TWI392519B - Liposomal composition - Google Patents

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TWI392519B
TWI392519B TW099109838A TW99109838A TWI392519B TW I392519 B TWI392519 B TW I392519B TW 099109838 A TW099109838 A TW 099109838A TW 99109838 A TW99109838 A TW 99109838A TW I392519 B TWI392519 B TW I392519B
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Kenji Hyodo
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Description

脂質體組合物
本發明係關於一種含有埃立布林(eribulin)或其藥理學上容許之鹽的新穎脂質體組合物。又，本發明係關於一種該脂質體組合物之製造方法。
脂質體係具有由1層以上之脂質雙層所包圍之內相的微細閉合小胞，可將水溶性物質保持於內相中，且將脂溶性物質保持於脂質雙層中。於脂質體中封入活性化合物，並送達至標的組織時，如何將活性化合物高效率地封入脂質體中，又，如何確保脂質體的活性化合物之保持穩定性成為關鍵。
於將脂溶性化合物封入脂質體中之情況，可比較容易地達成高封入率，但如雙性黴素B(脂質體醫藥品AmBisome之主藥)之膜親和性非常高之化合物的情況除外，通常於血漿中之保持穩定性低，體內動態難以充分改善。水溶性化合物向脂質體中之封入方法中有脂質膜法(渦漩法)、逆相蒸發法、界面活性劑去除法、冷凍融解法或遙控裝載法(pH值梯度法、離子梯度法)等各種方法。然而，僅遙控裝載法可獲得接近100%之高封入率，其他方法僅獲得5~30%左右之封入率。
作為遙控裝載法，已知利用pH值梯度或硫酸銨離子梯度者。所謂作為利用pH值梯度之遙控裝載法的pH值梯度法，係指利用由目標化合物之pH值所引起的分子型/離子型之背離平衡之移動而將化合物取入至脂質體內的技術。
作為利用pH值梯度法而封入脂質體中之化合物之一例，例如可列舉小紅莓(DOX(doxorubicin)，pKa:8.2)。利用pH值為4之緩衝液製備脂質體溶液後，將脂質體外相置換為pH值為7之緩衝液。於該脂質體溶液中添加DOX之情況，在所添加的pH值為7之溶液中，分子型DOX成為脂溶性，因此並非為水相，而係轉移至脂質體膜中。進而於轉移至脂質體膜中之DOX與pH值為4之脂質體內相接觸之情況，成為離子型而溶入脂質體內相中。如此，藉由解離平衡之移動，DOX自脂質體外相輸送至內相(參照非專利文獻1、非專利文獻2及專利文獻1)。
又，報告有將上述遙控裝載法加以改良而成之各種技術。
非專利文獻3中揭示有如下技術：於所謂無膽固醇之脂質體之特別組成之脂質體中進行pH值梯度法時，藉由將乙醇與活性化合物一起添加於脂質體外相中，而提高活性化合物之封入率。
專利文獻2中揭示有如下技術：除pH值梯度以外，藉由使脂質體內相中存在銅離子而提高活性化合物之封入率。
所謂作為利用硫酸銨離子梯度之遙控裝載法的硫酸銨法，係指代替pH值梯度法中之pH值梯度，利用2價之硫酸銨等之離子梯度而將活性化合物取入至脂質體內相中的技術(參照非專利文獻1及專利文獻3)。
專利文獻4中提出有如下技術：除利用硫酸銨之離子梯度以外，藉由將硼酸與活性化合物一起添加於脂質體外相中，而於脂質體內取入活性化合物。
又，專利文獻5中揭示有如下技術：代替硫酸銨之離子梯度，而利用葡萄糖醛酸陰離子之離子梯度，將活性化合物取入至脂質體中，藉此與利用硫酸銨之情況相比，提高活性化合物之釋放速度。
如此，就封入率方面而言，遙控裝載法為優異之封入方法。然而，封入脂質體內相中之活性化合物結晶化之Doxil(DOX之脂質體製劑)等特殊例子除外，於使用遙控裝載法之情況，存在活性化合物於血漿中容易自脂質體中漏出，活性化合物之保持穩定性低的問題。
如上所述現狀為，先前技術之方法中，難以兼顧活性化合物向脂質體中之高封入率、與脂質體中之活性化合物之保持穩定性。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]美國專利第5192549號說明書
[專利文獻2]國際公開第2006/037230號小冊子
[專利文獻3]美國專利第5316771號說明書
[專利文獻4]美國專利第6051251號說明書
[專利文獻5]國際公開第2005/046643號小冊子
[非專利文獻]
[非專利文獻1]佐塚泰之，「脂質體之製備法」，「脂質體應用之新展開：面向人工細胞之開發(秋吉一成，辻井薰主編)」，NTS,(2005),pp.33-37。
[非專利文獻2] Mayer LD et al.,Biochimica et Biophysica Acta,(1986),857: pp.123-126。
[非專利文獻3] N. Dos Santos et al.,Biochimica et Biophysica Acta,(2004),1661(1): pp.47-60。
本發明所欲解決之問題在於提供一種活性化合物之保持穩定性及封入率高之脂質體組合物。
本發明者等人為解決上述問題而進行銳意研究，結果發現，以埃立布林或其藥理學上容許之鹽作為活性化合物之脂質體組合物在脂質體組合物中之活性化合物之保持穩定性及封入率極高，從而完成本發明。
即，本發明如下所述。
[1]一種脂質體組合物，其係含有脂質體且於脂質體內相中含有活性化合物者，並且活性化合物為埃立布林或其藥理學上容許之鹽。
[2]如1所述之脂質體組合物，其中脂質體組合物為固體狀或液體狀。
[3]如1或2所述之脂質體組合物，其中脂質體內相中更含有銨鹽。
[4]如3所述之脂質體組合物，其中上述銨鹽之濃度為10 mM以上。
[5]如1~4中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體內相中更含有鹽、酸、鹼及/或胺基酸。
[6]如5所述之脂質體組合物，其中上述鹽之濃度為1~300 mM。
[7]如5或6所述之脂質體組合物，其中上述酸之濃度為1~300 mM。
[8]如5~7中任一項所述之脂質體組合物，其中上述胺基酸之濃度為1~300 mM。
[9]如5~8中任一項所述之脂質體組合物，其中上述鹼之濃度為1~300 mM。
[10]如1~9中任一項所述之脂質體組合物，其中上述活性化合物之濃度為0.01~300 mg/mL。
[11]如1~10中任一項所述之脂質體組合物，其中上述活性化合物為埃立布林甲磺酸鹽。
[12]如1~11中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體內相中更含有硫酸銨、檸檬酸及活性化合物。
[13]如1~12中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體外相中含有糖、電解質、及/或胺基酸。
[14]如1~13中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體外相中含有糖或電解質、及胺基酸。
[15]如13或14所述之脂質體組合物，其中上述糖之濃度為2~20%。
[16]如13~15中任一項所述之脂質體組合物，其中上述胺基酸之濃度為1~300 mM。
[17]如1~16中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體外相中含有蔗糖或氯化鈉、及組胺酸。
[18]如1~17中任一項所述之脂質體組合物，其中上述脂質體內相中實質上不含環糊精。
[19]如1~18中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體含有氫化磷脂醯基膽鹼。
[20]如1~19中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體含有膽固醇。
[21]如1~20中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體為甲氧基聚乙二醇縮合物。
[22]如21所述之脂質體組合物，其中上述甲氧基聚乙二醇縮合物為二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺-聚乙二醇縮合物。
[23]如1~22中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體含有氫化磷脂醯基膽鹼、膽固醇、以及二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺-聚乙二醇縮合物。
[24]如23所述之脂質體組合物，其含有上述氫化磷脂醯基膽鹼10~80%、上述膽固醇1~60%、上述二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺-聚乙二醇縮合物0~50%。
[25]如1~24中任一項所述之脂質體組合物，其中脂質體含有氫化大豆磷脂醯基膽鹼、膽固醇、以及聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺。
[26]一種1~25中任一項所述之脂質體組合物之製造方法，其包括以下步驟：提供含有脂質體之脂質體分散液；將上述脂質體分散液與上述活性化合物混合；以及於上述脂質體分散液之脂質體內相中導入上述活性化合物。
[27]如26所述之方法，其中上述脂質體分散液於脂質體外相中實質上不含銨鹽。
[28]如26或27所述之方法，其中上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值為3~10。
[29]如26~28中任一項所述之方法，其中上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值為7~10。
[30]如28或29所述之方法，其中上述pH值為將上述脂質體分散液與上述活性化合物混合之步驟中的上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值。
[31]如26~30中任一項所述之方法，其中上述提供脂質體分散液之步驟包括以下步驟：提供含有脂質體且於脂質體內相及脂質體外相中含有銨鹽之脂質體準備液；以及將上述脂質體準備液之脂質體外相置換或稀釋。
[32]如31所述之方法，其中上述將脂質體外相置換或稀釋之步驟為使脂質體外相之pH值高於脂質體內相之pH值之步驟。
[33]如31或32所述之方法，其中上述將脂質體外相置換或稀釋之步驟為使脂質體內相之pH值與脂質體外相之pH值之差為1~5之步驟。
[34]如26~33中任一項所述之方法，其中上述脂質體內相之pH值為3~9。
[35]如26~34中任一項所述之方法，其中上述脂質體內相之pH值為4~9。
[36]如26~35中任一項所述之方法，其中上述脂質體內相之pH值為5~8。
[37]如26~36中任一項所述之方法，其中於上述導入活性化合物之步驟中，脂質體外相為含有電解質之溶液。
[38]如26~37中任一項所述之方法，其中上述脂質體分散液於脂質體內相中實質上不含環糊精。
[39]如26~38中任一項所述之方法，其更包括使脂質體外相之pH值成為中性之步驟。
依據本發明，可提供一種新穎之脂質體組合物。本發明之脂質體組合物係以高效率向脂質體內相中封入活性化合物，又，具有活性化合物之高保持穩定性。
藉由用以實施發明之形態對本發明進行具體說明，本發明並不限定於以下用以實施發明之形態，可加以各種變形而實施。
本發明中參照之文獻中所揭示之內容併入本發明中以作參照。
[定義]
所謂「脂質體」，意指具有由脂質雙層包圍之內相的微細閉合小胞。本發明中，脂質體包括：小單室脂質體(SUV: small unilamellar vesicle，單層小微脂粒)、大單室脂質體(LUV: large unilamellar vesicle，單層大微脂粒)、更大單室脂質體(GUV: giant unilamellar vesicle，單層巨微脂粒)、具有同心圓狀複數層膜之多層脂質體(MLV: multilamellar vesicle，多層微脂粒)、不為同心圓狀而不規則地具有複數層膜之脂質體(MVV：multivesicular vesicle，多相微脂粒)等。
「脂質體內相」意指脂質體之由脂質雙層包圍之水性區域，以與「內水相」及「脂質體內水相」相同之含義使用。「脂質體外相」係指於脂質體分散於液體中之情況，脂質體之未由脂質雙層包圍之區域(即，內相及脂質雙層以外之區域)。
所謂「脂質體組合物」，意指含有脂質體且於脂質體內相中更含有埃立布林甲磺酸鹽之組合物。本發明中，脂質體組合物包括固體狀及液體狀者。
所謂「脂質體分散液」，係含有脂質體之組合物，意指於脂質體內相中導入活性化合物之前的組合物。
所謂「脂質體準備液」，係含有脂質體之組合物，意指為於脂質體內相中封入埃立布林甲磺酸鹽而調整脂質體外相之前的組合物。
所謂「脂質體試劑」，於液體狀之情況意指脂質體分散液，於固體狀之情況意指可藉由溶解或懸浮於預定溶劑中而獲得脂質體分散液的試劑。下文將對溶劑進行說明。如下文所述，固體狀脂質體試劑例如可藉由使脂質體分散液乾燥而獲得。
再者，本說明書中，所謂將固體與液體混合，係指包括將固體於液體中溶解及懸浮者，混合、溶解、懸浮可相互交換地使用。同樣地，溶劑與分散介質亦可相互交換地使用。
又，本發明之脂質體組合物、脂質體分散液、脂質體準備液、脂質體試劑實質上不含環糊精。所謂實質上不含環糊精，意指不添加環糊精。再者，只要不含有意地確認到由環糊精引起的活性化合物之溶解度(表觀溶解度)提高之量的環糊精即可，於添加未有意地確認到活性化合物之溶解度提高之量的情況，亦非作為本發明之實施而被排除者。
進而，作為本發明之較佳態樣，所謂脂質體分散液中之脂質體分散液於脂質體外相中實質上不含銨鹽，意指不於脂質體分散液之脂質體外相中添加銨鹽。再者，添加可達成本發明目的之範圍之量的銨鹽，並非作為本發明之實施而被排除者。又，於脂質體準備液之脂質體外相中含有銨鹽之情況，藉由使用實質上不含銨鹽之溶液，將脂質體準備液之脂質體外相置換或稀釋，可製備實質上不含銨鹽之脂質體分散液。
[活性化合物]
本發明中之活性化合物為埃立布林或其藥理學上容許之鹽(以下有記作「埃立布林等」之情況)。所謂藥理學上容許之鹽，可為無機酸鹽、有機酸鹽中之任一種，只要為與埃立布林形成鹽者，則無特別限定，例如可列舉：鹽酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、重硫酸鹽、磷酸鹽、過磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)等，較好的可列舉鹽酸鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽，更好的是甲磺酸鹽。即，本發明中之活性化合物較好的是埃立布林甲磺酸鹽。又，作為埃立布林之藥理學上容許之鹽，可為埃立布林與鋁、鈣、鋰、鎂、鈣、鈉、鋅、二乙醇胺之鹽。埃立布林或其藥理學上容許之鹽為國際公開第99/65894號小冊子或者美國專利第6214865號公報(該等專利文獻中記載之內容藉由參照而併入)中記載之化合物或者其鹽，包含抗腫瘤及抗有絲分裂活性而具有藥理學活性。並且，埃立布林或其藥理學上容許之鹽作為抗腫瘤劑，對黑色素瘤、纖維肉瘤、單核細胞白血病、結腸癌、卵巢癌、乳癌、骨肉瘤、前列腺癌、肺癌及ras-轉換纖維細胞等具有抗腫瘤活性。
其中，作為可與埃立布林等一起組合之活性化合物，可自醫藥(包含診斷試劑)、化粧料、食品等領域中使用之化合物中選擇。活性化合物亦可為埃立布林等以外之1種化合物或者2種以上之化合物之組合。
作為活性化合物，可列舉低分子化合物等，其中宜用作抗腫瘤劑、抗菌劑、消炎劑、抗心肌梗塞劑、造影劑之化合物。
活性化合物較好的是分子量為100~2000者，更好的是200~1500者，進而較好的是300~1000者。一般於該等範圍中，活性化合物之脂質體膜滲透性良好，可適宜應用本發明。
活性化合物包含水溶性化合物及脂溶性化合物，只要在水或水性溶劑中至少多少有所溶解者，則可應用本發明。
本發明中，作為抗腫瘤劑，並無特別限定，例如可列舉：鹽酸伊立替康(irinotecan hydrochloride)、鹽酸拓撲替康(nogitecan hydrochloride)、依喜替康(exatecan)、RFS-2000、勒托替康(Lurtotecan)、BNP-1350、Bay-383441、PNU-166148、IDEC-132、BN-80915、DB-38、DB-81、DB-90、DB-91、CKD-620、T-0128、ST-1480、ST-1481、DRF-1042、DE-310等喜樹鹼(camptothecin)衍生物；多西紫杉醇(docetaxel)水合物、多西紫杉醇、紫杉醇(paclitaxel)、IND-5109、BMS-184476、BMS-188797、T-3782、TAX-1011、SB-RA-31012、SBT-1514、DJ-927等紫杉烷(taxane)衍生物；異環磷醯胺(ifosfamide)、鹽酸尼莫司汀(nimustine hydrochloride)、卡波醌(carboquone)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、達卡巴嗪(dacarbazine)、噻替派(thiotepa)、白消安(busulfan)、美法侖(merphalan)、雷莫司汀(ranimustine)、雌莫司汀磷酸鈉(estramustine phosphate sodium)、6-巰基嘌呤核苷(6-mercaptopurine riboside)、依諾他濱(enocitabine)、鹽酸吉西他濱(gemcitabine hydrochloride)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷十八烷基磷酸鹽(cytarabine ocfosfate)、替加氟(tegafur)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、羥基脲(hydroxy carbamide)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、甲胺喋呤(methotrexate)、巰基嘌呤、磷酸氟達拉濱(fludarabine phosphate)、放射菌素D(actinomycin D)、鹽酸阿克拉黴素(aclarubicin hydrochloride)、鹽酸艾達黴素(idarubicin hydrochloride)、鹽酸吡柔比星(pirarubicin hydrochloride)、鹽酸艾達黴素(epirubicin hydrochloride)、鹽酸柔紅黴素(daunorubicin hydrochlorid)、鹽酸小紅莓、艾達黴素、吡柔比星、柔紅黴素、小紅莓、鹽酸吡柔比星、鹽酸博萊黴素(bleomycin hydrochloride)、淨司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)、新抑癌素(neocarzinostatin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、硫酸博萊黴素、硫酸培洛黴素(peplomycin sulfate)、依託泊苷(etoposide)、酒石酸長春瑞濱(vinorelbine tartrate)、硫酸長春新鹼(vincristine sulfate)、硫酸長春地辛(vindesine sulfate)、硫酸長春花鹼(vinblastine sulfate)、鹽酸氨柔比星(amrubicin hydrochloride)、吉非替尼(gefitinib)、依西美坦(exemestane)、卡培他濱(capecitabine)、TNP-470、TAK-165、KW-2401、KW-2170、KW-2871、KT-5555、KT-8391、TZT-1027、S-3304、CS-682、YM-511、YM-598、TAT-59、TAS-101、TAS-102、TA-106、FK-228、FK-317、E7070、(8E,12E,14E)-7-{(4-環庚基哌-1-基)羰基}氧基-3,6,16,21-四羥基-6,10,12,16,20-五甲基-18,19-環氧基二十三碳-8,12,14-三烯-11-內酯(E7107)、KRN-700、KRN-5500、J-107088、HMN-214、SM-11355、ZD-0473等。上述抗腫瘤劑中，作為鹽而記載之化合物可為任意之鹽，亦可為自由體。又，作為自由體而記載之化合物可為任意之鹽。
作為抗菌劑，並無特別限定，例如可列舉：兩性黴素B(amphotericin B)、頭孢替安酯(cefotiam hexetil)、頭孢菌素(cephalosporin)、氯黴素(chloramphenicol)、雙氯芬酸(diclofenac)等。上述抗菌劑中，化合物可為任意之鹽。
作為消炎劑並無特別限定，例如可列舉：前列腺素(prostaglandin)類(PGE1、PGE2)、地塞米松(dexamethasone)、氫皮質酮(hydrocortisone)、吡羅昔康(piroxicam)、吲哚美辛(indomethacin)、潑尼松龍(prednisolone)等。上述消炎劑中，化合物可為任意之鹽。
作為抗心肌梗塞劑，並無特別限定，例如可列舉腺苷(adenosine)、阿替洛爾(atenolol)、吡西卡尼(pilsicainide)等；作為造影劑，可列舉碘帕醇(iopamidol)、碘克沙酸(ioxaglic acid)、碘海醇(iohexol)、碘美普爾(iomeprol)等。上述抗心肌梗塞劑及上述造影劑中，化合物可為任意之鹽。
[脂質]
本發明之脂質體宜含有磷脂質及/或磷脂質衍生物作為膜構成成分。作為磷脂質及磷脂質衍生物，例如可列舉：磷脂醯基乙醇胺、磷脂醯基膽鹼、磷脂醯基絲胺酸、磷脂醯基肌醇、磷脂醯基甘油、心磷脂、神經鞘磷脂、腦醯胺磷醯乙醇胺、腦醯胺磷醯甘油、腦醯胺磷醯甘油磷酸酯、1,2-二肉豆蔻醯基-1,2-去氧磷脂醯基膽鹼、縮醛磷脂、磷脂酸等。磷脂質及磷脂質衍生物可為該等中1種或2種以上之組合。
磷脂質及磷脂質衍生物中之脂肪酸殘基並無特別限定，例如可列舉碳數12~20之飽和或不飽和脂肪酸殘基，具體可列舉來自月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸等脂肪酸之醯基。又，亦可使用：蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂等來自天然物之磷脂質，以及將不飽和脂肪酸殘基部分性或完全氫化而成之部分氫化蛋黃卵磷脂、(完全)氫化蛋黃卵磷脂、部分氫化大豆卵磷脂、(完全)氫化大豆卵磷脂等。
製備脂質體時所使用之磷脂質及/或磷脂質衍生物之調配量(莫耳分率)並無特別限定，相對於脂質體膜成分全體較好的是10~80%，更好的是30~60%。
本發明之脂質體除含有磷脂質及/或磷脂質衍生物作為膜構成成分以外，可含有膽固醇、二氫膽固醇等固醇類，碳數8~22之飽和或不飽和之具有醯基之脂肪酸類，α-生育酚等抗氧化劑作為膜穩定化劑。
製備脂質體時所使用之該等固醇類之調配量(莫耳分率)並無特別限定，相對於脂質體膜成分全體，較好的是1~60%，更好的是10~50%，進而較好的是30~50%。
又，脂肪酸類之調配量(莫耳分率)並無特別限定，相對於脂質體膜成分全體，較好的是0~30%，更好的是0~20%，進而較好的是0~10%。抗氧化劑之調配量(莫耳分率)只要添加獲得抗氧化效果之量即為充分，較好的是脂質體膜成分全體之0~15%，更好的是0~10%，進而較好的是0~5%。
本發明之脂質體可含有功能性脂質或者修飾脂質作為膜構成成分。
作為功能性脂質，可列舉血中滯留性脂質衍生物、溫度變化敏感性脂質衍生物、pH值敏感性脂質衍生物等。作為修飾脂質，可列舉PEG(polyethylene glycol，聚乙二醇)化脂質、糖脂質、抗體修飾脂質、肽修飾脂質等。
作為血中滯留性脂質衍生物，例如可列舉：血型糖蛋白、神經節苷脂GM1、神經節苷脂GM3、葡萄糖醛酸衍生物、麩胺酸衍生物、聚甘油磷脂質衍生物；磷脂醯乙醇胺與甲氧基聚乙二醇之縮合物，即N-{羰基-甲氧基聚乙二醇-2000}-1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺、N-{羰基-甲氧基聚乙二醇-5000}-1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺、N-{羰基-甲氧基聚乙二醇-750}-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺、N-{羰基-甲氧基聚乙二醇-2000}-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺(MPEG2000-二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺)、N-{羰基-甲氧基聚乙二醇-5000}-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺等聚乙二醇衍生物(甲氧基聚乙二醇縮合物等)等。藉由脂質體含有血中滯留性脂質衍生物，脂質體難以作為外來異物而於肝臟等中被捕捉，由此可使脂質體之血中滯留性提高等。
作為溫度變化敏感性脂質衍生物，例如可列舉二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼等。藉由脂質體含有溫度變化敏感性脂質衍生物，可於特定溫度下使脂質體崩解，使脂質體之表面特性變化等。進而藉由與腫瘤等標的部位之加溫加以組合，可使脂質體於標的部位崩解，使活性化合物釋放至標的部位等。
作為pH值敏感性脂質衍生物，例如可列舉二油醯基磷脂醯基乙醇胺等。藉由脂質體含有pH值敏感性脂質衍生物，當利用內噬作用，脂質體取入至細胞中時，可促進脂質體與內體之膜融合，對活性化合物向細胞質中之送達進行改良等。
作為糖脂質、抗體修飾脂質及肽修飾脂質，可列舉與標的細胞或標的組織具有親和性之糖、結合有抗體或肽之脂質。藉由修飾脂質，可主動將脂質體送達至標的細胞或標的組織。
製備脂質體時所使用之血中滯留性脂質衍生物之調配量(莫耳分率)並無特別限定，較好的是脂質體膜構成成分脂質全體之0~50%，更好的是0~30%，進而較好的是0~20%。
[脂質體]
如上所述，脂質體為具有由脂質雙層包圍之內相的微細閉合小胞。
理想而言，脂質體較好的是具有a)將埃立布林等暫時封入內相中後，埃立布林等不會漏出至脂質體外相中之阻隔能力。又，於用作醫藥之情況，脂質體較好的是於生物體內穩定，又，脂質體較好的是具有當投予至生物體內時，在血中埃立布林等不會漏出至脂質體外相中之阻隔能力。
本領域技術人員可藉由視需要參照後述實施例，而根據活性化合物或標的組織等來適當設定用於以可實用之水準具有此種膜滲透性之脂質體的膜構成成分之組成，(參照：菊池寬他，「脂質體I-製備法與檢定法-」，細胞工學，(1983),2(9): pp.1136-1149以及該文獻中所引用之文獻等)。
再者，於用作醫藥之情況，較好的是脂質體到達標的組織、細胞或細胞內小器官後，埃立布林等自脂質體中釋放。脂質體一般而言，膜構成成分本身為生物分解性，最終於標的組織等中分解。藉此認為，所封入之埃立布林等經釋放。又，脂質體本身可取入至細胞中。
又，脂質體組合物不僅為對實體癌等標的組織之標靶，並且可用於將活性化合物送達至血液癌等，亦可用作血中之緩釋製劑(slow release formulation)或控釋製劑(controlled release formulation)等。
脂質體之粒徑可根據目的而設定。例如，於欲利用EPR(Enhanced Permeability and Retention，滲透及滯留增強)效應，將脂質體作為注射劑等而送達至癌組織或炎症組織之情況，脂質體之粒徑較好的是30~400 nm，更好的是50~200 nm。又，於欲將脂質體送達至巨噬細胞之情況，脂質體之粒徑較好的是30~1000 nm，更好的是100~400 nm。又，於將脂質體組合物用作經口製劑或經皮製劑之情況等，脂質體之粒徑可設為數微米。再者，已知：(1)於正常組織中(由於血管內皮細胞緊密地構成血管壁)血管壁成為阻隔層，高分子或如特定大小之脂質體的微細粒子無法分布於組織內，但於病變組織中(血管內皮細胞間形成有間隙)血管壁變得寬鬆，血管滲透性亢進，高分子或微細粒子可分布於血管外之組織中(enhanced permeability，滲透增強)；又，(2)於正常組織中淋巴系統發達，但於病變組織中淋巴系統並不發達，因此暫時取入之高分子或微細粒子未回收至全身系統中而滯留於其病變組織(enhanced retention，滯留增強)；稱為EPR效應(松村、前田，癌症研究(Cancer Research),(1986),46: pp. 6387-6392)。藉此，可藉由調整脂質體之粒徑，而控制體內動態。
再者，本發明中，脂質體之粒徑意指動態光散射法(準彈性光散射法)之重量平均粒徑。此處，表示利用動態光散射(Dynamic Light Scattering)測定器(例如，Malvern Instruments Ltd公司製造之Zetasizer Nano ZS型，或大塚電子公司製造之ELS-8000)而測定之粒徑。測定器係測定粒子之布朗運動，基於已確立之動態光散射法理論而決定粒徑。
脂質體內相之溶劑並非應特別限定者，例如可列舉：磷酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝化生理食鹽液等緩衝液、生理食鹽水、細胞培養用之培養基等。於使用緩衝液作為溶劑之情況，緩衝劑之濃度較好的是5~300 mM，更好的是10~100 mM。脂質體內相之pH值並無特別限定，較好的是3~11，更好的是4~9。
[脂質體組合物]
依據本發明，提供脂質體組合物。脂質體組合物含有脂質體，且脂質體內相中更含有埃立布林等。如上所述，脂質體組合物包括固體狀及液體狀者。於脂質體組合物為固體狀者之情況，藉由如下文所述於預定溶劑中溶解或懸浮，可製成液體狀者。又，於脂質體組合物冷凍而成之固體之情況，藉由室溫放置等使其融解，可製成液體狀者。
脂質體組合物中之脂質體之濃度及活性化合物之濃度可根據脂質體組合物之目的、劑形等而適當設定。於脂質體組合物為液劑之情況，脂質體之濃度作為脂質體之構成成分即全脂質之濃度，可設為0.2~100 mM，較好的是1~30 mM。下文會對將脂質體組合物用作醫藥時之活性化合物之濃度(用量)進行說明。脂質體組合物中之環糊精之量相對於埃立布林等，較好的是未達0.1莫耳當量，更好的是檢測極限以下。
本發明中之脂質體可於脂質雙層中分配埃立布林等。
當脂質體組合物為液劑時之脂質體組合物之溶劑(分散介質)並非應特別限定者，例如可列舉：磷酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝化生理食鹽液等緩衝液；生理食鹽水、細胞培養用之培養基等。脂質體組合物中之脂質體外相之pH值並無特別限定，較好的是3~11，更好的是4~9。
脂質體組合物中，可進而添加：葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、肌醇、核糖、木糖等單糖類，乳糖、蔗糖、纖維雙糖、海藻糖、麥芽糖等二糖類，蜜三糖、松三糖等三糖類，環糊精等多糖類，赤藻糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖醇等糖醇等糖；甘油、二甘油、聚甘油、丙二醇、聚丙二醇、乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、聚乙二醇、乙二醇單烷基醚、二乙二醇單烷基醚、1,3-丁二醇等多元醇等。亦可將糖與醇組合使用。
為了將分散於該溶劑(分散介質)中之脂質體穩定地長期保存，就凝集等物理穩定性方面而言，較好的是極力去除溶劑(分散介質)中之電解質。又，就脂質之化學穩定性方面而言，較好的是將溶劑(分散介質)之pH值設定為自酸性至中性附近(pH值3.0~8.0)或藉由氮起泡而去除溶氧。
脂質體組合物中所含之糖或多元醇之濃度並無特別限定，但於脂質體分散於溶劑中之狀態下，例如，糖之濃度較好的是2~20%(W/V)，更好的是5~10%(W/V)。多元醇之濃度較好的是1~5%(W/V)，更好的是2~2.5%(W/V)。亦可將該等溶劑用作脂質體分散液中之脂質體外相，藉由將脂質體準備液之脂質體外相以該等溶劑進行置換或稀釋，可使脂質體外相之溶液為該等溶液。
脂質體組合物之固形製劑例如較好的是含有：葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、肌醇、核糖、木糖等單糖類，乳糖、蔗糖、纖維雙糖、海藻糖、麥芽糖等二糖類，蜜三糖、松三糖等三糖類，環糊精等多糖類，赤藻糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖醇等糖醇等糖；更好的是葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇之調配；進而較好的是乳糖、蔗糖、海藻糖之調配。藉此，可將固形製劑穩定地長期保存。又，於冷凍之情況，固形製劑較好的是含有甘油、二甘油、聚甘油、丙二醇、聚丙二醇、乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、聚乙二醇、乙二醇單烷基醚、二乙二醇單烷基醚、1,3-丁二醇等多元醇(水溶液)。多元醇(水溶液)更好的是甘油、丙二醇、聚乙二醇，進而較好的是甘油、丙二醇。藉此，可將固形製劑穩定地長期保存。亦可將糖與多元醇組合使用。
[脂質體組合物之製造方法]
依據本發明，提供製造含有埃立布林或其藥理學上容許之鹽的脂質體組合物之方法。製造脂質體組合物之方法係包括以下步驟之方法：提供含有脂質體之脂質體分散液；將上述脂質體分散液與上述活性化合物(埃立布林或其藥理學上容許之鹽)混合；以及於上述脂質體分散液之脂質體內相中導入上述活性化合物。
提供含有脂質體之脂質體分散液之步驟較好的是包括以下步驟：提供脂質體準備液；以及將上述脂質體準備液之脂質體外相置換或稀釋。
脂質體準備液例如可藉由在含有銨鹽之溶液中製備脂質體而提供。藉由在含有銨鹽之溶液中製備脂質體準備液，可製成在脂質體內相中更含有銨鹽之脂質體分散液。
製備脂質體準備液時之含有銨鹽之溶液只要為含有任一種銨鹽之溶液，則無特別限定。
作為銨鹽，例如可列舉：氯化銨、硼酸銨、硫酸銨、甲酸銨、乙酸銨、檸檬酸銨、酒石酸銨、琥珀酸銨、磷酸銨，較好的是硫酸銨、乙酸銨、檸檬酸銨、酒石酸銨、磷酸銨，更好的是硫酸銨、檸檬酸銨、酒石酸銨，尤其好的是硫酸銨。
該等銨鹽中，可將任意2種以上之銨鹽組合使用。
含有銨鹽之溶液中之銨鹽之濃度可根據所封入之埃立布林等之量而適當設定；越高越好，較好的是10 mM以上，更好的是20 mM以上，進而較好的是50 mM以上。含有銨鹽之溶液之pH值較好的是設為3~9，就封入率與穩定性之平衡而言，更好的是4~9，進而較好的是5~8。
為調整含有銨鹽之溶液之pH值，可使用pH調整劑。含有銨鹽之溶液中之各pH調整劑之濃度並無特別限定，較好的是1~300 mM，更好的是5~100 mM。
pH調整劑例如可列舉：精胺酸、組胺酸、甘胺酸等胺基酸，抗壞血酸、苯甲酸、檸檬酸、麩胺酸、磷酸、乙酸、丙酸、酒石酸、碳酸、乳酸、硼酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、己二酸、鹽酸、硫酸等酸，上述酸之鈉鹽、鉀鹽、銨鹽等鹽，三羥基甲基胺基甲烷、氨水(氨)、氫氧化鈉、氫氧化鉀等鹼性化合物(鹼)等。作為pH調整劑，較好的是氫氧化鈉、鹽酸、氨水、乙酸、乳酸、酒石酸、琥珀酸、檸檬酸及磷酸，更好的是氫氧化鈉、氨水、鹽酸、乙酸、檸檬酸及磷酸，進而較好的是氫氧化鈉、氨水、鹽酸、檸檬酸及磷酸。pH調整劑可將任意2種以上之銨鹽組合使用。又，作為pH調整劑，可使用磷酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝化生理食鹽液等緩衝液。
作為脂質體準備液，適宜使用實質上不含環糊精且藉由製備脂質體而獲得之溶液。又，作為脂質體準備液，可於脂質體內相中更含有鹽、酸、鹼及/或胺基酸，於此情況，較好的是於脂質體內相中更含有活性化合物、銨鹽及酸。銨鹽可列舉硫酸銨作為較佳例示，酸可列舉檸檬酸作為較佳例示。
脂質體之製備可列舉：脂質膜法(渦漩法)、逆相蒸發法、超音波法、預泡(pre-vesicle)法、乙醇注入法、法式壓碎(French Press)法、膽酸去除法、Triton X-100批次法、Ca2+ 融合法、醚注入法、退火法、冷凍融解融合法等。
脂質體之製備中之各種條件(膜構成成分之量、溫度等)可根據脂質體之製備方法或目標脂質體之組成、粒徑等而適當設定(參照上述菊池(1983)等)。
可視需要任意地調整脂質體之粒徑。粒徑例如可藉由使用孔徑一致之膜濾器，於高壓力下進行擠壓(擠出過濾)而調整。粒徑之調整可於本發明之脂質體組合物之製造中之任意時機進行，例如可於調整脂質體準備液中之脂質體外相之前、調整脂質體準備液中之脂質體外相之後、或者將活性化合物導入至脂質體內相中後進行。粒徑之調整較好的是於將活性化合物導入至脂質體內相中之前進行，更好的是於調整脂質體準備液中之脂質體外相之前進行。
藉由將所獲得之脂質體準備液之脂質體外相置換或稀釋，可獲得脂質體分散液。脂質體外相之置換或稀釋可進行1次，亦可將各種置換或稀釋之方法加以組合而進行複數次。
作為置換脂質體準備液之脂質體外相的方法，可列舉透析、離心分離、凝膠過濾等方法。藉由置換脂質體外相，可以脂質體外相中實質上不含環糊精或銨鹽之方式實施本發明。又，藉由將脂質體外相置換或稀釋，亦可於脂質體內相中有效率地封入埃立布林或其藥理學上容許之鹽。
透析例如可使用透析膜而進行。作為透析膜，可列舉纖維管或Spectra/Por等以分子量區分之膜。
離心分離例如可於離心加速度較好的是100,000 g以上、更好的是300,000 g以上之條件下實施。藉由離心而置換脂質體外相，可與脂質體外相之置換一起進行脂質體之濃縮。
凝膠過濾例如可藉由使用Sephadex或Sepharose等管柱，基於分子量進行區分而實施。
作為將脂質體外相置換及/或稀釋時所使用之溶劑(分散介質)，例如可列舉蔗糖溶液、食鹽水、細胞培養用之培養基等。藉由使用該等溶劑，可製備穩定之脂質體組合物。
該溶劑之pH值並無特別限定，可於2~11之範圍內設定，較好的是3~10，更好的是6~10，進而較好的是7~10。如下文所述，將埃立布林等導入至脂質體內相中時亦可利用pH值梯度。於此情況，可以脂質體外相達到目標pH值之方式設定溶劑之pH值。
為調整該溶劑之pH值，可使用pH調整劑。所使用之濃度並無特別限定，較好的是1~300 mM，更好的是5~100 mM。
作為pH調整劑，例如可列舉：精胺酸、組胺酸、甘胺酸等胺基酸，抗壞血酸、苯甲酸、檸檬酸、麩胺酸、磷酸、乙酸、丙酸、酒石酸、碳酸、乳酸、硼酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、己二酸、鹽酸、硫酸等酸，上述酸之鈉鹽、鉀鹽、銨鹽等鹽，三羥基甲基胺基甲烷、氨水、氫氧化鈉、氫氧化鉀等鹼性化合物；較好的是氫氧化鈉、鹽酸、組胺酸、酒石酸、琥珀酸、檸檬酸及磷酸，更好的是氫氧化鈉、鹽酸、組胺酸、酒石酸、檸檬酸及磷酸，進而較好的是氫氧化鈉、鹽酸、組胺酸、磷酸。
為改善埃立布林或其藥理學上容許之鹽向脂質體中之封入率，可藉由在脂質體外相中添加含有電解質之溶液(鹽類溶液)，使離子強度增大而使封入率增加。脂質體外相中所含之電解質(鹽類)並無特別限定，較好的是氯化鈉、氯化鉀，更好的是氯化鈉。又，亦可使用生理食鹽水。又，作為脂質體分散液等脂質體外相，可含有糖、電解質、及/或胺基酸，亦可含有糖或電解質、及胺基酸。糖可列舉蔗糖作為較佳例示，電解質可列舉生理食鹽水、氯化鈉等作為較佳例示，胺基酸可列舉組胺酸。
所獲得之脂質體分散液較好的是於脂質體外相及脂質體內相中實質上不含環糊精或銨鹽，但本發明中，於以任何理由而於脂質體分散液之脂質體外相中添加環糊精或銨鹽之情況等，脂質體分散液可於脂質體外相中含有環糊精或銨鹽，亦可將埃立布林或其藥理學上容許之鹽導入至脂質體內相中。
脂質體分散液中之脂質體之脂質濃度較好的是1~100 mM，更好的是1~50 mM。於該等範圍中，不會損及脂質體分散液之物性，而可適宜形成更多脂質體粒子。
藉由將所獲得之脂質體分散液與埃立布林等活性化合物混合，於脂質體分散液之脂質體內相中導入活性化合物，可獲得脂質體組合物。導入步驟較好的是包括提高脂質體分散液與活性化合物之混合液中的脂質體之膜滲透性的步驟。藉此，可以更短之時間將埃立布林等封入脂質體中。然而，將脂質體分散液與埃立布林等混合後，即便不特別進行用以提高脂質體之膜滲透性的操作，只要花費時間，亦可將埃立布林等封入脂質體中。
於混合埃立布林或其藥理學上容許之鹽的步驟中，作為埃立布林等，可使用溶解於溶劑中者、或固體狀者。溶劑並無特別限定，例如可使用與脂質體分散液中之脂質體外相相同者。
亦可視需要而任意地於將埃立布林等導入至脂質體內相中時利用pH值梯度。於此情況，脂質體分散液中之脂質體內相之pH值較好的是3~9，更好的是4~9，進而較好的是5~8。
又，即便將脂質體外相之pH值設定為比脂質體內相之pH值高，亦可提供pH值梯度。較佳pH值之梯度為1~5，更好的是2~3。
進而，藉由使脂質體外相之pH值接近埃立布林等之pKa附近，可提高向脂質體中之封入率。較好的是7.5~12.5，更好的是8.5~11.5，進而較好的是9~10.5(埃立布林甲磺酸鹽之pKa=9.6)。
作為脂質體準備液，適宜使用實質上不含環糊精且藉由製備脂質體而獲得之溶液。
作為提高所得混合液中之脂質體之膜滲透性的方法，可列舉加熱混合液之方法、於混合液中添加膜流化劑之方法等。
於加熱混合液之情況，一般而言，可藉由升溫至更高之溫度而更有效率地將活性化合物導入至脂質體內相中。具體而言，宜考慮到活性化合物或所使用之脂質體膜構成成分之熱穩定性而設定升溫之溫度。尤其好的是，升溫之溫度設為脂質體之脂質雙層膜之相轉移溫度以上。
所謂脂質體之脂質雙層膜之「相轉移溫度」，意指升溫狀態下之示差熱分析中之吸熱開始溫度(吸熱反應開始時之溫度)。所謂示差熱分析，係指可藉由一面使試料及基準物質之溫度變化，一面測定該試料與基準物質之溫度差作為時間或溫度之函數，而分析試料之熱特性的技術。於對脂質體之膜構成成分進行示差熱分析之情況，隨溫度之上升而產生脂質體膜成分之流動化，觀察到吸熱反應。如本技術領域中所廣泛知曉，觀察到由脂質體之膜成分引起之吸熱反應之溫度域大幅變化。例如於脂質體膜成分以純粹之脂質所構成之情況，觀察到吸熱反應之溫度域非常狹窄，吸熱反應多在相對於吸熱峰值溫度為±1℃之範圍內觀察到。另一方面，於脂質體膜成分以複數種脂質所構成之情況，尤其於來自天然物之脂質所構成之情況等，存在觀察到吸熱反應之溫度域變廣之傾向，吸熱反應有於相對於吸熱峰值溫度例如為±5℃之範圍內觀察到(即觀察到較寬之波峰)之情況。本發明中認為，藉由升溫至脂質體之脂質雙層膜之相轉移溫度以上，脂質體之膜流動性上升，活性化合物之膜滲透性上升。
例如，雖亦取決於活性化合物或所使用之脂質體膜構成成分之熱穩定性等，但較好的是脂質體之脂質雙層膜之相轉移溫度~相轉移溫度+20℃之溫度範圍，更好的是相轉移溫度~相轉移溫度+10℃之溫度範圍，進而較好的是相轉移溫度+5℃~相轉移溫度+10℃之溫度範圍。
升溫之溫度通常為20~100℃，較好的是40~80℃，進而較好的是45~65℃。
具體而言，於以二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼(單體之相轉移溫度：41℃)與膽固醇為主體之脂質體膜之情況，雖亦取決於其組成，但一般而言升溫溫度較好的是40~60℃，更好的是45~50℃。又，於以氫化大豆磷脂醯基膽鹼(HSPC，hydrogenated soybean phosphatidylcholine，單體之相轉移溫度：50~60℃)與膽固醇為主體之脂質體膜之情況，雖亦取決於其組成，但一般而言升溫溫度較好的是50~70℃，更好的是55~65℃。然而，該等升溫之溫度對本發明並無任何限定。
於升溫之步驟中，維持在相轉移溫度以上之溫度的時間並無特別限定，例如可於數秒~30分鐘之範圍內適當設定，若考慮到活性化合物或脂質之熱穩定性、或有效率之大量生產，則較理想為以短時間進行處理。即，升溫維持時間較好的是1分鐘~30分鐘，更好的是2分鐘~5分鐘。然而，該等溫度維持之時間對本發明並無任何限定。
又，如上所述，藉由在所獲得之混合液中添加膜流化劑(即，添加於脂質體之外相側)，亦可提高脂質體之膜滲透性。作為膜流化劑，可列舉可溶於水系溶劑中之有機溶劑、界面活性劑、酶等。更具體而言，作為有機溶劑，例如可列舉乙醇、苄醇等一元醇類，甘油、丙二醇等多元醇類，二甲基亞碸(DMSO，dimethyl sulfoxide)等非質子性極性溶劑。作為界面活性劑，可列舉：脂肪酸鈉、單烷基硫酸鹽、單烷基磷酸鹽等陰離子系界面活性劑，烷基三甲基銨鹽等陽離子系界面活性劑，烷基二甲基氧化胺等兩性界面活性劑，聚氧基伸乙基烷基醚、烷基單甘油醚、山梨糖醇酐脂肪酸酯等非離子性界面活性劑。作為酶，可列舉：膽鹼酯酶、膽固醇氧化酶等。本領域技術人員可根據脂質體膜構成成分之組成、膜流化劑等，且考慮到藉由添加膜流化劑而使活性化合物之封入效率化之程度、或脂質體之穩定性等，來設定膜流化劑之量。
本發明之脂質體組合物之製造方法可於上述導入步驟後繼續包括調整所得脂質體組合物之脂質體外相之pH值的步驟。
外相之調整之pH值並無特別限定，就構成脂質體之磷脂質之化學穩定性觀點而言，較好的是4~10，更好的是5~9，進而較好的是6~8之中性pH值。
又，可更包括使所獲得之脂質體組合物乾燥的步驟。即，於將脂質體組合物製成液劑之情況，可將由上述導入步驟獲得之液體狀脂質體組合物直接作為最終之脂質體組合物，或者可藉由調整(置換等)所得液體狀脂質體組合物中之脂質體外相而製成最終之脂質體組合物。此時之脂質體外相之調整可與脂質體準備液中之脂質體外相之調整同樣地進行。於脂質體組合物為液劑之情況，可直接供使用。
又，於將脂質體組合物製成固形製劑之情況，可藉由使由上述導入步驟所獲得之液體狀脂質體組合物乾燥而製成最終之固體狀脂質體組合物。作為使脂質體組合物乾燥之方法，可列舉冷凍乾燥或噴霧乾燥等。於脂質體組合物為固形製劑之情況，脂質體組合物可藉由溶解或懸浮於適當之溶劑中而製成液劑以供使用。溶劑可根據脂質體組合物之使用目的等而適當設定，例如於將脂質體組合物用作注射劑之情況，溶劑宜為滅菌蒸餾水。於將脂質體組合物用作醫藥之情況，可由醫生或患者，例如於封入有固形製劑之小瓶中注入溶劑，而進行此種用時製備。又，於使液體狀脂質體組合物冷凍而成之固形製劑之情況，可於冷凍狀態下保存，使用時於室溫下放置融解或者藉由加溫使其急速融解而恢復為液體狀，藉此製成液劑以供使用。
[醫藥組合物等]
本發明之脂質體組合物可於醫藥領域中用作治療藥。具體而言，本發明之脂質體組合物可用作抗腫瘤劑之醫藥組合物。
於將本發明之脂質體組合物用作醫藥組合物之情況，脂質體組合物可藉由注射(靜脈注射、動脈注射、局部注射)、經口、經鼻、經皮、經肺、滴眼而投予，尤其除靜脈注射、皮下注射、皮內注射、動脈內注射以外，較好的是對作為標的之細胞或臟器進行局部注射等注射。作為經口投予時之脂質體組合物之劑形，例如可列舉錠劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、膠囊劑、內服液劑等。作為非經口投予時之脂質體組合物之劑形，例如可列舉：注射劑、點滴劑、滴眼劑、軟膏劑、栓劑、懸浮劑、敷劑、乳液劑、噴霧劑、硬膏劑等，尤其好的是注射劑、點滴劑。
醫藥組合物之投予量根據對象疾病之種類、活性化合物之種類、患者之年齡、性別、體重、症狀之程度等而顯著不同，通常成人每1天之埃立布林或其藥理學上容許之鹽之投予量並無特別限定，作為較佳鹽之埃立布林甲磺酸鹽通常為0.1~10 mg。又，可1天分成1~數次投予。作為本發明之脂質體組合物，可投予在脂質體內相中含有例如0.01~300 mg/mL之埃立布林或其藥理學上容許之鹽的脂質體組合物。
[套組]
依據本發明，提供用以製備脂質體組合物之套組。套組可用於製備作為醫藥之脂質體組合物，在臨床現場醫生或患者自身可使用。
套組包含脂質體試劑。脂質體試劑可為固體狀或液體狀中任一種。於脂質體試劑為液體狀之情況，可將上述脂質體分散液作為脂質體試劑。又，於脂質體試劑為固體狀之情況，脂質體試劑為可藉由溶解或懸浮於適當之溶劑中而獲得脂質體分散液之試劑，可藉由使上述脂質體分散液乾燥而獲得脂質體試劑。乾燥可與上述脂質體組合物之乾燥同樣地進行。當使用套組時，於脂質體試劑為固體狀之情況，可藉由使脂質體試劑溶解或懸浮於適當之溶劑中而製成脂質體分散液。此時之溶劑與上述脂質體分散液中之脂質體外相相同。
本發明之套組更包含埃立布林或其藥理學上容許之鹽(較佳鹽為埃立布林甲磺酸鹽)。埃立布林或其藥理學上容許之鹽可為固體狀或液體狀(溶解或懸浮於溶劑中之狀態)中任一種。當使用套組時，於埃立布林等為固體狀之情況，較好的是使埃立布林等溶解或懸浮於適當之溶劑中而成為液體狀。溶劑可根據埃立布林等之物性等而適當設定，例如可設為與上述脂質體分散液中之脂質體外相相同。本發明之套組中可含有埃立布林或其藥理學上容許之鹽以外之活性化合物。
套組中，脂質體試劑與活性化合物可各別包裝，或者脂質體試劑與活性化合物分別為固體狀，可混合。
於脂質體試劑為固體狀之情況，除如上所述藉由使其溶解或懸浮而製成脂質體分散液以外，套組可藉由進行與上述脂質體組合物之製造方法中的脂質體分散液與活性化合物之混合、以及活性化合物向脂質體分散液之脂質體內相中之導入同樣之步驟而使用。藉此，可製造向脂質體試劑之脂質體內相中導入有活性化合物之脂質體組合物。
於脂質體試劑與活性化合物分別為固體狀而一起包裝之情況，使該脂質體試劑與活性化合物之混合物溶解或懸浮於適當之溶劑中。此時之溶劑與上述脂質體分散液中之脂質體外相相同。藉此，可成為混合有脂質體分散液與活性化合物之狀態，其後，可藉由進行與上述脂質體組合物之製造方法中的活性化合物向脂質體分散液之脂質體內相中之導入中的其他步驟而使用。
[實施例]
列舉實施例及比較例，對本發明進行具體說明，但本發明並不限定於以下實施例。
[實施例1] <脂質體內相用水溶液之製備>
藉由將硫酸銨396.4 mg及檸檬酸一水合物189.1 mg以純水溶解，定容為15 mL而製成200 mM硫酸銨/60 mM檸檬酸水溶液。脂質體內相用水溶液係藉由將200 mM硫酸銨/60 mM檸檬酸水溶液2.5 mL以氨水將pH值調整為5.5後，使用純水定容為5 mL而製備。
<脂質體準備液之製備>
將氫化大豆磷脂醯基膽鹼(Lipoid公司製造)317.9 mg、膽固醇(Sigma公司製造)116.0 mg以及聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺(Genzyme公司製造，MPEG2000-二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺)130.4 mg溶解於氯仿10 mL中後，正確地分注為3股，將其中1股以旋轉蒸發器減壓蒸餾去除氯仿，製成脂質膜。向所獲得之脂質膜中，將脂質體內相用水溶液5 mL加溫至約60℃而添加，攪拌而獲得脂質體準備液。將該脂質體準備液進行20分鐘超音波處理後，使用經加溫至約65℃之擠出機(Lipex Biomembranes公司製造)進行整粒，獲得脂質體準備液。以動態光散射法測定所得脂質體準備液中之脂質體之粒徑，結果均為90~100 nm。
<脂質體分散液之製備>
藉由使用Sephadex G-50管柱，將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.6)溶出，而將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液。將脂質體外相置換後，以400,000×g離心30分鐘。離心後，再分散，使用0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液將液量調整為5 mL，獲得脂質體分散液。
<活性化合物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得1 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，混合0.5 mL之脂質體分散液與0.5 mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液，於55℃之水浴中培養3分鐘，藉此獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。
<封入率之測定>
封入率係以下述方式求出。
將封入有活性化合物之脂質體組合物以400,000×g超離心30分鐘。以HPLC(high performance liquid chromatography，高效液相層析法)測定上清液中之活性化合物濃度，藉此定量未封入脂質體中之活性化合物量。利用下述式計算出封入率。
[數1]
埃立布林甲磺酸鹽之封入率為90.9%。
[實施例2] <脂質體內相用水溶液之製備>
藉由以與實施例1相同之方式，將硫酸銨264.3 mg以及檸檬酸一水合物126.1 mg以純水溶解，使用定容瓶定容為10 mL，而製成200 mM硫酸銨/60 mM檸檬酸水溶液。量取其中1 mL，以氨水將pH值調整為5.5後，以純水定容為2 mL，藉此製備脂質體內相用水溶液。
<脂質體準備液之製備>
以80 mg為單位稱量脂質混合物(氫化大豆磷脂醯基膽鹼：膽固醇：聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺=58.6:19.2:22.2(重量比))，將脂質體內相用水溶液2 mL加溫至約80℃而添加，攪拌而製備脂質體準備液。將該脂質體準備液使用經加溫至約80℃之擠出機(Lipex Biomembranes公司製造)進行整粒，獲得脂質體準備液。
<脂質體分散液之製備>
將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.6)定容為10 mL，以400,000×g離心30分鐘。離心後，將上清液全部廢棄。將沈澱以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液進行再分散，使用定容瓶將液量調整為1 mL，獲得脂質體分散液。
<藥物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽(埃立布林甲磺酸鹽)以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，混合0.96 mL之脂質體分散液與0.24 mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液，於60℃之水浴中培養3分鐘，藉此獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。
<於大白鼠血漿中之穩定性>
將所製備的封入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體0.2 mL與大白鼠血漿1.8 mL混合，使用液相培養箱於37℃下振盪。於剛製備後、振盪開始6小時後、12小時後、24小時後、48小時後、72小時後進行取樣，以HPLC測定埃立布林甲磺酸鹽之脂質體內殘存量。
將測定結果示於圖1。根據圖1可知表現出如下情況：即便於血漿中，亦可經過120小時之長時間而將埃立布林甲磺酸鹽穩定地維持、緩釋。
[實施例3] <脂質體內相用水溶液之製備>
將硫酸銨264.3 mg以及檸檬酸一水合物126.1 mg以純水溶解，製成約15 mL。以氫氧化鈉水溶液將pH值調整為7.0後，以純水定容為20 mL，藉此製備脂質體內相用水溶液(100 mM硫酸銨/30 mM檸檬酸)。
<脂質體準備液之製備>
稱量脂質混合物(氫化大豆磷脂醯基膽鹼：膽固醇：聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺=58.6：19.2：22.2(重量比))378 mg，將上述脂質體內相用水溶液10 mL加溫至約80℃而添加，攪拌而製備脂質體準備液。安裝50 nm之聚碳酸酯膜濾器，以經加溫至約80℃之擠出機(Lipex Biomembranes公司製造)將脂質體準備液進行整粒，獲得粒徑約80 nm之脂質體準備液。
<脂質體分散液之製備>
藉由使用Sephadex G-50管柱，將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.6)溶出，而將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液。將脂質體外相置換後，以約400,000×g離心30分鐘。離心後，以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.6)進行再分散，將液量定容為10 mL，藉此獲得脂質體分散液。
<藥物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.6)溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，混合9.6 mL之脂質體分散液與1.2 mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液，使用氫氧化鈉將pH值調整為9.5。於60℃之水浴中培養3分鐘，藉此獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。冷卻後，使用鹽酸將pH值調整為7.5。以與實施例1相同之方式測定封入率，結果封入率為99%。
[實施例4] <脂質體內相用水溶液之製備>
以與實施例1相同之方式，製備100 mM硫酸銨/30 mM檸檬酸水溶液(pH值=5.5)。
<脂質體準備液之製備>
將氫化大豆磷脂醯基膽鹼、膽固醇以及聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺分別僅稱量以下表1所記載之量。分別溶解於氯仿3 mL中後，以旋轉蒸發器減壓蒸餾去除氯仿，製成脂質膜。於所獲得之脂質膜中，將所製成之脂質體內相用水溶液10 mL加溫至約80℃而添加，攪拌而製備脂質體準備液。使用經加溫至約80℃之擠出機(Lipex Biomembranes公司製造)進行整粒，獲得經整粒之脂質體準備液。以動態光散射法測定所得脂質體準備液中之脂質體之粒徑，結果Rp.1為77 nm，Rp.2為95 nm，Rp.3為79 nm，Rp.4為128 nm。
[表1]
<脂質體組合物之製備>
以與實施例1相同之方式獲得脂質體分散液。又，將埃立布林甲磺酸鹽以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
於10 mL之玻璃容器中，分別混合4.8 mL之各脂質體分散液與0.6 mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液，於60℃之水浴中培養3分鐘，藉此獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。於各脂質體組合物中添加24.6 mL之0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液，使用0.22 μm之聚偏二氟乙烯(PVDF)過濾器進行過濾滅菌，藉此獲得投予被檢體(埃立布林甲磺酸鹽濃度：0.1 mg/mL)。
以與實施例1相同之方式測定封入率，確認於任一配方中均為90%以上。
對雌性裸鼠(NU/NU，日本Charles River股份有限公司)，將人類黑色素瘤LOX(lysyl oxidase，離胺基氧化酶)細胞接種於皮下，於11天後或12天後將被檢體以達10 mL/kg(埃立布林甲磺酸鹽為1.0 mg/kg)之方式進行尾靜脈內投予。投予後經過一定時間(15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、8小時、12小時、24小時、36小時、48小時)後實施藉由心穿刺之血液採集及腫瘤組織之摘取(n=3)。血液係取入至含有肝素之試管中，於採集後30分鐘以內在4℃下以1,500×g離心分離10分鐘而獲得血漿。腫瘤係摘取完全組織，以PBS(phosphate buffered saline，磷酸鹽緩衝溶液)清洗，以吸水紙拭乾後，立即測定‧記錄組織重量。將組織放入試管中，於冰水中冷卻後，於-80℃下保存至分析操作之前。
血漿中以及腫瘤組織中之埃立布林甲磺酸鹽係使用LC/MS/MS進行測定。
PK參數(pharmacokinetic parameter，藥物動力學參數)係使用非室體模式(non-compartment model)分析軟體(WinNonlin v.5.0.1)而算出。將埃立布林甲磺酸鹽之血漿PK參數以及腫瘤組織PK參數之結果分別示於表2及表3。
[表2]
LOX荷癌小白鼠之Rp.1~4及埃立布林甲磺酸鹽之血漿PK參數
Ratio 1=AUC血漿.脂質體 /AUC血漿.埃立布林甲磺酸鹽
[表3]
LOX荷癌小白鼠之Rp.1~4及埃立布林甲磺酸鹽之腫瘤組織PK參數
Ratio 2=AUC腫瘤.脂質體 /AUC腫瘤.埃立布林甲磺酸鹽
根據表2及表3，Rp.1~4之全部脂質體組合物中，與自由之埃立布林甲磺酸鹽相比較，血漿及腫瘤組織之AUC增大，因此埃立布林甲磺酸鹽之腫瘤轉移量及滯留性提高。
[實施例5] <脂質體內相用水溶液之製備>
以與實施例1相同之方式製備100 mM硫酸銨/30 mM檸檬酸水溶液(pH值=5.5)。
<脂質體準備液之製備>
稱量氫化大豆磷脂醯基膽鹼221.8 mg、膽固醇72.5 mg以及聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺86.9 mg。溶解於氯仿3 mL中後，以旋轉蒸發器減壓蒸餾去除氯仿，製成脂質膜。於所獲得之脂質膜中，將所製成之脂質體內相用水溶液10 mL加溫至約80℃而添加，攪拌而製備脂質體準備液。使用經加溫至約80℃之擠出機(Lipex Biomembranes公司製造)進行整粒，獲得經整粒之脂質體準備液。以動態光散射法測定所得脂質體準備液中之脂質體之粒徑，結果為約90 nm。
<脂質體分散液之製備>
藉由使用Sephadex G-50管柱，將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.6)溶出，而將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液。將脂質體外相置換後，以400,000×g離心30分鐘。離心後，再分散，使用0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液將液量調整為10 mL，獲得脂質體分散液。
<藥物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得1 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。又，作為自由體之投予被檢體，係藉由以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液將埃立布林甲磺酸鹽溶液稀釋，使用0.22 μm之PVDF(polyvinylidene fluoride，聚偏二氟乙烯)過濾器進行過濾滅菌，而獲得投予被檢體(埃立布林甲磺酸鹽濃度：0.3 mg/mL及0.4 mg/mL)。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，分別混合1.8 mL之脂質體分散液與1.2 mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液，於60℃之水浴中培養3分鐘，藉此獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。將所獲得之脂質體組合物以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液稀釋，使用0.22 μm之PVDF過濾器進行過濾滅菌，藉此獲得投予被檢體(埃立布林甲磺酸鹽濃度：0.2 mg/mL)。以與實施例1相同之方式測定封入率，確認為90%以上。
將作為人類喉部鱗狀細胞癌細胞株之FaDu(自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection)獲得)於含10%胎牛血清之MEM(minimum essential medium，最低必需培養基)培養基中培養，使其增殖。使用0.05%之Trypsin-EDTA(trypsin-ethylene diamine tetraacetic acid，胰蛋白酶-乙二胺四乙酸)溶液，使細胞自燒瓶中游離而回收。以PBS清洗後，以成為5×107 個/mL之方式懸浮於PBS中，於冰上保持。向6週齡之裸鼠(日本Charles River股份有限公司)之右腹側部，對每1隻皮下注射0.1 mL之細胞懸浮液。每天觀察各小白鼠，於發現狀態異常之情況進行適當記錄。隨時間經過使用游標卡尺測定腫瘤之大小，基於計算式：長徑×(短徑之平方)÷2而算出腫瘤之大小。於腫瘤之大小達到100~200 mm3 之時刻，以各試驗群間之腫瘤之大小以及小白鼠之體重之平均值變得均勻之方式進行分群(各試驗群之小白鼠數為5隻)，進行藥物之尾靜脈內投予(0.2 mL/20g，以7天為間隔進行3次)。
將被檢體投予後之平均腫瘤體積之推移結果示於圖2。
如圖2所示，FaDu為對埃立布林甲磺酸鹽之敏感性低之細胞株，因此對自由體即便投予最大耐用量即4 mg/kg，亦未獲得腫瘤縮小效果。另一方面，於脂質體組合物之情況，即便投予最大耐用量以下即2 mg/kg，亦明確地確認到腫瘤縮小效果，對於迄今為止埃立布林甲磺酸鹽未奏效之癌種類亦獲得非常高之藥理效果。
[實施例6] <脂質體內相用水溶液之製備>
以與實施例1相同之方式製備100 mM硫酸銨/30 mM檸檬酸水溶液(pH值=5.5)。
<藥物溶液之製備>
以與實施例5相同之方式實施，獲得自由體之投予被檢體(埃立布林甲磺酸鹽濃度：0.2 mg/mL、0.3 mg/mL以及0.4 mg/mL)。
<脂質體組合物之製備>
除使用以上述方式製作之脂質體內相用水溶液以外，以與實施例5相同之方式獲得脂質體組合物(埃立布林甲磺酸鹽濃度：0.3 mg/mL)。以與實施例1相同之方式測定封入率，確認為90%以上。
將作為人類腎癌細胞株之ACHN(自美國菌種保存中心獲得)於含10%胎牛血清之MEM培養基中培養，使其增殖。使用0.05%之Trypsin-EDTA溶液，使細胞自燒瓶中游離而回收。以PBS清洗後，以成為5×107 個/mL之方式懸浮於PBS中，於冰上保持。向6週齡之裸鼠(日本Charles River股份有限公司)之右腹側部，對每1隻皮下注射0.1 mL之細胞懸浮液。每天觀察各小白鼠，於發現狀態異常之情況進行適當記錄。隨時間經過使用游標卡尺測定腫瘤之大小，基於計算式：長徑×(短徑之平方)÷2而算出腫瘤之大小。於腫瘤之大小達到150~200 mm3 之時刻，以各試驗群間之腫瘤之大小以及小白鼠之體重之平均值變得均勻之方式進行分群(各試驗群之小白鼠數為5隻)，進行藥物之尾靜脈內投予(0.2 mL/20 g，以7天為間隔進行3次)。
將被檢體投予後之平均腫瘤體積之推移結果示於圖3。
如圖3所示，ACHN為對埃立布林甲磺酸鹽具有耐受性之細胞株，因此當投予自由體時，於2 mg/kg投予群、3 mg/kg投予群、以及4 mg/kg(最大耐用量)投予群中任一群中，於被檢體投予開始45天後未確認到與未處理群之有意差。另一方面，於脂質體組合物3 mg/kg投予群中確認到腫瘤增殖抑制效果，於被檢體投予開始45天後相對於未處理群以及自由體投予群而表現出有意較小之腫瘤體積值。如此，即便對於迄今為止之埃立布林甲磺酸鹽完全未獲得治療效果之癌種類，亦可藉由進行脂質體製劑化而使腫瘤之增殖延遲。
[實施例7] <脂質體內相用水溶液之製備>
製成如以下表4所示之12種內相用水溶液。
<脂質體準備液之製備>
以120 mg為單位稱量脂質混合物(氫化大豆磷脂醯基膽鹼：膽固醇：聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺=58.6：19.2：22.2(重量比))於試管中，以經加溫至80℃之各內相用水溶液3 mL進行水合。
將該脂質體準備液使用經加溫至約80℃之擠出機進行整粒，獲得脂質體準備液。
<脂質體分散液之製備>
藉由使用Sephadex G-50管柱，將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶出，藉此將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液。
將脂質體外相置換後，以400,000×g離心1小時，將上清液完全去除。將沈澱物以達約2 mL之方式再懸浮於96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)中。
以動態光散射法測定所得脂質體分散液之粒徑，結果均為約80 nm。
<藥物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，將脂質體分散液與埃立布林甲磺酸鹽溶液以達到埃立布林甲磺酸鹽：0.2 mg/mL、總脂質濃度：16 μmol/mL之方式進行混合。於60℃下升溫5分鐘，獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。
<封入率之測定>
封入率係以與實施例1相同之方式測定。將結果示於表4。根據表4可知，於將任一種銨鹽用於內相之情況，埃立布林甲磺酸鹽之封入率均明顯提高。尤其於使用硫酸銨、檸檬酸銨、磷酸銨、酒石酸銨時，封入率顯著提高。
[實施例8] <脂質體內相用水溶液之製備>
以與實施例7相同之方式製備100 mM硫酸銨/30 mM檸檬酸水溶液(pH值=7.5)之脂質體內相用水溶液。
<脂質體準備液之製備>
使用上述脂質體內相用水溶液，以與實施例7相同之方式製備脂質體準備液。
<脂質體分散液之製備>
藉由使用Sephadex G-50管柱，將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶出，而將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液。
將脂質體外相置換後，以400,000×g離心1小時，將上清液完全去除。將沈澱物以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)進行再懸浮，將脂質體外相置換為96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)，獲得脂質體分散液。以動態光散射法測定所得脂質體分散液之粒徑，結果為約80 nm。
將脂質體分散液分注為7股，將已知量之硫酸銨(已利用氫氧化鈉水溶液將pH值調整為7.5)以成為表5之各濃度之方式分別添加於脂質體外相中，獲得於脂質體外相中存在已知濃度之硫酸銨的脂質體分散液。
<藥物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，將脂質體分散液與埃立布林甲磺酸鹽溶液以達到埃立布林甲磺酸鹽：0.2 mg/mL、總脂質濃度：16 mM之方式進行混合。於60℃下升溫5分鐘，獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。
<封入率之測定>
封入率係以與實施例1相同之方式測定。將結果示於表5。於脂質體外相中硫酸銨只要存在0.4 mM，則封入率顯著降低，若存在10 mM，則基本未封入。
[表5]
[實施例9] <脂質體內相用水溶液之製備>
以與實施例7相同之方式製備100 mM硫酸銨/30 mM檸檬酸水溶液(pH值=7.5)之脂質體內相用水溶液。
<脂質體準備液之製備>
使用上述脂質體內相用水溶液，以與實施例7相同之方式製備脂質體準備液。
<脂質體分散液之製備>
藉由使用Sephadex G-50管柱，將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶出，而將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液。
將脂質體外相置換後，以400,000×g離心1小時，將上清液完全去除。將沈澱物以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)進行再懸浮，將脂質體外相置換為96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)，獲得脂質體分散液。以動態光散射法測定所得脂質體分散液之粒徑，結果為約80 nm。
其後，將脂質體分散液分注為7股。
<藥物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，將脂質體分散液與埃立布林甲磺酸鹽溶液以達到埃立布林甲磺酸鹽：0.2 mg/mL、總脂質濃度：16 mM之方式分別混合。使用1 M氫氧化鈉水溶液，以表6所示之方式分別調整脂質體外相之pH值。於60℃下升溫5分鐘，獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。繼而，使用鹽酸將外相之pH值調整為7.5。
<封入率之測定>
封入率係以與實施例1相同之方式測定。將結果示於表6。隨著脂質體外相之pH值之上升，埃立布林之封入率大幅提高，達成約100%之封入率。
[表6]
[實施例10] <脂質體內相用水溶液之製備>
以與實施例7相同之方式製備100 mM硫酸銨/30 mM檸檬酸水溶液(pH值=7.5)之脂質體內相用水溶液。
<脂質體準備液之製備>
使用上述脂質體內相用水溶液，以與實施例7相同之方式製備脂質體準備液。
<脂質體分散液之製備>
藉由使用Sephadex G-50管柱，將所獲得之脂質體準備液以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶出，而將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液。
將脂質體分散液分注為4股，以400,000×g離心1小時，將上清液完全去除。其中2股之沈澱物係以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)進行再懸浮，將脂質體外相置換為96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)。其餘2股之沈澱物係以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)進行再懸浮，將脂質體外相置換為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)。以動態光散射法測定所得脂質體分散液之粒徑，結果均為約80 nm。
<藥物溶液之製備>
將埃立布林甲磺酸鹽以96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。又，同樣地將埃立布林甲磺酸鹽以0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液溶解，獲得5 mg/mL之埃立布林甲磺酸鹽溶液。
<脂質體組合物之製備>
於10 mL之玻璃容器中，將脂質體分散液與埃立布林甲磺酸鹽溶液以達到埃立布林甲磺酸鹽：0.2 mg/mL、總脂質濃度：16 mM之方式分別混合。藉由添加氫氧化鈉，將脂質體外相為96 mg/mL蔗糖/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)之2股中之1股脂質體外相之pH值調整為9.5。同樣地，藉由添加氫氧化鈉，將脂質體外相為0.9%氯化鈉/10 mM組胺酸水溶液(pH值=7.5)之2股中之1股脂質體外相之pH值調整為9.5。於60℃下升溫5分鐘，獲得於脂質體內導入有埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物。
<封入率之測定>
封入率係以與實施例1相同之方式測定。將結果示於表7。可瞭解到，與脂質體外相為作為非電解質之蔗糖之情況相比，於作為電解質之氯化鈉之情況獲得非常高之封入率。又，除電解質之效果以外，藉由應用使脂質體外相為鹼之pH值梯度而達成100%之封入率。
[表7]
本申請案係基於2009年3月30日申請之日本專利申請案(特願2009-082521號)以及美國專利臨時申請案(61/164653)者，其內容併入本文中以作參照。
[產業上之可利用性]
本發明可提供一種以高封入率製造活性化合物之保持穩定性高之脂質體的方法。
本發明之脂質體組合物適宜利用埃立布林或其藥理學上容許之鹽之藥理作用而用於治療用途。
圖1係表示試管內大白鼠血漿中(37℃)之埃立布林甲磺酸鹽之脂質體組合物之濃度推移；
圖2係表示活體內FaDu荷癌裸鼠之利用脂質體之埃立布林甲磺酸鹽之抗腫瘤活性；及
圖3係表示活體內ACHN荷癌裸鼠之利用脂質體之埃立布林甲磺酸鹽之抗腫瘤活性。

Claims (44)

  1. 一種脂質體組合物，其係含有脂質體且於脂質體內相中含有活性化合物及銨鹽者，並且活性化合物為埃立布林或其藥理學上容許之鹽。
  2. 如請求項1之脂質體組合物，其中脂質體組合物為固體狀或液體狀。
  3. 如請求項1之脂質體組合物，其中上述銨鹽之濃度為10 mM以上。
  4. 如請求項2之脂質體組合物，其中上述銨鹽之濃度為10 mM以上。
  5. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體內相中更含有鹽、酸、鹼及/或胺基酸。
  6. 如請求項5之脂質體組合物，其中上述鹽之濃度為1~300 mM。
  7. 如請求項5之脂質體組合物，其中上述酸之濃度為1~300 mM。
  8. 如請求項6之脂質體組合物，其中上述酸之濃度為1~300 mM。
  9. 如請求項5之脂質體組合物，其中上述胺基酸之濃度為1~300 mM。
  10. 如請求項6之脂質體組合物，其中上述胺基酸之濃度為1~300 mM。
  11. 如請求項5之脂質體組合物，其中上述鹼之濃度為1~300 mM。
  12. 如請求項6之脂質體組合物，其中上述鹼之濃度為1~300 mM。
  13. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中上述活性化合物之濃度為0.01~300 mg/mL。
  14. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中上述活性化合物為埃立布林甲磺酸鹽。
  15. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體內相更含有硫酸銨、檸檬酸及活性化合物。
  16. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體外相中更含有糖、電解質、及/或胺基酸。
  17. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體外相中含有糖或電解質、及胺基酸。
  18. 如請求項16之脂質體組合物，其中上述糖之濃度為2~20%。
  19. 如請求項17之脂質體組合物，其中上述糖之濃度為2~20%。
  20. 如請求項16之脂質體組合物，其中上述胺基酸之濃度為1~300 mM。
  21. 如請求項17之脂質體組合物，其中上述胺基酸之濃度為1~300 mM。
  22. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體外相中含有蔗糖或氯化鈉、及組胺酸。
  23. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中上述脂質體內相中實質上不含環糊精。
  24. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體含有氫化磷脂醯基膽鹼。
  25. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體含有膽固醇。
  26. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體含有甲氧基聚乙二醇縮合物。
  27. 如請求項26之脂質體組合物，其中上述甲氧基聚乙二醇縮合物為二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺-聚乙二醇縮合物。
  28. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體含有氫化磷脂醯基膽鹼、膽固醇、以及二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺-聚乙二醇縮合物。
  29. 如請求項28之脂質體組合物，其含有上述氫化磷脂醯基膽鹼10~80%、上述膽固醇1~60%、及上述二硬脂醯基磷脂醯基乙醇胺-聚乙二醇縮合物0~50%。
  30. 如請求項1至4中任一項之脂質體組合物，其中脂質體含有氫化大豆磷脂醯基膽鹼、膽固醇、以及聚乙二醇2000-磷脂醯基乙醇胺。
  31. 一種請求項1至30中任一項之脂質體組合物之製造方法，其包括以下步驟：提供含有脂質體之脂質體分散液；將上述脂質體分散液與上述活性化合物混合；以及於上述脂質體分散液之脂質體內相中導入上述活性化合物；其中上述提供脂質體分散液之步驟包括以下步驟： 提供含有脂質體且於脂質體內相及脂質體外相中含有銨鹽之脂質體準備液；以及將上述脂質體準備液之脂質體外相置換或稀釋；上述將脂質體外相置換或稀釋之步驟為使脂質體外相之pH值高於脂質體內相之pH值的步驟。
  32. 如請求項31之方法，其中上述脂質體分散液於脂質體外相中實質上不含銨鹽。
  33. 如請求項31之方法，其中上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值為3~10。
  34. 如請求項32之方法，其中上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值為3~10。
  35. 如請求項31之方法，其中上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值為7~10。
  36. 如請求項32之方法，其中上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值為7~10。
  37. 如請求項33至36中任一項之方法，其中上述pH值為將上述脂質體分散液與上述活性化合物混合之步驟中的上述脂質體分散液之脂質體外相之pH值。
  38. 如請求項31至36中任一項之方法，其中上述將脂質體外相置換或稀釋之步驟為使脂質體內相之pH值與脂質體外相之pH值之差為1~5之步驟。
  39. 如請求項31至36中任一項之方法，其中上述脂質體內相之pH值為3~9。
  40. 如請求項31至36中任一項之方法，其中上述脂質體內相 之pH值為4~9。
  41. 如請求項31至36中任一項之方法，其中上述脂質體內相之pH值為5~8。
  42. 如請求項31至36中任一項之方法，其中於上述導入活性化合物之步驟中，脂質體外相為含有電解質之溶液。
  43. 如請求項31至36中任一項之方法，其中上述脂質體分散液於脂質體內相中實質上不含環糊精。
  44. 如請求項31至36中任一項之方法，其更包括使脂質體外相之pH值成為中性之步驟。
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8097648B2 (en) 1998-06-17 2012-01-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
CN101209243B (zh) * 2006-12-29 2010-12-08 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种脂质体药物及其制备方法
ES2593027T3 (es) 2009-03-30 2016-12-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Composición liposomal
WO2010113983A1 (ja) 2009-03-30 2010-10-07 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 リポソーム組成物の製造方法
RU2561582C2 (ru) * 2010-11-19 2015-08-27 Российская Федерация в лице Министерства промышленности и торговли Российской Федерации Инъекционная лекарственная форма олигопептидного препарата для лечения рассеянного склероза и способ ее получения
WO2012119077A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Morphotek Inc. Co -administration of eribulin and farletuzumab for the treatment of breast cancer
SG10201706239VA (en) * 2013-02-01 2017-08-30 Zoneone Pharma Inc Remote loading of sparingly water-soluble drugs into liposomes
AU2015301234A1 (en) 2014-08-04 2017-06-15 Zoneone Pharma, Inc. Remote loading of sparingly water-soluble drugs into lipid vesicles
EP3265063A4 (en) 2015-03-03 2018-11-07 Cureport, Inc. Dual loaded liposomal pharmaceutical formulations
HRP20211776T8 (hr) 2015-09-18 2022-03-18 Technische Universität München Ligandi za integrin alfavbeta6, njihova sinteza i upotreba
JP6564873B2 (ja) * 2015-11-02 2019-08-21 富士フイルム株式会社 リポソーム組成物およびその製造方法
WO2017188350A1 (ja) 2016-04-28 2017-11-02 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 腫瘍の成長を抑制する方法
KR20190122676A (ko) * 2017-01-18 2019-10-30 테마섹 라이프 사이언스 래보러토리 리미티드 유사분열기세포의 표적화를 증가시키는 고안정화된 리포좀
US11332498B2 (en) 2017-03-17 2022-05-17 Technische Universitat Munchen Ligands for integrin αVβ8, synthesis and uses thereof
CA3058127C (en) * 2017-03-31 2022-07-05 Fujifilm Corporation Liposome composition and pharmaceutical composition
WO2019097073A1 (en) 2017-11-20 2019-05-23 Basilea Pharmaceutica International AG Pharmaceutical combinations for use in the treatment of neoplastic diseases
US11083705B2 (en) 2019-07-26 2021-08-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treating tumor
US20230201119A1 (en) * 2020-05-29 2023-06-29 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Liposome containing ethylenediamine tetraacetic acid or salt thereof and eribulin or pharmaceutically acceptable salt thereof
CN115957351B (zh) * 2022-11-15 2023-06-27 中国人民解放军海军第九七一医院 一种碘海醇注射液及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5736155A (en) * 1984-08-08 1998-04-07 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
WO2008080367A1 (fr) * 2006-12-29 2008-07-10 Shijiazhuang Pharma. Group Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd. Composition de liposome et son procédé de préparation

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL91664A (en) 1988-09-28 1993-05-13 Yissum Res Dev Co Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release
GB9126209D0 (en) 1991-12-10 1992-02-12 Orion Yhtymae Oy Drug formulations for parenteral use
CA2161225C (en) 1993-04-22 2003-07-01 Sinil Kim Cyclodextrin liposomes encapsulating pharmacologic compounds and methods for their use
FR2736056B1 (fr) 1995-06-29 1997-08-08 Commissariat Energie Atomique Derives de cyclodextrines, leur preparation et leur utilisation pour incorporer des molecules hydrophobes dans des systemes de tensioactifs organises
US6051251A (en) 1997-11-20 2000-04-18 Alza Corporation Liposome loading method using a boronic acid compound
US8097648B2 (en) 1998-06-17 2012-01-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
US6653341B1 (en) 1998-06-17 2003-11-25 Eisai Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
DE122011100031I1 (de) 1998-06-17 2011-12-15 Eisai R&D Man Co Ltd Makrocyclische analoga und verfahren zu ihrer verwendung und herstellung.
US6593308B2 (en) 1999-12-03 2003-07-15 The Regents Of The University Of California Targeted drug delivery with a hyaluronan ligand
CN1116875C (zh) 2000-10-19 2003-08-06 南京振中生物工程有限公司 紫杉醇脂质组合物及其制备方法
AU2002340669A1 (en) 2001-11-13 2003-05-26 Celator Technologies, Inc. Lipid carrier compositions with enhanced blood stability
ES2290333T3 (es) 2001-11-13 2008-02-16 Celator Pharmaceuticals, Inc. Composiciones de vehiculos lipidicos y metodos para la retencion mejorada de farmacos.
DE10255106A1 (de) 2002-11-24 2004-06-09 Novosom Ag Liposomale Glucocorticoide
WO2004047800A2 (en) 2002-11-26 2004-06-10 Gilead Sciences, Inc. Method of drug loading in liposomes by gradient
JP5355842B2 (ja) * 2002-12-31 2013-11-27 ザイダス ビーエスヴィ ファーマ プライベート リミテッド 非ペギレート化長循環性リポソーム
WO2004089419A1 (ja) * 2003-04-04 2004-10-21 The University Of Tokyo 抗ｍｔ－ｍｍｐモノクローナル抗体含有脂質膜構造体
US6747011B1 (en) 2003-06-04 2004-06-08 A.P. Group, Inc. Antitumor drugs and methods
US20050129753A1 (en) 2003-11-14 2005-06-16 Gabizon Alberto A. Method for drug loading in liposomes
CA2553573A1 (en) 2004-01-29 2005-08-11 Eisai R & D Management Co., Ltd. Method for stabilizing macrolide compound
US8147867B2 (en) * 2004-05-03 2012-04-03 Hermes Biosciences, Inc. Liposomes useful for drug delivery
DE602005018043D1 (de) 2004-05-17 2010-01-14 Tekmira Pharmaceuticals Corp Liposomale formulierungen mit dihydrosphingomyelin und verfahren zu ihrer verwendung
CA3028453C (en) 2004-06-03 2021-07-27 Eisai R&D Management Co., Ltd. Intermediates for the preparation of analogs of halichondrin b
AU2005291807B2 (en) 2004-10-06 2012-04-19 Bc Cancer Agency Liposomes with improved drug retention for treatment of cancer
TWI373473B (en) 2005-09-02 2012-10-01 Otsuka Pharma Co Ltd Anticancer agent
US20090196913A1 (en) 2007-05-11 2009-08-06 Ken Shi Kun Huang Anti-Alpha-V Immunoliposome Composition, Methods, and Uses
US20090196918A1 (en) 2008-02-01 2009-08-06 University Of Kentucky Research Foundation Liposomal formulations of hydrophobic lactone drugs in the presence of metal ions
WO2010113983A1 (ja) 2009-03-30 2010-10-07 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 リポソーム組成物の製造方法
ES2593027T3 (es) 2009-03-30 2016-12-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Composición liposomal
WO2011094339A1 (en) 2010-01-26 2011-08-04 Eisai R&D Management Co., Ltd. Furo [3, 2 -b] pyrane derivatives useful in the synthesis of halichondrin b analogs
EP2693875A4 (en) 2011-04-08 2014-10-22 British Columbia Cancer Agency BISPHENOL COMPOUNDS AND METHODS OF USE
WO2013012891A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 Stc. Unm Intraperitoneally-administered nanocarriers that release their therapeutic load based on the inflammatory environment of cancers
CN105338977B (zh) 2013-06-26 2018-10-16 卫材R&D管理有限公司 艾日布林和乐伐替尼作为治疗癌症的联合疗法的用途
EP3046543A1 (en) 2013-09-18 2016-07-27 Stc.Unm Torroidal mesoporous silica nanoparticles (tmsnps) and related protocells
WO2015095784A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Luminus Biosciences, Inc. Solid nanoparticle formulation of microtubule inhibitors with reduced ostwald ripening for oral administration
RU2016136504A (ru) 2014-03-03 2018-04-03 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. ПРИМЕНЕНИЕ ЭРИБУЛИНА И ИНГИБИТОРОВ mTOR В КАЧЕСТВЕ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ
EP3148336B1 (en) 2014-05-28 2019-10-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Eribulin and poly (adp ribose) polymerase (parp) inhibitors as combination therapy for the treatment of cancer
CN105640935A (zh) 2014-11-12 2016-06-08 天津市汉康医药生物技术有限公司 供注射用甲磺酸艾日布林药物组合物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5736155A (en) * 1984-08-08 1998-04-07 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
WO2008080367A1 (fr) * 2006-12-29 2008-07-10 Shijiazhuang Pharma. Group Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd. Composition de liposome et son procédé de préparation

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Publication number Publication date
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