TWI331032B

TWI331032B -

Info

Publication number: TWI331032B
Application number: TW091109304A
Authority: TW
Inventors: Shimpei Ushio; Masashi Kurimoto
Original assignee: Hayashibara Biochem Lab
Priority date: 2002-05-01
Filing date: 2002-05-02
Publication date: 2010-10-01
Also published as: WO2003092666A1; US20090075908A1; EP1514540A1; KR20040101576A; EP1514540A4; US20050215493A1; KR100946822B1; US8778882B2; EP1514540B1

Description

1331032 A7 _____B7_ 五、發明説明（1 ) 本發明係有關骨質或牙齒組織等含鈣組織中可增加鈣量所使用之增強含鈣組織用劑及其用途者◊ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 先行技術中，通常伴隨年齡增長、骨質、牙齒等含鈣組織引起脆化。骨質組織中，不斷的骨形成與骨吸收被生成之，通常年輕時，可平衡骨形成與骨吸收者》惟，過於絕食，伴隨加齡導致荷爾蒙失衡等各種因素使得骨形成與骨吸收失調，傾向骨吸收。此時，長期持續後，由骨質、牙齒等含鈣組織減少重要組成成份之鈣，易產生骨質疏鬆、骨折、腰痛等骨疾病、或蛀牙、牙周病等牙齒疾病。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製生體內的鈣係於含鈣組織中以羥基磷灰石等磷酸鈣鹽之形態做成固體狀態存在後，形成骨質及牙齒，不僅擔任增強其組織之要角，亦做爲身體必要鈣離子之供給源。本國有鈣攝取量不足之虞、市販上有各種增強鈣質之各種健康食品販售之。惟，僅攝取鈣質，並未出現理想吸收效率者’且’攝取過量時將陷入局耗血绩之危險域中，因此，鈣之攝取方法非慎重不可。骨質、牙齒等含鈣組織中，使鈣沈著，以適當鈣做爲營養素攝取後，爲更加吸數，代謝而攝取鎂等其他鑛物質者被推崇者。惟，其效果並不明顯。又，除該鐮物質之外，亦進行投用維他命D、降鈣素製劑 '雌激素製劑、蛋白質同化激素製劑，雙磷酸鹽等油性維他命、激劑者。此方法比僅攝取鑛物質之效果較爲理想，惟，使用油溶性維他命劑、激劑時，其投用程序較爲煩雜，過剩投用後恐產生副作用，並未能完全令人滿意。本發明以提供一種無毒、安全，且作用效果高之增強本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 - 1331032 A7 ________B7___ 五、發明説明（2 ) 含耗組織用劑及摻合此所製成之飲食品 '化粧品、及醫藥品等用途爲課題者。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 〔發明開示〕本發明者針對植物成份，進行精密硏討後，意外發現 ’後述具有一般式1至5任一所示基本結構之物質或其前驅物（以下，亦記成本明細書中一般式1至5之物質）使動物鈣代謝往鈣沈著方向誘導後，於含鈣組織增強使鈣沈著之組織後，其結果增加骨重量者。更使異黃酮類與一般式1至5之物質共同使用後，則使動物之鈣代謝往鈣沈著方向進行誘導，含鈣組織中增強鈣沈著組織，其結果增加骨重量，進而完成本發明。亦即，本發明係提供一種含一般式1至5之物質，如 :含有1種或2種以上之黃酮類、黃酮醇類、黃烷酮類、二氫黃酮醇類、花色素類、黃烷醇類、芳基丙烯醯芳烴類 ’或噢嗫類、或其前驅物之增強含鈣組織用劑做爲有效成份者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明更提供一種該物質同時含有異黃酮類之增強含鈣組織用劑者。本發明又提供一種摻合該增強含鈣組織用劑所成之飮食品' 化粧品、醫藥品等用途者。〔圖面之簡單說明〕圖1係代表鹼磷酸酶活性增強作用中山萘黃素、桔皮本紙張尺度適用中.国國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -5- 1331032 A7 B7 五、發明説明（3 ) 素或ipriflavone各濃度之經日變化圖。 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖2係代表鈣沈著增強作用中山萘黃素、ipriflavone各濃度之經日變化圖。圖3係代表鈣沈著增強作用中山萘黃素與ipriflavone 各濃度之倂用效果圖者。圖4係代表鈣沈著增強作用中桂皮素與ipriflavone各濃度之倂用效果圖。〔發明實施之最佳形態〕經濟部智慧財產局員工消費合作社印製針對此發明之實施形態進行說明後，本發明所使用之一般式1至5物質係屬原本做爲植物成份廣範分布之類黃酮所屬物質者。具有一般式1之基本結構物質稱爲黃酮類、黃酮醇類、黃烷酮類、二氫黃酮醇類者，如：R i爲氫原子者，且，X爲雙鍵爲其特徵之黃酮類，Ri爲羥基（或藉由某糖類被配糖化者），且，X爲雙鍵者爲特徵之黃酮醇類，尺：爲氫原子’ X爲單鍵者爲其特徵之黃烷酮類，Rl 爲羥基（或藉由某糖類被配糖化者），且，X爲單鍵者爲其特徵之二氫黃酮醇類者。本發明中，可使用做爲具有一般式1之基本結構物質之表1所示物質者。又，表1中， Η代表氫原子，0H代表羥基、〇 CH3代表甲氧基、〇G 1 u爲被配糖化之葡萄糖、〇Rh a爲被配糖化之鼠李糖'ORut爲被配糖化之芸香糖。 < —般式1 : 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） -6- 1331032

A7 B7 五、發明説明（4 ) R6 R7 式中，X代表單鍵或雙鍵，只1至111〇代表任意取代基者。） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1331032 A7 B7 五、發明説明（5 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 X 驟盤 ttwl 1 m 盤加11 驟缴 t*w1 1 m |*W11 m 盤 <*w，l 職驟驄 »*·»" m 癱加1 1 m t*w1l 職懲 »*w1 1 m 驄盤 ι*τ«，Ι m 態 »*»t1 1 m <*w1l m 鳙 «♦mi m 鳙 IK IK SK ti 飘 m a SK a 默 m SK SK Sfflf Λ 酹 Dml nfflf 酹酹酙酹 Λ 輒〇 Ρί X X X X re X X X X X X X X X X X X X X pci X X X X X X X! 'X 〇 X X, X X 〇 X X X X X X X X X Pi X K OH OH OCHb 0CH3 K OH X 〇 OH i OH_I PC：〇 1 OH_I 1 OH__I OH 1 OHI OH ί X X 〇〇 OCH3 X 〇 \ OH 1 OH OCH3 〇 DC 〇 ¢5 s rr：〇 X X K OH OH Ί OH 「och3] X 1 OH | OH 1 OH X X αΰ X 〇 OH OH X 〇 o Ό X tc 丈 X X X X X 〇 X X X X： X X X X X X： X ού X X X X X 工: X tc X X K 工 x XI 工： P：： P：：：c Ρύ κ Pi 〇 OH X 〇〇 ORut 〇〇 OH OH o 1 _ OH_! 1 OH_I OH 1 OH_I K 〇 X X o OCH3 OH X 〇 | OCH3 1 ORha ORut OH OH 0^ X tr： Dd X K X X X OH 'X X X X X x: X X OH OH 〇 sc ο OH X X 〇 | OH X 〇 1 OH 1 o 1 OH I o 1 OH 1 〇 1 〇 HJ Π：〇工: ο OH OH | OGlu 1 OH X 〇 X 〇 οά X DC PC X X 〇 ο X 〇 OH rr：〇 1 OH I 丨OH—_—」 I OGlu 丨 ORha | ORut ! ORha :c χ: o 〇 m m m 枨 m m 赋 m 氍账瓶诽 IK 賦 m m 9n m m 昏 m 窓 m m m Μ m 涅匾 m w 遒 m 蜘辑 ss tin 掛 m 货扭 it 展 mil ΙΠη m a 蜜戗摊輒蜜 m M 塾剮 m s m (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -8- 1331032 A7 ___B7_ 五、發明説明（6 ) 具有一般式2之基本結構物質稱爲花色素物質者，本發明中，如表2所示化合物被使用之。又，表2中，Η代表氫原子、ΟΗ代表羥基' 〇ch3代表甲氧基、〇G 1 u 爲被配糖化之葡萄糖者。一般式2 : ----------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

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7 7 A B 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（7 ) 工工 I 工工工工 CO CO ΓΟ 工工〇〇〇〇〇〇〇 Μ PC 工工工 X X X 〇〇〇〇〇〇 τ 工工 JO CO 〇工〇〇〇〇〇工工工工工 X 工工工工 X 工工工工工工工〇〇〇〇〇〇工工工工工工工工工 X I X 〇〇〇〇〇〇工工工工 X 7n 〇〇〇〇〇〇绅I m CO 账驸駙滌账撕酿 Φ & 去1 11 1 1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -10- 1331032 A7 B7 五、發明説明（8 ) 具有一般式3基本結構之物質稱黃酮醇類之物質者，本發明中如表3所示之化合物被使用之。又，表3中，Η 代表氫原子、Ο Η代表羥基。一般式3 :

Re R7

R2 (式中，尺：至只！。代表任意取代基者。） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -11 - 1331032 A7 B7 五、發明説明（9 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〇 oi 工工 X 工 Ο 工工〇 I X 工〇〇〇工工〇工〇工工工 X 工工工工工〇〇〇工工工工工工〇〇〇工工工〇〇〇掩氍塑 m 撇 ---------衣—^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) IP-· 本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（2!OX：297公釐） -12- 1331032 A7 B7 五、發明説明（10 ) 具有一般式4基本結構之物質被稱爲芳基丙烯醯芳烴類物質者，本發明中如：表4所示化合物被使用之。又，表4中，Η代表氫原子、〇Η代表羥基。一般式4 :

(式中，Ri至Rii代表任意取代基。） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -13- 1331032 A7 B7 五、發明説明（11 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 X 工〇〇工工工工工工〇工工 X 工工工工 I 〇工工 X I 〇 X 工名稱芳基丙烯醯芳烴根皮素 I--------衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -14- 1331032 A7 B7 五、發明説明（12 ) 具有一般式5基本結構之物質被稱爲噢嗦類之物質者，本發明中，如：表5所示化合物被使用之。又，表5中者基氧甲表代 3 Η C ο 、基羥表代 Η ο 子原氫表代 Η 式般

8 R 者基代取意任表代 ο IX R 至 2 R 中式 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -15- 1331032 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（13 ) 〇 οά X X 工工 ce 工工〇〇工工〇〇工工 η 工〇〇工工〇〇工工工 X 睬 {Η m m m 粜 ---------11^衣— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）

*1T 1331032 A7

五、發明説明（14 ) (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明所使用之一般式1至5物質，亦即，黃酮類' 黃酮醇類、黃烷酮類、二氫黃酮醇類、花色素類、黃院醇類' 芳基丙烯醯芳烴類及噢嘮類，或其前驅物通常使用之配基、或配糖體形態者。又，存在於其聚合物等天然之衍生物’或不具一般式1至5之基本結構 '攝取後，藉由體內代謝後，結構變化後，於具有一般式1至5所示基本結構之物質上進行變化之物質，所有衍生物均可增強含鈣組織之鈣者即可。此者有花色素類之一種花青素前驅物之原花色素 '原花色素聚合物之原花色素聚合物（柿子單寧）等者。一般式1至5之物質或其衍生物不管其來源、純度、必要時，以適當溶媒萃取含較多量之植物材料後，直接利用取得之萃取液，更可精製後，提高純度使用之。另外 ’亦可使用人工合成取得者，或市販品均可適用之。又，必要時，藉由適當化學性，或生化學之方法使甲基化、乙基化、甲氧基化 '乙氧基化、硫酸化、配糖化等衍生物化 '聚乙二醇等水溶性高分子進行結合之，做爲提昇水溶性及/或安定性之衍生物之利用亦有利其進行者。做爲此例者如：α -糖基芸香苷（商品名PaG芸香苷P』股份公司林原商事販賣）、〇: -糖基桔皮苷（商品名『aG桔皮苷』股份公司林原商事販賣）、甲基化桔皮苷（AIPS藥品工業販賣）、α-糖基槲皮黃素、α -糖基柚苷等。使用不易溶於水中之物質時，在不損及本發明效果範圍下，必要時可藉由二甲亞硕、乙醇等溶媒進行溶解之，或利用海藻糖等糖質溶解，或以懸浮狀態亦可有利進行之。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -17- 1331032 A7 _____B7________ 五、發明説明（15 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製又，本發明所使用一般式1至5之物質倂用公知之骨質疏鬆治療或預防作用之異黃酮類時，具有明顯相乘增強強化含鈣組織之作用特徵者。異黃酮類係具有一般式6所示結構物質之總稱者，做爲本發明增強含鈣組織用劑所摻合之物質者可使用該配基以及/或該配糖體者。如··本發明中表6所示物質例者，適於摻合於本發明增強含鈣組織用劑。異黃酮類只要可對於發揮本發明所使用之一般式1 至5物質之含鈣組織的鈣沈著作用可更爲增強者即可，不管其來源，純度，必要時以適當溶媒萃取含較多量植物材料後，直接使用該取得萃取液，更可進行精製後，提高純度後使用之。做爲此例者有大豆異黃酮者。又，亦可適當使用人工合成者，或市販品均可，使用不易溶於水之物質時’在不損及本發明效果範圍下，必要時亦可使用二甲亞硕、乙醇等之溶媒、溶解後利用之。與α，α—海藻糖等糖質用時溶解，或，於懸浮狀態下亦可有利進行之。另外 ’必要時’更藉由適當化學’或生化學方法進行修飾後，進行甲基化、乙基化、甲氧基化、乙氧基化、硫酸化、配糖化等之處理，做成提昇水溶性及/或安定性之衍生物使用後亦有利於實施者。做爲比例者如：Ω Μ宜坦基麵去 —般式6 : 本纸張又度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -18- 1331032 A7 B7 五、發明説明（16

8 R 者基代取意任表代 ο 1R 至R 中式 ---------衣— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

,1T f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（21〇Χ：297公釐） -19- 1331032 7 Β 五、發明説明（17 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

〇 I 工 I 工工工工工 X 工工工 I 工工〇〇〇〇 I X 工工 X X 工工工工 X 工工工工卜 ¢0 工 a 工 1 1 1 < Ο 〇〇〇〇〇〇〇 ¢5 X 工 X 工工工工〇工工〇工工 X I 工工 <〇 c 〇 FTn7 > cd W 长长 • V-4 $ W 〇, 赋涨 U (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣

、1T 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -20- 1331032 Α7 Β7 五、發明説明（18 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之含鈣組織係指如：羥基磷灰石等之磷酸鈣鹽較多量存在之組織者，此組織例如：骨組織，特別是硬骨組織，及牙齒組織之例，此組織中具有發揮本發明增強含鈣組織用劑之效果者。本發明增強含鈣組織用劑除有效成份之一般式1至5 物質，或一般式1或5物質及異黃酮類之外，必要時可含有如：無水矽酸，合成矽酸鋁、乳糖、α，α -海藻糖、 α，々-海藻糖、阿拉伯膠、玉米澱粉、結晶纖維素等賦形劑、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等結合劑、硬脂酸鎂、滑石等潤滑劑、澱粉、羧甲基纖維素鈣等崩散劑、水、乙醇等溶媒等者。又，藉由此等可做成粉末、顆粒、錠劑、液狀、糊狀、懸浮狀等適當形態者。特別針對αα —海藻糖被揭示於特開2 0 0 0_3 8 3 4 3號公報及特開2000—198736號公報爲具有利於骨質疏鬆症之預防，治療之用者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製做爲本發明增強含鈣組織用劑之有效成份含一般式1 至5物質，或一般式1至5物質及異黃酮類可做爲有效成份之摻合’或有效成份與製劑上可容許載體或稀釋劑相互混合物任意製劑使用之。製劑中有效成份量以無水物換算下以0 · 000 1重量％以上者宜，較佳者爲〇 . 〇〇1 重量％以上者。本發明增強含鈣組織用劑可以口服、非經口投用任意投用法。本發明增強含鈣組織用劑之投用量依其投用形態、投服對象不同，投與足夠量可發揮本發明效果，因此，無限制投用量之必要，惟，一般如表記爲準，本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -21 - 1331032 A7 _____B7_ 五、發明説明（19 ) (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 以人體爲對象時，一般分一次或數次投用後，1日有效成份量爲0·1〜500mg/kg體重，較佳者爲0.5 〜200mg/kg體重者。做爲本發明增強含鈣組織用劑之有效成份所使用之一般式1至5物質，或一般式1至5物質及異黃酮做爲食品添加物、化粧品原料、醫藥品原料等被確定多半具安全性者’做爲增強含鈣組織用劑者更摻合此所成之飲食品、化粧品、或醫藥品亦極具安全性，可進行投用、攝取或使用之。做爲本發明增強含鈣組織用劑之適用對象者以具有以固體狀鈣做爲主成份之骨組織、齒組織之動物，亦即，人或人以外之哺乳類所含有之脊椎動物總體爲可適用對象者 c 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明增強含鈣組織用劑係可有效發揮伴隨骨質疏鬆症、骨折等骨相關疾病、蛀牙及牙周病之齒槽骨的化等牙齒相關疾病之治療、促進恢復、或其預防者。更可用於其他疾病之治療等所投用之激素、細胞分裂劑等藥劑之副作用之骨吸收，脫灰之骨量降低之防止，天然骨或人工骨利植時定著促進之使用。另外，可用於防止正常人各種骨量下降，如使閉經後或產前產後女性激素分泌異常造成骨量下降，過度絕食，營養失調所造成激素分泌異常後骨量之下降，高齡者長期臥床、上下肢麻痺、長期入院等長期臥床後，運動不足造成骨量下降、宇宙、水中生活之無重力或低重力造成骨量下降，過度運動訓練等造成骨量降低之本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX297公釐） -22- 1331032 A7 B7 五、發明説明（20) (請先閲讀背面之注_項再填寫本頁) 恢復，發揮預防骨量下降之效果。另外亦可有效促進幼兒成長時骨形成，維持高齡者之骨量。更使血漿中之鈣沈著於含鈣組織中，因此，依其使用方法後，亦可期待有效改善高鈣血漿者。以上效果，不限於人類，亦有利適用於犬、貓、牛、豬、馬、鹿'犀牛、象、山藉等脊椎動物者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製摻合醫藥品之本發明增強含鈣組織用劑必要時與本發明增強含鈣組織用劑之有效量同時倂用先行公知之骨質疏鬆治療藥後可期待更高度之效果。做爲骨質疏鬆治療劑者如：降鈣素製劑、雌激素製劑、雙磷酸鹽製劑、維他命D 製劑、維他命K製劑等例。又，一般其他常用藥品如：麻醉劑、催眠鎭痛劑、抗不安劑、抗癲癎劑、解熱鎭痛消炎劑，興奮劑、覺醒劑、抗帕金森氏劑、精神神經用藥、中樞神經劑、骨格肌弛緩劑 '自律神經用劑、鎭痙劑、眼科用藥、耳鼻科用藥 '鎭暈劑、強心劑、不整脈用藥、利尿劑、降血壓劑、血管收縮劑、冠狀血管抗張劑、末梢血管擴張劑 '高脂血症劑、呼吸促進劑 '鎭咳袪痰劑 '支氣管擴張劑 '過敏症用劑、止瀉劑、整腸劑、消化性潰瘍治療劑 '健胃消化劑、制酸劑、利膽劑、腦下垂體激素劑、唾液腺激素劑、甲狀腺激素劑、抗甲狀腺激素劑、蛋白同化類固醇劑、副腎皮質激素劑、男性激素劑、卵胞激素劑、黃體激素劑、混合激素劑、泌尿生殖器劑、肛門劑、外科用殺菌消毒劑·、創傷保護劑、化膿性疾病用外用劑、鎭痛劑、止癢劑、收歛劑、消炎劑、寄生蟲皮膚疾病外用劑、皮膚軟化劑、腐蝕刻、齒科、口腔用劑、維他命劑、無機本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -23- 1331032 A7 _____B7___ 五、發明説明（21 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 質製劑、補液劑、止血劑、血液凝固阻止劑、肝臟疾病用劑' 解毒劑、習慣性中毒用劑、痛風治療劑、酵素製劑、糖尿病用劑、抗惡性腫瘤劑、抗組織胺劑、刺激療法劑、抗生物質、化學療法劑 '生物學製劑、驅蟲劑、抗原蟲劑 '調製用劑、X線造影劑及診斷用藥等藥劑，更易於取得本發明增強含鈣組織用劑者，如：可適當摻合1種或複數之補助劑、增量劑、稀釋劑、賦形劑、安定劑、防腐劑、著色劑、著香劑等，依其使用形態可調製如：萃提劑、酏劑、膠囊劑、顆粒劑、九劑、眼軟膏劑、懸浮劑、乳劑、硬膏劑、栓劑、散劑、酒精劑、錠劑、糖漿劑、浸劑、煎劑、注射劑、酊劑 '點眼劑、含錠劑、軟膏劑、糊劑、芳香水劑、塗抹劑、檸檬水劑、流萃提劑、水劑、飮料劑、更於必要時，可調製成點鼻劑、噴鼻劑、下呼吸道用吸入劑、眼科用緩釋劑、口腔粘膜貼附劑、灌腸劑等。本發明增強含鈣組織用劑完成該調製步驟中只要藉由混合、捏混、溶解、浸漬、散佈、塗佈、噴霧、注入等方法後含所定量之有效成份者即可》經濟部智慧財產局員工消費合作社印" 又，本發明所使用一般式1至5之物質及異黃酮爲充份發揮其作用效果’亦即於含鈣組織中使鈣沈著作用，最好攝取礦物質，特別是與鈣化合物相同者，含於本發明之增強含鈣組織用製者爲宜。又，摻合此增強含鈣組織用劑之飮食品、化粧品或醫藥品更摻合後可更有利進行之。做爲鈣化合物者如··氯化鈣、甘油磷酸耗、葡糖酸鈣、乳酸釣、碳酸銘、磷酸氫釣 '磷酸二氫耗、何泮酸錦、沉酸耗本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐）—"~ ---- -24- 1331032 A7 _______B7__ 五、發明説明（22) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、氟化鈣、硫代二醇酸鈣、硫酸鈣、矽酸鈣、醋酸鈣、L -天冬胺酸鈣、檸檬酸鈣、蘋果酸鈣、琥珀酸鈣等例，此等可以1種或組合2種以上使用之。更爲發揮本發明增強含鈣組織用劑之作用效果，與該鈣化合物之同時除鈣以外之礦物質，如：鉀、鈉、鎂、錳 '磷、鐵、鋅等均衡良好之摻合者宜。特別是鎂化合物可防止高鈣血漿等之外同時亦攝取鈣爲宜者，鎂化合物對於本發明增強含鈣組織用劑之摻合量爲鈣化合物之等莫耳以下者宜，較佳者當1莫耳鈣化合物時爲0 . 5莫耳至0.05 莫耳之範圍下被摻合之。做爲鎂化合物者如：氧化鎂、氯化鎂、碳酸鎂、硫酸鎂等例，此等可以1種或組合2種以上者使用之。經濟，部智慧財產局員工消費合作社印製另外，礦物質於腸內易呈不溶化，因此，吸收效率容易下降，因此將有利腸管吸數，具有對於生體之利用性提高之礦物質吸收促進作用之物質含於本發明增強含鈣組織用劑者亦可利於實施。例如：酪蛋白磷肽等蛋白質或低聚肽、異麥芽低聚糖、左旋糖低聚糖、木糖低聚糖、左旋蔗糖、大豆低聚糖、α，海藻糖、α，海藻糖、乳糖等低聚糖、乳糖、醋酸、檸檬酸、葡糖酸、琥珀酸等有機酸例，可有效利用之。又，爲更發揮本發明增強含鈣組織用劑之作用效果，使維他命類含於本發明增強含鈣組織用劑者爲佳。做爲維他命類之例者如：活性型維他命D、維他命Κ、L -抗壞血酸，或其衍生物等例者。本紙浪尺度適用中周國家標$ ( CNS ) Α4規格（2丨0X297公— -25 - 1331032 A7 __ _B7_____ 五、發明説明（23 ) 以下，藉由實驗進行本發明說明。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 〔實驗1〕以鹼磷酸酶活性做爲指標之各種有機化合物的檢索使具有鈣沈著作用之骨芽細胞數量增加後可增加骨量者爲其重點者，因此，使老鼠前骨芽細胞株MC 3 T 3 -E1細胞（RCB1126,理硏genbank)對骨芽細胞分化之物質針對做爲植物成份之公知有機化合物進行檢索。採用測定前骨芽細胞中活性低，前骨芽細胞所分化之骨芽細胞中活性高者爲公知之鹼磷酸酶活性後，做成其指標。〔老鼠前骨芽細胞之培養〕藉由示於表7中含1 0 mMHEPES、10 ( v / v ) %牛胎兒血淸（gibco BRL公司販賣）之組成冷一 MEM培養基 p Η 6 _ 8後，調製成細胞濃度5 X 1 0 4個/m 1之老鼠前骨芽細胞株河03丁3-£1後，2 4孔感光板（[&1让〇11 經濟，部智慧財產局員工消費合作社印製 becton dikinson公司販賣）中1孔播種1ml之5x 1 04 個細胞，使細胞附著於感光板底面爲止，於5 %碳酸氣體氣氛下進行培養之。去除培養基後，使溶於乙醇之有機化合物，亦即，消炎痛（funacoshi股份公司販賣）（陽性對照 )、山萘黃素（funacoshi股份公司販賣）' 沒食子酸（ nacalaitesk股份公司販賣）、咖啡酸（和光純藥工業股份公司販賣）、4 -甲基傘形酮（和光純藥公司販賣）、咖啡因（和光純藥工業股份公司販賣）、万一葉紅素（sigma公司販賣）本纸張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公楚j '-- -26- 1331032 A7 _ _B7__ 五、發明説明（24) 、甘草酸（片山化學工業股份公司販賣）、薄荷醇（和光純藥工業股份公司販賣）、茶鹼（和光純藥工業股份公司販賣）' 生育酚（sigma公司販賣）、香草醛（和光純藥工業股份公司販賣）各以lm 1添加分別含有2 〇#M濃度之 MEM培養基（含1 〇% (v/v)牛胎與血淸、1 〇 m Μ β -甘油磷酸醋）者。又，由於培養基中含有最終濃度0 . 2 % ( ν / ν )乙醇，因此’做爲陰性對照者’ 爲含有0 . 2% (ν/ν)乙醇之α — MEM培養基者。連續使放置3天含新鮮之各試料培養基’或未含其之培養基相互交替培養8天。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1331032 A7 B7 五、發明説明（25 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製表7 成分 mg/1 成分 mg/1 L-丙胺酸 25 L-抗壞血酸 50 L-精胺酸 105 生物素 0.1 L-天冬醯胺 25 膽驗 1 L-天冬胺酸 30 氰鈷胺素 1.36 L-半胱胺酸 100 葉酸 1 L-胱胺酸 24 肌醇 2 L-谷胺酸 75 煙醯胺 1 L -谷醯胺 292 汎酸 1 甘胺酸 50 吡哆醛 1 L-組胺酸 31 核黃素 0.1 L-異白胺酸 52 硫胺素 1 L-白胺酸 52 氯化鈣 200 L-賴胺酸 58 氯化鉀 400 L-蛋胺酸 15 氯化鎂 200 L-苯基丙胺酸 32 氯化鈉 6,800 L-脯胺酸 40 碳酸氫鈉 2,000 L-絲胺酸 25 磷酸二氫鈉 150 L-蘇胺酸 47.6 葡萄糖 1,000 L-色胺酸 10 硫辛酸 0.2 L-酪胺酸 36 酚磺酞 10 L-纈胺酸 46 丙酮酸鈉 110 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -28- 1331032 A7 B7 五、發明説明（26) 〔鹼磷酸酶活性之測定〕鹼磷酸酶活性之測定係利用鹼磷/3 - T e s t和光（和光，純藥工業股份公司販賣），依kasi等方法爲基準進行（

Archives of Oral Biology) ’ 第 44 卷、2 3 3 〜2 4 1 頁（1 9 9 9 ))。亦即，由上記老鼠前骨芽細胞去除培養基後，以lml之0 · 2 5M蔗糖溶液進行洗淨3次，依序添加0 . 4 5ml之含有ImM氯化鎂，含50mM 蔗糖之50mM碳酸鹽緩衝液pH9 . 8者，0 . 05 ml之3 . 4mM對-硝苯磷酸二鈉，於2 5°C下放置5 分鐘後，添加1 . 5ml之0 . 6N氫氧化鈉後使反應停止之。該反應液中藉由鹼磷酸酶作用所生成之對-硝基苯酚之量測其波長4 0 5 n m之吸光度後，以該値做爲鹼磷酸酶活性者。表8顯示各試料中添加含鹼磷酸酶活性與 0 . 2 % ( v / v )乙醇之培養基之陰性對照活性比的相對活性整理表。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -29- 1331032 A7 B7 五、發明説明（27 ) 有機化合物相對鹼磷酸酶活性（％). 0.2% (ν/ν)乙醇 100 消炎痛 142 山萘黃素 1 62 .... 沒食子酸 79 -.- 咖啡酸 97 4 一甲基傘形酮 96 ... 咖啡因 100 /3 —葉紅素 8 1 甘草酸 97 薄荷醇 95____ 茶鹼 92 生育酚 100 香草醛 89 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -準一 I 國國. 中用適度幻 I張纸 I本由表8結果證明山萘黃素比陽性對象之消炎痛其老鼠前骨芽細胞株（M C 3 T 3 - E 1 )之鹼磷酸酶活性較爲增加。此結果顯示山萘黃素使老鼠前骨芽細胞之鹼磷酸酶活性增強，因此，前骨芽細胞於骨芽細胞具有分化作用者〔實驗2〕以鈣沈著作用做爲指標之各種有機化合物的檢索 (CNS > A4^tM 210 X297公釐） -30 1331032 A7 B7 五、發明説明（28) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實驗1中進行檢測由含有各種有機化合物被驗試料所具前骨芽細胞對骨芽細胞之分化衍生促進作用。再進行檢測實際上所增強之鈣沈著作用。做爲有機化合物例者使用如：消炎痛（funacoshi股份公司販賣）（陽性對照），山萘黃素（funacoshi股份公司販賣），梧皮素（funacoshi股份公司販賣），没食子酸（nakalaitesk股份公司販賣），咖啡酸（和光純藥工業股份公司販賣）者。此等分別以2 0 V m濃度含有之α— MEM培養基（含1 〇% (v/v )牛胎兒血淸，lOmMyS -甘油磷酸酯）添加於每lml老鼠 MC3T3-E1細胞株中。又，培養基中含最終濃度〇 . 2 % ( v / v )乙醇，因此，做爲陰性對照者爲含有〇 . 2 % ( v/v)乙醇之MEM培養基。連續將放置3天之含有新鮮之各試料，或未含有之培養基相互交替進行培養8 天。此等依常法進行茜素紅- S染色法，測定鈣沈著量。亦即，由培養感光板去除培養基後，以1 m 1 之 Dulbecco -磷酸緩衝生理食鹽水進行洗淨2次，添加1 ml之5 0 (v/v) %乙醇水溶液後，於室溫下放置 1 0分鐘。去除所添加之5 0 (v/v) %乙醇水溶液後，添加1 m 1蒸餾水後，再於室溫下放置1 〇分鐘。去除所添加之蒸餾水後，添加1 m 1之1 % ( w / v )茜素紅 -S (和光純藥工業股份公司販賣）溶液後，放置1 〇分鐘之後’去除茜素紅- S溶液後’以1 m 1蒸簡水進行洗淨3 次。藉由上記處理後，沈著鈣於培養感光板底面被染成紅色，以肉眼判定鈣沈著量之紅色化程度。判定基準爲+ : 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -31 - 1331032 B7 五、發明説明（29 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 與陰性對照（含〇 · 2% (v/v)乙醇之培養基）同程度之染色，+ + + :與陽性對照（消炎痛）同程度之染色 ’++:陽光對照染色之5成左右之染色程度者。結果如表9所示。表9 有機化合物鈣沈著量 0 · 2% (v/v)乙醇 + (陰性對照）消炎痛 + + + 山萘黃素 + + + 桔皮素 + + + 没食子酸 + 咖啡酸 + 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製由表9之結果判定山萘黃素與桔皮素與做爲陽性對照所採用之消炎痛呈幾乎相同之鈣沈著量者。此結果證明山萘黃素與梧皮素具有增強前骨’芽細胞之錦沈著之作用。由實驗1及2之結果判定山萘黃素係使前骨芽細胞之鹼磷酸酶活性增加作用，亦即，具有使前骨芽細胞於骨芽細胞進行分化之作用’且，證明山萘黃素、桔皮素均具有增強鈣沈著之作用者。〔實驗3〕各種類黃酮下之比較本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -32- 1331032 A7 _B7__ 五、發明説明（30 ) 針對山萘黃素、桔皮素以外之類黃酮所屬化合物進行檢測是否亦具相同效果。以黃酮（關東化學股份公司販賣 )’序黃素（funacoshi股份公司販賣），黃酮類（東京化成工業股份公司販賣），槲皮黃素（關東化學股份公司販賣 )、山萘黃素（funacoshi股份公司販賣）、芸香苷（關東化學股份販賣）、黃烷酮（關東化學股份公司販賣）、柚符配基（Aldolichi販賣），梧皮素（funacoshi股份公司販賣），桔皮苷（關東化學股份公司販賣），芳基丙烯醯芳烴 (melk公司販賣），根皮素（sigma公司販賣），兒茶酸 (sigma公司販賣），ipriflavone ( dait股份公司販賣），黃杉素（f u n a c 〇 s h i股份公司販賣），硫擴菊素（ funacoshi股份公司販賣），花青素（funacoshi股份公司販賣 )，做爲被驗試料採用之。以實驗1之方法進行測定鹼磷酸酶活性。另外，鈣沈著量之測定係利用鈣C test和光（和光純藥公司製）依常法進行之。亦即，由培養細胞去除培養基後，以lml之Dulbecco—磷酸緩衝生理食鹽水進行洗淨 3次後，爲溶解沈著鈣而添加0.5ml之2N鹽酸。由此溶解液採取5/zl後，添加0 · 5ml之0 · 88M單乙醇胺緩衝液（ρ Η 1 1 ) ，0 .〇5 m 1含6 9 m Μ 8 -喹啉酚之0 . 6 3mM鄰甲酚酞配位劑（形成鈣離子與螯合複合物。）·混合之。將此測定5 7 0 n m之吸光度後，與同波長測定標準鈣溶液之値比較後，算出感光板 1孔之鈣量。評定方法針對各試料中鹼磷酸酶活性及鈣沈著量分別比較對於含0 . 2 % ( v / v )乙醇之培養基所本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX297公釐） -------?- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -33- 1331032

A B7 五、發明説明（31 ) 添加之陰性對照鹼磷酸酶活性及鹼沈著鈣量之相對活性及相對量下進行之。結果如表1 0所示。表1 0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製相對鹼磷酸酶活性（％) 相對鈣沈著量（％) 0.2%(v/v)乙醇 100 100 黃酮 103 158 芹黃素 128 247 黃酮類 139 295 槲皮黃素 120 118 山萘黃素 162 305 芸香苷 109 74 黃烷酮 109 3 11 柚苷配基 1 10 27 1 桔皮素 1 I 6 289 桔皮苷 107 118 芳基丙烯醯芳烴 105 104 根皮素 109 238 兒茶酸 118 247 iprifla vone 1 14 263 黃杉素 98 234 硫磺菊素 126 157 花青素 1 15 216 -------f 丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

，1T 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -34- 1331032 A7 _____B7 五、發明説明（32) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 由表1 0結果確定本發明有效成份之類黃酮出現增加鈣沈著量者。由此結果證明，黃酮類、黃酮醇類、黃烷酮類、二氫黃酮醇類、花色素類、黃烷醇類、芳基丙烯醯芳烴類或噢嗦類均共同具有使前骨芽細胞於骨芽細胞進行分化，增強鈣沈著之作用效果著。〔實驗4〕鹼磷酸酶活性增強中山萘黃素、桔皮素、或 ipriflavone之作用效果的比較

山萘黃素或桔皮素及已做爲骨質疏鬆治療藥之公知的 ipriflavone做爲被驗試料使用後，比較前骨芽細胞於骨芽細胞被分化誘導作用之強度。將含各被驗試料之培養基中培養曰數做成3天'6天及9天者，培養基中被驗試料濃度做成5、1 0、20//M以外，依實驗1之方法爲基準進行之。培養基之乙醇濃度其各被檢試料濃度爲5 ;zM時呈 0 . 0 5 % ( v / v ) ，10//M 時呈〇 . 1%(V/V 經濟·部智慧財產局員工消費合作社印製 )，20#M時呈〇 · 2% (v/v)。以未含與此等乙醇濃度相同培養基之被驗試料做爲對照，求取對於對照活性之相對活性。其結果如圖1所示。由圖1結果確定被驗試料爲山萘黃素時呈濃度2 0 // Μ下稍遲緩培養6天後明顯出現鹼磷酸酶活性之增強作用，又，被驗試料結皮素雖比i p r i f 1 a ν ο n e之活性稍差，惟，培養3天即明顯出現鹼磷酸酶活性之增強。由此結果證明山萘黃素與桔皮素之增強老鼠前骨芽細胞（MC 3 丁 3 - E 1 )之鹼磷酸酶活性之效果不輸給做爲骨質疏鬆劑之本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 -35- 1331032 A7 ________B7 五、發明説明（33 ) ipriflavone 效果著。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 〔實驗5〕增強鈣沈著中山萘黃素與ipriflavone作用效果之比較針對鈣沈著量增強作用進行山萘黃素與iPriflavone之比較。被驗試料及被驗試料之添加方法與實驗4同法進行。鈣沈著量之測定係利用鈣C Test和光（和光純藥公司販賣）依常法進行之。亦即，由培養細胞去除培養基，以1 m 1之Du lb ecco ~磷酸緩衝生理食鹽水進行洗淨3次後，爲溶解沈著鈣而進行添加〇 . 5 m 1之2 N鹽酸。由此溶解液採取5/z 1後，添加〇 _ 5ml之〇 . 88M單乙醇胺緩衝液（pHl 1) ，〇 . 〇5ml之含69mM 8 -喹啉醇之〇 . 6 3 m Μ鄰甲酚酞配位劑（形成鈣離子與螯合複合物）進行混合之。此測定波長5 7 0 n m之吸光度後’比較以同波長測定標準鈣溶液之値後，算出感光板1孔之妈K。圖2顯不山萘黃素與ipriflavone之比較。另外’圖中亦顯示以對照之乙醇進行處理者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製由圖2之結果顯示山萘黃素比ipi.ifiavone更具良好之鈣沈著增強作用。由實驗4及5顯示山萘黃素及桔皮素對於老鼠前骨芽細胞與做爲先行抗骨質疏鬆劑公知之ipriflavone相同具提昇鹼磷酸酶活性’及鈣沈著增強作用，具有增強含鈣組織之作用者。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨ΟΧΜ7公釐） -36 - 1331032 A7 B7 五、發明説明（34) 〔實驗6〕耗沈著增強中山萘黃素與iprjfiav〇ne或桔皮素與ipriflavone之倂用效果 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 利用山萘黃素或桔皮素後，與異黃酮類之ipriflav〇ne 倂用後’進行檢測其鈣沈著之增強作用。該試料之調製方法，細胞之培養方法除使含有各被驗試料之培養基培養日數爲5天之外，依實驗1爲基準，該鈣測定方法依實驗3 及實驗5爲基準進行之。又’含各被驗試料之培養基所含乙醇濃度做成相同者。做爲被驗試料者如圖3所示，山萘頁素 5 、1 〇 μΜ、2 0 βΜ 單獨，ipi-iflavone 5 #M、l〇#M、20#M單獨，或山萘黃素同時分別倂用 ipriflavone 5/zM、10//M、20//M 者，如圖 4 所示’桔皮素 5//M、1〇μΜ、20#M 單獨，ipriflavone 10/zM、20//M單獨，或桔皮素同時與 ipriflavone 分別倂用 5//M、10//M、20/zM 者。由圖3及圖4結果確定對於前骨芽細胞其山萘黃素及桔皮素比倂用ipriflavone與單獨時均明顯出現鈣沈著之增強’倂用後，更出現相乘之效果。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〔實驗7〕實驗鼠大腿骨及脛骨中鈣沈著增強效果以6隻3週齡雌性wister系實驗鼠做成1群使用之》各被驗試料，亦即，各1重量份之桔皮素（funac0Shi股份公司販賣），槲皮黃素（股份公司東京化成販賣）、α -糖基桔皮苷（商品名『a G桔皮苷Ρ』林原商事股份公司販賣）、α —糖基芸香苷（商品名『aG芸香苷Ρ』林原商本紙張尺度適用中.國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1331032 A7 B7 五、發明説明（35) 事股份公司販賣）、ipriflavone ( dait股份公司販寶）（陽性對照）摻合表1 1所示摻合比率之高蔗糖添加飼料（表1 1中各數値以重量％示之），此做爲餌給與實驗鼠。添加1重量份蔗糖之餌給與實驗鼠者取代被驗試料做爲對照。水自由攝取之。試驗開始8週後，屠殺實驗鼠，摘取大腿及脛骨。摘出之大腿骨及脛骨於1 〇〇 °C下進行乾燥約6小時後，以高精度分析用上皿電子天秤（商品名『 HA180M/12QM』，股份公司A&D販賣）進行測其乾燥重量。再將大腿骨及脛骨置入坩堝中，於灰化爐 ’ 9 5 0 °C下進行處理6小時後，充份灰化後，溶於鹽酸液後’此做成試料液後，以原子吸光光度計定量鈣量。鈣量係算出1根乾燥骨之鈣量後，與對照進行比較者。結果如表1 2所示。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -38- 1331032 A7 B7 五、發明説明（36 ) 表1 1 飼料成分 (重量％) 試驗群無 (對照群）桔皮素槲皮黃素 -糖基芸香苷 α -糖基洁皮普 iprif la vone 類黃酮類 (試料） 0.5 0.5 1.25 1.25 0.5 0 玉米澱粉 14.5 14.5 13.75 13.75 14.5 15 蔗糖 50 酪蛋白 20 纖維素粉末 5 玉米油 5 鑛物質類 3.5 維他命類 1.2 蛋胺酸 0.3 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ297公釐） -39- 1331032 Α7 Β7 五、發明説明（37 ) 表12 試料乾燥骨重量 (g ) 乾燥骨一根之鈣重量 (mg) 考備桔皮素大腿骨 0.463 125.1 本發明脛骨 0.357 109.0 槲皮黃素大腿骨 0.456 120.3 本發明脛骨 0.352 108.7 α -糖基芸大腿骨 0.439 119.9 本發明香甘脛骨 0.343 107.7 α -糖基桔大腿骨 0.454 126.9 本發明皮苷脛骨 0.349 109.5 ipriflavone 大腿骨 0.428 120.0 陽性對照脛骨 0.338 106.0 Μ J » 大腿骨 0.427 116.4 陰性對照脛骨 0.33 1 105.9 ih-----0ΐ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製由表1 2之結果顯示大腿骨及脛骨之鈣沈著量其任意各被驗試料比陰性對照均較增強，與陽性對照之ipriflavone 同等或同等以上者。另外，桔皮苷、α_糖基桔皮苷、及 α -糖基芸香苷之配糖體中亦出現鈣沈著量之增加。又，利用此等配糖體進行檢測體外之鹼磷酸酶活性及鈣沈著增強作用後，未出現有意義之增強作用。因此，發揮此效果其各類黃酮務必呈配基。之形態者、生體內投與時，藉由本紙張尺度適用中周國家標準（CNs ) a4規格（210 X 297公釐） -40- 1331032 A7 ____B7_ 五、發明説明（38 ) 腸管內或生體內之酵素後，其糖部份被分解，呈配基進行作用之。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 〔實驗8〕急性毒性試驗經濟部智慧財產局員工消費合作社印製使用1群5隻4週齡wist er系雌性實驗鼠。以實驗3 所使用之各有機化合物做爲被驗試料，亦即，將各1重量份之黃酮（關東化學股份公司販賣），芹黃素（funacoshi 股份公司販賣），黃酮醇（東京化成工業股份公司販賣），槲皮黃素（關東化學股份公司販賣）、山萘黃素（funacosh i股份公司販賣）、芸香苷（關東化學股份公司販賣）、黃烷酮（關東化學股份公司販賣）、柚苷配基（Aldolichi 販賣），桔皮素（funacoshi股份公司販賣），桔皮苷（關東化學股份公司販賣），芳基丙烯醯芳烴（melk公司販賣 )，根皮素（sigma公司販賣），兒茶酸（sigma公司販賣 )，ipriflavone ( dait 股份公司販賣），黃杉素（funacoshi 股份公司販賣），硫磺菊素（funacoshi股份公司販賣），或花青素（funacoshi股份公司販賣）於2 5重量份之5 ( w/ v ) %阿拉伯膠溶液中進行溶解或懸浮後，於絕食 1 8小時之實驗鼠中利用胃探針以1 〇 m 1 / k g實驗鼠體重之用量強制進行經口投服。之後，實驗鼠於恆溫恒濕之條件下進行飼養’任其自由攝取餌及水。以0日做爲投服日進行各個體之體重測定，同時進行1 4天一般症狀及存活情況。 2週飼養後’任意被驗試料中均無死亡例，且，體重本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -41 - 1331032 A7 _________B7_ 五、發明説明（39) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 亦未減輕，外觀呈良好者，亦未出現較明顯之一般症狀。因此’判定本發明增強含鈣組織用劑做爲有效成份使用之一般式1至5物質具有極高之安全性者。以下，說明本發明實施例。〔實施例1〕液劑將1重量份之α -糖基芸香素（商品名『ccG芸香素 P』股份公司林原商事販賣）及0 · 1重量份之槲皮黃素 (funacoshi股份公司販賣）溶於5 0重量份之乙醇後’更加入5，000重量份之水，50重量份之α，〇: -海藻糖 (商品名『treha』股份公司林原商事販賣），3重量份乳酸鈣，1 . 5重量份氯化鎂，及10重量份酪蛋白磷胜肽後，進行混合溶解之後，取得液狀之增強含鈣組織用劑。可方便服用，被摻合於具吸收效率良好之鈣的本品因可有效維持，增強含鈣組織，可有效利用於骨質疏鬆症，骨折等治療、預防或促進恢復等。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〔實施例2〕液劑將1重量份之α -糖基桔皮苷（商品名『a G桔皮苷 ΡΑ』股份公司林原商事販賣）及0 . 1重量份之桔皮素 (funacoshi股份公司販賣）溶於5 〇重量份乙醇後，更添加 5，000重量份之水，20重量份之αα —海藻糖（商品名『treha』股份公司林原商事販賣）、5重量份之氯化鈣、2 . 5重量份之氯化鎂、及1 〇重量份之乳蔗糖後 -42- 本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） 1331032 A7 B7 五、發明説明（40 ) ，進行混合溶解後，取得液狀之增強含鈣組織用劑。 <請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 可方便服用，摻合具良好吸收效率鈣之本品可有效維持，增強含鈣組織，因此，可有效利用於骨質疏鬆症、骨折等之治療，預防或促進恢復等者。〔實施例3〕液劑將6重量份之氯化鈉，0 · 3重量份之氯化鉀、 0 . 2重量份之氯化鈣，3 . 1重量份之乳酸鈉、45重量份之α，Θ -海藻糖，以及1重量份之特開平5 — 3 2 6 9 0公報實施例Α - 2方法所取得之粉末狀α -糖基槲皮黃素溶於1， 0 0 0重量份之水後，依常法，精製過濾後做成無熱原者，此溶液經滅菌後塡入2 5 m 1安瓶後取得注射用之增強含鈣組織用劑。本品做爲注射劑可有效維持，增強鈣組織之效果，因此可有效利用骨質疏鬆症、骨折等之治療、預防或恢復的促進等。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〔實施例4〕粉劑均勻混合1重量份之α -糖基芸香苷（商品名『aG 芸香苷Η』股份公司林原商事販賣），5重量份之大豆異黃酮（不二製油股份公司販賣）、1 〇〇〇重量份之〇：， α -海藻糖粉末（商品名『treha』股份公司林原商事販賣 )，1重量份之乳酸鈣，0 · 5重量份之硫酸鎂後，進行乾燥後，製造粉末狀之增強含鈣組織用劑。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -43 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1331032 A7 _______B7___ 五、發明説明（41 ) 安定之本品易溶於水，亦含有鈣及鎂，因此，具有良好強化含鈣組織之效果者，做爲骨質疏鬆症、骨折等之治療 '預防之增強含鈣組織用劑、或做爲健康補助食品，保健機能食品等之健康食品者爲極有用者。〔實施例5〕粉劑均勻混合1重量份之α -糖基桔皮苷（商品名.『a G 桔皮苷Η』股份公司林原商事販賣），1000重量份之 α，α —海藻糖粉末（商品名『treha』股份公司林原商事販賣）、1重量份之乳酸鈣，0 . 5重量份之硫酸鎂，3 重量份之L 一抗壞血酸一 2 -糖苷（商品名『AA2G』股份公司林原商事販賣）後，進行乾燥之後，製造粉末狀之增強含鈣組織用劑。安定之本品，易溶於水，亦含有鈣及鎂，因此，具有良好增強含鈣組織之效果。做爲骨質疏鬆症、骨折等治療，預防之增強含鈣組織用劑，或做爲健康補助食品，保健機能食品等健康食品爲有用者。〔實施例6〕含錠劑將1重量份之α -糖基桔皮苷（商品名『aG桔皮苷 PA』股份公司林原商事販賣）'及0.1重量份之桔皮素（funacoshi股份公司販賣）溶於1重量份之乙醇後，充份混合.2重量份之乳酸鈣，1 0重量份之阿拉伯膠，1 〇重量份之α，α —海藻糖粉末（商品名『treha』股份公司林本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） ~ -44 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1331032 A7 B7 五、發明説明（42) 原商事販賣），5重量份蔗糖（三榮源F · F · I股份公 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 司販賣）、3重量份之水後，依常法進行成型後，取得含錠劑。安定之本品可做爲維持，增強齒槽骨及齒鈣量之含錠劑爲有用者。〔實施例7〕含錠劑將1重量份之糖基芸香苷（商品名『ctG芸香苷 P』B份公司林原商事販賣）、及〇·1重量份之槲皮黃素（f u n a c 〇 s h i股份公司販賣）溶於1重量份之乙醇後，加入 2重量份之乳酸鈣，1〇重量份之阿拉伯膠，1〇重量份之α，α-海藻糖粉末（商品名『treha』股份公司林原商事販賣），2重量份之糖轉移stevia，3重量份之水充份混合後，依常法進行成型後，取得含錠劑。安定之本品可有效做爲維持，增強齒槽骨及齒鈣量之含錠劑之用者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〔實施例8〕健康補助食品將5 2重量份之α，α —海藻糖粉末（商品名『treha 』股份公司林原商事販賣）、4 0重量份之玉米澱粉、 0 · 5重量份之α -糖基芸香苷（商品名『aG芸香苷P 』股份公司林原商事販賣）、0 . 5重量份之α-糖基桔皮苷.（商品名『a G桔皮苷P A』股份公司林原商事販賣 )、0 · 1重量份之L —抗壞血酸—2 —糖苷（商品名『本&張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2丨0X297公釐） -45 - 1331032 五、發明説明（43 AA2 G』股份公司林原商事販賣）氯化鈣，以及2 . 5 重量份之結晶纖維素進行混合後，依常法進行噴霧滴入適量水之同時進行混煉後，流動層造粒之後，進行粉碎，整粒之後取得打錠用粉狀物。此加入做爲潤滑劑之2重量份蔴糖脂肪酸酯均勻混合之，藉由裝有直徑1 1mm杵之打旋機進行打錠後取得錠劑（約3 〇〇 m g /錠）。易於攝取，於消化管中具良好崩散性之本品可有效做爲維持，增強骨量之健康補助食品，保健機能食品等健康食品之用。〔實施例9〕飲料劑將1重量份之α -糖基芸香苷（商品名『aG芸香苷 P』股份公司林原商事販賣），1重量份載於特開平4_ 1 3 6 9 1號公報實施例a- 2之方法所製造之α —糖基柚普’ 2 0重量份葡萄柚果汁，2重量份之α，α -海藻糖粉末（商品名『treha』股份公司林原商事販賣），2重量份檸檬酸，1重量份L_抗壞血酸- 2 -糖苷（商品名股份公司林原商事販賣）、5重量份異構化糖’ 6重量份海水、2重量份氯化鈣、及1 6 0重量份之水進行混合後各塡入i 〇〇 m 1於玻璃瓶中，進行密栓後 ’取得飮料劑。本品，不但風味佳，更具增強含鈣組織之作用，因此 ’可有效做爲骨質疏鬆症、骨折等之治療、預防的飮料劑之用者。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X297公釐） -------f 丨 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 46- 1331032 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（44 ) 〔實施例1 0〕飮料劑混合1重量份之α -糖基梧皮苔（簡品名^ a G桔皮有: ΡΑ』股份公司林原商事販賣）、5 0重量份蘋果汁，5 重量份異構化糖，2重量份L 一抗壞血酸，3重量份a， α -海藻糖（商品名『treha』股份公司林原商事販賣）、 2重量份L —天冬胺酸鈉，3 5重量份之水後，分別以 1 0 0 m 1塡入玻璃瓶中，進行密栓後，取得飮料劑^ 本品具良好風味，且具增強含鈣組織之作用，因此，可有效做爲骨質疏鬆症、骨折等之治療，預防之飮料劑之用者。〔實施例1 1〕糊劑依常法於4 5重量份之磷酸氫鈣，3重量份之支鏈激粉，1 . 5重量份之月桂硫酸鈉，20重量份之甘油， 0 · 5重量份之聚環氧乙烷山梨糖醇酐月桂酸酯，1〇重量份之山梨糖醇，7重量份之多糖.醇，12重量份之精製水中摻合0 · 4重量份之α -糖基桔皮苷（商品名『α(3 桔皮苷PA』股份公司林原商事販賣），及含有〇 . 1重量份之桔皮素（funacoshi股份公司販賣）之1重量份乙醇溶液後，取得糊劑。安定之本品可有效做爲維持，增強齒槽骨及齒鈣量之牙膏之用。〔實施例1 2〕糊劑本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4㈣ ( 21GX 297公楚） ~ -47- --------f (請先閲讀背面之注意事項再填寫本1)

*1T 1331032 A7 B7 五、發明説明（45 ) 依常法於4 5重量份之磷酸氫鈣，3重量份之支鏈澱粉’ 1 · 5重量份之月桂硫酸鈉，2 0重量份之甘油， (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 〇 · 5重量份之聚環氧乙烯山梨糖醇酐月桂酸酯，10重量份之山梨糖醇，7重量份之多糖醇及1 2重量份之精製水中摻合0 · 4重量份α -糖基芸香苷（商品名『ctG芸香有：P』股份公司林原商事販賣），及含0 . 1重量份之槲皮黃素（funacoshi股份公司販賣）之1重量份乙醇溶液後取得牙膏。安定之本品可有效做爲維持，增強齒槽骨及齒鈣量之牙膏之用者。〔產業上可利用性〕經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 —般式1至5物質或含其前驅物之增強含鈣組織用劑於前骨芽細胞或骨芽細胞中顯示強力鈣沈著活性，更且，其作用藉由添加異黃酮類之後，明顯出現相乘增強效果，因此，具滑成長及骨形成促進效果及骨量增加之效果，不僅可攝取於含於健康補助食品，保健機能食品等之健康食品者，即使做爲日常飮食品.亦無不妥感可輕易攝取之。本發明增強含鈣組織用劑特別可防止高齡者之骨、齒弱化，同時亦可有效治療及預防骨質疏鬆症。更且，對低齡層因飮食失調產生骨成長。骨形成延緩之預防亦有極高效困者。本纸張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -48-

Claims

1331032 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍第9 1 1 09304號專利申請案 (Π卑《月〕1 中文申請專利範圍修正本民國99年6月7日修正 1 · 一種增強含鈣組織用劑，其特徵係含有1種或2種以上選自芹黃素、黃酮醇、山萘黃素、槲皮黃素、黃烷酮、柚苷配基、桔皮素、花青素、兒茶酸及硫磺菊素作爲有效成分者。 2 ·如申請專利範圍第1項之增強含鈣組織用劑，其更含有異黃酮類做爲有效成份者。 3 ·如申請專利範圍第2項之增強含鈣組織用劑，其中該異黃酮類爲異丙黃酮或大豆異黃酮者。 4 ·如申請專利範圍第2項或第3項之增強含鈣組織用劑’其中該異黃酮類爲配醣基，配糖體，聚合物及/或衍生物者。 5 .如申請專利範圍第1項或第2項之增強含鈣組織用劑’其中該劑更含有1種或2種以上選自礦物質、具有礦物質吸收促進作用之物質，低聚糖及維他命者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ~w # £ (請先閱脅背面之注意事項再填寫本頁) 6 .如申請專利範圍第5項之增強含鈣組織用劑，其中該礦物質爲鈣化合物及/或鎂化合物者。 7 .如申請專利範圍第5項之增強含鈣組織用劑，其中該具有礦物質吸收促進作用之物質爲酪蛋白磷胜肽及/或低聚糖者。 8 .如申請專利範圍第5項之增強含鈣組織用劑，其中該低聚糖爲左旋低聚糖、異麥芽低聚糖、木質低聚糖、乳本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1331032 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍2 蔗糖、大豆低聚糖、α，α-海藻糖及/或α ; /3·海藻糖者〇 9 .如申請專利範圍第5項之增強含鈣組織用劑，其中該維他命爲維他命D、維他命K、L-抗壞血酸及/或其衍生物者。 I 0 · —種飮食品，其特徵係摻合如申請專利範圍第1 項至第9項中任一項之增強含鈣組織用劑所成者。 II ·如申請專利範圍第1 〇項之飮食品，其中該飮食品爲健康食品。：----^-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -3 線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -2-