TW593678B

TW593678B - Live attenuated bacteria of the species actinobacillus pleuropneumoniae

Info

Publication number: TW593678B
Application number: TW087112330A
Authority: TW
Inventors: Ruud Philip Antoon Mari Segers; Joachim Frey
Original assignee: Akzo Nobel Nv
Priority date: 1997-04-10
Filing date: 1998-07-28
Publication date: 2004-06-21
Also published as: HU9800855D0; JPH10290695A; US6013266A; CN1202523A; ES2443094T3; CA2228719A1; AU6078198A; KR100510906B1; NZ330159A; KR19980081220A; AU743165B2; BR9801397A; TW200502384A; HUP9800855A3; HUP9800855A2; ZA982870B; CN1198918C; TWI241407B

Description

593678 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明關於在可編碼毒素的基因上有一突變的胸膜肺炎放射菌（Actinobacillus pleuropneumoniae)的減毒活菌，製造此種細菌的方法，含有此種細菌之疫苗，製造此種疫苗的方法，含有毒素的疫苗，製造此種疫苗的方法和用以保護動物抵抗胸膜肺炎放射菌感染的方法。屬於放射菌層的所有細菌都會製造所謂的R T X -毒素（RTX再次代表毒素）。這些R T X -毒素促成這些細菌的病理性特徵。 RTX —毒素已被Braun等人廣泛地回顧（Critical Rev. in Microbiol. 18(2) -115-118( 1 9 9 1 ))。在格蘭氏陰性菌株內的RTX -毒素也已被 Welch, R.A ( Molecular Microbiology 5/3:521 —528 (1991))和 Welch等人（InF. Agents and Disease 4:254 — 272(1995))回顧。經濟部中央標準局員工消費合作社印製所有已知的R T X -毒素顯示一些種類的細胞毒性或細胞分解活性。然而標的細胞和宿主專一性的不同決定於毒素和醯化作用的差異（McWhinney et al.，J. Bact. 174:291 — 297(1992)和 Hackett et al·， J. Biol Chem. 270:20250 — 20253( 1995))。由於標的細胞的不同，已知有各種的 R T X -毒素家族，如溶血素、溶細胞素或細胞毒素。放射菌層包含許多不同的菌種，特別是胸膜肺炎放射菌，伴放線放射菌（A. actinomycetemcomitans )，豬放射菌（A. suis) ，（ A.rossii) —種放射菌，馬駒放射菌（本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 B7 五、發明説明（2 ) A. equuli )和李氏放射菌（A. lignieresii )。胸膜肺炎放射菌製造血淸型依賴的R T X -毒素，它們對豬、馬、牛和人類的紅血球、兔子和豬的嗜中性白血球和豬肺泡巨噬細胞具細胞毒性/細胞溶解性（Rosendel et al; An. J. Vet. Res. 49:1053-1058(1 988),Moudsley J. R. and S; Can. J. Microbiol 3 2:801 -805(1 986), Frey. J. and Nicolet, J; Inf. & Imm. 56:2570-2575 (1 988), Bendixon et al; Inf. & Imm. 3 3:673-676(1 98 1), Kamp. E.M .and van Leengoed, L. A. M. G·; J. Clin. Microbiol. 27:1 1 87- 1 1 9 1 (1 989))。豬隻感染放射菌會使年幼豬隻產生急性死亡率，降低年長動物的體重增加，因此造成豬隻業嚴重的經濟損失。在格蘭氏陰性菌中，參與R T X毒素合成，活化和運輸的操縱子基因構造最近已被Coote. J. G.回顧（FEMS Microbilogy reviews 88:137-162(1992))。Frey 曾專一性地回顧在胸膜肺炎放射菌中三種已知的RTX -毒素（

Bacterial Protein Toxins, Zbl Bakt. Suppl. 24, p. 322-Freer et a 1 · (E d s)，G u s t a f F i s c h e r，S t u 11 g a r t，J e n a，N e w Y o r k，1 9 9 4。在胸膜肺炎放射菌，RTX -控縱子含有4種基因：確實的毒素基因（A)、活化者基因（C)、和二種可編碼參與毒素分泌至周邊培養基的蛋白質的基因（B和D) 。毒素基因（A )的初級轉譯產物是一種無毒性的蛋白質，其毒性活性的活化是藉由活化者基因（C )產物。直到最近才確認在胸膜肺炎放射菌中只有三種R T X 毒素具有上述的基因構造，或至少有毒素基因（A)和活本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -5- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) «衣.

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 593678 A7 B7 五、發明説明（3 ) 化者基因（C )。這三種RTX毒素，ΑρχΙ ，ApxI I分別具有顯著的溶血活性（A p X I )，輕微的溶血活性（A p X 一 I I )或巨噬細胞細胞毒性活性（A p X - I I I )。各種毒性活性相當隨機地分布於血淸型。有四種亞群亞群A，包括血淸型第1，5，9和1 1型，可產生 ΑρχΙ 和 Αρχ— I ，亞群Β，包括血淸型第2，3，4，6和8型，可產生 Αρχ— I I 和 Αρχ — I I I ，亞群C，包括血淸型第10型，只產生ΑρχΙ ，亞群D，包括血淸型第7和12型，只產生ΑρχΙ -II。已知Αρχ-Ι ，一 I I和—I I I是抵抗胸膜肺炎放射菌感染的普遍疫苗內必需的元素：一種疫苗並不包含至少A ρ X — I ，— I I和一 I I I時，將無法提供保護抵抗所有的胸膜肺炎放射菌血淸型。同時，一種疫苗並不包含至少一種專一性血淸型的A Ρ X -毒素時，甚至將無法誘導保護作用以抵抗單一的血淸型。以源自A· pleuropneumoniae體外合成的R T X —毒素爲基礎的亞單元疫苗，先前已被描述喪失它們的毒性，如於歐洲專利E P No 0 · 3 5 4 · 6 2 8所發表的亞單元疫苗是基於A. pleuropneumoniae的溶血素和細胞毒素，和於歐洲專利E P No 0 · 4 5 3 · 0 2 4所發表 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -6- 593678 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（4 ) 的A. pleuropneumoniae亞單兀疫苗是基於溶血素’細胞毒素和外膜蛋白。然而，一般來說，亞單元疫苗有4個重要的缺點： •需要高量的抗原物質以適當地誘發免疫系統。 •通常只有B細胞免疫反應被誘發。 •許多保護性抗原只在體內被誘發，因此無法存在於亞單元之疫苗。 •活的病原性細菌有許多重要的免疫分子，如外膜蛋白質和莢膜多醣類，對於保護作用而言可能很重要，因此需包含在有效率的亞單元疫苗內。除了以上所提到的第1和2點很明顯的問題，特別是第4點。使得製造一有效率的亞單元疫苗是困難的。在歐洲專利E P No 0 · 4 5 3 · 0 2 4所發表的A. pleuropneumoniae亞單元疫苗，在一種疫苗中結合四種不同亞單元（3種RTX —毒素和一種外膜蛋白質）。很明顯地，爲了克服抵抗巴期德氏菌感染所使用的亞單元疫苗所具有的缺點，一種減毒活菌疫苗是相當需要的〇減毒活菌疫苗有下列優點：它可給予低的劑量（它是自我複製）它模擬近於天然/野生型感染它同時提供所有可能的免疫重要抗原。然而，雖然它有顯著的優點，但在本發明之前並無任何基於胸膜肺炎放射菌的活疫苗在市場上可取得。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X25)7公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·«衣· 訂

-7- 593678 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（5 ) 爲了下列似是而非的理由：如先前所提，，A p X -I ’ - I I和一 I I I都是普遍疫苗抵抗胸膜肺炎放射菌感染所必需的元素。因此活疫苗必需產生這三種RTX -毒素。然而這三種RTX -毒素在所有放射菌層中是強的毒力因子（參見如：Coote, J. G.; FEMS Microbiology reviews 8 8:1 37- 1 62( 1 992), Tascon et al.; Mol. Microbiol. 14:207-216(1994), Jansen et al; InF.& Imm. 63:27-37(1995)) 〇爲了減弱活的A p p菌株的毒力而使RTX —毒素缺失在技術上相當容易做得，但它無法提供做爲一解決方法 :此種R T X -陰性菌株無法做爲活的減毒活疫苗菌株，因爲它們不再在宿主中誘發免疫作用抵抗胸膜肺炎放射菌領域菌株的溶血性/細胞毒性活性。毒力因子雖然對免疫作用的誘導很重要，但比起 Apxl ，— I I和一 I I I在建立免疫作用上則扮演較不重要色，因此理論上可被刪除，然而目前並末知。因此在A p p基因組上急欲有一個位置是負責毒力，當修飾時會產生一減毒的A p p菌株，而同時它有可有效引發免疫作用。然而目前並未知有此一位置。而且急欲此一位置是普遍存在於所有A p p菌株’而非限制在某些血淸型。因此此一位置將准許所有不同的血淸型藉由刪除此相同位置而被減毒。本發明的一個目標是提供此一減毒位置，其普遍存在所有胸膜肺炎放射菌株而不論它們的血淸型。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 、訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（210 X 297公釐） -8 - 593678 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（6 ) 最近，在胸膜肺炎放射菌株血淸型第1型發現一個新的基因（T.J.Anderson 的論文，Νον · 1 9 9 5)。雖然此基因並不相似已知的放射菌A p X I ，— I I 和- I I I基因，但它相似於腦膜炎奈瑟氏球菌（ Neisseria meningitidis )已知的R T X —毒素基因，因此它被命名爲RTX -基因a p X I V。然而此基因在所有槪念上與存在放射菌家族的各種菌種內的三種已知R T X -毒素基因apxl ，一 I I和—I I I都不同。首先，基因構造是完全不同。第二，並無發現與已知A P X -毒素相同的活化者機制。第三，對於此基因來說並無專一的體內溶血性或細胞毒性活性，或它可能的基因產物。如今很驚訝地發現此基因，它與三種已知的R T X -基因完全不同，它存在於所有的胸膜肺炎放射菌種，不論它們的血淸型爲何。此項證據係利用含a p X I V編碼序列的探針與源自胸膜肺炎放射菌所有血淸型且經限制酶作用的D N A片段雜交反應證實，並描述於實施例6和7。現今很意外地發現a p X I V缺失突變種具有存活性，但與它們擁有a p X I V的母株相比則有較小的毒力。因此，確定此基因產生一 A ρ X I V毒素在所有的胸膜肺炎放射菌株內是一毒力因子。這是一意外的結論，因爲直到現在，沒有任何影響，除了在體內此基因產物可能影響毒性效率。事實上，直到現在，甚至無證據證實此基因在活體內或活體外的胸膜肺炎放射菌中以任何方式表現。因此本發明的一個價値是發現： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·«衣· 訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 B7 五、發明説明（7 ) • a ρ X I V基因存在於所有A. pleuropneumoniae菌株，不論其血淸型爲何， • a ρ X I V基因產物在所有A· pleuropneumoniae血淸型內是一毒力因子， • a ρ X I V基因缺失的A. pleuropneumoniae菌株仍然可存活，但具有較低的毒力，卻不會損傷此菌株的免疫特性。因此，本發明提供首次不會製造功能性A ρ X I V毒素的胸膜肺炎放射菌的減毒活菌。功能性A ρ X I V毒素被認爲是一種具有如野生型細菌內表現的Ap X I V毒素的所有特徵的蛋白質，並且表現程度如野生型含量。因此，無功能性A ρ X I V毒素被認爲是一種缺少如野生型細菌內表現的A ρ X I V毒素的一些或全部特徵的毒素，和/或其表現程度是不足以達到野生型Αρχ IV毒素的效果。無法製造A ρ X I V毒素可能是由於如：在可編碼 A ρ X I V毒素的編碼序列中有修飾反應。也可能如：在參與a ρ X I V基因轉錄的已知區域中有修飾反應，如啓動者區域，或參與轉譯的區域如核糖體結合位置有修飾反應。 a ρ X I V基因的所有構造列於第1圖。在此圖中，Ap X I V毒素將特徵的直接重覆區域以橫線區塊表示，而A ρ X I V —專一的富含甘胺酸九胜肽區域以三角形表示。此重覆區域是在A ρ X I V的C端部 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、^1 d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -10- 593678 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（8 ) 份被發現。這些特徵是存在於所有胸膜肺炎放射菌血淸型。二種血淸型的核酸序列和胺基酸序列是顯示在S E Q ID No.l-4°SEQ ID Nol顯示APP 血淸型第1型的a px I V基因的核酸序列，SEQ ID No 2顯示血淸型第1型Αρχ I V毒素的相配胺基酸序列。SEQ手ID N〇3顯示Αρρ血淸型第3 型的apxIV基因的胺基酸序列，SEQ ID N〇4顯示血淸型第3型ΑρχIV毒素的相配胺基酸序列。第2圖顯示在胺基酸層次，各種胸膜肺炎放射菌血淸型的ΑΡΧ毒素之間的高度保留，特別是在Ν —端6 5 0 個胺基酸。這也是a ρ X I V基因的一個明顯特徵。從第 1圖明顯看出，在毒素C端部分的重覆區域數目可能出現變動現象，而其決定於血淸型。此變動說明基因尺寸的不同和得自各種血淸型的編碼毒素的差異。即使從相同血淸型，不同的胸膜肺炎放射菌分離物所分離得到的a ρ X I V基因之間，在核酸序列上仍有一些變異。這是由於在所有有機體中天然存在爲人所知的變異。可能是由a ρ X I V基因編碼的Ap X I V毒素內的一些胺基酸被其他血淸型的A ρ X I V毒素所取代，而多胜肽的功能並不改變。例如，一多胜肽在某一位置含有 A s ρ。而在此相對應位置爲A s η的變異物仍具有相同特質。胺基酸被功能相似的胺基酸取代的此種過程稱爲功能性取代，在此例子的變異蛋白質即稱爲功能性變異物。另一個造成變動現象的原因是基因密碼退化的現象。簡言 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ，1Τ

Jm 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 11 - 593678 A7 五、發明説明（9 ) 之’它意謂如：胺基酸榖胺酸由G A T和G A A二者所編碼。此現象存在所有胺基酸，除了 Me t和T r p。因此 ’很明顯地，如本發明提出的血淸型第1型的Ap X I V 毒素除了可由S E Q ID N 〇 : 1的核苷酸序列編碼 ’也可由許多種其他序列編碼，但仍具有與相同多胜肽的相同功能。因此，可編碼出與A p X I V毒素功能相匹配的多胜肽的變異a p X I V序列屬於本發明範圍。如本發明的減毒活菌可藉由許多方法獲得。獲得此種細菌的一種可能方法是利用傳統的方法如：使用鹼基相似物突變劑，紫外光或溫度處理野生型胸膜肺炎放射菌。無法產生功能性A p X I V毒素或誘發較低程度抗一 A p X I V毒素抗體的菌株因此相當容易在動物試驗中被篩選。需要的抗血淸可利用實施例3所描述的方法獲取。另一個可以在編碼A p X I V毒素的基因中送入限定好突變的方法是使用重組D N A技術。此種突變可以是嵌入，缺失，取代一個核苷酸或其組合式，唯一的條件是此突變基因不可編碼一功能性A p X I V毒素。顯而易見地，在開放讀錄送入一終止密碼的突變或在開放讀錄產生一框構轉移的突變是非常適合做爲獲得不再編碼一功能性 A p X I V毒素菌株的方法。此種突變可利用如Clontech 公司的Transformer ®套組進行體外位置直接突變而製造。許多其他標準重組D N A技術如利用限制酶消化基因，然後經內核酸酶處理和再連接作用，也可應用。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）請閱讀背 φ 之注

I 馬本頁經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -12- 593678 A7 ___B7 五、發明説明（10 ) 因此，在一較佳的型式，本發明的具體實例關於減毒活菌，其中可編碼Ap X I V毒素的基因含有一突變。當與一般導入的突變相比較，涉及a p X I V基因片段或甚至全部基因的缺失，或異種DNA片段嵌入的限定突變有較好的優點，它們不會回復至野生型狀態。因此，在一更好的型式，本發明的具體實例關於減毒活菌，其中可編碼A p X I V毒素的基因含有一嵌入和/ 或缺失。經濟部中央標準局員工消費合作社印製現今對於豬隻都施予大量的疫苗，假如只基於降低疫苗花費的理由，則很明顯地，組合多種疫苗投予的方式是適宜的。因此，非常吸引人們使用減毒活菌疫苗做爲一含有異種基因的重組載體，此異種基因可編碼選自其他病原性微生物或病毒。投予此種重組載體的優點是：投予此一載體之後，同時可誘發抵抗二或更多種疾病的免疫力。根據本發明提供的減毒活菌非常適合做爲異種基因的載體，因爲可編碼A p X I V毒素的基因可做爲此異種基因的嵌入位置。使用a p X I V基因做爲一嵌入位置的優點是： a p X I V被去活化的同時，新送入的異種基因可與同種胸膜肺炎放射菌基因一起表現。此種重組載體的構築可使用常規的標準分子生物技術如同質重組作用實施。因此，在一更較佳的具體實例，本發明關於無法製造功能性 Ap X I V毒素的胸膜肺炎放射菌的減毒活菌，其中在 a p X I V基因中嵌入一異種基因。此一異種基因可以是，如上述，如：可編碼選自其他病原性微生物或病毒抗原 -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 593678 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（n) 的基因。其他的可能性是嵌入編碼參與引發免疫系統的蛋白質的基因，如編碼間白素或干擾素。本發明的更好形式是，可編碼一或更多種抗原的異種基因係選自下列構成族群：豬生殖性呼吸微候群（Porcine Reproductive Respiratory Syndrome, PRRS )病毒，假狂犬病毒（Pseudorabies virus )，豬流行感冒病毒（Porcine Influenza virus )，豬小去氧核糖核酸病毒（Porcine Parvovirus)，可傳染的胃腸病毒（Transmissible Gastroenteritis virus )，輪狀病毒（rotavirus )，大腸桿菌，豬丹毒桿菌（Eyrsipelothrix rhusiopathiae )，多殺巴斯德氏菌（Pasteurella multocida )，支氣管炎博德特氏菌（ Bordetella bronchiseptica )，副豬嗜血菌（Haempohilus parasuis )和豬鏈球菌（Streptococcus suis )。然而，異種基因在重組載體中表現有嚴重的陷井：我們已知假如許多蛋白質在異種細菌中被表現，則它們是具毒性的。因此，編碼此蛋白的基因不可被送入異種載體，因爲成功的重組物將由於表現某些量的異種基因而導致永久地死亡。如流感嗜血菌（Haemophilus influenzae )的 P 2 —蛋白質即無法在大腸桿菌（Munson et al.，Infect. & Immun. 57:88-94(1989)。本發明的一個目標是提供一種不會有此缺點的重組活載體。我們意外地發現雖然a p X I v 基因在體內可有效地表現（見實施例5 )，但它無法在體外表現（見實施例4 )。此結論是從A p X I V毒素無法在體外生長的胸膜肺炎放射菌培養物中出現而得到。此意 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、?T d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X·297公釐） -14- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 B7 五、發明説明（12) 指A p X I V表現的啓動或關閉，決定於其胸膜肺炎放射菌生長的環境。此特性提供一超越已知活的重組載體的意外優點：假如異種基因的表現是在a p X I V啓動者的控制下，根據本發明的減毒活胸膜肺炎放射菌載體在活體外可生長至高密度，無論其嵌入的異種基因爲何，因爲外來基因在這些條件下將不表現。投予許多細菌至宿主之後，異種基因的表現將開始，並且在細菌複製或死亡之後的某些時候，它對於宿主的免疫系統將變成有效的。被表現的異種基因可被功能性地連接至a p X I V啓動者，藉由如 :異種基因的編碼區域取代a p X I V基因的編碼序列。並不需要取代整個a ρ X I V基因：以包括終止密碼的異種基因編碼區域取代A p X I V的A T G -密碼就足夠。也可能藉由製造一融合構築在a ρ X I V啓動者的影響下而表現一異種基因。它可藉2中a px I V ATG密碼的a ρ x I V讀錄下游嵌入一異種基因而製造。 ''功能性連接至a ρ X I V啓動者〃意指異種基因的轉錄開始於a ρ X I V啓動者。不用說，功能性連接至a ρ X I V啓動者的嵌入性異種基因之每一個位置都屬於本發明範圍。因此，根據本發明關於減毒活菌的最好具體實例形式是：它攜帶一異種基因並功能性連接至a ρ X丨v基因的啓動者區域。令人驚訝地發現，天然的a ρ X I V啓動者是可開關的啓動者，它在體外是關閉，在體內是開啓，因此使此啓本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 d -15- 593678 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（13) 動者在其天然宿主和做爲在其它細菌內的異種啓動者二者中，都是一非常多方面的表現工具。當使用它做爲在其他細菌內的異種啓動者，含有啓動者的DNA可從其宿主中被分離並轉移至除了胸膜肺炎放射菌之外的其他細菌。目前可能的另一個選擇是選殖許多個a p X I V啓動者複本 ’每一個啓動者控制另一基因的表現。這可在胸膜肺炎放射菌宿主菌中執行但此多重複本的原則也可應用於其他細菌。如上述，啓動者可用於篩選在活體內可編碼選自其他病原性微生物或病毒的抗原的一或更多種異種基因。啓動者也可用於異種D N A序列的表現，此序列可編碼組織介素如間白素，腫瘤壞死因子或干擾素。許多的組織介素，如：干擾素已知扮演免疫調節者此項重要角色。因此，它可能有利於在a p X I V啓動的控制下表現此種基因資訊〇因此，本發明的另一具體實例是關於含有啓動者控制 a ρ X I V基因表現的核苷酸序列。在天然狀況下控制a p X I V基因表現的可轉換的啓動者，現在被發現位於SEQ ID No:5的451 一 1 1 3 2之間的D N A片段。很明顯地，此D N A片段的部分並不是啓動者必需元素，並不需要存在於片段中。因此，仍保有啓動者活性的此D N A片段較短片段，也適合做爲異種基因的表現。因此，此具體實例的更適宜型式是關於含有SEQ ID No:5的451-1132 之D N A片段或仍具有啓動者活性的亞片段的核苷酸序列 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .€衣.

、1T d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） -16- 593678 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（14) 〇 , 所有細菌啓動者都有二個一致的區域，即所謂- 1 0 和- 3 5區域。雖然這些一致區域的側邊序列可能會某些延伸影響啓動者的效率，仍可只使用含有介於- 3 5和 ATG密碼之間DNA片段的啓動者區域部分。此DNA 片段是位於SEQ ID No ·· 5的617 — 641位置之間。因此，在本發明更適宜的具體實例形式是關於含有 SEQ ID No: 5 617 — 641 位置的 D N A片段的核苷酸序列。本發明也關於A p X I V毒素做爲一亞單元疫苗成分〇亞單兀疫田將大部分可能含有二種已知的A p X -毒素。此是如上述。因爲正如上述，我們很意外地發現 A p X I V毒素存在於所有胸膜肺炎放射菌血淸型，它是亞單元疫苗合意的額外成分，抵抗A p X I V毒素的中和性抗體的產生提供保護以抵抗每一和每個胸膜肺炎放射菌株（不論血淸型）所產生的Ap X I V毒素。因此，本發明的另一具體實例是關於用於保護動物抵抗胸膜肺炎放射菌感染的亞單元疫苗，它包括純化的A p X I V毒素。 A p X I V毒素可單獨投予，或結合如上述的任何或所有的A p X I ，— I I和一 I I I毒素和/或如：結合胸膜肺炎放射囷的外膜蛋白質（outer membrane proteins，OMPS )°此種疫苗相當容易製備，即混合足以誘發免疫反應的 A p X I V毒素量，和一藥學可接受載體。Ap X I v毒本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公楚） ---------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、τ Γ -17- 593678 Λ7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（15) 素的製造係利用送入a p X I V基因於一適合的表現載體 ’基因表現和分離此毒素。本技藝中有許多已知的多方面表現系統，如細菌表現系統，巴氏病毒表現系統和哺乳類細胞表現系統。在實施例3描述如何在大腸桿菌內表現基因以得到A ρ X I V毒素。本發明另一具體實例是關於含有如上述保護動物抵抗胸膜肺炎放射菌感染的減毒活菌的減毒疫苗。此種疫苗可藉由混合減毒活菌和一藥學可接受載體而得到。這些疫苗至少含有如本發明的免疫有效量減毒細菌。免疫有效意指在接種時，投予的減毒活菌量足以誘發宿主內對毒力型式的R T X毒素製造細菌的有效免疫反應。投予的有效劑量將取決於接種的動物、動物的年齡、體重，投予的形式和接種抵抗的病原菌種類。疫苗可能含有足以激發免疫反應的任何細菌劑量。界於1 0 3和1 0 5細菌範圍的劑量是如 :非常適合的劑量。藥學可接受載體可能是簡單如水，但它可能是如：含有培養細菌的培養液。另一適合的載體是如：生理食鹽濃度的溶液。本發明中有用的其他藥學可接受載體或稀釋液的實施例包括安定劑如S P G A、醣類（如：山梨糖醇、甘露糖醇、澱粉、蔗糖、葡萄糖、糊精）、蛋白質如白蛋白或酪蛋白、含蛋白質的試劑如牛血淸或脫脂牛乳和緩衝液（如：磷酸鹽緩衝液）。具有佐劑活性的一或更多種化合物也可選擇性地加至疫苗，佐劑是免疫系統的非專一性刺激物。它們增強宿主 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣.

、1T d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 B7 五、發明説明（16) 對侵入病原菌的免疫反應。本技藝中已知的佐劑實施例是 Freunds Complete和Imcomplete佐劑、維生素E、非離子性阻塞聚合物、胞壁酸基二胜肽、I S C〇M S (免疫刺激複合物、i m m u η 1 s t i m u 1 a t i n g c 〇 m ρ 1 e s e s，例如歐洲專利 E P 1 0 9 9 4 2 )、皂素、礦物油、植物油和 Carbopol ( —種同聚合物）。佐劑，特別適合做爲黏膜應用的是如：大腸桿菌熱不穩定毒素（E. coli heat-labile toxin，LT )或霍亂毒素（Cholera toxin，CT )。其他適合的佐劑是例如氫氧化鋁、磷酸鹽或氧化物、油乳化劑（如：Bayol F ®或Marcol 52®、皂素或維生素 E -溶解鹽）。因此，在一較佳的型式，如本發明的疫苗含有一佐劑〇用於投予動物，如本發明的疫苗可以，利用噴霧或肌肉注射經鼻內、皮內、皮下投予。貯存亞單元和活的微生物二者有許多的方法。存放在冰箱是一種廣爲人知的方法。時常也與含甘油的緩衝液存放於- 7 0 °C。細菌也可存放在液態氮內。冷凍乾燥是另一保存方法。冷凍乾燥細菌可存放並保持生存力許多年。用於冷凍乾燥細菌存放之用的溫度可能最好在〇度以上，這樣的溫度對細菌存活力並不會有所損害。冷凍乾燥也同樣適用於亞單元。可根據所有爲人所知標準的冷凍乾燥技術進行冷凍乾燥。有益的添加物，如：脫脂牛乳、海藻糖、明膠或牛血本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T d 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 Λ7 B7 五、發明説明（17 ) 淸白蛋白都可在冷凍乾燥過程中加入。因此，在一更佳的具體實例，如本發明的疫苗是存在於一冷凍乾燥形式。在此具體實例的更適宜形式中，疫苗選擇性地含有一或更多種選自病原性微生物或病毒的抗原。此種疫苗的取得係利用添加一或更多種選自其他病原菌或病原的抗原至如上述的本發明滅毒活菌和一藥學可接受載體。當然，不但添加一或更多種抗原，而且加入一或更多種失活或活的型式的完整病原菌也是可能的。我們可使用如上述已知的重組D N A技術選殖可編碼一或更多種選自其他病原性微生物或病毒的基因訊息至減毒活菌而得到此種疫苗。從醫學和健康二者觀點來看，此種疫苗對於接種動物的壓力當然低於分別接種每一病原菌。在一甚至更適宜的型式中，這些抗原係選自下列構成族群：P R R S 病毒、Pseudq-rabies 病毒、Porcine influenza 病毒、Transmissible Gastroenteritis 病毒、 rotavirus、 Escherichia coli、 Erysipelothrix、 rhusiopathiae 、Pasteurlla、 multocida、 Bordetella、 bronchiseptica、 Haemophilus、 parasuis 和 Streptqcocus suis o 本發明也關於製備無法產生功能性A p x I V毒素的胸膜肺炎放射菌減毒活菌的方法。這些方法包括在可編碼 a px I V蛋白質的基因中導入一突變。使用突變劑和技藝中爲人所熟知做爲嵌入，取代或缺失a p X I V基因訊 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -20- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 五、發明説明（18) 息的重組D N A技術，這二種傳統的突變技術都可應用。在一較佳型式，如上述方法係做爲導入一缺失之用。製備如本發明減毒活疫苗的方法係包括混合如本發明的細菌和一藥學可接受載體，這些方法也爲本發明的一部分。製備亞單元疫苗的方法也屬於本發明範圍之內。此種方法包括混合純化的A p X I V毒素和一藥學可接受載體〇以活疫苗接種的領域中，另一個一般公認的問題是：在宿主動物血淸中存在某些抵抗病原菌的抗體，此顯示宿主曾被毒性或減毒型式的病原菌感染。然而無法區分領域被感染動物和經活疫苗菌株感染的動物。如本發明的減毒活胸膜肺炎放射菌對此問題提供一解決方法，其方法如下 :如實施例3中所述，胸膜肺炎放射菌血淸型第1型的a p X I V基因已被分離並在異種宿主細胞中表現。將此表現產物置於P A G E電泳，然後做爲西方點墨之用。此點墨與得自故意以胸膜肺炎放射菌感染的豬隻的康復期血淸和領域菌種血淸反應。我們發現a p X I v基因在所有試驗的胸膜肺炎放射菌領域菌株體內都表現。此暗示經胸膜肺炎放射菌感染的豬隻具有抵抗感染它們菌株的抗體，而不論感染菌株的血淸型爲何。如本發明的減毒活菌由於缺失a p X I v基因，不再製造A p X I V毒素。因此經如本發明減毒活菌胸膜肺炎放射菌株接種的動物，在牠們的血淸中將不再有抵抗本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T d -21 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 kl —___B7_______ 五、發明説明（19 ) ~

ApxIV毒素的抗體。在一比較試驗，如E L I S A試驗，此種血淸因將與所有免疫性胸膜肺炎放射菌蛋白質如A p X I ，I I和/ 或I I I反應，不與A p X I V反應。然而來自經胸膜肺炎放射菌領域菌株感染的豬隻血淸將與所有免疫性胸膜肺炎放射菌蛋白質，包括A p X I V反應。因此，如本發明的減毒活菌胸膜肺炎放射菌變成一非常適合的標識疫苗，即疫苗菌株可與領域菌株區分。區分疫苗菌株和領域菌株的診斷試驗可以是一簡單的 EL I SA -試驗，其中純化的Αρχ I V毒素是覆蓋在 E L I S Α盤的孔壁。先與被試驗豬隻的血淸反應，然後與如標識的抗豬抗體反應，可顯示是否存在抗A p X I V 毒素抗體。診斷試驗系統的另一實施例是如：含有純化的 A p X I V毒素的西方點墨與被試驗豬隻的血淸反應，然後利用專一的抗一 A p X I V抗體偵測。因此，含有純化的A p X I V毒素，用於區分來自經胸膜肺炎放射菌領域菌株感染的豬隻血淸和經含有如本發明減毒活疫苗胸膜肺炎放射菌株的疫苗接種的豬隻血淸的診斷試驗也落於本發明範圍之內。在豬隻健康照顧上另一可見的問題是：假如豬被胸膜肺炎放射菌或A· suis或可能二種組合式感染後，很困難在一快速並不含糊的狀態下測定。用於A. sins專一性偵測的診斷試驗目前並未獲得。這主要是由於A. pleuropneumoniae (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -22- 593678 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ____B7五、發明説明（20) 和A. suis分享許多的抗原。如一可能提供的實施例，兩種高度抗原性Αρχ —毒素；ΑρχΙ和ΑρχΙ I在如 A.suis中有高度地保留同質性（Van Ostaayn et al.，交付發行）。編碼ΑρχΙ ，一 I I和—I I I毒素或同質物的已知R T X -基因被發現存於於所有放射菌屬成員，如：A. pleuropneumoniae，A.suis, A. rossii 和 A. equuli 。因此，開始時，本發明者認爲新的R T X -毒素A p x I V可能也存在於所有放射菌屬成員。然而經過試驗豬病原性放射菌後我們再次驚訝地發現。與已知的三種RTX -基因相反地，此種新型的RTX -基因a p X I V只存在於豬病原性的胸膜肺炎放射菌。它不存在於所有其他一般的豬病原性放射菌屬，因此它也不存在A. suis。參見實施例6和 7 ° 因此，令人驚訝地發現，在豬血淸中出現A p X I V 的抗體。它是一快速且不含糊的證據顯示：豬已被A. pleuropneumoniae感染，而非A. suis或任何其他豬病原性放射菌種感染。因此本發明也提供一個以是否出現抗A p X I V的抗體爲基礎的診斷試驗，和一個專一性區分經A· pleuropneumoniae和A. suis感染的區分試驗。此一試驗可能如：是一 E L I S A試驗，在分別的孔中含有存在於：A· pleuropneumoniae 和 A· suis 二者的 A p X I 和一 I I 毒素’ 和純化的A p X I V毒素。從經A· suis感染得到的動物血 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 、^Τ d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -23· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 B7 五、發明説明（21 ) 淸將只與含A p X I和一 I I的孔反應，而經A. pleuropneumoniae感染得到的動物血淸將也與含純化的 Αρχ IV毒素的孔反應。實施例1 胸膜肺炎放射菌血淸型第1型的a ρ X I V基因的潠殖和分析標準分子生物技術（質體D N A分離、限制酶消化作用、瓊脂凝膠電泳、南方點墨法、連接反應、轉型、電穿孔）除非有特別說明，否則都依照Sambrook等人所編輯的書(Molecular Cloning, A Loboratory Manual, Cold Sprin£ Harbor, N. Y.. 1 989 )或Ausubel等人所編輯的書所描述的方法（Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons，N.Y.，1987) °PCR的實施依照Innis等人編輯的書 (PCR protocols, A guide to Methods and Applications, Academic Press Inc.，San Diego, 1990)所描述的方法。染色體D N A分離依照Phcher等人的方法（Lett· Appl·

Mirobiol.，8; 151-156，1 989 )。所有胸膜肺炎放射菌參考菌株血淸型第1型：4074菌株；血淸型第2型： S1536菌株；血淸型第3型：S1421;血淸型第 4型：M62;血淸型第5a型··Κ17;血淸型第5b 型；L20 ;血淸型第6型：f eme ;血淸型第7型； WF83 ;血淸型第8型：405 ;血淸型第9型： C V I 13261 ;血淸型第10型：13039 ;血 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -一^ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -24- 593678 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（22) 淸型第11型：56 1 53和血淸型第12型：8329 )的來源已被 Frey 和 Nicolet 描述（J· Chin· Microbiol·，28; 232-236,1990 )。胸膜肺炎放射菌血淸型第3型 HV 1 1 4菌株是一領域分離株（即Beck等人所試驗的血淸型第3型菌株的其中一種菌株’ J· Chin. Microbiol.， 32;2749_2754，1994 )。所使用的其他放射菌株爲：A. rossii ： ATCC 27072; A. equuli ： ATCC 1 9392; A suis ： ATCC 1 55 5 8。所使用的大腸桿菌宿主菌株是：XL 1 - blue ( Stratagene，La Yolla，Ca;基因型：recAl andAl gyrA96 thi·1 hsdR17 supE44 relAl lac [ F " proAB \a(\Q ZDM15 Tnl0( Tet，）〕）和 Η M S 1 7 4 ( D E 3 ) ( AMS Biotechnology Ltd，Switzerland;基因型：F recA(rKi2-mKi2 + )rifr IDE3 )。從 T. J. Anderson 的論文（University of Guelph，1995 )得到初步的序列資料，由此設計並合成二個例子，並命名爲APXINA—1L(5—_ TGGCACTGACGGTGATGA-3 >)和 APXIVA-1R ( 5 ^ - GGCCATCGACTCAACCAT-3 )。這些弓丨子做子 P C R放大反應之用，並以胸膜肺炎放射菌血淸型第3型 HV 1 1 4菌株和血淸型第1型參考菌株4 0 7 4的染色體D N A做爲模板可將二種菌株內含4 4 2 b p的片段放大。將源自血淸型3型染色體DNA的片段，依照製造商的步驟以異羥基洋地黃毒配質一11一dUTP ( Boehringer Mannheim)標示（此片段命名爲探針 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· 、11 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -25- 593678 Λ7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明 (25) 1 1 段放大（見第 4 圖 )，此 D Ν Α片段含有a ρ X I V - 1 1 V a r 3 ( S E Q ID 3 )內 3 5 2 0 - 5 6 4 3 1 1 b p區域，並在 5 一和3 〆端分別有N d e 1和B a m Η 1限制酶 -Ν 請 4k I 位置。將 P C R 片段和表現載體P Ε Τ Η I S - 1 以 Ndel 无閱讀 1 I / BamHl 水解 5 經過連接和選殖，此質體命名爲背之 1 1 1 P I F F a P X I V b / 1 0 h i s - 1。質體注意事 1 P E T H I S — 1 是P E T 14b 的衍生物（Novagen 項再填 1 Μ Inc., Mad] Lson, Wi ) ，其中多重選殖位置已延伸並嵌入可編寫本頁嗓 I 碼組織胺酸十聚 MfHf 體區域。因此，P J F T a ρ X I V b / 1 1 I 1 0 h i S — 1 質體含有 T 7啓動子’可編碼組織胺酸六 1 聚體S E Q I D 4的 6 5 3- 1 3 6 0胺基酸殘基和 1 1 組織胺酸十聚體的轉譯融合。將此質體轉移至含訂 1 P L y s S 的大腸桿菌Η Μ S 1 7 4 ( D E 3 ) 菌株，它 1 I 含有I P T G 可誘導的Τ 7 R N A聚合酶基因以及T 7 1 1 1 溶菌酶基因，做爲增加穩定性之用。將此菌株培養於含 1 2 5 m g / m t 可洛芬尼可 (Chloramphenicol ) 和1 0 0 Ί m g / m C 氨苄青黴素的 L B培養基至〇D 6 5 0 爲0 · 5 1 ，並以1 0 m Μ 的異丙基 — b — D -硫半乳糖吡喃糖苷誘發。添加 I P Τ G 後，將細胞於3 7 °C培養2 · 5小時， I 1 以離心法收集細胞，從包涵體將分子量約8 0 k D的融合 1 1 蛋白分離〇然後把包涵體溶解於6 Μ胍氯化氫， 3 0 0 1 1 m Μ Ν a C L 和 5 0m Μ N a Η 2 Ρ 〇 4 ρ Η 8 . 0 1 | 的溶液， 8 0 k D 融合蛋白進一步以使用N i 2 4 螯合管柱 1 I (Qiagen AG, Basel )的[ 固定式金屬親合層析法 ( 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 B7 五、發明説明（26)

Immobilised Metal Affinity Chromatography, IMAC )( Schmitt et al., Molecular Biology Reports 18; 223-230, 1 993 )進行純化。純的蛋白質在P H 5 · 0從管柱沖提出。把收集到的沖出液以含3 0 0 m Μ N a C 1和5 0 m Μ N a Η 2 P Ο 4 pH8 · 0的溶液透析。將500mg多組織胺酸融合產物和1體積的Comptete Freunds Adjuvant ( Difco Labs，Detroit, MI )相混合致免疫兔子。三星期後，以相同含量蛋白混合不完全Freund Adjuvant的加強注射劑量施予兔子。加強注射後的四星期，抽取兔子血液，可得到含有抗- Ap X I V毒素抗體的超免疫血淸，命名爲 522 — 409 血淸。實施例4 : a p X I V基因在體外生長的胸膜肺炎放射菌的表現將血淸型第1型的胸膜肺炎放射菌參考菌株培養於添力口 lOmg/m^ b— NAD的Columbia培養液並如描述的方法收集（Beck et al.，J· Clin. Microbiol·，32; 2749-2754,1994)。把 Ap x I A，Ap x I I A、 A p x I V A -多組織胺酸融合蛋白和濃縮的培養物上淸液分別置於聚丙烯醯胺凝腸上，以電泳法進行分離（ Laemmli, Nature 227: 680-685, 1970 )，然後進行西方點墨程序（Towbinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76:4350-4354，1 979)。將西方點墨與抗一 Ap xl A和抗— A p X I I A 單株抗體反應〔Beck et al·，Clin 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d -29- 593678 Λ7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（27) Microbiol.，32; 2749-2754，1994〕，並與抗—A p X I V 522 - 409血淸（見實施例3)反應。血淸型第1，型的分離RTX毒素部分淸楚地含有A p X I A和 Apxl IA〇ApxIVA的存在無法顯示出（見第5 圖）。實施例5 : X I V基因在胸膜肺炎放射菌在活體內感染時的表現將含有8 0 k D多組織胺酸—A p X I V - v a r 3融合蛋白的聚丙烯醯胺凝膠（見實施例3 )轉移至一硝纖維膜。把膜分割成條狀，然後與1 0 0倍稀釋抗血淸型第1 型的復原期血淸或來自經血淸型第1型參考菌株實驗感染豬隻的血淸（Frey and Nicolet，Vet. Microbiol·，28; 61-73， 1 99 1 )。此反應使用抗兔子.1 g G鹼性磷酸酶標示連接物 (kirkegaard Perry Inc., Gaithersburg, Md ) ，N B T ( 4 一 Nitrobluetetrazoliumchloride，氯化 4 一硝基藍四卩坐）和 B C I P ( 5 — Bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate，5 — 溴一 4 一氯一 3 -吲哚磷酸鹽）顯色（見第6圖）。血淸型第1型血淸以及來自實驗感染豬的血淸都會和8 0 kD 的多組織胺酸一 Αρχ IV- va r 3蛋白反應。此顯示並胸膜肺炎放射菌感染豬隻時，A p X I V蛋白確實表現並，具有抗原性，且誘發抗一 Ap X I V毒素抗體。實施例6 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) €衣· 、?τ d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -30- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 A7 ___B7 五、發明説明（28) 使用南方點墨法證實a p X I V基因存在於所有胸膜肺炎放射菌血淸型並且不存在於非胸膜肺炎放射菌株

爲了觀察a p X I V存在於各種胸膜肺炎放射菌血淸型和相關的細菌，因此製造三種探針（見第4圖）。探針 ΑΡΧIVA描述於實施例1。探針ΑΡΧIVA2含有介於BamHl和Nrul位置的2015bp DNA片段。含 7 5 8 b p的探針APP I VA 1的製造係使用寡核苷酸 A P P I V 1 - L ( 5 ^ -GGGACAGTGGCTCAATTAAG-3 ^ )^PAPPIV1-R(5^ -AGCTGTAAACTCCACCAACG-3 /)經P CR放大反應。所有探針都根據製造廠商的程序以異羥基洋地黃毒配質—11 — dlJTP ( Boehdnger Mannheim )標示。然後與含有所有胸膜肺炎放射菌參考菌株和 Η V 1 1 4 領域菌株，Actin Obacillus suis ( A T C C

1 5 5 5 8 ) ，Actin Obacillus suis ( A T C C

2 7 0 7 2 )和 ActinObacillusequuli ( AT C C 1 9 3 9 2 )經C 1 a I水解的染色體D N A的南方點墨雜交。三種探針反應相應（見第7圖，與ΑΡΧ I VA 2 探針反應的結果），所有A.pleuropneumoniae菌株都有反應，而與A. suis，A.equuli和A. rossii菌株則無雜交反應。實施例7 : 使用P CR放大反應證實a P X I V基因存在於所直肺炎放射菌和相關菌株取5 0 n g來自各種A. pleuropneumoniae血淸型’其 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·«衣. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -31 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 593678 Μ ___Β7 一五、發明説明（29 ) 他放射菌層和P. haemolytica的染色體D N A爲模版，和以 APXIVA-1L ( 5 ^ -TGGCACTGACGGTGATGA-3 ^ )及 APXIVA— 1R ( 5 ^ -GGCCATCGACTCAACCAT-3 >)爲引子進行P C R放大反應。經過瓊脂凝膠分析產物，我們在所有A. pleuropneumoniae樣品中都觀察到4 4 2 b p的產物，而在其他放射菌層的樣品中則無產物存在（第8圖）此顯示除了實施例6的結果，P CR可用以區分 A. pleuropneumoniae和其他放射菌層。實施例8 : A p X I V — v a r 1多組織胺酸融合蛋白的過度表現以質體pR〇K 一 7 (見實施例1)爲模版，寡核苷酸 APX4/115 - L (5' CGCCATATGACAAAATTAACTATGCAAG )和 APX4116— R(5' CGCGAATTCAGCGACACAAGAGATAT )爲 P C R -弓丨子，將P C R片段放大。將足夠量的此片段以限制酶Ndel和 EcoRI水解，並選殖於事先經相同酵素水解的表現載體 pETHIS-1(已描述於實施例3)。所形成的質體命名爲 pJFFApxIVAlHi si，含 1841 胺基酸殘基2 0 6 k D的多組胺酸融合蛋白（以P A G E決定其MW)於大腸桿菌內過度表現（如實施例3所述）。蛋白質是由SEQ ID No:5內的核酸no· 1 1 3 2 - 6 5 4 6所編碼。蛋白質的胺基酸序列列於 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） -32- 593678 B7 五、發明説明（30 ) SEQ ID No: 6。在西方點墨，此產物與抗 A p X I V 522 — 409血淸（抗血淸描述在實施例 3)專一性反應。實施例9 : 藉由A p X I V接種法保護老鼠抵抗A P P攻擊將源自於血淸型第1型參考菌株4 0 7 4基因原料的 2 0 6 k D多組織胺酸一 A p X I V融合蛋白（如實施例 8描述）和一可相比的1 0 8 k D多組織胺酸— A ρ X I A -融合蛋白，如實施例3所述過度表現。把被誘導的大腸桿菌細胞的塊狀物再懸浮於P B S緩衝液（ 1 g細胞塊狀物懸浮於6 m <緩衝液），於冰上超音波振盪二次，每次4 5秒，使細胞溶解。然後在4 °C， 2 2 0 0 0 X g離心2 0分鐘，再把上淸液丟棄，所形成的塊狀物以3 Μ尿素（ρ Η 6 · 3 )溶液淸洗。利用經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 2 0 0 0 X g離心2 0分鐘去除尿素，然後將形成的塊狀物溶解於 6 M Guanidinium HC1 ( ρ Η 8 · 0 )。經過 P A G Ε凝膠的密度測量將蛋白樣品標準化。樣品以 Ρ B S稀釋並以油佐劑配方。取三組老鼠，每組1 5隻，分別經腹腔注入A ρ X I V抗原（3 6 · 3 // g )， ΑρχΙΑ抗原（36 · 3//g)或單獨的佐劑，使其致免疫。投予的疫苗體積是0 · 4m <。第一次接種後2 4 小時，每一組小鼠再分爲含7和8隻小鼠的兩群。含7隻老鼠的那一群以腹腔注射法注入0 · 2 m <的疫苗，含8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -33 - 593678 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _____B7___五、發明説明（31 ) 隻老鼠的那一群以肌肉注射法在每一隻後腿注入0 · 1 m <。加強注射後的1 3天，每隻老鼠經腹腔注入 1 · 5 1 0 8 c f u的毒性血淸型第1型菌株。實施例1 0 : ' h X I V的孔生成能力使用新鮮誘導的大腸桿菌細胞所表現的A p X I V做爲蛋白質來源，用以測試其在人工脂質雙層上孔生成的能力（Maier et al·，Infect. Immun，64; 4415-4423 (1996))。做爲暗淡無光脂質雙層實驗之用的方法先前已被描述（Benz et al.; Biochim. Biophys. Acta 5 1 1:305-3 1 9 ( 1 978)。膜在含 1%自體外源凝集素（黃豆卵磷脂I V — S型，來自 Sigma，St. Louis Mo )的正一十烷溶液形成。在通過膜處建立1 0倍鹽梯度後，利用keithley 610C靜電計測量零電流膜電位 5 — 1 0 分鐘（Benz et al·; Biochim. Biophys. Acta 55 1: 23 8-247(1 97 9)) °Apx IV 存在會造成在含 0 · 5 %膽固醇時，高頻率的孔形成，其平均單一通道電導係數率（G)爲4n S。這些結果顯示Αρχ I V誘導孔在人工雙層形成，並且因此對真核細胞具毒性，因此對Α. pleuropneumoniae 是一毒力因子。圖片的說明第 1 圖：ApxIVAva r 1 和 ApxIVAvar3的比較（var代表血淸型）。圖 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· 、π d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -34- 593678 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Λ7 B7 五、發明説明（33) 第5圖：Ap X I V在體外培養的血淸型第1型參考菌株4 0 7 4的表現。方格A是與抗一 A P x I VA單株抗體反應，方格B是與抗一 A p x I I A單株抗體反應和方格C是與抗—Αρχ I V 5 2 2 — 40 9血淸反應。第1行含A Ρ X I V —多組織胺酸融合蛋白’第2行含 A p X I I A —多組織胺酸融合蛋白，第3行含4 0 7 4 菌株濃縮的培養物上淸液’第4行含A P x 1 V A多組織胺酸融合蛋白。第6圖：免疫點墨顯示來自經實驗性感染血淸型第1 型參考菌株豬隻的血淸（第1行）或來自血淸型第1型領域感染豬隻的血淸與8 0 kD多組織胺酸一 Ap X I V融合蛋白的反應活性。以5 2 2 — 4 0 9血淸做爲陽性控制組（+ )，以1000倍稀釋的抗ΑρχΙ和ΑρχΙΙ 多株兔子血淸（Trey et al·，Ifect. Immun·，57; 2050-2056， 1 989 )做爲陰性控制組（—）。第7圖；經C 1 a I消化的基因D N A與探針 APXIVS2雜交的南方點墨。第1 — 13行：A. pleuropneumoniae參考菌株；1 :血淸型第1型；2 :血淸型第2型；3:血淸型第3型；4:血淸型第4型；5: 血淸型5a型；b:血淸型5b型；7:血淸型6型；8 ••血淸型第7型；9 ··血淸型第8型；1 〇 :血淸型第9 型；11 :血淸型第10型；12 :血淸型11型；13 ••血淸型1 2型；1 4 : Η V 1 1 4領域菌株；1 5 : A. suis ( A T C C 1 5 5 5 8 ) 1 6 : A.rossii ( 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T -36- 593678 五、發明説明（34 )

ATCC 2 7 0 7 2 ) ； 1 7 ： A. equuli ( A T C C 1 g 3 θ 2)。分子量標識者顯示（k b p)在左邊。第8圖：使用引子APX1VA—1L和 ΑΡΧ I VA — 1 R進行a P x I V的P CR放大反應。行的設計：第1 — 1 3行分別含有Α· pleuropneumoniae參考菌株第 1、2、3、4、5a、5b、6、7、8、Θ 、10、11和12型；第I4行：HV1 I4菌株；第 15 行：A.suis ATCC 15558 弟 16 fj Α· rossn ATCC 27072;第 17 行 A. equuli ATCC 19392;第 18 行：A. lignieresii ATCC 49236;第 19 行：P.haemolytica 第 1 型 ATCC 14003。分子量標識者顯示（kbp)在左邊。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -37- 593678 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（35) 序列淸單 (1 ) 一般資料： (i )申請者： (A )名字：AKZ〇 Nobel N.V. (B )街·· Velperweg 76 (C )城市：Arnhem (E )國家：The Netherlands (F )郵遞區號：6842 BM (i i )發明：胸膜肺炎放射菌之減毒活菌 (i i i )序列數目：4 (i v )電腦可讀型式 (A )媒體種類：塑膠製磁碟片 (B )電腦：I Β Μ P C可相容 (C)操作系統：PC — DOS/MS — DOS (D )軟體：Patentln Release #1.0, Version #1.30 (EP〇） (2 ) S E Q ID N〇：l的資料 (i )序列特徵： (A)長度：6736鹼基材 (Β )種類：核酸 (C )股：雙股 (D )拓蹼學：直線 (ii)分子種類：DNA(基因組）本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4

、1T

-38- 593678 A7 B7 五、發明説明（36 ) i i i )假說：無 i V )抗意識鏈：無 v i )起始來源： (A )有機體：胸膜肺炎放射菌 (B)菌株：4074(血淸型第1型參考菌株 (v i i )直接來源： (B)菌落：pR〇K7 (i X )特色： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

X 名稱 / 關: 鍵 • C D S 位置 ; 1 5 7 6 • .6 5 4 9 其他資料 • / 密碼 -起始二 1 5 7 6 / 功能二 \\ R T X 毒素π / 產物二 \\ A Ρ X IV- v a r 1 " / 基因二 VV a Ρ X IV- y a r 1 " / 數巨 1 列描述 : S E Q I D N〇· 1 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 ATCGATATGC CGCCGGGTAC GGGCGATATC CAACTTACTC TTTCGCAACA AATTCCGGTT 60 ACCGGTGCGG TGGTGGTAAC CACTCCGCAA GATATTGCGT TATTAGATGC GGTGAAAGGT 120 ATTTCAATGT TCC^AAAAGT GTCGGTACCG GTCTTAGGTA TCATTGAAAA TATGAGCGTA 180 CATATCTGCC AAAATTGCGG TCACCACGAA GATATTTTCG GCACCGGCGG TGCGGAGAAA 240 GTGGCGAAGA AATACGGTAC TAAAGTATTA GGACAAATGC CGTTGCATAT TCGCTTACGT 300 CAAGATTTGG ATGCCGGCAC ACCGACCGTC GTTGCGGCAC CGGAACACGA AACCAGCCGA 360 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X297公釐） _ 39 - 593678 Λ 7 Β7 — 一 Π. —- - - ---^ Xf ▼ ~ ~ 一五、發明説明（37) GCCTATATTG AATTAGCGGC AAAAGTCGCT TCGGAATTAT ACTGGCAAGG TTCGGTTATC 420 CCGTCTGAAA TTATGATTCG TGAAGTAAAA TAAGTTTTAA TAACCACGAA AACACAAAGA 480 ACACAAGCGG TAGAATTTGC AGAAAAATTT GCAAATCCTA CCGCTTTTTT ATTAGTACGA 540 TTCGCTGTTG GACTGCTATT TGATTTGGTT TGTCAGGATA TTATGTTATT GTAATGAAAT 600 GTTAGTGAAT TATTTTTATT AATTTGAAAG GTU^ACAAAAT GAAAATAAAA AAACGTTACA 660 TTGCGCTGTT GGTCTTAGGT GTCGTTATCA GCTATGCCTG GTATCAAAAT TATCAATGGG 720 AACAGCTGAT GTTAAGCGGT TATTGTGAAA AGGACGGAAG TTATTTTGAT GATAGGCATA 780 CGAAGCAAGA ACTGATTGAT AGGGCAATTA ACTATATGCT GGAGCATCAA TCTAAAAAAA 840 CATACGATGC TTATACTGAT GAACCTTTAG AAATAAAACC ATATTTAACA ATAGAGGAAT 900 TTAAAAAACT CAATCCAAAT TGTTGTGAAA TTACCTCATG GCCAGCAGAT GCAGTTCCAC 960 AAGATTGGGA TGTTCGTGTG GAAGGTAAGG CATATAGGTA TGTAATCGTA AAATATTTAA 1020 GAACCTTAGC AAATAGAGAA CCTGAACGAT GGGAAACTAG TATTGTTTTT GATAATTGCG 1080 GCAATCCTAA AAGAGCAAGC TACTTATATT ATTTAAAGAG AGAAATTTAT TATGACAAAA 1140 TTAACTATGC AAGATGTGAC CAATTTATAT ΤΤΑΤΑΤΑΑΑΆ CGAAAACTCT ACCTAAAGAT 1200 AGATTGGATG ATTCACTTAT TTCTGAAATA GGAAAAGGAG ATGATGATAT TGATAGAAAA 1260

Si GAATTTATGG TGGGGCCGGG ACGTTTTGTG ACCX5CTGATA ACTTTAGCGT TGTAAGAGAT 1320 TTTTTTAATG CTGGGAAATC ACGCATTATT GCGCCGCAAG TCCCGCCTAT TCGTTCACAG 1380 CAGGAAAAAA TCTTGGTCGG TTTAAAACCG GGCAAATATT CCAAAGCGCA GATATTGGAA 1440 ATGCTGGGTT ATACGAAAGG CGGAGAAGTG GTAAATGGCA TGTTTGCCGG TGAAGTCCAG 1500 ACATTAGGCT TTTATGACGA TGGCAAAGGG GATTTACTCG AACGCGCCTA TATCTGGAAT 1560 ACCACAGGAT TTAAA ATG AGC GAC AAT GCC TTT TTT GTT ATA GAA GAA TCA 1611

Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val lie Glu Glu Ser 1 5 10 GGC AAA CGC TAT ATT GAA AAC TTT GGT ATT GAA CCT CTT GGT AAG CAA 1659

Gly Lys Arg Tyr lie Glu Asn Phe Gly lie Glu Pro Leu Gly Lys Gin 15 20 25 GAA GAT TTT GAT TTT GTC GGC GGC TTT TGG TCT AAC TTA GTG AAT CGT 1707

Glu Asp Phe Asp Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg 30 35 40 GGT TTG GAA AGT ATT ATC GAC CCA TCC GGT ATC GGT GGA ACG GTA AAC 1755

Gly Leu Glu Ser lie lie Asp Pro Ser Gly lie Gly Gly Thr Val Asn 45 50 55 60 CTT AAC TTT ACC GGC GAG GTG GAA ACC TAC ACG TTA GAC GAA ACA AGG 1803

Leu Asn Phe Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg 65 70 75 TTT AAA GCG GAA GCG GCG AAG AAA. AGC CAT TGG AGT TTA GTG AAT GCG 1851

Phe Lys Ala Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala 80 85 90 GCG AAA GTA TAC GGC GGT TTA GAC CAA ATT ATT AAA AAA CTA TGG GAC 1899

Ala Lys Val Tyr Gly Gly Leu Asp Gin lie lie Lys Lys Leu Trp Asp 95 100 105 -¾先間讀背面之注意事項馮填寫本頁

、1T ‘ 本紙張尺度適用中1¾國家標率（CNS ) A4規格（210XM7公釐） -40- 593678 A7 B7 五、發明説明（38 AGT GGC TCA ATT AAG CAT TTA TAT. CAA GAT AAA GAT ACG GGC AAA TTA Ser Gly Ser lie Lys His Leu Tyr Gin Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu 110 115 120 1947 AAA CCG ATT ATT TAC GGC ACG GCC GGC AAC GAC AGT AAG ATT GAA GGC Lys Pro lie lie Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys lie Glu Gly 125 130 135 140 ACT AAA ATC ACC CGT AGG ATT GCG GGT AAA GAA GTT ACG CTT GAT ATT Thr Lys lie Thr Arg Arg lie Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp lie 145 150 155 GCC AAT CAG AAA ATT GAA AAA GGC GTG TTA GAG AAA TTG GGG CTG TCT Ala Asn Gin Lys lie Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser 160 165 170 GTT AGT GGT TCG GAT ATC ATT AAA TTG TTG TTT GGA GCA TTG ACT CCA Val Ser Gly Ser Asp lie lie Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro 175 180 185 ACT TTA AAT AGA ATG TTG CTA TCA CAA CTT ATC CAG TCT TTT TCC GAT Thr Leu Asn Arg Met Leu Leu Ser Gin Leu lie Gin Ser Phe Ser Asp 190 195 200 AGC TTG GCT ΆΆΑ CTT GAT AA.T CCC TTA GCC CCT TAC ACT AAA AAT GGC Ser Leu Ala Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly 205 210 215 220 1995 2043 2091 2139 2187 2235 謂先閱讀背面之注意事項再填寫本頁曠· GTG GTT TAT GTC ACC GGC AAA Val Val Tyr Val Thr Gly Lys 225 GGG Gly

CAT AAT GAT GTG CTT AAA GGA ACT GAA Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu 230 235 2283 GAG GAT TTG TTT CTC GGT GGT GAG GGG AAT GAT ACT TAT TAT GCG His Glu Asp Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala 240 245 250 AGA GTA GGC GAT ACA ATT GAA GAC GCC GAC GGC AAA GGT AAA GTC TAT Arg Val Gly Asp Thr lie Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyx 255 260 265 TTT GTG AGA GAA AAA GGG GTA CCT AAG GCG GAT CCT AAG CGG GTA GAG Phe Val Arg Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu 270 275 280 TTT AGC GAG TAC ATA ACG AAA GAA GAA ATA AAA GAG GTT GAA AAG GGG Phe Ser Glu Tyx lie Thr Lys Glu Glu lie Lys Glu Val Glu Lys Gly 285 290 295 300 TTA TTA ACT TAC GCA GTT TTA GAA AAT TAT AAT TGG GAA GAG AAA ACG Leu Leu Thr Tyr Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr 305 310 315 GCG ACT TTC GCT CAT GCG ACT ATG CTT AAT GAG CTT TTT ACT GAT TAT Ala Thr Phe Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr 320 325 330 ACT AAT TAT CGT TAT GAA GTT AAA GGA CTA AAA TTG CCC GCC GTT AAA Thr Asn Tyr Arg Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys 335 340 345 AAG TTA AAA AGT CCG TTG GTG GAG TTT ACA GCT GAT TTA TTA ACT GTT Lys Leu Lys Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val 350 355 360 ACG CCT ATT GAC GAA AAC GGA AAA GCA CTT AGC GAA AAA AGT ATT ACG Thr Pro lie Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser lie Thr 365 370 375 380 2331 2379 2427 2475 2523 2571 2619 2667 2715

、1T 本紙张尺度適力]中國國家標準（CNS ) Λ4規梠（210X 297公釐） -41 - 593678 A7 B7 ACA Thr 發明説明（39

GTT AAA AAT TTT AAA AAT GGT GAT TTA GGA ATA AGG TTG TTG GAT CCT

Val Lys Asn Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly lie Arg Leu Leu Asp Pro 385 390 395

AAT AGC TAT TAT TAT TTC CTT GAA GGC CAA GAT ACG GGT TTT TAT GGT

Asn Ser Tyr Tyr Tyr Phe Leu Glu Gly Gin Asp Thr Gly Phe iyr Gly 400 405 410

CCT GCT TTT TAT ATT GAA CGA AAA AAC GGT GGC GGC GCT AAA AAT AAC

Pro Ala Phe Tyr lie Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn 415 420 425

TCG TCG GGA GCA GGA AAT AGC AAA GAT TGG GGC GGG AAC GGG CAT GGA

Ser Ser Gly Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly 430 435 440

AAT CAC CGA AAT AAT GCC TCC GAC CTG AAT AAA CCG GAC GGA AAT AAT

Asn His Arg Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Aan Asn 445 450 455 460

GGG AAT AAC CAA AAT AAC GGA AGC AAT CAA GAT AAT CAT AGC GAT GTG

Gly Asn Asn Gin Asn Asn Gly Ser Asn Gin Asp Asn His Ser Asp Val 465 470 475

AAT GCG CCA AAT AAC CCG GGA CGT AAC TAT GAT ATT TAC GAT CCT TTA

Asn Ala Pro Asrx Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp lie Tyr Asp Pro Leu 480 485 490

GCT TTA GAT TTA GAT GGA GAT GGG CTT GAA ACC GTG TCX5 ATG AAC GGG

Ala Leu Asp Leu Asp Gly Asp Gly Lieu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly 495 500 505 ss

CGA CAA GGC GCG TTA TTC GAT CAT GAA GGA AAA GGT ATT CGT ACC GCA

Arg Gin Gly Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly lie Arg Thx Ala 510 515 520

ACG GGC TGG CTC GCT GCG GAT GAC GGT TTT TTA GTG TTA GAT CGT AAC

Thr Gly Trp Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn 525 530 535 540 CAA GAC GGC ATT ATT AAT GAT ATA AGC GAG TTA TTT AGT AAT AAA AAT Gin Asp Gly lie lie Asn Asp lie Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn 545 550 555

CAA CTT TCC GAC GGC AGT ATT TCT GCA CAC GGT T

Gin Leu Ser Asp Gly Ser lie Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala 560 565 570

GAT TTG GAT ACA AAC CAA GAT CAG CGT ATC GAC CAA AAT GAT AAG CTG

Asp Leu Asp Thr Asn Gin Asp Gin Arg lie Asp Gin Asn Asp Lys Leu 575 580 585

TTT TCT AAA CTC CAA ATT TGG CGG GAT TTA AAT CAA AAC GGT TTT AGT

Phe Ser Lys Leu Gin lie Trp Arg Asp Leu Asn Gin Asn Gly Phe Ser 590 595 600

GAA GCG AAT GAG CTG TTT AGC TTA GAA AGT TTG AAT ATT AAA TCT TTA

Glu Ala Asn Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn lie Lys Ser Leu 605 610 615 620

CAT ACC GCC TAT GAA GAG CGT AAT GAT TTT CTA GCG GGC AAT AAT ATC

His Thr Ala Tyr Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn He 625 630 635

CTT GCT CAG CTT GGG AAG TAT GAA AAA ACG GAC GGT ACT TTT GCA CAA

Leu Ala Gin Leu Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gin 640 645 650 中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（2丨0X 297公楚） -42- J________------、对------ (讀先閱讀背面之注意事項巧填寫本頁) _ 593678 B7 五、發明说明（ 40 ATG GGC GAT TTA AAT TTC AGT TTT AAC CCG TTT TAT AGC CGA TTT ACC Met Gly Asp Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr 655 660 665 GAA GGG TTA AAT TTA ACC GAG CAA CAA CGT CGC ACA ATT AAT CTA ACC Glu Ala Leu Asn Leu Thr Glu Gin Gin Arg Arg Thr lie Asn Leu Thr 670 675 680 GGC ACC GGT CGG GTT CGG GAT TTG CGT GAA GCC GCC GCA CTT TCT GAG Gly Thr Gly Arg Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu 685 690 695 700 GAG TTG GCT GCT TTA TTA CAA CAG TAC ACT AAG GCC TCC GAT TTT CAG Glu Leu Ala Ala Leu Leu Gin Gin iyr Thr Lys Ala Ser Asp Phe Gin 705 710 715 GCA CAA CGA GAA TTA TTG CCT GCC ATT TTA GAT AAA TGG GCG GCA ACG Ala Gin Arg Glu Leu Leu Pro Ala lie Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr 720 725 730 GAT TTA CAG TAT CAA CAT TAT GAT AAA ACA TTA CTT AAA ACG GTA GAA Asp Leu Gin Tyr Gin His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu 735 740 745 AGT ACC GAT AGT AGT GCT TCT GTC GTT AGA GTC ACG CCT TCT CAA ΊΤΑ Ser Thr Asp Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gin Leu 750' 755 760 AGT AGT ATA CGC AAT GCA AAG CAT GAT CCT Ser Ser lie Arg Asn Ala Lys His Asp Pro 765 770 ACC Thr 775 GTT ATG CAA AAC TTT Val Met Gin Asn Phe 780 ' Λ 部中 k it 聲 GAA CAO AGT AAG GCA AAA ATT GCG ACT TTA AAT TCG CTC TAC GGG TTA Glu Gin Ser Lys Ala Lys lie Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu 785 790 795 AAT ATC GAT CAA CTT TAT TAC ACG ACG GAT AAA GAC ATT CGC TAT ATT Asn lie Asp Gin Leu Tyx Tyr Thr Thr Asp Lys Asp lie Arg Tyr lie 800 805 810 ACT GAT AAA GTG AAT AAT ATG TAT CAA ACA ACC GTA GAA CTT GCC TAC Thr Asp Lys Val Asn Asn Met Tyr Gin Thr Thr Val Glu Leu Ala Tyr 815 820 825 CGT TCT TTA CTT TTA CAA ACG CGT TTG AAG AAA TAT GTT TAT AGC GTT Arg Ser Leu Leu Leu Gin Thr Arg Leu Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val 830 835 840 ΑΛΤ GCG AAA CAA TTC GAA GGG AAA TGG GTA ACC GAT TAT TCT CGT ACT Asn Ala Lys Gin Phe Glu Gly Lys Trp Val Thr Asp Tyr Ser Arg Thr 845 850 855 860 GAA GCC TTA TTT AAC TCT ACT TTT AAA CAA TCG CCT GAA AAT GCA TTA Glu Ala Leu Phe Asn Ser Thr Phe Lys Gin Ser Pro Glu Asn Ala Leu 865 870 875 TAT GAT TTA AGC GAA TAC CTT TCT TTC TTT AAC GAT CCT ACG GAA TGG Tyr Asp Leu Ser Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp 880 885 890 AAA GAA GGG CTA TTA CTG TTA AGC CGT TAT ATA GAT TAT GCT AAA GCA Lys Glu Gly Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr lie Asp Tyr Ala Lys Ala 895 900 905 CAA GGA TTT TAT GAA AAC TGG GCG GCT ACT TCT AAC TTA ACT ATT GCC Gin Gly Phe Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr lie Ala 910 915 920 國國家標率（CNS ) Λ4規格（210X297公楚） -43 - (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本貢)

593678 A7B7 發明説明（ 41 CGT TTA AGA GAG GCT GGA GTA ATT TTT GCA GAA TCG ACG GAT TTA AAA 4395 Arg Leu Arg Glu Ala Gly Val lie Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys 925 930 935 940 GGC GAT GAA AAA AAT AAT ATT TTG TTA GGT AGC CAA AAA GAT AAT AAC 4443 Gly Asp Glu Lys Asn Asn lie Leu Leu Gly Ser Gin Lys Asp Asn Asn 945 950 955 TTA TCG GGT AGT GCA GGT GAT GAT CTA CTT ATC GGC GGA GAG GGT AAT 4491 Leu Ser Gly Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu lie Gly Gly Glu Gly Asn 960 965 970 GAT ACG TTA AAA GGC AGC TAC GGT GCA GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA Asp Thr Leu Lys Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys 975 980 985 4539 GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg 990 995 1000 4587 GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA 4635 Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyx Ala Glu 1005 1010 1015 1020 GTG AAG TTT CX3A CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT 4683 Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His 1025 1030 1035 GAT ACG GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyx Ser His Val Asp Tyr 1040 1045 1050 4731 CAA TTT GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CX3C GAT GAA Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu 4779 1055 1060 1065 CTG ATT AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT Leu lie Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp 1070 1075 1080 4827 ATA AAG GAT CAT GCG GAT TGG GAG AGC ATT TTG GAA GGC GGC AAA GGC lie Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly Gly Lys Gly 1085 1090 1095 1100 4875 h 、、》 /*r: 部屮 Jk Χ：ι >/)合 Μ AAC GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC AGC TAT ATC ΤΊΤ AGC 4923 Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser 1105 1110 1115 AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC 4971 Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asn 1120 1125 1130 CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG 5019 Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala 1135 1140 1145 GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT 5067 Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr 1150 1155 1160 CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT 5115 His Asp Thr Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp 1165 1170 1175 1180 TAT CAA TTT GAC AAA TTG GAA. TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT 5163 Tyr Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp 1185 1190 1195 (11先閲讀背面之注意事項属填寫本頁)

本紙张尺度適丨丨]屮圈國家標李（〔，]^)/\4規格（210、乂 297公釐） -44- 593678 A7 B7 42 五、發明説明 GAA CTA GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGT GAT GAT Glu Leu Gly Lys Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp 1200 1205 1210 5211 AAT ATC AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GGT GCG GGT Asn lie Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val 工le Asp Ala Gly Ala Gly 1215 1220 1225 5259 AAT GAT ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu lie Gly Gly 1230 1235 1240 5307 AAA GGT AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC Lys Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyx lie 1245 1250 1255 1260 5355 TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT Phe Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn 1265 1270 1275 5403 GAT AAC CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn 1280 1285 1290 5451 ¾先間讀背面之注意事項再楨寫本頁 TAT GCG GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp 1295 1300 TTA Leu 1305 ATG TTA TTC Met Leu Phe 5499 GGT TAT CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyx Ser His 1310 1315 1320 5547 GTA GAT TAT Val Asp Tyr 1325 CAA TTT GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr 1330 1335 1340 5595

、1T 5643 CGC GAT GAA CTG ATT AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC Arg Asp Glu Leu lie Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly 1345 1350 1355 AAT GAT GAT ΑΤΑ AAG GAT CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT TTG GAA GGC 5691

Asn Asp Asp lie Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly 1360 1365 1370 GGC AAA GGC AAC GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT 573 9

Gly Lys Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyx 1375 1380 1385 ATC TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT 578 7 lie Phe Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn 1390 1395 1400 AAT GAT AAC CGA GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT GTG 5835

Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val 1405 1410 1415 1420 AAT TAT GCG GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA 5883

Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu 1425 1430 1435 TTC GGT TAT CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC 5931

Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn 1440 1445 1450 CAT GTA GAT TAT CAA TTT GAC AAA TTG GAA TTT GCT GAC CGC AGT ATA 5979

His Val Asp Tyr Gin Phe Asp Lys' Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie 1455 1460 1465 φ 屮 •Λ “: 準' 消 1! A ii 印本纸张尺度速扣个阀國家標率（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） -45- 593678 Λ 7 B? 五發明説明（, ACT CGT GAT GAA CTA GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp 1470 1475 1480 GGT GAT GAT AAT ATC AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC Gly Asp Asp Asn lie Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val lie Asp Ala 1485 1490 149S 1500 GGT GCG GGT AAT GAT ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC Gly Ala Gly Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu 1505 1510 1515 ATC GGC GGC AAA GGT AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC lie Gly Gly Lys Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp 1520 1525 1530 ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp 1535 1540 1545 ACC Thr AAT AAT GAT AAC CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr 1550 1555 1560 GAT ATT AAT TTA TCC GAA CTT TGG TTT AGC CGA GAA AAT AAC GAT TTG Asp ΙΙέΓ Asn Leu Ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu 1565 " 1570 1575 1580 ATT ATT AAA TCA TTA TTA AGT GAG GAT AAA GTC ACG GTT CAA AAT TGG lie lie Lys Ser Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gin Asn Trp 一 1585 1590 1595 TAT TCA CAC CAA GAT Tyr Ser His Gin Asp 1600 CAT His AAA ATA GAA AAT Lys lie Glu Asn 1605 ATT lie CGT TTA TCG AAT GAG Arg Leu Ser Asn Glu 1610 才.部Ψ -失

CAA ACG TTG GTG AGC ACT CAG GTG GAG AAG ATG GTT GAG TCX5 ATG GCC Gin Thr Leu Val Ser Thr Gin Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala 1615 1620 1625 GGC TTT GCT CAG AAG CAC GGA GGA GAG ATA TCT CTT GTG TCG CTT GAA Gly Phe Ala Gin Lys His Gly Gly Glu He Ser Leu Val Ser Leu Glu 1630 1635 1640 GAG GTA AAA CAA TAT ATC AAT AGC TTA ACA GCT GCT TTA TAA Glu Val Lys Gin Tyr lie Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu * 1645 1650 1655 CATACGAAAG AAATCGGCAC AGTTTTTTTG AACTGTGCCG ATTTGATTTT AGTGTAAGAA TATAGCCTGA TTTTAAGAAA TTTACTCTTG GCTAATAACT ATTTCCCATT TTATAAGTTA TTGACGGATG GTTTTATCAA ATATGAGATC AAATCTTATT TTAAATTCGC TTTCCATTAA GCGATAT 6027 6075 6123 6171 6219 6267 6315 6363 6411 6459 6507 6549 6609 6669 6129 6736

>/ί A (¾先間讀背¾之注意事項扁續.H本13::

㉛麟（2丨。X 297公漦） 46- 593678 A7 B7 五、發明説明（44 ) (2 ) S E Q ID N〇：2的資料 (i )序列特徵 (A)長度：1658個胺基酸 (B )種類：胺基酸 (D )拓蹼學：直線 (ii)分子種類：蛋白質 (xi)序列描述：SEQ ID N〇：2: (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 經淤部中央榀率而只_τ消费合作ii印f 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -47- 593678 A7 B7 五、發明説明（4δ ) 經浐部中决樣卑β工消费合作私印掣

Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val lie Glu Glu Ser Gly Lys Arg Tyx 1 5 10 15 lie Glu Asn Phe Gly lie Glu Pro Leu Gly Lys Gin Glu Asp Phe Asp 20 25 30 Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu Glu Ser 35 40 45 lie lie Asp Pro Ser Gly lie Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn Phe Thr 50 55 60 Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys Ala Glu 65 70 75 80 Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys Val Tyr *' 85 90 95 Gly Gly Leu Asp Gin lie lie Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly Ser lie 100 105 110 Lys His Leu Tyr Gin Asp Lys Aap Thr Gly Lys Leu Lys Pro lie lie 115 120 125 Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys lie Glu Gly Thr Lys lie Thr 130 135 140 Arg Arg lie Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp lie Ala Asn Gin Lys 145 150 155 160 工le Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser Gly Ser 165 170 175 Asp lie lie Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu Asn Arg 180 185 190 Met Leu Leu Ser Gin Leu lie Gin Ser Phe Ser Asp" Ser Leu Ala Lys 195 200 205 Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val Tyr Val 210 215 220 Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu Asp Leu 225 230 235 240 Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Arg Val Gly Asp 245 250 255 Thr lie Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val Arg Glu 260 265 270 Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser Glu Tyr 275 280 285 lie Thr Lys Glu Glu lie Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu Thr Tyr 290 295 300 Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr Phe Ala 305 310 315 320 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .磉. 訂 d 593678 丸、箱明说明（46 ) i： JCt

Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gin Met Gly Asp Leu 645 650 655 A， ir

His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr Thr Asn Tvr Arg 325 330 335

Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu Lys Ser 340 345 350

Pro Leu Val Gl-u Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro lie Asp 355 360 365

Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser lie Thr Val Lys Asn Phe 370 375 380

Lys Asn Gly Asp Leu Gly lie Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser Tyr Tyr 385 390 395 400

Tyr Phe Leu Glu Gly Gin Asp Thr Gly Phe Tyr Gly Pro Ala Phe Tyr 405 410 415 lie Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn Ser Ser Gly Ala 420 425 430

Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His Arg Asn 435 440 445

Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly Asn A,sn Gin 450- 455 460

Asn Asn Gly Ser Asn Gin Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala Pro Asn 465 470 475 480

Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp lie Tyx Asp Pro Leu Ala Leu Asp I^eu 485 490 495

Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gin Gly Ala 500 505 510

Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly lie Arg Thr Ala Thr Gly Trp Leu 515 520 525

Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn Gin Asp Gly lie 530 535 540 lie Asn Asp He Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gin Leu Ser Asp 545 550 555 560

Gly Ser lie Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu Asp Thr 565 570 575

Asn Gin Asp Gin Arg lie Asp Gin Asn Asp Lys Leu Phe Ser Lys Leu 580 585 590

Gin lie Trp Arg Asp Leu Asn Gin Asn Gly Phe Ser Glu Ala Asn Glu 595 600 605

Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn lie Lys Ser Leu His Thr Ala Tyr 610 61S 620

Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn lie Leu Ala Gin Leu 625 630 635 640

Gly Lys r

Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala Leu Asn 660 665 670

Leu Thr Glu Gin Gin Arg Arg Thr lie Asn Leu Thr Gly Thr Gly Arg 675 680 685 i::巧—乂/iim tw 國家枕卑（CNS ) Λ4规格（210Χ29λ公棼）.-- 讀先間讀努而之注意ΐ項朽填朽本育、

593678 Λ7B7 五發明説明（4 J)

Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu Ala Ala 690 695 700 Leu Leu Gin Gin Tyr Thr Lys Ala Ser Asp Phe Gin Ala Gin Arg Glu 705 710 715 720 Leu Leu Pro Ala lie Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu Gin Tyr 725 730 735 Gin His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr Asp Ser 740 745 750 Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gin Leu Ser Ser lie Arg 755 760 765 Asn Ala Lys His Asp Pro Thr Val Met Gin Asn Phe Glu Gin Ser Lys 770 775 780 Ala Lys He Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn lie Asp Gin 785 790 795 800

Leu

Thr Thr Asp Lys Asp lie Arg Tyr lie Thr Asp Lys Val 805 810

Asn Asn Met Tyr Gin Thr Thr Val Glu Leu Ala 一 820 825 815 Arg Ser Leu Leu 830 /Τ'；部 il X ^ I f 印 f:

Leu Gin Thr Arg Leu Lys Lys Tyx Val Tyr Ser Val Asn Ala Lys Gin 835 840 845 Phe Glu Gly Lys Trp Val Thr Asp Tyr Ser Arg Thr Glu Ala Leu Phe " 850 855 Θβ0 Asn Ser Thr Phe Lys Gin Ser Pro Glu Asn Ala Leu Tyx Asp Leu Ser 865 870 875 880 Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu Gly Leu 885 890 895 Leu Leu Leu Ser Arg Tyr lie Asp Tyr Ala Lys Ala Gin Gly Phe Tyr 900 905 910 Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr lie Ala Arg Leu Arg Glu 915 920 925 Ala Gly Val lie Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp Glu Lys 930 935 940 Asn Asn lie Leu Leu Gly Ser Gin Lys Asp Asn Asn Leu Ser Gly Ser 945 950 955 960 Ala Gly Asp Asp Leu Leu lie Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Leu Lys 965 970 975 Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His Gly Gin 980 985 990 Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie 995 1000 1005 Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg 1010 1015 1020 Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser 1025 1030 1035 1040 < Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gin Phe Asp Lys 1045 1050 1055

(誚先閱讀背面之注意事項存填寫本1JC

國家標^·ΚΝ§)Α4規格（210x 297公釐卜〜 593678 A7 B7 發明説明Ui )

Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu lie Lys Ala 1060 1065 1070

Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp lie Lys Asp His 1075 1080 1085

Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp lie Leu 1090 1095 1100

Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His Gly 1105 1110 1X15 1120

Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp 1125 1130 1135 lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe 1140 1145 1150

Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp 1155 1160 1165

Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gin Phe Asp 1170 1175 1180

Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys 1185 •一 1190 1195 1200

Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn lie Asn Asp 1205 1210 1215

Trp Gly Arg Asn Ser Val lie Asp Ala Gly Ala Gly Asn Aap Thx Val • 1220 1225 1230

Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu He Gly Gly Lys Gly Asn Asp 1235 1240 1245 lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr He Phe Ser Lys Gly 1250 1255 1260

His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala 1265 1270 1275 1280

Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val 1285 1290 1295

Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp 1300 1305 1310

Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyx Gin 1315 1320 1325

Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu 1330 1335 1340 lie Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp lie 1345 1350 1355 1360

Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly Gly Lys Gly hsn 136S 1370 1375

Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys 1380 1385 1390

Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg 1395 1400 1405

Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyx Ala Glu 1410 1415 1420 一^\張尺度遥Λ中國國家標率（CNS ) A4規格（2lOX 297公釐） (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本I )

-5/ - 593678 A7 B7 五、發明説明（49 )

Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His 1425 1430 1435 1440

Asp Thr Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr 1445 1450 1455

Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu 1460 1465 1470

Leu Gly Lys Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn 1475 1480 1485 lie Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val 工le Asp Ala Gly Ala Gly Asn 1490 1495 1500

Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu lie Gly Gly Lys 1505 1510 1515 1520

Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyx lie Phe 1525 1530 1535

Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp 1540 1545 1550

Asn Arg Ala 7\xg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp lie Asn Leu ..1555 1560 1565

Ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu lie 工le Lys Ser 1570 1575 1580

Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gin Asn Trp Tyr Ser His Gin 1S85 1590 1595 1G00

Asp His Lys lie Glu Asn lie Arg Leu Ser Asn Glu Gin Thr Leu Val 1605 1610 1615

Ser Thr Gin Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala Gin 1620 1625 1630

Lys His Gly Gly Glu lie Ser Leu Val Ser Leu Glu Glu Val Lys Gin 1635 1640 1645

Tyr lie Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu * N〇：3的資料 :7 0 0 4鹼基材 :核酸 (C )股：雙股 (D )拓蹼學 (i i )分子種類 (i i i )假說：無 (誚先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1655 1650 (2 ) S E Q ID .(i )序列特徵 (A )長度 (B )種類直線 D N A (基因組）本纸張尺度述州中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） -52 593678

A

7 B 五、發明説明（5〇 ) (1 V )抗意識鏈：無 (V i )起始來源： (A )有機體：胸膜肺炎放射菌 (B)菌株：HV114(血淸型第3型領域菌株） (v i i )直接來源： (B)菌落：pR〇K5 (i X )特色： (A )名稱/關鍵：C D S (B)位置：1566. .5714 (D )其他資料：/密碼-起始=1 5 6 6 /功能=R T X —毒素〃 / 產物='、A p X I V - v a r 3 /7 / 基因='、a px IV — va r 3’ /數目=1 (xi)序列描述：SEQ ID NO :3 誚先閱讀背面之注意事項再镇寫本頁衣訂本紙張尺度適斤]中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -53- 593678 A7 ______________________________ B7 五、發明説明（51 ) 經濟部中央樣率而πς-τ消費合作ii印策 ATCGATATGC CGCCGGGTAC GGGCGATATC CAACTTACTC TTTCGCAACA AATTCCGGTT 60 ACCGGTGCGG TAGTGGTAAC TACTCCGCAA GATATTGCGT TATTAGATGC GGTGAAAGGT 120 ATTTCAATGT TCCAAAAAGT GTCGGTACCG GTCTTAGGTA TCATTGAAAA TATGAGCGTG 180 CATATCTGCC AAAATTGCGG TCACCACGAA GATATTTTCG GCACCGGCGG TGCGGAGAAA 240 GTGGCGAAGA AATACGGTAC TAAAGTATTA GGACAAATGC CGTTGCATAT TCGCTTACGT 300 CAAGATTTGG ATGCCGGCAC ACCGACCGTC GTTGCGGCAC CGGAACACGA CACCAGCAGA 360 GCCTATATTG AATTAGCGGC AAAAGTCGCT TCGGAATTAT ACTGGCAAGG TTCGGTTATC 420 CCGTCTGAAA TTATGATTCG TGAAGTAAAA TAAGCCTACA TAACCACGGA ATACCAGATA 480 ACACAGAAGG AAAACAAGCG GTAGAATTTG CAGAAAAAGT TGCAAATTCT ACCGCTTTTT 540 TATTAGTACG ATTCGCTGTT GGACTGCCAT TTGATTTGGT TTGTCAGGAT ATTATGTTAT 600 TGTAATGAAA TGTTAGTGAA TTATTTTTAT TAATTTGAAA GGAGACAAAA TGAAAATAAA 660 AAAACGTTAC ATTGCGCTGC TAGCTTTAGG CAGTGTTATT GGCTATGCCT GGTATCAAAA 720 TTATCAATGG GAACAGTTGA TGTTAAGTGG CTATTGTGAA AAGGACGGAA GCTATTGTGA 780 TGATAGGCAT ACGAAGCAGG AACTGATTGA TAGGGCAATT AACTATGTGC TGGAAAATCA 840 AATTCAACAG ACA^TATGAAG GTGATGACCT TGTGGATATA AAACAATATT CAACAATAGA 900 GGAATTTAAA AAACTAAATC CGAATTGTTG TAAGGTAGAT TCTTGGCCGG ATGATGCTGT 960 TCGTGAGGAT GCTGATTTAC AGCGAGAGGG CAAAGCGTAT AAATACGTAA AAGTCAAATA 1020 TTTAAGAACC TATTTAGCGA ATAGAGAACC TGAACAATGG GAAAATTACA TAGTATTTGA 1080 |衣--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -54- 593678 ^'''i^':^^^ A7 B7 五、發明说明（52) TAATTGCAGT GGAATTAAAG AAAGACACCA ACTGTATTAA AAATAGATTA GATGGAGACA 1140 ACACGATGAC AAAACTAACT ATCCAAGATG TGACTAATTT ATATTTATAT AAGCAAAGAA 1200 CTTTACCTAC GGATAGGTTA GATGATTCGC TTATTAGCAA AACAGGAAAA GGGGAAAATA 1260 TTGATAAAAA GGAATTTATG GCGGGGCCGG GACGTTTTGT GACGGCCGAT AATTTTAGTG 1320 TTGTAAAAGA CTTTTTTACT GCAAAGGATT CATTAATAAA CCTAAGCTTG CAGACTCGTA 13 8 0 TATTAGCGAA TTTAAAGCCG GGCAAATATT CCAAAGCGCA GATATTAGAA ATGTTGGGCT 1440 ATACGAAAAA TGGAGAAAAG GTAGATGGCA TGTTTACCGG TGAAGTCCAG ACATTAGGCT 1500 TTTATGACGA TGGCAAAGCG GATTTACTCG AACGCGCCTA TATCTGAAAT ACCACAGGAT 1560 TTAAA ATG AGC GAC AAT GCC TTT TTT GTT ΑΤΑ GAA GAA TCA GGC AAA 1607

Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val lie Glu Glu Ser Gly Lys 1660 1665 1670

CGC TAT ATT GAA AAC TTT GGT ATT GAA CCT CTT'GGT AAG CAA GAA GAT 165S

Arg Tyr lie Glu Asn Phe Gly lie Glu Pro Leu Gly Lys Gin Glu Asp 1675 1680 1685 TTT GAT TTT GTC GGC GGC TTT TGG TCT AAC TTA GTG AAT CGT GGT TTG 1703

Phe Asp" Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu 1690 1695 1700 GAA AGT ATT ATC GAC CCA TCC GGT ATC GGT GGA ACG GTA AAC CTT AAC 1751

Glu Ser lie lie Asp Pro Ser Gly lie Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn 1705 1710 1715 1720 TTT ACC GGC GAG GTG GAA ACC TAC ACG TTA GAC GAA ACA AGG TTT AAA 1799

Phe Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys 1725 1730 1735 GCG GAA GCG GCG AAG AAA AGC CAT TGG AGT TTA GTG AAT GCG GCG AAA 1847

Ala Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys 1740 1745 1750 GTA TAC GGC GGT TTA GAC CAA ATT ATT AAA AAA CTA TGG GAC AGT GGC 1895

Val Tyr Gly Gly Leu Asp Gin lie 工le Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly 1755 1760 1765 TCA ATT AAG CAT TTA TAT CAA GAT AAA GAT ACG GGC AAA TTA AAA CCG 1943

Ser lie Lys His Leu Tyr Gin Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu Lys Pro 1770 1775 1780 ATT ATT TAC GGC ACG GCC GGC AAC GAC AGT AAG ATT GAA GGC ACT AAA 1991 lie lie Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys 工le Glu Gly Thr Lys 1785 1790 1795 1800 ATC ACC CGT AGG ATT GCG GGT AAA GAA GTT ACG CTT GAT ATT GCC AAT 2039 lie Thr Arg Arg lie Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp lie Ala Asn 1805 1810 1815 CAG AAA ATT GAA AAA GGC GTG TTA GAG AAA TTG GGG CTG TCT GTT AGT 2087

Gin Lys lie Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser 1820 1825 1830 GGT TCG GAT ATC ATT AAA TTG TTG TTT GGA GCA TTG ACT CCA ACT TTA 2135

Gly Ser Asp lie lie Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu 1835 1840 1845 AAT AGA ATG TTG CTA TCA CAA CTT ATC CAG TCT TTT TCC GAT AGC TTG 2183

Asn Arg Met Leu Leu Ser Gin Leu lie Gin Ser Phe Ser Asp Ser Leu 1850 1855 1860

Ik張尺度適用中國國家標準（CNTS ) A4規格（2l〇x 297公釐） -55- (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

593678 A7 B7 五、發明説明（53) ? GCT AAA CTT GAT AAT CCC TTA GCC CCT TAC ACT AAA AAT GGC GTG GTT 2233

Ala Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val 1865 1870 1875 1880

TAT GTC ACC GGC AAA GGG AAT GAT GTG CTT AAA GGA ACT GAA CAT GAG

Tyr Val Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu 1885 1890 1895

GAT TTG TTT CTC GGT GGT GAG GGG AAT GAT ACT TAT TAT GCG AGA GTA

Asp Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Arg Val 1900 1905 1910

GGC GAT ACA ATT GAA GAC GCC GAC GGC AAA GGT AAA GTC TAT TTT GTG

Gly Asp Thr lie Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val 1915 1920 1925

AGA GAA AAA GGG GTA CCT AAG GCG GAT CCT AAG CGG GTA GAG TTT AGC

Arg Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser 1930 1935 1940

GAG TAC ATA ACG AAA GAA GAA ATA AAA GAG GTT GAA AAG GGG TTA TTA

Glu Tyx lie Thr Lys Glu Glu lie Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu 1945 1950 1955 i960 ------；-I (讀先閲讀背面之注意事項-«楨寫本lic ACT TAC GCA GTT TTA GAA AAT TAT AAT TGG GAA GAG AAA ACG GCG ACT Thr Tyr Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr 2519 1965 1970 TTC GCT CAT GCG ACT ATG CTT AAT GAG Phe Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu ^ 1980 1985 CTT TTT Leu Phe 1975 ACT GAT TAT ACT AAT Thr Asp Tyr Thr Asn 1990 2567 訂 TAT CGT TAT GAA GTT AAA GGA CTA AAA TTG CCC GCC GTT AAA AAG TTA Tyr Arg Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu 1995 2000 2005 2615 AAA AGT CCG TTG GTG GAG TTT ACA GCT GAT TTA TTA ACT GTT ACG CCT Lys Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro 2010 2015 2020 2663 ATT GAC GAA AAC GGA AAA GCA CTT AGC GAA AAA AGT ATT ACG GTT AAA lie Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser lie t*hr Val Lys 2025 2030 2035 2040 2711 AAT TTT AAA AAT GGT GAT TTA GGA ATA AGG TTG TTG GAT CCT AAT AGC Asn Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly lie Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser 2045 2050 2055 2759 TAT TAT TAT TTC CTT GAA GGC CAA GAT ACG GGT TTT TAT GGT CCT GCT 2807 Tyr Tyr Tyr Phe Leu Glu Gly Gin Asp Thr Gly Phe Tyr Gly Pro Ala 2060 2065 2070 TTT TAT ATT GAA CGA AAA AAC GGT GGA GGC TCT AAA AAT AAC TCG TCG 2855 Phe Tyr lie Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ser Lys Asn Asn Ser Ser 2075 2080 2085 GGA GCA GGA AAT AGC AAA GAT TGG GGC GGG AAC GGG CAT GGA AAT CAC 2903 Gly Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His 2090 2095 2100 CGA AAT AAT GCC TCC GAC CTG AAT AAA CCG GAC GGA AAT AAT GGG AAT 2951 Arg Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly T^sn 2105 2110 2X15 2120 AAC CAA AAT AAC GGA AGC AAT CAA GAT AAT CAT AGC GAT GTG AAT GCG 2999 Asn Gin Asn Asn Gly Ser Asn Gin Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala 2125 2130 2135 本紙張尺度適W屮困國家標枣（CNS ) A4規格（2丨0X 297公釐） -56- 593678 A7 B7 五、發明説明（54) CCA AAT AAC CCG GGA CGT AAC TAT GAT ATT TAC GAT CCT TTA GCT TTA Pro Asn Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp lie Tyr Asp Pro Leu Ala Leu 2140 2145 2150 3047 GAT TTA GAT GGA GAT GGG CTT GAA ACC GTG TCG ATG AAC GGG CGA CAA Asp Leu Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gin 2155 2160 2165 3095 GGC GCG TTA TTC GAT CAT GAA GGA AAA GGT ATT CGT ACC GCA ACG GGC Gly Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly lie Arg Thr Ala Thr Gly 217 0 .. 2175 2180 3143 TGG CTC GCT GCG GAT GAC GGT TTT TTA GTG TTA GAT CGT AAC CAA GAC Trp Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Axg Asn Gin Asp 2185 2190 2195 2200 3191 GGC ATT ATT AAT GAT ATA AGC GAG TTA TTT AGT AAT AAA AAT CAA CTT Gly lie lie Asn Asp lie Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gin Leu 2205 2210 2215 TCC GAC GGG AGT ATT TCT GCA CAC GGT TTT GCG ACA TTA GCC GAT TTG Gly

Ser Asp

Ser lie Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu 2220 2225 2230 TTT Phe GAT ACA AAC CAA GAT CAG CGT ATC GAC C Asp Thr Asn Gin Asp Gin Arg lie Asp Gin Asn Asp Lys Leu Phe Ser '2235 2240 2245 AAA CTC CAA ATT TGG CGG GAT TTA AAT CAA AAC GGT TTT AGT GAA GCG Lys Leu Gin He Trp Arg Asp Leu Asn Gin Asn Gly Phe Ser Glu Ala 2250 2255 2260 AAT GAG CTG ΤΓΤ AGC TTA GAA AGT TTG AAT ATT AAA TCT TTA CAT ACC Asn Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn lie Lys Ser Leu His Thr 2265 2270 2275 2280 GCC TAT GAA GAG CGT AAT GAT TTT CTA GCG GGC AAT AAT ATC CTT GCT Ala Tyr Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn lie Leu Ala 2285 2290 2295 CAG CTT GGG AAG TAT GAA AAA ACG GAC GGT ACT TTT GGA CAA ATG GGC Gin Leu Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Gly Gin Met Gly 2300 2305 2310 3239 3287 3335 3383 3431 3479 3527 (讀先間讀背面之注意事項男填寫本真)

3575 3623 if；部中 ·!); ll 消合 Μ 卬 GAT TTA AAT TTC AGT TTT AAC CCG TTT TAT AGC CGA TTT ACC GAA GCG Asp Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala 2315 2320 2325 TTA AAT TTA ACC GAG CAA CAA CGT CGC ACA ATT AAT CTA ACC GGC ACC Leu Asn Leu Thr Glu Gin Gin Arg Arg Thr lie Asn Leu Thr Gly Thr 2330 2335 2340 GGT CGG GTT CGG GAT TTG CGT GAA GCC GCC GCA CTT TCT GAG GAG TTG 3671

Gly Arg Val Axg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu 2345 2350 2355 2360 GCT GCT TTA TTA CAA CAG TAC ACT AAG GGC TCC GAT TTT CAG GCA CAA 3719

Ala Ala Leu Leu Gin Gin Tyr Thr Lys Gly Ser Asp Phe Gin Ala Gin 2365 2370 2375 CGA GAA TTA TTG CCT GCC ATT TTA GAT AAA TGG GCG GCA ACG GAT TTA 3767

Arg Glu Leu Leu Pro Ala lie Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu 2380 2385 2390 CAG TAT CAA CAT TAT GAT AAA ACA TTA CTT AAA ACG GTA GAA AGT ACC 3815

Gin Tyr Gin His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr 2395 2400 2405 -57- 593678 A7 B7 五、發明説明（5δ) GAT AGT AGT GCT TCT GTC GTT AGA GTC ACG CCT TCT CAA TTA AGT AGT Asp Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gin Leu Ser Ser 2410 2415 2420 ATA CGG AAT GTA AAG CAT GAT CCT ACC GTT ATG CAA AAC TGT GAA CAA 工le Arg Asn Val Lys His Asp Pro Thr Val Met Gin Asn Cys Glu Gin 2425 2430 2435 2440 AGT AAG GCA AAA ATT GCG ACT TTA AAT TCG CTC TAC GGG TTA AAT ATT Ser Lys Ala Lys lie Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn lie 2445 2450 2455 GAT CAA CTT TAT TAT ACG ACG GAT AAA GAC ATT CGT TAT ATT ACT GAC Asp Gin Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp lie Arg Tyr lie Thr Asp 2460 2465 2470 AAA GTG AAT AAT ATG TAT CAA ACA ACC GGA GAA CTC GGC TAT CGT TCT Lys Val Asn Asn Met Tyr Gin Thr Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Arg Ser 2475 2480 2485 TTA CTT TTA CAA ACG CGT GTG AAG AAA TAT GTT TAT AGC GTT AAT GCG Leu Leu Leu Gin Thr Arg Val Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val Asn Ala 2490 2495 2500 AAA CAA TTC GAA GGG AAA TGG GTA GCC GAT TAT TCT CGT ACT GAA GCC Lys Gin Phe Glu Gly Lys Trp Val Ala Asp Tyr Ser Arg Thr Glu Ala 2505 ’一 2510 2515 2520 3863 3911 3959 4007 4055 4103 4151 n 閲讀背面之

TTA TTT AAC TCT Leu Phe Asn Ser ACT Thr TAT AAA CAA TCG CCC GAA AAT GTA TTA TAT GAT Tyr Lys Gin Ser Pro Glu Asn Val Leu Tyr Asp 2525 2530 2535 4199 訂 TTA CX?C GAA TAC CTT TCT TTC TAT AAC GAC CCT ACG GAA TGG AAA GAA Leu Arg Glu Tyr Leu Ser Phe Tyr Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu 2540 2545 2550 GGG CTA TTA CTG TTA AGC CGT TAT ATA GAT TAT GCT AAA GCA CAA GGA Gly Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr lie Asp Tyr Ala Lys Ala Gin Gly 2555 2560 2565 TTT TAT GAA AAC TGG GCG GCT ACT TCT AAC TTA ACT ATT GCC CGT TTA Phe Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr lie Ala Arg Leu 2570 2575 2580 AGA GAG GCT GGA GTA ATT TGT GCA GAA TCG ACG GAT TTA AAA GGC GAT Arg Glu Ala Gly Val lie Cys Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp 2585 2590 2595 2600 GAA AAA AAT AAT ATT GTG TTA GGT AGC CAA AAA GAT AAT AAC TTA TCG Glu Lys Asn Asn lie Val Leu Gly Ser Gin Lys Asp Asn Asn Leu Ser 2605 2610 2615 GGT AGT GCA GGT GAT GAT CTA CTT ATC GGC GGA GAG GGT AAT GAT ACG Gly Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu lie Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr 2620 2625 2630 TTA AAA GGC AGC TAC GGT GCA GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGG CAT Leu Lys Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His 2635 2640 2645 GGA CAA GAT GTA ATT TAT GAA TAT TCC GAC AGT GCA AAC TCT AAA AAA Gly Gin Asp Val lie Tyr Glu Tyr Ser Asp Ser Ala Asn Ser Lys Lys 2650 2655 2660 GAT ATT GAT ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA GTG AAG Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys 2665 2670 2675 2680 4247 4295 4343 4391 4439 4487 4S35 4583 4631 國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -58- 593678 A7 " .B7 _________ • w . «ΜΜΙΗ·, 一. l · ,-,r *-»-1 I <—— 五、發明説明（Μ}

TTT CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT ACG 467S

Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr 2685 2690 2695 GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT CAA TTT Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gin Phe 2700 2705 2710 GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGC GAT GAA CTG ATT Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu lie 2715 2720 2725 AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT ATA AAG Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp lie Lys 2730 2735 2740 GAT CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT GTG GAA GGC GGC AAA GGC AAC GAT Asp His Ala Asp Trp Asp Ser lie Val Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp 2745 2750 2755 2160 ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly 2765 2770 2775 4727 4775 4823 4871 4919 讀先閲讀. 背 ι6 之注意事項再填寫本頁 4967

CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGA GCA

His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala — 2780 2785 2790 AGA GAT ATC GAC ACC TTA ACA TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG GAA GTG Arg Asp lie Asp Thr Leu Thr Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val 5015 2795 2800 2805 AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met heu Phe Gly Tyr His Asp 2810 2815 2820 5063 訂 ACG GAT TCX3 GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT TAT CAA Thr Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gin 2825 2830 2835 2840 5111 TGT GAC AAA TTG GAC TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT GAA CTA Cys Asp Lys Leu Asp Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu 2845 2850 2855 5159 GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGC GAT GAT AAT ATC Gly Lys Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn lie 2860 2865 2870 5207 AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GGT GCG GGT AAT GAT Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val lie Asp Ala Gly Ala Gly Asn Asp 2875 2880 2885 5255 ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC AAA GGT Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu He Gly Gly Lys Gly 2890 2895 2900 5303 AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser 2905 2910 2915 2920 5351 AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn 2925 2930 2935 5399 CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA ΆΛΑ ΤΊΤ ACT GAT ATT AAT TTA TCC Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp lie Asn Leu Ser 2940 2945 2950 5447 1^¥^111^國國家標车（^呢）八4規格（210/ 297公釐） -59- 593678 A7 " B7 五、發明説明（Μ GAA CTT TGG TTT AGC CGA GAA AAT AAC GAT TTG ATT ATT AAA TCA TTA 5495

Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu lie lie Lys Ser Leu 2955 2960 2965 TTA AGT GAG GAT AAA GTC ACG GTT CAA AAT TGG TAT TCA CAC CAA GAT 554 3

Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gin Asn Trp Tyr Ser His Gin Asp 2970 2975 2980 CAT AAA ATA GAA AAT ATT CGT TTA TCG AAT GAG CAA ATG TTG GTG AGC 5591

His Lys lie Glu Asn lie Arg Leu Ser Asn Glu Gin Met Leu Val Ser 2985 2990 2995 3000 ACT CAG GTG GAG AAG ATG GTT GAG TCG ATG GCC GGC TTT GCT CAG AAG 563 9

Thr Gin Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala Gin Lys 3005 3010 3015 CAC GGA GGA GAG ATA TCT CTT CTG TCG CCT GAA GAG GTA AAA CAA TAT 5687

His Gly Gly Glu lie Ser Leu Leu Ser Pro Glu Glu Val Lys Gin iyr 3020 3025 3030 ATC AAT AGC TTA ACA GCT GCT TTA TAA CATACGAAAG AAATCGGCAC 5734 lie Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu * 3035 3040 AGTTTTTGTG AACTGTGCCG ATTTGATTTT AGTGTAAGAA TATAGCCTGA TTTTAAGAAA 5794 TTTACTCTTG GCTAATAACT ATTTCCCATT TTATAAGTTA TTGACGGATG GTTTTATCAA 5854 ATATGAGATC AAATCTTATT TTAAATTCGC TTTCCATTAA GCGATATTGA TCTTTTAAGT 5914 TTGGGGCCGC ATGAGTTTGG AACCGATACC ACTCATTGTG GGAATCAATA CACAATACGC 5974 TGTAATCGGA CTCTTGCAGT TCATAATAAT GCTTTCTCTC CGTTAATTCT TCTTGCGTAT 6034 ATGGCGAGAG ATTAAAGCTG AATGGCTGGT TCGCACTAAC AAACAGGTTC TCCX3ATTTCA 6094 GATATTCACA ACCGTAATGG CTACCGGTTT CCTGCGGTTT TACATAATTG GTATGATTTT 6154 GTTTAGCTGT TATACGGTAG ATGCCTAATT GTGGTAAATT GCGTGTGTCA ATATAGCTTT 6214 CTTGTTCTCC GTAACCGAAA TACTCAATGG CGTTTTCTGT TTTAGCTAAG AAGAAACGTA 6274 AGCCGAAGCG GGGTAAATAC GGTAATTCGA TCGGGCGAAT AGCGTTAATT TCAACCGAAA 6334 GTTGTCCGTC ATTGAAGATA CGATAACGAA TATCCAGTGT TAAAATGCGA CCGCGAGAAA 6394 TTGACACAAT TGCAGATTTT ACTGAAAATT CGACCGCTTG TTCGCTTTGC TGCCACTGAA 6454 TTTCATACGC TCTGGTATAG GCTTTATCGT AGCCGGCATT TTGGCACGCC TCACGAATGA 6514 GGCGATCATT GTCGGTTGGC GCACGCCAAA TATTAAAATC TAACGATTGT TGGATAATCG 6574 CTTTACCGGC TTTTTCAATA CGGGTGAAAA TCCCTTTCTG TTTATCTAAT TGATAACTAA 6634 ATTGACCGTT GTGTACGTTA ATGTGGAAGC GATCTTCTTG TACTTCAAAT GCACTGTTCT 6694 CAATTGTGAA TTGTGGTAAT ACTAATTTAT TTTCGCTAAA TAAATTGAGC TGCTCGAAGC 6754 CAAGTGAATG TGCTTCGTCT AATAATTCGA CCGCGGTATT TAAGCGATAA TTTAAATTCA 6814 GTAGCCATAA ATGCCCGTTA TTTTTTGGTA ACTCAATCGG TAATACTACG CTGCCGTGCG 6874 GTTGGCAAGA AACGGATAAA TTCCCACCGC TTGTCACCAC GCCGTTTTCG ACAAATTCGT 6934 AATCAATCGT TAAATAATCG GCAAGATCAG TGAAATCCAA GTAGTTGTGG ATCACAATTT 6994 GGTTATCGAT 7004 國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -60- 誚先閱讀背面之注意事項扃填舄本黃 —St9 1--P-Ι» I— · ϋ- .

、1T 593678 A7 B7 五、發明説明（58 ) (2 ) S E Q ID N〇：4的資料 (i )序列特徵： (A)長度：1383個胺基酸 (B )種類：胺基酸 (D )拓蹼學：直線 (ii)分子種類：蛋白質 (X i )序列描述：S E Q ID N 〇·· 4 ·· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣·

、1T 經浐部中夾榀卑而只η消費合作扣印衆本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -61 - 593678 A7 B7 經浼部中决樣率而只工消費合作拉印製五、發明説明（59 )

Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val lie Glu Glu Ser Gly Lys Arg Tyr 15 10 15 工le Glu Asn Phe Gly lie Glu Pro Leu Gly Lys Gin Glu Asp Phe Asp 20 25 30

Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu Glu Ser 35 40 45 lie lie Asp Pro Ser Gly lie Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn Phe Thr 50 55 60

Gly Glu Val Glu Thr Tyx Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys Ala Glu 65 70 75 80

Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys Val Tyx 85 90 95

Gly Gly Leu Asp Gin lie lie Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly Ser lie 100 105 1X0

Lys His Leu Tyx Gin Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu Lys Pro lie lie 115 120 125

Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys lie Glu Gly Thr Lys lie Thr 130 135 140

Arg Arg lie Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp lie Ala Asn Gin Lys 145 150 155 160 lie Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser Gly Ser 165 170 175

Asp lie lie Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu Asn Arg 180 185 190

Met Leu Leu Ser Gin Leu lie Gin Ser Phe Ser Asp Ser Leu Ala Lys 195 200 205

Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val Tyr Val 210 215 220

Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu Asp Leu 225 230 235 240

Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Arg Val Gly Asp 245 250 255

Thr lie Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val Arg Glu 260 265 270

Lys Gly Val Pyo Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser Glu Tyr 275 280 285 lie Thr Lys Glu Glu lie Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu Thr Tyr 290 295 300

Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr Phe Ala 305 310 315 320 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -62- 593678 A7B7 I,五i_ 發明説明（ 60

His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr Thr Asn Tyr Arg 325 330 335 Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu Lys Ser 340 345 350 Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro lie Asp 355 360 365 Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser lie Thr Val Lys Asn Phe 370 375 380 Lys Asn Gly Asp Leu Gly lie Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser Tyr Tyr 385 390 395 400 Tyr Phe Leu Glu Gly Gin Asp Thr Gly Phe Tyx Gly Pro Ala Phe Tyr 405 410 415 lie Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ser Lys Asn Asn Ser Ser Gly Ala 420 425 430 Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His Arg Asn 435 440 445 Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly Asn Asn Gin 45Ό 455 460 Asn Asn Gly Ser Asn Gin Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala Pro Asn 465 470 475 480 Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp lie Tyr Asp Pro Leu Ala Leu Asp Leu 篇 485 490 495 Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gin Gly Ala 500 505 510 Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly lie Arg Thr Ala Thr Gly Trp Leu 515 520 525 Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn Gin Asp Gly lie 530 535 540 lie Asn Asp lie Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gin Leu Ser Asp 545 550 555 560 Gly Ser lie Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu Asp Thr 565 570 575 Asn Gin Asp Gin Arg lie Asp Gin Asn Asp Lys Leu Phe Ser Lys Leu 580 585 590 Gin lie Trp Arg Asp Leu Asn Gin Asn Gly Phe Ser Glu Ala Asn Glu 595 600 605 Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn lie Lys Ser Leu His Thr Ala Tyr 610 615 620 Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn lie Leu Gin Leu 625 630 635 640 Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Gly Gin Met Gly Asp Leu 645 650 655 Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala Leu Asn 660 665 670

Leu Thr Glu Gin Gin Arg Arg Thr lie Asn Leu Thr Gly Thr Gly Arg 675 680 685 «先閱讀背面之注意事項馮填寫本頁) ..衣. 訂本紙张尺度这圯中國國家標枣（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -63- 593678 A7 B7 五、發明説明（61 )

Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu Ala Ala 690 695 700

Leu Leu Gin Gin Tyr Thr Lys Gly Ser Asp Phe Gin Ala Gin Arg Glu 705 710 715 720

Leu Leu Pro Ala lie Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu Gin Tyr 725 730 735

Gin His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr Asp Ser 740 745 750

Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gin Leu Ser Ser lie Arg 755 760 765

Asn Val Lys His Asp Pro Thr Val Met Gin Asn Cys Glu Gin Ser Lys 770 775 780

Ala Lys lie Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn lie Asp Gin 785 790 795 800

Leu Tyr Tyx Thr Thr Asp Lys Asp lie Arg Tyr lie Thr Asp Lys Val 805 810 815

Asn Asn Met Tyr Gin Thr Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Arg Ser Leu Leu .. 820 825 830

Leu Gin Thr Arg Val Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val Asn Ala Lys Gin 835 840 845

Phe Glu Gly Lys Trp Val Ala Asp Tyr Ser Arg Thr Glu Ala Leu Phe " 850 855 860

Asn Ser Thr Tyr Lys Gin Ser Pro Glu Asn Val Leu Tyr Asp Leu Arg 865 870 875 880

Glu Tyx Leu Ser Phe Tyx Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu Gly Leu 885 890 895

Leu Leu Leu Ser Arg Tyr lie Asp Tyr Ala Lys Ala Gin Gly Phe Tyr 900 905 910

Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr lie Ala Arg Leu Arg Glu 915 920 925

Ala Gly Val lie Cys Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp Glu Lys 930 935 940

Asn Asn lie Val Leu Gly Ser Gin Lys Asp Asn Asn Leu Ser Gly Ser 945 950 955 960

Ala Gly Asp Asp Leu Leu lie Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Leu Lys 965 970 975

Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His Gly Gin 980 985 990

Asp Val lie Tyr Glu Tyr Ser Asp Ser Ala Asn Ser Lys Lys Asp lie 995 1000 1005

Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg 1010 1015 1020

Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser 1025 1030 1035 1040

Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gin Phe Asp Lys 1045 1050 1055 (韜先間讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準 ( CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 64- 593678 A7 B7 五、發明説明（62 )

Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu lie Lys Ala 1060 1065 1070

Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp 工le Lys Asp His 1075 1080 1085

Ala Asp Trp Asp Ser lie Val Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp lie Leu 1090 1095 lioo

Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His Gly 1105 1110 1115 1120

Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp 1125 1130 1135 lie Asp Thr Leu Thr Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe 1140 1145 1150

Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp 1155 1160 1165

Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gin Cys Asp 1170 1175 1180

Lys Leu Asp Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys 1185 1190 1195 1200

Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn lie Asn Asp 1205 1210 1215

Trp Gly Arg Asn Ser Val lie Asp Ala Gly Ala Gly Asn Asp Thx Val - 1220 1225 1230

Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu lie Gly Gly Lys Gly Asn Asp 1235 1240 1245 lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly 1250 1255 1260

Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp lie Asn Leu Ser Glu Leu 1285 1290 1295

Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu lie lie Lys Ser Leu Leu Ser 1300 1305 1310

Glu Asp Lys Val Thr Val Gin Asn Trp Tyr Ser His Gin Asp His Lys 1315 1320 1325 lie Glu Asn lie Arg Leu Ser Asn Glu Gin Met Leu Val Ser Thr Gin 1330 1335 1340

Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala Gin Lys His Gly 1345 1350 1355 1360

Gly Glu lie Ser Leu Leu Ser Pro Glu Glu Val Lys Gin Tyr lie Asn 1365 1370 1375

Ser Leu Thr Ala Ala Leu * 1380 >、紙张尺度適圯中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） · 65 - (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

593678 A7 B7 五、發明説明（63 ) (2 ) S E Q ID N〇：5的資料 (i )序列特徵： (A) 長度：6736鹼基材 (B )種類：核酸 (C )股：雙股 (D )拓蹼學：直線 (i i )分子種類：D N A (基因組） (i i i )假說：無 (i v )抗意識鏈：無 (v i )起始來源： (A )有機體：胸膜肺炎放射菌 (B) 菌株：4707(血淸型第1型參考菌株 ) (v i i )直接來源： (B)菌落：pR〇K7 (i X )特色：

(A )名稱/關鍵：C D S (B)位置：1132. .6549 (C )確認方法：實驗 (D )其他資料：/密碼-起始=1 1 3 2 /功能=R T X毒素〃 /產物=A p X I V夕 /證據=實驗 /基因='ApxIV — vl" 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .4 、-口 d. -66- 593678 A7 B7 五、發明説明（64 X i )特色： (A )名稱/關鍵：D〇S (B)位置：639. .1178 (D )其他資料：/密碼-起始=6 3 9 /功能= > 未知〃 /產物 /基因 )特色： (A) 名稱/關鍵：D〇S(B) 位置：619. .1453 (D )其他資料：/部分 / 產物M e t — G 〃 / 基因='' m r p " /標準-名稱='' m r p // /標示=m r p (i x )特色： (A )名稱/關鍵：一 1 〇 —訊息 B )位置 7 6 2 3 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) "口 - (D )其他資料：/標準—名稱''一 1 〇標示 10- 特色： 3 5 -訊息 A )名稱/關鍵 (B)位置：594. .599 (D )其他資料：/標準-名稱''一 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -67- 593678 A7 B7 五、發明説明（65 3 5 - s /標不= X )特色： (A) 名稱/關鍵：啓動者 (B) 位置：454··1 D )其他資料： /標準名稱

功能=a啓動者 >啓動者A ρ X

V 標示=啓動者 I ! .---!樣！ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

X

序列描述：S E Q

D N 〇·· 5

ATC GAT ATG CCG CCG GGT ACG GGC GAT ATC CAA. CTT ACT CTT TCG CAA He Asp Met Pro Pro Gly Thr Gly Asp He Gin Leu Thr Leu Ser Gin 1 5 l〇 15 CAA ATT CCG GTT t ACC GGT GCG GTG GTG GTA ACC ACT CCG CAA GAT ATT Gin lie Pro Val’ Thr Gly Ala Val Val Val Thr Thr Pro Gin Asp lie 20 25 30 GCG TTA TTA GAT GCG GTG AAA GGT ATT TCA ATG TTC CAA AAA GTr Trr· Ala Leu Asp Ala Val Lys Gly lie ser m2 €亞恐：羿？ 35 40 45 GTA CCG GTC TTA GGT ATC ATT GAA AAT ATG AGC GTA CAT ATC TQC CAA Val Pro Val Leu Gly lie lie Glu Asn Met Ser Val His lie gs Gl^ 55 6〇 J 48 96 144 192 訂經漭部中央標枣^只.T消费合作社印f 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -68- 593678 A7 B7 五、發明説明（66) AAT TGC GGT CAC CAC GAA GAT ATT TTC GGC ACC GGC GGT GCG GAG AAA 240

Asn Cys Gly His His Glu Asp lie Phe Gly Thr Gly Gly Ala Glu Lys 65 70 75 80 GTG GCG AAG AAA TAC GGT ACT AAA GTA TTA GGA CAA ATG CCG TTG CAT 288

Val Ala Lys Lys Tyr Gly Thr Lys Val Leu Gly Gin Met Pro Leu His 85 90 95 ATT CGC TTA CGT CAA GAT TTG GAT GCC GGC ACA CCG ACC GTC GTT GCG 336 lie Arg Leu Arg Gin Asp Leu Asp Ala Gly Thr Pro Thr Val Val Ala 100 105 110 GCA CCG GAA CAC GAA ACC AGC CGA GCC TAT ATT GAA TTA GCG GCA AAA 384

Ala Pro Glu His Glu Thr Ser Arg Ala Tyr lie Glu Leu Ala Ala Lys 115 120 125 GTC GCT TCG GAA TTA TAC TGG CAA GGT TCG GTT ATC CCG TCT GAA ATT 432

Val Ala Ser Glu Leu Tyr Trp Gin Gly Ser Val lie Pro Ser Glu lie 130 135 140 ATG ATT CGT GAA GTA AAA TAA GTTTTAATAA CCACGAAAAC ACAAAGAACA 483

Met lie Arg Glu Val Lys * 145 150 CAAGCGGTAG AATTTGCAGA AAAATTTGCA AATCCTACCG CTTTTTTATT AGTACGATTC 543 GCTGTTGGAC TGCTATTTGA TTTGGTTTGT CAGGATATTA TGTTATTGTA ATGAAATGTT 603 AGTGAATTAT TTTTATTAAT TTGAAAGGAA ACAAAATGAA AATAAAAAAA CGTTACATTG 663

* I CGCTGTTGGT CTTAGGTGTC GTTATCAGCT ATGCCTGGTA TCAAAATTAT CAATGGGAAC 723 AGCTGATGTT AAGCGGTTAT TGTGAAAAGG ACGGAAGTTA TTTTGATGAT AGGCATACGA 783 AGCAAGAACT GATTGATAGG GCAATTAACT ATATGCTGGA GCATCAATCT AAAAAAACAT 843 ACGATGCTTA TACTGATGAA CCTTTAGAAA. TAAAACCATA TTTAACAATA GAGGAATTTA 903 AAAAACTCAA TCCAAATTGT TGTGAAATTA CCTCATGGCC AGCAGATGCA GTTCCACAAG 9S3 ATTGGGATGT TCGTGTGGAA GGTAAGGCAT ATAGGTATGT AATCGTAAAA TATTTAAGAA 1023 CCTTAGCAAA TAGAGAACCT GAACGATGGG AAACTAGTAT TGTTTTTGAT AATTGCGGCA 1083 ATCCTAAAAG AGCAAGCTAC TTATATTATT T^lAAGAGAGA AA.TTTATT ATG ACA AAA 1140

Met Thr Lys 1 TTA ACT ATG CAA GAT GTG ACC AA.T TTA TAT TTA TAT AAA ACG AAA ACT 1188

Leu Thr Met. Gin Asp Val Thr Asn Leu Tyr Leu Tyr Lys Thr Lys Thr 5 10 15 CTA CCT AAA GAT AGA TTG GAT GAT TCA CTT ATT TCT GAA ATA GGA A?^A 1236

Leu Pro Lys Asp Arg Leu Asp Asp Ser Leu lie Ser Glu lie Gly Lys 20 25 30 35 GGA GAT GAT GAT ATT GAT AGA AAA GAA TTT ATG GTG GGG CCG GGA CQT 1284

Gly Asp Asp Asp 工le Asp Arg Lys Glu Phe Met Val Gly Pro Gly Arg 40 45 50 TTT GTG ACC GCT GAT AAC TTT AGC GTT GTA AGA GAT TTT TTT AAT GCT 1332

Phe Val Thr Ala Asp Asn Phe Ser Val Val Arg Asp Phe Phe Asn Ala

55 60 €S GGG AAA TCA CGC ATT ATT GCG CCG CAA GTC CCG CCT ATT CGT TCA CAG 1380

Gly Lvs Ser Arg lie lie Ala Pro Gin Val Pro Pro lie Arg Ser Gin 70 75 80 CAG GAA AAA ATC TTG GTC GGT TTA AAA CCG GGC AAA TAT TCC AAA GCG 1428

Gin Glu Lys lie Leu Val Gly Leu Lys Pro Gly Lys Tyr Ser Lys Ala 85 90 95 CAG ATA TTG GAA ATG CTG GGT TAT ACG AAA GGC GGA GAA GTG GTA AAT 1476

Gin lie Leu Glu Met Leu Gly Tyr Thr Lys Gly Gly Glu Val Val Asn 100 105 HO 115 GGC ATG TTT GCC GGT GAA GTC CAG ACA TTA GGC TTT TAT GAC GAT GGC 1524

Gly Met Phe Ala Gly Glu Val Gin Thr Leu Gly Phe Tyr Asp Asp Gly 120 125 130 AAA GGG GAT TTA CTC GAA CGC GCC TAT ATC TGG AAT ACC ACA GGA TTT 1572

Lys Gly Asp Leu Leu Glu Arg Ala Tyr lie Trp Asn Thr Thr Gly Phe 135 140 145 AAA ATG AGC GAC AAT GCC TTT TTT GTT ATA GAA GAA TCA GGC AAA CGC 1620 國國家標率（CNS ) A4規格（210 X297公f ) -69- (¾先閱讀背而之注意事項罚填寫本頁)

67\593678 A7 B7 五、發明説明

Lys Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val 工le Glu Glu Ser Gly Lys Arg 150 155 160 TAT ATT GAA AAC TTT GGT ATT GAA CCT CTT GGT AAG CAA GAA GAT ΤΊΤ Tyr lie Glu Asn Phe Gly lie Glu Pro Leu Gly Lys Gin Glu Asp Phe 16S 170 175 1668 GAT TTT GTC GGC GGC TTT TGG TCT AAC TTA GTG AAT CGT GGT TTG GAA Asp Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu Glu 18¾ 185 190 195 AGT ATT ATC GAC CCA TCC GGT ATC GGT GGA ACG GTA AAC CTT AAC TTT Ser lie 工le Asp Pro Ser Gly lie Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn Phe 200 205 210 ACC GGC GAG GTG GAA ACC TAC ACG TTA GAC GAA ACA AGG TTT AAA GCG Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys Ala 215 220 225 GAA GCG GCG AAG AAA AGC CAT TGG AGT TTA GTG AAT GCG GCG AAA GTA Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys Val 230 235 240 TAC GGC GGT TTA GAC CAA ATT ATT AAA AAA CTA TGG GAC AGT GGC TCA Tyr Gly Gly Leu Asp Gin lie lie Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly Ser 245 250 255 ATT AAG CAT TTA TAT CAA GAT AAA GAT ACG GGC AAA TTA AAA CCG ATT lie Lys His Leu Tyr Girl Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu Lys Pro lie 260 265 270 275 ATT TAC.X50C ACG GCC GGC AAC GAC AGT AAG ATT GAA GGC ACT AAA ATC 工le Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys lie Glu Gly Thr Lys lie 280 285 290 ACC CGT AGG ATT GCG GGT AAA GAA GTT ACG CTT GAT ATT GCC AAT CAG Thr Arg Arg lie Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp lie Ala Asn Gin 295 300 305 AAA ATT GAA AAA GGC GTG TTA GAG AAA TTG GGG CTG TCT GTT AGT GGT Lys lie Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser Gly 1716 1764 1812 1860 1908 1956 2004 2052 2100 310 315 320 TCG GAT ATC ATT AAA TTG TTG TTT GGA GCA TTG ACT CCA ACT TTA AAT Ser Asp lie lie Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu Asn 325 330 335 AGA ATG TTG CTA TCA CAA CTT ATC CAG TCT TTT TCC GAT AGO TTG GCT Arg Met Leu Leu Ser Gin Leu lie Gin Ser Phe Ser Asp Ser Leu Ala 340 345 350 355 AAA CTT GAT AAT CCC TTA GCC CCT TAC ACT AAA AAT GGC GTG GTT TAT Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val Tyr 3^0 365 370 GTC ACC GGC AAA GGG AAT GAT GTG CTT AAA GGA ACT GAA CAT GAG GAT Val Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu Asp 375 380 385 TTG TTT CTC GGT GGT GAG GGG AAT GAT ACT TAT TAT GCG AGA GTA GGC Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr ΊΥγ Ala Arg Val Gly 390 395 400 GAT ACA ATT GAA GAC GCC GAC GGC AAA GGT AAA GTC TAT TTT GTG AGA Asp Thr lie Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val Arg 405 410 415 GAA AAA GGG GTA CCT AAG GCG GAT CCT AAG CGG GTA GAG TTT AGC GAG Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser Glu 420 425 430 435 TAC ATA ACG AAA GAA GAA ATA AAA GAG GTT GAA AAG GGG TTA TTA ACT Tyr lie Thr Lys Glu Glu lie Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu Thr 440 445 450 TAC GCA GTT TTA GAA AAT TAT AAT TGG GAA GAG AAA ACG GCG ACT TTC Tyr Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr Phe 455 460 465 GCT CAT GCG ACT ATG CTT AAT GAG CTT TTT ACT GAT TAT ACT AAT TAT Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr Thr Asn Tyr 470 475 480 CGT TAT GAA GTT AAA GGA CTA AAA TTG CCC GCC GTT AAA AAG TTA AAA Arg Tyr Glu Val Lya Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu Lys 2148

21SS 2244 2292 2340 2388 2436 2484 2532 2580 2628 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

H张尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -70- 593678 A7 B7 五、發明说明（6δ) 485 490 495 AGT CCG TTG GTG GAG TTT ACA GCT GAT TTA TTA ACT GTT ACQ CCT ATT 2676 Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro lie 500 505 510 515 GAC GAA AAC GGA AAA GCA CTT AGC GAA AAA AGT ATT ACG GTT AAA AAT 2724 Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser lie Thr Val Lys Asn 520 525 530 TTT AAA AAT GGT GAT TTA GGA ATA AGG TTG TTG GAT CCT AAT AGC TAT 2772 Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly lie Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser Tyr 535 540 545 TAT TAT TTC CTT GAA GGC CAA GAT ACG GGT TTT TAT GGT CCT GCT TTT 2820 Tyr Tyr Phe Leu Glu Gly Gin Asp Thr Gly Phe Tyr Gly Pro Ala Phe 550 555 560 TAT ATT GAA CGA AAA AAC GGT GGC GGC GCT AAA AAT AAC TCG TCG GGA 2868 Tyr lie Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn Ser Ser Gly 565 570 575 GCA GGA AAT AGC AAA GAT TGG GGC GGG AAC GGG CAT GGA AAT CAC CGA 2916 Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His Arg 580 585 590 595 AAT AAT GCC TCC GAC CTG AAT AAA CCG GAC GGA AAT AAT GGG AAT AAC 2964 Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly Asn Asn 600 605 610 CAA AAT AAC GGA AGC AAT CAA GAT AAT CAT AGC GAT GTG AAT GCG CCA 3012 Gin Asn-Asn Gly Ser Asn Gin Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala Pro 615 620 625 AAT AAC CCG GGA CGT AAC TAT GAT ATT TAC GAT CCT TTA GCT TTA GAT 3060 Asn Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp lie Tyr Asp Pro Leu Άλα Leu Asp S30 635 S40 TTA GAT GGA GAT GGG CTT GAA ACC GTG TCG ATG AAC GGG CGA CAA GGC 3108 Leu Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gin Gly 645 650 655 GCG TTA TTC GAT CAT GAA GGA AAA GGT ATT CGT ACC GCA ACG GGC TGG 3156 Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly lie Arg Thr Ala Thr Gly Trp 660 6€5 670 6Ί5 CTC GCT GCG GAT GAC GGT TTT TTA GTG TTA GAT CGT AAC CAA GAC GGC 3204 Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn Gin Asp Gly 680 685 690 ATT ATT AAT GAT ATA AGC GAG TTA TTT AGT AAT AAA AAT CAA CTT TCC 3252 lie 工le Asn Asp lie Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gin Leu Ser 695 700 705 GAC GGC AGT ATT TCT GCA CAC GGT TTT GCG ACA TTA GCC GAT TTG GAT 3300 Asp Gly Ser lie Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu Asp 710 715 720 ACA AAC CAA GAT CAG CGT ATC GAC CAA AAT GAT AAG CTG TTT TCT AAA 3348 Thr Asn Gin Asp Gin Arg lie Asp Gin Asn Asp Lys Leu Phe Ser Lys 725 730 735 CTC CAA ATT TGG CGG GAT TTA AAT CAA AAC GGT TTT AGT GAA GCG AAT 3396 Leu Gin lie Trp Arg Asp Leu Asn Gin Asn Gly Phe Ser Glu Ala Asn 740 745 750 755 GAG CTG TTT AGC TTA GAA AGT TTG AAT ATT AAA TCT TTA CAT ACC GCC 3444 Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn lie Lys Ser Leu His Thr Ala 760 765 770 TAT GAA GAG CGT AAT GAT TTT CTA GCG GGC AAT AAT ATC CTT GCT CAG 3492 Tyr Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn lie Leu Ala Gin 775 780 785 CTT GGG AAG TAT GAA AAA ACG GAC GGT ACT TTT GCA CAA ATG GGC GAT 3540 Leu Gly Lys Tyx Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gin Met Gly Asp 790 795 800 TTA AAT TTC AGT TTT AAC CCG TTT TAT AGC CGA TTT ACC GAA GCG TTA 3588 Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala Leu 805 810 815 AAT TTA ACC GAG CAA CAA CGT CGC ACA ATT AAT CTA ACC GGC ACC GGT 3636 Gly Thr Gly 835

Asn Leu Thr Glu Gin Gin Arg Arg Thr lie Asn Leu Thr 820 825 830 本紙張尺度iiU丨]中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 71 讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁震· 訂 593678 A7 B7 五、發明説明（69) CGG GTT CGG GAT TTG CGT GAA GCC GCC GCA CTT TCT GAG GAG TTG GCT Arg Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu Ala 840 845 850 GCT TTA TTA CAA CAG TAC ACT AAG GCC TCC GAT ΊΤΤ CAG GCA CAA CGA Ala Leu -Leu Gin Gin Tyx Thr Lys Ala Ser Asp Phe Gin Ala Gin Arg 855 860 865 GAA TTA TTG CCT GCC ATT TTA GAT AAA TGG GCG GCA ACG GAT TTA CAG Glu Leu Leu Pro Ala lie Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu Gin 870 875 880 TAT CAA CAT TAT GAT AAA ACA TTA CTT AAA ACG GTA GAA AGT ACC GAT Tyr Gin His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr Asp 885 890 895 AGT AGT GCT TCT GTC GTT AGA GTC ACG CCT TCT CAA TTA AGT AGT ΑΐΆ Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gin Leu Ser Ser lie 900 905 910 915 CGC AAT GCA AAG CAT GAT CCT ACC GTT ATG CAA AAC TTT GAA CAG AGT Arg Asn Ala Lys His Asp Pro Thr Val Met Gin A日n Phe Glu Gin Ser 920 925 930 AAG GCA AAA ATT GCG ACT TTA AAT TCG CTC TAC GGG TTA AAT ATC GAT Lys Ala Lys lie Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn lie Asp 935 940 945 CAA CTT TAT TAC ACG ACG GAT AAA GAC ATT CGC TAT ATT ACT GAT AAA Gin Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp lie Arg Tyr lie Thr Asp Lys 950 955 960 GTG AAT AAT ATG TAT CAA ACA ACC GTA GAA CTT GCC TAC CGT TCT TTA Val Asn Asn Met Tyr Gin Thr Thr Val Glu Leu Ala Tyr Arg Ser Leu 965 970 975 CTT TTA CAA ACG CGT TTG AAG AAA TAT GTT TAT AGC GTT AAT GCG AAA Leu Leu Gin Thr Arg Leu Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val Asn Ala Lys 98Ό 985 990 995 3684 3732 3 7B0 3828 3876 3924 3972 4020 4068 4116 CAA TTC GAA Gin Phe Glu Gly Lys 1000 TGG GTA ACC GAT TAT TCT CGT ACT GAA GCC TTA Trp Val Thr Asp l*yr Ser Arg Thr Glu Ala Leu 4164 1005 TTT AAC TCT ACT TTT AAA CAA TCG CCT GAA Phe Asn Ser Thr Phe Lys Gin Ser Pro Glu 1015 1020 AAT Asn 1010 GCA TTA TAT GAT TTA Ala Leu Tyr Asp Leu 1025 4212 AGC GAA TAC CTT TCT TTC TTT AAC GAT CCT ACG GAA TGG Ser Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu Gly 1030 1035 1040 4260 CTA TTA CTG TTA AGC CGT TAT ATA GAT TAT GCT AAA GCA Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr lie Asp Tyr Ala Lys Ala 1045 1050 1055 CAA GGATTT Gin Gly Phe 4308 TAT GAA AAC TGG GCG GCT ACT TCT AAC TTA ACT ATT GCC CGT TTA AGA Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr lie Ala Arg Leu Arg 1060 1065 1070 1075 GAG GCT GGA GTA ATT TTT GCA GAA TCG ACG GAT TTA AAA GGC GAT GAA Glu Ala Gly Val 工le Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp Glu 1080 1085 1090 AAA AAT AAT ATT TTG TTA GGT AGC CAA AAA GAT AAT AAC TTA TCG GGT Lys Asn Asn lie Leu Leu Gly Ser Gin Lys Asp Asn Asn Leu Ser Gly 1095 1100 1105 AGT GCA GGT GAT GAT CTA CTT ATC GGC GGA GAG GGT AAT GAT ACG TTA Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu lie Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Leu 1110 1115 1120 AAA GGC AGC TAC GGT GCA GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA CAC GGA Lys Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His Gly 1125 1130 1135 CAG GAT ATC GIT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC GCA AGA GAT Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp 1140 1145 1150 1155 ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA GTG AAG TTT lie Asp Thr Leu Lys Phe Thx Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe 1160 11β5 1170 4356 4404 4452 4500 4548 4596 4644

CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT ACG GAT 4692 (讀先閱讀背面之注意事項洞填寫本頁)

本紙張尺度適州中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） -72 · 593678 A7 B7 五、發明説明（70)

Arg Arg Val Asp Αεη Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp 1175 1180 1185 TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT CAA TTT GAC Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Glrx Phe Asp 1190 1195 1200 AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGC GAT GAA CTG ATT AAA Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu lie Lys 1205 1210 1215 GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT ATA AAG GAT Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp lie Lys Asp 1220 1225 1230 1235 CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT TTG GAA GGC GGC AAA GGC AAC GAT ATT His Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp lie 1240 1245 1250 CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA CAC Leu Arg Gly Gly Tyx Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His 1255 12β0 1265 4 740 4 788 4836 4884 4932 GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC GCA AGA Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg 1270 1275 1280 4980 GAT ATC GAC ACC TTA Ά Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val 1285 1290 AAT Asn

GTG TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG I Tyr Ala Glu Val Lys 1^95 TTC CGA--CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT ACG Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr 1300 1305 1310 1315 GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT TAT CAA TTT Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gin Phe ^ 1320 1325 1330 GAC AAA TTG GAA TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT GAA CTA GGT Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu Leu Gly 1335 1340 1345 AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGT GAT GAT AAT ATC AAC Lys Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn lie Asn 1350 1355 1360 GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GOT GCG GGT AAT GAT ACG Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val lie Asp Ala Gly Ala Gly Asn Asp Thr 1365 1370 1375 GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC AAA GGT AAT Val Asn Gly Gly Ash Gly Asp Asp Thr Leu lie Gly Gly Lys Gly Asn 1380 13Θ5 1390 1395 GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser Lys 1400 1405 1410 GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg 1415 1420 1425 GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu 1430 1435 1440 GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyx His 1445 1450 1455 GAT ACG GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr 1460 1465 1470 1475 CAA TTT GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGC GAT GAA Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu 1480 1485 1490 CTG ATT AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT Leu lie Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp 1495 1500 1505 ATA AAG GAT CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT TTG GAA GGC GGC AAA GGC 工le Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly Gly Lys Gly 本紙张尺度適/0中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -73 5028 5076 5124 5172 5220 5268 5316 5364 5412 5460 5508 5556 5604 5652 5700 (讀1閱讀背面之注意事項再.填寫本頁) 訂 593678 經系-部中央榀準而只_τ.消贽合作社印製 A7 B7 五、發明説明（71 ) 1510 1515 1520 AAC GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC 5748

Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Giy Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser 1525 1530 1535 AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC 5796

Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn 1540 1545 1550 1555 CGA GCA AGA GAT ATC GAC ACC ΊΤΑ AAA TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG 5844

Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala 1560 1565 1570 GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT 5892

Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr 1575 1580 1585 CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT 5940

His Asp Thr Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp 1590 1595 1600 TAT CAA TTT GAC AAA TTG GAA TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT 5988

Tyr Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp 1605 1610 1615 GAA CTA GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGT GAT GAT 6036

Glu Leu Gly Lys Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp 1620 1β25 1630 1635 AAT ATC AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GGT GCG GGT 6084

Asn lie·_Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val lie Asp Ala Gly Ala Gly 1640 1645 1650 AAT GAT ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC 6132

Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu lie Gly Gly 1655 1660 1665 AAA GGT AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC 6180

Lys Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie 1670 . 1675 1680 TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT ΑΑΊ 6228

Phe Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn 1685 1690 1695 GAT AAC CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT ATT AAT 6276

Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp lie Asn 1700 1705 1710 1715 TTA TCC GAA CTT TGG TTT AGC CGA GAA AAT AAC GAT TTG ATT ATT AAA 6324

Leu Ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu lie lie Lys 1720 1725 1730 TCA TTA TTA AGT GAG GAT AAA GTC ACG GTT CAA AAT TGG TAT TCA CAC 6372

Ser Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gin Asn Trp Tyr Ser His 1735 1740 1745 CAA GAT CAT AAA ATA GAA AAT ATT CGT TTA TCG AAT GAG CAA ACG TTG 6420

Gin Asp His Lys lie Glu Asn lie Arg Leu Ser Asn Glu Gin Thr Leu 1750 1755 1760 GTG AGC ACT CAG GTG GAG AAG ATG GTT GAG TCG ATG GCC GGC TTT GCT 6468

Val Ser Thr Gin Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala . 1765 1770 1775 CAG AAG CAC GGA GGA GAG ATA TCT CTT GTG TCG CTT GAA GAG GTA AAA 6516

Gin Lys His Gly Gly Glu lie Ser Leu Val Ser Leu Glu Glu Val Lys 1780 1785 1790 1795 CAA TAT ATC AAT AGC TTA ACA GCT GCT TTA TAA CATACGAAAG AAATCGGCAC 6569

Gin Tyr lie Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu ★ 1800 1805 AGTTTTTTTG AACTGTGCCG ATTTGATTTT AGTGTAAGAA TATAGCCTGA TTTTAAGAAA 6629 TTTACTCTTG GCTAATAACT ATTTCCCATT TTATAAGTTA TTGACGGATG GTTTTATCAA 6689 ATATGAGATC AAATCTTATT TTAAATTCGC TTTCCATTAA GCGATAT 6736 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -74· 593678 A7 B7 五、發明説明（72 )(2 ) S E Q ID N〇：6的資料 (i) 序列特徵： (A)長度：151個胺基酸 (B )種類：胺基酸 (D)拓蹼學：直線 (ii) 分子種類：蛋白質(xi)序列描述：SEQ ID N〇：6: lie Asp Met Pro Pro Gly Thr Gly Asp lie Gin Leu Thr Leu Ser Gin 15 10 15 Gin lie Pro Val Thr Gly Ala Val Val Val Thr Thr Pro Gin Asp lie 20 25 30 Ala Leu Leu Asp Ala Val Lys Gly lie Ser Met Phe Gin Lys Val Ser 35 40 45 Val Pro Val I«eu Gly lie lie Glu Asn Met Ser Val His lie Cys Gin 50 55 60 Asn Cys Gly His Kis Glu Asp lie Phe Gly Thr Gly Gly Ala Glu Lys 65 7 0 7S 80 Val Ala Lys Lys Tyr Gly Thr Lys Val Leu Gly Gin Met Pro Leu His 85 90 95 工le Arg Leu Arg Gin Asp Leu Asp Ala Gly Thr Pro Thr Val Val Ala 100 105 110 Ala Pro Glu His Glu Thr Ser Arg Ala Tyr lie Glu Leu Ala Ala Lys 115 120 125 Val Ala Ser Glu Leu Tyr Trp Gin Gly Ser Val 工le Pro Ser Glu lie 130-- 135 140 Met 工le Arg Glu Val Lys * 145 150 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .-HI衣· 、-口 - 經滂部中央樣卑^找Η消贽合作拉印f (2 ) S E Q id N〇：7的資料 (i)序列特徵： (A) 長度：1806個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (D )拓蹼學··直線本紙張尺度適州中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -75- 593678 A7 B7 五、發明説明（73 )

i i )分子種類：蛋白質 x i )序列描述：S E Q

D N〇：7

Met Thr Lys Leu Thr Met Gin Asp Val Thr Asn 15 10 Thr Lys Thr Leu Pro Lys Asp Arg Leu Asp Asp 20 25 lie Gly Lys Gly Asp Asp Asp lie Asp Arg Lys 35 40 Pro Gly Arg Phe Val Thr Ala Asp Asn Phe Ser 50 55 Phe Asn Ala Gly Lys Ser Arg lie 工le Ala Pro 65 70 75 Arg Ser Gin Gin Glu Lys 工le Leu Val Gly Leu 85 90 Ser Lys Ala Gin lie Leu Glu Met Leu Gly Tyr 100 105 Val Val Asn Gly Met Phe Ala Gly Glu Val Gin 115 120 Asp Asp Gly Lys Gly Asp Leu Leu Glu Arg Ala 130 135 Thr Gly Phe Lyk Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe 145 150 155 Gly Lys Arg Tyr lie Glu Asn Phe Gly lie Glu 165 170 Glu Asp Phe Asp Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser 180 185 Gly Leu Glu Ser 工le lie Asp Pro Ser Gly lie 195 200

s u y-1 L G X 5 r yl e T s u eo e 13 LI r u y e T L

Glu Phe Met Val Gly 45 Val Val Arg Asp Phe 60 Gin Val Pro Pro lie 80 Lys Pro Gly Lys Tyr 95 Thr Lys Gly Gly Glu 110 Thr Leu Gly Phe Tyr 125 Tyr lie Trp Asn Thr 140 Val lie Glu Glu Ser 160 Pro Leu Gly Lys Gin 175 Asn Leu Val Asn Arg 190 Gly Gly Thr Val Asn 205 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d. 經满部中央樣率而只工消費合作扣卬I? 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -76- 593678 A7 B7 五、發明説明（74)

Leu Asn Phe Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg 210 215 220 Phe Lys Ala Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Tro Ser Leu Val Asn Ala 225 230 235 240 Ala Lys Val Tyr Gly Gly Leu Asp Gin lie lie Lys Lys Leu Trp Asp 245 250 255 Ser Gly Ser lie Lys His Leu Tyr Gin Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu 260 265 270 Lys Pro lie lie Ίγτ Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys 工le Glu Gly 275 280 285 Thr Lys lie Thr Arg Arg lie Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp lie 290 295 300 Ala Asn Gin Lys lie Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser 305 310 315 320 Val Ser Gly Ser Asp lie lie Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro 325 · 330 335

Thr Leu Asn Arg Met Leu Leu Ser Gin Leu lie Gin Ser Phe Ser Asp 340 345 350

Ser Leu Ala Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro 355 360

Thr Lys Asn Gly 365

Val Val Tyr Val Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu 370- 375 380 His Glu Asp Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala 365 390 395 400 Arg Val Gly Asp Thr lie Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr 405 410 415 Pile Val Arg Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu 420 425 430 Phe Ser Glu Tyr lie Thr Lys Glu Glu lie Lys Glu Val Glu Lys Gly 435 440 445

Leu Leu Thr Tyr Ala Val Leu Glu Asn 450 455

Asn Trp Glu Glu Lys Thr 460

Ala Thr Phe Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr 465 470 475 480 Thr Asn Tyr Arg Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys 485 490 495

Lys Leu Lys Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val 500 505 510 Thr Pro lie Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser lie Thr 515 520 525 Val Lys Asn Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly lie Arg Leu Leu Asp Pro 530 Asn Ser Tyr 545 Pro Ala Phe 535 540

Tyr Phe Leu Glu Gly Gin Asp Thr Gly Phe 550 555

Gly 560 工le Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn 565 570 575

Ser Ser Gly Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly 580 、 585 590 Asn His Arg Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn 59 600 605

Gly Asn Asn Gin Asn Asn Gly Ser Asn Gin Asp Asn His Ser Asp Val 610 615 620 Asn Ala Pro Asn Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp lie Tyr Asp Pro Leu 625 630 635 640 Ala Leu Asp Leu Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly 645 650 655 Arg Gin Gly Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly lie Arg Thr Ala (-«先閱讀背面之注意事項再楨寫本lio

本紙张尺度遥州中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） -77- 593678 A7 B7 五、發明説明（75) 660 665 670

Thr Gly Trp Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn 675 680 665 Gin Asp Gly lie lie Asn Asp lie Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn 690 695 700 Gin Leu Ser Asp Gly Ser lie Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala 705 710 715 720

Asp Leu Asp Thr Asn Gin Asp Gin Arg lie Asp Gin Asn Asp Lys Leu 725 730 735 Phe Ser Lys Leu Gin lie Trp Arg Asp Leu Asn Gin Asn Gly Phe Ser 740 745 75¾ Glu Ala Asn Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn lie Lys Ser Leu 755 760 765

His Thr Ala Tyr Glu Glu 770

Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn lie 780

Leu Ala Gin Leu Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gin 785 790 795 800 Met Gly Asp Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr 805 810 815 Glu Ala Leu Asn Leu Thr Glu Gin Gin Arg Arg Thr lie Asn Leu Thr 820 825 830 Gly Thr Gly Arg Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu 835 840

Glu Leu Ala Ala Leu Leu Gin Gin Tyr ' 850 855 Ala Gin Arg Glu Leu Leu Pro Ala lie Leu 845 Lys Ala Ser Asp Phe Gin 860 870

Asp 875

Lys Trp Ala Ala Thr 880

Asp Leu Gin Tyr Gin His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu 885 890 895 Ser Thr Asp Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gin Leu 900 905 910 Ser Ser lie Arg Asn Ala Lys His Asp Pro Thr Val Met Gin Asn Phe 915 920 925 Glu Gin Ser Lys Ala Lys He Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu 930 935 940

Asn lie Asp Gin Leu 945 950

Tyr Thr Thr Asp Lys Asp lie Arg Tyr lie 955 9β0

Thr Asp Lys Val Asn Asn Met 965

Gin Thr Thr Val Glu Leu Ala Tyr 970 975

Arg Ser Leu Leu Leu Gin Thr Arg Leu Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val 980 985 990 Asn Ala Lys Gin Phe Glu Gly Lys Trp Val Thr Asp Tyr Ser Arg Thr 995 1000 1005 Glu Ala Leu Phe Asn Ser Thr Phe Lys Gin Ser Pro Glu Asn Ala Leu 1010 1015 1020 Tyr Asp Leu Ser Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp 1025 1030 1035 1040 Lys Glu Gly Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr 工le Asp Tyr Ala Lys Ala 1045 1050 1055 Gin Gly Phe Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr lie Ala 1060 1065 1070 Arg Leu Arg Glu Ala Gly Val lie Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys 1075 1080 1085 Gly Asp Glu Lys Asn Asn lie Leu Leu Gly Ser Gin. Lys Asp Asn Asn 1090 1095 1100 Leu Ser Gly Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu lie Gly Gly Glu Gly Asn 1105 1110 1115 1120 ^本紙張尺度適扣中國國家樣率（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 78

(讀先間讀背面之注意事項再填寫本IJC

593678 A7 B7 五、發丨

Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr 工le Phe Ser Lys 1125 1130 1135

Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg 1140 1145 1150 Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu 1155 1160 1165

Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His 1170 1175 1180 Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr 1185 1190 1195 1200 Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp Glu 1205 1210 1215 Leu lie Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp 1220 1225 1230 lie Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly Gly Lys Gly 1235 1240 1245 Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr lie Phe Ser 1250 1255 1260 Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn 1265 1270 1275 1280 Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala -- 1285 1290 1295

Glu Val Lys Phe ； 1300

Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly 1305 1310

His Asp Thr Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp 1315 1320 1325 Tyr Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr Arg Asp 1330 1335 1340 Glu Leu Gly Lys Gin Gly* Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp 1345 1350 1355 1360 Asn lie Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val 工le Asp Ala Gly Ala Gly 1365 1370 1375 Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu lie Gly Gly 1380 1385 1390

Lys Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly 1395 1400

Gly Ala Asp Thr Tyr lie 1405

Phe Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn 1410 1415 1420 Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn 1425 1430 1435 1440 Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe 1445 1450 1455

Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe 1460 1465

Tyr Ser 1470

His 讀先閱讀背面之注意事項再瑣寫本頁) Φ. 、1Τ

Val Asp Tyr Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie Thr 1475 1480 1485

Arg Asp Glu Leu lie Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly 1490 1495 1500

Asn Asp Asp lie Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser lie Leu Glu Gly 1505 1510 1515 1520

Gly Lys Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyx 1525 1530 1535 lie Phe Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp Thr Asn 1540 1545 1550

Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val 1555 1560 15^5

Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu 本紙張尺度適用中國國家標李（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） -79 593678 A7 B7 五、發明説明（7) 1570 1575 1580

Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr lie Lys Ser Phe Tyr Asn 1585 1590 1595 1G00 His Val Asp Tyr Gin Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser lie 1605 1610 1615 Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys Gin Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp 1620 1625 1630 Gly Asp Asp Asn lie Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val lie Asp Ala 1635 1640 1645 Gly Ala Gly Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu 1650 1655 1660 lie Gly Gly Lys Gly Asn Asp lie Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp 1665 1670 1675 1680 Thr Tyr lie Phe Ser Lys Gly His Gly Gin Asp lie Val Tyr Glu Asp 1685 1690 1695 Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp lie Asp Thr Leu Lys Phe Thr 1700 1705 1710 Asp lie Asn Leu Ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu ---- 17^〇 ---- 1715 1725 lie He Lys Ser Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gin Asn Trp 1730 1735 1740 Tyr Ser Kis Gin Asp His Lys lie Glu Asn lie Arg Leu Ser Asn Glu 1745 1750 1755 1760 Gin Thr Leu Val Ser Thr Gin Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala ^ 1765 1770 1775 Gly Phe Ala Gin Lys His Gly Gly Glu lie Ser Leu Val Ser Leu Glu 1780 1785 1790 Glu Val Lys Gin Tyr lie Asn Ser Leu Thx Ala Ala Leu ★ 1795 1800 1805 w 部中 ikit 消印 (銘先閱讀背面之注意事項41填寫本頁)

本紙張尺度追用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） 80-

Claims

593678 正充修# 39 ο ^月告公

ABCD 六、申請專利範圍 p\ - 附件4:第87112330號專利申請案中文申請專利範圍替換本民國93年5月3曰呈 1 . 一種保護動物拮抗胸膜肺炎放射菌減染之亞單元疫苗，其特徵在於該疫苗包含純化之ApxIV毒素和藥學上可接受之載體。 2 . —種用於製備申請專利範圍第1項之疫苗的方法，該方法包含混合純化之A P X I V毒素和藥學上可接受之載體。 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）