TWI328454B - - Google Patents
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- TWI328454B TWI328454B TW91138151A TW91138151A TWI328454B TW I328454 B TWI328454 B TW I328454B TW 91138151 A TW91138151 A TW 91138151A TW 91138151 A TW91138151 A TW 91138151A TW I328454 B TWI328454 B TW I328454B
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1328454 玖、發明說明 (發明說鴨翻.發明細之技麵域、觸_、随、實施域細綱單說明) 一、發明所屬之技術領域 本發明係關於一種抗過敏之中草藥組成物,尤指一 種適用於抑制免疫球蛋白IgE以及白三烯素LTs之抗過敏 中草藥組成物。 —、先前技術 近年來患有過敏性疾病患者顯著的增加,如花粉 症、過敏性鼻炎、蓴麻疹到難以治療的特異反應性皮膚 炎及氣喘等,過敏性疾病的種類、症狀、輕重程度其範 圍相當廣泛。以氣喘為例,目前全世界約有一億五千五 百萬的氣喘患者,因氣喘而死亡的人數每年約有2〇萬 人,而且全球的氣喘患者正以每十年2〇_5〇%的成長率增 加,這類慢性疾病所花費的醫療費用支出是相當龐大, 即每年美國花約60億美元的氣喘病醫療費,德國3〇億美 元,英國16億美元,其中每年氣喘醫藥品市場為乃億美 元。因此,氣喘對人類健康的危害遠大於愛滋病或癌症。 但是目前對於氣喘的治療藥物仍有很多副作用而且對氣 喘現象亦祇能暫時性的壓制症狀,往往用藥一段期間就 產生效用漸減的現象。因為氣喘為一種可逆性的呼吸道 阻塞病,若治療藥物無效時就變成一種可危及生命之急 病,所以在臨床上的發展也必需有不同治療機轉的藥物 存在。 抗體分為五種類型A、M、G、D、E,和過敏發生密 切關係的為E型抗體,醫學代號為IgE (immun〇gi〇buiin·
7 1328454 E)。當過敏原進入人體後,刺激人體產生大量的抗體, 此種抗體即為IgE。IgE結合在人體肥大細胞(mast cell)和 嗜鹼性粒白血球的表面。當過敏原再次進入人體後,就 會和IgE相結合,而這結合的結果就會發生過敏反應。IgE 在正常人的血液中含量極少,罹患過敏性疾病者,其IgE 的含量通常會明顯上升。
另外,氣喘反應的產生主要歸因於T-helper cell走向 type 2的形式,進而釋放細胞激素IL-4去刺激B cell產生 IgE,而產生的IgE則會與肥大細胞上的高親合性IgE受器 (IgE receptor)做專一性的結合,釋放出相關的媒介物 質,包括白三浠素(Leukotriene)、組織胺(Histamine)及細 胞激素等,在引發氣喘症狀上,白三烯素扮演著重要的 角色。白三稀素主要分為兩大類:leukotriene B4(LTB4) 及 cysteinyl leukotrienes(cLTs; LTC4, LTD4,LTE4),cLTs 會使支氣管平滑肌收縮並刺激支氣管分泌黏液,且增加 呼吸道血管的通透性;另一方面LTB4為一種化學趨化物 質,能吸引嗜中性球(neutrophils)及喷酸性球 (eosinophils),引發後期的氣喘反應。 因此找出抑制細胞生成IgE與LTs相關媒介物質之 抑制劑實為目前治療過敏性疾病反應的一個重要指標。 三、發明内容 本發明之主要目的係在提供一種含有紫蘇萃取物之 中草藥抗過敏組成物,俾能具備抑制IgE與LTs之功效, 進一步達成抗過敏之效果。 8 1328454 為達成上述目的,本發明提供一種可抑制免疫球蛋 白IgE抗過敏組成物,主要包括:一紫蘇萃取物;以及至 少-輔助萃取物其係萃取自—植物性藥物群組包括:麻 黃、杏仁、甘草、石膏、黃荅、桑白皮、生蔓、丁力子 或上述之組合;其中紫蘇萃取物與辅助萃取物係以特定 比例混合》 本發明乃發現紫蘇萃取物同時具抑制細胞 生成IgE與LTs的功效,以及利用薄膜分離與部份 純化技術提高抑制作用,同時也組合出無細胞毒 性之抗過敏組合物。細胞激素(Cyt〇kine)的抑制效應 是評估治療過敏性疾病反應的重要指標,臨床或中醫典 籍圮載用來治療相關疾病之中草藥與組合物尚未有以 IgE、LTs等抑制反應進行抗過敏評估。本提案中紫蘇與 其組合物獲得具抑制細胞生成IgE與LTs的功效之萃取 物,進一步與中醫藥臨床上常使用麻杏甘石湯比對,確 實能提供製備出具抗過敏的新穎組合物。 四、實施方式 本發明之實施例主要係利用紫蘇萃取物作 為一主要成分,而搭配其他習知之中草藥抗過敏 成分之萃取物作為辅助萃取物’例如包含麻黃 (Ephedra sinica ST APE)、杏仁(Prurus armeniaca LINN.) ' ^ % {Glycyrrhiza uralensis FISCH) ' ^ 鹽類礦物含水硫酸鈣(CaS〇4 . 2H20)之礦石)、黃芩 (Scuunaha baricalensis GEORGl)、桑白复(Morus alba 1328454 UNN.)、生薑σ仿ROSC.)、丁力子 z/«w WILL.)或上述之組合之群組;其中各 貫施例中之配方中每一組成分之比例並無限制,較佳為 如表1及表2中每一配方之重量比例;本發明中自各中草 藥之獲得萃取物之萃取方法並無限制,較佳為利用95〇/〇 濃度酒精萃取。 傳統上中草藥以水煎煮,紫蘇水萃取物以濃 度0.5mg/mL以酵素免疫分析法重復3次分析其生 成的IgE含量分別為67.5%,72.9%,73.7%,(平均 ’ 抑制率2 8 · 5 %)。同時進行薄膜分離處理,取該濃 度紫蘇水萃取物2mL經薄膜分離至半,取其過膜 部分與未過膜殘留部份,分別冷凍乾燥後,再以 同濃度0.5mg/mL進行IgE酵素免疫分析,發現過 膜部分IgE生成率由未薄膜分離處理前737%升 高為8 0.1 %,而殘留部份降至6 5.3 %,亦即未過膜 殘留部份對IgE抑制活性提高3 1.9%。 在探討萃取最適化條件中發現,改由9 5 %酒 籲 精進行萃取,獲得的酒精抽提物製配成濃度 〇.5mg/mL以酵素免疫分析法重復3次,分析其生 成的I g E含量分別為6 · 1 %,6.9 %,8.0 %,(平均抑 制率9 3.0 % ),顯著的提高I g E抑制活性。 為能讓貴審查委員能更瞭解本發明之技術内容,特 舉一萃取例以及十六較佳具體實施例說明如下。 萃取例一、紫蘇萃取物之萃取 10 1328454 紫蘇50g加入95%酒精500mL,加熱迴流2小 時進行萃取,萃取液經減壓濃縮除去酒精溶劑, 最後以冷凍乾燥得到萃取物1 .5 1 g。 實施例一、麻黃、杏仁、甘草、石膏之水萃取物 組成對於IgE之抑制效果測試
以細胞毒性測試(MTT方法)得到對TIB-196 (得自ATCC )細胞具有最少毒性的最大中草藥 濃度,然後以此濃度進行TIB-196細胞培養8天, 離心取其上清液,以酵素免疫分析法分析其生成 的IgE含量。
本實施例以麻黃、杏仁、甘草、石膏以水萃 取之萃取物以2 : 1 : 1 : 4之重量比例混合,以此混合 物濃度0.5 m g / m L進行其對I g E之抑制效果測試, 結果列如表1。 實施例二、麻黃、杏仁、甘草、石膏之酒精萃取 物組成對於IgE之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例以麻 黃、杏仁、甘草、石膏改以9 5 %酒精萃取之萃取 物以2 : 1 : 1 : 4之重量比例混合,以此混合物濃度 0.5mg/mL進行其對IgE之抑制效果測試,結果列 如表1。 11 1328454 實施例三、紫蘇、麻黃、杏仁、甘草、石膏之水 萃取物組成對於I g E之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例以紫 蘇、麻黃、杏仁、甘草、石膏以水萃取之萃取物 以1 : 2 : 1 : 1 : 4之重量比例混合,以此混合物濃度 0.5 m g / m L進行其對I g E之抑制效果測試,結果列 如表1。
實施例四、紫蘇、麻黃、杏仁、甘草、石膏之酒 精萃取物組成對於I g E之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例取紫 蘇、麻黃、杏仁、甘草、石膏改以9 5 %漢度酒精 萃取之萃取物以1 : 2 : 1 : 1 : 4之重量比例混合,以此 混合物濃度0.5mg/mL進行其對IgE之抑制效果測 試,結果列如表1。 實施例五、紫蘇、黃芩、杏仁、生薑之萃取物組 成對於IgE之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例取紫 蘇、黃芩、杏仁、生薑以9 5 %濃度酒精萃取之萃 取物以1 : 1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃度 0.5 m g / m L進行其對I g E之抑制效果測試,結果列 如表1。 12 1328454 實施例六、紫蘇、黃芩、桑白皮、生薑之萃取物 組成對於I g E之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例取紫 蘇、黃芩、桑白皮、生薑以95 %濃度酒精萃取之 萃取物以1 : 1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃 度0.5mg/mL進行其對IgE之抑制效果測試,結果 列如表1。
實施例七、紫蘇、麻黃、黃答、杏仁之萃取物組 成對於IgE之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例取紫 蘇、麻黃、黃芩、杏仁以9 5 %濃度酒精萃取之萃 取物以1 : 1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃度 0.5mg/mL進行其對IgE之抑制效果測試,結果列 如表1。 實施例八、紫蘇、麻黃、黃芩之萃取物組成對於 IgE之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例取紫 蘇、麻黃、黃芩以9 5 %濃度酒精萃取之萃取物以 1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃度 0.5mg/mL進行其對IgE之抑制效果測試,結果列 如表1。 13 1328454 實施例九、紫棘、黃答、丁六 ^ J力子之卒取物組成對 於I g E之抑制效果測試 如實施例一所使用之方法,本實施例取紫 蘇、麻黃、丁力子以9 5 °/。濃度酒精萃取之萃取物 以1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃度 0.5mg/mL進行其對IgE之抑制效果測試,結果列 如表1。 貫把例一、二為臨床常用治療氣喘等過敏性 疾病中藥方劑麻杏甘石湯之效果,作為本發明之 對照組。從表1之中可以發現,麻杏甘石湯之配 方以95 %濃度酒精做萃取之抑制IgE效果較之以 水做萃取之效果提升了 5 0 % ;而實施例三至九中 係以本發明所提出之紫蘇萃取物加入習知用以 抗過敏之不同配方之中,亦有提升抑制IgE之效 果’證明紫蘇萃取物確能達成功效。 實施例十、麻黃、杏仁、甘草、石膏之水萃取物 組成對於L T s之抑制效果測試 以細胞毒性測試(MTT方法)得到對rblj (得自食品研究所菌種中心)細胞具有最少毒性 的最大中草藥濃度。RBL-1細胞内加入Retin〇ic ac 1 d培養1 6小時,然後以此濃度進行rb l -1細胞 培養2小時’其後以Calcium ionophore刺激生成 LTs,離心取其上清液,以酵素免疫分析法分析 其生成的LTs含量。 14 1328454 本實施例取麻黃、杏仁、甘草、石膏以水萃 取之萃取物以2 : 1 : 1 : 4之重量比例混合,以此混•合 物濃度0.05mg/mL進行其對LTs之抑制效果測 試,結果列如表2。 實施例十一、麻黃、杏仁、甘草、石膏之酒精萃 取物組成對於LTs之抑制效果測試
如實施例十所使用之方法,本實施例取麻 黃、杏仁、甘草、石膏改以9 5 %濃度酒精萃取之 萃取物以2 : 1 : 1 : 4之重量比例混合,以此混合物濃 度0.05mg/mL進行其對LTs之抑制效果測試,結 果列如表2。 實施例十二、紫蘇之萃取物組成對於LTs之抑制 效果測試 如實施例十所使用之方法,本實施例取紫蘇 以9 5 %濃度酒精萃取之萃取物,以此濃度 0.05mg/mL進行其對LTs之抑制效果測試,結果 列如表2。 實施例十三、紫蘇之萃取物組成對於LTs之抑制 效果測試 如實施例十所使用之方法,本實施例取紫蘇 以9 5 %濃度酒精萃取之萃取物,改以濃度 15 1328454 0.005mg/mL進行其對LTs之抑制效果測試,結果 列如表2。 實施例十四、紫蘇、黃答、杏仁、生薑之萃取物 組成對於LTs之抑制效果測試 如實施例十所使用之方法,本實施例取紫 蘇、黃芩、杏仁、生薑以9 5 %濃度酒精萃取之萃 取物以1 : 1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃度 0.5 mg/mL (煩請發明人再次確認)進行其對LTs 之抑制效果測試,結果列如表2。 實施例十五、紫蘇、黃芩、麻黃之萃取物組成對 於L T s之抑制效果測試 如實施例十所使用之方法,本實施例取紫 蘇、黃芩、麻黃以9 5 %濃度酒精萃取之萃取物以 1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃度 0.05mg/mL進行其對LTs之抑制效果測試,結果 列如表2。 實施例十六、紫蘇、黃答、丁力子之萃取物組成 對於L T s之抑制效果測試 如實施例十所使用之方法,本實施例取紫 蘇、黃芩、丁力子以95 %濃度酒精萃取之萃取物 以1 : 1 : 1之重量比例混合,以此混合物濃度 16 1328454 Ο . Ο 5 m g / m L進行其對L T s之抑制效果測試,結果 列如表2。 實施例十、十一為以習知之麻杏甘石湯配方 之萃取物所做的LTs抑制效果試驗,以作為本發 明紫蘇萃取物之LTs抑制效果對照。從表2之中可 以發現,除了實施例十三採用較低濃度之紫蘇萃 取物對於提升LTs抑制效果較不明顯之外,其餘 實施例均較實施例十、十一之LTs抑制效果大幅 提昇,證明本發明所提出之紫蘇萃取物單獨使用 或搭配習知之抗過敏配方時確有功效。 追尋主要活性成份(fraction)發現,酒精抽提 物經快速管柱層析分離後,其中編號PF-NP4SD4 部份具有最佳IgE抑制活性(1 ,8%,0.5mg/mL)。 ?尸-鮮43〇4以購自]^1^編號1.05 5 54薄層分 析材料,經正己烷/丙酮=1 /1溶劑系統沖提,在 1 0%硫酸顯色時,主要呈色信號點之Rf值分怖為 0.4 〜0 · 6。 17 1328454 表1 .中藥材組合物之萃取物IgE抑制活性 組合藥材 (方劑名稱/編號) 組成重量 比例 萃取溶劑 濃度 mg/mL IgE inhibition( %) MTT Assay(% ) 實施例一 麻黃、杏仁、甘草、石膏 2:1:1:4 水 0.5 23 92 實施例二 麻黃、杏仁、甘草、石膏 2:1:1:4 95%酒精 0.5 73 71 實施例三 紫蘇、麻黃、杏仁、甘草、 石膏 1: 2:1:1:4 水 0.5 98 117 實施例四 紫蘇、麻黃、杏仁、甘草、 石膏 1: 2:1:1:4 95%酒精 0.5 97 87 實施例五 紫蘇、黃答、杏仁、生薑 1:1:1:1 95%酒精 0.5 92 102 實施例六 紫蘇、黃芩、桑白皮、生薑 1:1:1:1 95%酒精 0.5 96 95 實施例七 紫蘇、黃答、麻黃、杏仁 1:1:1:1 95%酒精 0.5 97 115 實施例八 紫蘇、黃芩、麻黃 1:1:1 95%酒精 0.5 97 110 實施例九 紫蘇、黃芩、丁力子 1:1:1 95%酒精 0.5 96 108 1328454 表2.中藥材與其組合物之萃取物LTs抑制活性 藥材/組合物 組成重量 比例 萃取溶劑 濃度 mg/mL LTs inhibition(% ) MTT Assay(% ) 實施例十 麻黃、杏仁、甘草、石膏 2:1:1:4 水 0.05 10 91 實施例十一 麻黃、杏仁、甘草、石膏 2:1:1:4 95%酒精 0.05 41 113 實施例十二 紫蘇 95%酒精 0.05 73 111 實施例十三 紫蘇 95%酒精 0.005 56 116 實施例十四 紫蘇、黃答、杏仁、生薑 1:1:1:1 95%酒精 0.5 98 126 實施例十五 紫蘇、黃答、麻黃 1:1:1 95%酒精 0.05 97 107 實施例十六 紫蘇、黃芩、丁力子 1:1:1 95%酒精 0.05 84 110 需注意的是,本發明中所使用之輔助萃取物並無限 制,較佳係至少一輔助萃取物選自一由:麻黃、杏仁、 甘草以及石膏所組成之群組;本發明中所使用各萃取物 之重量比例並無限制,較佳之紫蘇:麻黃:杏仁:甘草: 石膏之萃取物重量比例為〇.5~1·5: 1〜3 : 0.5〜1.5 : 0.5〜1.5 : 3〜5 ;本發明所使用之輔助萃取物並無限制,較 佳係至少一輔助萃取物選自一由:黃芩、杏仁以及生薑 所組成之群組;本發明中所使用各萃取物之重量比例並 1328454 無限制,較佳之紫蘇:黃芩:杏仁:生薑之萃取物重量 比例為0.5〜1.5 : G.5〜1.5 : 0.5〜1.5 : G.5〜1.5 ;本發明所使 用之辅助萃取物並無限制,較佳係至少一輔助萃取物選 自-由H桑自皮以及生薑所組叙群組;本發明 中所使用各萃取物之重量比例並無限制,較佳之紫蘇: 丙今.桑白皮:生薑之萃取物重量比例為〇 5〜丨5 : ㈠〜1.5 ·· 0.545 ·· 0.545 ;本發明所❹之輔助萃取物 並無限制,較佳係至少一輔助萃取物選自一由:黃乂、 麻黃=及杏仁所組成之群組;本發明中所使用各萃取物 之重量比例並無限制,較佳之紫蘇:黃答^
〇‘5 1.5,本發明所使用之輔助萃取物並無限制較佳係 至少一輔助萃取物選自一由:輔助萃取物係萃取自黃 =、麻黃所組成之群組;本發明中所使用各萃取物之重 量比例並無限制,較佳之紫蘇:黃芩:麻黃之萃取物重 量^列為0.5〜L5 : 0.H.5 : on」;本發明戶斤使用之輔 助萃取物並無限制,較佳係至少一輔助萃取物選自一 由:黃芩以及丁力子所組成之群組:本發明中所使用各 萃取物之重量比例並無限制,較佳之紫蘇:黃芩:丁力 子之萃取物重量❹_‘5〜15 : Q 5 : q 5〜ι 5 ;本發 明中之紫蘇萃取物以及該輔助萃取物之萃取方法並無限 制,較佳係以95%濃度酒精萃取而得;本發明之抑制‘白三 烯素之抗過敏組合物中之輔助萃取物並無限制較佳= 由一植物性藥物包括:黃芩、杏仁、生薑、麻黃、丁力 子所組成之群組t萃取而得;本發明之輔助萃取物較佳 20 1328454 係萃取自黃答、杏仁以及生薑;本發明所使用各萃取物 之重量比例並無限制,較佳之紫蘇:黃芩:杏仁:生薑 之萃取物重量比例為0.5〜1_5 : 0.5〜1.5 : 〇·5〜1.5 . 0.5〜1.5 ’本發明之輔助萃取物較佳係萃取自黃答以及麻 黃;本發明所使用各萃取物之重量比例並無限制,較佳 之紫蘇:黃芩:麻黃之萃取物重量比例為〇.5〜丨.5 . 0.5〜1.5 : 0.5〜1.5 ;本發明之輔助萃取物較佳係萃取自黃 芩及丁力子;本發明所使用各萃取物之重量比例並無限 制’較佳之紫蘇:黃芩:丁力子之萃取物重量比例為 0.5〜1_5 : 0.5〜1.5 : 0.5〜1_5。 上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已,本發明 所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準,而非 僅限於上述實施例。
Claims (1)
- 第91Π8151號,99年3月修正頁 竹年尹Μ日修(史;止替換頁 拾、申請專利範^ -- 1. 一種可抑制免疫球蛋白IgE及抑制白三烯素 (leukotrienes)之抗過敏組成物,主要包括: 一 1蘇萃取物,該紫蘇萃取物係以95%濃度酒精萃 取而得;以及 一輔助萃取物,係萃取二至四種藥材選自由麻黃 (Ephedra Si”ica STA?E)、杏仁(Prurus armeniaca LINN.)、甘草(G/wr/nh ㈣·j FISCH)、石膏(硫酸 鹽類礦物含水硫酸鈣(CaS〇4 . 2^0)之礦石)、黃答 (Scutellaria baricalensis GEORGI) > ^ ^ ^{Morus alba LINN.)、生薑r〇sc_)、丁力子 山wm WILL·)所組成之群組之組合物,且 該辅助萃取物係以95%濃度酒精萃取而得; 其中’該紫蘇萃取物與該輔助萃取物之重量比例為 〇·5〜1 ·5 : 1 〜4·5 0 2. 如申請專利範圍第1項所述之抗過敏組成物,其 中該輔助萃取物係萃取自麻黃、杏仁、甘草以及石膏。 3. 如申請專利範圍第2項所述之抗過敏組成物,其 中該紫蘇:麻黃:杏仁:甘草:石膏之萃取物重量比例 為 〇·5〜1.5: 1 〜3 : 0.5〜1.5 : 0,5〜1.5 : 3〜5。 4. 如申請專利範圍第1項所述之抗過敏組成物,其 中該輔助萃取物係萃取自黃芩、杏仁以及生薑。 5·如申請專利範圍第4項所述之抗過敏組成物,其 中該紫蘇:黃芩:杏仁:生薑之萃取物重量比例為〇5〜丨5 : °-5~1.5 : 0.5-1.5 : 0.5-1.5 〇 6·如申請專利範圍第1項所述之抗過敏組成物,其 中該輔助萃取物係萃取自黃芩、桑白皮以及生薑。 7. 如申請專利範圍第6項所述之抗過敏組成物,其 中該紫蘇:黃芩:桑白皮:生薑之萃取物重量比例為 〇·5〜15 : 0.5〜1.5 : 〇.5〜1.5 : 0.5〜1.5。 8. 如申請專利範圍第1項所述之抗過敏組成物,其 中該輔助萃取物係萃取自黃芩、麻黃以及杏仁。 9’如申請專利範圍第8項所述之抗過敏組成物,其 中該紫蘇:黃芩:桑白皮:生薑之萃取物重量比例為 0-5-1.5 : 0.5-1.5 : 0.5-1.5 : 0.5-1.5 ° 1 〇.如申請專利範圍第1項所述之抗過敏組成物,其 中該輔助萃取物係萃取自黃芩、麻黃。 u·如申請專利範圍第10項所述之抗過敏組成物,其 中該紫蘇:黃答:麻黃之萃取物重量比例為0.5〜1.5 : 〇.5〜1.5:〇.5〜15。 12·如申請專利範圍第1項所述之抗過敏組成物,其 中該輔助萃取物係萃取自黃芩以及丁力子。 13 ’如申請專利範圍第12項所述之抗過敏組成物,其 中〜备'蘇·黃名:丁力子之萃取物重量比例為0.5〜1.5 : 0·5〜1·5 : 〇·5〜ι·5 〇 23
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