TW202039457A

TW202039457A - 一類含氟取代的苯并噻吩類化合物及其藥物組合物及應用

Info

Publication number: TW202039457A
Application number: TW108148626A
Authority: TW
Inventors: 張翱; 耿美玉; 丁春勇; 謝作權; 丁健; 張燕; 沈安成; 王璽淵
Original assignee: 大陸商上海海和藥物研究開發有限公司; 中國科學院上海藥物研究所
Priority date: 2019-01-02
Filing date: 2019-12-31
Publication date: 2020-11-01
Also published as: CA3125505C; CA3125505A1; KR102606167B1; JP7329052B2; AU2019419663B2; US20220089561A1; JP2022516922A; BR112021013099A2; EP3907221A4; WO2020140894A1; KR20210123314A; CN111393405B; CN111393405A; TWI794576B; AU2019419663A1; EP3907221A1

Abstract

本發明涉及一類含氟取代的苯并噻吩類化合物及其藥物組合物及應用。具體地，本發明化合物具有式I所示結構，其中各基團和取代基的定義如說明書中所述。本發明還公開了所述化合物的製備方法及其在抗腫瘤方面的用途。

Description

一類含氟取代的苯并噻吩類化合物及其藥物組合物及應用

本發明涉及醫藥領域，具體地涉及一類含氟取代的苯并噻吩類化合物及其藥物組合物及應用。

作為細胞因子訊號通路的調節者，干擾素基因刺激蛋白與多種疾病的病理及臨床表症密切相關，包括感染性疾病、癌症和自身免疫病。該蛋白是一種跨膜蛋白，通常在152-173位區域交接形成二聚體並處於自我抑制狀態。當受到部分配體，如環二核苷酸的刺激後，分子構型發生變化並被活化，招募細胞質中的TANK結合激酶1（TANK-binding kinase 1，TBK1），介導TBK1對IRF3的磷酸化，導致干擾素（interferon，IFN）-β和其它多種細胞素的形成，並通過一系列的級聯反應，活化適應性免疫系統，活化T細胞。一般情況下，干擾素基因刺激蛋白的正常活性維持免疫系統的正常功能，其活性缺失導致免疫缺陷，而過度活化會導致免疫過激。

腫瘤微環境（TME）天然免疫的訊號傳導是腫瘤特異性T細胞的活化和腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）浸潤的關鍵步驟。其中Ⅰ型IFN對腫瘤活化的T細胞活化起著關鍵作用。STING激動劑不僅誘導Ⅰ型干擾素基因的表達，在天然免疫訊號通路中起著重要作用；它還能活化包括樹突狀細胞等免疫刺激細胞，改變腫瘤微環境並誘導了腫瘤特異性T細胞的產生，進而殺死腫瘤細胞。

環鳥苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)/STING訊號通路的正常活化不光可以誘導細胞因子的生成、活化靶向腫瘤的T細胞，還可引發機體對腫瘤細胞的免疫應答，進而增強腫瘤放化射療法的療效，如cGAS可感知被殺死的腫瘤細胞釋放的DNA，來活化STING來誘導樹突狀細胞產生Ⅰ型干擾素，進而活化潛在的抗腫瘤免疫反應，增強放化射療法療效。

干擾素基因刺激蛋白激動劑在與其他免疫檢查點抑制劑聯合用藥方面顯示出一定潛力。儘管目前針對免疫檢查點PD-1/PD-L1已經有兩個單株抗體藥物成功上市，但是這類藥物總體存在效率相對較低，大約只有20–30%。PD-1/L1抑制劑能夠解除T細胞的活化抑制，但是如果腫瘤內部/附近並不存在T細胞，那麼該類藥物也很難發揮療效，這也是該類藥物總體存在效率低的部分原因。這樣，患者需要在使用該類藥物之前就存在免疫反應，這樣檢查點抑制才能發揮作用。而固有免疫系統恰好能夠完成這一任務。因此，活化干擾素基因刺激蛋白能夠為T細胞的活化和增殖提供基礎，然後再使用檢查點抑制劑就可以使T細胞有足夠的能力清除體內的腫瘤細胞。

綜上所述，活化干擾素基因刺激蛋白，誘導Ⅰ型干擾素的產生，成為抗腫瘤免疫領域中極具潛力的研究方向。目前已報導的對人源和鼠源都有效的干擾素基因刺激蛋白激動劑主要為環二核苷酸（CDN）類化合物，如ADU-S100、MK-1454等已經進入一期臨床研究，但該類化合物結構複雜、不易合成，更重要的是存在代謝不穩定、不良反應率高等缺點，導致目前該藥的給藥方式主要為瘤內注射，極大地限制其臨床應用。

因此，需要進一步開發結構簡單、合成方便、代謝穩定、安全性高的新型小分子，活化干擾素基因刺激蛋白，誘導Ⅰ型干擾素IFN-β的產生。

本發明的目的在於提供一種式I所示化合物及其製備方法和其在抗腫瘤方面的用途。

本發明的第一方面，提供了一種式I所示化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，

式I 其中， R¹ 和R² 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、鹵素、胺基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷氧基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基；或者R¹ 和R² 與它們連接的碳原子一起形成5-14員雜環基；所述R¹ 和R² 中的取代指獨立地被選自下組的一個或多個取代基取代：鹵素、胺基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基； X¹ 和X² 獨立地選自下組：H、D、鹵素、未取代的或鹵素取代的C1-C6烷基、未取代的或鹵素取代的C1-C6烷氧基、腈基； X³ 選自下組：氫、鹵素、羥基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基； n為選自0、1、2、3、4、5、6、7、8的整數； Y選自下組：-OR³ 、-N(X⁴ R⁴ )R⁵ ，其中， X⁴ 選自下組：O、S、NH； R³ 選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基； R⁴ 和R⁵ 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、C6-C10芳氧基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基；所述R³ 、R⁴ 和R⁵ 中的取代指獨立地被選自下組的一個或多個取代基取代：鹵素、羥基、胺基、羧基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基。

在另一優選例中，當R¹ 和R² 與它們連接的碳原子一起形成5-14員雜環基時，所述5-14員雜環基為含1-4個O的雜環基，優選為含2個O的雜環基。

在另一優選例中，所述“5-14員雜環基”為含2個O的環烷氧基。

在另一優選例中，X³ 為鹵素。

在另一優選例中，X³ 為氟。

在另一優選例中，X² 為氫或氟。

在另一優選例中，n為選自0、1、2的整數。

在另一優選例中，Y選自下組：-OR³ 、-N(X⁴ R⁴ )R⁵ ，其中， X⁴ 選自下組：O、NH； R³ 選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基； R⁴ 和R⁵ 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、C6-C10芳氧基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基；所述R³ 、R⁴ 和R⁵ 中的取代指獨立地被選自下組的一個或多個取代基取代：鹵素、羥基、胺基、羧基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基。

在另一優選例中，所述化合物選自表1所列化合物。

本發明的第二方面，提供了一種本發明第一方面所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽的製備方法，所述方法選自下組：方法一：

將式A化合物與DAST反應，得到式B化合物；其中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、n、Y、X³ 如本發明第一方面所定義；方法二：

將式C化合物和式D化合物或其鹽酸鹽反應，得到式E化合物；其中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、X³ 、n、R³ 、X⁴ 、R⁴ 和R⁵ 如本發明第一方面所定義。

在另一優選例中，方法一中，所述式A化合物在與DAST反應前經還原處理。

在另一優選例中，所述還原處理是指將式A化合物中與苯并噻吩結構連接的羰基還原為羥基。

本發明的第三方面，提供了一種藥物組合物，包含： (i) 一種或多種治療有效量的本發明第一方面所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽；和 (ii) 藥學上可接受的載體。

在另一優選例中，所述藥物組合物為注射劑、囊劑、片劑、丸劑、散劑或顆粒劑。

在另一優選例中，所述藥物組合物還包含一種或多種第二治療劑，所述第二治療劑為預防和/或治療癌症的藥物。

在另一優選例中，所述第二治療劑為傳統細胞毒化療藥物或其他抗腫瘤免疫藥物。

本發明的第四方面，提供了一種本發明第一方面所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽或本發明第三方面所述的藥物組合物的用途，用於製備製劑，所述製劑用於預防和/或治療與Ⅰ型干擾素相關的疾病。

在另一優選例中，所述Ⅰ型干擾素為IFN-β。

在另一優選例中，所述與Ⅰ型干擾素相關的疾病選自下組：感染性疾病、癌症、自身免疫病。

在另一優選例中，所述癌症選自下組：乳腺癌、卵巢癌、肝癌、黑色素瘤、前列腺癌、結腸癌、胃癌。

本發明的第五方面，提供了一種干擾素基因刺激蛋白激動劑，包含一種或多種本發明第一方面所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽。

本發明的第六方面，提供了一種預防和/或治療與Ⅰ型干擾素相關的疾病的方法，包括步驟：將治療有效量的一種或多種本發明第一方面所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽或本發明第三方面所述的藥物組合物施用於所需患者。

應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在此不再一一累述。

本發明人經過長期而深入的研究，意外地製備了一種結構簡單、合成方便、代謝穩定、安全性高的式I所示化合物，所述化合物對干擾素基因刺激蛋白具有優異的活化性能，從而活化T細胞並顯著促進干擾素因子IFN-β的表達，進而實現對腫瘤及其併發症的有效治療。在此基礎上，發明人完成了本發明。

術語

在本發明中，除非特別指出，所用術語具有本領域技術人員公知的一般含義。

在本發明中，術語“鹵素”指F、Cl、Br或I。

在本發明中，“C1-C6烷基”是指包括1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、新戊基、三級戊基、己基或類似基團。

在本發明中，術語“C3-C8環烷基”是指在環上具有3至8個碳原子的環狀烷基，非限制性地包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基等。

在本發明中，術語“芳環”或“芳基”具有相同的含義，優選為“C6-C10芳基”。術語“C6-C10芳基”是指在環上不含雜原子的具有6至10個碳原子的芳香族環基，如苯基、萘基等。

在本發明中，術語“雜環芳基”或“雜芳基”具有相同的含義，指包含一個到多個雜原子的雜芳族基團。例如“C3-C10雜芳基”是指含有1~4個選自氧、硫和氮中的雜原子以及3-10個碳原子的芳香雜環。非限制性例子包括：呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡唑基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡𠯤基、咪唑基、四唑基等。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環。雜芳基可以是任選取代的或未取代的。

在本發明中，術語“鹵代”是指被鹵素取代。

在本發明中，術語“C2-C6烯基”是指具有2至6個碳原子的含有一個雙鍵的直鏈或支鏈烯基，非限制性地包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、異丁烯基、戊烯基和己烯基等。

在本發明中，術語“C2-C6炔基”是指具有2至6個碳原子的含有一個三鍵的直鏈或支鏈炔基，非限制性地包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、異丁炔基、戊炔基和己炔基等。

在本發明中，術語“C1-C6烷氧基”是指具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基和丁氧基等。優選為C1-C4烷氧基。

在本發明中，術語“取代”指特定的基團上的一個或多個氫原子被特定的取代基所取代。特定的取代基為在前文中相應描述的取代基，或各實施例中所出現的取代基。除非特別說明，某個取代的基團可以在該基團的任何可取代的位點上具有一個選自特定組的取代基，所述的取代基在各個位置上可以是相同或不同的。本領域技術人員應理解，本發明所預期的取代基的組合是那些穩定的或化學上可實現的組合。所述取代基例如(但並不限於)：鹵素、羥基、羧基(-COOH)、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、3-12員雜環基、芳基、雜芳基、C1-C8醛基、C2-C10醯基、C2-C10酯基、胺基、C1-C6烷氧基、C1-C10磺醯基等。

在本發明中，術語“磺酸基”具有如下結構：

。

在本發明中，術語“磷醯基”具有如下結構：

。

化合物

本發明提供了一種式I所示化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，

式I

其中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、X³ 、n、Y如上文所定義。

在另一優選例中，所述的化合物中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、X³ 、n、Y中任一個分別為表1中所述具體化合物中所對應的基團。

在另一優選例中，所述化合物優選為實施例中所製備的化合物。

在另一優選例中，所述化合物選自表1所列化合物。【表1】

化合物編號	結構	化合物編號	結構
S1		S2
S3		S4
S5		S6
S7		S8
S9		S10
S11		S12
S13		S14
S15		S16
S17		S18
S19		S20
S21		S22
S23		S24
S25		S26
S27		S28
S29		S30
S31		S32
S33

鹽型

如本文所用，術語“藥學上可接受的鹽”指本發明化合物與酸或鹼所形成的適合用作藥物的鹽。藥學上可接受的鹽包括無機鹽和有機鹽。一類優選的鹽是本發明化合物與酸形成的鹽。適合形成鹽的酸包括但並不限於：鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有機酸；以及脯胺酸、苯丙胺酸、天冬胺酸、谷胺酸等胺基酸。

另一類優選的鹽是本發明化合物與鹼形成的鹽，例如鹼金屬鹽(例如鈉鹽或鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鎂鹽或鈣鹽)、銨鹽(如低級的烷醇銨鹽以及其它藥學上可接受的胺鹽)，例如甲胺鹽、乙胺鹽、丙胺鹽、二甲基胺鹽、三甲基胺鹽、二乙基胺鹽、三乙基胺鹽、第三丁基胺鹽、乙二胺鹽、羥乙胺鹽、二羥乙胺鹽、三羥乙胺鹽，以及分別由嗎啉、哌𠯤、離胺酸形成的胺鹽。

術語“溶劑合物”指本發明化合物與溶劑分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本發明化合物與水進行配位形成的配合物。

術語“前藥”包括其本身可以是具有生物學活性的或非活性的，當用適當的方法服用後，其在人體內進行代謝或化學反應而轉變成式I的一類化合物，或式I的一個化合物所組成的鹽或溶液。所述的前藥包括(但不局限於)所述化合物的羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、碸酯、亞碸酯、胺基化合物、胺基甲酸鹽、偶氮化合物、磷醯胺、葡萄糖苷、醚、乙縮醛等形式。

製備方法

下面更具體地描述本發明式I結構化合物的製備方法，但這些具體方法不對本發明構成任何限制。本發明化合物還可以任選將在本說明書中描述的或本領域已知的各種合成方法組合起來而方便地製得，這樣的組合可由本發明所屬領域的技術人員容易地進行。

典型地，本發明化合物的製備工藝流程如下，其中所用原料和試劑如無特殊說明，均可通過商業途徑購買。

示例性地，所述化合物的製備方法選自下組：

方法一：

將苯并噻吩與環酸酐反應得到酸(A)，然後進行甲酯化得(B)，再進行羰基硫化得(C)，進一步在二氟化試劑條件下得(D)，甲酯水解得(E)，最後與HY縮合得(F)；其中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、n、Y如上文中所限定；

方法二：

將(B)與選擇性氟試劑Selectfluor反應得(G)，再與勞森試劑反應得(H)，再進一步與DAST反應得(I)，水解得(J)，最後與HY縮合得(K)；其中，X² =H；R¹ 、R² 、X¹ 、n、Y如上文中所限定；

方法三：

將(B)在Pd/C條件下進行氫化還原得(L)，再與DAST反應得到(M)，進一步水解得(N)，最後與HY進行縮合得(O)；其中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、n、Y如上文中所限定。

藥物組合物和施用方法

本發明還提供了一種藥物組合物，包含： (i) 一種或多種治療有效量的所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽；和 (ii) 藥學上可接受的載體。

由於本發明化合物具有優異的抗腫瘤活性，因此本發明化合物及其各種晶型，藥學上可接受的無機或有機鹽，水合物或溶劑合物，以及含有本發明化合物為主要活性成分的藥物組合物可用於治療、預防以及緩解與腫瘤相關的疾病。

本發明的藥物組合物包含安全有效量範圍內的本發明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明顯改善病情，而不至於產生嚴重的副作用。治療有效量根據治療對象的年齡、病情、療程等來確定。通常，藥物組合物含有1-2000mg本發明化合物/劑，更佳地，含有10-1000mg本發明化合物/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個膠囊或藥片。

所述的“藥學上可接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質，它們適合於人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性。“相容性”在此指的是組合物中各組分能和本發明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學上可以接受的載體部分例子有糖（如葡萄糖、蔗糖、乳糖等），澱粉（如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉等），纖維素及其衍生物（如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等），明膠，滑石，固體潤滑劑（如硬脂酸、硬脂酸鎂），硫酸鈣，植物油（如豆油，芝麻油，花生油，橄欖油等），多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等），乳化劑（如吐溫）、潤濕劑（如十二烷基硫酸鈉），著色劑，調味劑，穩定劑，抗氧化劑，防腐劑，無熱原水等。

本發明化合物或藥物組合物的施用方式沒有特別限制，代表性的施用方式包括(但並不限於)：口服、瘤內、直腸、腸胃外(靜脈內、肌肉內或皮下)、和局部給藥。

用於口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a) 填料或增容劑，例如，澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和矽酸；(b) 黏合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c) 保濕劑，例如，甘油；(d) 崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯澱粉或木薯澱粉、藻酸、某些複合矽酸鹽、和碳酸鈉；(e) 緩溶劑，例如石蠟；(f) 吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g) 潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h) 吸附劑，例如，高嶺土；和(i) 潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩衝劑。

固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可採用包衣和殼材製備，如腸衣和其它本領域公知的材料。它們可包含不透明劑，並且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內的某一部分中釋放。可採用的包埋組分的實例是聚合物質和蠟類物質。必要時，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。

用於口服給藥的液體劑型包括藥學上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領域中常規採用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質的混合物等。

除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。

除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質的混合物等。

用於腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用於重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。

用於局部給藥的本發明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。活性成分在無菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩衝劑，或必要時可能需要的推進劑一起混合。

本發明中的上述通式I所示的苯并噻吩衍生物和其藥學上可接受的鹽可以單獨給藥，或者與其他藥學上可接受的治療劑聯合給藥，特別是與傳統的細胞毒化療藥物、腫瘤免疫檢查點抑制劑的藥物組合。所述藥學上可接受的治療劑包括但不限於，同通式I所示的苯并噻吩衍生物聯合用藥的其他可接受的治療劑，例如，免疫檢查點抑制劑單株抗體藥物Opdivo和Keytruda，直接作用於T細胞表面PD-1蛋白，中斷PD-1/PD-L1相互結合的；以及傳統細胞毒化療小分子藥物，如影響核酸合成的抗腫瘤藥物胺甲蝶呤(MTX)、5-氟尿嘧啶(5FU)等，影響核酸轉錄的抗腫瘤藥物如阿黴素、表阿黴素、阿克拉黴素、光輝黴素等，作用於微管蛋白合成的抗腫瘤藥物如紫杉醇、長春瑞濱等，芳香化酶抑制劑如胺麩精等，細胞訊號通路抑制劑如表皮生長因子受體抑制劑伊馬替尼（Imatinib）、吉非替尼（Gefitinib）、埃羅替尼（Erlotinib）、拉帕替尼（Lapatinib）等。該組合的各成分可同時或順序地給予，以單一製劑形式或以不同製劑的形式給予。所述組合不僅包括本發明的化合物和一種其它活性劑的組合，而且包括本發明的化合物和兩種或更多種其它活性劑的組合。

本發明治療方法可以單獨施用，或者與其它治療手段或者治療藥物聯用。

使用藥物組合物時，是將安全有效量的本發明化合物適用於需要治療的哺乳動物(如人)，其中施用時劑量為藥學上認為的有效給藥劑量，對於60 kg體重的人而言，日給藥劑量通常為1～2000 mg，優選50～1000 mg。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫師技能範圍之內的。

與現有技術相比，本發明具有以下主要優點：

（1）所述化合物具有結構簡單、易於合成、代謝穩定、安全性高、給藥方式多樣的特點；

（2）所述化合物對干擾素基因刺激蛋白具有優異的活化性能，從而活化T細胞並顯著促進干擾素因子IFN-β的表達，進而實現對腫瘤及其併發症的有效治療；

（3）相對於TW201817723A（US20180093964）公開化合物1a ，所述化合物對干擾素基因刺激蛋白具有顯著提高的激動活性，約有2-2.5倍的增強；此外，本專利化合物S2在藥物代謝動力學性質方面亦明顯優於TW201817723A（US20180093964）公開化合物1a ，特別是靜脈注射時的血漿暴露量約為1a 的4.4倍。

下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述，但這些實施例並不限制本發明的範圍。

對於以下實施例，可以使用本領域技術人員已知的標準操作和純化方法。除非另有規定，否則原料通常是從市售來源可獲得的，比如Aldrich Chemicals Co.和Acros Organics。商購的溶劑和試劑一般在不進一步純化的情況下使用，無水溶劑均通過標準方法處理，其他試劑為市售分析純。除非另有說明，所有溫度以℃(攝氏度)表示，室溫或環境溫度是指20～25℃。化合物的結構通過核磁共振譜(NMR)來確定的。核磁共振氫譜位移(δ)以百萬分之一(ppm)的單位給出。核磁共振氫譜用AVANCE III 400 MHz型核磁共振儀測定，氘代二甲基亞碸(DMSO-d ₆ )、氘代氯仿(CDCl₃ )、氘代甲醇(CD₃ OD)為溶劑，四甲基矽烷(TMS)為內標。

層析柱一般使用200~300目矽膠為載體。

在上述討論和下述實施例中，下列縮寫具有如下含義。如果某一縮寫沒有定義，則它具有通常被接受的含義。

RT為室溫；

DIPEA為N ，N -二異丙基乙胺；

THF為四氫呋喃；

TBTU為O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸；

Selectfluor為1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸)鹽；

DAST為二乙胺基三氟化硫。

一、化合物製備例部分

以下製備例示例性的製備了本發明的部分式I化合物，各化合物分別以S1 至S33 表示。

1. 化合物 S1 的合成

步驟1：稱取丁二酸酐（1.55g, 15.44 mmol）、三氯化鋁（2.75g, 20.6 mmol）溶於10 mL 1,2-二氯乙烷中，置零下10℃攪拌；將5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩（2.0 g, 10.30 mmol）溶於40 mL 1,2-二氯乙烷中，逐滴滴入上述反應液中，持續30 min；滴畢，繼續攪拌10 min中後轉移至45℃油浴鍋中反應過夜。TLC檢測反應完畢後，將反應液倒入冰水中，加入60 mL 15%鹽酸溶液，攪拌使產物析出，抽濾得粗產品。二氯甲烷再結晶後得純品1a （2.35 g, 產率77.6%）。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 12.18 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.25 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 2.58 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。

步驟2：將化合物1a （1 eq）溶於甲醇中，於0℃下滴加氯化亞碸（5 eq），而後移至室溫反應4小時。反應結束後將溶劑旋乾，加入少量水並用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物1b 。

步驟3：將化合物1b （1 eq）溶於二氯甲烷中，冰浴下加入DAST（5 eq），約10分鐘後升溫至45℃反應兩小時，待反應液冷卻至室溫後，冰浴下用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯萃取，過柱分離純化得化合物S1 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.34 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.72 – 2.61 (m, 2H), 2.61 – 2.55 (m, 2H); MS (EI): 330.0。

2. 化合物 S2 的合成

將化合物S1 （1 eq）溶於四氫呋喃：水（1：1）的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰一水合物（3 eq），於室溫下反應半小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化得化合物S2 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.35 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 2.70 – 2.58 (m, 4H); MS (EI): 316。

3. 化合物 S3 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於異丙醇中，於0℃下滴加氯化亞碸（5 eq），而後移至室溫反應4小時。反應結束後將溶劑旋乾，加入少量水並用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S3 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.85 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.68 (m, 1H), 3.31 (t, 2H,J = 6.8 Hz), 2.78 (t, 2H,J = 6.8 Hz), 1.13 (d, 6H,J = 4.0 Hz); MS (EI): 358。

4. 化合物 S4 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入肼鹽酸鹽（1.0 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S4 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.82 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.08 (br, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 2.62 – 2.53 (m, 4H); MS (EI): 330。

5. 化合物 S5 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入鹽酸羥胺（1.0 eq），縮合劑TBTU（3 eq），N ,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S5 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ +CD₃ OD) δ 7.39 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 2.59 – 2.50 (m, 4H)；MS (EI): 331。

6. 化合物 S6 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入N -甲基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S6 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 10.01 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 2.67 – 2.53 (m, 4H)；MS (EI): 345。

7. 化合物 S7 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入N -二氟甲基羥胺（1.0 eq），縮合劑TBTU（3 eq），N ,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S7 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.94 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.20 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.38 (t, 2H,J = 8.0 Hz), 2.97 (t, 2H,J = 8.0 Hz)；MS (EI): 381。

8. 化合物 S8 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N ,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入N -烯丙基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S8 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.10 (brs, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.61 (m, 1H), 5.33 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.70 (d, 2H,J = 6.2 Hz), 2.65 – 2.54 (m, 4H)；MS (EI): 371。

9. 化合物 S9 的合成

將化合物S8 （1 eq）溶於1,4-二氧六環中，而後加入二羥化混合物試劑AD-Mix-β（1.5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用二氯甲烷萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S9 。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD) δ 8.30 (brs, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.84 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 2.62 – 2.55 (m, 4H)；MS (EI): 405。

10. 化合物 S10 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-異丙基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S10 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.85 (s, 1H), 7.28 (brs, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.23 (m, 1H), 2.65 – 2.60 (m, 4H), 1.10 (d, 6H,J = 4.0 Hz)；MS (EI): 373。

11. 化合物 S11 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-苄基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S11 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.82 (s, 1H), 7.73 (brs, 1H), 7.37-7.3 (m, 5H), 7.23 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 2.59 – 2.53 (m, 4H), MS (EI): 421。

12. 化合物 S12 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-二氟苄基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S12 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.90 (s, 1H), 7.76 (brs, 1H), 7.59-7.52 (m, 5H), 7.38 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 2.68 – 2.62 (m, 4H), MS (EI): 457。

13. 化合物 S13 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-吡啶亞甲基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S13 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.45 (s, 1H), 8.17 (d, 1H,J = 7.5 Hz), 7.82 (s, 1H), 7.79 (d, 1H,J = 7.5 Hz), 7.70 (brs, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 2.66 – 2.59 (m, 4H), MS (EI): 422。

14. 化合物 S14 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-苯基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S14 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.00 (s, 1H), 7.79 (brs, 1H), 7.50-7.42 (m, 5H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 2.62 – 2.54 (m, 4H); MS (EI): 407。

15. 化合物 S15 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-環丙基羥胺鹽酸鹽（1.0 eq），縮合劑TBTU（3 eq），N ,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S15 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.94 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.28 (m, 1H), 2.61 – 2.52 (m, 4H), 0.94 (m, 4H); MS (EI): 371。

16. 化合物 S16 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入磺酸羥胺鹽酸鹽（1.0 eq），縮合劑TBTU（3 eq），N ,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S16 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ +CD₃ OD) δ 11.89 (brs, 1H,), 7.40 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 2.67 – 2.58 (m, 4H); MS (EI): 411。

17. 化合物 S17 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入甲氧基胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S17 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.54 (brs 1H), 7.87 (s, 1H), 7.20 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.69 – 2.60 (m, 4H)；MS (EI): 345。

18. 化合物 S18 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入O-苯基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S18 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.33 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.24 – 6.95 (m, 6H), 3.96 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 2.67 – 2.59 (m, 4H); MS (EI): 407。

19. 化合物 S19 的合成

步驟1：將化合物1b （1 eq）溶於乙腈中，於室溫下加入選擇性氟試劑Selectfluor，反應過夜。反應結束後用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯萃取，而後收集有機相過柱純化得化合物19a 。

步驟2：將化合物19a （1 eq）溶於二氯甲烷中，冰浴下加入DAST（5 eq），約10分鐘後升溫至45℃反應兩小時，待反應液冷卻至室溫後，冰浴下用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯萃取，過柱分離純化得化合物19b 。

步驟3：將化合物19b （1 eq）溶於甲醇：水（1：1）的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰（3 eq），於室溫下反應一小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化，得化合物S19 。 ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 12.09 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 2.90 – 2.58 (m, 4H); MS (EI): 334。

20. 化合物 S20 的合成

將化合物S19 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入鹽酸羥胺（1.0 eq），縮合劑TBTU（3 eq），N ,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S20 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ +CD₃ OD) δ 8.19 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 2.88 - 2.62 (m, 4H); MS (EI): 349。

21 ．化合物 S21 的合成

將化合物S19 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-異丙基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S21 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.25 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.34 (m, 1H), 2.93 – 2.89 (m, 4H), 1.13 (d,J = 4.0 Hz, 6H); MS (EI): 391。

22 ．化合物 S22 的合成

將化合物S19 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-苄基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S22 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.25 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 2.78 (m, 4H); MS (EI): 439。

23. 化合物 S23 的合成

步驟1：將化合物1b （1 eq）懸浮於甲醇中，而後加入氫氧化鈀/碳（20%），於室溫下在1.1 atm氫氣環境下反應6小時。反應結束後將反應液用矽藻土過濾，並旋乾，過柱純化，得化合物23a 。

步驟2：將化合物23a （1 eq）溶於二氯甲烷中，冰浴下加入DAST（5 eq），約10分鐘後升溫至室溫反應兩小時，待反應液結束後，冰浴下用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯萃取，過柱分離純化得化合物23b 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.23 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.06 (t,J = 6.7 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.55 (s, 2H), 2.21 (d,J = 6.5 Hz, 2H)。

步驟3：將化合物23b （1 eq）溶於四氫呋喃：水（1：1）的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰一水合物（3 eq），於室溫下反應半小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化得化合物S23 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.75 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.16 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 2.55 (brs, 2H), 2.23 (d,J = 6.5 Hz, 2H); MS (EI): 298。

24. 化合物 S24 的合成

將化合物S23 （1 eq）溶於N,N -二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-異丙基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N -二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S24 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.72 (s, 1H), 7.30 (brs, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 5.24 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.23 (m, 1H), 2.57 (brs, 2H), 2.29 (d,J = 6.5 Hz, 2H), 1.08 (d, 6H,J = 4.0 Hz); MS (EI): 355。

25. 化合物 S25 的合成

將化合物S23 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-苯基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S25 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.23 (s, 1H), 7.62-7.53 (m, 5H), 7.35 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 5.31 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 2.49 (brs, 2H), 2.35 (d,J = 6.5 Hz, 2H); MS (EI): 389。

26. 化合物 S26 的合成

步驟1：稱取丁二酸酐（1 eq）、三氯化鋁（1.5 eq）溶於1,2-二氯乙烷中，置零下10℃攪拌；將亞甲二氧基苯并[b]噻吩（1.1 eq）溶於1,2-二氯乙烷中，逐滴滴入上述反應液中，持續30 min；滴畢，繼續攪拌10 min中後轉移至45℃油浴鍋中反應過夜。TLC檢測反應完畢後，將反應液倒入冰水中，加入15%鹽酸溶液，攪拌使產物析出，抽濾得粗產品。二氯甲烷再結晶後得純品26a 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 11.98 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 5.95 (s, 2H), 3.23 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 2.51 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。

步驟2：將化合物26a （1 eq）溶於甲醇中，於0℃下滴加氯化亞碸（5 eq），而後移至室溫反應4小時。反應結束後將溶劑旋乾，加入少量水並用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物26b 。

步驟3：將化合物26b （1 eq）溶於二氯甲烷中，冰浴下加入DAST（5 eq），約10分鐘後升溫至45℃反應兩小時，待反應液冷卻至室溫後，冰浴下用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯萃取，過柱分離純化得化合物26c 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.32 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.87 (s, 2H), 3.64 (s, 3H), 2.64-2.57 (m, 4H); MS (EI): 314。

步驟4：將化合物26c (1 eq) 溶於四氫呋喃：水(1：1)的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰一水合物（3 eq），於室溫下反應半小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化得化合物S26 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.31 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 5.83 (s, 2H), 2.72 – 263 (m, 4H); MS (EI): 300。

27. 化合物 S27 的合成

步驟1：將化合物5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩（1 eq）溶於二氯甲烷中，於-78℃下緩慢滴加1.0 M三溴化硼的二氯甲烷溶液（6 eq），並在-78℃反應半小時，而後移至室溫反應約半小時。反應結束後在冰浴下緩慢滴加水淬滅，而後用二氯甲烷萃取，並過柱純化得中間體27a 。將27a （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而依次加入1,2-二溴乙烷（1 eq），碳酸鉀（4.5 eq），於90℃下反應過夜，冷卻至室溫後傾入冰水中，用乙酸乙酯萃取並過柱純化得化合物27b 。

步驟2：稱取丁二酸酐（1 eq）、三氯化鋁（1.5 eq）溶於1,2-二氯乙烷中，置零下10℃攪拌；將27b （1.1 eq）溶於1,2-二氯乙烷中，逐滴滴入上述反應液中，持續30 min；滴畢，繼續攪拌10 min中後轉移至45℃油浴鍋中反應過夜。TLC檢測反應完畢後，將反應液倒入冰水中，加入15%鹽酸溶液，攪拌使產物析出，抽濾得粗產品。二氯甲烷再結晶後得純品27c 。

步驟3：將化合物27c （1 eq）溶於甲醇中，於0℃下滴加氯化亞碸（5 eq），而後移至室溫反應4小時。反應結束後將溶劑旋乾，加入少量水並用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物27d 。

步驟4：將化合物27d （1 eq）溶於二氯甲烷中，冰浴下加入DAST（5 eq），約10分鐘後升溫至45℃反應兩小時，待反應液冷卻至室溫後，冰浴下用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯萃取，過柱分離純化得化合物27e 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.35 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.32 (m, 4H), 3.64 (s, 3H), 2.63 – 2.57 (m, 4H); MS (EI): 328。

步驟5：將化合物27e (1 eq) 溶於四氫呋喃：水(1：1)的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰一水合物（3 eq），於室溫下反應半小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化得化合物S27 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.38 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.36 (m, 4H), 2.61 – 2.56 (m, 4H); MS (EI): 314。

28. 化合物 S28 的合成

步驟1：將6-甲氧基苯并噻吩(1 eq)溶於二氯甲烷中，加入NBS (1.1 eq)，反應液持續攪拌6小時，TLC檢測反應完畢後，將溶劑旋掉，並過柱純化得化合物28a 。

步驟2：稱取丁二酸酐（1 eq）、三氯化鋁（1.5 eq）溶於1,2-二氯乙烷中，置零下10℃攪拌；將28a （1.1 eq）溶於1,2-二氯乙烷中，逐滴滴入上述反應液中，持續30 min；滴畢，繼續攪拌10 min中後轉移至45℃油浴鍋中反應過夜。TLC檢測反應完畢後，將反應液倒入冰水中，加入15%鹽酸溶液，攪拌使產物析出，抽濾得粗產品。二氯甲烷再結晶後得純品28b 。

步驟3：將化合物28b （1 eq）溶於甲醇中，於0℃下滴加氯化亞碸（5 eq），而後移至室溫反應4小時。反應結束後將溶劑旋乾，加入少量水並用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物28c 。

步驟4：將化合物28c （1 eq）溶於二氯甲烷中，冰浴下加入DAST（5 eq），約10分鐘後升溫至45℃反應兩小時，待反應液冷卻至室溫後，冰浴下用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯萃取，過柱分離純化得化合物28d 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.81 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 2.61 – 2.54 (m, 4H)。

步驟5：將化合物28d (1 eq) 溶於四氫呋喃：水(1：1)的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰一水合物（3 eq），於室溫下反應半小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化得化合物S28 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.83 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 2.62 – 2.53 (m, 4H); MS (EI): 364。

29. 化合物 S29 的合成

步驟1:將28d (1 eq)、烯基硼酸酯(1.1 eq)、催化劑Pd₂ (dba)₃ (0.05 eq)、配體X-Phos (0.05 eq)和Cs₂ CO₃ (1 eq)溶於乾燥甲苯中，於110℃反應12小時，TLC檢測反應完畢後，加入乙酸乙酯稀釋，用飽和食鹽水洗，有機相用無水Na₂ SO₄ 乾燥，減壓濃縮並過柱純化得化合物29a 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.56 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.52 (m, 1H), 5.30-5.48 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.65 – 2.58 (m, 4H)。

步驟2: 將化合物29a (1 eq) 溶於四氫呋喃：水(1：1)的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰一水合物（3 eq），於室溫下反應半小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化得化合物S29 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.55 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.49 (m, 1H), 5.25-5.43 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.60 – 2.54 (m, 4H); MS (EI): 312。

30. 化合物 S30 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於1,4-二氧六烷中，於0℃下滴加氯化亞碸（5 eq），而後加入苯酚(1.1 eq),待反應結束，移至室溫反應4小時。反應結束後將溶劑旋乾，加入少量水並用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8左右，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S30 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.82 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.430-7.39 (m, 5H)，7.19 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 2.79 - 2.68 (m, 4H); MS (EI): 392。

31. 化合物 S31 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於1,4-二氧六烷中，於0℃下滴加氯甲酸甲酯（3 eq），而後加入Et₃ N (2 eq),待反應結束，移至室溫反應12小時。反應結束後將溶劑旋乾，加入少量水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S31 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 11.18 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 2.70 – 2.58 (m, 4H); MS (EI): 360。

32. 化合物 S32 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入N-乙酸甲酯羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得中間體；將中間體（1 eq）溶於四氫呋喃：水（1：1）的混合溶劑中，而後加入氫氧化鋰一水合物（3 eq），於室溫下反應半小時，用1 N鹽酸調節pH至5~6，用氯仿萃取，將有機相收集並過柱純化得化合物S32 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.40 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 2.72 – 2.65 (m, 4H); MS (EI): 389。

33. 化合物 S33 的合成

將化合物S2 （1 eq）溶於N,N-二甲基甲醯胺中，而後依次加入O-羥乙基羥胺鹽酸鹽（1.5 eq），TBTU（3 eq），N,N-二異丙基乙胺（5 eq），於室溫下反應過夜。反應結束後將反應液傾入冰水，用乙酸乙酯萃取，收集有機相並過柱純化得化合物S33 。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.88 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.72 (t, 2H,J = 8.4 Hz ), 3.54 (t, 2H,J = 8.0 Hz ), 2.84-2.65 (m, 4H). MS (EI): 375。

二、化合物活化干擾素基因刺激蛋白，促進 IFN-β 表達的細胞篩選實驗

檢測方法及原理： 人源的THP1-Blue ISG細胞，該細胞內轉有含IFN-β的報告系統，報告系統可誘導下游鹼性磷酸酶的表達，當鹼性磷酸酶分泌至細胞外時，可通過顯色反應測定OD650可反應其含量。當細胞加入化合物後，若活化干擾素基因刺激蛋白，則可促進IFN-β的表達，進而促進下游的鹼性磷酸酶分泌增加及顯色反應的吸光度增加。

試驗方法： 1、加化合物：96孔細胞培養板中的每孔加入20 µL用生理鹽水稀釋的化合物化合物的濃度為100 µM，設2個重複孔。陽性對照化合物為ADU-S100，濃度為100 µM。不加藥對照組加20 µL含1% DMSO的生理鹽水。 2、加細胞：THP1-Blue ISG細胞計數，調整細胞濃度至5×10⁵ /mL，每孔加入180 µL的細胞進行孵育。因此，每個測試孔的終體積為200 µL，DMSO的含量為0.1%，化合物的測試濃度為10 µM。陽性對照化合物為ADU-S100的終濃度為10 µM，孵育24小時進行檢測；另空白對照組加180 µL培液。 3、檢測顯色反應：24小時後，每孔取20 µL的培養液至新的96孔板中，加入顯色液Quanti-Blue 200 µL，放置37℃的培養箱，0.5-2小時後測定OD650值。 4、化合物的篩選濃度：10 µM。 5、結果分析：

，其中Compound OD650為本發明化合物的OD650值，Blank OD650為培養基的OD650值，Control OD650為不加化合物（僅細胞和0.1% DMSO）的對照組的OD650值。 6、結果評定：活化倍數（Fold change） ≥ 2時，有效。

實驗結果： 【表2】部分化合物在10 μM濃度時活化THP1細胞中人源干擾素基因刺激蛋白，促進Ⅰ型干擾素表達的能力

化合物 (10 µM)	活化倍數 (相對於對照實驗的比值)	評價
第一次實驗	第二次實驗	平均值
S1	24.20	33.38	28.79	有效
S2	23.95	25.94	24.95	有效
S3	24.31	33.69	29.00	有效
S6	15.82	26.22	21.02	有效
S7	23.95	29.94	26.95	有效
S10	25.41	34.36	29.89	有效
S11	20.44	30.93	25.69	有效
S12	22.38	31.54	26.96	有效
S15	26.23	35.12	30.68	有效
S18	17.62	28.34	22.98	有效
S19	25.73	31.81	28.77	有效
S21	27.51	32.63	30.07	有效
S24	15.53	24.54	20.04	有效
S26	16.24	25.03	20.64	有效
S28	23.75	33.73	28.74	有效
S29	25.26	34.05	29.66	有效
1a	13.80	10.52	12.16	有效
ADU-S100	21.52	31.47	26.50	有效
CON	1.00	1.00	1.00

其中，CON表示不加化合物（即僅細胞和0.1% DMSO）的對照。

以上結果表明，在10 µM濃度時，所測化合物都能顯著活化干擾素基因刺激蛋白，促進干擾素因子IFN-β的表達；其中，絕大部分化合物的激動活性與處於I期臨床研究的環二核苷化合物ADU-S100 相當，甚至更好，具有進一步應用前景。

此外，相對於TW201817723A（US20180093964）公開化合物1a (即已公開專利中化合物16 )，化合物S1-3 、 S7 、 S10 、 S11-12 、 S15 、 S19 、 S21 、 S28-29 具有2-2.5倍增強的激動活性。

三、化合物 S2 的藥物代謝性質研究 【表3】化合物S2 與1a 在大鼠中藥物代謝動力學性質比較

給藥方式	化合物編號	T_1/2	C_max	AUC	CL	MRT
(h)	(ng/mL)	(h*ng/mL)	(mL/min/kg)	(h)
口服（3 mg/kg）	1a	0.656	5171	3424	-	0.854
S2	0.740	6906	5818	-	1.15
靜脈（1 mg/kg）	1a	0.471	-	1649	10.3	0.510
S2	0.669	-	7180	2.33	0.853

以上數據表明，本專利所述代表性化合物S2 不管口服給藥、還是靜脈注射，其半衰期(T_1/2 )、最大血藥溶度(C_max )、血漿暴露量(AUC)和平均駐留時間(MRT)等指標都要明顯優於TW201817723A（US20180093964）公開化合物1a （即已公開專利中化合物16 ），特別是靜脈注射時的AUC，約為1a 的4.4倍，顯著提高。

在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。

Claims

一種式I所示化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，
式I 其中， R¹ 和R² 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、鹵素、胺基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷氧基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基；或者R¹ 和R² 與它們連接的碳原子一起形成5-14員雜環基；所述R¹ 和R² 中的取代指獨立地被選自下組的一個或多個取代基取代：鹵素、胺基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基； X¹ 和X² 獨立地選自下組：H、D、鹵素、未取代的或鹵素取代的C1-C6烷基、未取代的或鹵素取代的C1-C6烷氧基、腈基； X³ 選自下組：氫、鹵素、羥基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基； n為選自0、1、2、3、4、5、6、7、8的整數； Y選自下組：-OR³ 、-N(X⁴ R⁴ )R⁵ ，其中， X⁴ 選自下組：O、S、NH； R³ 選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基； R⁴ 和R⁵ 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、C6-C10芳氧基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基；所述R³ 、R⁴ 和R⁵ 中的取代指獨立地被選自下組的一個或多個取代基取代：鹵素、羥基、胺基、羧基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基。
如請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，X³ 為鹵素。
如請求項2所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，X² 為氫或氟。
如請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，n為選自0、1、2的整數。
如請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，Y選自下組：-OR³ 、-N(X⁴ R⁴ )R⁵ ，其中， X⁴ 選自下組：O、NH； R³ 選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基； R⁴ 和R⁵ 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、羧基、磺酸基、磷醯基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、C6-C10芳氧基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環烷基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基；所述R³ 、R⁴ 和R⁵ 中的取代指獨立地被選自下組的一個或多個取代基取代：鹵素、羥基、胺基、羧基、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8環烷氧基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-8員雜環基、C6-C10芳基、含1-3個選自N、O、S的雜原子的3-10員雜芳基。
如請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述化合物選自下組：
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。
一種請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽的製備方法，其特徵在於，所述方法選自下組：方法一：
將式A化合物與DAST反應，得到式B化合物；其中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、n、Y、X³ 如請求項1所定義；方法二：
將式C化合物和式D化合物或其鹽酸鹽反應，得到式E化合物；其中，R¹ 、R² 、X¹ 、X² 、X³ 、n、R³ 、X⁴ 、R⁴ 和R⁵ 如請求項1所定義。
一種藥物組合物，其特徵在於，包含： (i) 一種或多種治療有效量的請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽；和 (ii) 藥學上可接受的載體。
一種請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽或請求項8所述的藥物組合物的用途，其特徵在於，用於製備製劑，所述製劑用於預防和/或治療與Ⅰ型干擾素相關的疾病。
一種干擾素基因刺激蛋白激動劑，其特徵在於，包含一種或多種請求項1所述的化合物、或其異構體、前藥、溶劑合物、水合物或其藥學上可接受的鹽。