KR20190122676A - 유사분열기세포의 표적화를 증가시키는 고안정화된 리포좀 - Google Patents
유사분열기세포의 표적화를 증가시키는 고안정화된 리포좀 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20190122676A KR20190122676A KR1020197024196A KR20197024196A KR20190122676A KR 20190122676 A KR20190122676 A KR 20190122676A KR 1020197024196 A KR1020197024196 A KR 1020197024196A KR 20197024196 A KR20197024196 A KR 20197024196A KR 20190122676 A KR20190122676 A KR 20190122676A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- liposome
- liposomes
- highly
- citrate
- phosphate
- Prior art date
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims abstract description 210
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 title description 9
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title description 8
- XQVVPGYIWAGRNI-JOCHJYFZSA-N bi-2536 Chemical compound N1([C@@H](C(N(C)C2=CN=C(NC=3C(=CC(=CC=3)C(=O)NC3CCN(C)CC3)OC)N=C21)=O)CC)C1CCCC1 XQVVPGYIWAGRNI-JOCHJYFZSA-N 0.000 claims abstract description 90
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 69
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 66
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 63
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 39
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 32
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims abstract description 32
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 31
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 20
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 20
- 230000002927 anti-mitotic effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 26
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 24
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 19
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 15
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 12
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 12
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-M 2-(N-morpholino)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CCN1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- -1 BI 811283 Chemical compound 0.000 claims description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 9
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- KGWWHPZQLVVAPT-STTJLUEPSA-N (2r,3r)-2,3-dihydroxybutanedioic acid;6-(4-methylpiperazin-1-yl)-n-(5-methyl-1h-pyrazol-3-yl)-2-[(e)-2-phenylethenyl]pyrimidin-4-amine Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.C1CN(C)CCN1C1=CC(NC2=NNC(C)=C2)=NC(\C=C\C=2C=CC=CC=2)=N1 KGWWHPZQLVVAPT-STTJLUEPSA-N 0.000 claims description 3
- MYBGWENAVMIGMM-GIFXNVAJSA-N (2s)-4-(2,5-difluorophenyl)-n-[(3r,4s)-3-fluoro-1-methylpiperidin-4-yl]-2-(hydroxymethyl)-n-methyl-2-phenyl-2,5-dihydro-1h-pyrrole-1-carboxamide Chemical compound N1([C@](C=C(C1)C=1C(=CC=C(F)C=1)F)(CO)C=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)[C@H]1CCN(C)C[C@H]1F MYBGWENAVMIGMM-GIFXNVAJSA-N 0.000 claims description 3
- FAYAUAZLLLJJGH-UHFFFAOYSA-N 1-(3-chlorophenyl)-3-[5-[2-(4-thieno[3,2-d]pyrimidinylamino)ethyl]-2-thiazolyl]urea Chemical compound ClC1=CC=CC(NC(=O)NC=2SC(CCNC=3C=4SC=CC=4N=CN=3)=CN=2)=C1 FAYAUAZLLLJJGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NHFDRBXTEDBWCZ-ZROIWOOFSA-N 3-[2,4-dimethyl-5-[(z)-(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrol-3-yl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC=CC=C3NC\2=O)=C1C NHFDRBXTEDBWCZ-ZROIWOOFSA-N 0.000 claims description 3
- HHFBDROWDBDFBR-UHFFFAOYSA-N 4-[[9-chloro-7-(2,6-difluorophenyl)-5H-pyrimido[5,4-d][2]benzazepin-2-yl]amino]benzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1NC1=NC=C(CN=C(C=2C3=CC=C(Cl)C=2)C=2C(=CC=CC=2F)F)C3=N1 HHFBDROWDBDFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZLHFILGSQDJULK-UHFFFAOYSA-N 4-[[9-chloro-7-(2-fluoro-6-methoxyphenyl)-5H-pyrimido[5,4-d][2]benzazepin-2-yl]amino]-2-methoxybenzoic acid Chemical compound C1=C(C(O)=O)C(OC)=CC(NC=2N=C3C4=CC=C(Cl)C=C4C(=NCC3=CN=2)C=2C(=CC=CC=2F)OC)=C1 ZLHFILGSQDJULK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GPSZYOIFQZPWEJ-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-5-[2-(4-morpholin-4-ylanilino)pyrimidin-4-yl]-1,3-thiazol-2-amine Chemical compound N1=C(N)SC(C=2N=C(NC=3C=CC(=CC=3)N3CCOCC3)N=CC=2)=C1C GPSZYOIFQZPWEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZHJGWYRLJUCMRT-QGZVFWFLSA-N 5-[6-[(4-methyl-1-piperazinyl)methyl]-1-benzimidazolyl]-3-[(1R)-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]ethoxy]-2-thiophenecarboxamide Chemical compound O([C@H](C)C=1C(=CC=CC=1)C(F)(F)F)C(=C(S1)C(N)=O)C=C1N(C1=C2)C=NC1=CC=C2CN1CCN(C)CC1 ZHJGWYRLJUCMRT-QGZVFWFLSA-N 0.000 claims description 3
- GBJVVSCPOBPEIT-UHFFFAOYSA-N AZT-1152 Chemical compound N=1C=NC2=CC(OCCCN(CC)CCOP(O)(O)=O)=CC=C2C=1NC(=NN1)C=C1CC(=O)NC1=CC=CC(F)=C1 GBJVVSCPOBPEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000010638 Kinesin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010063296 Kinesin Proteins 0.000 claims description 3
- XKFTZKGMDDZMJI-HSZRJFAPSA-N N-[5-[(2R)-2-methoxy-1-oxo-2-phenylethyl]-4,6-dihydro-1H-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-(4-methyl-1-piperazinyl)benzamide Chemical compound O=C([C@H](OC)C=1C=CC=CC=1)N(CC=12)CC=1NN=C2NC(=O)C(C=C1)=CC=C1N1CCN(C)CC1 XKFTZKGMDDZMJI-HSZRJFAPSA-N 0.000 claims description 3
- 229950000133 filanesib Drugs 0.000 claims description 3
- LLXISKGBWFTGEI-FQEVSTJZSA-N filanesib Chemical compound C1([C@]2(CCCN)SC(=NN2C(=O)N(C)OC)C=2C(=CC=C(F)C=2)F)=CC=CC=C1 LLXISKGBWFTGEI-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- OBWNXGOQPLDDPS-UHFFFAOYSA-N n-(2,6-diethylphenyl)-3-[[4-(4-methylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino]-4,6-dihydro-1h-pyrrolo[3,4-c]pyrazole-5-carboxamide Chemical compound CCC1=CC=CC(CC)=C1NC(=O)N1CC(C(NC(=O)C=2C=CC(=CC=2)N2CCN(C)CC2)=NN2)=C2C1 OBWNXGOQPLDDPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PGXYIBJJCLWJST-MUUNZHRXSA-N n-(3-aminopropyl)-n-[(1r)-1-(3-benzyl-7-chloro-4-oxochromen-2-yl)-2-methylpropyl]-4-methylbenzamide Chemical compound NCCCN([C@H](C(C)C)C1=C(C(=O)C2=CC=C(Cl)C=C2O1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)C1=CC=C(C)C=C1 PGXYIBJJCLWJST-MUUNZHRXSA-N 0.000 claims description 3
- OCKHRKSTDPOHEN-BQYQJAHWSA-N n-(4-methoxyphenyl)sulfonyl-n-[2-[(e)-2-(1-oxidopyridin-1-ium-4-yl)ethenyl]phenyl]acetamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(C)=O)C1=CC=CC=C1\C=C\C1=CC=[N+]([O-])C=C1 OCKHRKSTDPOHEN-BQYQJAHWSA-N 0.000 claims description 3
- OWBFCJROIKNMGD-BQYQJAHWSA-N rigosertib Chemical compound COC1=CC(OC)=CC(OC)=C1\C=C\S(=O)(=O)CC1=CC=C(OC)C(NCC(O)=O)=C1 OWBFCJROIKNMGD-BQYQJAHWSA-N 0.000 claims description 3
- SXNJFOWDRLKDSF-STROYTFGSA-N volasertib Chemical compound C1CN([C@H]2CC[C@@H](CC2)NC(=O)C2=CC=C(C(=C2)OC)NC=2N=C3N(C(C)C)[C@@H](C(N(C)C3=CN=2)=O)CC)CCN1CC1CC1 SXNJFOWDRLKDSF-STROYTFGSA-N 0.000 claims description 3
- OVSKGTONMLKNPZ-UHFFFAOYSA-N 3-(1-methylindol-3-yl)-4-(1-methyl-6-nitroindol-3-yl)pyrrole-2,5-dione Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C)C=C1C1=C(C=2C3=CC=C(C=C3N(C)C=2)[N+]([O-])=O)C(=O)NC1=O OVSKGTONMLKNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940122166 Polo-like kinase inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003719 aurora kinase inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000002770 polo like kinase inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O triethylammonium ion Chemical compound CC[NH+](CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 claims 1
- 102100036284 Hepcidin Human genes 0.000 abstract 1
- 101001021253 Homo sapiens Hepcidin Proteins 0.000 abstract 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 30
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 12
- ZWRUINPWMLAQRD-UHFFFAOYSA-N nonan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCO ZWRUINPWMLAQRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical group ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000010408 film Substances 0.000 description 10
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 9
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 9
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 101000582926 Dictyostelium discoideum Probable serine/threonine-protein kinase PLK Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 4
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 108090000433 Aurora kinases Proteins 0.000 description 3
- 102000003989 Aurora kinases Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 3
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 229940115080 doxil Drugs 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 3
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 3
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 description 2
- LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HKJAWHYHRVVDHK-UHFFFAOYSA-N 15,16,17-trihydroxyhentriacontane-14,18-dione Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)C(O)C(O)C(O)C(=O)CCCCCCCCCCCCC HKJAWHYHRVVDHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumylethyl 2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229920005603 alternating copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 1
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 1
- PYSRRFNXTXNWCD-UHFFFAOYSA-N 3-(2-phenylethenyl)furan-2,5-dione Chemical compound O=C1OC(=O)C(C=CC=2C=CC=CC=2)=C1 PYSRRFNXTXNWCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 206010073478 Anaplastic large-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000004736 B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000032004 Large-Cell Anaplastic Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000002030 Merkel cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010029266 Neuroendocrine carcinoma of the skin Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N SYBR Green I Chemical compound CN(C)CCCN(CCC)C1=CC(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=C2C=CC=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000147 Styrene maleic anhydride Polymers 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- WCZWUYYJZVBKDZ-FGSXEWAUSA-N Vertine Natural products O([C@@H]1C[C@H](N2CCCC[C@@H]2C1)C=1C=C(C(=CC=11)OC)OC)C(=O)C=CC2=CC=C(O)C1=C2 WCZWUYYJZVBKDZ-FGSXEWAUSA-N 0.000 description 1
- 102220559234 Voltage-dependent L-type calcium channel subunit alpha-1C_S30H_mutation Human genes 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 208000017763 cutaneous neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical group OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 1
- 238000011038 discontinuous diafiltration by volume reduction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002662 enteric coated tablet Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid;2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound CCS(O)(=O)=O.OCCN1CCNCC1 DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DQJJMWZRDSGUJP-UHFFFAOYSA-N ethenoxyethene;furan-2,5-dione Chemical compound C=COC=C.O=C1OC(=O)C=C1 DQJJMWZRDSGUJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008723 osmotic stress Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008106 phosphatidylserines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- PJPOCNJHYFUPCE-UHFFFAOYSA-N picen-1-ol Chemical compound C1=CC=CC2=C(C=CC=3C4=CC=C5C=CC=C(C=35)O)C4=CC=C21 PJPOCNJHYFUPCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001748 polybutylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 108091006091 regulatory enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N simvastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)C(C)(C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000008348 synthetic phosphatidyl choline Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
- A61K9/1278—Post-loading, e.g. by ion or pH gradient
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
내부 환경에 포획된 항-유사분열 제제, 하나 이상의 음이온 및 하나 이상의 양이온을 포함하는 고안정화된 리포좀으로, 상기 포획된 항-유사분열 약물은 리포좀이 600 mM 수크로스에 현탁된 경우 12 시간 동안 0.6% 미만 또는 8 시간 동안 5% 미만의 느린 속도로 방출된다. 이러한 리포좀은 암 치료에 유용하다. 특히, BI 2536 및 1:3 비율의 시트레이트:포스페이트를 포함하는 HEPC:Chol:DSPE-PEG2000 (50:45:5) 리포좀.
Description
본 발명은 암 치료 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 암 치료에 유용한 고안정화된 리포좀 및 상기 고안정화된 리포좀을 이용하여 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 배경을 밝히거나 실행에 관한 추가 세부사항을 제공하기 위해 본원에 사용된 간행물 및 기타 다른 자료는 참고문헌으로 포함되며, 편의를 위해 각각 참고문헌 목록에 그룹화되어 있다.
암이 근본적으로 과도한 세포분열 상태인 경우, 유사분열-조절 효소는 훌륭한 항암 약물 표적이 되어야 한다. 실제로, 유사분열을 억제하는 보다 구체적인 방법에 대한 연구에 동기를 부여했던 약물 종류로서 미세소관 표적화 제제 (MTA)의 성공이 있었고, 이에 따라 MTA와 관련된 말초신경병증을 피할 수 있었다 [1-3]. 폴로-유사 키나아제 (PLK)[4,5], 키네신-스핀들 단백질 (KSP)[6,7] 및 오로라 키나아제 [8,9]와 같은 유사분열에서 중추적인 역할을 한 효소 조절제는 즉시 최우선의 약물 표적이 되었다. 그러나, 25종의 유사분열 특이적 제제의 개발에 100억 달러 이상을 소비했지만, 임상적 효능은 보고된바 없이 성능이 떨어졌다 [10,11].
그러나, 제한된 비율의 종양 세포만이 실제로 임의의 시간에 분할되기 때문에 유사분열-조절 효소는 본질적으로 나쁜 약물 표적일 수 있다. Komlodi-Pasztor 등에 [10] 간결하게 설명된 바와 같이, "표적화된 치료가 효과적이기 위해서는, 표적이 존재해야 한다". 그러나, 이러한 주장은 종양 생체이용률이 일시적으로 유지될 수 있다면, 유사분열-조절 효소가 아마도 여전히 효과적일 수 있음을 암시한다. PLK 억제제인 BI 2536의 전임상 시험에서 격주 투여만으로 종양 감소를 나타냈다는 사실 [4]은 지속적인 생체이용율이 세포분열의 작용에서 종양세포를 잡을 수 있는 기회를 높인다는 아이디어를 뒷받침한다.
리포좀은 약물 전달에 사용되어 온 잘 알려진 콜로이드 입자이다. 약물을 포함하는 소분자가 리포좀의 내부 및 외부 환경 사이의 물리화학적 차이를 생성함으로써 리포좀에 "간접적으로 (remotely) 로딩"될 수 있다는 것이 잘 알려져 있다 [16-18]. 중요하게, 약물은 외부 환경에서 막 투과성이어야 하지만, 내부 환경으로 확산될 때 하전되어 포획된다. 약물이 약한 염기인 경우, 이러한 차이를 만드는 한 가지 방법은 외부에 비해 낮은 pH를 만드는 리포좀 내부에 완충 음이온을 캡슐화하는 것이다.
리포좀은 종양 조직에 접근하고 유지하기 위해 종양 내피에 천공을 이용하는 것으로 알려져 있다 [12,13]. 향상된 투과 및 유지 (Enhanced Permeability and Retention, EPR) 효과로 알려진 이러한 현상은 독소루비신으로 처음 입증되었고, 그 결과가 리포좀 암 약물인 Doxil™이다 [14,15]. 리포좀 캡슐화의 안정성은 Doxil™에 의해 입증된 바와 같이 양날의 검인 것으로 밝혀졌다. 한편으로는, 건강한 조직에 대한 약물 노출이 감소된다. 다른 한편으로는, 대부분의 암 약물이 효과적이기 위해서는 높은 종양 농도를 필요로 하기 때문에 리포좀으로부터 독소루비신의 느린 누출은 효능에 제동을 일으킨다.
독소루비신과 대조적으로, BI 2536은 독소루비신의 1000분의 1 농도에서 효과적이며, 최대 농도가 아닌 지속적인 노출은 효능을 현저하게 향상시켜야 한다는 것을 암시한다.
유사분열 억제제에 의해 표적화될 수 있는 암세포를 분열하는 부분을 증가시키기 위해 유사분열 억제제의 일시적인 노출을 최대화하는 시스템을 개발하는 것이 바람직하다.
발명의 요약
본 발명은 암 치료 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 암 치료에 유용한 고안정화된 리포좀 및 상기 고안정화된 리포좀을 이용하여 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
따라서, 일 측면에서, 본 발명은 항-유사분열 약물을 캡슐화하는 고안정화된 리포좀을 제공한다. 일 구현예에서, 항-유사분열 약물은 BI 2536, 이스피네십 (SB 715992), MK 0457 (VX 680), AZD 1152, PHA 680632, PHA 739358, MLN8054, MLN8237, R763, AT9283, SNS 314, SU 6668, ENMD 2076, BI 811283, CYC116, ENMD 981693, MKC 1693, ON01910, GSK 461364, HMN 214, BI 6727, SB 743921, MK 0731 또는 ARRY 520이다. 일부 구현예에서, 임의의 적합한 리포좀 성분이 고안정화된 리포좀을 제조하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 입체 구조로 안정화된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 50:45:5의 몰 비의 HEPC:Chol:DSPE-PEG2000 (HEPC: 수소화된 난자 L-α-포스파티딜-콜린; Chol: 콜레스테롤; DSPE-PEG-2000: 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올-아민-N-[메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000]을 포함하는 지질 혼합물로부터 제조된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 하나 이상의 음이온, 바람직하게는 둘 이상의 음이온을 갖는 내부 환경을 함유하며, 이는 고안정화된 리포좀으로부터 항-유사분열 제제의 느린 방출을 제공한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 음이온, 또는 바람직하게는 둘 이상의 음이온은 본원에 기재된 바와 같을 수 있다. 일부 구현예에서, 내부 환경은 하나 이상의 양이온을 함유한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 양이온은 본원에 기재된 바와 같을 수 있다. 음이온 및 양이온의 최상의 조합은 본원에 기재된 기술을 이용하여 주어진 항-유사분열 약물에 대해 용이하게 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 담체없이 또는 이와 함께 본원 기재된 고안정화된 리포좀을 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 적합한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 담체는 당해 기술분야에 잘 알려져 있다.
제2 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 고안정화된 리포좀을 이용하여 암을 치료하는 방법을 제공한다. 이 방법에 따르면, 고안정화된 리포좀의 치료학적 유효량은 치료를 필요로 하는 환자, 예를 들어, 인간에게 투여된다.
도 1은 다양한 염 용액으로부터 헥산올로 분할하는 BI 2536의 능력을 연구하기 위한 절차를 보여준다.
도 2는 도 1에 기재된 방법론을 이용하여 다양한 단일 음이온 염 용액으로부터 헥산올로 추출된 BI 2536의 상대적 형광을 보여준다. BI 2536의 헥산올 및 염 용액으로의 분할은 염 음이온의 정체 및 농도에 영향을 받는다. 사용된 약어는 시트레이트 (C), 아세테이트 (A), 포스페이트 (P), 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트 (M) 및 염산 (H)이다. 모든 염 용액은 0.8M이고 양이온으로 나트륨을 사용하여 pH 3으로 조정된다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다.
도 3은 도 1에 기재된 방법론을 이용하여 다양한 쌍의 음이온 조합으로부터 헥산올로 추출된 BI 2536의 상대적 형광을 보여준다. 쌍 음이온 조합의 몰 비 조절은 BI 2536의 헥산올로의 분할에 영향을 미칠 수 있다. 모든 염은 0.8M이고 양이온으로 나트륨을 사용하여 pH 3으로 조정된다. 단일 염은 0.8 M의 농도를 가진다. 약어 앞의 숫자는 0.8 M의 총 염 농도 중 농도 비율을 나타낸다.
도 4는 방출 속도가 리포좀 BI2536에 대한 EC50과 상관관계가 있지만 리포좀 독소루비신과는 상관관계가 없음을 보여준다. 약물 방출 속도의 연속체는 구배 로딩을 수행하기 위해 다음의 음이온의 단일 및 쌍 조합을 이용하여 만들어졌다: 시트레이트 (C), 아세테이트 (A), 포스페이트 (P), 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트 (M) 및 염산 (H). 이중 문자 약어는 총 농도의 절반의 각각 쌍 음이온 조합을 나타낸다. 세포독성 (EC50) 대 BI 2536 (위)과 독소루비신 (아래)의 산점도는 저장성 (물) 및 고장성 조건 (수크로스) 둘 다에 대해 나타내었다. 막대 그래프는 동일한 데이터에 대한 방출 속도로 순위가 매겨진 EC50 대 제형을 보여준다. 모든 그래프의 점선은 캡슐화되지 않은 약물의 EC50을 나타낸다. 방출 속도는 12시간의 배양 후 방출되는 약물의 양을 기준으로 하였다. 스피어만의 순위 상관 (r s ) 및 연관 p-값이 보고된다.
도 5a 및 5b는 시트레이트:포스페이트 비를 조정함으로써 리포좀 BI 2536의 효능이 조절된다는 것을 보여준다. 도 5a: EC50 대 다양한 시트레이트:포스페이트 (C:P) 비율을 3일 및 8일째에 측정한 방출 속도의 산점도를 나타낸다. 도 5b: HCT116 대장암 세포로 이종이식된 마우스는 다양한 C:P 비율로 제형화된 리포좀 BI 2536의 단일 투여량으로 처리되었다. 3 마리의 마우스가 각 실험군 (experimental arm)에 사용되었다. 종양 부피와 중량이 보고된다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다.
도 6a 및 6b는 HCT116 이종이식된 마우스에서 리포좀 BI 2536의 생체 내 (in vivo) 효능 및 독성을 나타낸다. 종양 부피 및 중량 및 카플란-마이어 생존 곡선은 0 일째에 단일 투여량으로 처리 (도 6a) 또는 0 일 및 7 일째에 이중 투여량으로 처리 (도 6b)한 것에 대해 나타내었다. 리포좀 BI 2536로의 모든 처리는 설명된 바와 같이 다양한 시트레이트:포스페이트 (C:P) 비율로 제형화되었고 캡슐화 효능을 확인한 후 340 mg/kg으로 투여되었다. 유리 BI 2536은 100 mg/kg의 최대 내약 용량으로 투여되었다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다. 종양 부피는 고안정화된 리포좀 (C:P=1:3)과 다른 그룹 사이에서 단일 투여량의 경우 9 일째부터 계속해서 그리고 이중 투여량 처리의 경우 14 일째부터 현저한 차이를 나타낸다 (p < 0.05). C:P(1:3)로 처리된 마우스는 다른 그룹보다 현저하게 더 오래 생존했다 (p < 0.05). 카플란-마이어 곡선은 시간에 따른 생존율을 보여준다. 체크 표시는 죽음이 일어났음을 나타낸다. BI-L2C6P와 다른 처리 사이의 차이는 현저하였고, 만텔-콕스 로그-순위 p 값 (Mantel-Cox Log-rank p-value)은 생존 곡선에 대해 기록되었으며, C:P(1:3)로 처리된 마우스는 단일 (p = 0.0164) 및 이중 (p = 0.0349) 투여량 처리 둘 다에 대해 현저하게 더 오랫동안 생존하였음을 보여준다.
도 7a-7d는 고안정화된 리포좀 BI 2536으로 처리한 후 BI 2536의 약동학적 분포 및 생체이용률을 보여준다. (도 7a): HCT116 이종이식편을 갖는 마우스는 다양한 시트레이트:포스페이트 비율을 이용하여 캡슐화된 BI 2536으로 처리되었다. 각 데이터 포인트는 3 마리의 마우스를 포함한다. BI 2536은 형광분석법에 의해 정량화된 다양한 시점에서 조직으로부터 추출되었다. 데이터 포인트 및 오차 막대는 각각 평균 및 표준 오차를 나타낸다. 고안정화된 리포좀 (C:P=1:3)과 다른 그룹 사이의 유의적인 차이 (p < 0.05)는 별표로 표시된다. (도 7b): 곡선 아래 면적으로 측정된 BI 2536에 대한 조직 노출을 나타낸다. (도 7c): 처리 후 1.5일 및 5.5일에 유사분열 정지 세포 (mitotically arrested cell)의 비율을 나타낸다. 각 막대는 2개의 비인접한 H&E 염색 섹션의 6개의 개별 시야로부터 유래된다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다. (도 7d): 다양한 처리에 대한 전형적인 H&E 이미지를 나타낸다. 화살표는 유사분열로 정지된 세포의 예시를 나타낸다. 눈금 막대, 10μm.
도 8a 및 8b는 HCT116 이종이식된 마우스에서 리포좀 BI 2536의 생체 내 (in vivo) 효능을 보여준다. 종양 부피는 다양한 비율의 시트레이트:아세테이트로 제형화된 리포좀 (도 8a) 및 다양한 비율의 시트레이트:아세테이트로 제형화되지만 암모늄으로 대체된 나트륨 양이온을 갖는 리포좀 (도 8b)으로 0 일째에 단일 투여량으로 처리된 경우에 대해 나타내었다. 모든 제형은 340 mg/kg의 BI 2536으로 투여되었다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다.
도 2는 도 1에 기재된 방법론을 이용하여 다양한 단일 음이온 염 용액으로부터 헥산올로 추출된 BI 2536의 상대적 형광을 보여준다. BI 2536의 헥산올 및 염 용액으로의 분할은 염 음이온의 정체 및 농도에 영향을 받는다. 사용된 약어는 시트레이트 (C), 아세테이트 (A), 포스페이트 (P), 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트 (M) 및 염산 (H)이다. 모든 염 용액은 0.8M이고 양이온으로 나트륨을 사용하여 pH 3으로 조정된다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다.
도 3은 도 1에 기재된 방법론을 이용하여 다양한 쌍의 음이온 조합으로부터 헥산올로 추출된 BI 2536의 상대적 형광을 보여준다. 쌍 음이온 조합의 몰 비 조절은 BI 2536의 헥산올로의 분할에 영향을 미칠 수 있다. 모든 염은 0.8M이고 양이온으로 나트륨을 사용하여 pH 3으로 조정된다. 단일 염은 0.8 M의 농도를 가진다. 약어 앞의 숫자는 0.8 M의 총 염 농도 중 농도 비율을 나타낸다.
도 4는 방출 속도가 리포좀 BI2536에 대한 EC50과 상관관계가 있지만 리포좀 독소루비신과는 상관관계가 없음을 보여준다. 약물 방출 속도의 연속체는 구배 로딩을 수행하기 위해 다음의 음이온의 단일 및 쌍 조합을 이용하여 만들어졌다: 시트레이트 (C), 아세테이트 (A), 포스페이트 (P), 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트 (M) 및 염산 (H). 이중 문자 약어는 총 농도의 절반의 각각 쌍 음이온 조합을 나타낸다. 세포독성 (EC50) 대 BI 2536 (위)과 독소루비신 (아래)의 산점도는 저장성 (물) 및 고장성 조건 (수크로스) 둘 다에 대해 나타내었다. 막대 그래프는 동일한 데이터에 대한 방출 속도로 순위가 매겨진 EC50 대 제형을 보여준다. 모든 그래프의 점선은 캡슐화되지 않은 약물의 EC50을 나타낸다. 방출 속도는 12시간의 배양 후 방출되는 약물의 양을 기준으로 하였다. 스피어만의 순위 상관 (r s ) 및 연관 p-값이 보고된다.
도 5a 및 5b는 시트레이트:포스페이트 비를 조정함으로써 리포좀 BI 2536의 효능이 조절된다는 것을 보여준다. 도 5a: EC50 대 다양한 시트레이트:포스페이트 (C:P) 비율을 3일 및 8일째에 측정한 방출 속도의 산점도를 나타낸다. 도 5b: HCT116 대장암 세포로 이종이식된 마우스는 다양한 C:P 비율로 제형화된 리포좀 BI 2536의 단일 투여량으로 처리되었다. 3 마리의 마우스가 각 실험군 (experimental arm)에 사용되었다. 종양 부피와 중량이 보고된다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다.
도 6a 및 6b는 HCT116 이종이식된 마우스에서 리포좀 BI 2536의 생체 내 (in vivo) 효능 및 독성을 나타낸다. 종양 부피 및 중량 및 카플란-마이어 생존 곡선은 0 일째에 단일 투여량으로 처리 (도 6a) 또는 0 일 및 7 일째에 이중 투여량으로 처리 (도 6b)한 것에 대해 나타내었다. 리포좀 BI 2536로의 모든 처리는 설명된 바와 같이 다양한 시트레이트:포스페이트 (C:P) 비율로 제형화되었고 캡슐화 효능을 확인한 후 340 mg/kg으로 투여되었다. 유리 BI 2536은 100 mg/kg의 최대 내약 용량으로 투여되었다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다. 종양 부피는 고안정화된 리포좀 (C:P=1:3)과 다른 그룹 사이에서 단일 투여량의 경우 9 일째부터 계속해서 그리고 이중 투여량 처리의 경우 14 일째부터 현저한 차이를 나타낸다 (p < 0.05). C:P(1:3)로 처리된 마우스는 다른 그룹보다 현저하게 더 오래 생존했다 (p < 0.05). 카플란-마이어 곡선은 시간에 따른 생존율을 보여준다. 체크 표시는 죽음이 일어났음을 나타낸다. BI-L2C6P와 다른 처리 사이의 차이는 현저하였고, 만텔-콕스 로그-순위 p 값 (Mantel-Cox Log-rank p-value)은 생존 곡선에 대해 기록되었으며, C:P(1:3)로 처리된 마우스는 단일 (p = 0.0164) 및 이중 (p = 0.0349) 투여량 처리 둘 다에 대해 현저하게 더 오랫동안 생존하였음을 보여준다.
도 7a-7d는 고안정화된 리포좀 BI 2536으로 처리한 후 BI 2536의 약동학적 분포 및 생체이용률을 보여준다. (도 7a): HCT116 이종이식편을 갖는 마우스는 다양한 시트레이트:포스페이트 비율을 이용하여 캡슐화된 BI 2536으로 처리되었다. 각 데이터 포인트는 3 마리의 마우스를 포함한다. BI 2536은 형광분석법에 의해 정량화된 다양한 시점에서 조직으로부터 추출되었다. 데이터 포인트 및 오차 막대는 각각 평균 및 표준 오차를 나타낸다. 고안정화된 리포좀 (C:P=1:3)과 다른 그룹 사이의 유의적인 차이 (p < 0.05)는 별표로 표시된다. (도 7b): 곡선 아래 면적으로 측정된 BI 2536에 대한 조직 노출을 나타낸다. (도 7c): 처리 후 1.5일 및 5.5일에 유사분열 정지 세포 (mitotically arrested cell)의 비율을 나타낸다. 각 막대는 2개의 비인접한 H&E 염색 섹션의 6개의 개별 시야로부터 유래된다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다. (도 7d): 다양한 처리에 대한 전형적인 H&E 이미지를 나타낸다. 화살표는 유사분열로 정지된 세포의 예시를 나타낸다. 눈금 막대, 10μm.
도 8a 및 8b는 HCT116 이종이식된 마우스에서 리포좀 BI 2536의 생체 내 (in vivo) 효능을 보여준다. 종양 부피는 다양한 비율의 시트레이트:아세테이트로 제형화된 리포좀 (도 8a) 및 다양한 비율의 시트레이트:아세테이트로 제형화되지만 암모늄으로 대체된 나트륨 양이온을 갖는 리포좀 (도 8b)으로 0 일째에 단일 투여량으로 처리된 경우에 대해 나타내었다. 모든 제형은 340 mg/kg의 BI 2536으로 투여되었다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다.
본 발명은 암 치료 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 암 치료에 유용한 고안정화된 리포좀 및 상기 고안정화된 리포좀을 이용하여 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 고안정화된 리포좀으로부터의 유사분열-억제 약물 방출의 극단적인 연장은 표적화 가능한 암세포의 비율을 증가시킴으로써 암을 치료하는 효능을 개선시키는 것으로 밝혀졌다. 고안정화된 리포좀으로부터의 유사분열-억제 약물의 느린 방출은 생체 외 (in vitro) 및 생체 내 (in vivo) 암세포 사멸과 상관관계가 있다. 일례로, 단일 투여량의 고안정화된 리포좀 BI 2536으로 처리된 이종이식된 마우스는 12일 동안 지속되는 종양 부피 감소 및 처리된 마우스의 20%에서 완전한 반응을 경험하였다. 일주일 간격으로 2회의 투여량으로 처리하는 경우 처리된 마우스의 75%로 반응율이 증가했다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 기술용어 및 과학용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
용어 "약 (about)" 또는 "대략 (approximately)"은 통계적으로 의미있는 값의 범위 내를 의미한다. 이러한 범위는 주어진 값 또는 범위의 10배 이내, 바람직하게는 50% 이내, 보다 바람직하게는 20% 이내, 보다 더 바람직하게는 10% 이내, 그리고 보다 더 바람직하게는 5% 이내일 수 있다. 용어 "약" 또는 "대략"에 포함되는 허용가능한 변동은 연구 중인 특정 시스템에 따라 달라질 수 있고, 통상의 기술자는 쉽게 이해할 수 있다.
본원에 사용된 "암"은 신체의 다른 부분으로 침입하거나 퍼질 가능성이 있는 비정상적인 세포 성장을 수반하는 질환의 그룹을 말한다. 암은 신경교종, 두경부, 신장, 폐, 수모세포종, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 신경아세포종, 식도, 난소, 췌장, 전립선, 위, 고환, 갑상선과 같은 암종; 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 모양세포성백혈병, 림프아구성 T-세포 백혈병, T-세포 백혈병, B-세포 백혈병과 같은 백혈병; 역형성큰세포림프종, B-세포 림프종, 버킷 림프종, 호지킨 림프종과 같은 림프종; 및 골수종을 포함한다.
용어 "유사분열-억제 약물"은 미세소관 조절 효소, 폴로-유사 키나아제 (PLK), 키네신-스핀들 단백질 (KSP), 오로라 키나아제 등과 같은 유사분열 조절 효소를 표적화하는 약물을 의미한다. 용어 "항-유사분열의 약물 (anti-mitotic drug)" 또는 "항-유사분열 약물 (anti-mitosis drug)"은 "유사분열-억제 약물"과 상호교환적으로 사용될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "고안정화된 리포좀"은 부분적으로 리포좀의 내부 환경에 존재하는 음이온 및 양이온으로 인해 약물의 느린 방출을 갖는 리포좀-캡슐화된 약물을 말한다. 고안정화된 리포좀에 대한 방출의 가장 느린 속도는 암세포 사멸과 높은 상관관계를 나타낸다.
용어 "약물의 느린 방출"은 리포좀이 600 mM 수크로스에 현탁된 경우 12 시간 동안 0.6% 미만 또는 8일 동안 5% 미만으로 리포좀-캡슐화된 약물로부터 약물의 정량화된 방출을 말한다.
일 측면에서, 본 발명은 항-유사분열 약물을 캡슐화하는 고안정화된 리포좀을 제공한다. 일부 구현예에서, 항-유사분열 약물은 BI 2536, ON01910, GSK 461364, HMN 214 또는 BI 6727과 같은 폴로-유사 키나아제 억제제이다. 다른 구현예에서, 항유사분열 약물은 이스피네십 (SB 715992), SB 743921, MK 0731 또는 ARRY 520과 같은 키네신 스핀들 억제제이다. 일부 구현예에서, 항-유사분열 제제는 MK 0457 (VX 680), AZD 1152, PHA 680632, PHA 739358, MLN8054, MLN8237, R763, AT9283, SNS 314, SU 6668, ENMD 2076, BI 811283, CYC116, ENMD 981693 또는 MKC 1693과 같은 오로라 키나아제 억제제이다. 일부 구현예에서, 항-유사분열 제제는 BI 2536 또는 이스피네십이다.
일부 구현예에서, 임의의 적합한 리포좀 성분은 고안정화된 리포좀을 제조하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 입체 구조로 안정화된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 입체 구조로 안정화된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 50:45:5의 몰 비의 HEPC:Chol:DSPE-PEG2000 (HEPC: 수소화된 난자 L-α-포스파티딜-콜린; Chol: 콜레스테롤; DSPE-PEG-2000: 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올-아민-N-[메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000]을 포함하는 지질 혼합물로부터 제조된다.
입체 구조로 안정화된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 50:45:5의 몰 비의 HEPC:Chol:DSPE-PEG2000 (HEPC: 수소화된 난자 L-α-포스파티딜-콜린; Chol: 콜레스테롤; DSPE-PEG-2000: 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올-아민-N-[메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000]을 포함하는 지질 혼합물로부터 제조된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 하나 이상의 음이온, 바람직하게는 둘 이상의 음이온을 갖는 내부 환경을 함유하며, 이는 고안정화된 리포좀으로부터 항-유사분열 제제의 느린 방출을 제공한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 음이온, 또는 바람직하게는 둘 이상의 음이온은 본원에 기재된 바와 같을 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 음이온, 또는 바람직하게는 둘 이상의 음이온은 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트, 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 클로라이드, 시트레이트와 아세테이트, 시트레이트와 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 시트레이트와 클로라이드, 아세테이트와 포스페이트, 아세테이트와 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 아세테이트 및 클로라이드, 포스페이트와 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 포스페이트와 클로라이드, 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트와 클로라이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 클로라이드는 HCl 형태이다. 일부 구현예에서, 두 개의 음이온의 비율은 약 1:7 내지 약 7:1일 수 있다. 다른 구현예에서, 두 개의 음이온의 비율은 약 1:3 내지 약 3:1일 수 있다. 일부 구현예에서, 음이온은 약 1:3 내지 약 1:7, 바람직하게는 약 1:3 비율의 시트레이트:포스페이트이다. 일부 구현예에서, 음이온은 약 1:3 내지 약 3:1, 바람직하게는 약 1:3 비율의 시트레이트:아세테이트이다. 일부 구현예에서, 내부 환경은 하나 이상의 양이온을 함유한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 양이온은 나트륨, 암모늄, 트리에틸암모늄, 구리, 마그네슘, 아연 또는 철일 수 있다. 음이온과 양이온의 가장 최상의 조합 및 비율은 마우스에서 실험적으로 주어진 항-유사분열 약물에 대해, 본원에 기재된 기술을 이용하는 것과 같이 쉽게 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 임의의 적합한 형태, 예를 들어, 다가음이온 (polyanion) 및 양이온을 포함하는 산 또는 염 형태, 바람직하게는 염 형태로 본 발명의 하나 이상의 음이온을 함유할 수 있다. 음이온의 양은 양이온의 양과 화학량론적으로 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 하나 이상의 양이온의 음이온 염을 함유하며, 여기서 리포좀 막에 걸쳐 존재하는 양이온 농도 구배 또는 pH 구배가 있다. 다른 일 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 본 발명의 하나 이상의 암모늄 음이온 염을 함유한다. 또 다른 일 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 고안정화된 리포좀 내부에 음이온을 함유하는 반면, 고안정화된 리포좀을 함유하는 매체 (medium)의 음이온은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 적합한 수단, 예를 들어, 희석, 이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 투석, 한외여과, 흡수, 침전 등으로 부분적으로 또는 실질적으로 제거된다. 일부 구현예에서, 포획된 음이온(들)을 갖는 고안정화된 리포좀은 또한 고안정화된 리포좀 내에 물질을 보유하는데 효과적인 막관통 구배를 갖는다. 이러한 막관통 구배의 예는 pH 구배, 전기화학적 전위 구배, 양이온 이온 구배, 또는 용해도 구배이다. 막관통 구배를 생성하는 방법은 리포좀 기술분야에서 통상적이다.
일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 종양 내피에서 천공을 이용함으로써 표적 세포로 진입하게 된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 또한 표적화 리포좀, 예를 들어, 리포좀의 표면 상에 하나 이상의 표적화 성분 (moieties) 또는 생물분포 변경인자 (biodistribution modifiers)를 함유하는 리포좀일 수 있다. 표적화 성분은 원하는 표적과 특이적으로 결합하거나 상호작용할 수 있는 임의의 제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 표적화 성분은 리간드이다. 일부 구현예에서, 리간드는 우선적으로 리포좀-포획된 실재물이 원하는 효과를 발휘하는 세포 (표적 세포)에 우선적으로 결합하고 그리고/또는 내재화된다. 리간드는 일반적으로 제2 구성원이 표적 세포 상에 또는 안에 또는 표적 세포를 포함하는 조직 내에 존재하는 결합 쌍의 구성원이다. 예를 들어, 본원에 참고문헌으로 포함된 미국 특허번호 제8,922,970호를 참조한다.
본 발명의 리포좀은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있거나 추후에 발견되는 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 본원에 각각 참고문헌으로 포함된 Gregoriadis [25], 미국 특허번호 제8,992,970호 및 미국 특허번호 제9,023,384호를 참조한다. 리포좀은 전형적으로 수용성 (친수성) 물질이 수화 유체로서 이들 물질의 수용액을 사용함으로써 또는 리포좀의 제조 동안 일부 단계에서 약물/약물 용액의 첨가에 의해 포획되는 다양한 과정을 이용하여 제조된다. 지용성 (친유성) 물질은 구성 지질의 유기 용액에 가용화한 다음 지질 필름을 함유하는 건조 약물로 증발시키고 이를 수화한다. 이들 방법은 제조 과정 전 또는 그 동안 포획된 제제의 로딩 (수동 로딩)을 포함한다. 그러나, 이온화 가능한 기를 갖는 특정 유형의 화합물, 및 지질 및 수 용해성을 모두 나타내는 화합물은 온전한 소포체의 형성 후 (능동 또는 활성 로딩)에 리포좀으로 도입될 수 있다.
혼합된 지질 조성물로 리포좀을 제조하는 경우, 지질을 먼저 유기 용매에 용해시키고 혼합하여 지질의 균일한 혼합물을 보장한다. 일부 구현예에서, 유기 용매는 클로로포름 또는 클로로포름:메탄올 혼합물이다. 일단 지질이 유기 용매에 완전히 혼합되면, 용매를 제거하여 지질 필름을 생성한다. 일부 구현예에서, 유기 용매는 감소된 압력에서 회전 증발에 의해 제거되어 둥근 바닥 플라스크의 측면 상에 얇은 지질 필름을 생성한다. 지질 필름은 전형적으로 잔류 유기 용매를 제거하기 위해 높은 진공 하에 밤새 완전히 건조시킨다. 건조 지질 필름의 수화는 수용성 완충 용액을 건조 지질의 용기에 첨가하고 지질 전이 온도 이상의 온도에서 교반함으로써 간단히 달성된다. 이 방법은 크기 및 모양 (예를 들어, 지름 1-5 μm, 단일 단층 소포체 (SUV) 형성을 위한 초음파 처리와 같은 리포좀 크기 감소 기술 또는 거대한 단층 소포체 (LUV)를 형성하는 폴리카보네이트 필터를 통한 압출)이 혼성인 다중층 리포좀 (multilamellar liposome, MLV)의 집단을 생성한다. 캡슐화된 약물을 갖는 리포좀의 제조를 위한 추가 세부사항 및 추가의 방법은 본원에 각각 참고문헌으로 포함된 문헌 Fritze 등. [16], Dua 등 [20], Laouini 등 [21], 미국특허번호 제8,992,970호 및 미국특허번호 제9,023,384호에서 찾을 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 막 투과성을 감소시키기 위해 높은 콜레스테롤 함량과 결합된 포화 포스파티딜콜린을 사용하여 나노규모로 제형화된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 입체 안정화를 위해 페길화 또는 다른 결합을 이용하여 추가로 제형화된다. 다른 구현예에서, 포화된 포스파티딜콜린은 다른 막 형성 인지질로 대체될 수 있다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 통상적인 기술 또는 본원에 기재된 기술을 이용하여 제조된다. 일부 구현예에서, 막 형성 인지질은 포화된 포스파티딜콜린 (PC), 포화된 지방산 꼬리를 갖는 임의의 합성 포스파티딜콜린 (PC), 또는 막 형성 지질이다. 일부 구현예에서, 합성 PC는 디미리스토일-포스파티딜콜린, 디팔미토일-포스파티딜콜린, 또는 디스테아로일-포스파티딜콜린일 수 있다. 일부 구현예에서, 포화된 포스파티딜콜린 (PC)은 수소화된 난황 포스파티딜콜린 (HEPC)이다. 다른 구현예에서, 막 형성 지질은 포화된 스핑고미엘린, 포화된 포스파티딜에탄올아민, 포화된 포스파티딜글리세롤, 포화된 포스파티딜이노시톨 또는 포화된 포스파티딜세린일 수 있다.
일부 구현예에서, 접합체는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리부틸렌 글리콜, 또는 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체와 같은 폴리알킬렌 글리콜의 공중합체, 덱스트란, 풀루란, 피콜, 폴리비닐 알코올, 스티렌-말레산 무수물 교대 공중합체 (alternating copolymer), 디비닐 에테르-말레산 무수물 교대 공중합체, 아밀로오스, 아밀로펙틴, 키토산, 만난, 사이클로덱스트린, 펙틴 또는 카라기난일 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)은 접합체 (C-PEG)로 사용된다. 일부 구현예에서, PEG는 약 500 내지 약 10,000, 바람직하게는 약 1,000 내지 약 5,000, 보다 바람직하게는 약 2,000의 범위의 분자량을 갖는다.
일부 구현예에서, PEG 또는 다른 접합체는 디스테아로일 포스파티딜에탄올아민 (DSPE), 디팔미토일 포스파티딜에탄올아민 (DPPE), 디미리스토일 포스파티딜에탄올아민 (DMPE), 디스테아로일 글리세롤 (DSG),디미리스토일 글리세롤 (DMG), 콜레스테릴화 (cholesterylated)-접합체, 스테아릴 (STR) 접합체, C8 세라마이드-접합체 또는 C16 세라마이드-접합체와 결합된다. 일부 구현예에서, 접합체는 PEG2000이고 접합체는 DSPE-PEG2000, DPPE-PEG2000, DMPE-PEG2000, DSG-PEG2000, DMG-PEG2000, 콜레스테릴화 (cholesterylated)-PEG2000, STR-PEG2000, C8 세라마이드-PEG2000 또는 C16 세라마이드-PEG2000이다.
일부 구현예에서, 입체적으로-안정화된 리포좀은 전형적으로 5% (mol/mol)로 존재하는 C-PEG를 가지며 PC:콜레스테롤의 몰비가 전형적으로 2:1 내지 1:1의 범위인 PC:콜레스테롤:C-PEG의 예비 혼합물로부터 제조된다. 일부 구현예에서, PC:콜레스테롤:C-PEG의 예비 혼합물은 50:45:5의 몰비를 갖는다. 일부 구현예에서, 예비 혼합물은 HEPC:콜레스테롤:DSPE-PEG2000이다. 일부 구현예에서, HEPC:콜레스테롤:DSPE-PEG2000의 예비 혼합물은 50:45:5의 몰비를 갖는다.
일부 구현예에서, 리포좀은 본원에 기재된 예비 혼합물을 클로로포름에 용해시킴으로써 제조된다. 이 용액은 회전 증발 하에 얇은 필름으로 건조시킨 다음 진공 하에 밤새 두었다. 필름은 리포좀의 내부 환경으로서 본원에 기재된 바와 같이 원하는 염 용액을 함유하는 수화 완충제로 수화시키고 수조 초음파발생장치에 담갔다. 리포좀 혼합물은 먼저 초음파처리된 다음 압출되어 SUV를 형성한다. 일부 구현예에서, SUV는 수크로스에 대해 투석되어 리포좀의 외부 환경을 변화시킨다.
일부 구현예에서, 유사분열-억제 약물은 당해 기술분야에 잘 알려진 pH 구배 방법을 통해 리포좀에 능동적으로 (remotely) 로딩된다. 일부 구현예에서, 유사분열-억제 약물은 먼저 적합한 용기에서 얇은 필름으로 코팅되고 이어서 건조된다. 일부 구현예에서, 리포좀은 3:1의 지질:약물 농도로 로딩되고 물로 이러한 원하는 농도로 희석된다. 그런 다음 혼합물은 고온 수조에서 배양되어 로딩을 용이하게 하고 이어서 수크로스에서 투석하여 캡슐화되지 않은 약물을 제거한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 다음과 같이 제조된다. 50:45:5 몰비의 HEPC:Chol:DSPE-PEG2000의 지질 혼합물을 클로로포름에 용해시킨다. 혼합물을 회전 증발 하에 둥근 바닥 플라스크에서 얇은 지질 필름으로 건조시키고 리포좀의 내부 환경으로서 원하는 염 용액으로 수화시키기 전에 밤새 고진공 하에 추가로 건조시킨다. 생성된 100 mM 지질 현탁액을`1 시간 동안 배스 초음파발생장치로 초음파처리한 다음 이중 적층 100 nm 뉴클레포어 필터를 통해 리펙스 써모배럴 압출기 (Lipex Thermobarrel Extruder)를 이용하여 10회 연속 압출하여 단일 단층 소포체 (SUV)를 형성한다. 이러한 SUV는 리포좀의 외부 환경을 교환하기 위해 24시간 내에 신선한 수크로스 용액의 3 회 교체로 4℃, 300 mM 수크로스에서 투석된다. 리포좀은 의도된 사용 시까지 4℃, 유리관에 보관된다.
일 실시예에서, 유사분열-억제 약물 BI 2536은 pH 구배 방법을 통해 리포좀으로 능동적으로 로딩된다. BI 2536는 먼저 에탄올에 용해시킨 후 회전 증발 하에 건조시켜 섬광 유리병 (scintillation vial)에서 얇은 필름으로 코팅된다. BI 2536 필름은 적어도 24 시간 동안 진공 하에 추가로 건조된다. 리포좀은 3:1의 지질:약물 농도로 로딩되고 물로 약 50 내지 약 70 mM 지질의 최종 농도로 희석된다. 그 다음 혼합물을 70℃ 수조에서 배양하여 로딩을 용이하게 한 다음 적어도 36 시간 동안 300 mM 수크로스에서 투석하여 캡슐화되지 않은 BI 2536을 제거한다. 투석 후, 리포좀은 사용시까지 유리관에 저장된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 고안정화된 리포좀은, 예를 들어, 본 발명의 고안정화된 리포좀 내부에 실재물의 초기 로딩으로부터 특정 시간 후에 고안정화된 리포좀의 외부로 방출되거나 고안정화된 리포좀의 내부에 여전히 유지되는 포획된 실재물의 백분율에 의해 측정되는 바와 같이, 저장 동안 상당히 안정하다. 예를 들어, 본 발명의 고안정화된 리포좀 조성물은 4℃에서 적어도 6 개월 동안 안정하다.
고안정화된 리포좀이 이의 의도된 작용 부위, 예를 들어, 환자에 투여된 리포좀 항-유사분열 약물의 경우, 종양에 도달할 때까지 리포좀-포획된 항-유사분열 제제가 리포좀에 캡슐화된 상태로 유지되는 것이 유리하다. 본 발명의 고안정화된 리포좀은 생체 내 (in vivo) 조건 하에, 예를 들어 포유동물의 혈액에 포획된 항-유사분열 약물의 방출 (누출)에 대한 놀라운 안정성을 나타냈다. 놀랍게도, 본 발명의 고안정화된 리포좀은 혈액 순환에서 이러한 낮은 생체 내 (in vivo) 약물 방출 속도를 갖지만, 실질적인 생체 외 (in vitro) 항종양 활성을 나타냈다. 본 발명의 고안정화된 리포좀은 포획된 항-유사분열 약물의 높은 효능 및 낮은 독성의 예상치 못한 조합을 제공한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 고안정화된 리포좀을 포함하는 리포좀 조성물이 수성 매체에 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 고안정화된 리포좀을 포함하는 리포좀 조성물이 수성 매체에 제공된다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀은 막에 의해 수성 매체로부터 분리된 내부 수성 공간을 갖는다. 일부 구현예에서, 막은 1,2-디스테아로일-sn-글리세롤-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000], 수소화된 난자 L-α-포스파티딜콜린 및 콜레스테롤을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-유사분열 약물, 음이온(들) 및 양이온(들)이 고안정화된 리포좀 내부에 포획되며, 상기 고안정화된 리포좀 내부에 포획된 항-유사분열 약물은 수성 매체에서 항-유사분열 약물의 농도를 초과하는 농도이다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 담체없이 또는 이와 함께 본원 기재된 고안정화된 리포좀을 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 담체는 통상적인 식염수, 등장성 덱스트로스, 등장성 수크로스, 링거액, 및 행크 용액이다. 저장 안정성에 최적인 pH를 제공하기 위해 완충 물질이 첨가될 수 있다. 예를 들어, 약 6.0 내지 약 7.5의 pH, 보다 바람직하게는 약 6.5의 pH는 리포좀 막 지질의 안정성에 최적이며, 포획된 실재물의 우수한 보유를 제공한다. 전형적으로 2-20 mM 농도의 히스티딘, 하이드록시에틸피페라진-에틸설포네이트 (HEPES), 모르폴리노-에틸설포네이트 (MES), 석신산염, 타르타르산염, 및 시트르산염이 예시적인 완충 물질이다. 다른 적합한 담체는, 예를 들어, 물, 완충된 수용액, 0.4% NaCl, 0.3% 글리신 등을 포함한다. 단백질, 탄수화물, 또는 고분자 안정화제 및 긴장성 조정제 (tonicity adjuster), 예를 들어, 젤라틴, 알부민, 덱스트란, 또는 폴리비닐피롤리돈이 첨가될 수 있다. 조성물의 긴장성은 글루코스 또는 락토스, 수크로스, 만니톨, 또는 덱스트린과 같은 보다 비활성인 화합물을 사용하여 0.25-0.35 mol/kg의 생리학적 수준으로 조정될 수 있다. 이러한 조성물은 통상적인, 잘 알려진 멸균 기술, 예를 들어, 여과에 의해 멸균될 수 있다. 생성된 수용액은 사용을 위해 포장되거나 무균 조건 하에서 여과되고 동결건조될 수 있고, 동결건조된 조제용 물질은 투여 전에 멸균 수성 매체와 결합된다.
일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 pH 조정 및 완충제, 긴장성 조정제 등, 예를 들어, 아세트산나트륨, 락트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 등과 같은 생리학적 조건과 비슷하게 하는데 필요한 것으로 사용될 수 있다. 추가로, 고안정화된 리포좀 현탁액은 저장 시 유리-라디칼 및 지질-과산화 손상을 보호하는 지질-보호제를 포함할 수 있다. 알파-토코페롤과 같은 친유성 자유-라디칼 소광제 및 페리옥사민 (ferrioxamine)과 같은 수용성 철-특이적 킬레이터가 적합하다.
약학적 조성물에서 본 발명의 고안정화된 리포좀의 농도는 폭넓게, 즉, 약 0.05 중량% 미만 일반적으로 또는 적어도 약 2-10 중량%에서 30 내지 50 중량%까지 다양할 수 있고 선택된 특정 투여 방식에 따라, 주로 유체 부피, 점도 등에 의해 선택될 것이다. 예를 들어, 농도는 처리와 관련된 유체 부하를 낮추기 위해 증가될 수 있다. 이는 죽상동맥경화증-관련 울혈성 심부전 또는 중증 고혈압을 갖는 환자에서 특히 바람직할 수 있다. 다르게는, 자극성 (irritating) 지질로 구성된 약학 조성물은 투여 부위에서 염증을 감소시키기 위해 낮은 농도로 희석될 수 있다.
제2 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 고안정화된 리포좀을 이용하여 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 고안정화된 리포좀 약학 조성물의 양은 고안정화된 리포좀 내에 포획된 특정 항-유사분열 약물, 치료되는 암, 사용되는 고안정화된 리포좀의 종류, 및 임상의의 판단에 달라질 것이다. 일반적으로 투여되는 고안정화된 리포좀 약학 조성물의 양은 치료학적 유효량의 특정 항-유사분열 약물을 전달하기에 충분할 것이다.
치료학적 유효량을 전달하기 위해 필요한 고안정화된 리포좀 약학 조성물의 양은 약물 시험 분야에서 통상적인 생체 외 (in vitro) 및 생체 내 (in vivo) 방법에 의해 일상적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌 Budman 등 [22]을 참고한다. 다양한 항-유사분열 약물에 대한 치료학적 유효 투여량은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있고; 본 발명에 따르면, 본 발명의 약학 조성물을 통해 전달되는 항-유사분열 약물은 통상적인 비-리포좀 제형에서 항-유사분열 약물의 동일한 양을 투여함으로써 수득되는 활성과 적어도 동일하거나, 2배, 4배, 또는 10배 더 높은 활성을 제공한다. 전형적으로 본 발명의 고안정화된 리포좀 약학 조성물의 투여량은 체중의 킬로그램 당 약 0.005 내지 약 500 mg의 치료 실재물, 가장 일반적으로는, 체중의 kg 당 약 0.1 내지 약 100 mg의 치료 실재물 범위이다.
전형적으로, 본 발명의 약학 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로 국소 또는 주사제로 제조된다. 그러나, 주사 전에 액체 비히클에 용해되는 용액, 또는 현탁액에 적합한 고체 형태가 또한 제조될 수 있다. 조성물은 또한 당해 기술분야에 공지된 방법에 따라 장용성 코팅 정제 또는 겔 캡슐로 제형화될 수 있다.
본 발명의 고안정화된 리포좀 조성물은 치료되는 암에 따라 의학적으로 허용되는 임의의 방식으로 투여될 수 있다. 가능한 투여 경로는 경구, 비측, 눈, 직장, 질, 국소, 또는 폐, 예를 들어, 흡입뿐만 아니라, 근육 내, 피하, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 관절 내, 경막외 내 (intraepidural), 척추강 내, 또는 기타 다른 비경구 경로에 의한 주사를 포함한다. 본 발명에 따른 제형화된 리포좀 항-유사분열 약물을 중추 신경계의 종양으로 전달하기 위해, 리포좀을 종양으로 직접적으로 천천히 지속적으로 두개 내 주입하는 것 (운반-강화 전달 (convection-enhanced delivery), CED)이 특히 유리하다. 문헌 Saito 등 [23] 및 Mamot 등 [24]을 참고한다. 조성물은 또한 조직 표면에 직접적으로 적용될 수 있다. 지속적인 방출, pH 의존적 방출, 또는 다른 특이적 화학적 또는 환경 조건 매개 방출 투여는 또한 예를 들어, 데포 주사 (depot injection), 또는 침식성 이식과 같은 방법에 의해 본 발명에 구체적으로 포함된다.
다음의 실시예에 나타낸 바와 같이, 느린-방출의 고안정화된 리포좀 제형을 확인하기 위해 조합 음이온 다양성을 이용하는 접근법이 기술되어 있다. 시트레이트:포스페이트 음이온 쌍이 실시예에 집중되어 있지만, 스크린에서 발견된 다른 고안정화된 음이온 쌍 (도 4)은 BI 2536에 대해 유사한 결과를 생성할 것이다. 시트레이트:포스페이트 쌍이 시트레이트:아세테이트로 대체되었을 때, 이 대안적인 리포좀 형태의 단일 투여량으로 처리된 마우스는 가장 우수한 종양 감소를 나타내는 1:3의 시트레이트:아세테이트 비율과 유사한 효능을 나타냈다 (도 8a). 더 큰 다양성을 추가하는 자연스러운 방법은 양이온 정체를 변화시키는 것이다. 예를 들어, 시트레이트:아세테이트 쌍에 대해 나트륨 양이온을 암모늄으로 대체하면 종양 퇴행의 속도가 극적으로 증가한다 (도 8b).
고안정화된 리포좀은 두 가지 개념적 문제를 해결한다. 시간적 유효성을 연장시키는 경우 항유사분열 약물이 복제 중인 더 많은 종양 세포를 포획할 수 있게 한다. 또한, 고안정화된 리포좀에 의해 달성된 낮은 지속적인 약물 농도는 유사분열 이탈 (mitotic slippage)을 유발할 가능성이 적다 [19]. 이는 더 적은 종양 세포가 약물의 유도된 효과를 벗어나야 한다는 것을 의미한다. 이러한 접근법은 BI 2536뿐만 아니라, 모든 항-유사분열 약물에 적용될 수 있다. 따라서, 고안정화된 캡슐화는 이 종류에 속하는 24 종의 약물의 임상적 유용성을 회복시킬 수 있는 잠재력을 갖는다. 고안정화된 리포좀의 하나의 이점은 임상의가 덜 빈번한 투여로 더 높은 효능을 달성할 수 있게 하는 단일 투여량에 대해 2주의 시간 단위로 생체이용률을 연장시키는 것이다. 또 다른 이점은 독성 관점에서 다른 약물 종류와 비교하여 유사분열 억제제의 매력적인 특징인 고안정화된 리포좀으로 치료한 후 비가역적인 신경병증이 없다는 것이다. 실패한 유사분열 억제제를 재활성화하기 위한 일반적인 방법의 설명은 많은 가능성의 문을 열어주고 결함이 있는 유사분열을 억제하는 아이디어가 아니고; 중요한 것은 전달임을 입증한다.
실시예
본 발명은 다음의 실시예를 참고로 하여 설명되며, 이는 예시로서 제공되는 것일 뿐, 어떠한 방식이로든 본 발명을 제한하려는 의도는 아니다. 당해 기술분야에 잘 알려진 표준 기술 또는 아래 구체적으로 설명된 기술이 이용되었다.
물질 및 방법
리포좀 제조: 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000] (DSPE-PEG2000) 및 수소화된 난황 L-α 포스파티딜콜린 (HEPC)은 리포이드에서 구입하였고 콜레스테롤 (Chol)은 시그마-알드리치에서 구입하였다. 50:45:5 몰비의 HEPC:Chol:DSPE-PEG2000의 지질 혼합물을 클로로포름 (타카라)에 용해시켰다. 혼합물을 회전 증발 (Eyela NVC-2200/N-1100) 하에 둥근 바닥 플라스크에서 얇은 필름으로 건조시키고 리포좀의 내부 환경으로서 바람직한 염 용액으로 수화하기 전에 고진공 하에 밤새 추가 건조시켰다. 생성된 100 mM 지질 현탁액을 1시간 동안 배스 초음파발생장치 (S30H Elmasonic)로 초음파처리한 다음, 이중 적층 100 nm 뉴클레포어 필터 (와트만)를 통해 리펙스 써모배럴 압출기 (노던 리피즈)를 이용하여 10회 압출하여 하나의 단일 단층 소포체 (Single Unilamellar Vesicles, SUV)을 형성한다. 이러한 SUV는 리포좀의 외부 환경을 교환하기 위해 24시간 내에 3회의 신선한 수크로스 용액의 교체로 4℃의 300 mM 수크로스 (시그마)에서 투석된다. 리포좀을 의도된 사용까지 4℃의 유리관에 저장하였다.
BI 2536의 리포좀으로의 로딩: BI 2536 (악손)을 pH 구배 방법을 통해 리포좀에 능동적으로 로딩하였다. 필수의 BI 2536을 에탄올에 용해시킨 다음 회전 증발 하에 건조시켜 섬광 유리병에서 얇은 필름으로 먼저 코팅하였다. BI 2536 필름을 적어도 24 시간 동안 진공 하에서 추가로 건조시켰다. 리포좀을 3:1의 지질:약물 농도로 로딩하고 물을 이용하여 50 내지 75 mM의 최종 지질 농도로 희석하였다. 혼합물을 70℃ 수조에서 배양하여 로딩을 용이하게 하고 이어서 적어도 36시간 동안 300 mM 수크로스에서 투석하여 캡슐화되지 않은 BI 2536을 제거한다. 투석 후, 사용 시까지 리포좀을 유리관에 저장하였고 수크로스 투석물의 일부를 후속 (downstream) 캡슐화 효능 결정을 위해 4℃에서 저장하였다.
BI 2536 캡슐화의 결정: 리포좀에 로딩된 BI 2536의 양은 직접 계산 (생체 외 (in vitro) 연구) 또는 역 계산 (동물 연구의 경우)으로 결정되었다. 직접 계산의 경우, 1 ㎕의 리포좀을 20 ㎕의 에탄올로 희석하고 360 nm 여기 및 470 nm 방출 (Tecan Infinite M200)을 이용하여 형광 측정을 통해 판독하였다. BI 2536의 양은 표준 곡선과 비교하여 결정하였다. 역 계산의 경우, 100 ㎕의 노난올을 사용하여 1시간 동안 볼텍싱함으로써 1.5 ml 투석물로부터 캡슐화되지 않은 BI 2536을 추출하였다. 노난올과 수크로스를 간단한 원심분리로 상 분리하고 20 ul의 노난올 층을 330 nm 여기 및 370 nm 방출 (Tecan Infinite M200)을 이용하여 형광 강도에 대해 측정하였다. 투석물에서 BI 2536의 농도를 표준 곡선과 비교하여 결정한 다음 캡슐화 효능을 다음 공식으로 계산하였다.
여기서 A = 
이고 B = 
이다.
세포 배양: HCT116 (CCL-247, 인간 결장 암종)은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC)에서 구입하였고 10% 태아 소 혈청 (Thermo Scientific)이 보충된 맥코이 5A 배지 (Life Technology)를 이용하여 배양하였다. 세포를 5% CO2를 갖는 37℃에서 배양하였고 컨플루언스가 ~80%에 도달하였을 때 2 내지 3일마다 계대하였다.
EC 50 결정: 대략 7x103 개의 HCT116 세포를 96-웰 플레이트에 파종하여 밤새 배양 후 ~50% 컴플루언스에 도달하였다. 웰의 배지는 유리 BI 2536 또는 리포좀 BI 2536으로 보충된 신선한 배지로 교체하였다. 사용된 BI 2536의 농도는 1 μ BI 2536을 연속으로 희석하여 제조하였다. 배지를 함유하는 웰을 블랭크 대조군으로 사용하였다. 각 제형에 대해 적어도 3회 반복이 수행되었다. SYBR Green I (Life Technologies)은 세포 생존의 척도로서 DNA를 정량하는데 사용하였다. 이는 세포를 용해하기 위해 세포를 37℃에서 2 시간 동안 50 ㎕의 0.2% 소듐 도데실 설페이트와 함께 먼저 배양함으로써 수행되었다. 150 μ SYBR Green 용액 (물에 1:750으로 희석)을 각 웰에 첨가하고 Tecan 플레이트 판독기를 이용하여 형광 강도 (Ex: 497nm / Em: 520nm)를 측정하였다. 형광 강도 값을 GraphPad Prism V5에 입력하였다. 로지틱스 회귀 곡선과 EC50은 가장 높은 형광값을 100% 생존으로 설정하고 가장 낮은 형광값을 0% 생존으로 설정하여 측정하였다.
동물 연구: 모든 동물 실험은 타마섹 생명과학 연구소의 실험동물운영위원회 및 싱가폴 국립 대학교 (NUS)의 승인을 받았다. 암컷 NCr 누드 마우스 (5-8 주령)는 (싱가폴/InVivos)에서 구입하였고 HCT116 세포로 피하 이종이식시켰다. HCT116 세포를 600 cm2 디쉬 (Corning)에서 상기 기재된 바와 같이 성장시키고 컨플루언스가 ~80%에 도달하였을 때 각 디쉬를 사용하여 5 마리 마우스를 이식하였다.
효능 연구: 유리 BI 2536 (0.1 N HCl, 식염수에 용해됨) 또는 표시된 리포좀 BI 2536 제형을 HCT116로 이식한지 7일 후에 천천히 꼬리 정맥 주사로 투여하였다. 종양 부피는 적어도 150 mm3였고 길이 × 너비2 × 0.5를 이용하여 계산하였다. 모든 측정은 버니어 캘리퍼스를 이용하여 수행하였고 마우스는 격일로 체중을 쟀다. 처리 후 5일 동안 매일 마우스를 1 ml 하트만 용액으로 피하로 수화시켜 마우스를 완전히 수화시켰다.
약물동태학 연구: HCT116 이종이식편을 갖는 마우스를 표시된 유리 BI 2536 또는 리포좀 BI 2536 제형으로 처리하고 표시된 시점에서 처리 후 안락사시켜 심장, 종양, 근육, 신장, 간 및 비장을 수집하였다. 조직을 처리하기 전에 장기의 무게를 재고 -80℃에서 보관하였다. 조직을 카오트로픽 (chaotropic) 8M 요소 (Vivantis)에 침지시키고 0.5 mm 직경의 지르코니아 비드 (Biospec)를 사용하여 버틴 균질기에서 균질화하여 처리하였다. 균질화된 조직을 벤치탑 원심분리기에서 최고 속도로 1 시간 동안 회전시키고 800 ㎕의 상청액을 수집하여 BI 2536의 추출을 위해 100 ㎕ 노난올을 사용하여 1 시간 동안 부드럽게 회전시켰다. 노난올과 수크로스를 간단한 원심분리로 상 분리시키고 20 ul의 노난올 층을 Tecan 플레이트 판독기를 이용하여 형광 측정 (Ex: 330 nm / Em: 370 nm)을 통해 판독하였다. BI2536을 표준 곡선과 비교하여 정량한 다음 조직의 중량에 대해 정규화시켰다.
조직학: 표시된 처리일 후에 조직 수집을 위해 마우스를 희생시켰다. 종양 조직을 OCT 배지 (Sakura Finetek)에서 동결시키고 절단 전에 -80℃에서 보관하였다. 10 ㎛ 종양 조직 박편을 CM3050S 크라이오스탯 (Leica)을 이용하여 수득하였다. 박편화된 조직을 메탄올에 고정시키고 즉시 헤마톡실린 및 에오신 (H&E)으로 염색하였다. H&E 염색을 수행하기 위해, 먼저 종양 박편을 여과된 해리스 용액 (Sigma)으로 과염색시키고, 흐르는 수돗물로 세척하여 산-알코올 (1% 염산, 70% 에탄올)에 침지시키고 추가로 수돗물로 세척하였다. 그 다음 조직 박편을 블루잉 (bluing)까지 0.2% 암모니아수 (Sigma)에 침지시켰다. 10분 동안 수돗물에서 세척한 후, 조직 박편을 에오신-플록신 (각각 Sigma 및 Merck)으로 염색하고 95% 에탄올에 침지시켜 과도한 염색을 세척하였다. 조직 박편을 퍼마운트 (Permount) (Fisher)로 고정 (mounting)시키기 전에 밤새 건조시켰다. 모든 H&E 염색된 박편을 시각화하고 DXM 1200F 카메라 (Nikon) 및 63× 대물렌즈가 결합된 Axioplan 2 현미경 (Carl Zeiss, Inc)을 이용하여 명시야 이미지를 획득하였다.
완충제에 용해된 BI 2536의 제조: BI 2536을 먼저 에탄올에 용해시킨 다음 회전 건조에 의해 1.5 ml 마이크로퓨즈 (microfuge) 튜브에 코팅하였다. 그런 다음 BI 2636-코팅된 튜브를 표시된 염 용액에 재현탁시키기 전에 고 진공 하에 밤새 추가로 건조시켜 500 μM의 최종 농도를 달성하였다. 코팅된 BI2536의 완전한 용해를 위해, 튜브를 짧게 볼텍싱하고 특성화를 위해 사용하기 전에 1 분 동안 배스 처음파 처리하였다.
헥산올 추출: 1 ml의 표시된 완충액으로부터 BI 2536을 1 시간 동안 짧게 진탕하여 100 ㎕ 1-헥산올 (Merck)로 추출하였다. 헥산올 및 완충액 층을 짧은 시간 동안 원심분리로 분리하고 20 ul의 헥산올 층을 Tecan 플레이트 판독기 (Ex: 330 nm, Em: 370 nm)를 이용하여 형광 강도에 대해 분석하였다.
리포좀 안정성 검정: 누출된 BI 2536의 형광 탈억제 (dequenching)는 리포좀 불안정성의 척도로 사용되었다. 모든 형광 판독은 Tecan 플레이트 판독기 (Ex: 280 nm, Em: 385 nm)를 이용하여 수행하였다. 트리톤-X100 (sigma)을 첨가하여 리포좀으로부터 BI 2536을 완전히 방출하기 위해 0.2%의 최종 농도를 달성하였고 형광 판독은 다시 수행하였다. 방출된 BI 2536의 비율을 계산하기 위해, 트리톤 첨가 전의 형광 판독값을 트리톤 첨가 후의 형광 판독값으로 나누었다. 안정성 측정을 수행하기 위해, 리포좀 제형을 물 또는 600 mM 수크로스 용액으로 50× 희석하고 형광은 시작 시 Tecan 플레이트 판독기를 이용하고 37℃에서 배양한지 12 시간 후에 Tecan 플레이트 판독기를 이용하여 측정하였다. 장기간 안정성을 측정하기 위해, 리포좀을 물 또는 600 mM 수크로스에 희석한 후 37℃에서 보관하였고 형광 판독은 표시된 날에 유사한 방식으로 수행하였다.
리포좀 BI 2536의 방출 속도는 종양 세포 사멸과 반비례한다
음이온 정체 및 농도가 BI 2536의 물리화학적 측성에 영향을 미치는 정도는 pH 3으로 조정된 다음의 용액을 사용하여 연구하였다: 시트르산나트륨 (C), 아세트산 나트륨 (A), 인산 나트륨 (P), 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산 (M) 및 염산 (H). 이들 용액으로부터 BI 2536이 헥산올에 분할되는 경향은 다양한 농도에서 측정되었다 (도 1). 음이온 정체는 헥산올-추출의 효율에 영향을 미쳤으며 또한 이 효율은 음이온 농도-의존적 방식으로 증가 (P, A) 또는 감소 (M, C, H)하였다는 것이 관찰되었다 (도 2). 이들 헥산올-추출 효율 곡선의 다양성은 이들 음이온의 쌍별 조합을 이용함으로써 추가로 증가될 수 있다는 것 또한 관찰되었다 (도 3). 이러한 결과로부터 이들 음이온을 다양한 방출 속도를 갖는 리포좀 제형의 라이브러리를 생성하기 위해 조합 방식으로 사용할 수 있는 것으로 판단되었다.
리포좀 BI 2536의 고안정화된 느린 방출 형태를 확인하기 위해, 모든 15개의 단일 및 이중의 음이온의 리포좀-캡슐화 형태가 제조되었고 BI 2536는 그 내부에 능동적으로 로딩되었다. BI 2536 형광은 리포좀에 고농도로 캡슐화될 때 소멸된다. 따라서, 리포좀으로부터 BI 2536의 방출은 형광 탈억제로 인한 형광의 증가에 의해 측정될 수 있다. 이 방법을 이용하여, 각 제형에 대한 BI 2536의 누출을 시간에 대하여 고장성 (600mM 수크로스) 및 저장성 (순수) 조건에서 측정하였다 (도 4). 예상한 바와 같이, 빠른 속도 (A, H, AH)에서 느린 속도 (시트레이트를 포함하는 모든 조합)까지의 방출 속도의 범위가 관찰되었다. 이러한 방출 속도의 순위는 고장성과 저장성 환경 사이에서 눈에 띄게 다르지 않았고, 이는 리포좀 BI 2536에 대한 약물 방출 속도를 결정하는 것이, 외부 삼투 스트레스가 아닌, 리포좀 내부 환경임을 나타낸다. 고안정화된 느린-방출성 리포좀이 암세포 사멸과 관련이 있는지 조사하기 위해, HCT116 결장암 세포를 다양한 리포좀 제형의 연속 희석물과 배양하였고, 이들의 EC50 값을 효능의 척도로서 계산하였다. 고안정성이 세포독성과 관련이 있다는 가설과 일치하여, 방출 속도와 EC50 사이의 높은 상관관계가 밝혀졌다. 대조적으로, 동일한 실험을 독소루비신을 이용하여 수행하였을 때, 유사한 상관관계가 없음이 밝혀졌다 (도 4). 이러한 발견은 유사분열 억제제가 고안정성으로부터 이득을 얻을 수 있지만, 느린-방출이 유리하지 않은 다른 종류의 약물에 대해서는 그 반대에 해당한다라는 생각과 일치한다.
음이온 비율은 방출 속도 및 생체 내 (in vivo) 효능을 조정한다
가장 느린 방출 속도를 갖는 두 음이온은 시트레이트 단독 및 시트레이트와 포스페이트의 조합이었기 때문에 (도 4), 시트레이트:포스페이트 비율을 변화시켜 효능에 실질적인 영향을 미치는지 여부를 결정하기 위해 조사하였다. 0:1, 1:3, 1:1, 3:1 및 1:0 비율을 커버하는 제형을 이전의 방출 속도 및 EC50에 대해 했던 것과 동일한 방식으로 테스트하였다. 이들 변수가 세포의 세포독성 검정의 3일 또는 8일째에 측정되었는지에 관계없이 방출 속도 및 EC50과 동일한 경향이 일관되게 관찰되었다 (도 5a). 흥미롭게도, 가장 느린 방출은 1:3의 시트레이트:포스페이트 비율로 달성되었고, 이 조합 비율은 상승적이며 단순히 시트레이트 단독 및 포스페이트 단독의 평균 결과에 그치지 않았다는 것을 보여준다. 이 결과는 실제 고형 종양에서 생체 내 (in vivo) 효능을 최대화하기 위해 최적의 시트레이트:포스페이트 비율을 확인하는 것이 중요하다는 것을 추가로 제안했다. 이 비율을 확인하기 위해, 확립된 인간 결장암 이종이식편을 갖는 마우스를 1:7, 1:4, 1:3, 1:2 및 1:0.5의 시트레이트:포스페이트 비율을 커버하는 리포좀으로 처리하였다. 이전에 관찰된 1:3 비율과 일치하여, 가장 우수한 생체 내 (in vivo) 효능이 1:3 및 1:4의 시트레이트:포스페이트 비율에서 관찰되었다 (도 5b). 중요하게도, 이들 비율에 대한 종양 부피의 감소는 2주 간에 걸쳐 지속되었으며, 이는 이러한 고안정화된 리포좀으로부터의 예상되는 느린 방출과 일치한다. 1:4 비율이 1:3보다 더 큰 항-종양 효과를 나타내었지만, 이는 또한 더 큰 체중 감소를 초래했다. 따라서, 후속 실험에 대한 최적의 비율로 1:3이 채택되었다. 이 방식으로 캡슐화된 BI 2536은 "고안정화된" 것으로 지칭된다.
고안정화된 리포좀 BI 2536은 마우스에서 완전한 반응을 일으킨다
HCT116 이종이식된 종양을 갖는 누드 마우스를 고안정화된 리포좀 BI 2536 또는 음이온으로 시트레이트 또는 포스페이트만을 갖는 리포좀 BI 2536의 단일 정맥 주사로 처리하였다. 유리된 캡슐화되지 않은 BI 2536을 대조군으로 사용하였다. 고안정화된 리포좀으로 처리된 이종이식편은 12일 동안 부피가 감소하였고, 우리의 이전 동물 실험에서 관찰된 연장된 치료 효과를 재현하였다 (도 6a). 이에 비해, 시트레이트 또는 포스페이트 단독만을 사용한 리포좀은 유리 약물과 구분하기 어려웠고, 이는 음이온의 조합이 각 음이온 단독으로 설명되지 않는 상승효과를 나타낸다는 것을 입증한다. 고안정화된 BI 2536으로 처리된 마우스는 처리 후 더 무거운 체중을 갖는 경향이 있는데, 이는 약물 방출의 연장에 따라 기대되는 낮은 독성과 일치하는 경향성이다. 중요하게도, 고안정화된 BI 2536은 10 마리 중 2 마리의 마우스에서 관찰된 완전한 반응으로 마우스의 생존을 현저하게 개선시켰다. (표 1). 다른 실험군에서는 완전한 반응이 관찰되지 않았다.
| 처리 | 완전한 반응 | |
| 단일 투여량 | 이중 투여량 | |
| 유리 약물 | 0/10 | 0/8 |
| C:P (1:0) | 0/10 | 1/8 |
| C:P (0:1) | 0/10 | 0/10 |
| C:P (1:3) | 2/10 | 6/8 |
단일 투여량의 고안정화된 리포좀 대신 7일 간격으로 2회 처리 투여량으로 동일한 실험을 반복하였을 때, 치료 효과가 훨씬 더 긴 기간동안 연장되었고 (도 6b) 마우스의 75%에서 완전한 반응을 나타냈다 (표 1). 대조적으로, 다른 실험군에서는 완전한 반응이 관찰되지 않았다. 고안정화된 리포좀은 더욱 효과적일 뿐만 아니라, 내약성이 좋은 (well tolerated) 반면, 다른 모든 실험군은 처리 후 독성을 나타냈다.
고안정화된 리포좀은 종양 존재 및 BI 2536의 효능을 연장시킨다
고안정화된 리포좀으로 관찰된 개선된 효능에 대한 합리적인 설명은 약물 반감기가 보통의 페길화된 리포좀에 비해 개선된다는 것이다. 단일 투여량의 고안정화된 리포좀으로 처리된 누드 마우스는 시트레이트 또는 포스페이트 단독을 각각 함유하는 대조군 리포좀에 비해 현저하게 더 높은 종양 농도의 BI 2536을 나타냈다 (도 7a; 표 2). 이러한 경향은 전체 9.5일의 측정 기간 동안 지속되었으며, 그 후에 감소된 종양 부피는 조직 처리를 비실용적으로 만든다. 고안정화된 리포좀 BI 2536에 대한 종양 노출 (곡선 아래 면적에 의해 측정됨)은 시트레이트 리포좀에 비해 5배 더 높고 포스페이트 리포좀에 비해 3배 더 높았다. 건강한 조직 (비장, 근육, 신장, 심장 및 간)에서 약물 농도는 고안정화된 리포좀에 대해 유사하게 상승했지만, 이 경향은 10시간 후에는 통계적으로 유의하지 않았다 (도 7a; 표 2). 이러한 더 높은 조직 농도에도 불구하고, 고안정화된 리포좀은 대조군 리포좀보다 독성이 더 낮았고, 이는 고안정화된 리포좀에서 BI 2536의 대부분이 건강한 조직을 통해 순환하면서 캡슐화된 상태로 안전하게 남아있음을 시시한다. 곡선 아래 면적의 일반적인 증가와 함께, 데이터는 고안정화된 캡슐화가 BI 2536의 순환 반감기를 증가시켜, 결과적으로 종양 구획 내 BI 2536의 관류 및 유지를 향상시킨다는 것을 시사한다 (도 7b). BI 2536 (또는 임의의 항유사분열 화학요법)의 특징은 종양에서 유사분열을 억제하는 능력에 있다. BI 2536의 더 높은 생체이용률이 고안정화된 리포좀과 대조군 사이의 차이를 설명할 수 있는지에 대한 질문을 조사하기 위해, 단일 투여량의 처리 후 1.5일 및 5.5일째에 이종이식편에 대한 종양 샘플의 조직학적 분석이 수행되었다 (도 7c 및 7d). 1.5일째에, BI 2536 및 캡슐화된 유리 BI 2536의 모든 리포좀 제형은 조직학적 박편의 약 25% 종양 핵에서 관찰되는 유사분열 수치와 관련이 있다. 그러나, 5.5일까지 고안정화된 리포좀 BI 2536은 대조군 리포좀 및 유리 약물과 비교하여 현저하게 높은 비율의 유사분열-분열정지세포와 관련이 있었다. 이러한 연장된 일시적 생체이용률은 고안정적으로 캡슐화된 BI 2536의 개선된 효능을 설명하는 것으로 여겨진다.
본 발명을 기술하는 맥락에서 (특히 다음의 청구범위의 맥락에서) 용어 "하나 (a, an)" 및 "그 (the)" 및 유사한 지시어의 사용은 본원에 다르게 명시되거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 단수형과 복수형 모두를 포함하는 것으로 해석된다. 용어 "포함하는 (comprising)", "가지는 (having)" 및 "함유하는 (containing)"은 달리 언급되지 않는 한 개방형 용어 (즉, 포함하지만, 이에 한정되지 않는"을 의미함)로 해석된다. 본원에서 값의 범위의 언급은, 본원에서 다르게 지시하지 않는 한, 단순히 범위 내에 속하는 각각의 개별적인 값을 개별적으로 지칭하는 속기 방법으로서 사용되는 것으로 의도되며, 각각의 개별적인 값은 이것이 본원에서 개별적으로 인용된 것과 같이 명세서에 포함된다. 본원에 기술된 모든 방법은 본원에 달리 지시되거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공되는 임의의 그리고 모든 실시예, 또는 예시적인 표현 (예를 들어, "예를 들어")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것일 뿐, 달리 청구되지 않는 한 발명의 범위에 제한을 가하는 것은 아니다. 본 명세서의 어떠한 표현도 본 발명을 수행하는데 필수적인 것으로서 임의의 비청구된 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 발명을 수행하기 위해 발명자들에게 알려진 최상의 방식을 포함하여, 본 발명의 구현예가 본원에 기술된다. 이러한 구현예의 변형은 전술한 설명을 읽으면 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해질 수 있다. 본 발명자들은 통상의 기술자가 이러한 변형을 적절히 적용할 것을 기대하며, 본 발명자들은 본원에 구체적으로 기재된 것과 다르게 본 발명을 실시되는 것을 의도한다. 따라서, 본 발명은 적용 가능한 법에 의해 허용되는 바와 같이 본원에 첨부된 청구범위에 인용된 내용의 모든 변경 및 등가물을 포함한다. 또한, 본원에서 달리 지시되거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 모든 가능한 이의 변형에서 상기 기재된 요소의 임의의 조합이 본 발명에 포함된다.
참고문헌 목록
1. Dumontet, C. & Jordan, M. A. Microtubule-binding agents: a dynamic field of cancer therapeutics. Nat. Rev. Drug Discov . 9, 790-803 (2010).
2. Jordan, M. A. & Wilson, L. Microtubules as a target for anticancer drugs. Nat. Rev. Cancer 4, 253-265 (2004).
3. Gascoigne, K. E. & Taylor, S. S. How do anti-mitotic drugs kill cancer cells? J. Cell Sci . 122, 2579-2585 (2009).
4. Steegmaier, M. et al. BI 2536, a Potent and Selective Inhibitor of Polo-like Kinase 1, Inhibits Tumor Growth In Vivo. Curr . Biol . 17, 316-322 (2007).
5. Strebhardt, K. & Ullrich, A. Targeting polo-like kinase 1 for cancer therapy. Nat. Rev. Cancer 6, 321-330 (2006).
6. Sarli, V. & Giannis, A. Targeting the kinesin spindle protein: basic principles and clinical implications. Clin . Cancer Res. 14, 7583-7587 (2008).
7. Jackson, J. R., Patrick, D. R., Dar, M. M. & Huang, P. S. Targeted anti-mitotic therapies: can we improve on tubulin agents? Nat. Rev. Cancer 7, 107-117 (2007).
8. Keen, N. & Taylor, S. Aurora-kinase inhibitors as anticancer agents. Nat. Rev. Cancer 4, 927-936 (2004).
9. Gautschi, O. et al. Aurora kinases as anticancer drug targets. Clin. Cancer Res. 14, 1639-1648 (2008).
10. Komlodi-Pasztor, E., Sackett, D. L. & Fojo, A. T. Inhibitors targeting mitosis: tales of how great drugs against a promising target were brought down by a flawed rationale. Clin . Cancer Res. 18, 51-63 (2012).
11. Komlodi-Pasztor, E., Sackett, D., Wilkerson, J. & Fojo, T. Mitosis is not a key target of microtubule agents in patient tumors. Nat. Rev. Clin . Oncol . 8, 244-250 (2011).
12. Maeda, H. Toward a full understanding of the EPR effect in primary and metastatic tumors as well as issues related to its heterogeneity. Adv. Drug Deliv . Rev. 91, 3-6 (2015).
13. Matsumura, Y. & Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46, 6387-6392 (1986).
14. Barenholz, Y. (chezy). Doxil® ― The first FDA-approved nano-drug: Lessons learned. J. Control. Release 160, 117-134 (2012).
15. Papahadjopoulos, D. et al. Sterically stabilized liposomes: improvements in pharmacokinetics and antitumor therapeutic efficacy. Proc . Natl. Acad . Sci . U. S. A. 88, 11460-11464 (1991).
16. Fritze, A., Hens, F., Kimpfler, A., Schubert, R. & Peschka-S
ss, R. Remote loading of doxorubicin into liposomes driven by a transmembrane phosphate gradient. Biochim . Biophys . Acta 1758, 1633-1640 (2006).
17. Cern, A. et al. Quantitative structure - property relationship modeling of remote liposome loading of drugs. J. Control. Release 160, 147-157 (2012).
18. Cheong, I. et al. A bacterial protein enhances the release and efficacy of liposomal cancer drugs. Science 314, 1308-1311 (2006).
19. Raab, M. et al. Mitotic arrest and slippage induced by pharmacological inhibition of Polo-like kinase 1. Mol . Oncol . 9, 140-154 (2015).
20. Dua, J.S. et. Liposome: methods of preparation and applications. Int'l J Pharmaceut Studies Res III (II):14-20 (2012).
21. Laouini, A et al. Preparation, characterization and applications of liposomes: state of the art. J Colloid Sci Biotechnol 1:147-168 (2012).
22. Budman, D.B. et at. (editors). Handbook of Anticancer Drug Development, Lippincott Williams & Wilkins (2003).
23. Saito, R. et al. Distribution of Liposomes into Brain and Rat Brain Tumor Models by Convection-Enhanced Delivery Monitored with Magnetic Resonance Imaging Cancer Research 64:2572-2579 (2004).
24. Mamot, C. et al. Extensive distribution of liposomes in rodent brains and brain tumors following convection-enhanced delivery. J Neuro -Oncology 68:1-9 (2004).
25. Gregoriadis, G. (editor), Liposome Technology, vol. 1-3, 1st edition, 1983; 2nd edition, 1993, CRC Press, Boca Raton, Fla.
Claims (17)
- 막에 의해 외부 환경으로부터 분리된 내부 환경 (milieu)을 포함하는 고안정화된 리포좀으로, 상기 내부 환경은 내부 환경에 포획된 항-유사분열 약물, 하나 이상의 음이온 및 하나 이상의 양이온을 포함하고, 상기 포획된 항-유사분열 약물은 리포좀이 600 mM 수크로스에 현탁된 경우 12 시간 동안 0.6% 미만 또는 8일 동안 5% 미만의 느린 속도로 방출되는 고안정화된 리포좀.
- 제1항에 있어서, 상기 하나 이상의 음이온은 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트, 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 클로라이드, 시트레이트와 아세테이트, 시트레이트와 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 시트레이트와 클로라이드, 아세테이트와 포스페이트, 아세테이트와 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 아세테이트와 클로라이드, 포스페이트와 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트, 포스페이트와 클로라이드, 2-(N-모르폴리노)에탄설포네이트와 클로라이드인 것인, 고안정화된 리포좀.
- 제1항 또는 제1항에 있어서, 상기 두 개의 음이온은 약 1:7 내지 약 7:1의 비율로 존재하는, 고안정화된 리포좀.
- 제3항에 있어서, 상기 하나 이상의 음이온은 시트레이트와 포스페이트 또는 시트레이트와 아세테이트 또는 아세테이트와 포스페이트인 것인, 고안정화된 리포좀.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 양이온은 나트륨, 암모늄, 트리에틸암모늄, 구리, 마그네슘, 아연 또는 철인 것인, 고안정화된 리포좀.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-유사분열 약물은 BI2536, ON01910, GSK 461364, HMN 214 또는 BI 6727과 같은 폴로-유사 키나아제 억제제; 이스피네십(SB 715992), SB 743921, MK 0731 또는 ARRY 520과 같은 키네신 스핀들 억제제; 또는 MK 0457 (VX 680), AZD 1152, PHA 680632, PHA 739358, MLN8054, MLN8237, R763, AT9283, SNS 314, SU 6668, ENMD 2076, BI 811283, CYC116, ENMD 981693 또는 MKC 1693과 같은 오로라 키나아제 억제제인 것인, 고안정화된 리포좀.
- 제6항에 있어서, 상기 항-유사분열 약물은 BI 2536 또는 이스피네십인 것인, 고안정화된 리포좀.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막은 1,2-디스테아로일-sn-글리세롤-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000] (DSPE-PEG2000), 수소화된 난자 L-α-포스파티딜콜린 (HEPC) 및 콜레스테롤 (Chol)을 포함하는, 고안정화된 리포좀.
- 제8항에 있어서, 상기 막은 50:45:5 몰 비의 HEPC:Chol:DSPE-PEG2000을 포함하는, 고안정화된 리포좀.
- 제1항 내지 제9항 중 임의의 고안정화된 리포좀을 수성 매체에 포함하는 리포좀 조성물.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 고안정화된 리포좀을 포함하는 약학 조성물.
- 제11항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 담체를 추가로 포함하는, 약학 조성물.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 치료학적 유효량의 고안정화된 리포좀 또는 제10항의 리포좀 조성물 또는 제11항 또는 제12항의 약학 조성물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체의 암을 치료하는 방법.
- 개체의 암을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 고안정화된 리포좀의 용도.
- 개체의 암을 치료하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 고안정화된 리포좀 또는 제10항의 리포좀 조성물 또는 제11항 또는 제12항의 약학 조성물의 용도.
- 개체의 암을 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 고안정화된 리포좀.
- 개체의 암을 치료하는데 사용하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 고안정화된 리포좀 또는 제10항의 리포좀 조성물 또는 제11항 또는 제12항의 약학 조성물.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762447498P | 2017-01-18 | 2017-01-18 | |
| US62/447,498 | 2017-01-18 | ||
| PCT/SG2018/050026 WO2018136002A1 (en) | 2017-01-18 | 2018-01-17 | Hyperstabilized liposomes increase targeting of mitotic cells |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20190122676A true KR20190122676A (ko) | 2019-10-30 |
Family
ID=62909275
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020197024196A KR20190122676A (ko) | 2017-01-18 | 2018-01-17 | 유사분열기세포의 표적화를 증가시키는 고안정화된 리포좀 |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11331272B2 (ko) |
| EP (1) | EP3570818B1 (ko) |
| JP (2) | JP7232530B2 (ko) |
| KR (1) | KR20190122676A (ko) |
| CN (1) | CN110381922A (ko) |
| AU (1) | AU2018210748B2 (ko) |
| BR (1) | BR112019014718A2 (ko) |
| CA (1) | CA3050686A1 (ko) |
| CL (1) | CL2019002002A1 (ko) |
| CO (1) | CO2019008876A2 (ko) |
| IL (1) | IL268099B2 (ko) |
| MA (1) | MA47319A (ko) |
| MX (1) | MX2019008533A (ko) |
| PH (1) | PH12019501650A1 (ko) |
| RU (1) | RU2765736C2 (ko) |
| SG (2) | SG10202107836SA (ko) |
| TW (1) | TWI816656B (ko) |
| WO (1) | WO2018136002A1 (ko) |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0768117B2 (ja) * | 1983-05-06 | 1995-07-26 | ベスター・インコーポレイテツド | 薬剤放出調整用小胞製剤 |
| CA1338702C (en) | 1987-03-05 | 1996-11-12 | Lawrence D. Mayer | High drug:lipid formulations of liposomal- antineoplastic agents |
| US5714163A (en) | 1994-06-27 | 1998-02-03 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Vinca alkaloid vesicles with enhanced efficacy and tumor targeting properties |
| US6120800A (en) * | 1997-09-25 | 2000-09-19 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Vinca-alkaloid vesicles with enhanced efficacy and tumor targeting properties |
| AU2002334358B2 (en) | 2001-09-06 | 2008-02-07 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | A method for preparing liposome formulations with a predefined release profile |
| KR101462819B1 (ko) | 2004-05-03 | 2014-11-21 | 헤르메스 바이오사이언스, 인코포레이티드 | 약물 전달에 유용한 리포좀 |
| JP5057362B2 (ja) | 2004-11-02 | 2012-10-24 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | リポソーム及びこれを用いた細胞に対する物質注入方法 |
| CN101209243B (zh) | 2006-12-29 | 2010-12-08 | 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 | 一种脂质体药物及其制备方法 |
| WO2009114703A2 (en) * | 2008-03-12 | 2009-09-17 | Fox Chase Cancer Center | Combination therapy for the treatment of cancer |
| US20090285881A1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-11-19 | Abbott Laboratories | Cationic lipids and uses thereof |
| US8318817B2 (en) * | 2008-07-21 | 2012-11-27 | Otonomy, Inc. | Controlled release antimicrobial compositions and methods for the treatment of otic disorders |
| CN102369008B (zh) | 2009-03-30 | 2014-10-29 | 卫材R&D管理有限公司 | 脂质体组合物 |
| ES2568778T3 (es) | 2009-04-17 | 2016-05-04 | 3M Innovative Properties Company | Lámina de protección contra rayos con conductor estampado |
| WO2010124004A2 (en) * | 2009-04-22 | 2010-10-28 | Emory University | Nanocarrier therapy for treating invasive tumors |
| WO2010143972A2 (en) * | 2009-06-08 | 2010-12-16 | Epitarget As | Acoustically sensitive drug delivery particles comprising non-lamellar forming lipids |
| US20120301537A1 (en) * | 2011-05-23 | 2012-11-29 | Delta-Fly Pharma, Inc. | LIPOSOME CONTAINING shRNA MOLECULE TARGETING A THYMIDYLATE SYNTHASE AND USE THEREOF |
| EP2773426B1 (en) * | 2011-10-31 | 2018-08-22 | Mallinckrodt LLC | Combinational liposome compositions for cancer therapy |
| KR102554628B1 (ko) * | 2013-02-01 | 2023-07-12 | 존원 파마, 인코포레이티드 | 리포좀 내로 난수용성 약물의 원격 부하 |
| EP2968142A1 (en) * | 2013-03-13 | 2016-01-20 | Mallinckrodt LLC | Liposomal cisplatin compositions for cancer therapy |
| NZ711500A (en) * | 2013-03-15 | 2020-05-29 | Taiwan Liposome Co Ltd | Engineering a control drug release profile via liposome compositions in both aqueous and non-aqueous compartments |
| CN106659683A (zh) * | 2014-01-14 | 2017-05-10 | 约翰斯·霍普金斯大学 | 包封修饰的环糊精复合物的脂质体组合物及其应用 |
| US20170035894A1 (en) * | 2014-04-14 | 2017-02-09 | Endocyte, Inc. | Drug delivery conjugates for treating resistant cancer and for use in combination therapy |
| US20160175250A1 (en) * | 2014-12-23 | 2016-06-23 | Tolmar Inc. | Method for Making Liposomes Containing an Active Pharmaceutical Ingredient |
| JP2018505224A (ja) | 2015-02-13 | 2018-02-22 | オーピーナノ シーオー エルティーディーＯＰ Ｎａｎｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． | ナノ粒子を含む組成物並びに腫瘍を治療する方法 |
-
2018
- 2018-01-17 IL IL268099A patent/IL268099B2/en unknown
- 2018-01-17 WO PCT/SG2018/050026 patent/WO2018136002A1/en unknown
- 2018-01-17 MA MA047319A patent/MA47319A/fr unknown
- 2018-01-17 US US16/478,278 patent/US11331272B2/en active Active
- 2018-01-17 CA CA3050686A patent/CA3050686A1/en active Pending
- 2018-01-17 BR BR112019014718-7A patent/BR112019014718A2/pt active Search and Examination
- 2018-01-17 KR KR1020197024196A patent/KR20190122676A/ko active IP Right Grant
- 2018-01-17 SG SG10202107836SA patent/SG10202107836SA/en unknown
- 2018-01-17 RU RU2019125724A patent/RU2765736C2/ru active
- 2018-01-17 JP JP2019559257A patent/JP7232530B2/ja active Active
- 2018-01-17 EP EP18741815.7A patent/EP3570818B1/en active Active
- 2018-01-17 AU AU2018210748A patent/AU2018210748B2/en active Active
- 2018-01-17 MX MX2019008533A patent/MX2019008533A/es unknown
- 2018-01-17 CN CN201880012370.3A patent/CN110381922A/zh active Pending
- 2018-01-17 SG SG11201906539YA patent/SG11201906539YA/en unknown
- 2018-01-18 TW TW107101914A patent/TWI816656B/zh active
-
2019
- 2019-07-16 PH PH12019501650A patent/PH12019501650A1/en unknown
- 2019-07-17 CL CL2019002002A patent/CL2019002002A1/es unknown
- 2019-08-15 CO CONC2019/0008876A patent/CO2019008876A2/es unknown
-
2022
- 2022-10-20 JP JP2022168560A patent/JP2023002702A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL268099B2 (en) | 2024-05-01 |
| SG11201906539YA (en) | 2019-08-27 |
| EP3570818A4 (en) | 2020-11-18 |
| JP7232530B2 (ja) | 2023-03-03 |
| RU2019125724A (ru) | 2021-02-19 |
| US11331272B2 (en) | 2022-05-17 |
| CO2019008876A2 (es) | 2020-01-17 |
| MA47319A (fr) | 2019-11-27 |
| CL2019002002A1 (es) | 2020-01-17 |
| EP3570818B1 (en) | 2023-11-01 |
| EP3570818A1 (en) | 2019-11-27 |
| BR112019014718A2 (pt) | 2020-03-10 |
| WO2018136002A1 (en) | 2018-07-26 |
| CA3050686A1 (en) | 2018-07-26 |
| SG10202107836SA (en) | 2021-08-30 |
| TW201828925A (zh) | 2018-08-16 |
| PH12019501650A1 (en) | 2020-02-24 |
| MX2019008533A (es) | 2019-12-02 |
| IL268099A (en) | 2019-09-26 |
| AU2018210748A1 (en) | 2019-08-29 |
| CN110381922A (zh) | 2019-10-25 |
| JP2023002702A (ja) | 2023-01-10 |
| US20190358161A1 (en) | 2019-11-28 |
| IL268099B1 (en) | 2024-01-01 |
| RU2019125724A3 (ko) | 2021-03-04 |
| AU2018210748B2 (en) | 2023-09-28 |
| JP2020505451A (ja) | 2020-02-20 |
| TWI816656B (zh) | 2023-10-01 |
| RU2765736C2 (ru) | 2022-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11839685B2 (en) | Composition of matter comprising liposomes embedded in a polymeric matrix and methods of using same | |
| TWI362931B (en) | Irinotecan formulation | |
| Bajelan et al. | Co-delivery of doxorubicin and PSC 833 (Valspodar) by stealth nanoliposomes for efficient overcoming of multidrug resistance | |
| JP4672817B2 (ja) | 弱塩基性薬物を担持するイオン運搬体―中介リポゾーム | |
| Chiu et al. | Encapsulation of doxorubicin into thermosensitive liposomes via complexation with the transition metal manganese | |
| US5543152A (en) | Sphingosomes for enhanced drug delivery | |
| Saito et al. | Convection-enhanced delivery of Ls-TPT enables an effective, continuous, low-dose chemotherapy against malignant glioma xenograft model | |
| US9655848B2 (en) | Liposomes for in-vivo delivery | |
| Saraf et al. | Sphingosomes a novel approach to vesicular drug delivery | |
| US20080058274A1 (en) | Combination Therapy | |
| Østrem et al. | Secretory phospholipase A2 responsive liposomes exhibit a potent anti-neoplastic effect in vitro, but induce unforeseen severe toxicity in vivo | |
| US20130052259A1 (en) | Liposomes comprising amphipathic drugs and method for their preparation | |
| CN102475682A (zh) | 小檗碱脂质体及其制备方法 | |
| WO2008038291A1 (en) | Combination of liposomal anti-cancer drugs and lysosome/endosome ph increasing agents for therapy | |
| JP7232530B2 (ja) | 超安定リポソームによる有糸分裂細胞の標的化の増加 | |
| US20040219201A1 (en) | Tempamine compositions and methods of use | |
| Saraf et al. | International Journal of Current Scientific Research | |
| Woo | Thermosensitive liposomal cisplatin: formulation development, in vitro characterization and in vivo plasma elimination studies |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AMND | Amendment | ||
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) |