TWI353985B - Novel compounds - Google Patents

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1353985 九、發明說明： 【發明所屬之技術領威】 本發明係關於新穎乙内酿腺（hydantoin)衍生物、其製備 方法、包含它們之醫藥組合物及其於醫療上之用途° 【先前技術】 金屬蛋白酶為蛋白酶（酵素）之一超家族’近年來其數目 有戲劇性之增長。基於構造和功能之考量’此等酵素已被 歸類至如 N.M. Hooper(1994)FEBS Letters 354:1-6所說明之 族及亞族内。金屬蛋白酶之實例包括：基質金屬蛋白酶 (MMPs)，例如：膠原酶（MMP1、MMP8、MMP13)、明膠 酶（MMP2、MMP9)、基質溶素（stromelysins)(MMP3、 MMP10、MMP11) ' 基質裂解素（matrilysin)(MMP7)、金屬 彈性蛋白酶（MMP12)、基質金屬蛋白酶（enamelysin) (MMP19)、MT-MMPs (MMP14、MMP15、MMP16、 MMP17); reprolysin 或 adamalysin 或 MDC家族，其包括： 泌離酶（secretases)及卸離酶（sheddases)，例如：TNF轉化 酶（ADAM 10和TACE);蝦青素（astacin)家族，其包括酵 素，例如：前膠原蛋白加工蛋白酶（PCP);以及其他金屬 蛋白酶，例如：聚蛋白多畴酶、内皮素轉化酶家族和血管 收縮素轉化酶家族。 咸信金屬蛋白酶在涉及組織重建，例如：胚胎發育、骨 骼形成及月經期間之子宮重建之生理性疾病過程之多血症 中具重要性。此係基於金屬蛋白酶可裂解廣範圍之基質， 例如：膠原蛋白、醣蛋白及纖維粘連蛋白之能力。金屬蛋 102523.doc -5- ⑧ 1353985 白酶亦咸信於生物重要之細胞調節子，例如：腫瘤〉周亡因 、子之加工或分泌；以及生物重要膜蛋白質，例如：低親和 性IgE受體CD23(更完整之條列可參見N. M H〇oper等人， - (1997) Biochem. J. 321:265-279)之轉譯後蛋白質分解性加 工或脫落上具有重要性。 金屬蛋白酶已知與許多疾病或狀況有所關聯。一或多種 金屬蛋白酶活性之抑制可能對於此等疾病或狀況，例如： 各種發炎及過敏性疾病，例如：關節發炎（特別是風濕性 • 關節炎、骨關節炎和痛風）、胃腸道發炎（特別是發炎性腸 疾、結腸潰瘍及胃炎）' 皮膚發炎（特別是牛皮癬、濕疹、 皮膚炎）’對於腫瘤轉移或入侵；對於與胞外基質之降解 失控有關之疾病，例如：骨關節炎；對於骨骼再吸收疾病 (例如：骨質疏鬆和帕哲特氏病（Paget，s disease));對於與 異常之血#新生有關之疾病；與糖尿病、牙周病（例如·· 牙齦炎）、角膜潰瘍、皮膚潰瘍、手術後狀況（例如：大腸 閉合）和皮膚傷口癒合相關之膠原蛋白重建增加；中樞或 • 周圍神經系統之髓鞘脫失性疾病（例如：多發性硬化症）； 阿滋海默症；可見於心血管疾病，例如：再狹窄和動脈粥 狀硬化中之胞外基質重建；氣喘；鼻炎；和慢性阻塞性肺 疾病（COPD)很有助益。 亦已知MMIM2為巨噬細胞彈性蛋白酶或金屬彈性蛋白 -酶，其最初係由Shapir〇等人選殖於小鼠中[1992, J〇urnal of Biol〇gical Chemistry 267: 4664]並由同組人員於 1995年 選殖於人中。]VIMP12較易表現於經活化之巨嗟細跑中並已 102523.doc 1353985 知可自抽煙者之肺泡巨嗟細胞分泌出來[Shapiro等人， 1993，Journal of Biological Chemistry，268: 23824]亦存在 於動脈粥狀硬化損害之泡沐細胞中[Matsumoto等人，1998, Am. J. Pathol. 153: 109]。COPD之小鼠模型係以每天兩 支、每週六天對小鼠進行六個月之香煙攻毒。野生型小鼠 於此處理之後發展出肺氣腫。但以剔除MMP12之小鼠於此 模型中進行試驗，則並未發展出顯著之肺氣腫，此強烈顯 示MMP12係為COPD發病時之關鍵酵素。MMPs，例如： MMP12於C0PD(肺氣腫及支氣管炎）中之角色已討論於 Anderson 和 Shinagawa， 1999, Current Opinion in Antiinflammatory and Immunomodulatory Investigational Drugs 1(1): 29-38。最近發現抽煙可提高巨噬細胞浸潤和巨噬細 胞衍生之MMP-12於人類頸動脈斑塊中之表現Kangavari [Matetzky S, Fishbein MC et al., Circulation 102:(18), 36-39 Suppl. S, Oct 31，2000]。

MMP9(明膠酶B ; 92kDa第IV型膠原蛋白酶；92kDa明膠 酶）為一種分泌性蛋白質，其係於1989年首度被純化，再 被選殖並定序[S.M_ Wilhelm等人，（1989) J. Biol. Chem. 264(29): 17213-17221 ;勘誤表干丨J 登於 J. Biol. Chem. (1990) 265(36): 22570]。最近對於MMP9之回顧文提供對於此蛋 白酶之詳細資訊及參考文獻之極佳來源：T.H. Vu & Z. Werb(1998)(於：Matrix Metalloproteinases，1998, W.C. Parks & R.P. Mecham編著，115-148 ISBN 0-12-545090-7)。下列論點係由 T.H. Vu & Z. Werb 102523.doc 1353985 (1998)於該回顧中所提出。 k MMP9之表現正常係受限於一些細胞型，包括：滋養層 細胞、蝕骨細胞、嗜中性白血球和巨噬細胞。然而，其表 現可藉由數種調節子，包括將細胞曝露於生長因子或細胞 素中而於此等細胞或其他細胞型中被誘導而出。此等調節 子通常與發炎反應之開始有所牽連。當與其他分泌性 MMPs—起時，MMp9係呈不活化之前酵素被釋出，其隨 後會被切割形成酵素活化性酵素。此等活化作用於活體内 _ 所需之蛋白酶尚未知曉。於活體内之活化MMP9與不活化 酵素間之平衡係進一步藉由與ΉΜΝ!(金屬蛋白酶_丨之組 織抑制劑）-一種自然發生之蛋白質_之交互作用來加以調 節。TIMP-丨結合於MMP9iC端，造成對ΜΜρ9之催化功能 區之抑制。前ΜΜΡ9之誘導性表現、前ΜΜΡ9切割成活化 ΜΜΡ9以及ΤΙΜΙΜ之存在間之平衡共同決定存在於一局部 位點之催化性活化ΜΜΡ9之量。經蛋白質分解性活化 ΜΜΡ9會攻擊包括：明膠、彈性蛋白f及原態㈣型和第 攀V型膠原蛋白之基質；其對於原態第工型膠原蛋白、釀蛋白 或層粘連蛋白並無活性。 已有愈來愈多之資料指出MMP9在各種生理和病理過程 中之角色。生理角色包括：在胚胎著床之早期透過子宮上 皮侵入胚胎滋養膜細胞；在骨骼生長和發育中之一此角 * 色；以及發炎細胞自血管網轉移至組織内。 一 W酵素免疫分析測得未經治療之氣喘患者於體液及鹰上 清液内之ΜΜΡ9釋放顯著較來自其他族群者為高[八爪j 102523.doc 1353985

Resp. Cell & Mol. Biol.，Nov 1997，17(5):583-591]。增加 之MMP9表現亦於某些其他病理狀況申被觀察到，由此知 MMP9涉入疾病過程，例如：COPD、關節炎、腫瘤轉移、 阿滋海默症、多發性硬化症及動脈粥狀硬化中之斑塊破裂 所導致之急性冠狀動脈狀況，例如：心肌梗塞。 已知許多種金屬蛋白酶抑制劑（參見例如Beckett R.P.和 Whittaker Μ., 1998, Exp. Opin. Ther. Patents, 8(3):259-282，以及 Whittaker M.等人，1999，Chemical Reviews 99(9):2735-2776之]VIMP抑制劑回顧）。 WO 〇2/〇74767揭示下式之乙内醯脲衍生物

其可作為MMP抑制劑，特別是作為有效之mMP12抑制 劑。下列二個化合物係特別揭示於W〇 02/074767者。

102523.doc -9- ⑧ 1353985 : 【發明内容】 吾人現今發現-群化合物，其為金屬蛋白酶之抑制劑並 特別針對可抑制MMPs，例如：刪川和MMp#。本發 明之化合物具有益之效能、選擇性及/或藥動學特性。本 φ 發明之化合物係在W0 °2/°74767之基因範圍内，但為其中 並未特別示例之型式。 八 根據本發明，其因而提供一式⑴之化合物

• 其中 W代表CM至以基、環丙基、⑽3、随3或⑽3;該产 基或環丙基基團係視情況進一步經一或多個氟原子取代： 且 ， R2代表C1至3燒基； 及其醫藥上可接受之鹽類。 式⑴之化合物可以鏡像異構物之型式存在。咸知 像異構物、非鏡像異構物、消旋異構物和其混合物均包: 102523.doc 1353985 於本發明之範圍内。 式⑴之化合物亦可以各種互變異構物型式存在。所有可 月&的互變異構物型式及其混合物均包含於本發明之範圍 内。 在一具體實施例中，Ri代表（^至2烷基或環丙基；該烷 基或壤丙基基團可視情況進一步經一或多個氟原子取代。 在另一具體實施例中，R!代表（：1至2烷基，其視情況進 一步經一或多個氟原子取代。

在一具體實施財，R]代表視情況經一或多㈣氟原子進 R1代表丙基。 R1代表三氟甲基。 R1 代表 och3 或 sch3。 R代表甲基或乙基。在一具體實施 步取代之環丙基 在一具體實施例中 在一具體實施例中 在一具體實施例中 在一具體實施例中 例中’ R2代表甲基。

在一具體實施例中，R】代表〇至2院基或環丙基，其視 情況進-步經氟原子取代且r2代表甲基或乙基。 在一具體實施例中，R丨代表基或環丙基，其視 情況進-步經-或多個a原子取代且r2代表甲基。 在一具體貫施例t，R1表示視情況經—或多個氟原子進 -步取代之。至。院基且R2表示甲基或乙基。 在-具體實施例中’ R1代表灿2代表甲基或乙基。 在一具體實施例中，R】符矣 κ代表裱丙基且R2代表甲基或乙 基。 I02523.doc -Η· 1353985 除非另有W ’否則本文中之術語「C1至3烧基」係指 具有1至3個碳原子之直鏈或支鏈烷基基團。此等基團之 貫例包括：f基、乙基、正丙基和異丙基。術語「ci至2 炫基J係指f基或乙基。 視h況進一步經一或多個氟原子取代之C1至2院基之實 例包括：cf3、ch2f、ch2cf3、CF2CH3和cf2cf3。 視情況進一步經一或多個氟原子取代之環丙基環之實例 包括：1-氟-1-環丙基、2,2-二氟-1-環丙基和2,3_二氟_丨環 丙基：

本發明之化合物實例包括： (55>5-({[4-[(2-環丙基嘧啶-5-基）乙炔基]·3,6-二氫吡咬. 1 (2//)-基]續醢基}曱基）-5 -甲基味。坐咬_2,4-二酮； (55)-5 -曱基-5-( {[4-{[2-(甲基硫）嘧啶-5-基]乙炔基卜3,6_二 氫吡啶-1(2丑)-基]磺醯基}甲基）咪唑啶-2,4-二_ ; (55>5-曱基·5-({[4-{[2-(三氟甲基）嘧啶_5_基]乙炔基} 3 6_ 二氫吡啶-1(2//)-基]磺醯基}曱基）咪唑啶-2,4-二酮； (5*S>5-甲基-5-({[4-[(2-曱基嘧啶-5-基）乙炔基]·3,6_二氫吼 啶-1(2/〇-基]磺醯基}曱基）咪唑啶-2,4-二酮； (5*S>5-({[4-[(2-乙基嘧啶-5-基）乙炔基]_3,6·二氫吡咬_ l(2i/)-基]磺醯基}曱基）-5-甲基咪唑啶_2,4_二_ ; (55>5-({[4-[(2-曱氧基嘧啶_5-基）乙炔基]·3,6_二氫吨咬· •12· I02523.doc

!353985 U2丑)·基]磺醯基}甲基）_5·甲基咪唑啶_24_二_ ; 及其醫藥上可接受之鹽類。 各個示範性化合物均代表本發明之一特定並獨立之面 向。

式⑴之化合物可呈鏡像異構物型式存在因此所有並鏡 像異構物、非鏡像異構物、消旋異構物與其混合物均包括 於本發明之範圍内。各種光學異構物可利用慣用之技術， 例如：區分性結晶作用或HPLC，藉由分離化合物之消旋 混合物來加以分離。或者，光學異構物之取得可藉由不對 稱性合成’或自活化具光學活性之起始物質合成。 若光學異構物存在於本發明之化合物中，則吾人將所有 個別之光學活化型式及其組合揭示為本發明之個別特定具 體實施例，其相對應之消旋異構物亦同。 較佳之式⑴之化合物具有叫立體化學性，如下面之顯 示：

0 若互變異構物存在於本發明之化合 口初〒’則吾人將所有個 別之互變異構物型式及其組合揭示為 體實施例 馬本發明之個別特定具 102523.doc 13 1353985 本發明包括呈鹽類型式之式（i)之化合物。適當之鹽類包 括彼等與有機或無機酸或有機或無機鹼所形成者。此等鹽 類正常係為醫藥上可接受之鹽類，雖然非醫藥上可接受之 鹽類亦可能可用於特性化合物之製備及純化中。此等鹽類 包括酸加成鹽類，例如：鹽酸、氫溴酸、檸檬酸、甲苯續 酸及馬來酸鹽類及與磷酸或硫酸所形成之鹽類。另—方 面，適當之鹽類為鹼鹽，例如：一鹼金屬鹽，例如：鈉戋 鉀，一鹼土金屬鹽，例如：鈣或鎂或一有機胺鹽，例如： 三乙胺。 式⑴之化合物之鹽類可藉由使自由鹼或其其他鹽與—或 多種適當之酸或鹼之等同物反應而形成。 式（I)之化合物因於動物體内具有藥理活性故可使用並因 此具有醫藥用途之潛力。特定言之，本發明之化合物係為 金屬蛋白酶抑制劑且可因而應用於由MMP12及/或MMP9所 調節之疾病或狀況，例如：氣喘、鼻炎、慢性阻塞性肺病 (COPD)、關節炎（例如：風濕性關節炎和骨關節炎）、動脈 粥狀硬化及再狹窄、癌症、侵襲及轉移、涉及組織破壞之 疾病、髖關節置換之鬆脫、牙周病、纖維化疾病、梗塞及 心臟疾病、旰和腎之纖維化、子宮内膜組織異位形成、與 胞外基質弱化有關之疾病、心臟衰竭、主動脈瘤、cns相 關性疾病，例如：阿滋海默症和多發性硬化症（MS)，以及 血液病變之治療。 大體上，本發明之化合物係為MMP9和MMP12之有效抑 制州本發明之化合物亦具有優良之選擇性，其對於其他 I02523.doc -14- 1353985 各種MMP ’例如：MMP8、MMP14及MMP19相對缺乏抑制 性。此外’本發明之化合物亦通常具有改善之1〇g D值， 特定言之’其l〇g D值之範圍為〇.5<l〇g D<2.0。Log D係為 可反映一化合物於生理pH下之親脂性之參數。此等較佳 log D值之結果使得本發明之化合物具有改善之溶解特性 及減少之血漿蛋白質結合，因而有改善之藥動學及藥效學 特性。

據此，本發明提供一如前文中定義之式（I)之化合物，或 其醫藥上可接受之鹽，以供醫療之用。 另一方面，本發明提供一如前文中定義之式⑴之化合 物’或其醫藥上可接受之鹽於用以f療之藥物製造上之用 途0 另一方面，本發明提供一如前文中定義之式⑴之化合 物或其醫藥上可接受之鹽於用於治療抑制2及/或 MMP9會有益處之疾病或狀況之藥物製造上之用途。

另方面，本發明提供一如前文中定義之式⑴之化合 物’或其醫藥上可接受之鹽於用於治療發炎性疾病之藥物 製造上之用途。 另方面，本發明提供_如前文中定義之式⑴之化合 物，或其醫藥上可接受之鹽於用於治療阻塞性氣道疾病， 例如：氣喘或COPD之藥物製造上之用途。 亦包括「預防」，除非特別 在治療上」應可據此加以 在本說明文中’術語「治療」 指出例外。術語「治療的」及「 解釋。 102523.doc -15· 1353985 預防係預期特別適用於已有問題疾病或狀況之前死或其 他被認為風險增加者之治療上。有發展特定疾病或狀 風險者-般係包括彼等具有家族性疾病或狀況之病史者， 或為彼等由基因試驗或篩選較出特別容易發展該疾病或 狀況者。 本發明進-步提供-治療抑制MMPl2h或MMp9會有助 益之疾病或狀況之方法，其包含對患者投予治療有效量之

如前述定義之式⑴化合物或其醫藥上可接受之鹽。 本發明亦提供一治療阻窠科备产— 席丨且丞性氣道疾病之方法，例如：氣 喘或COPD ’其包含對患者投 $仅丁〜療有效量之如前述定義 之式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。 上文提及之治療性用途中，投藥之劑量當㈣視所使用 之化合物、㈣模式、所欲之治療及欲治療之病變而加以 改變。式⑴之化合物/鹽（活性成份）之每日劑量範圍可為 0.001 mg/kg至 75 mg/kg，牯 5?,| β Λ c , S S 特別疋0.5mg/kg 至 30mg/kg。此

等每曰劑量可視需藥分劑給予。典型之單位劑型包含約i mg至500 mg之本發明化合物。 式二化合物與其醫藥上可接受鹽類可單獨使用，但通 成二Λ組合物之型式投藥，其中式⑴之化合物，鹽(活性 與-醫藥上可接受之佐劑、稀釋劑或載 Γ據投：…’該醫藥組合物較佳係包含⑽至99 99^%^ I ^ }^ ^ 70 〇/ow^ ^ ^ ^ ^ 1 ^ • °W’ 乂佳為30至99.90❶“之醫藥上可接受 稀釋劑或載劑’所有重量百分率均以總組合物為基準適 102523.doc *16- 1353985 當之醫藥調配物之篩選及製備慣用步驟c係說明於例如： Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs」， Μ. E. Aulton，Churchill Livingstone，1988 o 因此’本發明亦提供一醫藥組合物，其包括式（I)之化合 物或其如前述定義之醫藥上可接受鹽併同一醫藥上可接受 之佐劑、稀釋劑或載劑。 本發明進一步提供一用以製備本發明之醫藥組合物之方

法，其包含將如前述定義之式⑴之化合物或其醫藥上可接 文鹽與一醫藥上可接受之佐劑、稀釋劑或載劑混合。 本發明之醫藥組合物可以標準方式對於欲治療之疾病或 狀況加以投藥，例如藉由：、經口、局部、非經腸、經頰、

、，-里鼻、經陰道或直腸投藥或藉由吸入。針 發明之化合物可藉由此項技藝中已知之方式調:成1。本 樂鍵、膠囊、水溶液或油狀溶液、懸浮液、乳化液、乳 霜、油膏、膠體、鼻喷劑、栓劑、微細分散粉末或吸入用 氣溶膠’及非經腸用（包括：靜脈内、肌内或灌注）無菌水 溶液或油狀溶液或懸浮液或無菌乳化液。 除了本發明之化合物 可與一或多種可治療一 劑，例如：「Symbicort

本發明之醫藥組合物亦可包含或 或多種上述之疾病^狀;兄之藥物製 」（商標）產品共同投藥（同時或相 本發明進-步提供-用以製備式⑴之 定義之醫藥上可接受之鹽之方法，其包括：其如上述 a)使式（II)之化合物 102523.doc 1353985 ο

(II) 其中R2係如式（I)中之定義且L1代表一脫離基，與一式（III) 之化合物（或其鹽）

其中R1係如式（I)中之定義相反應；或 b)使式（X)之化合物 /R3

N 0 (X)

其中R2係如式（I)中之定義，R3係為Η或一適當之保護基團 且X係為一脫離基，例如：鹵化物或三氟化物；與一式 (IX)之乙炔化合物

其中R1係如式（I)中之定義相反應；或 102523.doc • 18· ⑧ 1353985 c)使（XI)之化合物

其中R代表Η或：W , 鹵化物或 代表Η或-適基石夕院基，R係如式⑴中之定義且R: 三氣化物…呆護基團；與-式陳芳基

RV\ (VI) 應； 其中R係如式(I)中之定義且χ代表鹵化物或三氟化物相反 並視情況於其後形成一其醫藥上可接受之鹽。

在上述方法（a)中，適當之脫離基^包括函素、特別是 氣。該反應輓佳係於室溫至迴流溫度之下，在適當之溶劑 中，其視需要可於一加入之鹼存在—段適當之時間，典型 為0·5-24小時之下進行。典型之溶劑例如：吡啶、二甲基 曱酿胺、四氫°夫喃、乙腈或二氣甲烧均可使用。若有使 用，則加入之驗可為一有機驗，例如：三乙胺、二異丙基 乙胺、N-曱基嗎啉或吡啶，或一無機鹼，例如：驗金屬破 酸鹽。該反應典型係於室溫下進行0.5至16小時，或至以 層析或光譜法測定得反應完全為止。確酿基_化物與各種 一級及二級胺之反應為文獻中已知者’且其條件之變化應 102523.doc -19- ⑧ 1353985 為彼等熟習此項技藝者所明瞭。 式⑴)之續酿氯（其中Li代表氣）習慣上係藉^(ιν)化合 物之氧化性氣化

〇 S (IV) 使用彼等熟習此項技藝者已知之方法來加以製備。 (Mosher, J., J. 〇rg. Chem. 1958. 23, 1257; Griffith, 〇., J. CAew. 1983. 255,（3)，1591; WO 02/074767)。 式（ΠΙ)之化合物可藉由各種說明於文獻或其中可為彼等熟 習有機合成化學者明瞭之變化加以製備。適當之方法包括 但不限於彼等說明於下並顯示於流程圖丨者。

流程圖1 102523.doc • 20· 1353985 於流程圖1中，PG代表一適當之保護基團，例如：t-Boc ; X代表一脫離基，例如：鹵化物或三氟化物；r代表 氫或三甲基矽烷基；tms代表三甲基矽烷基；Ar代表2-位 置被R1取代之5·嘧啶基環；且R1係如式⑴中之定義。 芳基-或乙烯基衍生物[(V)或（VI)]與乙炔[(VII)，（VIII)或 (IX)]間之反應可視情況於一適當溶劑中，使用一催化劑， 例如：適當之鈀鹽，例如：PdCl2(PPh3)2，於有/或無添加 銅鹽並有一胺鹼，例如：哌啶' 三乙胺、二異丙胺或二異 丙基乙胺之下完成。若有使用，則加入之溶劑，可為例 如：四氫呋喃’乙腈或N，N-二曱基曱醯胺。該反應係於室 溫至迴流溫度下進行20分鐘至數小時直至以層析或光譜法 測定得反應完全為止。有乙炔化合物參與之鈀催化反應為 文獻中已詳知者，且其條件之改變應為彼等熟習此項技藝 者所明瞭。此等型式之通用方法學說明於例如： Brandsma, L., Synthesis of Acetylenes, Allenes and Cumulenes: Methods and Techniques, 2004, Elsiever

Academic Press, chapter 16, pages 293-317; Transition Metals-Catalysed Couplings of Acetylenes with sp2-halides, Sonogashira, K., J. Org^omet. Chem., 2002, 653, 46-49; Tykwinski, R. R., Angew- Chem- Ed., 2003, 42, 1566-1568 中。 X為o-三氟化物真pG為卜Boc之二氣乙烯（v)可如文獻 (Wustrow，D. L，办1991，993-995)中之說明般加以 製備。 •21 · 102523.doc 1353985 式（νι)之適當之經取代嘧啶基齒化物之製備可藉由各種 . 說明於文獻中之方法，例如：Budesinsky，z等人， C^c/z. C7^w. Commw·，1949，"，223_235; TakahasM 等 人，C/iew. P/mr/n.及《//.，1958, & 334·337; us 4 558 039 〇 乙炔化合物（VIII)可自三氟化物（v)經由與三甲基矽烷基 乙炔之鈀催化性偶合反應，再視需要使用例如：溶於適當 溶劑中之氟化鉀將三甲基矽烷基基團脫保護而製得。或 者，R為Η且PG為t-B〇c之化合物（VIII)之製備可藉由將式 _ (VI1)之化合物脫水，例如：藉由甲烷磺醯化，再以適當之 鹼’例如：二異丙基乙胺處理而成。 式（IX)之乙炔雜芳基化合物可藉由各種說明於文獻中之 方法加以製備。 於方法（b)中，反應係使用類似於彼等上述說明用於式 (VIII)之化合物之製備之方法加以進行。若需要，則式（X) 之化合物内之乙内醯腺環中之一個氮可於進行把催化性反 應之前使用SEMC1(R3=SEM)加以保護。式（X)之化合物之 ® 製備可藉由酸催化之式（V)化合物（PG=t-Boc)之脫保護，之 後再以和上述說明用於式（I)化合物之製備相同之方法與式 (II)之化合物反應^ 於方法（c)中’反應之進行係以類似於彼等上述用以說明 式（VIII)之化合物之製備之方式。若需要，則式（XI)之化 . 合物内之乙内醯脲環令之一個氮可於進行鈀催化性反應之 前使用SEMC1(R3 = SEM)加以保護。化合物（XI)可藉由酸催 化性t-Boc基團去除（例如：使用溶於甲醇之乙醯氯），再以 -22· 102523.doc (§) 1353985 如上述說明用於式（II)和（III)之化合物間之反應與式（π)之 化合物反應而自R為三甲基矽烷基且1>(}為卜3〇(：之化合物 (VIII)製得 β 彼·#熟習此項技藝者知道在本發明之方法中，起始原料 或中間化合物中之某些可能之反應官能基，例如：羥基或 胺基基團可能需要藉由適當之保護基團加以保護。因此， 本發明之化合物之製備於各階段中均可能涉及一或多個保 護性基團之加入或移除。 適當之保護基團及用以加入或移除該等基團之詳細方法 係說明於J.W.F. McOmie編著之 rPr〇tective Groups in

Organic Chemistry」，Plenum Press(1973)以及「protective

Groups in 〇rganic Synthesis」第三版，Tw Greene 和 P.G.M. Wuts，Wiley-Interscience(1999)。 本發明之化合物與其中間物可自其反應混合物中分離出 來且視需要使用標準技術進一步加以純化。 現在參照下列說明性實例以進一步解釋本發明。 一般方法 將 HNMR 和 CNMR 圖譜記錄於 Varian/«〇va 400 MHz 或

Varian 300 MHz儀器上。以氣仿 _^δΗ 7 27

ppm)、二甲亞 υ6(δΗ 2_50 ppm)、乙腈·4(δΗ j 95 ppm)或 甲醇-Α(δΗ 3.31 ppm)之主波峰作為内參照。使用石夕膠 (0.040-0.063 mm，Merck)進行管柱層析。使用 Kr〇masU KR-100-5-C18 管柱（250x20 mm，Akzo Nobel)和乙腈/水與 0· 1 /ό TFA之屍合物以1 〇 niL/min之流速進行製備性hplC!。 •23. I02523.doc © 1353985 除非另有說明，否則起始原料均可於市售購得。所有溶劑 和市售試劑均為實驗室級並直接使用。 使用下列方法進行LC/MS分析：

Instrument Agilent 1100 ;管柱：Waters Symmetry 2.1x30 mm ; Mass APCI ;流速：0.7 mL/min ;波長：254 或 220 nm ;溶劑 A :水+0.1% TFA ;溶劑B :乙腈+0.1% TFA ;梯 度：15-95%/8 2.7分鐘，95%8 0.3分鐘。 使用下列方法進行LC分析： 方法 A : Instrument Agilent 1100 ;管柱：Kromasil C18 100x3 mm，5 μ粒徑；溶劑 A : 0.1% TFA/水，溶劑B : 0.08% TFA/乙腈，流速1 mL/分鐘，梯度：10-100%/B 20分 鐘，100% B 1分鐘。測定220、254和280 nm處之吸光度。 方法 B : Instrument Agilent 1100 ;管柱：XTerra C 8, 100x3 mm, 5 μ粒徑；溶劑A : 15 mM NH3/水，溶劑B:乙腈 流速：1 mL/分鐘，梯度：10-100%/B 20分鐘，100% B 1 分鐘。測定220、254和280 nm處之吸光度。 縮寫· Ac DMF DMSO eq. Et LDA Me 乙酿基 二曱基曱醯胺 二甲亞颯 當量 乙基 二異丙醯胺鋰 甲基 -24- 102523.doc (S) MS 質譜 tert 第三 THF 四氫呋喃 TFA 三氟醋酸 1353985 【實施方式】 實例1 (55)-5-({[4-丨(2-環丙基嘧啶-5·基）乙炔基】·3,6_二氫β比啶· 1(2开)-基]磺醯基}曱基）-5-甲基咪唑啶_2,4_二網 標題化合物之製備係根據Yamanaka等人，办祕 Commit.，1983，312-314之通用方法。於35〇c之下，於溶 於 THF(3 mL)之 5-溴-2-環丙基嘧啶（11〇 mg，〇55 mm〇1)和 (5<S)-5-{[(4-乙炔基-3,6-二氫D比啶· 基）磺醯基]甲基卜 5-甲基咪唑啶-2,4-二酮（180„^，061111111〇1)中加入玢3叫1 mL)和DMF(1 mL)。形成溶液之後，加入pdcl2(pph3)2(2 mol%)並將該混合物於72t下加熱6小時。使該混合物於 EtOAc(15 mL)和水（10 mL)之間進行分配，並以Et〇Ac萃取 水層3次。將合併之有機層脫水並濃縮以得呈黃色油之粗 產物。使用製備性HPLC純化而得標題化合物（65 。 Ή-NMR (DMSO-,6): δ 10.75 (1Hj s)； 8 72 (2Hj s)； 8 〇3 (1H，s); 6.28 (1H，m); 3.84 (2H，m); 3 47 (2H，q); 3 3〇 (2H， m); 2_37 (2H，m); 2.21 (1H，m); 133 (3H，s);〗l() (2H, 1.02 (2H, m)。 APCI-MS m/z: 416 [MH+] 〇 a)5-溴-2-環丙基嘧啶 I02523.doc •25- 1353985 5-溴-2-環丙基嘧啶之製備係藉由Budesinsky，Z., Co//. Czec/i. C/iem. Cowww”.，1949, 74, 223·235之通用方法。加 入溶於EtOH(4 mL)之環丙烷曱脒醯胺鹽酸（2.5 g, 20.7 mmol)、新鮮製備之溶於Et〇H(4.8 mL)之4.1 M NaOEt，再 加入黏溴酸（2.7 g，10.3 mmol)。將該混合物加熱至56°C經 30分鐘’加入更多溶於Et〇H(4.1 M，3.2 mL)之NaOE並將 該反應於56°C再攪拌1 5分鐘並再於室溫下過夜。將溶劑蒸 顧去除’加入HC1水溶液（2 M，10 mL)並將褐色固體濾除。 以二氯甲烷萃取水層三次。將合併之有機層加以脫水並濃 縮以得到一褐色油’其與該固體共同提供粗中間物5_溴_2_ 環丙基嘴咬-4-羧酸（1.6 g)。將該粗中間物於14〇。〇下加熱8 分鐘以得一褐色黏稠油，再將其部份溶解於二氣甲烷中。 將溶液自混合物内輕輕倒出並加以濃縮以得成油狀之次標 題化合物（673 mg)。 ,H-NMR(CDC13): δ 8.61 (2Η, s); 2.25 (1H, m); 1.13 (4H, m)。 APCI-MS m/z: 199/201 1:1 [MH+]。 b)(5S)-5-{[(4-乙炔基_3,6_二氫比啶_1(2丑)_基）磺醯基】甲 基卜5-曱基咪唑啶-2,4-二酮 將””^-甲基^-^^-“三甲基矽烷基^乙炔基卜允…二氫 0比咬·1(2//)-基]績醯基}甲基）咪唑啶_2,4二酮（227 g， 6·0 mmol)和氟化鉀（ι·〇7 g，18.4 mmol)於曱醇（50 mL)中攪 拌過仪。將浴劑遽除’將殘餘物溶於Et〇Ac中，以水洗再 以鹽水洗之，脫水（硫酸鈉）並加以蒸發。使用管柱層析法 I02523.doc (§) -26- 1353985 以異己烧/EtO Ac 1:1溶離以純化該殘餘物一固態產物（丨8 j g)。 *H NMR (CDC13) δ 1.66 (3Η, s), 2.37 (2Η, dt), 2.95 (1H, s), 3.24 - 3.50 (4H, m), 3.89 (2H, t), 6.11 (ih, s), 6.68 (1H, s), 8.75 (1H，s)。 APCI-MS m/z: 298 [MH+] 〇 (〇(5Λ>5-甲基-5-({[4-[(三甲基矽烷基）乙炔基j_3,6·二氫0比 啶-1(2丑)-基]磺醯基}甲基）咪唑啶·2,4-二酮 將4_[(三甲基石夕烧基）乙炔基]-1，2,3,6-四氫》比啶鹽酸（3.43 g， 15.9 mmol)與[(45)-4-甲基-2,5-二氧咪唑啶-4-基]甲烷磺醯 基氣（3.39 g，15 mmol)於THF(100 mL)中攪拌並於冰鹽浴 (溫度約-10 °C )中冷卻。於2小時期間内逐滴加入溶於 THF(100 mL)之 ΑΓ-乙基二異丙胺（5.13 mL，30 mmol)並將該 混合物再攪拌2小時。以水洗滌反應混合物，將水層萃取 至Et〇Ac(x2)中，將有機層合併，以2 M HCl(x2)、飽和重 碳酸鹽溶液（x2)，再以鹽水洗滌，脫水（硫酸鈉）並蒸發以 得粗產物（5 .06 g)。將其不經純化直接使用。 'H NMR (DUSO-d6) δ 10.74 (1Η, s), 8.01 (1H, s), 6.13 (iH quintet), 3.75 (2H, d), 3.44 (2H, dd), 3.23 (2H, t)s 2.18 -2.28 (2H，m)，1.32 (3H, s), 1.32 (9H, s)。 APCI-MS m/z： 370 [MH+] 0 d)4_丨（三甲基矽烷基）乙炔基]-1，2,3,6-四氫吡啶鹽酸 將4-[(三曱基矽烷基）乙炔基]3,6_二氫吡啶羧酸第 三丁醋（2.75 g，9.8 mmol)於曱醇（1〇 mL)中攪拌並逐滴加入 102523.doc 1353985 乙醯氯（2.1 mL，29.2 mmol)。添加期間，溫度由18它上升 至3(TC，並將該混合物之溫度維持於4〇t直至以τιχ檢測 並無任何起始物質為止。將該混合物冷卻至室溫，加入 EtOAc(15 mL)並將固體濾除以得一灰白色固體（1.6 。 Ή NMR (DMSO-J6) δ 9.46 (2Η, s)5 6.09 (1H, quintet), 3.60 (2H，dd)，3.13 (2H，t)，2.35 (2H，td)，〇.17 (8H，s：)。 APCI-MS m/z: 180 [MH+]。 e) 4-[(三甲基梦炫基）乙快基】-3,6-二氫。比咬叛酸第 三丁酯 如WO 96/05200中之說明自A^-Boc-o辰咬_4_酮製備。 'H NMR(CDC13)6 6.05(1H, s), 3.94(2H, dd), 3.47(2H, t), 2·23(2Η，dq)，1.45(10H，s)，0.15(8H，s)。 GCMS-MS m/z: 223 [M-55]。 f) [(4S)-4-甲基-2,5-二氧咪唑啶-4-基]曱烷磺醯氣 根據說明於下列論文之方法加以製備：Mosher，J.，·/. Org. Chem. 1958. 23, 1257; Griffith, O., J. Biol. Chem. 1983. （3)，1591 ;和 WO 02/074767。 實例2 (5S)-5-曱基-5-({【4-{[2-(甲基硫）嘧啶-5-基]乙炔基}-3,6-二 氫吡啶-1(2H)-基】續醯基}甲基）咪唑啶-2,4-二酮 以 Nishihara等人，/· C/zew·，2000，<55，1780-1787之通 用方法製備標題化合物。於2-(甲基硫）-5-[(三甲基矽烷基） 乙快基]°密。定（0.55 g，2.47 mmol)和 1-{[(4-甲基-2,5-二氧0米 唑啶-4-基）甲基μ黃醯基}-1，2,3,6-四氫吡啶-4-基三氟曱烷 •28· 102523.doc ⑧ 磺酸酯（0.94 g, 2.22 mmol)溶於DMF(5 mL)之溶液中加入 Cul(10 mol%)及 PdCl2(PPh3)2(5 mol%)並將該混合物於 85°C 下加熱6小時。 將該混合物於EtOAc(20 mL)和水（10 mL)中進行分配，並 以EtOAc萃取水層三次。將合併之有機層以鹽水、水加以 洗滌並濃縮成棕色油（1.6 g)。以製備性HPLC(使用又16〇^-Prep-MS-C 18(5 0x1 9)管柱以溶於水之5-35%乙腈與0.06% NH3之1 2分鐘梯度）純化之後得到呈固態之標題化合物（1 〇 mg)。 】H-NMR (DMSO-A): δ 10.75 (1H，s); 8.73 (2H，s); 8.02 (1Η, s); 6.29 (1H, m); 3.84 (2H, m); 3.48 (2H, q)； 3.30 (2H, m); 2.53 (3H，s); 2.38 (2H，m); 1.33 (3H, s)。 APCI-MS m/z: 422 [MH+]。 a)5-溴-2-(甲基硫）嘧啶 根本 Takahashi等人，C/zew. Bm".，1958，（ί, 334-337 之方法製備次標題化合物。在室溫下，於溶於EtOH之5-溴-2-氣嘧啶（1.0 g，5.2 mmol)之溶液中加入甲烷硫醇納 (0.36 g，5.2 mmol)並將該反應混合物授拌過夜。使該混合 物於EtOAc(15 mL)和水（10 mL)中授拌過夜。使該混合物 於EtOAc(15 mL)和水（10 mL)之間進行分配。以EtOAc萃取 水層兩次並以鹽水洗滌。將合併之有機層脫水並浪縮以得 呈白色固體之次標題化合物（1.1 g)。 i-NMR^CDsOD): δ 8.66 (2H，s); 2.54 (3H，s)。 APCI-MS m/z: 204/206 1:1 [ΜΗ+]。 102523.doc ·29· 1353985 b) 2-(甲基硫）-5-[(三甲基矽烷基）乙炔基]嘧啶 .根據丫311131131«；3等人，51少《//1.0〇;«;«抓.，1983，312-314之方 .法製備次標題化合物。於溶於Et3N(3 mL)之5-溴-2-(曱基 硫）嘴咬（0.60 g，2·9 mmol)中加入 DMF(0.5 mL)、Cul(5 mol%)和PdCl2(PPh3)2(3 mol%)。將該混合物於95°C下加熱 12小時並再於Et2〇(30 mL)和水（10 mL)之間進行分配。以

EhO萃取水層兩次並以水洗滌合併之有機層，加以脫水並 濃縮以得呈褐色油之粗產物。以快速層析法，使用1〇 6〇% • EtOAc溶於庚烷之梯度純化該化合物以得呈無色油之次標 題化合物（0.55 g)。 H-NMR (CDC13)： δ 8.56 (2Η, s); 2.58 (3H, s); 0.27 (9¾ s) 。 APCI-MS m/z: 223 [MH+]。 c) 1-({【d4_甲基·2’5_二氧味嗤咬_4基]甲基K醯基）· 1,2,3,6四氫"比啶_4·基三氟甲燒項酸醋 以與實例1c相同之方法使三氟甲基)續醢基]氧} 響以，3,6-四氫°比啶氣與[(4Μ-甲基_2,5_二氧味唑啶_4

甲烷磺醯氣（實例If)反應。 A

iHNMR(DMSCW6)5l0.77(1H，s)，8〇4(iH，d)，6i〇(iH t) , 3.88 (2H, q), 3.36 - 3.58 (4H, m), 2.50 - 2.56 (2¾ 1.32 (3H，s)。 ’叫， APCI-MS m/z: 422 [MH+] 〇 d) 4-m三氟甲基）磺醯基]氧卜四氫吡啶氯 將4-{[(三氟甲基）續醯基]氧}_3,6_二氯吼。定_1(2別__第 102523.doc •30- 二丁醋（3.77g，11.4 mmol)與 THF(15 mL)和濃鹽酸（15 mL) 混合。經1小時之後，將該混合物蒸發並與甲苯和甲醇共 沸蒸發來加以脫水以得米色固體（88%)，其可不經進一步 純化直接使用。 ]Η NMR (CDC13)5 9.72 (2H, s), 6.22 (1H, s), 3.75 (2H, q), 3.30 (2H, t), 2.65 (2H, td) 〇 APCI-MS m/z: 232 [MH+]。 e)4_{[(三氟甲基）確醯基]氧}-3,6-二氫e比啶_i(2u)·羧酸第三 丁酯 於大約30分鐘期間’於iv-boc-哌啶-4-酮（10.14 g, 50 mmol) 溶於THF(80 mL)之溶液中加入經冷卻之2 μ LDA溶於 THF(30 mL，60 mmol，1.2 eq.)溶液。再攪拌10分鐘之後， 加入溶於™F(80 mL)之1，1，1_三氟苯基_#七三氟曱基） 磺醯基]甲烷磺醯胺（20 g，56 mmol，1.1 eq.)並使該混合物 回至室溫。以水洗滌該溶液，以Et〇Ac(x2)洗滌水層，將 有機層合併並以飽和氣化胺溶液、鹽水加以洗滌，脫水 (硫酸鈉）並蒸發。以正庚烷再以正庚烷/Et〇Ac 9:1為溶離 液使殘餘物濾經中性氧化鋁。蒸發之後，ih_NMR顯示一 些雜試劑仍存在’但該粗產物係不經進一步純化而直接使 用。產率（13.17 g，79.5¾)。（Wustrow, D. J” 1991， 993-995) 〇 ]U NMR (CDC13)6 5.77 (1H, s), 4.05 (2H, q), 3.64 (2H, t), 2.45 (2H, quintet)，1.48 (9H，s)。 GCMS-MS m/z: 274 [M-57]。 102523.doc -31 · 1353985 實例3 (55)-5-甲基-5-({[4-{[2-(三氟甲基）嘧啶-5-基]乙炔基}-3,6-二氫"比咬-1(2丑)-基]確酿基}甲基）妹唾唆-2,4-二明 以如實例2所說明之相同方法自2-(三氟曱基）·5·[(三甲基石夕 烷基）乙炔基]嘧啶製備標題化合物，其產率為48%。自 95% EtOH析出白色固體，分解溫度：240-245。(：。 丨H NMR (DMSO-c?6)J 10.8 (1H，br s)，9.16 (2H，s)，8.05 (1H, s), 6.42 (1H, m), 3.88 (2H, m), 3.56 (1H, d), 3.42 (1H, d)，3.32 (2H，m)，2.41 (2H，m)和 1·33 (3H，s). APCI-MS m/z: 444 [MH+]。 a)2-(三氟甲基）-5-【（三甲基矽烷基）乙炔基]嘧啶 將2-(三氟曱基）鳴咬-5 -基三氟甲烧續酸醋（0.45 g，1.5 mmol)和無水三乙胺（1 .〇 mL)混合於螺蓋小瓶中。於該溶 液通入無水氬氣10分鐘。加入三甲基石夕燒基乙快（043 mL， 3.0 mmol)、磨細之 Cul(0.010 g，〇·〇5 mmolw〇 pdCl2 (PPh3)2(0.020 g，0.030 mmol)。將該小航封 口並於 8〇。匚下 於一鋁塊中加熱。授拌5小時之後，揮發物於室溫之下蒸 發（該產物於35-40°C /10毫巴之下昇華）。將黑色殘餘物溶 於EtOAc(20 mL)中並以二氧化矽（約5至1〇 g)濃縮至乾。於 石夕膠上以EtO Ac/庚烧（1:30)進行層析可得呈白色固體之2 (二氟甲基）-5-[(三甲基石夕院基）乙快基]。密咬（0.35 g，95%)， 熔點：75.5-76.0eC。 ’H NMR(CDC13) (5 8.90 (2H，s)和 0.30 (9H，s)。 APCI-MS m/z: 245 [MH+] » •32- 102523.doc (§) 1353985 b)2-(三氟甲基）嘧啶-5-基三氟甲烷磺酸酯 於冰浴溫度之下，將三氟甲磺酸酐（1.01 mL，6.0 mmol)逐 滴加至一被攪拌之2-(三氟甲基）嘧啶-5-醇（根據美國專利第 4,558,039 號而製備）(0.82 g，5.0 mmol)、甲苯（1〇 mL)和填 酸三鉀水溶液（30%重量比，1〇 mL)之混合物中（Frantz等 人，Ogawzc 2002，4(26)，4717-4718)。該添加完 成之後，將冰浴移開並將該溶液於室溫之下攪拌30分鐘。 分離透明相並以水，再以鹽水洗滌有機層。將有機相經無 水硫酸鈉乾燥’過濾並以旋轉蒸發氣於室溫下進行濃縮以 得成無色油之2-(三氟曱基）-嘧啶-5-基三氟曱烷磺酸酯 (1.3 8吕，93%)。沸點：75-77。(：（10毫巴）。 NMR(CDC13) 3 8.90 (2H，s)。 實例4 (5S)-5-甲基·5-({[4-[(2-甲基嘧啶-5-基）乙炔基】-3,6-二氫《比 咬-1(2Η)-基]績醯基}曱基）咪唑咬·2,4-二酮 以溶於EtOH之TFA處理4-[(2-甲基嘧啶-5-基）乙炔基]_3,6_ 二氫。比啶-1 (2//)-羧酸第三丁酯並於反應完全之後將溶劑蒸 發並將該混合物冷凍乾燥。以DMF(1.5 mL)溶解該殘餘物 並將該昆合物冷卻至4°C。加入乙基二異丙胺（2.2 eq.)並 攪拌20分鐘，再加入溶於DMF(1 mL)之[(4S)4·甲基_25· 二氧咪唑啶-4·基]曱烷磺醯氯（實例if)(1丨eq.)。將該混合 物於4°C下攪拌10分鐘並再於室溫下攪拌2小時，之後將溶 劑蒸發。以製備性HPLC將該產物純化以得標題化合物 (0.022 g, 30%) 〇 102523.doc •33 · NMR (DMSO-A); 10.75 (1H，s); 8.80 (2H，s); 8.02 (1H， s); 7.80 (1H, m); 7.32 (1H, d, J = 8.1 Hz); 6.24 (1H, s); 3.81 (2H, d, J = 3.2 Hz); 3.34 - 3.21 (2H, m); 3.30 (3H, s); 2.75 (2H, q, J = 20.8 Hz); 2.34 (2H, m); 1.29 (3H, s); 1.19 (3H, t, = 7_6 Hz)。 APCI-MS m/z: 390 [MH+】。 a) 2-甲基-5-[(三甲基矽烷基）乙炔基】嘧啶 將溶於Et3N(2 mL)和THF(2 mL)之5-溴-2-甲基-嘧啶（根據 英國專利申請案GB 2 157 288加以製備K〇_2 g，1.16 mmol)、（三曱基石夕烧基）乙快（164 μί，1.3 mmol)、 Cul(0.022 g，0.116 mmol)和 PdCl2(PPh3)2(〇.082 g，0.116 mmol)於80°C下攪拌4小時。冷卻之後，於真空下將溶劑去 除並將殘餘物加以層析以得次標題化合物（0.1 6 g，50%)。 APCI-MS m/z: 191 [MH+] ° b) 4_[(2-甲基嘧啶-5-基）乙炔基】-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸 第三丁酯 在室溫之下，於CuCl(l mg，0.01 mmol)和 PdCl2(PPh3)2 (0.003 g，0.004 mmol)溶於 DMF(2 mL)之溶液中加入 2-曱 基-5-[(三曱基矽烷基）乙炔基]嘧啶（〇·〇88 g，0.462 mmol)和 4_{[(三氟甲基）磺醯基]氧}-3,6·二氫。比啶-1(2//)-羧酸第三 丁酯（實例2e)(0.183 g，0.555 mmol)。將該反應混合物於8〇 °C下攪拌8小時。冷卻之後’以1 N HC1中止反應並以乙醚 加以萃取（3x)將合併之有機層以飽和之NaHC03水溶液、 鹽水洗滌並加以脫水》過濾並蒸發以得一褐色油，將之經 I02523.doc •34_ 1353985 HPLC純化以得次標題化合物（0.062 g, 45%)。 APCI-MS m/z: 300 [MH+]。 .實例5 (5S)-5-({[4-[(2-乙基嘧啶_5•基）乙炔基】·36_二氫吼啶_ 1(2Η)-基]確醮基}甲基）_5_甲基咪唑啶_2,4_二酮三氟醋酸酯 以相同於實例4中所說明之方法製備標題化合物。使用Gb 2 157 288之方法學製備5_漠·2·乙基咬起始原料。 *H NMR (DMS〇-J6)； 10.75 (1H, s); 8.82 (2H, s); 8.05 (1H, ® s); 6.24 (1H，s); 3.81 (2H，d，= 3.2 Hz); 3.34 · 3.21 (2H, m); 3.30 (3H, s); 2.92 (2H, q, / = 17.8 Hz); 2.75 (2H, q, J = 20.8 Hz); 2.34 (2H, m); 1.26 (3H, t, 7 = 12.8 Hz); 1.19 (1H, s) ° APCI-MS m/z: 404 [MH+] 〇 實例6 (5S)-5-({[4_[(2甲氧嘧啶_5_基）乙炔基卜3,6二氫吡啶_ 1(211)-基]確酿基}曱基）_5-甲基味吐咬_2,4-二酮 ® 以相同於實例1中所說明之方法自5-溴-2甲氧嘧啶和（55)-5-{[(4-乙炔基-3,6-二氫吼啶_1(2丑)_基）磺醯基]曱基卜5_甲基 咪唑啶-2,4-二酮製備標題化合物。 ]H NMR (DMSO-^6)： § 10.75 (1Η, s); 8.73 (2H, s); 8.04 (1H, s); 6.26 (1H, s); 3.95 (3H, s); 3.81 (2H, d, y = 3.2 Hz); 3.34 - 3.21 (2H, m); 3.30 (3H, s); 2.75 (2H, q, J ~ 2〇.8 Hz); 2.34 (2H，m); 1.19 (3H，t，《/= 7.6 Hz)。 APCI-MS m/z: 406 [MH+] » 102523.doc ⑧ •35- 1353985 藥理性實例 經分離之酵素之分析 MMP12 重組人類MMP12催化功能區可如Parkar Α_Α·等人（2〇〇〇)， Protein Expression and Purification，20，152之說明般加以 表現及純化《經純化之酵素可如下述用以監測活性之抑制 劑.經MMP12(終濃度50 ng/ml)於室溫下與溶於有（1〇濃 度）或無抑制劑之分析緩衝液（〇」M "Tris-HCl"(商標）緩衝

液 ’ pH 7.3 ’ 含 0.1M NaCl、20 mM CaCl2、0.020 mM

ZnCl和0.05%(w/v)"Brij 35"(商標）清潔劑）中之合成基質

Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(10 μΜ)共置 60 分 鐘。藉由測定kex 32〇 nm和Xem 4〇5 nm處之螢光度來測得 活性。如下計算抑制百分比：％抑制等於[螢光度㈣螢 光度"]除以[螢光度❹登光度 MMP8 經純化之前-MMP8係購自Calbiochem。於35°C下以1 mM 對fe基-笨基醋酸采將該酵素（1〇 活化2 5小時。經活

化之酵素可用以如下述般監測活性之抑制劑：將MMP8(終 濃度200 ng/mi)於35它（8〇% Η")下與溶於有（5濃度）或無 抑制劑之分析緩衝液（〇.丨M "Tris-HCl"(商標）緩衝液，pH 7-5 ’ 含 0.1 M NaCl、30 mM CaCl2、0.040 mM ZnCl 和 0.050/〇(w/v)"Brij 35"(商標）清潔劑）中之合成基質Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(12.5 μΜ)共置 30分鐘。藉 由測疋λεχ 320 nm和λέπι 405 nm處之螢光度來測得活性。 I02523.doc (ί -36· 1353985 如下計算抑制百分比：％抑制等於[螢光度*螢光度牙*] 除以[螢光度心螢光度μ]。 ΜΜΡ9 重組人類ΜΜΡ9催化功能區可加以表現，之後以Ζη鉗合 物管柱層析及後續氧肟酸鹽親和性管柱層析純化。經純化 之酵素可如下述用以監測活性之抑制劑：經ΜΜΡ9(終濃度 5 ng/ml)於室溫下與溶於有（5濃度）或無抑制劑之分析緩衝 液（0.1 M "Tris-HCl"(商標）緩衝液，pH 7.3，含 0.1 Μ NaCl、20 mM CaCl2、0.020 mM ZnCl和 0.050/〇(w/v)"Brij 35"(商標）清潔劑）中之合成基質Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-DPa-NH2(5 μΜ)共置 30分鐘。藉由測定λβχ 320

Xem 405 nm處之螢光度來測得活性。如下計算抑制百分 比：％抑制等於[螢光度-螢光度η]除以[螢光度*w 螢光度"]。 MMP14 重組人類MMP14催化功能區可如Parkaj· α.Α·等人（2000)， Protein Expression and Purification，20，152之說明般加以 表現及純化。經純化之酵素可如下述用以監測活性之抑制 劑：經MMP14(終濃度1〇 ng/ml)於室溫下與溶於有（5濃度） 或無抑制劑之分析緩衝液（0.1 M "Tris-HCl"(商標）緩衝

液，pH 7.5 ’ 含 0.1 M Naa、20 mM CaCl2、0.020 mM

ZnCl和0.05%(w/v)"Brij 3 5"(商標）清潔劑）中之合成基質

Mca-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala-Dpa-NH2(10 μΜ)共置 60 分 鐘。藉由測定lex 320 nm和Xem 4〇5 nm處之螢光度來測得 102523.doc -37· 1353985 活性。如下計算抑制百分比：％抑制等於[螢光度★…營 , 光度##]除以[螢光度麻-蝥光度。 、、· 用以測試對於其他基質金屬蛋白酶，包括：MMP9之使 : 用經表現和經純化之前MMP之程序係說明於例如：c

Graham Knight等人，（1992)FEBS Lett” 296(3)，263_266。 MMP19 重組人類MMP19催化功能區可如Parkar A a等人（2〇〇〇)， Protein Expressi〇n and Purificati〇n，2〇:152之說明般加以 φ 表現及純化。經純化之酵素可如下述用以監測活性之抑制 劑：經ΜΜΡ19(終濃度40 ng/ml)於35t下與溶於有（5濃度） 或無抑制劑之分析緩衝液（〇」M "Tris—HCi"(商標）緩衝 液 ’ PH 7.3 ’ 含（Μ μ Naa、2〇 mM CaCl2、〇 〇2〇 祕

ZnCl和0.05% (w/v)”Brij 35”（商標）清潔劑）中之合成基質 MCa-Pr〇-Leu-Ala-NVa-DPa-Ala-Arg-NH2(5 μΜ)共置 120 分 在里。藉由/則疋Xex 32〇 nm和Xem 4〇5 nm處之螢光度來測得 活性。如下計算抑制百分比：％抑制等於[螢光度*〜w螢 癱光度"]除以[螢光度4Ή/Λ/-螢光度η]。 蛋白質結合 血榮蛋白質結合係利用超過滤法於一自動96孔排列分析 加以測定。於各個試驗時點均同時監測參照化合物（布地 奈德（budesonide))之jk漿蛋白質結合。 將試驗化合物（10 mM溶於DMS0)加至血漿中，使其最終 濃度為10 μΜ並於室溫之下平衡10分鐘。將35〇吣之血漿 轉移至超過濾盤Microcon-96(10kDa截切，Millipore)中。使 I02523.doc -38- 該超過濾盤在室溫之下以3000G下離心70分鐘。離心之 後，以LC-MS/MS，利用3點校正曲線測定所得之血漿水 (未結合部份）中該化合物之濃度，並與原始添加之血漿内 之濃度相比較。 該分析係使用梯度層析系統以醋酸/乙腈作為移動相來進 行。使用Applied Bio systems之三層四極質譜儀API3 000或 API4000，以電喷霧介面進行偵測。 溶解度之測定方法 如下述測定試驗化合物於pH 7.4之0.1 Μ磷酸緩衝液中溶 解度： 將試驗化合物（1 mg)科入2 mL之具旋蓋玻璃瓶中並加 入。再將該樣品瓶超音波振盪10分鐘並再置於20°C之振盪 板上過夜。再使樣品瓶中之内容物濾經一 Millipore Millex-LH 0.45 μηι濾器至一新的2 mL玻璃瓶中以得澄清溶 液。將該澄清溶液（40 μΙ〇轉移至一新的2 mL玻璃瓶中並 以pH 7.4之0.1 Μ磷酸緩衝液（960 μΙ〇加以稀釋。 使用已知濃度之溶液建立各個特定試驗化合物之標準校 正曲線。此等已知濃度之溶液所選用之正常濃度為〜1 〇 pg/mL至〜5 0 pg/mL。其製備係藉由將已知重量之化合物溶 於99.5 %乙醇（500 μ!〇中並視需要以超音波振盪1分鐘。倘 若該化合物仍未完全溶解，則加入DMSO(500 μΙ〇並將該 混合物再超音波振盪1分鐘。再將所得之溶液以乙腈/1 〇〇 mM醋酸銨pH 5.5 20-50/80-50之混合物稀釋至適當之體 積。視需要藉由稀釋法製備經進一步再稀釋之標準溶液。 102523.doc -39- 1353985 再以下列參數使用HPLC以UV-偵測法分析試驗化合物溶 液和標準溶液，並藉此測定試驗化合物於〇. 1 Μ磷酸緩衝 液中之溶解度： HPLC-設備： ΗΡ1100/ΗΡ1050 管柱： 管柱溫度： 流速： 移動相： 等位比： UV偵測器： 注射體積：

HyPURITY Advanced, 5 μηι, 125><3 mm 室溫 1 mL/min A=乙猜 B = 100 mM 醋酸銨 pH 5.5 A/B 20-50/80-50 254 nm(220-280 nm) 20 μί 層析數據處理系統：ATLAS/Xchrome Log D之測定方法 使用搖瓶法測定pH 7.4下之Log 0值。於室溫之下，將適 當之小量受測化合物置於一 2 mL之有旋蓋玻璃瓶中並加入 600 μι之1-八碳醇（經pH 7.4之10 mM磷酸緩衝液飽和）。再 將該瓶進行超音波振盪1分鐘以使該化合物完全溶解。再 加入600 pL之pH 7.4之10 mM磷酸緩衝液（經1-八碳醇飽和） 並將該瓶搖動4分鐘，使兩相混合。再將此樣品於室溫之 下以1000 g離心10分鐘以分離兩相。最後，使用HPLC以下 列條件將分開之水相和有機相進行二重覆分析。 注射器： Spark Holland, Endurance 幫浦： HP1050 102523.doc • 40- 偵測器： Kratos, Spectroflow 783 管柱： YMC Pro C18, 5 μπι, 5〇x4mm, Part no AS12S050504QT 管柱溫度： 室溫 流速： 1 mL/min 移動相： A=乙腈 B=25 mM甲酸 C = 100 mM 醋酸銨 pH 5.5 D=0.05 %醋酸銨 梯度： 0.00 分鐘 A/B 或 A/C 或 A/D 5/95 5.00 分鐘 A/B 或 A/C 或 A/D 100/0 7.00 分鐘 A/B 或 A/C 或 A/D 100/0 7.02 分鐘 A/B 或 A/C 或 A/D 5/95 UV偵測器： 254 nm 注射體積： 50 pL之未經稀釋水相及5 pL之經10次稀釋 (以甲醇）之有機相 注射循環時間 :11分鐘 離心： Hettich, Universal 30RF 振盪： Scientific Industries, Vortex-2 genie 1353985 層析數據處理系統： ATLAS/Xchrome log D pH 7.4值係於手動輸入ATLAS層析數據處理系統回 報之化合物波夺面積反應之後藉由Excel表格自動計算而 得（參見下列公式）。log DpH 7.4之計算公式如下： 102523.doc -41 - 1353985 " Log D = r [Analyte]org = log 面積orgx稀釋因子org *- *. TAnalytelaq Vinj(〇rg) 面積a(jx稀釋因子aax ·: V J Vjnj (aq) 下表顯示本發明之化合物之代表性選項及自wo 02/074767選出之化合物之數據。 表

化合物 hMMP12 ICso(nM) hMMP9 ICso(nM) hMMP8 ICso(nM) hMMP14 ICso^nM) hMMP19 Ι〇50(ΠΜ) 溶解度 pH 7.4 (UM) 蛋白質 結合 (%游離） 實例5 9 9 1,140 >10,000 >10,000 91 47 實例3 6 5 547 >10,000 7,900 118 33 實例1 6 5 2,530 >10,000 >10,000 396 18 WO 02/074767, 第120頁 (55)-5-({[4-[(4-氣 苯基）乙炔基]-3,6-二氳吡啶-](2功-基]磺醯基}-曱 基)-5-曱基-咪唑 啶-2,4-二酮 2 9 180 4,300 3,980 49 1.75 WO 02/074767, 第120頁 (55>5·甲基-5-({[4-[(4-甲基苯 基）乙块基]-3,6-二 氫咕啶-1(2片)·基] 磺醯基}-曱基)咪 。坐。定-2,4-二明 3 34 384 4,430 1,970 72 2.25 102523.doc -42- ⑧

Claims (1)

1. 135398% 094121763號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(100年6月)A 十、申請專利範圍： 1. 一種式（I)之化合物或其醫藥上可接受之鹽

   其中 R代表C1至2院基、環丙基、〇CH3、SCH3或〇CF);該 烷基或％丙基基團係視情況進一步經一或多個氟原子取 代；且 - · R2代表C1至3烷基。 2.如吻求項！之化合物，其中Rl代表匚丨至2烷基或環丙基； 5玄烷基或環丙基基團係視情況進一步經一或多個氟原子 取代。 3.如吻求項2之化合物，其中Rl代表ο至2烷基，其視情況 進一步經一或多個氟原子取代。 4·如請求項3之化合物，其中Rl代表CF3。 5. 如請求項2之化合物，其中Rl代表環丙基。 6. 如。月求項之任_項之化合物，纟中^代表甲基 基。 一

   8. 如請求項6之化合物，其中R2代表甲基。 如哨求項1之化合物，其係選自由下列所組成之群： ⑽1({[4_[(2_環丙基嘧。定_5基）乙炔基]-认二氫吡咬 102523-1000613.doc 1353985 1 (2//)-基]石黃酿基}甲基）-5 -甲基咪唾咬_2,4-二酮； (5<S)-5-甲基-5-({[4-{[2-(甲基硫）嘧啶·5·基]乙炔基卜3 6_ 二氫D比咬-1(2/〇-基]項酿基}曱基）味。坐咬_2,4-二酿J ; " ψ (51^)-5-甲基-5-({[4-{[2-(三氟曱基）嘧啶_5_基]乙炔基卜 ， 3,6-二虱。比咬-1(2//)-基]石黃酿基}曱基）0米。坐咬_2,4-二_ ; (5S)-5-甲基-5-({[4-[(2-甲基嘧啶_5-基）乙炔基]_3,6_二氫 0比咬-1(2H)-基]續酿基}甲基）〇米0坐咬_2,4_二鋼； (55>5-({[4-[(2-乙基嘧啶_5_基）乙炔基]_3 6_二氫吡啶· 1 (2//)-基]石買3¾基}甲基）_5·曱基味嗤咬_2,4-二酮； | (5*S)-5-({[4-[(2曱氧嘧啶_5_基）乙炔基]_3,6_二氫吡啶_ 1 (2//)-基]績醢基}甲基）_5_甲基0米。坐咬_2,4_二_ ; 及其醫藥上可接受鹽類。 9. 如請求項1之化合物，其係（55>5-({[4-[(2-環丙基嘧啶-5-基）乙炔基]-3,6-二氫吡啶_1(2//)_基]磺醯基}曱基）5_甲基 咪唑啶-2,4-二酮或其醫藥上可接受鹽類。 10. —種用以製備如請求項！定義之式⑴之化合物或其醫藥 上可接受之鹽之方法，其包括： · a)使式（II)之化合物 102523-1000613.doc

   其中R2係如式⑴中之定義且L1代表—脫離基 (III)之化合物（或其鹽）反應 與一式 -2 - 1353985

   其中R1係如式（I)申之定義；或 b)使式（X)之化合物

   其中R2係如式（I)中之定義，R3係為Η或一保護基團且 X係為鹵化物或三氟化物；與一式（IX)之乙炔化合物 反應

   其中R1係如式（I)中之定義；或 c)使（XI)之化合物

   R (XI) 102523-1000613.doc 1353985 其中R代表Η或三甲基矽烷基’ R2係如式（j)中之定義且 R3代表Η或一保護基團；與一式（VI)之芳基鹵化物或三 氟化物反應

   其中R1係如式（I)中之定義且x代表鹵化物或三氟化 物； 11. 12. 13. 14. 15. 並視情況於其後形成一其醫藥上可接受鹽。 一種醫藥組合物，其包含如請求項丨至9中任一項之式（工） 之化合物或其醫藥上可接受鹽併同一醫藥上可接受之佐 劑、稀釋劑或載劑》 一種用以製備如請求項11之醫藥組合物之方法，其包括 將如請求項1至9中任一項所定義之式⑴之化合物或其醫 藥上可接X鹽與一醫藥上可接受之佐劑、稀釋劑或載劑 混合。 種如凊求項1至9中任一項之式⑴之化合物或其醫藥上 · 可接又U^於用以治療阻塞性氣道疾病之藥物製造中之用 途。 如。月求項13之用途，其中該阻塞性氣道疾病係為氣喘或 慢性阻塞性肺病。 。種如喷求項！至9中任一項之式⑴之化合物或其醫藥上 可接文鹽於用以治療由ΜΜΡ12及/或ΜΜΡ9所調節之疾病 或狀況之藥物製造上之用途。 102523-1000613.doc