TWI245045B - Preparation and isolation of indolocarbazole glycosides - Google Patents

Description

1245045 A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明背景 本發明有關一種製造高純度吲3朵并叶唾：之新穎方法， 其抑制癌細胞之生長及因此可使用於治療哺乳動物及類似 者之癌症。 在癌症化療領域中’已實務上使用大量之化合物做為抗 癌劑。然而，持續需要發展更有效之化合物對抗各種腫瘤 (參見 Proceedings of the 47th General Meeting of the Japan

Cancer Society，第12至15頁（1988年））。此需求導致啕哚并 咔唑衍生物之發展。（參見美國專利第4,487,925 ; 4,552,842 ; 4,785,085 ; 5,591，842 ;及5,922,860號；日本專利 第 20277/91 號；Journal of Antibiotics，第 44 冊第 723 至 728 頁 (1991 年）；W0 91/18003 ; WO 98/07433 ;及EP0545 195 A1)。 此等化合物已顯示作用為拓樸異構酵素抑制劑及因此可使 用於治療癌症（Cancer Chemother· Pharmacol. 34 (suppl):S41-S45 (1994))。 此等化合物在治療許多癌症方面之成功使發展其改良之 合成方法成為必須。（參見Bioorg. & Med. Chem. Letters 2000, 10, 419 ; Tetrahedron 1997, 53, 5937 ; Tetrahedron 1997, 53，5 85 ;及Synthesis 1976, 414)。然而，先前已知之方法遭 受許多問題’包含使用不為所欲之溶劑、汞或銀鹽，低產 率及形成不欲之副產物’需要冗長或拖延之純化步驟。 例如，先前已知之製備高純度响哚并咔唑：y： m之方法需 要純化步驟，例如碳處理、層析、及/或粗產物之再結晶， 很冗長、費時、及危險，尤其是當以商業規格進行時，因 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公#) 1245045 A7 B7 五、發明説明（2 ) 為產物有高度之細胞毒性。（參見Bioorg & Med Chem Letters 1999, 3307 ;及Tetrahedron 1997，5 85 (欷述，° 構上類 似之化合物之合成，需要將粗產物再溶解以獲得純物

因此本發明之目的係提供此等啕哚并吡σ各并叶唾衍生之 抗癌物質之新穎途徑，同時克服先前已知之合成既存之問 題，特別是製造充分純度以允訐在後續調配時直接使用之 產物之途徑。 發明概要 本發明有關一種製造高純度式I之响哚并叶唾答之新顆、方 法’其抑制癌細胞之生長及因此可使用於治療哺乳動物及 類似者之癌症。 1245045 A7 B7 五、發明説明（3 )

發明詳細說明 以一種製備高純度之式I之化合物說明本發明之具體實施

其包括下列步驟： (a) 藉由添加鹼而調整基本上由酸、醇、水、及化合物I組 成之酸性混合物之pH，以產生具有pH在約1.5至約6.5之範 圍之溶液； (b) 將來自步驟（a)之溶液溫度保持在約50 °C至約1 00°C之 -7- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（4 ) 範圍；及 (c)分離化合物I晶體。 於本發明之第二具體實施例中，該方法包括下列步驟： (a) 藉由添加驗而調整基本上由酸、醇、水、及化合物j組 成之酸性混合物之pH，以產生具有pH在約1 · 5至約6.5之範 圍之溶液； (b) 以醇調整來自步驟（a)之溶液，使得溶液為約1〇% w/v 至約30% w/v之水於醇中及化合物I之濃度為約1〇 mL/g至2〇 mL/g ； (c) 將來自步驟（b)之溶液溫度調整至約501至約loot：之 範圍之溫度； (d) 將醇添加至來自步驟（c)之溶液，使得溶液被稀釋為 約3 : 2 (溶液··醇）； (e) 使來自（d)之溶液在約50 °C至約100°C之範圍之溫度下 熟化，直到化合物I晶體形成而產生漿體為止；及 (f) 分離化合物I晶體。 . ： 於第二具體實施例之進一步具體實施例中，該方法進一 步包括經由在觸媒存在下氫化而使中間物II去保護：

本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格（210X 297公釐） 1245045 A7 B7

五、發明説明（5 ) (其中R獨立為氫或經取代或未經取代之> 丨〜 < 下基保護基，但是 至少一個R為經取代或未經取代之芊基保 工叩5曼：¾ )，以產生 應混合物，接著將反應混合物過濾以楹 k供步驟（a)之混合 物0 於另一具體實施例中，上述方法中之尺為3

化合物III 於本發明之第三具體實施例中，製備高純度

裝 訂

(a)藉由添加驗而調整基本上由酸、醇、水、及化人物m 組成之酸性混合物之pH ’以產生具有pH在約1 $至約6 $之 範圍之溶液； (b) 以醇調整來自步驟（a)之溶液，使得溶液為約ι〇%〜〜 至約30% w/v之水於醇中及化合物ΠΙ之濃度為約1〇 mL/§至 20 mL/ g ； (c) 將來自步驟（b)之溶液溫度調整至約5〇t：至約wye之 範圍之溫度； (d) 加種晶至溶液中； -9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格（210X297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（6 ) (e) 將醇添加至溶液中，使得溶液被稀釋為約3 : 2 (溶 液：醇）； (f) 使來自（e)之溶液在約5〇 °c至約1 〇〇 °c之範圍之溫度下 熟化’直到化合物III晶體形成而產生漿體為止；及 (g) 分離化合物III晶體。 在第三具體實施例之進一步具體實施例中，該方法進一 步包括經由在觸媒存在下氫化而使中間物π去保護：

OR (其中R獨立為氫或經取代或未經取代之芊基保護基，但是 至少一個R為經取代或未經取代之芊基保護基），以產生反 應混合物，接著將反應混合物過濾以提供步驟（a)之混合 物。 及仍另一具體實施例為上列剛敘述之方法，其中將步驟 (a)之pH調整至約1.5至約3.5之範圍之pH ;調整（之溶液’ 使得溶液為約15% w/v至約25% w/v之水於醇中及化合物111 之濃度為約12 m L / g至約1 8 m L / g ;及將步驟（c)之溫度调整 至約70°C。 -10- 本紙張尺度適财關家鮮(CNS) A4規格(21QX 297公^7 1245045 A7 B7 五、發明説明（7 進一步之具體實施例為上述方法，其中將步驟（a)之pH調 整至約2.5之pH ;調整（b)之溶液，使得溶液為約20% w/v之 水於醇中及化合物HI之濃度為約15 mL/g ;及將步驟（c)之 溫度調整至約70°C。 本發明亦涵括上述之方法，進一步包括在步驟（f)後調整 聚體之步驟，使得在步驟（g)分離化合物m晶體之前水含量 降至約1 % w/ ν至約1 0 % w/ ν之範圍。 較佳之具體實施例為製備高純度化合物ΠΙ之方法，

其包括下列步驟： ' (a) 藉由添加低級烷基胺鹼而調整基本上由酸、醇、水、 及化合物III組成之酸性混合物之pH，以產生具有pH約2.5之 溶液， (b) 以異丙醇調整來自步驟（a)之溶液，使得溶液為約20% w/v之水於異丙醇中及化合物III之濃度為約15 mL/g ; (c) 將來自步驟（b)之溶液溫度調整至約70°C之溫度； 11 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（8 ) (d) 加種晶至溶液中； (e) 將異丙醇添加至溶液中，使得溶液被稀釋為約3 ··， (溶液：異丙醇）； (f) 使來自（e)之溶液在約701之溫度下熟化，直到化合物 I晶體形成而產生漿體為止； (g) 調整漿體使得水含量為約3 % w/ v ; (h) 在冷卻至約22°C前使漿體在約70°C下熟化；及 (i) 分離化合物III晶體。 於較佳具體實施例之進一步具體實施例中，該方法進〆 步包括經由在觸媒存在下氫化而使中間物π去保護：

OR OR (其中R獨立為氫或經取代或未經取代之芊基保護基，俱尤 至少一個R為經取代或未經取代之爷基保護基），以產生久 應混合物，接著將反應混合物過濾以提供步驟（a)之浪合 物。 上列剛敘述之方法亦在本發明之範缚内，其中步驟（a)之

-12 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1245045 A7 ---- B7 五、發明説明（9 ) 低級烷基胺為三乙胺。 本發明產生能夠直接自反應介質結晶之產物，不需額外 之純化步驟。此外，本發明所主張之申請專利範圍之方法 尚能提供具有比先前已知方法2- D針狀更穩定之3- D梯形之 晶體幾何之晶體，如溶解動力學所建議者。 可遵循1997年1月7日頒發之美國專利第5,591，842號中所 述之步驟合成化合物I與化合物m。併入本文以供參考。 WO 95/ 30682與美國專利第5,591，842號中所述之方法獲得之 化合物III之粉末係藉由本發明之方法結晶。 如本申請案中所使用者，“高純度，，指獲得之產物具有1 % 或更少之總不純物，以HPLC測量。 “酸性混合物”指具有小於約7.0之pH之混合物。更佳為酸 性混合物之pH小於約2.5。 對於本申請案而言，可使用之酸的型態包括但不限於無 水或水性 HF、HC1、HBr、HI、HN〇3、HC104、硫酸、磷 酸、丙酸、MsOH、TsOH、一磷酸鹽、二磷酸鹽、混合之 磷酸鹽、羧酸、或齒化銨。混合之磷酸鹽可以MiM2HP04為 例，其中1^與M2係獨立選自Η、Na、K、NH4OH、鈉鉀、及 類似者。更佳，酸選自HC1。 本文所述之氫解反應中觸媒之選擇對於熟習此項技藝者 顯然易知。適合之觸媒包含碳ί巴、Pcl(〇H)2、雷尼鎳（Raney Nickel)、鎢觸媒、Rh/A12〇3、及類似者。鈀觸媒較佳，例 如，碳。 “加種晶，，指使溶液曝露至晶體（種晶）以便加速晶體自溶 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210X 297公黄) 1245045

發明説明（1〇 :中沉澱。可藉由添加固態、乾燥形式之種晶完成加種 :^或是可添加液體漿液形式之種晶。“種晶，，可為被誘發 ’儿4之相同化合物之晶體或其可為不同之化合物。在本案 之情况下，以相同化合物之漿體加種晶較佳。 热化”意謂在恆定溫度及恆定體積下使溶液經過某段時 間。本發明中反應經過之時間長短不極重要，除非另有特 別提示，及可輕易被彼等熟習此技藝者所看出。 過濾意渭使溶液通過某介質使得微粒物質被移除。介 貝之選擇非極重要，及一般實施者可輕易選擇。可藉由通 過賽特力（celite)、solka fl〇c、砂、玻璃砂碼、石夕藻土、及 類似者而完成過濾。 “醇”意欲指直鏈或具支鏈之丨至5個碳原子之有機分子， 至少一個羥基為顯著之活性基。醇包含甲醇、丙醇、異丙 醇、丁醇、第二丁醇等。異丙醇為較佳之醇。 ‘‘經取代之苄基保護基，，包括但不限於對基、鄰_ 硝基苄基、對-硝基苄基、對__代苄基（其中鹵素包含氯、 溴、及埃）、2,6-二氣芊基、二苯基甲基、三苯基甲基、及 類似者。進一步適合之保護基可見於peter G Wuts與

Theodora W· Greene 之 Protective Groups in 0rganic Chemistry，John Wiley & Sons 出版，第 3版（1999年）。 本發明包括其中調整濾液之pH至特別範圍之步驟。可使 用任何適合之鹼（例如三乙胺、二異丙基乙基胺、三丁胺、 吡啶、2,6- lutidine、2,4,6-三甲基吡啶、DBU、Dbn、二異 丙基胺、N，N-二甲苯胺、DABC0、N-烷基嗎福啉、及類似 -14」 ^^尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公赞） 1245045 A7 B7 五、發明説明（11 ) 者）調整pH。低級烷基胺鹼較佳。三乙胺最佳。 “漿體”指固體或晶體在液體中之懸浮液。固體在液體中 可為部份、不完全、或完全非溶解性。 不意圖概要 圖A說明經由去保護/結晶方式提供高產率與高純度之產 物之製備生物活性：哚并咔唑：y：之一般化方法，消除在配 方前進一步純化步驟之需要。

示意圖A

iJL . ! .[ - , ', - 欲使所提供之實例^助進一步了解本發明。欲使所使用 之特別材料、物類、及條件進一步說明本發明而非限制其 合理範疇。 實例1 製造化合物1-1之方法見述於WO95/30682 (相當：美國專利 第5,804,564號），併入本文以供參考。 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（12 )

在室溫下以0.5小時之時間將乙醇（14·0 L)逐滴添加至5〇_ L玻璃瓶中之化合物卜i ( i 55 kg，i 44莫耳）、甲苯（5 6 L)、及48% KOH水溶液（4· 15 kg)之雙相混合物中，將内部 溫度保持於30 °C以下。將所得之暗紅色混合物在2〇至3〇。〇 下授拌12小時，在此期間混合物變成均勻紅色溶液。然後 使混合物進一步在-下熟化丨小時，在達此時間時緩慢添 加10%檸檬酸水溶液（23 5 kg)以形成pH 7.7至8·0混合物， 保持内部溫度在5 °C以下。使所得之混合物回暖，及在2 5至 3 〇 C下搜拌7小時，在此期間，週期性添加額外之1 〇 %獰檬 酸水溶液（1·77 kg)以維持pH在7.5至8.0。然後以MTBE (15.5 L)萃取混合物，及以3〇/q NaCn水溶液（2χ3 1 [)及25% NaC1水溶液（3.1 L)洗滌分離之有機層，乾燥（Na2S04)及以 碳（Darco G-60，155 g，室溫，i小時）處理。將濾得之溶液 於真空中濃縮至6升程度，及進行MeCN (2χ 15 L)沖洗，各 次均於真空中濃縮至6升批次體積（殘餘甲苯：9〇/〇)。然後 以MeCN稀釋混合物，形成23 3升溶液，及在22至25。〇下以 〇.〕小時之時間緩慢添加MeOH ( 3·0 L),接著添加使結晶起 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） A7 B7 1245045 玉、發明説明（13 始之產物（1 - 2)之晶種。在此溫度範圍下進一步使所製得之 混合物熟化達1小時，接著以1小時之時間緩慢添加MeOH (17.6 L)。使所得之黃色懸浮液在22至25 °C下熟化1小時， 接著在0至5 °C下進一步熟化3小時。藉由過濾分離晶體’以 9: 1 (v/v)之MeCN/MeOH混合物（15.5 L)洗滌’及在真空 下乾燥獲得1-2。 IH-NMR (270MHz, CDCI3, ppm): 10.79 (1H, br. s,), 9.04 (1H, d, J=9.2Hz), 8.95 (1 H, d，J二9.6Hz), 7.26 (32H, m), 6.17 (2H, d，J二7.31Iz)，5.85 ([H, d，J=8.2Hz), 4.89 (]〇H, m), 4.32 (1H, t, J=8.9Hz), 3,96 (6H, m), 3.13 (1H, d, J=10.2Hz)

Boc-NHNH2 實例2 .OBn

ΟΒπ 2-2

.OBn TEMPO v0Bl1漂白 2-1 .OBn 刀Bn 1) NaBH4/BF3OEt2 HN^^〇Bn N^^OBn 2) HCI; (C〇2H)2 NHBoc 2-3 一 NH2-1/2(C02H)2 2-4 在0°C下以1.5小時之時間將12.1%之NaCIO水溶液（使用之 前用Na2S203水溶液滴定）逐滴添加至50-L玻璃瓶中之1,3-二 爷基氧基-2-丙醇（化合物2-1，1.50 kg，5.51莫耳）、 2,2,6,6-四甲基-1-六氫吡啶基氧基自由基（TEMPO，86.0 g，0.550 莫耳）、MeCN (20.6 L)、及 3% NaHC03 水溶液 (1 5.5 kg ’ 5.5 1莫耳）之攪拌混合物中，將内部溫度保持在〇 至5 °C。將所得之混合物在〇至5。(：下攪拌額外1小時，及在 1〇。(：下以MTBE (甲基第三丁基醚）（41 L)萃取。在10°C下 17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公釐） 1245045 A7 ___B7 五、發明説明（彳4 ) 以10%之Na2S03水溶液（5·0 kg)洗滌分離之有機層，接著在 室溫下以5% NaCl水溶液（3.0 kg)及1% NaCl水溶液（3.0 kg) 洗滌。然後以HPLC分析淡紅色有機層，及經計算含有丨.48 kg (5.49莫耳）所欲之酮（化合物2-2)。然後將溶液放置於 50-L容器中及在真空下（40°C浴）濃縮至約8 L，並以正庚烷 沖洗（2x7.5 L)以獲得庚烷混合物（殘餘MTBE與MeCN分別 為0.005%與0.90%)，接著以正庚烷稀釋形成37 5-L批次體 積。然後使混合物加溫至70 °C，及添加Boc-NHNH2 ( 80 1 g ’ 6.06莫耳）與曱苯（1.5 L)之溶液。在7〇°C以上攪拌所得 之混合物達3小時，接著冷卻至60°C。添加產物（化合物孓3) 之晶種，及在59至61。(：下使所得之混合物熟化達丨小時以使 結晶起始。然後使混合物冷卻至室溫，及熟化過夜。藉由 在20°C下過濾而分離晶體，以正庚烷（7 5 L)接著7 ·· 3 νΛν 之正庚烧/i-PrOH混合物（4.5 L)及正庚烧（4.5 L)洗務，及 在真空下乾燥獲得化合物2 - 3，為無色針狀。 在0 C下逐滴添加化合物2 - 3 ( 1.64 kg，4.27莫耳）與THF (5.9 L)之/谷液至50-L玻璃瓶中之NaBH4 (364 g，9.62莫耳） 與THF ( 7.2 L)之攪拌懸浮液中，將内部溫度保持在$。〇以 下。然後逐滴添加BF3 · 〇Et2 ( 920 g，6.48莫耳）至所得之混 合物中，將内部溫度保持在以下。將所得之無色懸浮 液在0至5°C下攪拌1小時，在達此時間時以丨小時時間逐滴 添加6 N HC1水溶液（4.29 kg，23.5莫耳），保持内部溫度在 20°C以下（注意：放出劇烈氣體）。使所得之無色懸浮液回 暖，及在60至6) C下授拌2小時，直到停止放出氣體為止。 _______-18- •本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（15 ) 然後在3°C下緩慢添加除氣之2N NaOH水溶液（12.9 L，25.8 莫耳）至混合物中，保持内部溫度在20°C以下，接著使所得 之混合物回暖至室溫，及使用除氣MTBE ( 40 L)萃取。以 除氣之水（6.6 L)、接著除氣之鹽水（6.5L)、及除氣之水（3.3 L)洗滌分離之有機層。然後以除氣之MTBE將有機層稀釋形 成57-L溶液，及添加產物（化合物2-4)之晶種，接著以15分 鐘之時間緩慢逐滴添加草酸（1 77 g，1.97莫耳）與除氣之 MTBE ( 1.97 L)之溶液，使產物結晶。在室溫下使所得之無 色漿體熟化過夜，及藉由過濾而分離晶體，以MTBE ( 12.3 L)洗滌，及在真空下乾燥獲得化合物2-4( 1.25 kg，88%， 以HPLC分析：99.9面積0/〇)，為無色片狀。 1 H-NMR (270MHz, DMSO-d6, ppm): 7.41-7.26(m,10H), 5.91-5.62 (br. m, 4H), 4.50 (s, 4H), 3.56 (br. d, J=4.9Hz, 4H), 3.34 (m, JH). 13〇NMR (68MHz, DMSO-c^, ppm)·· 164.7, 138.2, 128.2, 127.5, 127.4, 72.3, 68.3, 59.8 實例3

在22 °C下在22升吹著氮氣之容器中置入DMA ( 8.3 L)、化 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（16 ) 合物W (LOG kg; 〇.94莫耳）、及化合物2_4 (35() g; !屬 莫耳）。#由對容器施加真空(4〇至8〇托耳)5分鐘/循環並且 授拌以將所得之毁錄氣，及填充気氣（三循環）。以财 鐘時間將内容物加熱至机，在該期間溶液變均勻。快速 添加三乙胺(146 ml; L05莫耳），及在饥下使溶液孰化3 小時。使内容物冷卻至45t及轉移至保持在1〇。〇下含有娘 過吹氮氣之MTBE (17.〇 L)i50_L量筒中。將容器之内容物 再次冷卻至10°C，及以1〇分鐘之時間添加經過吹氮氣之水 (4.7 L)以保持内部溫度在3〇t以下。在22t下添加2m鹽酸 (440 ml)至二相混合物中。在22t下攪拌1〇分鐘後，將層 分離，及以水（3x3.8 L)洗滌有機層。在真空中將有機層濃 縮至5 L程度（20至25 t )及進行多次THF沖洗，以移除 MTBE。在真空令移除溶劑，製得所欲之化合物3_ 1 ^ iH-NMR (270MHz, CDCI3, ppm): 10.63 (1H, br. s.), 9.24 (1H, br. d, J=9.6Hz), 9.16 (1H, br. cl, J=9.6Hz), 7.50-6.84 (42H, m) , 6.20 (2H, br. d, J=7.6Hz), 5.84 (1H, d, J=8.6I Iz), 5.33 (1H, br. d, J=3.0Hz), 5.21 (1H, cl, J=12.2Hz), 5.19 (1H, d, J=11.9Hz), 5.16 (III, d, J=12.2Hz)/5.08 (Hi d, J=11.9Hz), 5.08 (1H, d, J=10.9Hz), 4.96 (1H, d, J=l0.9Mz)t 4.89(lH,cU=10*9Hz),4.85(lH, dvJ=10.9Hz)v4.72 (1H, d, J=12.9Hz), 4.68 (1H, cl, J=12.9Hz), 4.62-4.48 (4H, m), 4.33 (lHr ddvJ=9.6, 9.6Hz), 4.06-3.77 (7H, m), 3.72 (4H, d，J=5.6Hz), 3.04 (1H, d，J=9.9Hz). 13C-NMR(68MHz，CDCI3, ppm): 168.8, 168.7, 159.4, 159.3, 143.2, 142.9, 138.0， 137.9, 137.6, 136.9, 136.8, 136.6, 136.0, 130.2, 128.7, 128.6, 128.5, 128.4, 128.3， 128.2, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.6, 127.5, 127.4, 127.3, 126.9, 126.6, 119.4, 119.1，118.0,116.9, 116.7, 116.1，110.4, 96.7, 96.3, 85.8, 84.7, 80.9， 77.4, 77.2, 76.0, 75.9, 75.4, 74.9, 73.9, 73.3, 73.2, 70.7, 70·4, 69.9, 69.8, 66.7, 58.7， 49.4, 30.9, 27.0 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210 x 297公釐) 1245045 A7 B7 五、發明説明（17 實例4 注意··此反應之產物化合物4- 1係細胞毒性化合物

將碳鈀（10% Pd，50%濕度，112 g)置於5加侖高壓蚤 中’接著置入12-β-0-(2,3,4,6-四-0-爷基吹°南葡糖基）-12，1 3-二氫-2,10-二芊基氧基-6-[[-(2-芊基氧基-1-(芊基氧 基甲基）乙基]胺基]-5H-啕哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7(6H)-二酮（3-1)之THF (四氫呋喃）溶液（175 g/L溶液； 6.4 L ; 1.12 測試 kg)、異丙醇（ΙΡΑ)(7·9 L)、及 3 N HC1 (224 mL)。在40°C/40 psi下，快速攪拌4至14小時，在此攪 拌期間，吸收110%理論量之氫，使内容物氫化。使内容物 冷卻至 25°C，及以 3/2 1PA/THF (1x3 L)清洗經solka floe床 過濾之反應混合物。使用1 Μ三乙胺於IPA (約600 mL)將濾 液之pH調整至2.5 (範圍：1.5至6.5)，接著添加水（4.0 L)。 在大氣壓下將該批次濃縮至7.5 L程度。在饋入4/1 IPA/水 (6.5 L)時，在恆定之批次體積下連續蒸餾。藉由饋入 IPA(約9 L)至容器中使水含量降至20% (w/v)( 10至30%範圍 之水），同時保持批次體積在7.5 L。使内容物冷卻至70°C， 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（18 ) 及添加IPA漿體形式（50 mL)之晶種（5.0 g)。在70°C下保持 達1小時，接著以90分鐘之時間添加IPA (5.0 L)。在70°C下 熟化9至24小時，在該期間，產物結晶。進行jpa ( 1 7 L)之 怪定體積蒸餾饋料，導致水含量降至3 % ( w/ v) ( 1至10%範圍 之水）降低。使漿體在70°C下熟化3至6小時，接著冷卻至22 C及熟化1小時。將漿體過濾及以ipA (2.5 L)及然後甲醇 (1.5 L)洗滌濾餅，接著在38°C下真空乾燥6小時以提供產物 4- 1，為橘色固體，純度大於99 A%及產率大於80%。 NMR數據（偶合常數（J)，以赫茲表示）： iH NMR (400.13 MHz, DMSO-^)-.主要轉動之數據 δ 11.23 (s，1H)，9.80 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 8.90 (d, J = 8.4, 1H), 8.82 (d, J = 8.4, 1H), 7.21 (br s, 1H), 7.01 (br s，1H)，6,84 (重疊.m，2H), 6·00 (d，= 8.0, 1H)，5.88 (t，J = 3.6, iH), 5.57 (d, J =2.4, IH), 5.34 (d, J = 4.4, IH), 5.13 (d, J = 4.4, 1H), 4.94 (d, J = 4.4, 1H), 4.56 (1, J = 5.6, 2H), 4.04 (dd, J = 11.2, 3.2, iH), 3.95 (重憂 m, 2H), 3.81 (dd, 7 = U).4,4,0, 1H)，3.53(重叠 m，6H); i3c NMR (100.64 MHz, DMSO^)-主要轉動之數據 δ 169,03, 168.94， 157.79, 157.63, 144.38, 143.12, 129.46, 127.92, 125.19 (2C)，118.91，117.57, 115.94， 114.32，114.23，i 13.92, U0.30, 110.24, 97.54, 97.49, 84.49, 78.39, 76.77, 72.88， 67.53, 62.59, 60.47 (2C)，58.33.21 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 x 297公釐） 1245045 A7 B7 五、發明説明（ 19 ) HPLC分析 HPLC參數： 管柱： YMC ODS-AQ (25〇χ4.6 mm) 流速： 1 . 5 m L /分鐘 偵測： 2 2 8 n m 流動相： A = 0 · 1 % H3PO4 水溶液 B =乙腈 梯度： 分鐘 A(%) B(%) 0 85 15 40 74 26 60 3 0 7 0 6 1 85 15 65 85 15 注射體積： 10 pL '溫度 . 2 5〇C -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）

Claims (1)

1. A8 B8 C8 D8 1245祕5l06306號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(94年8月） 申請專利範圍 1. 一種製備高純度化合物I晶體之方法

   HO 其包括下列步驟： (a) 藉由添加驗而調整基本上由酸、醇、水、及化合物 I組成之酸性混合物之pH，以產生具有pH在1.5至6.5之範 圍之溶液； (b) 將來自步驟（a)之溶液溫度保持在50°C至100°C之範 圍；及 (c) 分離化合物I晶體。 2. —種製備高純度化合物I晶體之方法， 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) A8 B8 C8 D8 1245045 申請專利範圍 HN

   OH OH

   其包括下列步驟： (a) 藉由添加驗而調整基本上由酸、醇、水、及化合物 I組成之酸性混合物之pH，以產生具有pH在1.5至6.5之範 圍之溶液； (b) 以醇調整來自步驟（a)之溶液，使得溶液為10% w/v至30% w/v之水於醇中及化合物I之濃度為1〇 mL/g至 20 mL/g ; (c) 將來自步驟（b)之溶液溫度調整至50°C至100°C之範 圍之溫度； (d) 將醇添加至來自步驟（c)之溶液，使得溶液被稀釋 為3 : 2 (溶液：醇）； (e) 在50°C至100°C之範圍之溫度下熟化（aging)來自 (d)之溶液，直到化合物I晶體形成而產生漿體為止；及 (f) 分離化合物I晶體。 3 ·根據申请專利範圍弟2項之方法’其進一步包括經由在 -2 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 8 8 8 8 A B CD- 1245045 申請專利範圍 觸媒存在下氫化而使中間物II去保護：

   (其中R獨立為氫或經取代或未經取代之芊基保護基，但 是至少一個R為經取代或未經取代之芊基保護基），以產 生反應混合物，接著將反應混合物過濾以提供步驟（a) 之混合物。 4·根據申請專利範圍第3項之方法，其中R為苄基。 5. —種製備高純度化合物III之方法， HN- -OH -OH

   OH -3 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1245045 A8 B8 C8 D8

   六、申請專利範 其包括下列步驟： (a) 藉由添加驗而調整基本上由酸、醇、水、及化合物 III組成之酸性混合物之pH，以產生具有pH在1.5至6.5之 範圍之溶液； (b) 以醇調整來自步驟（a)之溶液，使得溶液為1 〇% w/v至30% w/v之水於醇中及化合物ΙΠ之濃度為1〇 mL/g 至 20 mL/ g ; (c) 將來自步驟（b)之溶液溫度調整至5〇°C至l〇〇°c之範 圍之溫度； (d) 加種晶至溶液中； (e) 將醇添加至溶液中，使得溶液被稀釋為3 : 2 (溶 液：醇）； (f) 在50°C至100°C之範圍之溫度下熟化（aging)來自 之溶液，直到化合物III晶體形成而產生漿體為止；及 (g) 分離化合物III晶體。 6·根據申請專利範圍第5項之方法，其進一步包括經由在 觸媒存在下氮化而使中間物II去保護： -4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1245045 A8 Β8 C8

   (曰其中R獨立為氫或經取代或未經取代之苄基保護基，但 疋至少一個R為經取代或未經取代之苄基保護基），以產 生反應混合物，接著將反應混合物過濾以提供步驟 之混合物。 7·根據申請專利範圍第5或6項之方法，其中將步驟之 PH凋整至ι·5至3·5之範圍之pH;調整之溶液，使得溶 液為15% w/v至25% w/v之水於醇中及化合物m之濃度 為12 mL/g至18 mL/g ;及將步驟（c)之溫度調整至7〇 °C。 8. 根據申請專利範圍第7項之方法，其中將步驟（…之^^調 整至2.5之pH ;調整（b)之溶液，使得溶液為2〇% w/v之 水於醇中及化合物πι之濃度為15 mL/g ;及將步驟（c)之 溫度調整至70°C。 9. 根據申請專利範圍第8項之方法，進一步包括在步驟（f) 後调整漿體之步驟，使得在步驟（g)分離化合物ΠΙ晶體 之前水含量降至1% w/v至10% w/v之範圍。

   A8 B8 C8 D8

   1245045 六、申請專利範圍 10·根據申請專利範圍第5項之方法，其包括下列步驟： (a) 藉由添加c i - C 6烷基胺鹼而調整基本上由酸、醇 水、及化合物III組成之酸性混合物之pH，以產生具 ρΗ2·5之溶液； 、 (b) 以異丙醇調整來自步驟（a)之溶液，使得溶液為 20% w/v之水於異丙醇中及化合物ΙΠ之濃度為^ mL/g ； (c) 將來自步驟（b)之溶液溫度調整至7〇°c之溫度； (d) 加種晶至溶液中； (e) 將異丙醇添加至溶液中，使得溶液被稀釋為3 : 2 (溶液：異丙醇）； (f) 在70C之溫度下熟化（aging)來自（e)之溶液，直 到化合物III晶體形成而產生漿體為止； (g) 调整漿體使得水含量為3% w/ v ; (h) 在冷卻至22 °C前，在70 °C下熟化（aging)漿體；及 (i) 分離化合物III晶體。 11.根據申請專利範圍第1〇項之方法，其進一步包括經由在 觸媒存在下氫化而使中間物II去保護： -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公 1245045 C8 D8