TWI363056B

TWI363056B - Anticancer compounds, intermediates and the method for preparation thereof

Info

Publication number: TWI363056B
Application number: TW095108794A
Authority: TW
Inventors: Harukuni Tokuda; Katsumi Nishimura
Original assignee: Taheebo Japan Co Ltd
Priority date: 2005-03-16
Filing date: 2006-03-15
Publication date: 2012-05-01
Also published as: EP1860103A4; KR20070114287A; US7910752B2; EP1860103B1; JP2006290871A; EP1860103A1; TW200700404A; WO2006098355A1; US20090042977A1

Description

九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於一種2-乙醯基_2,3_二氫-5-羥基萘幷[2,3-b] 呋喃-4,9-二嗣及其製造方法，以及以該化合物為起始物質製造具有抗癌活性之2-(1_羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3_b]呋喃-4,9-二酮之方法。本發明進而係關於一種將2_(1_羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃_4,9_二酮之消旋體或α體作為有效成分之抗癌劑。【先前技術】已知有’以下述式： [化1]

所表示之2-(1-羥基乙基）·5_羥基萘幷[2,3-b]呋喃_4,9-二酮’係袁蔵科植物天然紫杉（Tabebuia avellanedae Lorentz ex Griseb)中所含有之光學活性化合物，該化合物為p體，具有優異之抗癌作用（例如，參照專利文獻丨）。然而，2-(^ 羥基乙基）-5-經基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮之獲得方法，除自該植物中萃取以外並不為人所知，因該植物稀少且價格車父冋以及收率為極低之〇. 〇 5 % (例如，參照非專利文獻1)，故將2-(1-羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮作為醫藥品之使用並不充分。 109361.doc 1363056 [專利文獻1]日本專利第2669762號說明書 [非專利文獻l]Shinichi Ueda等’ 「植物化學 (Phytochemistry)」，1994年，第 36卷，第 2號，第 323-325 頁 [發明所欲解決之問題] 因此，較理想的是，廉價且簡便地製造用作醫藥品之2-(1-羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮。【發明内容】本發明者們，著眼於可較廉價地獲得之作為化學品之5- 羥基萘-1,4-二酮（別名：胡桃醌），發現可將其作為起始物質而廉價且簡便地以高收率地合成2-(1-羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮，且基於該發現而最終完成本發明。即，本發明係關於一種經由將可簡便地自胡桃醌中衍生出之2 -乙醢基-5-經基萘幷[2,3-b]e夫"南-4,9-二酮作為中間體，而製造2-(1·羥基乙基）_5_羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮之方法。又’本發明者們瞭解到，以如此方式敦造之2_(【· 經基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮係以消旋體形式而獲得，其等可藉由以常法進行光學解析而分離為α體與 β體，進而該消旋體及α體，較ρ體具有更優越之安全性，且最終完成本發明。 ** Τ [發明之效果] 根據本發明，可提供一種廉價且簡便之2_(1-經基乙基）·5· 經基萘幷[2’3-b]咬喃·4,9_;之製造方法。又，相對於自植物中卒取之2_(1_經基乙基經基萘幷[2,3-b]吱喃-4,9-二酮為β體，本發明之製造方法可提供消旋混合物。進而， 109361.doc !363〇56 亦可藉由該消旋混合物之手性分離，例如於手性管柱色譜法中之分離或光學分離等’而獲得無法自植物中獲得之？體之鏡像異構物（以後，於本說明書中稱為「α體」）。【實施方式】於第一態樣中，本發明係提供一種以式（皿）： [化4]

(III) 所表示之化合物之製造方法 [化2] 其特徵在於：使以式（I):

(I) 所示之化合物與以式（II): [化3]

109361.doc (II) Ϊ363056 [式中，R與上述意義相同，χΐ及χ2分別為齒素] 所表示之化合物於鹼存在下進行反應。於進一步之態樣中，本發明係提供一種以式（瓜）： [化8]

(III) [式中’ R與上述意義相同] 所表示之化合物之製造方法 [化5]

其特徵在於：使以式⑴ 所表示之化合物與以式（Π) [化6]

所表示之化合物於驗存在下進行反應’而製造以式（VII) 109361.doc 1363056

[化7]

所表示之化合物，繼 (VII)。而藉由氧化齊I氧化所得之化合物於較好之態樣中，本發明係提供—種製造方法，其中進而包含以還原劑將以上述任意之方法所得之式（ΠΙ)之化合物加以還原，獲得以式（IV) [化9]

[式中，R與上述意義相同，波狀線表示消旋體] 所表示之化合物之步驟。而且，本發明係提供一種製造消旋化合物之方法，該消旋化合物細式（IV)所表示，其中藉由還原劑還原直接自式⑴化合物中或經由式（νπ)化合物而製造之以式⑴工） 109361.doc (III)1363056 [化 ίο]

[式中，R與上述意義相同] 所表示之化合物 [化 11]

[式中’ R與上述意義相同，波狀線表示消旋體

於其他態樣中，本發明係提供一種將以式（IV): [化 12]

[式中，R與上述意義相同，波狀線表示消旋體] 所表示之化合物加以拆分，而製造2·〇_羥基乙基）_5_羥基幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮之α體及β體之方法。於更好之態樣中，本發明係提供一種製造方法，〃中包 109361.doc 1363056 含使溶解於溶劑中之二甲胺與以式（v) [化 13]

所表示之化合物反應，獲得以式（VI) [化 14]

15%(w/w)之酸水溶液反應而獲得式⑴之化合物，繼而使月

所得之式（I)之化合物而實行上述任意之製造方法。又，於其他態樣中，本發明係提供一種以式（νπ) [化 15]

109361.doc •12· 1363056 所表示之化合物。該化合物，可作為用於製造2 (ι經基已基K經基萘幷[2,3外夫^4,9_二酮之★間體而使用。進而於其他態樣中’本發明係提供—種於甲醇㈣^， 25。〇中顯示出（+)旋光度之2仆經基乙基）5·經基蔡幷 [2,3-b]呋喃-4,9-二酮，即 α體。於其他樣態中’本發明係提供一種將消旋體之2_〇_羥基> 己基）-5-經基萘幷[2,3-b]«夫喃_4,9_二_作為有效成分之抗1 癌劑。 ' ,

tL

於其他樣痗中，本發明係提供一種將α體之2_(丨_羥基乙』基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃_4,9_二酮作為有效成分之抗_ / 劑。 . · 、'

於本說明書中，所使用之「氧化劑」並無特別限定，但vy 其中包含猛化合物（例如二氧化猛、過（高）猛酸鉀）、絡化合物（例如Cr03、Na2Cr2〇7)、鉛化合物（例如pb〇、pb〇2、 Pb(OCOCH3)4)、其他金屬化合物（例如Hg〇、Ag〇、Ag2〇、 AgN03、CuCl2、FeCl3)、_ 素及自化物（例如 cl2、Br2、l2、 NaCIO、KBr03、ΚΙ04)、氧、臭氧、過氧化物（例如h2〇2、 Na202、（C6H5CO)2〇2)、過酸及其鹽（例如 ch3C03H、 C6H5C03H、K2S208) 〇於本說明書中，所使用之「鹵素」包含氟、氣、溴及碘。較好的東，「鹵素」為溴。於本說明書中’所使用之「CrCe烷基」可為直鏈或支鏈烷基中之任一者，例如：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、正戊基、正己基。於本發明中，較好 109361.doc 1363056 的Ci-C^烧基為甲基。於本說明書+，所使用之「驗」之用語，可為有機驗或無機鹼中之任一者》所謂有機鹼，例如包含：吡啶、DMAP(4· 二甲胺基㈣）、喧琳、異㈣、三乙胺、二異丙基乙胺、 DBU(1，8-二氮雜雙環[5,4,0]十一碳烯_7)或DBN(1，5二氮雜雙環[4,3,0]壬烯·5) ’但並非僅限定於該等。又，所謂無機鹼，係指鹼金屬或鹼土類金屬之氫氧化物鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽等，例如氫氧化納、氫氧化鉀、氫氧㈣、碳酸納、或碳酸氫鈉等，但並非僅限定於該等。於本發明中，較好之鹼為DBU。於本說明書中，所使用之「還原劑」之用語，包含例如：硼氫化鈉（NaBH4)、硼氫化鉀、硼氫化鋰、氫化鋁鈉、氫化紹卸、氫化㈣、贱化辞、三乙醢氧基爛氫化鈉、β比咬/ 硼烷、氰基硼氫化鈉、鈉汞齊、H2/Pd、H2/pd_c、H2/pt、 K/PtO2、Ha/Rh及H；j/雷氏-鎳’但並非僅限定於該等。較好之還原劑為硼氫化鈉1 根據期望’彳藉由該領域中已知之方法例如分部結晶法或手性管柱層析法’而將以上所得之式（VI)之化合物加以刀離又，亦可藉由使用眾所周知的方法而獲得該領域中已知之手性還原劑，例如使用不對稱硼烷衍生物（例如（_) 或（+ >B_氣一異異松蒎醇硼烷）或BINAP((R)或（S)-2,2'_雙 (二笨基膦）-1, Γ·聯萘）等而獲得光學活性之2_(1_羥基匕基）5-經基萘幷[2,3_b]。夫。南_4,卜二朗，來代替上述還原劑。本發明之製造方法，可以以下之方式加以圖示。 109361.doc -14- 1363056 [化 16]

[式中

上述流程之步驟1，較好的是依據Chaker等的文獻 (Chaker，L· ; Pautet，F. ; Fillion，H·，Chem.Pharm.Bull.， 1994，42，223 8-2240)中所揭示之方法進行。又，作為上述流程中步驟1的起始物質之5-羥基萘-1,4-二酮（別名：胡桃酿，Juglone)，例如由東京化成工業股份公司（曰本，東京）出售。進而，關於胡桃醌（Juglone)，則於默克索引（Merck Index)第13版第5288頁及其中之引用文獻中有詳細記载。本發明者們驚奇地發現，即使以添加該文獻中之二甲胺 10936I.doc 15 1363056 來代替添加溶解於溶劑中之二甲胺（沸點：-6。〇,亦可獲得相同程度之结果（取代基選擇性及收率）。因此，本發明又係提供一種於步驟1中所揭示之製造方法，其特徵為：於胡桃醌之曱笨溶液中添加溶解於溶劑中之二曱胺。於上述流程之步驟丨中，胡桃醌之溶劑，若為該領域中通常使用之溶劑則並無特別限定。作為較奸之溶劑，可列舉甲苯。又，二甲胺之溶劑，若為於該領域中通常使用之溶劑，則亦無特別限定。作為較好之溶劑，可列舉：水（H20)、己烷、四氫呋喃（THF)、二乙醚、甲苯、甲醇及乙醇。步驟1之反應，可於自_78t：至溶劑回流溫度下進行但較好的是於-4(TC〜室溫之範圍内進行。尤其就選擇性及操作簡便性而言，-40〜〇°c之反應溫度較為有利。上述流程之步驟2，較好的是依據De 〇nveira等的文獻 (De Oliveira» A. ； Ferreira · D.T. ； Raslan ^ D.S. « Tetrahedron Lett.，1988’29, 155·158)中所記載之方法進行。本發明者們驚奇地發現，即使以5〜15%酸性水溶液來代替該文獻中所使用之濃鹽酸，亦可達成相同程度之收率。酸性水溶液，若為通常之可用於水解反應之酸，則任一者均可，但較好的是鹽酸或硫酸之水溶液。進而，亦可於上述水溶液中添加適當之二氡雜環己烷。又，酸之濃度，若為可進行水解之濃度則無特別限定，但就安全性及易處理性而言，較好的是5〜15%。因此，本發明又係提供一種於步騾2中所記載之製造方法，其特徵為：使用5〜15%酸性水溶液，較好的是使用5〜15%鹽酸。又，步驟2之反應，並無特別限定， I09361.doc •16· 1363056 但較好的是在加熱回流下進行。上述流程之步驟3，可以與Hagiwara等的文獻（Hagiwara， Η· ; Sato，K. ; Nishino，D. ; Hoshi，T. ; Suzuki，T. ; Ando， M.，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2001，2946-2957)中所記載之方法同樣地進行。然而，相對於該文獻中報告之收率為60%，於以該文獻中所揭示之起始物質來代替2-羥基胡桃醌之情形時之反應收率，為極低者。本發明者有鑒於此而進行努力研究之結果是，發現藉由於蒸餾精製後24小時以内之較好的是3小時以内使用甲基乙烯基酮，而使得步驟3 之收率大幅上升。因此，本發明又係提供一種於步驟3中揭示之製造方法，其特徵為：於蒸餾純化後立即，較好的是於蒸餾純化後1小時以内，使用曱基乙烯基酮。於該步驟3 中，可獲得化合物（III)及化合物（VII)之混合物。可藉由使用氧化劑使化合物（VII)反應，而生成化合物（111)(步驟4)。又，可作為步驟3中甲基乙烯基酮及溴之溶劑而使用之溶劑，並無特別限定，但較好的是戊烷或己烷。另一方面，可作為2-羥基胡桃醌之溶劑使用之溶劑，並無特別限定，但較好的是THF或二乙醚。進而，步驟3之反應溫度，並無特別限定，但較好的是室溫。上述流程之步驟4及5，係依據該領域中自身已知之方法，較好的是依據Hagiwara等的文獻（Hagiwara，H· ; Sato， K. ; Nishino，D· ; Hoshi，Τ· ; Suzuki，T. ; Ando，M.， J.Chem.Soc.Perkin Trans.l，2001，2946-2957)中所記載之方法進行。 109361.doc -17- 1363056 再者於步驟4中之反應溶劑，並無特別限定，但較好的 • 是齒代烴’例如氯仿或二氣甲烷。又，步驟4之反應，並無特別限定，但較好的是在加熱回流下進行。於步驟5中之反應溶劑，並無特別限定，但較好的是氣仿 • 及乙醇之混合溶劑’尤其好的是氯仿：乙醇=4: l(v/v)之混合

. 溶劑。X ’步驟5之反應，並無特別限定，但較好的是於(TC 下進行。實施例 • 根據以下實施例就本發明加以說明，但本發明並非僅限制於該等實施例。於以下實施例中’使用以下之裝置。 1Η核磁共振波譜 Gh-NMR): UNITY INOVA 500(Varian 公司製造）’ NMR測定溶劑：CDCl3(内部標準物質：四甲基矽烷（TMS)); 炫點測定器：Mp-J3(Yanaco機器開發研究所） [實施例1] φ 2-二甲胺基胡桃醌之製法 [化 17]

於5-經基萘-1,4-二綱（又稱胡桃醒）（171 mg，1 mmol)之曱苯（5 mL)溶液中，於-20°C下添加二甲胺（0.75 mL，THF中2.0 I0936l.doc -18- 1363056 Μ溶液，1.5 mmol)。於-20°C下攪拌1小時後’添加二甲胺 (0.75 mL，於 THF 中之 2.0 Μ溶液 ’ 1.5 mmol)，進而於-20°C 下攪拌30分鐘，繼而減壓餾去溶劑。若藉由矽膠管枉層析法（氣仿/乙酸乙酯=20/l(v/v))將殘渣加以分離純化，則獲得2-二甲胺基胡桃醌（87.2 mg，40%)及3-二甲胺基胡桃醌 (28.8 mg，13%)。 2- 二曱胺基胡桃醌

熔點：147〜148°C 'H-NMR(CDC13)： δ3.25 (s, 6H), 5.72 (s, 1H), 7.20 (dd, 1H, J= 1.2,8.3Hz)，7.45-7.51 (m，2H), 13.0 (s, 1H)。 3- 二甲胺基胡桃醌 *H-NMR(CDC13)·. 53.23 (s, 6H), 5.84 (s, 1H), 7.15 (dd, 1H, J = 3.7,6.1Hz)，7_56-7_59 (m，2H)，11.9 (s，ih) 〇 [實施例2] 若除將-20°C更改為-40°C以外’其他以與實施例1同樣之方式進行反應，則可獲得2-二甲胺基胡桃醌（1〇4 mg，48〇/〇) 及3·二甲胺基胡桃醌（20 mg，10%)。 [實施例3] 若除將二曱胺之溶劑自THF變更為水而使用〇15 mL之二曱胺水溶液（50%水溶液，1.5 mmol)繼而將反應溫度設為〇。〇以外，其他以與實施例丨相同之方式進行反應，則可獲得2_ 二甲胺基胡桃酿（97mg，45%)及3-二甲胺基胡桃醌（6?mg， 31%)。該方法使用水來代替有機溶劑，就此而言於環境方面及安全方面較實施例1之方法更為有利。 109361.doc -19- 1363056 [實施例4] 2-羥基胡桃醌之製造 [化 18]

mL)溶液中，添加1 〇%鹽酸（1 〇 mL)，加熱回流30分鐘。待冷卻至室溫後，以氯仿萃取反應液。若將有機層混合且以鹽水清洗之，以硫酸鈉乾燥，過濾，繼而減壓餾去溶劑，則獲得作為褐色固體之2-羥基胡桃醌（1.67 g，97%)。

熔點：220〜221°C

1H-NMR(CDC13):86.31 (lH, s), 7.35 (1H, dd, 1=8.5,1.2 Hz), 7.44 (1H, s), 7.59 (1H, t, J=8.5 Hz), 7.69 (1H, dd, J=8.5，1.2 Hz)，12.33 (1H，s)。 [實施例5] s 2-乙醯基-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮及2-乙醯基 -2,3-二氫-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮之製造 [化 19]

副產物主產物 109361.doc -20· 1363056 於甲基乙缔基鋼（10.5 g，150 mmol)之戊烧（150 niL)溶液中，於-15°C下添加溴（25 g，156 mmol)之戊烧（30mL)溶液。若於-15C下攪拌10分鐘後減塵館去溶劑，則獲得無色之油，繼而將其添加入2-羥基胡桃醌（4.75 g，25 mmol)之 THF(250 mL)溶液中。於(TC下於其中添加DBU，繼而於溫室下授拌一晚。於其中添加1〇%鹽酸，繼而以氯仿萃取反應混合液。將有機層混合且以鹽水清洗之，以硫酸鈉乾燥，過濾，繼而減壓餾去溶劑。若藉由矽膠管柱層析法（溶離液：氣仿/乙酸乙醋=9/l(v/v))進行精製，則以Μ之比率而獲得含有2·乙ϋ基-5-經基萘幷[2,3_b]咬二嗣及2_乙酿基-2’3-二氫-5-經基萘幷[2’3外夫喃妙二嗣之燈色固體 95〇/〇)〇；將該固體混合物進行分離’而分别獲得2.乙喊领基萘幷[2’3-b]呋喃_4,9·二酮及2·乙醯基^二氫·5_經基萘幷 [2,3-b]呋喃-4,9-二酮。 2-乙酿基-2’3-二氫’基蔡幷[2,3姻。南.a二酮熔點：175〜182°C(分解） 1H-NMR(CDC13):62.39 (3H, s\ 5.30(lH，t，J=9.5Hz)，7.26(lH dd W (2H，d，>9.5 HZ)， t, J=8.0 Hz)，7.65 (1H，dd，J=8 〇】^ J 8 〇，10 HZ)，7 56 (1H， “ .丄0 Hz)，12.18 (1H，s)。 2-乙酿基-5-經基萘幷[2,3_bi咕天。南-4,9-二酮熔點：208〜220°C(分解） 1H-NMR(CDC13):82.67 (3η, 8λ Ηζ)，7.60 (1Η, s)，7.67 (1H t 33 (1H，dd，卜8.5，1·0 S ts J = 8-3 Hz), 7.81 (1H, dd, 109361.doc 1363056 =7.4,1.0 Hz), 12.13 (1H，s)。 [實施例6] 2-乙醯基_5_羥基萘幷[2,3-b]呋嗑4 0 _ .. j次嗝·4,9-二酮之製造 [化 20] ΩΗ 0

0

於2-乙醯基-2,3-二氫-5-羥基萘幷[2,3七呋喃_4,9·二酮 (2·4 g，9.4 mmol)之氣仿（50 mL)溶液中，添加2〇 g之二氧化錳（Aldrich公司製造，85%活性二氧化錳，<5微米），將所得之懸濁液加熱回流一天。待冷卻至溫室後，將混合物過濾。若減壓餾去過濾液，繼而藉由矽膠管柱層析法（溶離液··氣仿）將殘渣加以精製，則獲得2-乙醯基_5-羥基萘幷 [2,3-1)]'1夫<1南-4,9-二酮（〇.718§，33%)。熔點：208〜220°C(分解）

1H-NMR(CDC13):62.67 (3H, s), 7.33 (1H, dd, J=8.5,1.0 Hz), 7.60 (1H, s), 7.67 (1H, t, J=8.3 Hz),7.81 (1H, dd, J=7.4，l.〇 Hz)，12.13 (1H，s)。再者，作為其他方法，亦可以二氧化錳（Aldrich公司製造，90%二氧化錳，電池，<10微米〉來代替實施例6中之二氧化猛（Aldrich公司製造，85%活性二氧化猛，<5微米）（參照下述實施例7)。 [實施例7] I09361.doc • 22· 於之-乙酿基^一-二氫-纟-經基秦幷^，]-^)]1^1^ -4,9 -二嗣 (0.58，1.95 111111〇1)之氯仿（5〇1111〇溶液中，添加1〇§之二氧化鍾（Aldrich公司製造’ 90%二氧化猛，電池用，<1〇微米）將所得之懸濁液加熱回流3天。待冷卻至室溫後，將混合物過濾。若減壓餾去過濾液，繼而藉由矽膠管柱層析法（溶離液..氣仿）精製殘渣，則獲得2-乙酿基-5-經基萘幷[2,3-b]e夫喃-4,9-二酮（0.216 g’ 44%)及2-乙醯基-2,3-二氫·5-幾基萘幷 [2,3-b]呋喃 _4,9-二酮（0.255 g，51%)。根據本方法，可提供一種成本亦低於實施例6之2-乙酿基 •5_羥基萘幷[2,3-b]呋喃_4,9·二酮之製造方法。 [實施例8] 2-(1-經基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]吱喃-4,9-二酮之製造 [化 21] 0H 0

於〇°C下於實施例5中所得之2-乙醯基-5-羥基萘幷[2,3-b] 呋喃-4,9-二酮（694 mg ’ 2·73 mmol)之氣仿（1〇〇 mL)及乙醇 (25 mL)溶液甲，添加棚氫化納（515 mg，13.7 mmol)。於授拌30分鐘後，藉由添加10%鹽酸而使反應淬火。以氣仿將水層萃取2次，繼而以水及鹽水連續清洗萃取液。若減壓餾去混合液’且藉由矽膠管柱層析法（溶離液：氣仿）進行精製’則獲得作為黃色結晶消旋混合物之2-( 1 -羥基乙基）_5_ 109361.doc •23· 經基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮（516 mg，74%)。熔點：148〜1491： 1H-NMR(CDC13):51.66 (3H, d, J=6.8 Hz), 2.31 (1H, brs), 5-〇5 (1H} m), 6.84 (1H, s), 7.27 (1H, dd, 1=8.3,1.0 Hz), 7.62 UH，t, J=8.〇 Hz)，7.75 (1H，dd，J=8.0,0.9 Hz), 12.18 (1H, s)。可藉由下述條件之手性管柱色譜法，而自以上所得之消旋混合物中分離出鏡像異構物。管柱：SUMICHIRAL OA-4500(4.6 mmcpx250 mm) 流動相 :己炫/2-丙醇/曱醇= 95:4:1 檢測： UV 254 nm 流速： 1.0 mL/分溫度：室溫（25 °C附近之固定溫度）注入量：5 pL(0.1 mg/mL甲醇）保持時間：30.8及34.4分。再者’即使將上述條件之流動相自「己烷/乙醇=95:5」替換為「己烷/2-丙醇/曱醇=95:4:1」，亦可將2-(1-經基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二闕之鏡像異構物相互分離’於此情形時之保持時間為24.9及27.4分。若以同樣條件負載於手性管柱色譜中，則來自天然之2-(1_羥基乙基）_5_ 經基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮即β體之保持時間為27 4分鐘。根據藉由使用光學活性管柱之使用上述條件的合成2_( i_ 羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮之HPLC分離而獲得的各個鏡像異構物之保持時間，可判斷出最初溶出者 109361.doc -24· 丄的3056 係非天然型（α體），之後溶出者係天然型（β體）。各自之物性示於表1 » [表1]

------ 非天然型(α體）天然型(β體） --- 純廑 ^99% 之99% --- 熔點「 172-173.51 171-172〇C 以如下所禾之方式’使用於實施例8中所得之2-(ι·羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮之消旋體、α體及β體，對於抗腫瘤活性及對正常細胞之毒性進行研究。 [試驗例1]抗腫瘤活性 (1)針對PC-3細胞（前列腺癌細胞）之抗腫瘤活性_ i 將PC-3細胞（大日本製藥（股份）公司，實驗室·產品部）以 1 x 10 /ml之》農度播種於預先加入有含2〇%牛胎血清（fbs)之枉貝可（Dulbeco)改良培養基（DMEM)之35 mm培養皿中。將其置於5 Q/oCOz中於36°C下培育一天’且確認細胞緊貼於培養皿底部。將所得之PC_3細胞分成3群，於第1群中以〇5 mM、0.05 mM及0.005 mM之濃度添加（±)_2-(1 羥基乙基卜5_ 經基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮（消旋體），於第2群中以〇 5 mM、0.05 mM及0.005 mM之濃度添加阿黴素（和研藥（股份）公司）作為對照。將該等於36°C下培養3天，計算生存細胞數，且計算出生存率。結果示於表2。 [表2] 表2.針對PC-3細胞之抗痛活性之比鉸-1 --- 濃度(mM) 消旋體處理(生存率°/〇) 阿撒音虚技（咔荇辛 0.5 0 Λ 0.05 0 Λ 0.005 50 —---_y --42 I09361.doc -25- 1363056 (2)針對PC-3細胞之抗腫瘤活性-2

將進行與上述（1)相同之處理所得之PC-3細胞分成3群，於第 1群中以 0.5 mM、0_05 mM、0.005 mM及 0.0005 mM之濃度添加（土)-2-(卜羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮（消旋體），於第2群中以0.5 mM、0.05 mM、0.005 mM及 0.0005 mM之濃度添加非天然型2-(1-羥基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮（α體），於第3群中以0.5 mM、0.05 mM、0.005 mM及0.0005 mM之濃度添加天然型2-(1-經基乙基）-5-羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮（β體），於第4群中以0.5 mM、0·05 mM、0.005 mM及0.0005 mM之濃度添加絲裂黴素作為對照。將該等於36°C下培養3天，計算生存細胞數，計算出生存率。結果示於表3。 [表3] 表3.針對PC-3細胞之抗癌活性之比較-2 濃度(mM) 消旋體處理 (生存率％) α體處理 (生存率％) β體處理 (生存率％) 絲裂黴素處理 (生存率％) 0.5 0 0 0 0 0.05 0 0 0 0 0.005 30 30 10 10 0.0005 50 60 40 40 (3)針對A-549細胞（肺癌細胞）之抗腫瘤活性

對於A-549細胞，進行與上述（2)相同之處理，研究抗腫瘤活性。結果示於表4。 [表4] 表4.針對Α-549細胞之抗癌活性乏比較濃度(mM) 消旋體處理 (生存率％) α體處理 (生存率％) β體處理 (生存率％) 絲裂黴素處理 (生存率％) 0.5 0 0 0 0 0.05 10 10 10 0 0.005 50 40 30 10 0.0005 70 70 60 50 109361.doc -26- 1363056 (4)針對MCF-7細胞（乳癌細胞）之抗腫瘤活性對於MCF-7細胞，進行與上述（2)相同之處理，研究抗腫瘤活性。結果示於表5。 [表5] 表5.針對MCF-7知胞之抗癌活性之比較濃度消旋體處理 α體處理 β體處理絲裂黴素處理 (mM) (生存率％) (生存率％) (生存率％) (生存率％) 0.5 0 0 0 0 0.05 20 30 20 10 0.005 50 60 50 30 0.0005 90 90 70 60

[試驗例2]針對人皮膚正常細胞（Ceil System Fb cells)、人肝正常細胞（Cell Systems He cells)、人小腸正常細胞（Cell Systems IE cells)、人體非肺正常細胞（MRC-5)之細胞毒性試驗法

分別以lxl〇5/ml之濃度，將各人正常細胞播種於預先加入含20%牛胎血清（FBS)之杜貝可（Dulbeco)改良培養基 (DMEM)之35 mm培養皿中。將該等置於5%C02中於36°C下培育1天，且確認細胞緊貼於培養皿底部。將消旋體、α體及β體分別溶解於DMSO中，獲得0.5 mM、0.05 mM、0.005 mM及0.0005 mM濃度之溶液，分別以2 pL之容積將其添加於各細胞中。於36°C下將該等培養3天，使用0.25%台盼藍計算生存細胞數，計算出生存率。所得之結果示於表6〜9。再者，於針對人皮膚正常細胞之試驗中，亦對作為對照品之市售抗癌劑進行試驗，結合其結果而示於表6。 109361.doc -27- 1363056 [表6] 表6.針對人皮膚正常細胞之細胞毒性濃度消旋體處理(生 α體處理 β體處理絲裂黴素處理 (mM) 存率％) (生存率 (生存率％) (生存率％) 0.5 20 30 10 0 0.05 50 40 20 0 0.005 80 70 50 30 0.0005 100 100 100 60 [表7] 表7.針對人肝臟正常細胞之細胞毒性濃度(mM) 消旋體處理 (生存率％) α體處理 (生存率％) β體處理 (生存率％) 0.5 30 20 10 0.05 60 40 20 0.005 80 70 50 0.0005 100 100 100

[表8] 表8.針對人小腸正常細胞之細胞毒性濃度(mM) 消旋體處理 (生存率％) α體處理 (生存率％) β體處理 (生存率％) 0.5 40 40 30 0.05 60 60 50 0.005 80 80 70 0.0005 100 100 100

[表9] 表9.針對人體肺正常細胞之細胞毒性濃度(mM) 消旋體處理 (生存率％) A體處理 (生存率％) β體處理 (生存率％) 0.5 30 30 20 0.05 60 50 40 0.005 80 80 70 0.0005 100 100 100 以表6所示之方式，作為現存之代表性的抗腫瘤劑之絲裂黴素C，對於正常細胞亦顯示出相當強之毒性。 109361.doc •28-

Claims

1363056 第095108794號專利申請案中文申請專利範圍替換本(100年11月）十、申請專利範圍： 1. 一種以式（III)

曰' 孑 ίΙϊ/Ί· (III) [式中，RgCVCe烷基]

所表示之化合物之製造方法，其特徵在於：使以式（I)

所表示之化合物與以式（II)

[式中，尺為匸广匸6之烷基，X1及X2分別為鹵素] 所表示之化合物，於選自吡啶、4·二甲胺基Π比咬 (DMAP)、啥琳、異啥淋、三乙胺、二異丙基乙胺、丨，8-二氮雜雙環[5,4,0]十一碳烯_7(DBU)、15二氮雜雙環 [4,3,〇]壬烯_5(DBN)、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、< 故酸納、或碳酸氫鈉之驗存在下進行反應。 109361-100H23.doc 1363056 2. 一種以式（III)

(ill) [式中，R為C丨-C6之烷基] 所表示之化合物之製造方法，其特徵在於：使以式（1)

所示之化合物與以式（II) (I) X2〜

(II) [式中，R為C丨-C6之烷基，Χι及X2分別為鹵素] 所表示之化合物，於選自吡啶、4_二甲胺基吡 (DMAP)、喧啉、異喧啉、三乙胺、二異丙基乙胺、L 一氮雜雙環[5,4,0]十一碳烯_7(DBU)、15•二 K3,〇]讀.5(DBN)、氫氧化納、氫氧化鉀氫氧化二碳酸納、或⑽錢⑼存^進行反應， (VII) 109361-1001I23.doc -2 - 1363056

所表示之化合物’繼而將所得之化合物（VII)藉由選自一氧化猛、過猛酸钟、Cr03、Na2Cr2〇7、PbO、Pb02、

Pb(OC〇CH3)4、HgO、AgO、Ag20、AgN03、CuCl2、FeCI3、 CI2、Br2、l2、NaCIO、KBr03、KIO4、氧、臭氧、η2〇2、 Na202、（qh5CO)202、CH3C03H、C6H5C03H、或 K2S208 之氧化劑氧化。 3.如凊求項2之製造方法’其中氧化劑為二氧化猛β 4_如請求項1至3中任一項之製造方法，其中R為甲基。 5. 如請求項1或2之製造方法，其中χι及&為溴。 6. 如請求項1或2之製造方法，其中鹼為dbu。 7_ —種以式（IV)

[式中’ R^CVC：6之烧基，波狀線表示消旋體] 所表示之化合物之製造方法，其中將以式（ΙΠ) 109361-1001123.doc / -3 - 1363056

[式中’ R為C丨-(：6之烷基] 所表示之化合物，藉由選自硼氫化鈉（NaBH4)、硼氫化鉀、硼氫化鋰、氫化鋁鈉、氫化鋁鉀、氫化鋁鋰、硼氫化鋅、三乙醯氧基硼氫化鈉、吡啶/硼烷、氰基硼氫化鈉、鈉汞齊、H2/Pd、H2/Pd_C、H2/Pt、H2/Pt02、H2/Rh 及 H2/ 雷氏-鎳之還原劑加以還原。 8_ —種以式（IV)

[式中，11為(：1-(：6之烷基，波狀線表示消旋體] 所表示之化合物之製造方法，其中將以式（I)

所表示之化合物與以式（π) 10936M001123.doc .4- (II)1363056

[式令，R為CVCk燒基，χΐΑχ2分別為齒辛] :表示之化合物，於選…、4二甲胺… (DMAP)、喹啉、異喹啉' = —乙胺一異丙基乙胺、1,8- -氮雜雙環[5,4，G]十n7(DBU)、〖，5•三氮雜雙環

[4,3,0]壬稀_5(DBN)、氫氧化鈉、氫氧化鉀氫氧化避、碳酸鈉、或碳酸氫納之驗存在下進行反應，而製造以式 (III)

[式中，R與上述意思相同]

所表示之化合物，繼而將所得之化合物（III)，使用選自硼氫化鈉（NaBH4)、硼氫化鉀、硼氫化鋰、氫化鋁鈉、氫化鋁鉀、氫化鋁鋰、硼氫化鋅、三乙酿氧基硼氫化鈉、吡啶/硼烷、氰基硼氫化鈉、鈉汞齊、H2/Pd、H2/Pd-C、 H2/Pt、H2/Pt02、H2/Rh及H2/雷氏·鎳之還原劑還原。 9. 一種以式（IV) 10936M001123.doc 1363056

[式中，尺為(:丨-匚6之烷基，波狀線表示消旋體] 所表示之化合物之製造方法，其中使以式（1)

所示之化合物與以式（II)

X2 V [式中，R為C丨-C6之烷基，X丨及X2分別為鹵素] 所表不之化合物，於選自吡啶、4_二甲胺基吡啶 (DMAP)、啥淋、異喹啉、三乙胺、二異丙基乙胺、1，8- 一氮雜雙環[5,4,0]十一碳烯_7(DBU)、15•二氮雜雙環 [>3,〇]壬烯-5(DBN)、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、碳酸納、或碳酸氫#J线存在下進行反應，而製造以式 (VII) 109361-1001123.doc 1363056

[式中，R與上述意義相同]

所表示之化合物，繼而將所得之化合物（νιΌ以選自二氧化錳、過錳酸鉀、Cr03、Na2Cr207、PbO、Pb02、 Pb(OCOCH3)4、HgO、AgO、Ag20、AgN03、CuCl2、FeCl3、 Cl2、Br2、I2、NaCIO、KBr03、KI04、氧、臭氧、H202、 Na202、（C6H5CO)2〇2、CH3C03H、C6H5C03H、或 K2S208 之氧化劑氧化，而製造以式（in)

0 ® [式中，R與上述意義相同] (Mi) 所表示之化合物，進而將所得之化合物（I11)以選自棚氫化鈉（NaBH4)、硼氫化鉀、硼氫化鋰、氫化鋁鈉、氫化鋁鉀、氫化鋁鋰、硼氫化鋅、三乙醯氧基硼氫化納、°比啶/ 硼烷、氰基硼氫化鈉、鈉汞齊、H2/Pd、H2/Pd-C、H2/Pt、 H2/Pt02、H2/Rh及H2/雷氏-鎳之還原劑還原。 10. 如請求項7至9中任一項之製造方法，其中還原劑為 NaBH4。 11. 如請求項7至9中任一項之製造方法，其中進而包含以下 109361-1001123.doc 1363056 步驟：將以式（ιν)

[式中，R與上述意義相同，波狀線表示消旋體] 所表示之化合物加以拆分，製造2·(1 •羥基乙基）_5羥基萘幷[2,3-b]呋喃-4,9-二酮之α體及β體。

12.如叫求項1、2、7至9中任一項之製造方法，其中進而包含使溶解於溶劑中之二甲胺與以式（ν)

所表示之化合物反應而獲得以式（VI)

(VI)

所表示之化δ物之步驟、以及使所得之式（VI)之化合物與15 /0(w/w)選自鹽酸或硫酸之酸性水溶液反應，而獲付式（I)之化合物之步驟。 13.如叫求項12之製造方法，其中酸性水溶液為鹽酸水溶液。 109361-1001123.doc -8 -