제2 군은 비타민 K 길항제이다. 이러한 것으로는, 예를 들면 1,3-인단디온, 특히 간에서 특정 비타민 K-의존성 응고 인자의 다양한 생성물의 합성을 비선택적으로 억제하는 와파린, 펜프로쿠몬, 디쿠마롤 및 기타 쿠마린 유도체와 같은 화합물이 포함된다. 그러나, 작용 메커니즘으로 인해 작용 개시가 매우 느리다 (작용 개시의 잠복 시간이 36 내지 48 시간). 상기 화합물은 경구적으로 투여할 수 있지만; 출혈 위험이 높고 요법 지수가 좁기 때문에, 복합적인 개별 조정 및 환자의 모니터링이 요구된다 (문헌 [J. Hirsch, J. Dalen, D.R. Anderson et al., "Oral anticoagulants: Mechanism of action, clinical effectiveness, and optimal therapeutic range" Chest 2001, 119, 8S-21S]; [J. Ansell, J. Hirsch, J. Dalen et al., "Managing oral anticoagulant therapy" Chest 2001, 119, 22S-38S]; [P.S. Wells, A.M. Holbrook, N.R. Crowther et al., "Interactions of warfarin with drugs and food" Ann. Intern. Med. 1994, 121, 676-683]). 또한, 위장관 문제, 탈모 및 피부 괴사와 같은 다른 부작용이 보고되어 있다.

또한, 트롬빈 억제제는 범위를 더욱 좁히는데 사용된다. 히루딘은 트롬빈을 매우 강력하게 억제하는 단백질이다. 이는 재조합 형태로 역 항응고제로서 정맥내 투여된다. 비발리루딘은 히루딘의 20개의 아미노산 단편으로, 매우 짧은 반감기를 갖고, 역시 경구로는 이용이 불가능하다. 또한, 이는 직접 비펩티드성 저분자량 트롬빈 억제제인 알가트로반의 경우에도 그러하다 (문헌 [J.H.Sohn, et al. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001, 57, 606-613]; [T.Galdwell Clin. Ther. 2002, 24, 38-58]; [G.Escolar, Drugs of Today 2006, 42, 223]).

추가의 요법적 접근방법은 인자 Xa를 단독으로 억제하는 것을 포함한다 (문헌 [J. Hauptmann, J. Sturzebecher, Thrombosis Research 1999, 93, 203]; [S.A.V. Raghavan, M. Dikshit, "Recent advances in the status and targets of antithrombotic agents" Drugs Fut. 2002, 27, 669 683]; [H.A. Wieland, V. Laux, D. Kozian, M. Lorenz, "Approaches in anticoagulation: Rationales for target positioning" Curr. Opin. Investig. Drugs 2003, 4, 264 271]; [U.J. Ries, W. Wienen, "Serine proteases as targets for antithrombotic therapy" Drugs Fut. 2003, 28, 355-370]; [L.-A. Linkins, J.I. Weitz, "New anticoagulant therapy" Annu. Rev. Med. 2005, 56, 63-77]; [A. Casimiro-Garcia et al., "Progress in the discovery of Factor Xa inhibitors" Expert Opin. Ther. Patents 2006, 15, 119-145].

본원에서는 펩티드성 및 비펩티드성 둘 모두의 다양한 화합물이 동물 모델에서 인자 Xa의 억제제로서 효과적임을 보여준다. 오늘날, 다수의 직접적인 인자 Xa 억제제가 공지되어 있다 (문헌 [J.M. Walenga, W.P. Jeske, D. Hoppensteadt, J. Fareed, "Factor Xa Inhibitors: Today and beyond" Curr. Opin. Investig. Drugs 2003, 4, 272-281]; [J. Ruef, H.A. Katus, "New antithrombotic drugs on the horizon" Expert Opin. Investig. Drugs 2003, 12, 781-797]; [M.L. Quan, J.M. Smallheer, "The race to an orally active Factor Xa inhibitor: Recent advances" Curr. Opin. Drug Discovery & Development 2004, 7, 460-469]). 비펩티드성이고 저분자량의 인자 Xa 억제제로서 옥사졸리디논이 WO 01/47919에 기재되어 있다.

최근의 접근방법으로, 저분자량의 트롬빈 및 인자 Xa 억제제를 다양한 혼합비로 시험관 내 및 생체내에서 시험하는 것이 기재되어 있다. 여기서는 강력한 상승적 잠재력을 발견하였다. 타노지트란(tanogitran)은 저분자량의 물질로 트롬빈과 인자 Xa를 둘 모두 억제하는 것으로 기재되어 있지만, 트롬빈 억제를 위해 더 강하게 선호된다. 개발중인 이 물질은 경구적으로 생물학적 이용가능성이 없다.

항혈전성 약제의 경우, 치료 범위가 가장 중요하다: 응집 억제를 위한 치료상 활성 투여량 및 출혈을 일으킬 수 있는 투여량 사이의 차이는 최대의 치료 활성을 최소의 위험 추이로 얻을 수 있도록 가능한 한 커야 할 것이다.

저분자량의 트롬빈 및 인자 Xa 억제제의 혼합물을 이용한 실험에서 볼 수 있는 바와 같이, 트롬빈 및 인자 Xa 둘 모두를 억제하는 화합물은 그의 이중적 특성으로 인해 특히 강력한 상승효과를 가져, 혈전의 형성을 조절하는데 특히 효과적이다. 이러한 방식으로, 화합물은 개별 효소를 완벽하게 차단하지 않으면서 응고 연속단계의 두 가지 핵심 효소를 억제한다. 잔여 인자 Xa 및 트롬빈은 손상없이 지혈되게 하여 특히 유익한 치료 범위를 제공한다. 토끼의 동정맥 단락 모델에서, 선택적인 인자 Xa 억제제 PD0313052 및 선택적인 트롬빈 억제제 알가트로반을 항혈전 활성 용량으로 단지 약하게 공동투여하는 것으로 강한 추가적인 항혈전 효과가 야기된다는 것이 입증가능하였다. 또한, 최대의 상승적 효과를 갖는 개별 투여량을 조합할 경우, 출혈의 증가는 관찰되지 않았다. 이러한 관찰은 트롬빈 및 인자 Xa의 동시 억제가 항혈전 작용과 출혈 위험 사이의 거리와 관련하여 치료 범위를 넓힌다는 결론을 도출시킨다 (문헌 [Journal of Thrombosis and Haemostasis, 4: 834-841]).

이러한 상승작용은 물질 농도의 함수로서 프로트롬빈 시간을 순수한 인자 Xa 및 트롬빈 억제제와 직접 비교하여 연구할 경우 특히 언급된다. 응고 연속단계의 두 가지 핵심 효소에 대한 이와 같은 강력한 효과는 혈전 형성의 위험이 높게 존재하거나, 또는 혈전 형성이 치명적인 질병을 야기할 수 있는 경우에 특히 유익한 것으로 여겨진다. 이들 둘 모두는, 예를 들어 급성 관상동맥 증후군 유형의 죽상혈전성 질환의 경우나 급성 심근 경색증 이후의 상황에서 관련성을 가진다.

추가로, 헤파린과 대조적으로, 트롬빈 및 인자 Xa 둘 모두를 억제하는 화합 물인 히루딘 및 비타민 K 길항제는 또한 피브린 덩어리와 결합된 응고 인자에 대해 활성이 있을 것이다. 이미 존재하는 덩어리의 혈전 잠재력을 제한하는 것은 동맥 폐쇄를 방지하는 중요한 포인트이다. 이는 현재의 트롬빈 활성 및 덩어리 내에 새로운 트롬빈이 형성되는 것 둘 모두를 억제하는 것에 의해 특히 효과적으로 달성된다. 순수한 트롬빈 억제제가 덩어리에 결합된 인자 Xa를 함유하는 프로트롬빈 분해효소 복합체에 의한 눈사태와 같은 트롬빈의 생산을 방지할 수 없어서, 억제 효과가 생산된 다량의 트롬빈에 의해 매우 자극된 응고를 초과보상할 수 없는 반면에, 순수한 인자 Xa 억제제는 이미 존재하는 트롬빈의 활성을 억제할 수 없다. 억제는 생리적 메카니즘에 의해서도 불가능하기 때문에, 이러한 덩어리에 결합된 트롬빈은 특히 큰 위험성을 지닌다. 대조적으로, 이중 화합물, 즉 트롬빈과 인자 Xa를 둘 모두 억제하는 화합물은 트롬빈 생산과 덩어리에 대한 트롬빈 활성을 둘 모두 억제할 수 있고, 따라서 잠재적인 덩어리의 성장도 방지할 수 있다.

따라서, 본 발명의 목적은 이중 화합물, 즉 트롬빈과 인자 Xa를 둘 모두 억제하고, 트롬빈의 생산 및 덩어리에 대한 트롬빈의 활성을 억제함으로써 그의 잠재적인 성장을 방지하고, 인간 및 동물에서 질병, 특히 혈전색전성 질환을 조절하는 넓은 치료 범위를 갖는 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 및 이들의 염, 이들의 용매화물 및 이들의 염의 용매화물을 제공한다.

상기 식에서,

n은 숫자 0, 1, 2 또는 3을 나타내고,

R¹은 염소, 트리플루오로메톡시, 메틸, 에틸, n-프로필, 메톡시, 메톡시메틸 또는 에톡시메틸을 나타내고,

R²는 수소 또는 메틸을 나타낸다.

본 발명에 따른 화합물은 화학식 I의 화합물 및 이들의 염, 용매화물 및 상기 염의 용매화물, 이하에서 언급하는 화학식 I에 포함되는 화합물 및 이들의 염, 용매화물 및 상기 염의 용매화물, 및 이하에서 예시적인 실시양태로서 언급하는 화학식 I에 포함되는 화합물, 이들의 염, 용매화물 및 상기 염의 용매화물 (이하에서 언급하는 화학식 I에 포함되는 화합물이 아직 염, 용매화물, 및 상기 염의 용매화물이 아닌 경우)이다.

본 발명에 따른 화합물은 그의 구조에 따라 입체이성질체 형태 (광학이성질체, 부분입체이성질체)의 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명은 광학이성질체 또는 부분입체이성질체 및 이들 각각의 혼합물을 포함한다. 그러한 광학이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 혼합물로부터, 입체이성질체적으로 균일한 성분을 공지의 방식으로 단리할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물이 호변이성질체 형태로 존재할 수 있는 경우, 본 발명은 모든 호변이성질체 형태를 포함한다.

본 발명과 관련하여, 바람직한 염은 본 발명에 따른 화합물의 생리적으로 허용가능한 염이다. 또한 본 발명은, 일부가 제약 용도로 부적합하지만, 예를 들어 본 발명에 따른 화합물을 단리하거나 정제하는데 사용할 수 있는 염도 포함한다.

본 발명에 따른 화합물의 생리적으로 허용가능한 염에는 무기산 (mineral acid), 카르복실산 및 술폰산의 산 부가 염, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 벤젠술폰산, 나프탈렌 디술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 푸마르산, 말레산 및 벤조산의 염이 포함된다.

본 발명에 따른 화합물의 생리적으로 허용가능한 염에는 또한 통상의 염기의 염, 예를 들어 바람직하게는 알칼리 금속 염 (예를 들어 나트륨 염 및 칼륨 염), 알칼리성 토금속 염 (예를 들어 칼슘 염 및 마그네슘 염), 및 암모니아 또는 탄소수가 1 내지 16인 유기 아민, 예를 들어 바람직하게는 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸디이소프로필아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디시클로헥실아민, 디메틸아미노에탄올, 프로카인, 디벤질아민, N-메틸모르폴린, 아르기닌, 라이신, 에틸렌디아민 및 N-메틸피페리딘에서 유래된 암모늄 염도 포함된다.

본 발명과 관련하여, 용매화물은 본 발명에 따른 화합물이 용매 분자와의 배 위에 의해 고체 또는 액체 상태로 복합체를 형성한 형태이다. 수화물은 배위가 물과 일어난 용매화물의 특이적 형태이다. 본 발명과 관련하여 바람직한 용매화물은 수화물이다.

추가로, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 화합물의 전구약물을 포함한다. 용어 "전구약물"은 일부가 생물학적으로 활성일 수 있는 화합물, 또는 비활성이지만 신체내에서 소비되는 시간 동안에 본 발명에 따른 화합물로 전환 (예를 들어 대사적으로 또는 가수분해에 의해)될 수 있는 화합물을 포함한다.

바람직한 화학식 I의 화합물 및 이들의 염, 용매화물, 및 이들의 염의 용매화물은

n이 숫자 0, 1 또는 2를 나타내고,

R¹이 염소, 트리플루오로메톡시, 메틸, n-프로필, 메톡시 또는 메톡시메틸을 나타내고,

R²가 수소 또는 메틸을 나타내는 것이다.

바람직한 화학식 I의 화합물 및 이들의 염, 용매화물, 및 이들의 염의 용매화물은

n이 숫자 0, 1 또는 2를 나타내고,

R¹이 메틸, 메톡시 또는 메톡시메틸을 나타내고,

R²가 수소를 나타내는 것이다.

바람직한 화학식 I의 화합물 및 이들의 염, 용매화물, 및 이들의 염의 용매화물은

n이 숫자 0, 1 또는 2를 나타내고,

R¹이 메틸을 나타내고,

R²가 수소를 나타내는 것이다.

바람직한 화학식 I의 화합물 및 이들의 염, 용매화물, 및 이들의 염의 용매화물은

n이 숫자 1 또는 2를 나타내고,

R¹이 메틸을 나타내고,

R²가 수소를 나타내는 것이다.

또한 바람직한 화학식 I의 화합물은 n이 숫자 1 또는 2를 나타내는 것이다.

또한 바람직한 화학식 I의 화합물은 n이 숫자 1을 나타내는 것이다.

또한 바람직한 화학식 I의 화합물은 R¹이 메틸을 나타내는 것이다.

또한 바람직한 화학식 I의 화합물은 R²가 수소를 나타내는 것이다.

또한 바람직한 화학식 I의 화합물은 R¹이 메틸을 나타내고, R²가 수소를 나타내는 것이다.

또한 특히 바람직한 것은 하기 화학식의 화합물 5-클로로-N-[((5S)-3-{4-[3- (히드록시메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]티오펜-2-카르복스아미드 및 그의 염, 그의 용매화물 및 그의 염의 용매화물이다. 본 화합물은 실시예 2에 기재되어 있다.

또한 특히 바람직한 것은 하기 화학식의 화합물 5-클로로-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-히드록시에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]티오펜-2-카르복스아미드 및 그의 염, 그의 용매화물 및 그의 염의 용매화물이다. 본 화합물은 실시예 6에 기재되어 있다.

또한 특히 바람직한 것은 하기 화학식의 화합물 5-클로로-N-{[(5S)-3-{4-[3-(3-히드록시프로필)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}티오펜-2-카르복스아미드 및 그의 염, 그의 용매화물 및 그의 염의 용매화물이다. 본 화합물은 실시예 10에 기재되어 있다.

각각의 조합 또는 바람직한 라디칼의 조합에서 제공되는 특이적인 라디칼 정의는, 제공된 각각의 라디칼의 조합에 따라 독립적으로, 다른 조합의 임의의 라디칼 정의에 의해 또한 대체된다.

매우 특히 바람직한 것은 상기에서 언급한 바람직한 범위의 2 이상의 조합이다.

본 발명은 추가로 화학식 I의 화합물 또는 그의 염, 용매화물 또는 그의 염의 용매화물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은

[A] 제1 단계에서, 하기 화학식 II의 화합물을 하기 화학식 III의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 IV의 화합물을 생성하고,

제2 단계에서, 이 화합물을 포스겐 또는 포스겐 균등물, 예를 들어 카르보닐디이미다졸 (CDI)의 존재하에 고리화하여 화학식 I의 화합물을 생성하거나, 또는

[B] 하기 화학식 V의 화합물을 하기 화학식 VI의 화합물과 반응시키는 것이다.

상기 식에서, n, R¹ 및 R²는 상기한 바와 같은 의미를 가지며, X는 할로겐, 바람직하게는 브롬 또는 염소, 또는 히드록실을 나타낸다.

히드록실기가 상기 과정 동안, 예를 들어 실릴 보호기에 의해 보호되는 경 우, 이는 [A] 과정 또는 [B] 과정이 종료된 이후에 당업자에게 공지된 방법으로, 예를 들어, 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중의 테트라부틸암모늄 플루오라이드와 반응시키거나 또는 메탄올 중의 염화 수소와 반응시켜 제거한다.

염의 유리 염기는, 예를 들어 염기가 첨가된 아세토니트릴/물 구배를 이용한 역상 컬럼 상에서의 크로마토그래피에 의해, 특히 RP18 페노메넥스 루나(Phenomenex Luna) C18(2) 컬럼을 사용하고 염기로서 디에틸아민을 이용하는 것에 의해 수득할 수 있거나, 또는 염을 유기 용매에 용해시키고 중탄산 나트륨과 같은 염기성 염의 수용액으로 추출하는 것에 의해 수득할 수 있다.

본 발명은 추가로 화학식 I의 화합물 또는 그의 용매화물을 제조하는 방법을 제공하며, 여기서 화합물의 염 또는 화합물의 염의 용매화물은 염기가 첨가된 크로마토그래피에 의해 화합물로 전환된다.

상기 제1 단계의 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서 루이스 산의 존재하에, 바람직하게는 대기압하의 실온 내지 용매의 환류 온도 범위에서 행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 극성 비양자성 용매, 예컨대 아세토니트릴, 부티로니트릴, 디클로로메탄 또는 클로로포름이며, 바람직한 것은 아세토니트릴이다.

루이스 산은, 예를 들어 과염소산 마그네슘, 이테르븀(III) 트리플루오로메탄술포네이트, 리튬 브로마이드, 마그네슘 트리플레이트 또는 알루미늄 트리클로라이드이며, 바람직한 것은 과염소산 마그네슘이다.

과정 [A]의 제2 단계의 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서 염기의 존재하에, 바람직하게는 대기압하의 실온 내지 용매의 환류 온도 범위에서 행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 극성 비양자성 용매, 예컨대 아세토니트릴 또는 부티로니트릴이다.

염기는, 예를 들어 강한 3급 아민 염기, 예컨대 4-N,N-디메틸아미노피리딘이다.

바람직한 것은 염기로서 4-N,N-디메틸아미노피리딘을 첨가하여, 카르본산 균등물로서 N,N'-카르보닐디이미다졸과 반응시키는 것이다.

과정 [B]에서 X가 할로겐인 경우, 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서, 적절한 경우 염기의 존재하에, 바람직하게는 대기압하의 -30℃ 내지 50℃의 온도 범위에서 행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 테트라히드로푸란, 메틸렌 클로라이드, 피리딘, 디옥산 또는 디메틸포름아미드이고, 바람직한 것은 테트라히드로푸란 또는 메틸렌 클로라이드이다.

염기는, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 또는 N-메틸모르폴린이고; 바람직한 것은 디이소프로필에틸아민이다.

과정 [B]에서 X가 히드록실인 경우, 반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서 탈수제의 존재하에, 적절한 경우 염기의 존재하에, 바람직하게는 대기압하의 -30℃ 내지 50℃의 온도 범위에서 행한다.

불활성 용매는, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 디클로로메탄 또는 트리클로로메탄, 탄화수소, 예컨대 벤젠, 니트로메탄, 디옥산, 디메틸포름아미드 또는 아세토니트릴이다. 또한, 용매의 혼합물을 사용하는 것도 가능하다. 특히 바 람직한 것은 디클로로메탄 또는 디메틸포름아미드이다.

본원에서 적합한 탈수제는, 예를 들어 카르보디이미드, 예컨대 N,N'-디에틸-, N,N,'-디프로필-, N,N'-디이소프로필-, N,N'-디시클로헥실카르보디이미드, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC), N-시클로헥실카르보디이미드-N'-프로필옥시메틸-폴리스티렌 (PS-카르보디이미드), 또는 카르보닐 화합물, 예컨대 카르보닐디이미다졸, 또는 1,2-옥사졸륨 화합물, 예컨대 2-에틸-5-페닐-1,2-옥사졸륨 3-술페이트 또는 2-tert-부틸-5-메틸이속사졸륨 퍼클로레이트, 또는 아실아미노 화합물, 예컨대 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린, 또는 프로판포스폰 무수물, 또는 이소부틸 클로로포르메이트, 또는 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스포릴 클로라이드, 또는 벤조트리아졸릴옥시-트리(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트, 또는 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 2-(2-옥소-1-(2H)-피리딜)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU) 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU), 또는 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt), 또는 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP), 또는 N-히드록시숙신이미드, 또는 염기와 이들의 혼합물이다.

염기는, 예를 들어 알칼리 금속 카르보네이트, 예컨대 탄산 나트륨 또는 탄산 칼륨, 또는 중탄산 나트륨 또는 중탄산 칼륨, 또는 유기 염기, 예컨대 트리알킬아민, 예를 들어 트리에틸아민, N-메틸모르폴린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노 피리딘 또는 디이소프로필에틸아민이다.

HATU 또는 EDC와의 축합은 바람직하게는 HOBt의 존재하에 행한다.

화학식 II의 화합물 및 화학식 VI의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 상응하는 출발 물질로부터 공지의 방법을 이용하여 합성할 수 있다.

화학식 III의 화합물은 공지되어 있거나, 또는 하기 화학식 VII의 화합물

(상기 식에서, n, R¹ 및 R²는 상기한 바와 같은 의미를 가짐)

에서 니트로기를 환원시켜 제조할 수 있다.

반응은 일반적으로 불활성 용매 중에서 환원제를 이용하여, 바람직하게는 대기압 내지 3 바(bar) 하의 실온 내지 용매의 환류 온도 범위에서 행한다.

환원제는, 예를 들어, 활성탄 상의 팔라듐, 수소, 주석 디클로라이드, 티타늄 트리클로라이드 또는 암모늄 포르메이트, 및 에탄올 및 에틸 아세테이트의 혼합물 중의 활성탄 상의 팔라듐이고; 바람직한 것은 활성탄 상의 팔라듐 및 수소 또는 주석 디클로라이드이다.

불활성 용매는, 예를 들어 에테르, 예컨대 디에틸 에테르, 메틸 tert-부틸 에테르, 1,2-디메톡시에탄, 디옥산, 테트라히드로푸란, 글리콜 디메틸 에테르 또는 디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르, 알코올, 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 탄화수소, 예컨대 벤젠, 크실렌, 톨루엔, 헥산, 시클로헥산 또는 미네랄 오일 분획, 또는 다른 용매들, 예컨대 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 아세토니트릴 또는 피리딘이고; 바람직한 용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 또는 주석 디클로라이드의 경우 디메틸포름아미드이다.

화학식 VII의 화합물은 공지되어 있거나, 상응하는 출발 물질로부터 공지의 방법을 이용하여 합성할 수 있거나, 또는 실시예 단락에서 기재하는 방법과 유사하게 제조할 수 있다.

화학식 V의 화합물은 공지되어 있거나, 하기 화학식 VIII의 화합물로부터 프탈이미드 보호기를 제거하여 제조할 수 있다.

(상기 식에서, n, R¹ 및 R²는 상기한 바와 같은 의미를 가짐)

반응은 일반적으로 수성 메틸아민 용액 또는 에탄올 중의 히드라진 수화물 용액을 사용하여, 바람직하게는 대기압 하에 용매의 환류 하에서 수성 메틸아민 용액을 사용하여 행한다.

화학식 VIII의 화합물은 공지되어 있거나, 과정 [A]에서 기재한 바와 같이 제조할 수 있거나, 또는 적절한 출발 물질로부터 공지의 방법을 이용하여 합성할 수 있다.

화학식 III, IV, V, VII 및 VIII의 화합물에서, 히드록실기는 임의로 실릴 보호기, 예컨대 tert-부틸(디페닐)실릴기를 운반할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물의 제조는 이하의 합성 반응식으로 설명할 수 있다:

본 발명에 따른 화합물은 예측할 수 없이 유용한 범위의 약리 활성을 갖는 다.

따라서, 이들은 인간 및 동물의 질병을 치료하고/하거나 예방하기 위한 약제로서 사용하는데 적합하다.

본 발명에 따른 화합물은 혈액 응고 인자 Xa 및 트롬빈 (인자 IIa) 작용의 이중 억제제, 특히 항응고제이다. 본 화합물은 트롬빈 및 인자 Xa를 둘 모두 억제하고, 트롬빈의 생산 및 덩어리에 대한 활성을 억제함으로써 그들의 잠재적인 성장을 방지하며, 넓은 치료 범위를 갖는다.

본 발명은 또한 질환, 바람직하게는 혈전색전성 질환 및/또는 혈전색전성 합병증의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명에 따른 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명의 관점에서 "혈전색전성 질환"은 특히, ST 분절 상승 (STEMI) 및 ST 분절 비상승 (비-STEMI) 심근 경색, 안전성 협심증, 불안전성 협심증, 관상동맥 중재술, 예컨대 혈관 성형술 또는 대동맥관 동맥회로술 이후의 재폐쇄 및 재협착, 말초 동맥 폐쇄 질병, 폐색전증, 심부정맥 혈전증 및 신장 정맥 혈전증, 일과성 허혈성 발작 및 또한 혈전성 및 혈전색전성 뇌졸중과 같은 질환이다.

따라서, 본 발명에 따른 물질은 또한 급성, 간헐적 또는 지속적 심장성 부정맥, 예컨대 심장 세동을 앓고 있는 환자, 및 심장율동전환을 앓고 있는 환자, 또한 심장 판막 질환 환자 또는 인공 심장 판막 환자에서 심인성 혈전색전증, 예컨대 대뇌 허혈, 뇌졸중 및 전신 혈전색전증 및 허혈을 방지 및 치료하는데 적합하다.

추가로, 혈전색전성 합병증으로 미세맥관병성 용혈성 빈혈, 체외 순환계, 예컨대 혈액투석 및 인공 심장 판막과 직면하게 된다.

또한, 본 발명에 따른 화합물은 동맥경화성 혈관 질환 및 염증성 질환, 예컨대 운동 기관의 류머티즘 질환을 예방 및/또는 치료하는데 적합하고, 이에 더하여 알츠하이머병을 예방 및/또는 치료하는데 적합하다. 게다가, 본 발명에 따른 화합물은 종양의 성장 및 전이 형성을 억제하는데, 및 미세혈관병증, 노인 황반 변성, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 신증 및 기타 미세혈관 질환에 대해 사용될 수 있으며, 또한 종양 환자, 특히 주요 외과수술의 개입 또는 화학요법 또는 방사선 요법 중인 환자의 혈전색전성 합병증, 예컨대 정맥 혈전색전증을 방지 및 치료하는데 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화합물은 폐 고혈압을 예방 및/또는 치료하는데 적합하다.

용어 "폐 고혈압"은 예를 들어 세계 보건 기구 (World Health Organisation, WHO)가 명시한 바와 같은 특별한 형태의 폐 고혈압을 포함한다 [폐 고혈압의 임상 분류, 2003년 베니스]. 언급될 수 있는 예는 폐 동맥 고혈압, 좌측 심장 장애와 관련이 있는 폐 고혈압, 폐 질환 및/또는 저산소증과 관련이 있는 폐 고혈압, 및 만성 혈전색전증으로 인한 폐 고혈압 (CTEPH)이다.

"폐 동맥 고혈압"은 특발성 폐 동맥 고혈압 (IPAH, 이전에는 원발성 폐 고혈압이라고 언급되기도 함), 가족성 폐 동맥 고혈압 (FPAH) 및 관련 폐 동맥 고혈압 (APAH) (교원질증, 선천적 전신 폐 단락, 문맥 고혈압, HIV 감염, 특정 약물 및 약제의 섭취; 갑상선 장애, 글리코겐 축적 질환, 고세병, 유전성 모세혈관확장증, 혈색소병증, 골수증식 장애, 비장절제술과 같은 다른 장애; 또는 폐 정맥폐색성 질환 및 폐 모세관 혈관종증과 같은 유의한 정맥/모세관이 관여하는 장애와 관련이 있는 것), 및 신생아의 지속적 폐 고혈압을 포함한다.

좌측 심장 장애와 관련이 있는 폐 고혈압은 좌심방 또는 좌심실 및 승모판막 또는 대동맥판막 결함의 장애를 포함한다.

폐 질환 및/또는 저산소증과 관련이 있는 폐 고혈압은 만성 폐쇄성 폐 장애, 간질성 폐 질환, 수면 무호흡 증후군, 폐포 저환기, 만성 고산병 및 선천적 결함을 포함한다.

만성 혈전색전증으로 인한 폐 고혈압 (CTEPH)은 근위 폐 동맥의 혈전색전성 폐쇄증, 원위 폐 동맥의 혈전색전성 폐쇄증 및 비-혈전증 폐 색전증 (종양, 기생충, 이물질)을 포함한다.

추가로, 본 발명은 유육종증, 조직구증 X 및 림프관종증과 관련이 있는 폐 고혈압의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 화합물의 용도를 제공한다.

또한, 본 발명에 따른 물질은 폐 및 간 섬유증을 치료하는데 적합할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화합물은 패혈증(sepsis) (또는 패혈증(septicaemia)), 전신성 염증 증후군 (SIRS), 패혈성 장기 기능부전, 패혈성 장기 부전 및 다발성장기 부전(multiorgan failure), 급성 호흡곤란 증후군 (ARDS), 급성 폐 손상 (ALI), 패혈증 쇼크, DIC (파종성 혈관내 응고 또는 소모성 응고병증) 및/또는 패혈성 장기 부전을 치료 및/또는 예방하는데 적합할 수 있다.

"패혈증"은 감염의 존재 및 전신성 염증 반응 증후군 (이하에서는, "SIRS"라 칭함)으로 정의된다. SIRS은 감염 외에도, 상해, 화상, 쇼크, 수술, 허혈, 췌장염, 재생 또는 종양과 같은 다른 상태와 관련하여 일어난다. 1992년 ACCP/SCCM 컨센서스 컨퍼런스 위원회 (Consensus Conference Committee)의 정의 (문헌 [Crit Care Med 1992; 20:864-874])는 진단 징후 및 "SIRS"를 진단하는데 필요한 지표 (특히 체온 변화, 맥박 항진, 호흡 곤란 및 혈액상의 변화)를 측정하는 방법을 기술하고 있다. 이후 (2001) SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS 국제 패혈증 정의 컨퍼런스 (International Sepsis Definitions Conference)는 본질적으로는 상기 기준을 유지시키되, 상세내용을 미세하게 조정하였다 (문헌 [Levy et al., Crit Care Med 2003; 31:1250-1256]).

패혈증 동안, 다양한 장기에서의 미소혈전증 및 2차 출혈성 합병증과 함께 응고계의 일반화된 활성화가 있을 수 있다 (파종성 혈관내 응고 또는 소모성 응고병증, 이하에서는 "DIC"라 칭함). 게다가, 혈관의 투과성이 증가되고, 혈관외 강으로 체액 및 단백질이 스며나오는 내피세포의 손상이 있을 수 있다. 패혈증 경과로서, 장기 부전 (예를 들어, 신장 부전, 간 부전, 호흡기 부전, 중추 신경 결손 및/또는 심혈관 부전) 또는 다발성장기 부전이 있을 수 있다. "패혈증 쇼크"는 치료를 요하는 저혈압의 개시를 말하며, 저혈압은 장기 손상을 더욱 촉진하고, 예후의 악화와 관련이 있다.

병원균은 박테리아 (그람-음성 및 그람-양성), 균류, 바이러스 및/또는 진핵생물일 수 있다. 진입 지점 또는 1차 감염은, 예를 들어 폐렴, 요로 감염 또는 복 막염일 수 있다. 감염은, 반드시 그러한 것은 아니지만, 균혈증과 관련이 있을 수 있다.

DIC 및/또는 SIRS는 패혈증 동안에 일어날 수 있지만, 또한 수술, 종양성 질병, 화상 또는 기타 상해의 결과로서 일어날 수도 있다. DIC에서는, 손상된 내피세포의 표면, 이물질의 표면 또는 상해를 입은 혈관외 조직에서 응고계가 대규모로 활성화된다. 그 결과 다양한 장기의 작은 혈관에서 응고가 생기고, 이는 저산소증 및 뒤이은 장기 기능부전과 관련이 있다. 2차적으로, 응고 인자 (예를 들어, 인자 X, 프로트롬빈 및 피브리노겐) 및 혈소판이 소모되어 혈액이 응고되는 능력이 감소되고, 심각한 출혈이 야기될 수 있다.

패혈증의 치료법은 먼저, 예를 들어 외과수술적 병소 재구축 및 항생작용에 의한, 감염 원인의 당연한 제거로 이루어진다. 다음으로, 치료법은 영향을 받은 장기 시스템의 집중적인 의료적 지원으로 이루어진다. 이 질병의 다양한 단계의 치료법이, 예를 들어 다음 문헌 [Dellinger et al., Crit Care Med 2004;32:858-873]에 기재되어 있다. DIC의 경우, 증명된 효과적인 치료법이 존재하지 않는다.

본 발명은 또한, 특히 상기에서 언급한 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한, 본 발명에 따른 화합물 및 1종 이상의 추가의 활성 화합물을 포함하는 약제를 제공한다. 예시적이고 바람직한 활성 화합물의 조합은 다음과 같다:

● 항생 요법

다양한 항생체 또는 항진균제의 조합이 예측적 요법 (미생물 존재의 진단 이전) 또는 특이적 요법으로 적합하다.

● 유체 요법

예를 들어, 정질 유체 또는 콜로이드성 유체.

● 혈압상승제

예를 들어, 노르에피네프린, 도파민 또는 바소프레신

● 수축 요법

예를 들어, 도부타민

● 코르티코스테로이드

예를 들어, 히드로코르티손, 또는 플루드로코르티손

● 재조합 인간 활성화 단백질 C

지그리스

● 혈액 제제

예를 들어, 적혈구 농축물, 혈소판 농축물, 에리스로포이에틴 또는 신선한 동결 혈장

● 패혈증 유래 급성 폐 손상 (ALI) 또는 급성 호흡곤란 증후군 (ARDS)의 경우의 인공 환기

예를 들어, 허용성 과탄산혈증, 감소된 일회 호흡량

● 진정, 진통 및 신경근 차단

진정: 예를 들어, 디아제팜, 로라제팜, 미다졸람 또는 프로포폴. 아편유사제: 예를 들어, 펜타닐, 히드로모르폰, 모르핀, 메페리딘 또는 레미펜타닐. NSAID: 예를 들어, 케토롤락, 이부프로펜 또는 아세트아미노펜. 신경근 차단: 예 를 들어, 판쿠로늄

● 당 조절

예를 들어, 인슐린, 글루코스

● 신장 대체 방법

예를 들어, 연속 정정맥 혈액여과 또는 간헐적 혈액투석. 신장 보호를 위한 낮은 용량의 도파민

● 항응고제

예를 들어, 혈전증 예방 또는 신장 대체 방법을 위한 것으로, 예를 들어 미분획 헤파린, 저분자량 헤파린, 헤파리노이드, 히루딘, 비발리루딘 또는 알가트로반.

● 바이카르보네이트 요법

● 스트레스 궤양 예방

예를 들어, H2-수용체 억제제, 제산제.

또한, 본 발명에 따른 화합물은 생체외에서 응고를 방지하는데 사용될 수 있으며, 예를 들어 혈액 및 혈장 제제를 보존하거나, 카테터 및 기타 의료 보조기 및 기구를 세정/전처리하거나, 생체내 또는 생체외에서 사용된 의료 보조기 및 기구의 합성 표면을 코팅하거나, 또는 인자 Xa 및/또는 인자 IIa를 포함하는 생물학적 샘플의 응고를 방지하는데 사용될 수 있다.

본 발명은 또한, 질환, 특히 상기에서 언급한 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명에 따른 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, 질환, 특히 상기에서 언급한 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제를 제조하는데 있어서의 본 발명에 따른 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, 본 발명에 따른 화합물의 항응고 유효량을 이용하여 질환, 특히 상기에서 언급한 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 시험관 내에서 혈액, 특히 저장 혈액 또는 인자 Xa 및/또는 인자 IIa를 함유하는 생물학적 샘플의 응고를 방지하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 화합물의 항응고 유효량을 첨가하는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 또한, 특히 상기에서 언급한 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한, 본 발명에 따른 화합물 및 1종 이상의 추가의 활성 화합물을 포함하는 약제를 제공한다. 예시적이고 바람직한 것으로서, 이하의 활성 화합물 또는 조합을 언급할 수 있다:

● 지질 저하제, 특히 HMG-CoA-(3-히드록시-3-메틸글루타릴-보조효소 A) 리덕타제 억제제, 예컨대 로바스타틴 (메바콜; US 4,231,938), 심바스타틴 (조콜; US 4,444,784), 프라바스타틴 (프라바콜; US 4,346,227), 플루바스타틴 (레스콜; US 5,354,772) 및 아토르바스타틴 (리피톨; US 5,273,995)이다.

● 심장 요법제/혈관확장제, 특히 ACE (안지오텐신 전환 효소) 억제제, 예컨대 카프토프릴, 리시노프릴, 에날라프릴, 라미프릴, 실라자프릴, 베나제프릴, 포시노프릴, 퀴나프릴 및 페린도프릴, 또는 AII (안지오텐신 II) 수용체 길항제, 예컨대 엠부사르탄 (US 5,863,930), 로사르탄, 발사르탄, 일베사르탄, 칸데사르탄, 에프로사르탄 및 테미사르탄, 또는 β-아드레날린 수용체 길항제, 예컨대 칼베딜롤, 알프레놀롤, 비소프롤롤, 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 칼테올롤, 메토프롤롤, 나돌롤, 펜부톨롤, 핀돌롤, 프로파놀롤 및 티몰롤, 또는 알파-1-아드레날린 수용체 길항제, 예컨대 프라조신, 부나조신, 독사조신 및 테라조신, 또는 이뇨제, 예컨대 히드로클로로티아지드, 푸로세미드, 부메타니드, 피레타니드, 토라세미드, 아밀로리드 및 디히드랄라진, 또는 칼슘 채널 차단제, 예컨대 베라파밀 및 딜티아젬, 또는 디히드로피리딘 유도체, 예컨대 니페디핀 (아달라트) 및 니트렌디핀 (바요텐신), 또는 니트로 제제, 예컨대 이소소르비드 5-모노니트레이트, 이소소르비드 디니트레이트 및 글리세롤 트리니트레이트, 또는 시클릭 구아노신 모노포스페이트 (cGMP)를 증가시키는 물질, 예컨대 가용성 구아닐레이트 시클라제 자극제 (WO 98/16223, WO 98/16507, WO 98/23619, WO 00/06567, WO 00/06568, WO 00/06569, WO 00/21954, WO 00/66582, WO 01/17998, WO 01/19776, WO 01/19355, WO 01/19780, WO 01/19778, WO 07/045366, WO 07/045367, WO 07/045369, WO 07/045370, WO 07/045433);

● 플라스미노겐 활성제 (혈전용해제/섬유소용해제) 및 혈전용해/섬유소용해를 촉진시키는 화합물, 예컨대 플라스미노겐 활성제 억제제의 억제제 (PAI 억제제) 또는 트롬빈-활성화 섬유소용해 억제제의 억제제 (TAFI 억제제), 예컨대 조직 플라스미노겐 활성제 (t-PA), 스트렙토키나제, 레테플라제 및 유로키나제;

● 항응고 물질 (항응고제), 예컨대 헤파린 (UFH), 저분자량 헤파린 (NMH), 예컨대 틴자파린, 세르토파린, 파르나파린, 나드로파린, 알데파린, 에녹사파린, 레비파린, 달테파린, 다나파로이드,

AVE 5026 (사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis), 문헌 [Company Presentation 2008, February 12]),

M118 (모멘타 파마수티칼스 인크.(Momenta Pharmaceuticals Inc.), 문헌 [Press Release 2008, February 14]),

ORG42675 (올가논 인터내셔날 인크.(Organon International Inc.), 문헌 [Company World Wide Website 2007, April]),

및 직접 트롬빈 억제제 (DTI), 예컨대

엑산타 (자이멜라가트란),

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AZD-0837 (아스트라제네카(AstraZeneca) 문헌 [Annual Report 2006, March 19, 2007]),

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리바록사반 (베이(BAY) 59-7939): 5-클로로-N-({(5S)-2-옥소-3-[4-(3-옥소모르폴린-4-일)페닐]-1,3-옥사졸리딘-5-일}메틸)티오펜-2-카르복스아미드 [WO 2001/47919],

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타노지트란 (BIBT-986, 전구약물: BIBT-1011): N-[(1R)-1-{2-[({4-[아미노(이미노)메틸]-페닐}아미노)메틸]-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일}-1-메틸-2-옥소-2-피롤리딘-1-일에틸]글리신 (문헌 [American Chemical Society - 226th National Meeting, New York City, NY, USA, 2003]),

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WO 2000/242270에 개시되어 있는 화합물,

AZ12300547: 6-[4-({(2S)-4-[(3-클로로-1H-인돌-6-일)술포닐]-2-메틸-6-옥소피페라진-1-일}메틸)페닐]-2-메틸피리다진-3(2H)-온 (문헌 [K.L Granberg et al. American Chemical Society - 232th National Meeting, San Francisco, USA, 2006, MEDI 391]),

WO 2007/008142에 개시되어 있는 화합물,

라작사반 (DPC-906): 1-(3-아미노-1,2-벤즈이속사졸-5-일)-N-(4-{2-[(디메틸아미노)-메틸]-1H-이미다졸-1-일}-2-플루오로페닐)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-카르복스아미드 (문헌 [J.Med.Chem. 2005, 48, 1729-1744]),

아픽사반 (BMS-562247): 1-(4-메톡시페닐)-7-옥소-6-[4-(2-옥소피페리딘-1-일)페닐]-4,5,6,7-테트라히드로-1H-피라졸로[3,4-c]피리딘-3-카르복스아미드 [WO 2003/026652, WO 2003/049681],

BMS-691648: 3-클로로-N-[(3S,4R)-1-(메틸술포닐)-4-{[4-(2-옥소피리딘-1(2H)-일)벤조일]아미노}피페리딘-3-일]-1H-인돌-6-카르복스아미드 (문헌 [T. Gungor et al. Drugs Fut. 2006, 31(Suppl A): abstract P118; WO 2004/082687]),

DX-9065a: (2S)-3-{7-[아미노(이미노)메틸]-2-나프틸}-2-(4-{[(3S)-1-에탄이 미도일-피롤리딘-3-일]옥시}페닐)프로판산 (문헌 [T. Nagahara et al. J.Med.Chem. 1994, 37, 1200-1207]),

DU-176b (문헌 [Y. Morishima et al. Blood 2004, 104, abstract 1862 (ASH 2004)]; [T. Fukuda et al. Blood 2004, 104, abstract 1852 (ASH 2004)]; [T. Furugohri et al. Blood 2004, 104, abstract 1851 (ASH 2004)]),

N-(5-클로로피리딘-2-일)-N'-[(1S,2R,4S)-4-(디메틸카바모일)-2-{[(5-메틸-4,5,6,7-테트라히드로[1,3]티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일)카르보닐]아미노}시클로헥실]에탄디아미드 [US 2005/0020645, WO 2005/47296],

US 2005/0020645에 개시되어 있는 화합물,

LY517717: N-{(1R)-2-[4-(1-메틸피페리딘-4-일)피페라진-1-일]-2-옥소-1-페닐에틸}-1H-인돌-6-카르복스아미드 [WO 2000/76971, WO 2002/100847],

813893 (문헌 [Proteinase Inhibitor Design - Fourth SCI-RSC Symposium, Proteinase 2004: Strategies for New Medicines (Part I), London]),

6-클로로-N-{(3S)-1-[(1S)-1-메틸-2-모르폴린-4-일-2-옥소에틸]-2-옥소피롤리딘-3-일}나프탈렌-2-술폰아미드 (문헌 [N.S. Watson et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 3784; WO 2002/100830; WO 2002/100886]),

KFA-1982 (KFA-1829의 전구약물) (문헌 [T. Koizumi et al. Journal of Thrombosis and Hemostasis 2003, 1 Suppl 1, P2022]),

EMD-503982 (문헌 [Merck KGaA Annual Report 2006, 48-49]),

EMD-495235: 5-클로로-N-[(1R)-1-(메톡시메틸)-2-{[3-메틸-4-(3-옥소모르폴린-4-일)-페닐]아미노}-2-옥소에틸]티오펜-2-카르복스아미드 (문헌 [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 5817-5822]),

M-55113: 4-[(6-클로로-2-나프틸)술포닐]-1-[(1-피리딘-4-일피페리딘-4-일)메틸]피페라진-2-온 (문헌 [H. Nishida et al. Chem.Pharm.Bull. 2001, 49, 1237-1244]),

M-55551/M-55555: (2R)-4-[(6-클로로-2-나프틸)술포닐]-6-옥소-1-[(1-피리딘-4-일피페리딘-4-일)메틸]피페라진-2-카르복실산 (문헌 [H. Nishida et al. Chem.Pharm.Bull. 2002, 50, 1187-1194]),

M-55190: 에틸 (2R)-4-[(6-클로로-2-나프틸)술포닐]-6-옥소-1-[(1-피리딘-4-일피페리딘-4-일)메틸]피페라진-2-카르복실레이트 (문헌 [H. Nishida et al. 16th Int Symp Med Chem, Bologna, 18-22 Sept 2000, Abst PA-125]),

M-55532: 7-[(6-클로로-2-나프틸)술포닐]-8a-(메톡시메틸)-1'-피리딘-4-일테트라히드로-5H-스피로[1,3-옥사졸로[3,2-a]피라진-2,4'-피페리딘]-5-온 (문헌 [H. Nishida et al. 228th ACS National Meeting, Philadelphia, August 22-26, 2004, MEDI-251; H. Nishida et al. Chem.Pharm.Bull. 2004, 52, 406-412; dito 459-462]),

N-({7-[(5-클로로-1H-인돌-2-일)술포닐]-5-옥소-1'-프로피오닐테트라히드로-8aH-스피로[1,3-옥사졸로-[3,2-a]피라진-2,4'-피페리딘]-8a-일}메틸)-N-메틸글리신 [WO 2006/106804],

PRT54021 (문헌 [U. Sinha et al. Blood 2006, 108, abstract 907 (ASH 2006)]; [K. Abe et al. Blood 2006, 108, abstract 901 (ASH 2006)]),

WO 2006/002099에 개시되어 있는 화합물,

오타믹사반 (FXV-673, RPR-130673): 메틸 (2R,3R)-2-{3-[아미노(이미노)메틸]벤질}-3-{[4-(1-옥시도피리딘-4-일)벤조일]아미노}부타노에이트 (문헌 [V. Chu et al. Thrombosis Research 2001, 103, 309-324]; [K.R. Guertin et al. Bioorg Med.Chem.Lett. 2002, 12, 1671-1674]),

AVE3247 (문헌 [Sanofi Aventis Company Presentation, Paris 2007, February 13]),

SAR377142 (SSR-7142) (문헌 [Sanofi Aventis Company Presentation, Paris 2007, February 13]),

HMR-2906 (문헌 [XVIIth Congress of the International Society for Thrombosis and Haemostasis, Washington D.C., USA, 14-21 Aug 1999]; [Generating greater value from our products and pipeline. Aventis SA Company Presentation, 05 Feb 2004]),

이드라파리눅스 (문헌 [Harry R. Buller et al. Blood, 2006, 108, abstract 571 (ASH 2006)]) 및

폰다파리눅스;

● 혈소판의 응집을 억제하는 물질 (혈소판 응집 억제제, 트롬보사이트(thrombocyte) 응집 억제제), 예컨대 아세틸살리실산 (예컨대 아스피린), 티클로피딘 (티클리드), 클로피도그렐 (플라빅스) 및 프라수그렐;

● 피브리노겐 수용체 길항제 (당단백질-IIb/IIIa 길항제), 예컨대 아브식시맙, 엡티피바티드, 티로피반, 라미피반, 레프라다피반 및 프라다피반;

● 및 또한 부정맥치료제.

본 발명은 추가로, 본 발명에 따른 1종 이상의 화합물을, 정상적으로는 1종 이상의 불활성, 무독성, 제약상 적합한 부형제와 함께 포함하는 약제 및 상기에서 언급한 목적을 위한 그의 용도에 관한 것이다.

본 발명에 따른 화합물은 전신적 및/또는 국소적으로 작용할 수 있다. 이러한 목적을 위해서, 이것들은 예를 들어 경구, 비경구, 폐, 비측, 설하, 설측, 협측, 직장, 피부, 경피, 결막 또는 귀 경로 등 적합한 방식으로, 또는 이식물 또는 스텐트로서 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물은 이러한 투여 경로에 적합한 투여 형태로 투여될 수 있다.

경구 투여에 적합한 것은, 종래 기술에 따라 기능하고 본 발명에 따른 화합물을 신속하게 전달하고/하거나 변형된 방식으로 전달하며, 본 발명에 따른 화합물을 결정질 및/또는 무정질 및/또는 용해된 형태로 함유하는 투여 형태, 예를 들어 정제 (피복되지 않은 정제 또는 피복된 정제, 예를 들어 장용피를 갖는 것, 또는 불용성이거나 본 발명에 따른 화합물의 방출을 지연시키거나 제어하며 용해되는 피 복물을 갖는 것), 구강 내에서 신속하게 붕해되는 정제, 또는 필름/웨이퍼제, 필름/동결건조 제제, 캡슐제 (예를 들어 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐제), 당의정, 과립제, 펠렛제, 산제, 유화액제, 현탁액제, 에어로졸제 또는 용액제이다.

비경구 투여는 흡수 단계 없이 수행될 수도 있고 (예를 들어 정맥내, 동맥내, 심장내, 척수내 또는 요추내(intralumbar)), 또는 흡수를 포함할 수도 있다 (예를 들어 근육내, 피하, 피내, 경피 또는 복강내). 비경구 투여에 적합한 투여 형태는 특히 용액제, 현탁액제, 유화액제, 동결건조 제제 또는 멸균 산제 형태의 주사 및 주입용 제제이다.

다른 투여 경로에 적합한 것은, 예를 들어 흡입용 제약 형태 (특히 분말 흡입제, 연무제), 점비제, 용액제 또는 분무제; 설측, 설하 또는 협측 투여용 정제, 필름/웨이퍼제 또는 캡슐제, 좌제, 눈 또는 귀를 위한 제제, 질 캡슐제, 수성 현탁액제 (로션제, 진탕 혼합물), 친지성 현탁액제, 연고제, 크림제, 경피 치료 시스템 (예를 들어 패치제), 밀크제, 페이스트, 발포제, 살포용 산제, 이식물 또는 스텐트이다.

경구 또는 비경구 투여가 바람직하고, 특히 경구 투여가 바람직하다.

본 발명에 따른 화합물은 상기 언급된 투여 형태로 전환될 수 있다. 이것은 불활성, 비-독성의 제약상 적합한 부형제와 혼합하여 공지된 방식으로 수행될 수 있다. 이들 부형제는 특히 담체 (예를 들어 미세결정질 셀룰로스, 락토스, 만니톨), 용매 (예를 들어 액체 폴리에틸렌 글리콜), 유화제 및 분산제 또는 습윤제 (예를 들어 나트륨 도데실 술페이트, 폴리옥시소르비탄 올레에이트), 결합제 (예를 들어 폴리비닐피롤리돈), 합성 및 천연 중합체 (예를 들어 알부민), 안정화제 (예를 들어 항-산화제, 예를 들어 아스코르브산), 착색제 (예를 들어 무기 안료, 예컨대 산화철) 및 향 및/또는 냄새 차폐제를 포함한다.

비경구 투여시에는 체중 1 kg 당 약 0.001 내지 5 mg, 바람직하게는 약 0.01 내지 1 mg의 양으로 투여하는 것이 효과적인 결과를 달성하는데 유리하다는 것이 일반적으로 입증되었고, 경구 투여시의 투여량은 체중 1 kg 당 약 0.01 내지 100 mg, 바람직하게는 약 0.01 내지 20 mg, 매우 특히 바람직하게는 0.1 내지 10 mg이다.

그럼에도 불구하고, 적절한 경우 특히 체중, 투여 경로, 활성 성분에 대한 개인의 반응, 제제의 성질 및 투여가 실시되는 시간 또는 간격의 함수로서 상기 언급된 양으로부터 벗어나는 것이 필요할 수 있다. 따라서, 일부 경우에서는 상기에서 언급한 최소량 미만으로 실시하는 것으로 충분할 수도 있고, 다른 경우에서는 상기에서 언급한 상한값을 초과해야 한다. 더 많은 양을 투여하는 경우에는 이것을 하루에 걸쳐서 복수개의 개별 투여량으로 나누는 것이 바람직할 수 있다.

하기하는 예시적인 실시양태는 본 발명을 설명한다. 본 발명은 하기 실시예로 제한되지 않는다.

달리 언급하지 않는다면, 하기 시험 및 실시예에서의 백분률(％) 데이타는 중량％이고, 부는 중량부이다. 액체/액체 용액에 대한 용매 비율, 희석률 및 농도 데이타는 각 경우에 부피를 기초로 한다.

A. 실시예

약어

CDI 카르보닐디이미다졸

d 일, (NMR에서는) 이중선

TLC 박층 크로마토그래피

DCI 직접 화학 이온화 (MS에서)

dd 이중의 이중선 (NMR에서)

DMAP 4-디메틸아미노피리딘

DMF N,N-디메틸포름아미드

DMSO 디메틸 술폭시드

eq. 균등물

ESI 전기분무 이온화 (MS에서)

h 시간

HPLC 고압, 고성능 액체 크로마토그래피

LC-MS 액체 크로마토그래피와 결합된 질량 분석법

m 다중선 (NMR에서)

min 분

MS 질량 분석법

NMR 핵 자기 공명 분광법

RP 역상 (HPLC에서)

RT 실온

R_t 체류 시간 (HPLC에서)

s 단일선 (NMR에서)

THF 테트라히드로푸란

LC-MS 및 HPLC 방법

방법 1 (HPLC): 기구: DAD 검출기가 장착된 HP 1100; 컬럼: 크로마실(Kromasil) 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 과염소산 (70％ 농도) 5 ml/물 1 L, 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 0 분 2％ B, 0.5 분 2％ B, 4.5 분 90％ B, 6.5 분 90％ B, 6.7 분 2％ B, 7.5 분 2％ B; 유속: 0.75 ml/분; 컬럼 온도: 30℃; 검출: UV 210 nm.

방법 2 (HPLC): 기구: DAD 검출기가 장착된 HP 1100; 컬럼: 크로마실 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; 이동상 A: 과염소산 (70％ 농도) 5 ml/물 1 L, 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 0 분 2％ B, 0.5 분 2％ B, 4.5 분 90％ B, 9 분 90％ B, 9.2 분 2％ B, 10 분 2％ B; 유속: 0.75 ml/분; 컬럼 온도: 30℃; 검출: UV 210 nm.

방법 3 (LC-MS): MS 기구 유형: 마이크로매스(Micromass) ZQ; HPLC 기구 유형: 워터스 얼라이언스 (Waters Alliance) 2795; 컬럼: 페노메넥스 시너지(Synergi) 2μ 히드로-RP 머큐리 20 mm x 4 mm; 이동상 A: 물 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml, 이동상 B: 아세토니트릴 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0 분 90％ A → 2.5 분 30％ A → 3.0 분 5％ A → 4.5 분 5％ A; 유속: 0.0 분 1 ml/분, 2.5 분/3.0 분/4.5 분 2 ml/분; 오븐: 50℃; UV 검출: 210 nm.

방법 4 (LC-MS): MS 기구 유형: 마이크로매스 ZQ; HPLC 기구 유형: HP 1100 시리즈; UV DAD; 컬럼: 페노메넥스 시너지 2μ 히드로-RP 머큐리 20 mm x 4 mm; 이동상 A: 물 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml, 이동상 B: 아세토니트릴 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0 분 90％ A → 2.5 분 30％ A → 3.0 분 5％ A → 4.5 분 5％ A; 유속: 0.0 분 1 ml/분, 2.5 분/3.0 분/4.5 분 2 ml/분; 오븐: 50℃; UV 검출: 210 nm.

방법 5 (LC-MS): 기구: HPLC 애질리언트 시리즈(Agilent series) 1100이 장착된 마이크로매스 쿼트로(Quattro) LCZ; 컬럼: 페노메넥스 시너지 2μ 히드로-RP 머큐리 20 mm x 4 mm; 이동상 A: 물 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml, 이동상 B: 아세토니트릴 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0 분 90％ A → 2.5 분 30％ A → 3.0 분 5％ A → 4.5 분 5％ A; 유속: 0.0 분 1 ml/분, 2.5 분/3.0 분/4.5 분 2 ml/분; 오븐: 50℃; UV 검출: 208 내지 400 nm.

방법 6 (LC-MS): MS 기구 유형: 마이크로매스 ZQ; HPLC 기구 유형: HP 1100 시리즈; UV DAD; 컬럼: 페노메넥스 제미니(Gemini) 3μ 30 mm x 3.00 mm; 이동상 A: 물 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml, 이동상 B: 아세토니트릴 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0 분 90％ A → 2.5 분 30％ A → 3.0 분 5％ A → 4.5 분 5％ A; 유속: 0.0 분 1 ml/분, 2.5 분/3.0 분/4.5 분 2 ml/분; 오븐: 50℃; UV 검출: 210 nm.

방법 7 (LC-MS): 기구: HPLC 애질리언트 시리즈 1100이 장착된 마이크로매스 플랫폼(Platform) LCZ; 컬럼: 설모 하이퍼실 골드(Thermo Hypersil GOLD) 3μ 20 mm x 4 mm; 이동상 A: 물 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml, 이동상 B: 아세토니트릴 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0 분 100％ A → 0.2 분 100％ A → 2.9 분 30％ A → 3.1 분 10％ A → 5.5 분 10％ A; 오븐: 50℃; 유속: 0.8 ml/분; UV 검출: 210 nm.

방법 8 (LC-MS): MS 기구 유형: 워터스 ZQ; HPLC 기구 유형: 워터스 얼라이언스 2795; 컬럼: 페노메넥스 오닉스 모노리틱(Onyx Monolithic) C18, 100 mm x 3 mm; 이동상 A: 물 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml, 이동상 B: 아세토니트릴 1 L + 50％ 농도의 포름산 0.5 ml; 구배: 0.0 분 90％ A → 2 분 65％ A → 4.5 분 5％ A → 6 분 5％ A; 유속: 2 ml/분; 오븐: 40℃; UV 검출: 210 nm.

방법 9 (GC-MS): 기구: 마이크로매스 GCT, GC6890; 컬럼: 레스테크(Restek) RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0.25 μm; 일정한 헬륨 흐름: 0.88 ml/분; 오븐: 60℃; 입구: 250℃; 구배: 60℃ (0.30 분간 지속), 50℃/분 → 120℃, 16℃/분 → 250℃, 30℃/분 → 300℃ (1.7 분간 지속).

방법 10 (GC-MS): 기구: 마이크로매스 GCT, GC6890; 컬럼: 레스테크 RTX-35, 15 m x 200 μm x 0.33 μm; 일정한 헬륨 흐름: 0.88 ml/분; 오븐: 70℃; 입구: 250℃; 구배: 70℃, 30℃/분 → 310℃ (3 분간 지속).

출발 물질

실시예 1A

5-클로로-N-[(2S)-옥시란-2-일메틸]티오펜-2-카르복스아미드

실시예 1A를 WO04/101557 (실시예 6A)에 기재된 바와 같이 제조하였다.

실시예 2A

3-(히드록시메틸)피리딘-2(1H)-온

실온에서, 헥사메틸디실란 23.2 g (144 mmol) 및 클로로트리메틸실란 0.781 g (7.19 mmol)을 톨루엔 100 ml 중 2-히드록시니코틴산 10.0 g (71.9 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 30분 동안 KPG 교반기로 교반하였다. 이어서, 혼합물을 -40℃로 냉각시키고, 디클로로메탄 중 디이소부틸알루미늄 수소화물 1 molar 용액 22.5 g (158 mmol)을 상기 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 해동시키고, 실온에서 18시간 동안 교반하고, 마지막으로 -10℃에서 희석된 염산으로 pH = 4까지 조정하고, 메탄올 500 ml를 첨가하여 온도가 -10℃를 초과하지 않도록 하였다. 형성된 침전물을 여과하고, 물 100 ml를 여액에 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하고, 침전물을 여과하였다. 여액을 농축하여 8.55 g (이론상 95％)의 목적 화합물을 수득하였다.

실시예 3A

3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)피리딘-2(1H)-온

실온에서, 이미다졸 0.65 g (9.59 mmol), t-부틸디페닐클로로실란 2.42 g (8.79 mmol) 및 DMAP 0.10 g (0.80 mmol)을 DMF 19 ml 중 실시예 2A로부터의 화합물 1.00 g (7.99 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 물 180 ml를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 유지하였다. 여과 후에, 얻어진 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (에틸 아세테이트/에틸디메틸아민 1000:1). 이로써 801 mg (이론상 27％)의 목적 화합물을 수득하였다.

실시예 4A

3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-1-(2-클로로-4-니트로페닐)피리딘- 2(1H)-온

0℃에서, 칼륨 tert-부톡시드 0.500 g (4.46 mmol)을 DMF 21 ml 중 실시예 3A로부터의 화합물 1.08 g (2.97 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 2-클로로-1-플루오로-4-니트로벤젠 0.571 g (3.27 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 4.5시간 후에, 물 200 ml를 첨가하고, 이어서 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 물로 세척한 다음, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 후에, 용매를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 9:1). 이로써 872 mg (이론상 56％)의 목적 화합물을 수득하였다.

실시예 5A

1-(4-아미노-2-클로로페닐)-3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 4A로부터의 화합물 800 mg (1.54 mmol)을 THF 48 ml 중에 용해시켰다. 이어서, 탄소 상 팔라듐 50 mg (0.05 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 수소 분위기에서 대기압하에 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 THF로 세척하고, 여액에서 용매를 제거하였다. 반응 생성물 (순도: 95％)을 추가 정제 없이 더 반응시켰다.

실시예 6A

N-{[(5S)-3-{4-[3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-클로로-페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 1A로부터의 화합물 386 mg (1.77 mmol)을 아세토니트릴 24 ml 중 실 시예 5A로부터의 화합물 789 mg (1.61 mmol)의 용액에 첨가하였다. 과염소산마그네슘 540 mg (2.42 mmol)을 상기 현탁액에 첨가하였다. 실온에서 19시간 후에, 실시예 1A로부터의 화합물 193 mg (0.952 mmol)을 첨가하고, 실온에서 추가 30시간 동안 계속 교반하였다. 이어서, 1,1'-카르보닐디이미다졸 523 mg (2.46 mmol) 및 DMAP 19 mg (0.09 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 가열하였다. 21시간 후에, 혼합물을 물, 포화 염화나트륨 수용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합친 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 후에, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 1:1). 이로써 533 mg (이론상 45％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 7A

3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-1-(2-메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

실시예 4A와 유사하게, 실시예 3A로부터의 화합물 1.50 g (4.13 mmol)을 2-플루오로-5-니트로톨루엔 704 mg (4.54 mmol)과 반응시켰다. 이로써 570 mg (이론상 28％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 8A

1-(4-아미노-2-메틸페닐)-3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 7A로부터의 화합물 555 mg (1.11 mmol)을 THF 15 ml 중에 용해시키고, 탄소 상 팔라듐 150 mg을 첨가하고, 이론량의 수소가 용해될 때까지 혼합물을 수소 분위기에서 대기압하에 수소화시켰다. 촉매를 여과하고, 이를 감압하에 농축한 후에 520 mg (이론상 99％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 9A

N-[((5S)-3-{4-[3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸-페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 8A로부터의 화합물 522 mg (1.11 mmol)을 아세토니트릴 10 ml 중에 용해시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 266 mg (1.22 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 과염소산마그네슘 373 mg (1.67 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 이어서, 1,1'-카르보닐디이미다졸 271 mg (1.67 mmol) 및 DMAP 14 mg (0.11 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 20시간 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 감압하에 농축하고, 물 및 tert-부틸 메틸 에테르를 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합친 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 562 mg (이론 상 71％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 10A

3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-1-(2-메톡시-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

실시예 4A와 유사하게, 실시예 3A로부터의 화합물 5.00 g (13.8 mmol)을 1-플루오로-2-메톡시-4-니트로벤젠 2.59 g (15.1 mmol)과 반응시켰다. 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (이동상 펜탄/에틸 아세테이트 = 5:1), 2.70 g (이론상 38％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 11A

1-(4-아미노-2-메톡시페닐)-3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)피리딘- 2(1H)-온

실시예 10A로부터의 화합물 2.60 g (5.05 mmol)을 실시예 8A와 유사하게 수소화시켰다. 이로써 2.40 g (이론상 95％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 12A

N-[((5S)-3-{4-[3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메톡시페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 6A와 유사하게, 실시예 11A로부터의 화합물 2.30 g (4.75 mmol)을 실 시예 1A로부터의 화합물과 반응시켰다. 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (이동상: 디클로로메탄/메탄올 = 25:1). 이로써 3.10 g (이론상 88％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 13A

3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-1-[4-니트로-2-(트리플루오로메틸)페닐]피리딘-2(1H)-온

실시예 4A와 유사하게, 실시예 3A로부터의 화합물 1.50 g (4.13 mmol)을 1-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 949 mg (4.54 mmol)과 반응시켰다. 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (이동상 펜탄/에틸 아세테이트 = 5:1), 1.00 g (이론상 44％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 14A

1-[4-아미노-2-(트리플루오로메틸)페닐]-3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 13A로부터의 화합물 1.00 g (1.81 mmol)을 실시예 8A와 유사하게 수소화시켰다. 이로써 930 mg (이론상 98％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 15A

N-[((5S)-3-{4-[3-({[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-(트리플루오로메틸)페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 6A와 유사하게, 실시예 14A로부터의 화합물 930 mg (1.78 mmol)을 실시예 1A로부터의 화합물과 반응시켰다. 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 405 mg (이론상 28％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 16A

3-브로모-1-(2-클로로-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

3-브로모피리딘-2(1H)-온 (문헌 [O. S. Tee, M. Pavent, J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 4142-4146]) 2.00 g (11.5 mmol)을 DMF 40 ml 중에 용해시켰다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 칼륨 tert-부톡시드 2.04 g (17.2 mmol, 95％ 농도)을 첨가하였다. 약 15분 후에, 빙조를 제거하고, 추가 30분 후에, 2-클로로-1-플루오로- 4-니트로벤젠 2.22 g (12.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액과 함께 진탕시키고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 펜탄 중에 현탁시키고, 흡입으로 여과하였다. 얻어진 고체를 시클로헥산/에틸 아세테이트 10:1과 함께 끓였다. 생성물을 흡입으로 여과하고, 시클로헥산/에틸 아세테이트 10:1로 세척하였다. 이로써 2.54 g (이론상 67％)의 목적 화합물을 수득하였다.

실시예 17A

1-(4-아미노-2-클로로페닐)-3-브로모피리딘-2(1H)-온

실시예 16A로부터의 화합물 2.00 g (6.07 mmol)을 메탄올 80 ml 중에 용해시켰다. 염화주석 이수화물 6.83 g (30.3 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류하에 2시간 동안 가열하였다. 이어서, 상기 용액을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 컬럼 여과 후에 (이동상 디클로로메탄:메탄올 = 25:1) 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 용액과 함께 진탕시켰다. 유기상을 황산나트륨 상에 서 건조시키고 농축하였다. 이로써 1.60 mg (이론상 87％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 18A

N-({(5S)-3-[4-(3-브로모-2-옥소피리딘-1(2H)-일)-3-클로로페닐]-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일}메틸)-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 17A로부터의 화합물 1.60 g (5.34 mmol)을 먼저 0℃에서 아세토니트릴 25 ml 중에 충전시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 1.28 g (5.88 mmol)을 첨가하였다. 과염소산마그네슘 1.79 g (8.01 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 이어서, 실시예 1A로부터의 화합물 추가 0.38 g (1.76 mmol) 및 과염소산마그네슘 0.54 g (2.4 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 추가 20시간 동안 교반하였다. 이어서, CDI 1.30 g (8.01 mmol) 및 DMAP 65 mg (0.53 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 20시간 동안 가열한 다음, 감압하에 농축하고, 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 유기상을 제거하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축하였다. 생성물을 메탄올로부터 재결정화하였다. 이로써 1.32 g (이론 상 45％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 19A

3-알릴-1-(2-클로로-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

실시예 16A로부터의 화합물 1.00 g (3.03 mmol), 세슘 플루오라이드 922 mg (6.07 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 디클로라이드 124 mg (152 mmol)을 먼저 탈기된 THF 20 ml 중에 충전시켰다. 2-알릴-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 765 mg (4.55 mmol)을 적가하고, 혼합물을 환류에서 밤새 가열하였다. 포화 중탄산나트륨 용액을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축하였다. 생성물을 제조용 HPLC로 정제하여 616 mg (이론상 70％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 20A

3-알릴-1-(4-아미노-2-클로로페닐)피리딘-2(1H)-온

실시예 17A와 유사하게, 실시예 19A로부터의 화합물 815 mg (2.80 mmol)을 염화주석으로 환원시켰다. 이로써 737 mg (이론상 99％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 21A

N-({(5S)-3-[4-(3-알릴-2-옥소피리딘-1(2H)-일)-3-클로로페닐]-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일}메틸)-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 18A와 유사하게, 실시예 20A로부터의 화합물 735 mg (2.82 mmol)을 실시예 1A로부터의 생성물과 반응시켰다. 생성물을 메탄올로부터의 재결정화에 의해 정제하였다. 이로써 826 mg (이론상 58％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 22A

3-브로모-1-(2-메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

3-브로모피리딘-2(1H)-온 44.5 g (280 mmol)을 무수 디메틸 술폭시드 750 ml 중에 용해시키고, 칼륨 tert-부톡시드 33.4 g (298 mmol)을 실온에서 조금씩 첨가하였다. 현탁액을 상기 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 1-플루오로-2-메틸-4-니트로벤젠 38.5 g (280 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 80℃에서 20시간 동안 가열하였다. 용액을 냉각시키고, 물로 조심스럽게 희석시켰다. 생성된 결정질 침전물을 여과하고, 약간의 물로 세척하고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 62 g (이론상 80％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 23A

1-(2-메틸-4-니트로페닐)-3-비닐피리딘-2(1H)-온

실시예 22A로부터의 화합물 50 g (162 mmol)을 무수 디옥산 700 ml 중에 용해시키고, 트리부틸비닐주석 62 g (194 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 4.7 g (4 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 15시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 합친 여액을 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔에 적용하고, 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 실리카겔 800 g 상에서 크로마토그래피하였다. 이로써 27 g (이론상 62％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 24A

3-(2-히드록시에틸)-1-(2-메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

얼음-냉각시키면서, 테트라히드로푸란 650 ml 중 9-보라바이시클로[3.3.1]노 난 40 g (326 mmol)의 용액을 45분에 걸쳐 실시예 23A로부터의 화합물 38 g (148 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 상기 온도에서 추가 시간 동안 교반한 다음, 물 740 ml 중 수산화나트륨 30 g (747 mmol)의 용액을 15 분에 걸쳐 첨가하였다. 30％ 농도의 과산화수소 용액 151 ml를 첨가하여 온도가 30℃를 초과하지 않도록 하였다. 첨가를 종결한 후에, 냉각을 제거하고, 추가 30분 동안 계속 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 반복적으로 추출하고, 합친 유기상을 중아황산나트륨 780 g (1.63 mol)의 용액으로 세척하고, 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 다시 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔에 적용하고, 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 38 g (이론상 93％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 25A

3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-1-(2-메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

실시예 24A로부터의 화합물 38 g (138 mmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 200 ml 중에 용해시키고, 이미다졸 12.2 g (198 mmol) 및 조금씩 tert-부틸(클로로)디페닐실란 46 g (135 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반한 다음, 물로 희석시키고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔에 적용하고, 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 증발 건조시켰다. 이로써 62 g (이론상 88％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 26A

1-(4-아미노-2-메틸페닐)-3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 25A로부터의 화합물 62 g (121 mmol)을 에탄올 및 에틸 아세테이트 1:1 혼합물 2 l 중에 용해시키고, 암모늄 포르메이트 46 g (726 mmol) 및 탄소 상 팔라듐 0.6 g을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 가열하였다. 45분 후에, 혼합물을 냉각시키고, 실리카겔을 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 여액을 감압하에 증발 건조시켰다. 이로써 36 g (이론상 61％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 27A

N-[((5S)-3-{4-[3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸-페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 26A로부터의 화합물 35.6 g (74.1 mmol)을 무수 아세토니트릴 800 ml 중에 용해시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 19 g (89 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 과염소산마그네슘 25 g (110 mmol)을 첨가하고, 냉각을 제거하고, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 1,1-카르보닐디이미다졸 24 mg (148 mmol) 및 N,N-디메틸아미노피리딘 180 mg (1.4 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 용매를 감압하에 증발시켰다. 이어서, 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 물로 세척하고, 포화 염화나트륨 용액으로 3회 세척하였다. 황산마그네슘 상에서 건조시킨 후에, 혼합물을 여과하고, 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔에 적용하고, 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 증발 건조시켰다. 이로써 46.4 g (이론상 84％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 28A

3-브로모-1-(2-메톡시-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

3-브로모피리딘-2(1H)-온 70 g (403 mmol)을 무수 디메틸 술폭시드 1 l 중에 용해시키고, 칼륨 tert-부톡시드 54 g (484 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 현탁액을 상기 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 1-플루오로-2-메톡시-4-니트로벤젠 69 g (403 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 80℃에서 20시간 동안 가열하였다. 조심스럽게, 혼합물을 물 5 l로 희석시켰다. 침전된 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 103 g (이론상 72％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 29A

1-(2-메톡시-4-니트로페닐)-3-비닐피리딘-2(1H)-온

실시예 28A로부터의 화합물 100 g (308 mmol)을 무수 디옥산 1.4 l 중에 용해시키고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 8.9 g (7.7 mmol) 및 트리부틸비닐주석 117 g (370 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 16시간 동안 가열하였다. 이어서, 반응 용액을 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 여액을 감압하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 결정화가 시작될 때까지 석유 에테르를 첨가하였다. 결정을 여과하고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 37 g (이론상 41％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 30A

3-(2-히드록시에틸)-1-(2-메톡시-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

0℃에서, 테트라히드로푸란 600 ml 중 9-보라바이시클로[3.3.1]노난 36 g (299 mmol)의 용액을 실시예 29A로부터의 화합물 37 g (136 mmol)에 45분에 걸쳐 첨가하였다. 상기 온도에서 추가 시간 후에, 수산화나트륨 27 g (680 mmol) 용액 (물 중 1N)을 15 분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 추가 5분 동안 교반한 다음, 30％ 농도의 과산화수소 용액 125 ml를 첨가하여 온도가 30℃를 넘지 않도록 하였다. 냉각을 제거하고, 혼합물을 추가 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이 트로 반복적으로 추출하고, 합친 유기상을 중아황산나트륨 730 g (1.50 mol)의 용액으로 세척하고, 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 재추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에 흡수시키고, 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 크로마토그래피하였다. 생성물 분획을 합치고, 감압하에 증발 건조시켰다. 결정화 동안, tert-부틸 메틸 에테르를 첨가하였다. 결정을 여과하고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 24 g (이론상 60％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 31A

3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-1-(2-메톡시-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

실시예 30A로부터의 화합물 24 g (81 mmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 200 ml 중에 용해시키고, 이미다졸 7.2 g (106 mmol) 및 tert-부틸(클로로)디페닐 실란 27 g (98 mmol)을 첨가하였다. 16시간 후에, 혼합물을 물 1.2 l로 희석시키고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 물로 2회 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하였다. 결정화를 위해, tert-부틸 메틸 에테르를 첨가하고, 생성된 결정을 여과하고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 30 g (이론상 67％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 32A

1-(4-아미노-2-메톡시페닐)-3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 31A로부터의 화합물 25 g (48 mmol)을 에탄올 및 에틸 아세테이트 1:1 혼합물 800 ml 중에 용해시키고, 암모늄 포르메이트 18 g (286 mmol) 및 탄소 상 팔라듐 800 mg을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 가열하였다. 60분 후에, 혼합물을 냉각시키고, 실리카겔을 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 여액을 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 27 g (이론상 98％)의 목적 생성물을 수득하였다.

MS (ESIpos): m/z = 499 (M+H)⁺

실시예 33A

N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메톡시-페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 32A로부터의 화합물 29 g (58 mmol)을 무수 아세토니트릴 600 ml 중에 용해시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 15 g (69 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 과염소산마그네슘 19 g (87 mmol)을 첨가하고, 냉각을 제거하고, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 이어서, 1,1-카르보닐디이미다졸 19.0 g (116 mmol) 및 N,N-디메틸아미노피리딘 141 mg (1.21 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 가열하였다. 2시간 후에, 혼합물을 냉각시키고, 용매를 감압하에 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 물로 세척하고, 포화 염화나트륨 용액으로 3회 세척하였다. 황산마그네슘 상에서 건조시킨 후에, 혼합물을 여과하고, 감압하 에 증발 건조시켰다. 잔류물을 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 37 g (이론상 85％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 34A

2-(브로모메틸)-1-플루오로-4-니트로벤젠

2-플루오로-5-니트로톨루엔 186 g (1.20 mol)을 사염화탄소 1.2 l 중에 용해시키고, N-브로모숙신이미드 214 g (1.20 mol)을 첨가하였다. 아조디이소부티로니트릴 19.7 g (120 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류하에 가열하였다. 16시간 후에, 혼합물을 냉각시키고, 여과하고, 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 300 ml 중에 용해시키고, 시 샌드(sea sand) 300 g을 첨가하였다. 이어서, 한번 더, 혼합물을 감압하에 농축 건조시키고, 잔류물을 1 kg 실리카겔 컬럼에 적용하였다. 생성물을 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 20:1 혼합물을 사용하여 크로마토그래피하고, 생성물 분획을 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 시클로헥산으로 결정화시키고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 92 g (이론상 32％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 35A

1-플루오로-2-(메톡시메틸)-4-니트로벤젠

실시예 34A로부터의 화합물 30 g (128 mmol)을 무수 톨루엔 1.3 l 중에 용해시키고, 은(I) 옥시드 45 g (192 mmol) 및 무수 메탄올 24.6 g (769 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 냉각시키고, 실리카겔을 통해 여과하였다. 생성물을 시클로헥산 및 시클로헥산/에틸 아세테이트 25:1의 구배를 사용하여 분획으로 용출시켰다. 생성물 분획을 감압하에 증발 건조시키고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 17 g (이론상 72％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 36A

3-브로모-1-[2-(메톡시메틸)-4-니트로페닐]피리딘-2(1H)-온

3-브로모-2-히드록시피리딘 38 g (391 mmol)을 무수 디메틸 술폭시드 1250 ml 중에 용해시키고, 칼륨 tert-부톡시드 53 g (469 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 추가 시간 동안 교반한 다음, 실시예 35A로부터의 화합물 72.4 g (391 mmol)을 첨가하였다. 첨가를 종결한 후에, 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 냉각시키고, 실온에서 추가 16시간 동안 계속 교반하였다. 이어서, 반응 용액을 15℃로 냉각시키고, 상기 온도에서 pH를 1N 염산으로 pH = 3까지 조심스럽게 조정하였다. 물 4 l를 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 2 l로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 이어서, 용액을 감압하에 증발 건조시키고, tert-부틸 메틸 에테르를 결정화를 위해 첨가하였다. 결정을 여과하고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 94 g (이론상 71％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 37A

1-[2-(메톡시메틸)-4-니트로페닐]-3-비닐피리딘-2(1H)-온

실시예 36A로부터의 화합물 94 g (277 mmol)을 무수 디옥산 1.2 l 중에 용해시키고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 8 g (6.9 mmol)을 첨가하였다. 실온에서, 트리부틸비닐주석 105 g (333 mmol)을 서서히 첨가하고, 첨가를 종결한 후에, 혼합물을 환류에서 21시간 동안 가열하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 합친 유기 여액을 감압하에 농축 건조시켰다. 남아있는 잔류물를 디클로로메탄 중에 용해시키고, 규조토에 적용하였다. 생성물을 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 실리카겔 1.2 kg 상에서 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 23 g (이론상 29％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 38A

3-(2-히드록시에틸)-1-[2-(메톡시메틸)-4-니트로페닐]피리딘-2(1H)-온

실시예 37A로부터의 화합물 23 g (80 mmol)을 무수 테트라히드로푸란 80 ml 중에 용해시키고, 5℃로 냉각시켰다. 15분에 걸쳐, 9-보라바이시클로[3.3.1]노난 (테트라히드로푸란 중 0.5M 용액) 21 g (176 mmol)을 첨가하였다. 냉각을 제거하고, 혼합물을 실온에서 추가 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 5℃로 다시 냉각시키고, 1N 수산화나트륨 수용액 400 ml를 첨가하였다. 첨가를 종결한 후에, 30％ 농도의 과산화수소 용액 81 ml를 상기 온도에서 조금씩 첨가하였다. 에틸 아세테이트 500 ml로 희석시킨 후에, 혼합물을 40％ 농도의 중아황산나트륨 용액 32 ml로 희석시켜 퍼옥시드를 분해하였다. 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 4회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 후에, 감압하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 20 g (이론상 77％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 39A

3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-1-[2-(메톡시메틸)-4-니트로페닐]피리딘-2(1H)-온

실시예 38A로부터의 화합물 20 g (65 mmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 75 ml 중에 용해시키고, 빙냉시키면서, 먼저 이미다졸 5.3 g (78 mmol) 및 이어서 3분에 걸쳐 조금씩 tert-부틸디페닐클로로실란 19 g (72 mmol)을 첨가하였다. 냉각을 제거하고, 혼합물을 실온에서 추가 19시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물로 3회 세척하고, 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하였다. 이어서, 혼합물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축 건조시켰다. tert-부틸 메틸 에테르를 잔류물에 첨가하고, 생성된 결정을 여과하고, 감압하에 건조시켰다. 이로써 39 g (이론상 90％)의 목적 생성물을 수득하 였다.

실시예 40A

1-[4-아미노-2-(메톡시메틸)페닐]-3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 39A로부터의 화합물 25 g (48 mmol)을 에틸 아세테이트 500 ml 및 에탄올 500 ml 중에 용해시켰다. 암모늄 포르메이트 18 g (286 mmol) 및 탄소 상 팔라듐 1 g을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 45분 동안 가열하였다. 이어서, 반응 용액을 냉각시키고, 실리카겔을 통해 여과하였다. 여액을 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 25 g (이론상 100％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 41A

N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-(메톡시-메틸)페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 40A로부터의 화합물 25 g (47 mmol)을 무수 아세토니트릴 500 ml 중에 용해시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 15 g (61 mmol) 및 과염소산마그네슘 16 g (71 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 실시예 1A로부터의 화합물 추가 1 g (4.1 mmol)을 첨가하였다. 21시간 후에, 카르보닐디이미다졸 15.3 g (95 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 116 mg (0.65 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 3.5시간 동안 가열하였다. 이어서, 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 800 ml 중에 용해시켰다. 용액을 물로 세척하고, 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음, 감압하에 농축하였다. 잔류물을 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 실리카겔 상에서 분리하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 26.5 g (이론상 72％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 42A

(2-플루오로-5-니트로벤질)(트리페닐)포스포늄 브로마이드

실시예 34A로부터의 화합물 20 g (85.5 mmol)을 무수 톨루엔 250 ml 중에 용해시키고, 트리페닐포스핀 22.4 g (85.5 mmol)을 첨가하였다. 용액을 환류하에 16시간 동안 가열하면, 침전물이 형성되었다. 혼합물을 냉각시키고, 침전물을 여과하였다. 디에틸 에테르로 세척한 후에, 침전물을 감압하에 건조시켰다. 이로써 39 g (이론상 92％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 43A

1-플루오로-4-니트로-2-[프로프-1-엔-1-일]벤젠

10℃에서, 나트륨 비스(트리메틸실릴)아미드 5.99 g (32.7 mmol)을 디옥산 145 ml 중 실시예 42A로부터의 화합물 13.5 g (27.3 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 상기 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 디옥산 5 ml 중 아세트알데히드 2.40 g (54.5 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 물 400 ml를 첨가하고, 혼합물을 디클로로메탄으로 3회 추출하고, 합친 유기상을 포화 염화나트륨 수용액으로 2회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고 이후 여과한 후에, 용매를 감압하에 제거하였다. 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (이동상: 시클로헥산/에틸 아세테이트 = 40:1). 이로써 5.2 g (이론상 100％)의 목적 생성물을 E/Z 이성질체 혼합물로서 수득하였다.

실시예 44A

3-브로모-1-{4-니트로-2-[(1E)-프로프-1-엔-1-일]페닐}피리딘-2(1H)-온

3-브로모피리딘-2(1H)-온 0.96 g (5.52 mmol)을 DMSO 17 ml 중에 용해시켰다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 칼륨 tert-부톡시드 1.00 g (5.52 mmol)을 첨가하여 내부 온도가 30℃를 넘지 않도록 하였다. 실온에서 1시간 후에, DMSO 5 ml 중 실시예 43A로부터의 화합물 1.00 g (5.52 mmol)의 용액을 첨가하였다. 80℃에서 3시간 후에, 물 200 ml 및 염화나트륨 용액 50 ml를 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (이동상: 시클로헥산/에틸 아세테이트 = 4:1). 이로써 935 mg (이론상 49％)의 목적 화합물을 E/Z 이성질체 혼합물로서 수득하였다.

실시예 45A

1-{4-니트로-2-[(1E)-프로프-1-엔-1-일]페닐}-3-비닐피리딘-2(1H)-온

실시예 44A로부터의 화합물 929 mg (2.77 mmol)을 무수 디옥산 14 ml 중에 용해시키고, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 64 mg (0.06 mmol)을 첨가하였다. 실온에서, 트리부틸비닐 주석 1.06 g (3.33 mmol)을 서서히 첨가하고, 첨가를 종결한 후에, 혼합물을 환류에서 21시간 동안 가열하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 이어서, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 합친 유기 추출물을 감압하에 농축 건조시켰다. 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (이동상: 시클로헥산/에틸 아세테이트 = 4:1). 이로써 568 mg (이론상 70％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 46A

3-(2-히드록시에틸)-1-{4-니트로-2-[(1E)-프로프-1-엔-1-일]페닐}피리딘-2(1H)-온

실시예 45A로부터의 화합물 452 g (1.60 mmol)을 무수 테트라히드로푸란 1.7 ml 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 9-보라바이시클로[3.3.1]노난 488 mg (176 mmol) (테트라히드로푸란 중 0.5M 용액)을 서서히 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0℃로 다시 냉각시키고, 1N 수산화나트륨 수용액 8 ml를 서서히 첨가하였다. 첨가를 종결한 후에, 30％ 농도의 과산화수소 용액 1.6 ml를 상기 온도에서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 40％ 농도의 중아황산나트륨 용액 1.3 ml로 세척하여 퍼옥시드를 분해하고, 에틸 아세테이트 500 ml로 희석시켰다. 유기상을 제거하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과 후에, 감압하에 농축 건조시켰다. 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (이동상: 시클로헥산/에틸 아세테이트 = 2:1). 이로써 514 mg (이론상 100％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 47A

1-(4-아미노-2-프로필페닐)-3-(2-히드록시에틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 46A로부터의 화합물 520 mg (1.73 mmol)을 THF 10 ml 중에 용해시켰다. 탄소 상 팔라듐 30 mg을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 수소 분위기에서 대기압하에 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 THF로 3회 세척하고, 여액에서 용매를 제거하였다. 반응 생성물을 추가 정제 없이 더 반응시켰다. 이로써 471 mg (이론상 89％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 48A

3-알릴-1-(2-메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

가열로 건조된 플라스크에서, 실시예 22A로부터의 화합물 1.50 g (4.85 mmol), 세슘 플루오라이드 1.44 g (9.46 mmol) 및 테트라키스-(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 0.561 g (0.48 mmol)을 탈기된 THF 30 ml 중에 먼저 충전시켰다. 탈기된 THF 5 ml 중 2-알릴-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 2.04 g (12.1 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 환류에서 밤새 가열하였다. 이어서, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 물을 첨가하였다. 상을 분리한 후에, 수성상을 디클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축하였다. 생성물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 1.18 g (이론상 62％)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 49A

3-(3-히드록시프로필)-1-(2-메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

0℃에서, THF 중 9-보라바이시클로[3.3.1]노난 0.5 molar 용액 18.5 ml (9.25 mmol)를 THF 4 ml 중 실시예 48A로부터의 화합물 1.00 g (3.70 mmol)에 서서히 적가하였다. 실온에서 1시간 후에, 혼합물을 0℃로 다시 냉각시키고, 물 중 수산화나트륨 1 molar 용액 18.5 ml (18.5 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 추가 30분 동안 교반한 다음, 30％ 농도의 과산화수소 용액 3.24 ml를 첨가하여 온도가 30℃를 넘지 않도록 하였다. 혼합물을 30분 동안 빙냉시키면서 교반한 다음, 에틸 아세테이트 및 이어서 중아황산나트륨 용액 11 g (40 mmol)을 첨가하였다. 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음, 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 1:4). 이로써 1.03 g (이론상 83％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 50A

1-(4-아미노-2-메틸페닐)-3-(3-히드록시프로필)피리딘-2(1H)-온

실시예 49A로부터의 화합물 475 mg (1.65 mmol)을 THF 48 ml 중에 용해시켰다. 이어서, 탄소 상 팔라듐 50 mg (0.05 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 수소 분위기에서 대기압하에 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 THF로 3회 세척하고, 여액에서 용매를 제거하였다. 반응 생성물을 추가 정제 없이 더 반응시켰다.

실시예 51A

3-브로모-1-(2,6-디메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

3-브로모피리딘-2(1H)-온 (문헌 [O. S. Tee, M. Pavent, J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 4142-4146]) 2.81 g (16.1 mmol)을 DMF 100 ml 중에 용해시켰다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 칼륨 tert-부톡시드 2.71 g (24.2 mmol)을 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1-플루오로-2,5-디메틸-4-니트로벤젠 3.00 g (17.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 18시간 동안, 100℃에서 36시간 동안 및 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 4:1). 이로써 2.04 g (이론상 38％)의 목적 화합물을 수득하였다.

실시예 52A

1-(2,6-디메틸-4-니트로페닐)-3-비닐피리딘-2(1H)-온

실시예 51A로부터의 화합물 2.00 g (6.19 mmol)을 무수 디옥산 31 ml 중에 용해시키고, 트리부틸비닐주석 2.36 g (7.42 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 143 mg (0.124 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 3회 세척하고, 합친 여액을 감압하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 4:1). 이로써 846 mg (이론상 51％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 53A

1-(2,6-디메틸-4-니트로페닐)-3-(2-히드록시에틸)피리딘-2(1H)-온

빙냉시키면서, 테트라히드로푸란 14.8 ml 중 9-보라바이시클로[3.3.1]노난 902 mg (7.40 mmol)의 용액을 실시예 52A로부터의 화합물 800 mg (2.96 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시키고, 수산화나트륨 591 mg (14.8 mmol)의 수용액을 15 분에 걸쳐 첨가하였다. 30％ 농도의 과산화수소 용액 2.60 ml를 첨가하여 온도가 30℃를 넘지 않도록 하였다. 첨가를 종결한 후에, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 빙냉시키면서, 물 12 ml 중 중아황산나트륨 8.73 g (32.6 mol)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 50 ml로 희석시키고, 유기상을 제거하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 1:2). 이로써 765 mg (이론상 89％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 54A

3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-1-(2,6-디메틸-4-니트로페닐)피리딘-2(1H)-온

실시예 53A로부터의 화합물 760 mg (2.64 mmol) 및 트리에틸아민 0.55 ml (3.9 mmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 7 ml 중에 용해시켰다. 4-디메틸아미노피리딘 16 mg (0.13 mmol) 및 tert-부틸(클로로)디페닐실란 1.09 g (3.95 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물에 첨가하고, 상 분리 후에, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 물로 2회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 5:1). 이로써 971 mg (이론상 58％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 55A

1-(4-아미노-2,6-디메틸페닐)-3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)피리딘-2(1H)-온

실시예 54A로부터의 화합물 970 mg (1.84 mmol)을 THF 20 ml 중에 용해시켰다. 이어서, 탄소 상 팔라듐 200 mg을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 수소 분위기에서 대기압하에 수소화시켰다. 이어서, 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 THF로 3회 세척하고, 여액에서 용매를 제거하였다. 반응 생성물 (1.00 g)을 추가 정제 없이 더 반응시켰다.

실시예 56A

N-[((5S)-3-{4-[3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3,5-디메틸-페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

실시예 55A로부터의 화합물 800 mg (1.61 mmol)을 무수 아세토니트릴 15 ml 중에 용해시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 385 g (1.77 mmol) 및 과염소산마그네슘 539 mg (2.41 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 1,1-카르보닐디이미다졸 652 mg (4.03 mmol) 및 N,N-디메틸아미노피리딘 19 mg (0.16 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 물 100 ml 및 에틸 아세테이트 100 ml에 첨가하였다. 상 분리 후에, 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합친 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 후에, 혼합물을 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (시클로헥산/에틸 아세테이트 1:2). 이로써 664 mg (이론상 55％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실행 실시예

실시예 1

5-클로로-N-{[(5S)-3-{3-클로로-4-[3-(히드록시메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}티오펜-2-카르복스아미드

테트라부틸암모늄 플루오라이드 367 mg (1.41 mmol; THF 중 1 molar)을 THF 8 ml 중 실시예 6A로부터의 화합물 515 mg (0.703 mmol)의 용액에 첨가하였다. 실온에서 3시간 후에, 혼합물을 물, 포화 염화나트륨 수용액 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 수성상을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합친 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 후에, 혼합물에서 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (디클로로메탄/메탄올 20:1). 이로써 278 mg (이론상 78％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 2

5-클로로-N-[((5S)-3-{4-[3-(히드록시메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]티오펜-2-카르복스아미드

실시예 9A로부터의 화합물 530 mg (0.74 mmol)을 THF 9 ml 중에 용해시켰다. THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드 1 molar 용액 1.5 ml를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 약간의 물을 첨가하고, 혼합물을 농축하고, 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 335 mg (이론상 93％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 3

5-클로로-N-[((5S)-3-{4-[3-(히드록시메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메톡시페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]티오펜-2-카르복스아미드

실시예 2와 유사하게, 실시예 12A로부터의 화합물 491 mg (0.67 mmol)을 THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드로 탈실릴화시켰다. 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 287 mg (이론상 87％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 4

5-클로로-N-({(5S)-3-[4-[3-(히드록시메틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-(트리플루오로메틸)페닐]-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일}메틸)티오펜-2-카르복스아미드

실시예 2와 유사하게, 실시예 15A로부터의 화합물 370 mg (0.48 mmol)을 THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드로 탈실릴화시켰다. 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 200 mg (이론상 78％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 5

5-클로로-N-[((5S)-3-{3-클로로-4-[3-(2-히드록시에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]티오펜-2-카르복스아미드

실시예 21A로부터의 화합물 400 mg (0.79 mmol)을 THF 6 ml와 물 4 ml의 혼합물 중에 용해시켰다. tert-부탄올 중 사산화오스뮴 2.5 molar 용액 161 mg (0.016 mmol) 및 과요오드산나트륨 509 mg (2.38 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물로 희석시키고, 디클로로메탄 으로 추출하고, 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 THF 4 ml와 물 4 ml의 혼합물 중에 용해시키고, 붕수소화나트륨 30.0 mg (0.79 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 물로 희석시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기상을 건조시키고, 농축하고, 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 47 mg (이론상 12％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 6

5-클로로-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-히드록시에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]티오펜-2-카르복스아미드

빙냉시키면서, 메탄올 중 1.25N 염산 400 ml를 실시예 27A로부터의 화합물 43.8 g (60.3 mmol)에 첨가하였다. 1시간 후에, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시킨 다음, 수성상을 제거하였다. 유기상을 물로 2회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과 후에, 감압하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔에 적용하고, 시클로헥산 및 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 19.6 g (이론상 66％)의 목적 생성물을 수득하였다.

MS (ESIpos): m/z = 488 (M+H)⁺

실시예 7

5-클로로-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-히드록시에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메톡시페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}티오펜-2-카르복스아미드

0℃에서, 실시예 33A로부터의 화합물 37 g (49 mmol)을 메탄올 중 1.25N 염산 313 ml 중에 용해시켰다. 1시간 후에, 용액을 감압하에 증발시키고, 디클로로메탄으로 희석시켰다. 유기상을 물로 2회 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 후에, 감압하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 및 메탄올의 구배를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다. 생성물 분획을 합치고, 감압하에 증발 건조시켰다. 이로써 19 g (이론상 78％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 8

N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시}에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-(메톡시메틸)페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}-5-클로로티오펜-2-카르복스아미드

빙냉시키면서, 메탄올 중 1.25N 염산 135 ml를 실시예 41A로부터의 화합물 27 g (34 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 상기 온도에서 추가 45분 동안 교반하였다. 빙냉시키면서, pH를 1N 수산화나트륨 수용액을 사용하여 7까지 조정하고, 차가운 용액을 디클로로메탄으로 반복적으로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 혼합물을 감압하에 증발 건조시키고, 잔류물을 디클로로메탄 및 메탄올의 구배를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다. 생성물-함유 분획을 합치고, 감압하에 농축 건조시켰다. 이로써 16.4 g (이론상 89％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 9

5-클로로-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-히드록시에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-프로필페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}티오펜-2-카르복스아미드

실시예 47A로부터의 화합물 450 mg (1.65 mmol)을 무수 아세토니트릴 10 ml 중에 용해시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 395 mg (1.82 mmol) 및 과염소산마그네슘 552 mg (2.47 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 카르보닐디이미다졸 669 mg (4.13 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 20 mg (0.16 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 3시간 동안 가열하였다. 실온에서 18시간 후에, 4-디메틸아미노피리딘 10 mg (0.08 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물 100 ml에 첨가하고, 에틸 아세테이트 50 ml로 희석시켰다. 상 분리 후에, 수성상을 에틸 아세테이트 50 ml로 2회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음, 감압하에 농축하였다. 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합 물을 사용하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 28 mg (이론상 3％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 10

5-클로로-N-{[(5S)-3-{4-[3-(3-히드록시프로필)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3-메틸페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일]메틸}티오펜-2-카르복스아미드

실시예 50A로부터의 화합물 580 mg (2.24 mmol)을 무수 아세토니트릴 12.7 ml 중에 용해시키고, 실시예 1A로부터의 화합물 538 mg (2.47 mmol) 및 과염소산마그네슘 751 mg (3.37 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 카르보닐디이미다졸 437 mg (2.69 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 27 mg (0.23 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 18시간 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 물 100 ml에 첨가하고, 에틸 아세테이트 50 ml로 3회 추출하였다. 합친 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음, 감압하에 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다. 이로써 175 mg (이론상 16％)의 목적 생성물을 수득하였다.

실시예 11

5-클로로-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-히드록시에틸)-2-옥소피리딘-1(2H)-일]-3,5-디메틸페닐}-2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)메틸]티오펜-2-카르복스아미드

실시예 56A로부터의 화합물 660 mg (0.891 mmol)을 THF 20 ml 중에 용해시키고, 테트라부틸암모늄 플루오라이드 512 mg (1.96 mmol)를 첨가하였다. 1시간 후에, 혼합물을 감압하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (디클로로메탄/메탄올 10:1; 1％ 트리에틸아민). 이로써 396 mg (이론상 85％)의 목적 생성물을 수득하였다.

B. 약리 활성의 평가

혈전색전성 질환을 치료하는데 있어서의 본 발명에 따른 화합물의 적합성은 이하의 검정 시스템을 이용하여 증명할 수 있다:

a) 시험 기재 (시험관 내)

a.1) 완충액 중에서의 인자 Xa 억제의 측정

상기에서 열거한 물질이 인자 Xa를 억제하는지 판단하기 위하여 생물학적 시험 시스템을 구축하고, 인자 Xa 기질의 전환을 이용하여 인간 인자 Xa의 효소적 활성을 판단하였다. 여기서는 인자 Xa가 펩티드 기질로부터 아미노메틸쿠마린을 절단하고, 이것은 형광으로 측정된다. 판단은 미세역가 플레이트에서 행하였다.

시험 물질을 디메틸 술폭시드 중에 다양한 농도로 용해시키고, 인간 인자 Xa (트리스 완충액 [C,C,C-트리스(히드록시메틸)아미노메탄] 50 mmol/L, 염화 나트륨 100 mmol/L, 염화 칼슘 5 mmol/L, 0.1％ BSA (소 혈청 알부민) 중에 1.3 nmol/L로 용해시킨 것. pH 7.4)와 함께 22℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 기질 (바켐(Bachem)의 Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC 5 μmol/L)을 첨가하였다. 30분 동안 인큐베이션한 후에, 샘플을 360 nm의 파장에서 여기시키고, 460 nm에서의 방출을 측정하였다. 시험 물질을 함유하는 시험 배치에서 측정된 방출을 시험 물질을 함유하지 않는 대조군 배치 (디메틸 술폭시드 중에 시험 화합물 대신 디메틸 술폭시드 만이 존재하는 것)와 비교하고, 농도/활성 관계로부터 IC₅₀ 값을 계산하였다.

a.2) 완충액 중에서의 트롬빈 억제의 측정

상기에서 열거한 물질이 트롬빈을 억제하는지 판단하기 위하여 생물학적 시험 시스템을 구축하고, 트롬빈 기질의 전환을 이용하여 인간 트롬빈의 효소적 활성을 판단하였다. 여기서는 트롬빈이 펩티드 기질로부터 아미노메틸쿠마린을 절단하고, 이것은 형광으로 측정된다. 판단은 미세역가 플레이트에서 행하였다.

시험 물질을 디메틸 술폭시드 중에 다양한 농도로 용해시키고, 인간 트롬빈 (트리스 완충액 [C,C,C-트리스(히드록시메틸)아미노메탄] 50 mmol/L, 염화 나트륨 100 mmol/L, 0.1％ BSA (소 혈청 알부민) 중에 0.06 nmol/L로 용해시킨 것. pH 7.4)와 함께 22℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 기질 (바켐의 Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC 5 μmol/L)을 첨가하였다. 30분 동안 인큐베이션한 후에, 샘플을 360 nm의 파장에서 여기시키고, 460 nm에서의 방출을 측정하였다. 시험 물질을 함유하는 시험 배치에서 측정된 방출을 시험 물질을 함유하지 않는 대조군 배치 (디메틸 술폭시드 중에 시험 화합물 대신 디메틸 술폭시드 만이 존재하는 것)와 비교하고, 농도/활성 관계로부터 IC₅₀ 값을 계산하였다.

a.3) 선택성 판단

트롬빈 및 인자 Xa 억제에 대한 물질의 선택성을 증명하기 위해, 시험 물질이 다른 인간 세린 프로테아제, 예컨대 인자 XIIa, 인자 XIa, 트립신 및 플라스민을 억제하는지를 조사하였다. 인자 XIIa (콜디아(Kordia), 10 nmol/l), 인자 XIa (콜디아 0.4 nmol/L), 트립신 (시그마(Sigma), 83 mU/ml) 및 플라스민 (콜디아, 0.1 μg/ml)의 효소 활성을 판단하기 위해, 이들 효소를 용해시키고 (트리스 완충 액 [C,C,C-트리스(히드록시메틸)아미노메탄] 50 mmol/l, 염화 나트륨 100 mmol/l, 0.1％ BSA [소 혈청 알부민], 염화 칼슘 5 mmol/l, pH 7.4), 디메틸 술폭시드 중에 다양한 농도로 존재하는 시험 물질 및 시험 물질을 함유하지 않는 디메틸 술폭시드와 함께 15분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 적절한 기질 (인자 XIIa에 대해서는 바켐의 H-Pro-Phe-Arg-AMC 5 μmol/l, 트립신에 대해서는 바켐의 Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC 5 μmol/l, 인자 XIa에 대해서는 바켐의 Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC 5 μmol/l 및 플라스민에 대해서는 바켐의 MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC 50 μmol/l)을 첨가하는 것에 의해 효소 반응이 시작되었다. 22℃에서 30분 인큐베이션한 후, 형광을 측정하였다 (여기: 360 nm, 방출: 460 nm). 시험 물질을 함유하는 시험 배치의 방출 측정값을 시험 물질을 함유하지 않는 대조군 배치 (디메틸 술폭시드 중에 시험 화합물 대신 디메틸 술폭시드만이 존재하는 것)와 비교하고, 농도/활성 관계로부터 IC₅₀ 값을 계산하였다.

a.4) 혈장 샘플에서의 잠재적인 억제제의 인자 Xa 억제 활성의 판단

혈장 샘플 중에서의 인자 Xa의 억제를 판단하기 위하여, 혈장에 존재하는 인자 X를 방울뱀 독소 유래의 프로테아제를 이용하여 활성화시켰다. 이어서, 발색성 기질을 첨가하여 인자 Xa 활성 또는 잠재적인 억제제에 의한 그의 억제를 측정하였다.

시험 물질을 다양한 농도로 디메틸 술폭시드에 용해시키고, 수성 레플루단 용액 (10 ㎍/ml)과 혼합하였다. 바닥이 편평한 투명 96-웰 플레이트에서, 시트르 산 처리된 혈장 (옥타파마(Octapharma)) 30 ㎕를 물질 희석액 10 ㎕와 혼합하였다. 이어서, 수성 염화 칼슘 용액 완충액 (염화 칼슘 최종 농도 0.05 M) 중의 방울뱀 독소 (러셀 바이퍼 베놈(Russel viper venom; RVV); RVV 시약: 펜타팜(Pentapharm) 121-06, 최종 농도 0.6 mU) 용액 20 ㎕ 또는 RVV 시약을 함유하지 않는 수성 염화 칼슘 용액 (염화 칼슘 최종 농도 0.05 M) (비자극 샘플의 참조) 20 ㎕를 첨가하였다. 크로모짐X 기질 (최종 농도 1.6 mmol/l, 바켐 L-1565, 물에 희석시킨 것) 20 ㎕를 첨가한 후, 20분에 걸쳐 매 분마다 405 nm의 측정 필터를 이용하여 스펙트라플루오르(SpectraFluor) 판독기에서 샘플을 측정하였다. 최대 신호의 약 70％에 도달하였을 때 (약 12분) IC₅₀ 값을 판단하였다.

본 테스트로부터의 대표적인 활성 데이터를 이하의 표 1에 열거한다.

a.5) 혈장 샘플에서의 잠재적인 억제제의 트롬빈 억제 활성의 판단

시험 물질을 다양한 농도로 디메틸 술폭시드에 용해시키고, 물로 희석시켰다. 바닥이 편평한 백색 96-웰 플레이트에서, 물질 희석액 20 ㎕를 Ca 완충액 (헤페스 200 mM + 염화 나트륨 560 mM + 염화 칼슘 10 mM + 0.4 ％ PEG) 중의 에카린(ecarin) 용액 (시그마 E-0504의 에카린 시약, 배치당 최종 농도 20 mU) 20 ㎕와 혼합하거나, 또는 Ca 완충액 20 ㎕와 (비자극 대조군으로서) 혼합하였다. 추가로, 형광 트롬빈 기질 (바켐 I-1120, 최종 농도 50 μmol/l) 20 ㎕ 및 시트르산 처리된 혈장 (옥타파마) 20 ㎕를 첨가하고 완전히 균질화시켰다. 20분에 걸쳐 매 분마다 360 nm의 여기 필터 및 465 nm의 방출 필터를 이용하여 스펙트라플루오르플러스 판독기 내에서 플레이트를 측정하엿다. 최대 신호의 약 70％에 도달하였을 때 (약 12분) IC₅₀ 값을 판단하였다.

본 테스트로부터의 대표적인 활성 데이터를 이하의 표 2에 열거한다.

a.6) 트롬빈 생성 검정 (트롬보그램(thrombogram))

인간 혈장 (옥타파마(Octapharma)의 옥타플라스(Octaplas)^®)에 대해 시험관 내에서 트롬보그램 (헴케르(Hemker)에 따른 트롬빈 생성 검정)에 대한 시험 물질의 효과를 판단하였다. 헴케르에 따른 트롬빈 생성 검정에서는, 기질 I-1140 (Z-Gly-Gly-Arg-AMC, 바켐)의 형광 절단 생성물을 측정하는 것에 의해 혈장 응고에 있어서의 트롬빈의 활성을 판단하였다. 트롬비노스콥(Thrombinoscope)의 시약 (PPP 시약: 재조합 조직 인자 30 pM, HEPES 중의 인지질 24 μM)을 사용하여 응고 반응을 개시시켰다. 반응은 다양한 농도의 시험 물질 또는 상응하는 용매의 존재하에서 행하였다. 또한, 트롬비노스콥의 트롬빈 측정기를 사용하였고, 그의 발색 활성은 혈장 샘플 중의 트롬빈 활성을 계산하는데 요구된다.

본 시험은 제조사 (트롬비노스콥 BV)의 지침서에 따라 행하였다: 시험 물질 또는 용매 4 ㎕, 혈장 76 ㎕, 및 PPP 시약 또는 트롬빈 측정기 20㎕를 37℃에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 헤페스 20 mM, BSA 60 mg/ml, 염화 칼슘 102 mM 중의 2.5 mM 트롬빈 기질 20 ㎕를 첨가한 후, 120분에 걸쳐 매 20초 마다 트롬빈 생성을 측정하였다. 측정은 390/460 nm 필터 쌍 및 분배기가 피팅된 설모 엘렉트론(Thermo Electron)의 형광 측정기 (플루오로스칸 아센트(Fluoroskan Ascent))를 사용하여 행하였다. 트롬비노스콥 소프트웨어를 이용하여, 트롬보그램을 계산하고 그래프로 나타내었다. 계산된 것은 다음의 지표이다: 지체 시간, 최대 증가까지의 시간, 최대 증가, ETP (내생적 트롬빈 잠재력) 및 출발 말단.

a.7) 항응고 활성의 판단

시험 물질의 항응고 활성을 인간 혈장, 토끼 혈장 및 래트의 혈장에 대해 시험관 내에서 판단하였다. 이를 위해, 0.11 몰의 시트르산 나트륨 용액을 수용제로서 사용하여 시트르산 나트륨/혈액 혼합비 1/9로 채혈하였다. 채혈 직후에 이를 철저히 혼합하고, 약 4000 g에서 15분 동안 원심분리하였다. 상청액을 피펫으로 뽑아내었다.

프로트롬빈 시간 (PT, 동의어: 트롬보플라스틴 시간, 빠른 시험)을 다양한 농도의 시험 물질 또는 상응하는 용매의 존재하에서 시판되는 시험 키트 (베링거 만하임(Boehringer Mannheim)의 네오플라스틴(Neoplastin)^® 또는 인스트루멘테이션 래보러토리(Instrumentation Laboratory)의 헤몰리안스(Hemoliance)^® 리콤비플라스틴(RecombiPlastin))를 사용하여 판단하였다. 시험 화합물을 혈장과 함께 37℃에서 3분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 트롬보플라스틴을 첨가하여 응고가 시작되게 하고, 응고 개시 시간을 판단하였다. 프로트롬빈 시간을 2배가 되게 하는 시험 물질의 농도를 판단하였다.

트롬빈 시간 (TT)은 다양한 농도의 시험 물질 또는 상응하는 용매의 존재하에서 시판되는 시험 키트 (로쉐의 트롬빈 시약)를 사용하여 판단하였다. 시험 화합물을 혈장과 함께 37℃에서 3분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 트롬빈 시약을 첨가하여 응고가 시작되게 하고, 응고 개시 시간을 판단하였다. 트롬빈 시간을 2배가 되게 하는 시험 물질의 농도를 판단하였다.

활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간 (APTT)은 다양한 농도의 시험 물질 또는 상응하는 용매의 존재하에서 시판되는 시험 키트 (로쉐의 PTT 시약)를 사용하여 판단하였다. 시험 화합물을 혈장 및 PTT 시약 (세팔린, 카올린)과 함께 37℃에서 3분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 염화 칼슘 25 mM을 첨가하여 응고가 시작되게 하고, 응고 개시 시간을 판단하였다. APTT를 2배가 되게 하는 시험 물질의 농도를 판단하였다.

a.8) 혈전탄성검사 (thromboelastography; 혈전탄성도(thromboelastogram))

펜타팜의 혈전탄성그래프 ROTEM과 그의 부품, 컵 및 핀의 보조하에 혈전탄성검사를 행하였다. 측정은 살스테트(Sarstedt)의 시트르산 나트륨 모노베트(monovette)에 미리 채혈해 둔 전혈에 대하여 행하였다. 모노베트 내의 혈액은 진탕기를 이용하여 운동상태로 유지시켰고, 37℃에서 30분 동안 예비인큐베이션하였다. 수중의 염화 칼슘 원액 2 몰을 제조하였다. 이것을 수성 0.9％ 농도의 염화 나트륨 용액으로 1:10으로 희석시켰다. 측정을 위해 이 200 mM 염화 칼슘 용액 20 ㎕를 먼저 컵에 채웠다 (염화 칼슘의 최종 농도는 12.5 mM). 물질 또는 용매 3.2 ㎕를 첨가하였다. 전혈 300 ㎕를 첨가하여 측정을 개시하였다. 첨가한 후에, 피펫의 끝을 이용하여 혼합물을 피펫으로 잠시 뽑아내고, 공기 거품이 일지 않도록 다시 뿜어내었다. 측정은 2.5 시간에 걸쳐 행하거나, 섬유소용해가 시작되면 중지하였다. 평가를 위해, 다음의 지표를 판단하였다: CT (덩어리화되는 시간/[초]), CFT (덩어리 형성 시간/[초]), MCF (덩어리의 최대 견고함/[mm]) 및 알파 각도 [°]. 측정 지점을 매 3초마다 판단하고, y축을 MCF [mm], x축을 시간 [초]로 하여 그래프로 나타내었다.

a.9) 혈전에 결합된 응고 인자 트롬빈 및 인자 Xa의 억제

항응고제에 의한 치료의 개시 이전, 치료를 중단한 동안, 또는 치료에도 불구하고 형성된 응혈은 혈전 형성의 진행을 장려할 수 있는 다량의 응고 인자를 함유한다. 이들 응고 인자는 혈전에 단단히 결합되어 떼어낼 수 없다. 특정 임상적 상황에서, 이는 환자에게 위험을 야기할 수 있다. 이하에서 행하는 시험에서, 트롬빈 및 인자 Xa 둘 모두가 생물학적 (응고항진(procoagulatory)) 활성을 가짐을 인간 혈전 중에서 증명할 수 있었다.

시험관 내에서 형성된 혈전

혈전은 인간 혈장으로부터 시험관 내에서 형성시켰고, 결합된 응고 인자 트롬빈 및 인자 Xa의 활성을 조사하였다. 이를 위해, 혈장 300 ㎕를 48-웰 MTP 플레이트에서 지질 소포 30 ㎕ 및 수성 염화 칼슘 용액 30 ㎕와 혼합하고, 30분 동안 인큐베이션하였다. 이 단계 및 다음 단계는 37℃에서 일정하게 교반하며 (300 rpm) 행하였다. 형성된 혈전을 새로운 48-웰 MTP 플레이트로 옮기고, 0.9％ 농도의 염화 나트륨 용액으로 10분에 걸쳐 2회 세척하였고, 세척 단계 동안 여과 종이 상에 혈전이 부착되었다. 혈전을 완충액 B (오웬스 베로날(Owens Veronal) 완충액, 1％ BSA)로 옮기고, 15분 동안 인큐베이션하고, 여과 종이 상에 부착시키고, 완충액 B 중의 다양한 농도의 시험 물질 중에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 덩어리를 상기에서 언급한 바와 같이 2회 세척하였다. 혈전이 부착되었고, 이를 완충액 D (오렌스 베로날(Owren's Veronal) 완충액 240 ㎕, 1％ BSA 및 염화 칼슘 15.6 mM)로 옮기고, 0.6 μM의 프로트롬빈과 함께 또는 프로트롬빈 없이 45분 동안 인큐베이션하였다. 1％ EDTA 용액 75 ㎕를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 트롬빈 활성은 완충액 A (Na₂EDTA x 2H₂O 7.5 mM, 염화 나트륨 175 mM, 1％ BSA, pH 8.4) 중의 혈전에서, 또는 마지막 단계의 상청액에서 별도로 측정하였다. 이를 위해 기질 I-1120을 최종 농도 50 μM로 사용하였고, 생성된 형광은 형광 플레이트 판독기에서 측정하였다 (360/465 nm).

혈전에 결합된 트롬빈의 활성은 선택적 인자 Xa 억제제의 치료상 관련 농도로는 억제할 수 없었다. 이와 대조적으로, 이중 인자 IIa/인자 Xa 억제제 또는 인자 IIa 참조 억제제를 이용하여서는 이를 억제시킬 수 있었다.

프로트롬빈을 첨가한 후에, 혈전에 결합된 인자 Xa가 존재할 경우 (프로트롬빈 분해효소 복합체), 새로운 트롬빈이 형성되며 이는 형광 기질에 의해 검출된다. 이와 같이 트롬빈이 다시 새롭게 형성되는 것은 순수한 트롬빈 억제제로는 방지할 수 없지만; 이중 인자 IIa/인자 Xa 억제제 또는 선택적 인자 Xa 참조 억제제를 이용하여서는 억제시킬 수 있었다.

혈전에 결합된 트롬빈 활성의 생물학적 활성은 형광으로 표지된, 활성 트롬빈에 의해 피브린으로 전환되고 혈전에 결합하는 피브리노겐을 첨가하여 시험하였다. 이를 위해, 혈전을 상기한 바와 같이 형성시키고, 알렉사488(Alexa488)로 표지된 피브리노겐 용액 (100 ㎍/ml) 250 ㎕ 및 수성 100 mM 염화 칼슘 용액 (시험 물질을 다양한 농도로 함유하거나 그렇지 않은 것) 30 ㎕ 중에서 인큐베이션하였다. 상청액의 형광은 형광 플레이트 판독기에서 적합한 파장 하에 측정하였다. 또한, 혈전을 각 경우마다 15분씩 4회 세척하고, 형광 현미경을 이용하여 평가하였다. 상청액으로부터의 형광의 감소 및 혈전의 형광의 증가는 이중 인자 IIa/인자 Xa 억제제로 억제시킬 수 있었지만, 인자 Xa 참조 억제제로는 억제시킬 수 없었다.

생체내 형성된 심장내 혈전 (환자 시료)

심장 수술 동안 환자의 좌심실로부터 혈전을 채취하여 실험을 반복하였다. 이를 위해 혈전을 해동시키고, 조각으로 나누었다 (젖은 중량 10 내지 100 mg). 프로토콜에 따라 세척을 반복하거나 세척하지 않은 혈전을 사용하고, 트롬빈 활성은 기질 I-1120 (최종 농도 100 μM)을 이용하여 상기에서 기술한 방법과 유사하게 측정하였다.

a.10) 내독소혈증 마우스 및 래트에서의 불완전 응고 및 장기 기능의 특이적 진단

트롬빈/항트롬빈 복합체

트롬빈/항트롬빈 복합체 (이하에서는 "TAT"라 칭함)는 응고 활성화에 의해 내생적으로 형성된 트롬빈에 대한 측정치이다. TAT는 ELISA 검정 (엔지그노스트(Enzygnost) TAT 마이크로, 다데 베어링(Dade-Behring))을 이용하여 판단하였다. 혈장은 원심분리에 의해 시트르산 처리된 혈액으로부터 수득하였다. TAT 샘플 완충액 50 ㎕를 혈장 50 ㎕에 첨가하고, 샘플을 잠깐 진탕하고, 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 흡입하여 여과하고, 웰을 세척 완충액으로 3회 세척하였다 (300 ㎕/웰). 세척하는 동안, 플레이트를 두드려 액체를 제거하였다. 짝 용액 (100 ㎕)을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 흡입해내고, 웰을 세척 완충액으로 3회 세척하였다 (300 ㎕/웰). 이어서, 발색성 기질 (100 ㎕/웰)을 첨가하고, 플레이트를 암실에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션하고, 종결 용액을 첨가하고 (100 ㎕/웰), 492 nm에서 발색을 측정하였다 (사파이어(Saphire) 플레이트 판독기).

장기 기능에 대한 지표

LPS의 투여에 의한 다양한 내부 장기의 기능 제한에 관하여 결론을 도출시키고, 시험 물질의 치료 효과를 예측가능하게 하는 다양한 지표가 판단되었다. 시트르산 처리된 혈액, 또는 적절한 경우 리튬/헤파린 혈액을 원심분리하고, 혈장으로부터 지표를 판단하였다. 전형적으로, 다음과 같은 지표가 판단되었다: 크레아티닌, 요소, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST), 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 총 빌리루빈, 락테이트 데히드로게나제 (LDH), 총 단백질, 총 알부민 및 피브리노겐. 이들 값은 신장, 간, 심혈관계 및 혈관의 기능과 관련된 지표를 제시하였다.

염증에 대한 지표

내독소에 의해 야기되는 염증 반응의 범위는 혈장 내 염증 매개자, 예를 들어 인터루킨 (1, 6, 8 및 10), 종양 괴사 인자 알파 또는 단핵구 화학주성 단백질-1의 증가에 의해 검출가능하다. 이를 위해, ELISA 또는 루미넥스(luminex) 시스템을 사용할 수 있다.

b) 항혈전 활성의 판단 (생체내)

b.1) 동정맥 단락 및 출혈 모델 (콤비-모델 래트)

체중이 300 g 내지 350 g인 금식시킨 수컷 래트 (품종: HSD CPB:WU)를 인액틴(Inactin) (150 내지 180 mg/kg)을 이용하여 마취시켰다. 문헌 [Christopher N. Berry et al., Br. J. Pharmacol. (1994), 113, 1209-1214]에 기재된 방법에 따라 동정맥 단락에서 혈전 형성이 개시되게 하였다. 이를 위해, 좌측 경정맥 및 우측 경동맥을 노출시켰다. 10 cm 길이의 폴리에틸렌 튜브 (PE 60)를 이용하여 체외 단락으로 상기 2개의 혈관을 연결하였다. 중간쯤에서, 이 폴리에틸렌 튜브를 거친 나일론 실을 함유하는 3 cm 길이의 추가의 폴리에틸렌 튜브 (PE 160)에 부착시켜, 혈전형성 표면을 생성하는 루프를 형성시켰다. 체외 순환을 15분 동안 유지시켰다. 이어서, 상기 단락을 제거하고, 혈전이 생긴 나일론 실을 즉시 칭량하였다. 나일론 실의 자체 중량은 실험 시작 전에 판단해 두었다.

출혈 시간을 판단하기 위해, 단락 순환을 개방한 직후 안전 면도날을 이용하여 래트의 꼬리의 끝을 3 mm 만큼 잘라내었다. 이어서, 꼬리를 37℃로 유지시킨 생리 식염수에 넣고, 잘린 부위로부터의 출혈을 15분에 걸쳐 관찰하였다. 판단하고자 하는 것은 출혈이 멈추기까지 걸린 시간 (적어도 30초, 초기 출혈 시간), 총 출혈 시간 (15분, 누적된 출혈 시간) 및 수집된 헤모글로빈의 광도 판단을 통한 정량적 혈액 손실이다.

체외 순환을 설정하고 꼬리의 끝을 자르기 전에, 깨어있는 동안 동물에게 반대쪽 경정맥을 통해 단일 볼루스로서, 또는 후속해서 연속 주입하는 볼루스로서 정맥내로, 또는 인두 튜브를 통해 경구로 시험 물질을 투여해 두었다.

c) 약동학 판단 (생체내)

생체내 약동학을 판단하기 위해, 시험 물질을 다양한 제제화 조성물 (예를 들어, 혈장, 에탄올, DMSO, PEG400 등) 또는 이들 가용화제의 혼합물에 용해시키고, 마우스, 래트, 개, 또는 원숭이에 정맥내로 또는 경구로 투여하였다. 정맥내 투여는 볼루스 주사하거나 또는 주입하여 행하였다. 투여된 투여량은 0.1 내지 5 mg/kg의 범위였다. 최대 26시간에 걸쳐 다양한 시점에서 카테터를 이용하거나 희생시킨 동물의 혈장으로서 혈액 샘플을 채취하였다. 추가로, 몇몇 경우에서는 장기, 조직 및 소변의 샘플도 채취하였다. 시험 샘플 중의 물질의 정량 판단은 의문이 있는 기질(matrix) 중에서 조정한 교정 샘플을 이용하여 행하였다. 샘플 중에 존재하는 단백질은 아세토니트릴 또는 메탄올을 이용하여 침전시켜 제거하였다. 이어서, 2300 HTLC 시스템 (미국 메사추세츠주 프랭클린 소재의 코헤시브 테크널러지스(Cohesive Technologies))에서 역상 컬럼을 이용하여 HPLC에 의해 샘플을 분획하였다. HPLC 시스템은 터보 철 분무 접촉영역을 통해 API 3000 트리플 쿼드로폴(Triple Quadropole) 질량 분석기 (독일 다름스타트 소재의 어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems))에 연결시켰다. 인증된 역학 분석 프로그램을 이용하여 혈장 농도 시간 경과를 분석하였다.

운반 단백질에 대한 물질의 친화도는 Caco-2 세포 또는 특이적 운반체 내에서 과다발현되는 세포를 이용한 흐름 검정 (flux assay)으로 시험관 내에서 시험하여 조사하였다 (문헌 [Troutman MD, Thakker DR, Pharm. Res. 20 (8) 1210-1224 (2003)]; [Schwab D, Fischer H, Tabatabaei A, Poli S, Huwyler J, J. Med. Chem. 46, 1716-1725 (2003)]; [Merino G, Jonker JW, Wagenaar E, Pulido MM, Molina AJ, Alvarez AI, Schinkel AH, Drug Metab. Dispos. 33 (5) 614- 618 (2005)]). 이를 위해, 24- 또는 96-웰 여과 플레이트 상에서 4 내지 15일 동안 세포를 배양하였다. 투과 판단을 위해, HEPES 완충액 중의 물질을 첨부로 (A) 또는 기저로 (B) 세포에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 인큐베이션하였다. 0시간 및 2시간 후에, 샘플을 시스- 및 트랜스-구획으로부터 채취하고, LC-MS/MS로 분석하였다. 쉬밥(Schwab) 등이 공개한 공식을 이용하여 Papp 값을 계산하였다. Papp(B-A)/Papp(A-B) 비율이 2를 초과하거나, 0.5 미만인 경우 물질을 활발히 운반된 것으로 분류하였다.

d) 내독소혈증 활성의 판단 (생체내)

본 조사는 래트 또는 마우스를 이용하여 행하였다. 마우스 모델 (NMRI, 수컷)에서, LPS (에쉐리시아 콜라이(Escherichia coli) 항원형 055:B5, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 50 mg/kg을 복강내로 주사하였다. 시험 물질은 LPS를 주입하기 최대 1시간 전에 꼬리 정맥을 통해 정맥내로, 피하로, 복강내로, 또는 위 튜브를 이용하여 경구로 투여하였다. LPS를 투여하고 4시간 후에, 동물을 마취시키고 (케타베트/롬푼), 수술로 복부를 개방하였다. 시트르산 나트륨 용액 (3.2％ w/v) (처방: 체중 g / 13 회 100 ㎕)을 하대정맥(lower vena carva)에 주사하고, 30초 후에 혈액 샘플 (약 1 ml)을 채취하였다. 혈액으로부터 다양한 지표, 예를 들어 세포성 혈액 성분 (특히, 적혈구, 백혈구, 및 혈소판), 락테이트 농도, 응고 활성화 (TAT) 또는 장기 기능부전 또는 장기 부전의 지표 및 사망률을 판단하였다.

e) 래트에 대한 DIC 시험에 사용된 방법의 기술

LPS (이. 콜라이 O55 B5, 시그마 제조, PBS에 용해된 것)를 수컷 위스타 래트에게 250 μg/ kg의 투여량으로 꼬리 정맥을 통해 정맥내 투여하였다 (투여 용량 2 ml/kg). 시험 물질을 PEG 400/H₂O 60％/40％에 용해시키고, LPS를 주사하기 30분 전에 경구로 투여하였다 (투여 용량 5 ml/kg). LPS를 주사하고 1, 5 또는 4시간 후, 마취 (트라파날(Trapanal)^® 100 mg/kg i.p.)가 끝날 무렵에 동물의 심장을 뚫어 방혈하고, 시트르산 처리된 혈장을 수득하여 피브리노겐, PT, TAT 및 혈소판 수를 판단하였다. 임의로, 혈청을 수득하여 간 효소, 신장 기능 지표 및 시토킨을 판단하였다. TNFα 및 IL-6은 시판하는 ELISA (R&D 시스템스)를 이용하여 판단하였다.

장기 기능의 직접 지표, 예를 들어 좌심실압 및 우심실압, 동맥압, 소변 배설, 신장 관류 및 혈액 가스 및 산/염기 상태를 측정하는 것도 역시 가능하다.

C. 제약 조성물의 예시적인 실시양태

본 발명에 따른 화합물은 하기와 같은 방식으로 제약 제제로 전환시킬 수 있다.

정제 :

조성:

본 발명에 따른 화합물 100 mg, 락토스 (일수화물) 50 mg, 옥수수 전분 (천연) 50 mg, 폴리비닐피롤리돈 (PVP 25) (독일 루드빅샤펜 소재의 바스프(BASF)) 10 mg 및 스테아르산 마그네슘 2 mg.

정제 중량 212 mg, 직경 8 mm, 곡률 반경 12 mm.

제조:

본 발명에 따른 화합물, 락토스 및 전분의 혼합물을 물 중 5％ 농도의 PVP 용액 (m/m)으로 과립화하였다. 과립을 건조시킨 다음, 스테아르산 마그네슘과 5분 동안 혼합하였다. 이 혼합물을 통상의 정제 프레스를 이용하여 압착시켰다 (정제의 포맷에 대하여는 상기 참조). 압착을 위한 권장 압착력은 15 kN이었다.

경구용 현탁액제 :

조성:

본 발명에 따른 화합물 1000 mg, 에탄올 (96％) 1000 mg, 로디겔(Rhodigel)^® (미국 펜실바니아주 소재 FMC의 크산탄 검) 400 mg 및 물 99 g.

경구 현탁액 10 mL는 본 발명에 따른 화합물 100 mg의 단일 용량에 상응한다.

제조:

로디겔을 에탄올 중에 현탁하고, 이 현탁액에 본 발명에 따른 화합물을 첨가하였다. 교반하면서 물을 첨가하였다. 상기 혼합물을 로디겔의 팽윤이 완료될 때까지 약 6시간 동안 교반하였다.

경구용 용액제 :

조성:

본 발명에 따른 화합물 500 mg, 폴리소르베이트 2.5 g 및 폴리에틸렌 글리콜 400 97 g. 경구 용액 20 g은 본 발명에 따른 화합물 100 mg의 단일 용량에 상응한다.

제조:

본 발명에 따른 화합물을 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리소르베이트의 혼합물 중에 교반시키며 현탁하였다. 본 발명에 따른 화합물이 완전하게 용해될 때까지 교반을 계속하였다.

i.v. 용액제 :

본 발명에 따른 화합물을 생리적으로 허용되는 용매 (예를 들어 등장성 염화 나트륨 용액, 5％ 글루코스 용액 및/또는 30％ PEG 400 용액) 중에 포화 용해도 미만의 농도로 용해시켰다. 상기 용액을 여과에 의해 멸균시키고, 멸균되고 발열원이 없는 주사 용기에 충전하였다.

Claims (17)

1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물.

   <화학식 I>

   

   상기 식에서,

   n은 숫자 0, 1, 2 또는 3을 나타내고,

   R¹은 염소, 트리플루오로메톡시, 메틸, 에틸, n-프로필, 메톡시, 메톡시메틸 또는 에톡시메틸을 나타내고,

   R²는 수소 또는 메틸을 나타낸다.
2. 제1항에 있어서,

   n이 숫자 0, 1 또는 2를 나타내고,

   R¹이 염소, 트리플루오로메톡시, 메틸, n-프로필, 메톡시 또는 메톡시메틸을 나타내고,

   R²가 수소 또는 메틸을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,

   n이 숫자 0, 1 또는 2를 나타내고,

   R¹이 메틸, 메톡시 또는 메톡시메틸을 나타내고,

   R²가 수소를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,

   n이 숫자 1 또는 2를 나타내고,

   R¹이 메틸을 나타내고,

   R²가 수소를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물.
5. [A] 제1 단계에서, 하기 화학식 II의 화합물을 하기 화학식 III의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 IV의 화합물을 생성하고,

   제2 단계에서, 이 화합물을 포스겐 또는 포스겐 균등물의 존재하에 고리화하 여 화학식 I의 화합물을 생성하거나, 또는

   [B] 하기 화학식 V의 화합물을 하기 화학식 VI의 화합물과 반응시키는 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 그의 용매화물 또는 그의 염의 용매화물의 제조 방법.

   <화학식 II>

   

   <화학식 III>

   

   <화학식 IV>

   

   <화학식 V>

   

   <화학식 VI>

   

   상기 식에서, n, R¹ 및 R²는 제1항에 제시된 의미를 가지며, X는 할로겐, 바람직하게는 브롬 또는 염소, 또는 히드록실을 나타낸다.
6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 질병을 치료 및/또는 예방하기 위한 것인 화합물.
7. 질병의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
8. 혈전색전성 질환의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
9. 시험관 내에서 혈액 응고를 방지하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
10. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 불활성이고 무독성인 제약 상 허용가능한 보조제와 조합하여 포함하는 약제.
11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 추가의 활성 화합물과 조합하여 포함하는 약제.
12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 혈전색전성 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 약제.
13. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 1종 이상의 화합물, 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 약제, 또는 제7항 또는 제8항에 따라 수득된 약제를 항응고 유효량으로 사용하여 인간 및 동물의 혈전색전성 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법.
14. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 항응고 유효량 첨가하는 것을 특징으로 하는, 시험관 내에서 혈액 응고를 방지하는 방법.
15. 폐 고혈압의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
16. 패혈증, 전신성 염증 증후군 (SIRS), 패혈성 장기 기능부전, 패혈성 장기 부 전 및 다발성장기 부전(multiorgan failure), 급성 호흡곤란 증후군 (ARDS), 급성 폐 손상 (ALI), 패혈증 쇼크 및/또는 DIC (파종성 혈관내 응고)의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
17. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 혈전색전성 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 것인 화합물.