CN101142202A - 抗癌化合物及其中间体和生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种简单而廉价地、高产率地制备消旋体或光活性的2－(1－羟乙基)－5－羟基萘并[2，3－b]呋喃－4，9－二酮的方法，可作为制备NFD的中间体的2－乙酰基－2，3－二氢－5－羟基萘并[2，3－b]呋喃－4，9－二酮，以及包括2－(1－羟乙基)－5－羟基萘[2，3－b]呋喃－4，9－二酮作为有效成份的抗癌剂。所述2－(1－羟乙基)－5－羟基萘并[2，3－b]呋喃－4，9－二酮可以使用相对便宜的5－羟基萘－1，4－二酮(也称为胡桃醌)作为初始材料，通过4或5个步骤获得。
Description
技术领域
本发明涉及2-乙酰基-2，3二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮及其制备，以及从上述化合物中制备具有抗癌活性的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的方法。本发明还涉及一种含有2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的消旋体或α-异构体作为有效成份的抗癌剂
背景技术
2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的分子式为：
是一种包含在紫葳、天然紫杉树木(Taheebo)(Tabebuia avellanedaeLorentz ex Griseb)、洛伦兹、空心莲子草)中有光学活性的化合物，它具有β异构体并被认为具有极好的抗癌活性(例如参见：专利文献1)。然而，除了从上述植物中提取外，获取2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的方法还是未知，因此，基于上述植物的稀缺性及其产率非常低(0.05％)(例如参见：非专利文献1)的原因，2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-B]呋喃-4，9-二酮还未被完全当作药物来使用。
[专利文献1]JP2669762
[非专利文献1]Shinichi Ueda等人，植物化学，1994，Vol.36(2)，p.323-325
发明内容
因此，廉价而容易地合成可当作药物使用的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮将令人愉悦。
5-羟基萘-1，4-二酮(又指胡桃醌)能够以相对低的成本获得，本发明人发现通过使用胡桃醌作为初始材料，2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮可以以较高产率廉价且容易地合成，以完成本发明。因此，本发明涉及一种通过胡桃醌容易地得到2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮作为中间体，进而制备2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的方法。本发明人已经成功地实施本发明，按照本方法提取的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮可以以消旋体形式获得，该消旋体可以通过传统的光学办法被分离为α-和β-异构体。并且，消旋体和α-异构体被认为比β-异构体要安全。
本发明提供了一种方法以用于廉价而容易地制备2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮。而且，虽然从植物中提取出来的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮是β-异构体，而本发明的方法可以以消旋体混合物提供所述化合物。进一步地，可以获取β-异构体的对映体(以下称为α-异构体)，这种α-异构体是不能够从植物中获取的，其手性地从消旋体混合物中分离，例如，通过柱层析法或者是光学的方法。
具体实施方式
在第一实施方案中，本发明提供一种用于制备通式(III)的化合物的方法：
其中R是C1-C6烷基，包括：在碱的存在下，通式(I)的化合物与通式(II)的化合物反应：
其中R的定义同上，X1和X2各自独立地是卤原子。
在另一实施方案中，本发明提供一种制备通式(III)的化合物的方法：
其中，R是C1-C6烷基，包括：在碱的存在下，通式(I)的化合物和通式(II)的化合物反应：
其中R的定义同上，X1和X2各自独立地是卤原子，以提供通式(VII)的化合物
其中R的定义同上，随后通过氧化剂氧化所得的通式(VII)的化合物。
作为一个优选的实施方案，本发明提供了一种制备通式(IV)的化合物的方法。
其中R的定义同上，以及波纹线是指消旋体，其进一步包含利用还原剂来还原在上述方法的任意一种方法中得到的通式(III)化合物的步骤。
另外，本发明提供了一种制备通式(IV)的消旋混合物的方法：
其中R的定义同上，波纹线是指消旋体，其包括：通过一种还原剂还原通式(III)的化合物。
其中R的定义同上，所述化合物(III)可以直接地从通式(I)的化合物或经由通式(VII)的化合物制备。
在另一实施方案中，本发明提供了一种制备2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的α-和β-异构体的方法，包括：拆分通式(IV)的化合物：
其中R的定义同上，波纹线是指消旋体。
在进一步优选的实施方案中，本发明提供了一种制备上述多种化合物的方法，包括以下步骤
使溶解于溶剂中的二甲胺与通式(V)的化合物反应：
生成通式(VI)的化合物
使所得的通式(VI)化合物和5～15wt％的酸性溶液(W/W)反应，生成通式(I)的化合物，和
包括通过使用所得的通式(I)化合物来实施上述任一种方法。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种通式(VII)的化合物
其中R的定义同上。所述化合物可以作为制备2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的中间体。
在另一实施方案中，本发明提供了2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮，其在甲醇(c0.25，25℃)中具有(+)-旋光度，称之为α-异构体
在另一实施方案中，本发明提供了一种包含2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的消旋体作为活性成份的抗癌剂。
另一实施方案中，本发明提供了一种包含2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的α-异构体作为活性成份的抗癌剂。
本文所指的氧化剂包括但不限于，锰化合物(如MnO2、KMnO4)、铬化合物(如：CrO3或Na2Cr2O7)、铅化合物[如：PbO、PbO2或Pb(OCOCH3)4]及其它金属化合物(如：HgO、AgO、Ag2O、AgNO3、CuCl2或者FeCl3)、卤素及卤化合物(如：Cl2、Br2、I2、NaClO、KBrO3或KIO4)、氧、臭氧、过氧化物[如：H2O2、Na2O2或者(C6H5CO)2O2]或过酸及盐(如：CH3CO3H、C6H5CO3H或K2S2O8)。
本文所指的术语“卤素”包括氟、氯、溴、碘。优选“卤素”是溴。
本文所指的术语“C1-C6烷基”可以是直链或支链的烷基，如：甲基、乙烷基、正丙基、异丙基、正丁基、叔-丁基、正戊基或者正已基。在本发明中，优选的C1-C6烷基是甲基。
本文所指的术语“碱”可以是有机的或无机的碱。有机碱包括，例如吡啶、DMAP(4-二甲基氨基吡啶)、喹啉、异喹啉、三乙胺、二异丙基乙胺、DBU(1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯)或DBN(1，5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯)，但不限于上述所列。无机碱包括碱性金属或碱土金属的氢氧化物、碳酸盐或重碳酸盐等，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠或碳酸氢钠，但不限于上述所列。在本发明中，优选的碱是DBU。
本文所指的术语“还原剂”包括例如：硼氢化钠(NaBH4)、硼氢化钾、硼氢化锂、氢化铝钠、氢化铝钾、氢化铝锂、硼氢化锌、三乙酰氧基硼氢化钠、吡啶/硼、氰基硼氢化钠、汞化钠、H2/Pd、H2/Pd-C、H2/Pt、H2/PtO2、H2/Rh和H2/拉尼镍，但并不限此。优选的还原剂是硼氢化钠。
上述获取的通式(VI)的化合物可以利用本领域中传统的方法任选进行分离，例如分馏结晶或手性柱色谱法。此外，具有光学活性的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮可采用传统手性还原剂代替上述还原剂通过已知的方法获得，所述的手性还原剂是例如手性的硼烷衍生物(如(-)或(+)-B-氯代二-3-蒎基硼烷)或BINAP(R)或(S)-2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘))。
本发明的方法可以说明如下：
其中R、X1和X2的定义与如上相同。
在上述方案中的步骤1优选依照Chaker，L.；Pautet，F.；Fillion，H.，在Chem.Pharm.Bull(1994，42，2238-2240.)中描述的方法实施。同时，在上述方案的步骤1中的起始原料5-羟基萘-1，4-二酮(也称为胡桃醌)可以从商用渠道获得，例如从东京化学工业株式会社(日本东京)。另外，有关胡桃醌的细节描述可参见Merck Index，13版，5288页和其中的参考资料。
发明者已出乎意料地发现，在上述文献公开的方法中，即使使用在溶剂中的二甲胺溶液用来代替二甲胺(沸点：-6℃)，也可获得类似的结果(取代基选择性和产率)。因此，本发明还提供了一种方法步骤1的方法，包括将溶剂中的二甲胺溶液中加至甲苯中的胡桃醌溶液。
在上述方案的第1步，用于胡桃醌的溶剂并没有限定，包括本领域中的任何常用溶剂。优选的溶剂是甲苯。用于二甲胺的溶剂也没有指定，但包括本领域中的任何常用溶剂。优选的溶剂包括水(H2O)、己烷、四氢呋喃(THF)、乙醚、甲苯、甲醇和乙醇。
第1步的反应可在-78℃至溶剂的回流温度范围内的温度下进行，优选是从40℃到室温。尤其，就选择性和易于操作来讲，反应温度在-40至0℃最为有利。
在上述方案步骤2的反应可以优选依据De Oliveira，A.；Ferreira，D.T.；Raslan，D.S.在Tetrahedron Lett.，1988，29，155-158中描述的方法实施。发明人预料不到地发现上述文献中所描述的方法中使用的浓盐酸可用5至15％酸性水溶液取代，以达到类似的产率。水性酸溶液可以是在通常的水解反应中使用的任何酸的溶液，优选是在水性盐酸或硫酸溶液中的溶液。此外，上述水性溶液中可任选滴加二氧杂环己烷。同时，酸液的浓度并没有指明，可在只要水解可以进行的任何范围内，且基于安全和容易处理考虑，优选为5至15％。因此，本发明还提供步骤2的方法，包括使用5至15重量％的水性酸溶液，优选5至15重量％的盐酸水溶液。此外，虽然没有具体限制，第2步的反应优选在回流下加热进行。
在上述方案中的步骤3的反应可以按照类似于Hagiwara等人(Hagiwara，H.；Sato，K.；Nishino，D.；Hoshi，T.；Suzuki，T.；Ando，M.，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2001，2946-2957) 描述的方式实施。尽管文献报道的产品的产率是60％，用文献中所描述的2-羟基胡桃醌替代起始原料导致非常低的产率。根据本发明人的深入研究发现，通过在蒸馏提纯后的24小时内，优选在3小时内使用反应物甲基乙烯基酮，所述步骤中反应的产率大大改善。因此，本发明还提供了步骤3的改进方法，即使用刚经过蒸馏提纯的甲基乙烯基酮，优选在提纯后一小时内。在第3步，可以获得化合物(III)和化合物(VII)的混合物。化合物(VII)可以在步骤4的反应中通过氧化剂的处理转化为化合物(III)。
用于甲基乙烯基酮和步骤3中使用的溴的溶剂并没有指定，但优选是异戊烷或己烷。另一方面，用于2-羟基胡桃醌的溶剂没有指定，但优选是四氢呋喃或乙醚。另外，步骤3的反应温度并没有指定，但优选是室温。
在上述方案步骤4和步骤5的反应可依据本领域已知的方法进行，优选通过Hagiwara et al.(Hagiwara，H.；Sato，K.；Nishino，D.；Hoshi，T.；Suzuki，T.；Ando，M.，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2001，2946-2957)所描述的方法。
与此同时，步骤4的反应溶剂并没有指定，但优选是卤化烃，例如氯仿或二氯甲烷。此外，在步骤4中的反应优选在回流下加热进行，然而这并没有限制。
步骤5的反应溶剂并没有指定，但优选是氯仿及乙醇的混合物，尤其是体积比(v/v)为4∶1的氯仿∶乙醇混合物。此外，步骤5的反应优选在0℃进行，然而这并没有限制。
本发明按以下实施例说明，但不局限于这些实施例。
在下列例子中，会使用下列工具，
1H-NMR(氢谱核磁共振)：UNITY INOVA 500(制造商瓦瑞安公司)，核磁共振溶剂：CDCl3(内标材料：四甲基硅(TMS))；
熔点仪器：Mp-J3(Yanaco)
实施例1
制备2-二甲基胡桃醌
在-20℃时，向5-羟基萘-1，4-二酮(也称为胡桃醌)(171毫克，1毫摩尔)的甲苯(5毫升)溶液中，加入二甲胺(0.75毫升，2.0M的四氢呋喃溶液，1.5毫摩尔)。在-20℃下，将混合物搅拌1小时。然后向其中加入二甲胺(0.75毫升，2.0M的四氢呋喃溶液，1.5毫摩尔)，在-20℃下将混合物搅拌30分钟，然后在真空下将溶剂蒸发。残留物用硅胶柱色谱纯化(氯仿/乙酸乙酯＝20/1(V/V))以分离出2-二甲基氨基胡桃醌(87.2毫克，40％)和3-二甲基氨基胡桃醌(28.8毫克，13％)。
2-二甲基氨基胡桃醌
熔点：147至148℃
1H-NMR(CDCl3)：δ3.25(s，6H)，5.72(s，1H)，7.20(dd，1H，J＝1.2，8.3Hz)，7.45-7.51(m，2H)，13.0(s，1H)。
3-二甲基氨基胡桃醌
1H-NMR(CDCl3)：δ3.23(s，6H)，5.84(s，1H)，7.15(dd，1H，J＝3.7，6.1Hz)，7.56-7.59(m，2H)，11.9(s，1H)。
实施例2
反应以与实施例1所描述的类似方式进行，除了-40℃取代-20℃，以获得2-二甲胡桃醌(104毫克，48％)和3-二甲胡桃醌(20毫克，10％)。
实施例3
反应以与实施例1所描述的类似方式进行，除了以水取代四氢呋喃作为二甲胺的溶剂，用0.15毫升水性二甲胺溶液(50％水溶液，1.5毫摩尔)，反应温度0℃，以获得2-二甲基氨基胡桃醌(97毫克，45％)和3-二甲基氨基胡桃醌(67毫克，31％)。使用水取代有机溶剂使得这种方法就环境和安全来说更为有利。
实施例4
制备2-羟基胡桃醌
向2-二甲基氨基胡桃醌(1.95克，9mmol)的二氧杂环己烷(45毫升)溶液中，加入10％盐酸(10毫升)，并把混合物加热至回流30分钟。混合物冷却到室温，然后将反应溶液用氯仿萃取。用盐水冲洗合并的有机层，用硫酸钠干燥、过滤，在真空下蒸发溶剂，以获得2-羟基胡桃醌(1.67克，97％)，为棕色固体。
熔点：220至221℃
1H-NMR(CDCl3)：δ6.31(1H，s)，7.35(1H，dd，J＝8.5，1.2Hz)，7.44(1H，s)，7.59(1H，t，J＝8.5Hz)，7.69(1H，dd，J＝8.5，1.2Hz)，12.33(1H，s)。
实施例5
制备2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮和2-乙酰基-2，3二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮。
在-15℃下，向甲基乙烯基酮(10.5克，150mmol)的戊烷(150毫升)溶液中，加入溴(25克，156mmol)的戊烷(30毫升)溶液。在-15℃下搅拌混合物10分钟，然后在真空下蒸发溶剂，得到无色油。然后将此油加至2-羟基胡桃醌(4.75克，25mmol)的四氢呋喃(250毫升)溶液，让后在0℃下进一步加入DBU，将混合物在室温下搅拌一整夜。向混合物加入10％的盐酸，反应混合物用氯仿萃取。用盐水冲洗合并的有机层，用硫酸钠干燥、过滤，在真空下蒸发溶剂。残留物用硅胶柱色谱纯化(洗脱液∶氯仿/乙酸乙酯＝9/1(v/v))，以得到橙色固态混合物(6.14克，95％)，其包括2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮和2-乙酰基-2，3-二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮，其比例为1∶5。用硅胶柱色谱(洗脱液：氯仿)分离固体混合物，得到2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮和2-乙酰基-2，3-二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮。2-乙酰基-2，3-二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮
熔点：175至182℃(分解)
1H-NMR(CDCl3)：δ2.39(3H，s)，3.39(2H，d，J＝9.5Hz)，5.30(1H，t，J＝9.5Hz)，7.26(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz)，7.56(1H，t，J＝8.0Hz)，7.65(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz)，12.18(1H，s)。
2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮
熔点：208至220℃(分解)
1H-NMR(CDCl3)：δ2.67(3H，s)，7.33(1H，dd，J＝8.5，1.0Hz)，7.60(1H，s)，7.67(1H，t，J＝8.3Hz)，7.81(1H，dd，J＝7.4，1.0Hz)，12.13(1H，s).
实施例6
制备2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮
向2-乙酰基-2，3二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(2.4克，9.4mmol)的氯仿(50毫升)溶液中加入20克二氧化锰(由Aldrich Corp.制造，85％的活性二氧化锰，＜5微米)，将所得悬浮液加热至回流保持1天。混合物冷却到室温，然后过滤。滤液真空蒸发，残留物用硅胶柱色谱(洗脱液：氯仿)纯化，得到2-乙酰-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(0.718克，33％)。
熔点：208至220℃(分解)
1H-NMR(CDCl3)：δ2.67(3H，s)，7.33(1H，dd，J＝8.5，1.0Hz)，7.60(1H，s)，7.67(1H，t，J＝8.3Hz)，7.81(1H，dd，J＝7.4，1.0Hz)，12.13(1H，s)。
或者，在上述实施例6的方法中，二氧化锰(制造公司AldrichCorp.，有90％二氧化锰，用于电池，＜10微米)可改用二氧化锰(制造公司Aldrich Corp.，有85％的活性二氧化锰，＜5微米)(见以下实施例7)。
实施例7
向2-乙酰基-2，3二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(0.5克，1.95mmol)的氯仿(50毫升)溶液加入10克二氧化锰(制造公司AldrichCorp.，有90％二氧化锰，用于电池，＜10微米)，将所得悬浮液加热至回流保持3天。混合物冷却到室温，然后过滤。滤液真空蒸发，残留物用纯净硅胶柱色谱(洗脱液：氯仿)纯化，以得到2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(0.216克，44％)和2-乙酰氨基-2，3二氢-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(0.255克，51％)。
本方法提供了一种方法以制备2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮，成本低于实施例6。
实施例8
制备2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮
在0℃下，向实施例5中获得的2-乙酰基-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(694毫克，2.73mmol)的氯仿(100ml)和乙醇(25毫升)的溶液中添加硼氢化钠(515毫克，13.7mmol)。混合物搅拌30分钟，然后通过向混合物加入10％盐酸来淬灭反应。水层用氯仿萃取两次，提取物连续用水和盐水清洗。混合物真空蒸发，并由硅胶柱色谱(洗脱液：氯仿)纯化，得到2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(516毫克，74％)，是作为黄色结晶体的消旋混合物。
熔点温度：148至149℃
1H-NMR(CDCl3)：δ1.66(3H，d，J＝6.8Hz)，2.31(1H，brs)，5.05(1H，m)，6.84(1H，s)，7.27(1H，dd，J＝8.3，1.0Hz)，7.62(1H，t，J＝8.0Hz)，7.75(1H，dd，J＝8.0，0.9Hz)，12.18(1H，s)。
得到的消旋混合物可通过手性柱色谱法在以下条件下分离，得到其对映体。
柱：SUMICHIRAL OA-4500(4.6mm×250mm)
流动相：乙烷/2-丙醇/甲醇＝95∶4∶1
探测光：UV254nm
流量：1.0mL/分钟
温度：室温(恒温约25℃)
注入量：5μL(0.1mg/mL甲醇)
保持时间：30.8和34.4分钟。
2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的对映体也可用“己烷/乙醇＝95∶5”取代上述条件下的“己烷/2-丙醇/甲醇＝95∶4∶1”为流动相进行分离，并且在这种情况下，保持时间为24.9和27.4分钟。在同样条件下，手性柱色谱法获得自然衍生的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(也称为β-异构体)的保持时间是27.4分钟。
已经发现，考虑到通过合成的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮在上述条件下使用光活性柱的HPLC分离获得的对映体的各自保持时间，先洗脱的是非自然型(α-异构体)，后洗脱的是自然型(β-异构体)。各性能见下表1。
表1
| 非自然型(α-异构体) | 自然型(β-异构体) | |
| 纯度 | ≥99％ | ≥99％ |
| 熔点 | 172-173.5℃ | 171-172℃ |
通过使用实施例8获得的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的消旋体、α-异构体与β-异构体，对抗癌活性和对正常细胞的毒性进行了检验，如下所示。
试验1：抗癌活性
(1)对PC-3细胞(前列腺癌细胞)的抗癌活性(1)
首先，将PC-3细胞(由Department of Laboratory Products ofDainippon Pharm.Co.Ltd.制造)细胞接种在35mm培养皿中，该培养皿含DMEM(Dulbecco′s modified Eagle medium)培养基，含有20％浓度为1×105/ml的胎牛血清。细胞在36℃，5％二氧化碳下培养1天，细胞均证实被粘附在培养皿的底部。所得pc-3细胞被分为三组，向第一组加入(±)一2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(消旋体)，其浓度为0.5mM、0.05mM和0.005mM，向第二组加入阿霉素(wakenyaku公司)，浓度为0.5mM，0.05mM和0.005mM作为对照。这几组在36℃下培养3天后，活细胞计数以计算细胞生存能力。结果见表2.
表2
| 对PC-3细胞的抗癌活性的比较-1 | ||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | 阿霉素处理(生存能力％) |
| 0.5 | 0 | 0 |
| 0.05 | 0 | 0 |
| 0.005 | 50 | 42 |
(2)对PC-3细胞的抗癌活性(2)
将与上述(1)类似的方式获得的PC-3细胞分为三组，向第一组加入(±)-2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(消旋体)，浓度为0.5mM、0.05mM、0.005mM和0.0005mM，向第二组加入非自然型2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(α-异构体)，浓度为0.5mM、0.05mM、0.005mM和0.0005mM，向第三组添加天然型2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮(β-异构体)，浓度为0.5mM、0.05mM、0.005mM和0.0005mM，向第四组加入丝裂霉素作为对照，浓度为0.5mM、0.05mM、0.005mM和0.0005mM。这几组在36℃下培养3天后，计数活细胞以计算细胞生存能力。结果见表3。
表3
| 对PC-3细胞的抗癌活性的比较-2 | ||||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | α-异构体处理(生存能力％) | β-异构体处理(生存能力％) | 丝裂霉素处理(生存能力％) |
| 0.5 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 0.05 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 0.005 | 30 | 30 | 10 | 10 |
| 0.0005 | 50 | 60 | 40 | 40 |
(3)对A-549细胞(肺癌细胞)的抗癌活性
对A549细胞抗癌活性的研究与上述(2)方式相似，结果见表4。
表4
| 对A-549细胞的抗癌活性的比较 | ||||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | α-异构体处理(生存能力％) | β-异构体处理(生存能力％) | 丝裂霉素处理(生存能力％) |
| 0.5 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 0.05 | 10 | 10 | 10 | 0 |
| 0.005 | 50 | 40 | 30 | 10 |
| 0.0005 | 70 | 70 | 60 | 50 |
(4)对MCF-7细胞(乳癌细胞)的抗癌活性
对MCF-7细胞抗癌活性的研究与上述(2)方式相似，结果见表5。
表5
| 对MCF-7细胞的抗癌活性的比较 | ||||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | α-异构体处理(生存能力％) | β-异构体处理(生存能力％) | 丝裂霉素处理(生存能力％) |
| 0.5 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 0.05 | 20 | 30 | 20 | 10 |
| 0.005 | 50 | 60 | 50 | 30 |
| 0.0005 | 90 | 90 | 70 | 60 |
试验2：对人体皮肤正常细胞(细胞体系FB细胞)、人体正常肝细胞(细胞体系Hc细胞)、人体肠道正常细胞(细胞体系IE细胞)和人体正常肺细胞(MRC-5)的毒性测定
首先，将每种人的正常细胞接种在35mm培养皿中，该培养皿含DMEM(Dulbecco′s modified Eagle meditum)培养基，含有20％浓度为1×105/ml胎牛血清。细胞在36℃，5％二氧化碳下培养1天，细胞均证实粘附在培养皿的底部。将外消旋、α-异构体与β-异构体各自溶于二甲基亚砜以得到浓度为0.5mM、0.05mM、0.005mM和0.0005mM的溶液，向每种细胞中加入上述溶液2微升。在36℃下培养细胞3天，用0.25％台盼蓝计数活细胞，计算细胞生存能力。结果见表6-9。还在对人体皮肤正常细胞的毒性测试中检验了商用抗癌药丝裂霉素作为对照，结果见表6。
表6
| 对人体皮肤正常细胞的毒性 | ||||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | α-异构体处理(生存能力％) | β-异构体处理(生存能力％) | 丝裂霉素处理(生存能力％) |
| 0.5 | 20 | 30 | 10 | 0 |
| 0.05 | 50 | 40 | 20 | 0 |
| 0.005 | 80 | 70 | 50 | 30 |
| 0.0005 | 100 | 100 | 100 | 60 |
表7
| 对人体肝脏正常细胞的毒性 | |||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | α-异构体处理(生存能力％) | β-异构体处理(生存能力％) |
| 0.5 | 30 | 20 | 10 |
| 0.05 | 60 | 40 | 20 |
| 0.005 | 80 | 70 | 50 |
| 0.0005 | 100 | 100 | 100 |
表8
| 对人体肠正常细胞的毒性 | |||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | α-异构体处理(生存能力％) | β-异构体处理(生存能力％) |
| 0.5 | 40 | 40 | 30 |
| 0.05 | 60 | 60 | 50 |
| 0.005 | 80 | 80 | 70 |
| 0.0005 | 100 | 100 | 100 |
表9
| 对人体肺正常细胞的毒性 | |||
| 浓度(mM) | 消旋体处理(生存能力％) | α-异构体处理(生存能力％) | β-异构体处理(生存能力％) |
| 0.5 | 30 | 30 | 20 |
| 0.05 | 60 | 50 | 40 |
| 0.005 | 80 | 80 | 70 |
| 0.0005 | 100 | 100 | 100 |
现有的典型的抗癌药丝裂霉素显示出很强的对正常细胞的毒性，如表6所示。
Claims (18)
1.一种制备通式(III)化合物的方法：
其中，R是C1-C6烷基，
包括使通式(I)的化合物和通式(II)的化合物在碱的存在下反应：
其中，其中R的定义同上，X1和X2各自独立地是卤原子。
2.一种制备通式(III)化合物的方法：
其中，R是C1-C6烷基，
包括使通式(I)的化合物和通式(II)的化合物在碱的存在下反应：
其中R的定义同上，X1和X2各自独立地是卤原子，
以得到通式(VII)的化合物：
其中R的定义同上，
随后通过氧化剂氧化得到的化合物(VII)。
3.权利要求2的方法，其中所述氧化剂是二氧化锰。
4.权利要求1至3中任何一项权利要求的方法，其中R是甲基。
5.权利要求1至4中任何一项权利要求的方法，其中X1和X2各是溴原子。
6.权利要求1至5中任何一项权利要求的方法，其中所述碱是DBU。
7.一种制备通式(IV)化合物的方法：
其中R是C1-C6烷基，波纹线表示消旋体，
包括：由还原剂还原通式(III)的化合物：
其中R的定义同上。
8.一种制备通式(IV)化合物的方法：
其中，R是C1-C6烷基，波纹线表示消旋体，
包括：使通式(I)的化合物和通式(II)的化合物在碱存在下反应：
其中R的定义同上，X1和X2各自独立地是卤原子，
以获得通式(III)的化合物：
其中R的定义同上，
随后由还原剂得到的化合物通式(III)。
9.一种制备通式(IV)化合物的方法：
其中R是C1-C6烷基，波纹线表示消旋体，
包括：使通式(I)的化合物和通式(II)的化合物在碱存在下反应：
其中R的定义同上，X1和X2各自独立地是卤原子，
以获得通式(VII)的化合物：
其中R的定义同上，
随后所得的化合物(VII)被氧化剂氧化以得到通式(III)的化合物：
其中R的定义同上，
和用还原剂还原得到的化合物(III)。
10.权利要求7至9中任何一项权利要求的方法，其中所述还原剂是NaBH4。
11.权利要求7至10中任何一项权利要求的方法，其进一步包括拆分通式(IV)化合物的步骤：
其中R的定义同上，波纹线表示消旋体，
以得到2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的α-和β-异构体。
12.权利要求1至6、8至11中任何一项权利要求的方法，其还包括使溶于溶剂中的二甲胺与通式(V)的化合物反应的步骤：
以得到通式(VI)的化合物：
和使得到的通式(VI)的化合物与5至15％(w/w)的水性酸溶液反应以得到通式(I)化合物的步骤。
13.权利要求12的方法，其中所述水性酸溶液是盐酸水溶液。
14.通式(VII)的化合物：
其中R是C1-C6烷基。
15.通式(IV)的消旋混合物：
其中R是C1-C6烷基，波纹线表示消旋体。
16.2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮，其在甲醇(c0.25， 25℃)中具有(+)-旋光度。
17.一种抗癌剂，其包括2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮的消旋体作为活性成分。
18.权利要求17所述的抗癌剂，包括在甲醇(c 0.25，25℃)中有(+)-旋光度的2-(1-羟乙基)-5-羟基萘并[2，3-b]呋喃-4，9-二酮作为活性成分。
Applications Claiming Priority (3)
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| JP2005075291 | 2005-03-16 | ||
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| CN (1) | CN101142202A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103025159A (zh) * | 2010-03-19 | 2013-04-03 | 波士顿生物医学公司 | 靶向癌症干细胞的新方法 |
-
2006
- 2006-03-15 CN CNA200680008508XA patent/CN101142202A/zh active Pending
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|---|---|---|---|---|
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