TWI257307B - Pharmaceutical composition for cardiac tissue repair - Google Patents

Description

1257307 A7 —^_Β7 _____________ 五、發明說明（丨） 發明背景 人類α -凝血酶似乎具有促進各種組織之各種細胞生長 的能力。例如，α-凝血酶已顯示可使培養中的纖維母細胞 開始增殖，而無須添加血淸或其他純化的生長因子；在特 定的倉鼠纖維母細胞或人類內皮細胞中，可與上皮生長因 子協同作用；可使晡乳動物眼球上皮細胞及脾臟細胞開始 細胞分裂以及合成DNA，並且啓動單核球及嗜中性白血球 。然而，使用凝血酶作爲生長因子以及其對於創傷癒合的 潛在重要性，卻並未被廣泛地宣佈。在某種程度上，這可 能是由於凝血酶與血液凝結、血小板活化及細胞增殖開始 的牽連之複雜性，以及由於凝血酶及類凝血酶分子受到血 淸蛋白酶抑制劑及受到細胞釋放的蛋白酶連接素之複雜的 調控。然而，這個複雜性以及高度的生理調控，支持這個 創傷癒合的起始途徑之潛在重要性。 凝血酶也可在正常的再血管化中，以及細胞從血液移 動至受傷部位，以及與腫瘤有關的異常轉移及血管生成中 ，扮演重要的角色。凝血酶可增加內皮細胞的增殖以及改 變血管障礙功能之能力，可歸因於在組織受傷部位之血管 生成以及發炎。 凝血酶衍生的胜肽已由本發明說明，例如，在創傷的 治療中，其激動及拮抗凝血酶及/或凝血酶受體之活性。美 國專利第5,500,412或5,352,664號，其完整內容納入此處 作爲參考文獻。然而，這些專利並未教示在受損的心臟組 織之治療、再血管化或在血管栓塞及再狹窄（restenosis) 3 —ί-------—--------^---------線. Γ 请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307 A7 _____B7___ 五、發明說明（/ ) 之抑制中，凝血酶衍生的胜肽之新穎用途。 發明槪述 本發明是有關於促進心臟組織或心肌修補、促進再血 管化或抑制血管栓塞之方法，包括將一治療有效量之血管 生成的凝血酶衍生的胜肽，給藥至心臟組織或血管。在一 較佳具體實施例中，該胜肽是美國專利第5,500,412或 5,352,664號所說明之胜肽，其完整內容納入此處作爲參考 文獻。例如，該胜肽較佳地可包括一凝血酶受體結合之功 能部位，其具有序列：精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸 (序列辨識編號1);以及一絲胺酸酯酶保守性序列。較 佳的絲胺酸酯酶保守性序列包括天門冬胺酸-丙胺酸-半胱 胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯 胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編號2)。在另一更佳具 體實施例中，凝血酶衍生的胜肽包括胺基酸序列：丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺 酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙 胺酸-纈胺酸（序列辨識編號3)，例如，由胺基酸序列： 丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸·麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺 酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺 酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編號3)所組成之胜肽。具 有序列辨識編號3的序列之胜肽，此處也稱爲“TP-508”。 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —j-----------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 1257307 B7 五、發明說明) 該胜肽較佳地可在心臟手術期間或之後，例如，藉由 直接或由導管媒介注射至心臟組織而給藥，或塗佈在氣球 血管修復術導管上，以用於局部的傳輸。 本發明也有關於刺激再血管化或血管內皮細胞增殖之 方法，包括將一治療有效量之血管生成的凝血酶衍生的胜 肽（如此處所說明之凝血酶衍生的胜肽），給藥至心臟組 織。 ®示之簡單說明 第1圖顯示增加的TP-508 (具有序列辨識編號1的胺 基酸序列之胜肽）之濃度，可在活體外刺激人類微血管內 皮細胞之增殖。此圖顯示給藥各種濃度的TP-508 (以微克/ 毫升表示）後的48小時之細胞計數。 第2圖顯示增加的TP-508之濃度，可刺激在塑膠上之 微血管內皮細胞之移動。此圖顯示給藥各種濃度的TP-508 (以微克/毫升表示）後之細胞移動的距離。 第3圖顯示在心臟局部缺血的豬模式中，TP-508治療 組及對照組的豬之心臟功能的變化。 發明詳述 一般而言，心臟血管疾病的特徵在於血液減弱的供給 至心臟或其他的標的器官。心肌梗塞（MI)是起源於在心 臟中之狹窄的或栓塞的冠狀動脈，其使得需要營養及氧氣 的心臟餓死。當血液至心臟的供給危急時，細胞會以產生 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1257307 A7 ____B7____ 五、發明說明（y ) 誘導新血管生長之化合物而反應，以便增加血液至心臟的 供給。這些新的血管被稱作附屬的血管。誘發新的血管以 生長超過現存的血管分布之方法，稱爲血管生成，以及細 胞所產生用以誘發血管生成的物質，稱爲血管生成的因子 Ο 內皮細胞的增殖，例如，發生在血管生成中之內皮細 胞的增殖，也有效於預防氣球血管修復術後的再狹窄。氣 球血管修復術的程序，通常會使內皮細胞襯裡血管的內壁 受傷。平滑肌細胞通常會滲入至開放的血管，導致在手術 中的第二次栓塞，已知如再狹窄。位於氣球誘發的受損區 域周圍之內皮細胞的增殖，用以覆蓋具有新的內皮細胞單 層之管腔表面，將可能恢復血管的原始結構。 較佳地，內皮形成（endothelialization)包括血管修復 術後的再內皮形成，以減少或預防再狹窄。熟悉於此技藝 者應可了解，根據本發明之方法而治療的患者，可利用或 不須利用移植片固定模（stent)而治療。 具有胜肽塗佈氣球之膨脹的氣球導管，也可用於將物 質傳遞至標的動脈。 氣球血管修復術是一種常用的局部缺血性心臟疾病之 治療，其涉及到氣球栓塞的血管中之膨脹，以將栓塞的血 管打開。不幸地’這個治療方法經常導致內皮細胞襯裡血 管的內壁受傷。平滑肌細胞通常會滲入至開放的血管，導 致在手術中的第二次栓塞，稱作再狹窄。可使用本發明所 說明之胜肽，以誘發位於氣球誘發的受損區域周圍之內皮 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） jIL--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —訂---------線· 1257307 A7 ___B7 _ 五、發明說明（4 ) 細胞的增殖，用以覆蓋具有新的內皮細胞單層之管腔表面 ，期待可恢復血管的原始結構。冠狀動脈血管修復術通常 伴隨著血管內移植片固定模的裝配，以協助維持血管的功 能以及避免再狹窄。移植片固定模已塗佈肝素以預防血栓 形成，直到藉由移植片固定模可內皮形成而形成新的通道 爲止。本發明所說明之胜肽可利用在此技藝中之人士所熟 知的方法，而直接塗佈到移植片固定模。此胜肽可局部的 塗佈或全身性的給藥，以增強血管或血管壁的內皮形成， 及/或調節其他的方法，以抑制或減少血栓形成及再狹窄。 本發明較佳地是使用可調節事件的凝血酶受體之合成 的或天然衍生的多胜肽激動劑。這兩類作用劑都具有凝血 酶受體結合之功能部位，其包括可選擇性結合至高親和力 凝血酶受體之多胜肽的片段。這個多胜肽的片段包括同源 於纖維網蛋白之三胜肽細胞結合功能部位的胺基酸序列。 除了凝血酶受體結合之功能部位之外，刺激性（激動 性）的多胜肽具有衍生自十二肽（其先前顯示在絲胺酸蛋 白酶之間是高度保守性）的胺基端胺基酸之胺基酸序列。 然而，抑制性的多胜肽並沒有包括這些絲胺酸酯酶的保守 性序列。 例如，本發明提供許多有效於促進心臟組織修復之多 胜肽。對於這樣的應用，本發明提供一種凝血酶的多胜肽 衍生物（或這樣的衍生物之功能性相等物），其具有凝血 酶受體結合之功能部位，以及至少12個胺基酸之絲胺酸酯 酶保守性序列。本發明也提供至少23個L-胺基酸之多胜 7 —„--------- C請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —訂---------線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307 A7 ___B7___ 五、發明說明（V ) 肽化合物，其具有凝血酶受體結合之功能部位，以及絲胺 酸酯酶保守性胺基酸序列之功能部位。 在一較佳具體實施例中，本發明提供數種包含特定胺 基酸序列之多胜肽，例如，多胜肽化合物，其中凝血酶受 體結合之功能部位包括L-胺基酸序列：精胺酸_甘胺酸_天 門冬胺酸-丙胺酸（序列辨識編號1)，以及絲胺酸酯酶保 守性胺基酸序列：天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸_甘 胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸.胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編號2)。在一較佳具體實施例中，多 胜肽化合物包括L-胺基酸序列：丙胺酸-甘胺酸_酪胺酸-離 胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘 胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬 胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序 列辨識編號3)。 本發明也提供促進組織修補之藥學組成物，其包括一 治療有效濃度之上述任何的化合物，以及結合一藥學上可 接受的賦形劑。典型地，這樣的組成物包括，例如，足夠 濃度之多胜肽以對凝血酶受體產生刺激的作用，如此處所 證實的。因此，這樣的組成物典型地應包括足夠的濃度， 以在標的部位獲得多胜肽，其在活體外顯示可刺激受體。 當內源性的二次訊息的量據信是不充分時，可使用此組成 物，其更包括額外的治療有效濃度之血管內皮生長因子（ VEGF)、α-凝血酶、7-凝血酶或其他的生長因子。這樣 的組成物可發揮加成或協同作用的效果。 8 J—i---------% (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I-*訂-------線. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307 A7 ________B7_ 五、發明說明（1 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 此處所使用的“治療有效濃度”是定義爲一特定作用 劑的濃度，其提供令人滿意的修補或血管生成速率之增加 ，或令人滿意的再狹窄或血管栓塞之抑制或減少。此外， 這樣的濃度一般相信是相當於足以在活體外誘發刺激凝血 酶受體之程度。然而，當刺激性（激動性）的多胜肽是以 〇·1微莫耳濃度（//M)到10//M的濃度存在時，一般相 信此組成物將可顯示最大的有效性。 爲了本發明之目的，凝血酶衍生物是定義爲具有至少 一部份衍生自凝血酶的胺基酸序列之任何分子，而不論是 活體內或活體外合成的。因此，此處所說明之凝血酶衍生 物命名爲多胜肽分子，其包括較少於凝血酶的胺基酸。 凝血酶衍生物之生理功能的相等物，包括不同於凝血 酶衍生物之分子，特別是不會影響凝血酶受體結合功能部 位或絲胺酸酯酶保守性胺基酸序列的功能之分子。這樣的 特點可包括，但並不限於，保守性胺基酸序列的取代及修 飾，例如，羧基端的醯胺化、胺基端的醯基化、多胜肽連 結到一生理惰性的載體分子或絲胺酸酯酶保守性序列之序 列改變。 凝血酶受體結合功能部位是定義爲可直接結合至凝血 酶受體之多胜肽序列，及/或可競爭性抑制高親和力凝血酶 受體與α-凝血酶之間的結合之多胜肽序列。 具有絲胺酸酯酶保守性序列之功能部位，包括含有十 二肽（其先前顯示在絲胺酸蛋白酶之間是高度保守性）的 至少4-12個胺基端胺基酸之多胜肽序列（天門冬胺酸-Xl_ 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307 A7 ___一 —__B7____ _ 五、發明說明（$ ) 半胱胺酸-Χ2-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯 胺酸_Χ3_纈胺酸（序列辨識編號4);其中Xl是丙胺酸或 絲胺酸之一；X2是麩胺酸或麩胺酸醯胺之一；以及χ3是 苯丙胺酸、甲硫胺酸、白胺酸、組胺酸或纈胺酸之一）。 刺激性多胜肽是定義爲凝血酶之多胜肽衍生物，或其 生理功能的相等物，具有可結合及刺激凝血酶受體之能力 。因此，刺激性胜肽將包括凝血酶受體結合之功能部位， 以及具有絲胺酸酯酶保守性胺基酸序列之功能部位。 本發明將藉由以下的實施例而說明，這些實施例並非 要以任何的方式而限制本發明之範疇。 實施例 實施例1 : TP-508在活體外刺激人類內皮細胞之增殖 及移動 爲了測定TP-508是否可直接誘發內皮細胞之增殖，將 購自Clonetics之人類微血管內皮細胞，置於組織培養級塑 膠之24孔培養皿上，並且不供給血淸24小時。將培養液 中的細胞以TP-50.8或不以TP-508刺激48小時，此時利用 直接的細胞計數而評估增殖。如第1圖所示，TP-508刺激 微血管內皮細胞的增殖，是高於單獨以培養液（1·〇微克/ 毫升之TP-508 )處理的細胞增殖達30%到50%。這個效 果似乎是專一性的，因爲分離自大鼠主動脈之平滑肌細胞 的生長，並未受到TP-508之影響。 TP-508對於人類內皮細胞的移動之效果，是利用活體 10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· -線. 1257307 A7 ____B7______ 五、發明說明（' ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 外單層分析而評估，其中，內皮細胞是置於35公釐的培養 皿中，使其生長至接近全滿3天，此時，將單層細胞藉由 橡膠擦子刮過培養皿中心以移除細胞條帶而使其受傷。在 這個時間點拍照，然後將細胞以單獨的新鮮培養液或包含 各種濃度的TP-508之培養液而處理，並使其再生長48小 時。將細胞再次照相，並測量內皮細胞移動至受傷區域的 .距離。如第2圖所示，即使當細胞是單獨培養在塑膠上時 ，TP-508仍可刺激內皮細胞的移動。 這些硏究證實，TP-508對於人類內皮細胞在活體外產 生增加的增殖及移動，具有直接的血管生成效果。另外的 硏究指出，將內皮細胞暴露至TP-508可具有保護作用，以 避免受到氧化作用的暴露所引起之細胞死亡。 實施例2 :在絨毛膜尿嚢膜的模式中，TP-508在活體 外刺激血管生成 在大鼠背部完全的真皮手術切口以及開放切除創傷的 硏究中，顯示單一局部的塗抹TP-508可刺激橫越手術切口 的血管之再血管化以及顯著性。在大鼠的背部製造兩個手 術切口的創傷。一個創傷是以單一塗抹TP-508 ( 0.1微克 )而治療；另一個創傷則未治療。治療組創傷較對照組創 傷的血管更受到注意。 將TP-508外加至瓊脂培養皿，置於雞胚胎的絨毛膜尿 囊膜上，導致血管生成之結果。血管被刺激以生長到含有 TP_5〇8的培養皿中。在血管末端到栓塞中，也有增加的附 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮） 1257307 A7 _____JB7_ 五、發明說明（v〇 ) 屬血管之自然發展，相似於其他血管生成因子所觀察到的 結果。 實施例3 :在豬模式中，TP-508顯示治療心肌局部缺 血的功效 將環形窄器（ameroid)栓塞器，置於猶太迷你豬的近 側左圍旋動脈上。窄器會隨著時間而將水吸入，而產生血 管的栓塞物。在手術後的四週，藉由對比增強的血管造影 法而證實栓塞。此時，將每隻動物的胸腔再次打開，隨之 以緩釋配方的TP-508 (也就是，包含TP-508的聚乳酸-共-甘醇酸（PLGA)的微球體，懸浮於聚氧乙烯-聚丙烯嵌段 共聚物（Phironic)的凝膠中）注射至局部缺血的區域。所 使用的聚乳酸-共-甘醇酸微球體提供一開始大量釋放的藥 物（24小時內釋放裝載的50% )，然後的3-4天顯示控制 的釋放，此時已釋放出裝載的80%。所使用的凝膠是30% (重量/體積）溶於0.9%鹽溶液之Phironic F68。在注射之 前’將3.3毫克的聚乳酸-共-甘醇酸微球體迅速加到在冰上 的每毫升凝膠中以減少黏度。這提供100微克/毫升凝膠的 TP-508劑量，其用於注射到局部缺血區域中的大約1〇個 部位（每個部位100微升）。對照組接受溶於聚氧乙烯-聚 丙烯嵌段共聚物凝膠但不含TP-508的聚乳酸-共-甘醇酸微 球體。得到基線、治療後的血管造影圖以及超音波心臟動 態圖。 心肌壁增厚以及心臟排斥部份的指數，顯示TP-508治 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Li ---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂--------線· 1257307 A7 ______B7____ 五、發明說明（W ) 療的動物耐受多巴酣丁胺（dobutamine )誘發的壓力，是 優於對照組的趨勢。三週後，以對比增強的超音波心臟動 態圖而評估動物。對於這些有限數目的動物之初始結果， 證明在多巴酹丁胺壓力下之TP-508治療的動物，相較於對 照組，是具有稍微較大的排斥部份之增加，以及較佳維持 的壁增厚。 實施例4 :在兔子模式中，TP-508刺激心肌的再血管 化 將TP-508注射到局部缺血的兔子心肌中。將窄器栓塞 器置於兩隻兔子的左主冠狀動脈之橫面區域上，剛好位於 心房-心室（A-V)溝之下，如Operschall等人之說明（丄 却〆88 : 1438 ( 2000))。置入後兩週，將動物 的胸腔再度打開。在一隻動物中，將包含於聚氧乙烯-聚丙 烯嵌段共聚物凝膠中的TP-508微球體（如實施例3所述） ，注射至由栓塞血管所提供的區域內以及圍繞該區域之8 個分離的部位。其他的動物是作爲未治療的對照組。在注 射後大約四週，將動物犧牲並將它們的心臟固定在10%緩 衝的福馬林中24小時。然後將心臟橫過有興趣的區域切片 ，並以蘇木素-曙紅染色，以及藉由抗凡偉列布蘭德因子（ vWF ; —種內皮細胞標誌）而免疫標示。 組織學硏究證實，在栓塞器所提供的區域中’對照組 動物具有明顯的纖維變性。另一方面，TP-508治療的心臟 ，具有較多的功能性微血管以及明顯的紅血球細胞之健康 13 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -------—訂·， — — — — — . 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307 A7 ________ B7__ 五、發明說明（yy ) 呈現的心肌。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例5 :在髙膽固醇血症的兔子模式中，TP_508抑 制再狹窄 這個實驗方法是設計用以在高膽固醇血症的紐西蘭白 兔中，提供一種試驗測試樣品在血管修復術後，可抑制新 血管內膜形成以及血管栓塞的功效之系統。將動物餵食由 〇·5%膽固醇及2.0%花生油所組成的高脂肪飮食三週。在 手術之前，將動物預先處理24小時；將腸骨動脈以氣球血 管修復術使其受傷，如上所述；然後將動物以ΤΡ-508治療 7天。使這些動物維持高脂肪飮食四週。在氣球血管修復 術之前以及實驗結束時，進行血管造影法。將受傷及未受 傷的腸骨動脈回收及製備，以用於組織學之硏究。對於內 腔、新血管內膜（如果存在的話）以及動脈中膜，進行形 態計量之測量。 ΤΡ-508的測試樣品是溶解/稀釋在一無菌、無熱源的 鹽溶液中至所需要的濃度，並且藉由一天0.2毫升體積的 靜脈注射，在手術前、手術當天以及手術後連續六天而給 藥0 製作一個5公分中線的頸部切口，並將右頸動脈暴露 、約略結紮以及切開。然後將4 Fr Berman氣球血管造影 導管導入至主動脈中。將5 Ft*鞘經由4 Fr Bernian氣球血 管造影導管導入至主動脈中。收集3毫升的血液以用於膽 固醇之計數。然後將兔子注射肝素以及更多的麻醉劑（如 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307* A7 ____ B7 ___ 五、發明說明) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 果需要的話）。爲了使腸骨動脈顯現，將6毫升的 Hypaque ( 76% )混合4毫升的無菌鹽溶液，經由導管而 注射。獲得腸骨動脈的影像（影像是以格線標示，並將剪 刀置於右側）。將4 Fr Berman氣球血管造影導管自鞘移 除。然後將0.014吋/3.0公釐X20.0公釐/120公分的氣球 導管，經由鞘而插入至主動脈以及腸骨動脈中。使氣球在 10個大氣壓下擴張3次30秒，每次1分鐘間隔。然後將 導管及鞘移除。將右頸動脈以3.0絲質縫合線結紮。將頸 部切口以PDS閉合，並將表皮以雙層抗生素軟膏固定以及 包紮。 然後將測試樣品或對照樣品給藥至兔子。測試樣品是 以下述的方式稀釋：將0.3毫升的鹽溶液吸到具有23號1 吋針頭的1.0毫升針筒。將這個體積量注射到TP-508的小 瓶中。在TP-508溶解後，將0.25毫升的溶液移除並且給 藥。接著將中空套管以鹽溶液沖洗。如果兔子是對照組的 話，則注射0.2毫升的鹽溶液並且再以另外的鹽溶液沖洗 。這個兔子也經由皮下注射而接受〇·3毫升的丁基原啡因 (buprenorphine ) 〇 在手術之後，給兔子一些時間變得靈活同時在加熱墊 上休息。然後使兔子回到其籠子，並使其任意接近食物及 水。使這些兔子再維持這樣的飮食四週，直到犧牲爲止。 組織學硏究摘要： 利用Image-Pro Plus及Excel軟體，完成19個樣品之 15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307 B7 五、發明說明（A) 形態組織學的分析。在這19個樣品中，2個顯示外部彈性 薄層之危險。19個樣品中的1個似乎需要另外的切片。因 此，比膠16個樣品，其中包括7個治療組以及9個鹽溶液 對照組。 再狹窄損傷之厚度，是利用數位分析，藉由測量新血 管內膜的區域而測定。血管的動脈中膜是以相同的方法測 量。然後將這些數値，藉由加總這兩個區域的面積，以及： 除以在相同組織學載片系列中所發現的正常（未受傷）ψ 膜之面積所得的結果而常態化。經證實，在未受傷的中膜 所發現的區域之間，並沒有明顯的差異。 當比較治療組動物與對照組動物時，再狹窄的程度:¾ 藉由三個獨立的方法而分析：“單一最差數値”法、“平 均損傷厚度”法以及“全部切片平均”法。“單一最差數 値”法是比較操作的血管之間所得到的再狹窄數値之最大; 値。“平均損傷厚度”法是比較操作的血管之間，定義完 善的受傷區域內之所有異常點的平均。最後，“全部切片 平均”法是比較所有測量樣品的平均厚度，而不管它們是 否出現損傷的部份。將這些結果的平均値，經由學生氏I 試驗而測試其統計上的意義。 數據摘要： 所有的數據分析是利用二尾t-試驗，假設不相等的變 異而完成。α是0.05，以及平均差異假設是0。每個分析 包括治療組7以及鹽溶液對照組η= 9。結果摘述於下 16 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} n n n n n- 訂--------線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1257307 A7 ___ Β7 i、發明說明（/ ) 表中。所顯示的“差異”數値是有關於治療組與對應的對 照組比較之變化百分比。以星號註記的數値是表示統計上 有意義的。 — 技術 單—最差數値 平均損傷厚度 全部切片平均 測量的區域 治療組 對照組 差異 治療組 對照組 差異 治療組 對照組 差異， 新血管內膜 .202 332 -39%* .158 .245 -36% .117 185 -37%* 一 中膜 .113 133 -15% .123 .152 -19% .116 140 -17% 新血管內膜+中膜/ —未受傷的中膜 4.56 7.73 •41%* 4.18 5.87 -29%* 3.49 5.22 -37%* 結論： 這些數據顯示，在高膽固醇血症的兔子模式中，TP-508 明顯地抑制再狹窄以及血管栓塞 。這個結果是堅強的 ，在於它與所選擇用以定量結果的技術是獨立的。 雖然本發明已以其較佳具體實施例而特定地顯示及說 明，但熟悉於此技藝者應可了解，在不脫離本發明之範疇 外，對本發明進行的各種形式及細節之更動，都是在本發 明所附的申請專利範圍內。 17 ---*------------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1. SC8D8 1257307 六、申請專利範圍 〗· 一種用於促進心臟組織修補之醫藥組成物，該組成物包 含一治療有效量之血管生成性凝血酶的衍生胜肽，其中 該胜肽包括胺基酸序列：丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸 -脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘 胺酸"·天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門 冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸 (序列辨識編號3)。 2. —種用於促進心臟組織再血管化之醫藥組成物，該組成 物包含一治療有效量之血管生成性凝血酶的衍生胜肽， 其中該胜肽包括胺基酸序列··丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離 胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸·離胺酸-精胺酸 -甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸· 天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈 胺酸（序列辨識編號3)。 3· —種用於在病患中於氣球血管修復術後抑制再狹窄之醫 藥組成物，該組成物包含一血管生成性凝血酶的衍生胜 肽，其中該胜肽包括胺基酸序列：丙胺酸-甘胺酸-酪胺 酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸·甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘 胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸·苯丙胺 酸·纈胺酸（序列辨識編號3)。 4.根據申請專利範圍第1至3項中任一項的組成物’其包 括胜肽：丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬 胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸丨 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) ·ν·σ 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) 8 S 8 ABCD 1257307 六、申請專利範圍 -丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編 號3)，其中該胜肽於羧端經醯胺化。 5. 根據申請專利範圍第1至3項中任一項的組成物，其中 該胜肽係由丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門 冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺 酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸 -甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編 號3)所組成。 6. 根據申請專利範圍第1至3項中任一項的組成物，其係 一種緩釋配方。 7. 根據申請專利範圍第4項的組成物，其係一種緩釋配方 〇 8·根據申請專利範圍第5項的組成物，其係一種緩釋配方 〇 9·根據申請專利範圍第6項的組成物，其中該組成物含有 包含血管生成性凝血酶的衍生胜肽之聚乳酸/甘醇酸微 球體。 10·根據申請專利範圍第7項的組成物，其中該組成物含有 包含血管生成性凝血酶的衍生胜肽之聚乳酸/甘醇酸微 球體。 11.根據申請專利範圍第8項的組成物，其中該組成物含有 包含血管生成性凝血酶的衍生胜肽之聚乳酸/甘醇酸微 球體。 . ...............II—............總；·· (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) A8B8C8D8 1257307 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 12·—種血管生成性凝血酶的衍生胜肽的用途，其係用於製 備用於治療心臟組織的損傷之醫藥品，其中該胜肽包括 胺基酸序列··丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天 門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬 胺酸丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺 酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識 編號3)。 13·—種血管生成性凝血酶的衍生胜肽的用途，其係用於製 備用於在病患中於氣球血管修復術後抑制血管再狹窄之 醫藥品，其中該胜肽包括胺基酸序列：丙胺酸-甘胺酸_ 酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺 酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸 -甘胺酸-天門冬胺酸_絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯 丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編號3)。 線 H.—種血管生成性凝血酶的衍生胜肽的用途，其係用於製 備用於促進心臟組織再血管化之醫藥品，其中該胜肽包 括胺基酸序列：丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門 冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸•麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲 胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨 識編號3)。 15·根據申請專利範圍第12至14項中任一項的用途，其中 該胜肽係由丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門 冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) :598899 ABCD 1257307 六、申請專利範圍 酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸 -甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編 號3 )所組成。 16·根據申請專利範圍第12至14項中任一項的用途，其中 該胜肽於羧端經醯胺化。 17. —種經血管生成性凝血酶的衍生胜肽塗佈之移植片固定 模，其中該胜肽包括胺基酸序列：丙胺酸-甘胺酸-酪胺 酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘 胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺 酸-纈胺酸（序列辨識編號3)。 18. 根據申請專利範圍第Π項的移植片固定模，其中該胜 肽係由丙胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺 酸-麩胺酸-甘胺酸-離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸_ 丙胺酸-半胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘 胺酸-甘胺酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編號3 )所組成。 19. 根據申請專利範圍第17或18項的移植片固定模’其中 該胜肽於羧端經醯胺化。 20. —種經血管生成性凝血酶的衍生胜肽塗佈之氣球血管修 復術導管，其中該胜肽包括胺基酸序列：丙胺酸-甘胺 酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-魅胺酸—甘胺酸_ 離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-丙胺酸-半胱胺酸•鍵 胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺酸-脯胺酸 一斗 ___ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格⑽x 297公愛〉 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

   A8B8C8D8 1257307 六、申請專利範圍 -苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編號3)。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 21.根據申請專利範圍第20項的導管，其中該胜肽係由丙 胺酸-甘胺酸-酪胺酸-離胺酸-脯胺酸-天門冬胺酸-麩胺酸 -甘胺酸離胺酸-精胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸·丙胺酸-半 胱胺酸-麩胺酸-甘胺酸-天門冬胺酸-絲胺酸-甘胺酸-甘胺 酸-脯胺酸-苯丙胺酸-纈胺酸（序列辨識編號3)所組成 〇 22·根據申請專利範圍第20或21項的導管，其中該胜肽於 羧端經醯胺化。 r 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐）