TW585785B

TW585785B - Methods of making liposomes containing hydro-monobenzoporphyrin photosensitizer

Info

Publication number: TW585785B
Application number: TW085109287A
Authority: TW
Inventors: Ron Liu
Original assignee: Qlt Phototherapeutics Inc
Priority date: 1995-08-02
Filing date: 1996-07-30
Publication date: 2004-05-01
Also published as: PT843547E; ATE226430T1; US5707608A; EP0843547B1; AU717181B2; JP3782112B2; DE69624485T2; WO1997004746A1; DK0843547T3; EP0843547A1; CA2227761A1; CA2227761C; DE69624485D1; ES2186792T3; AU6608396A

Description

585785 經濟部中央標隼局貝工消費合作社印製 A7 ________B7 _五、發明説明（2 ) 光時，其在彼等定域之細胞或其組織上能展現細胞毒素效果（參閱Diamond等人之Lancet，2期··第1 175 — 7 7 頁（1972 年）；Dougherty 等人之 >The Science of Photo Medicine ▼，第 625 — 38 頁（Pegan 等人編著，1 9 8 2 年）；及Dougherty 等人之 ’Cancer·· Priciples and Practice of Oncology^ ，第 1 8 3 6 一 44頁（De Vita Jr等人編著，1982年））。經假定，卩卜啉之細胞毒素效果係由於其暴露於光線時產生單一個氧之故（We i shaupt 等人之 Cancer Research ，3 6 期 :第2 326 — 29頁（1976年））。以純形態之 Η P D » Photofrin® ，por f i mer sod i um 成功地治療 A I D S相關之口腔性卡波西氏肉瘤已揭示於Schwietzer 等人之 Otolaryng〇lQgv-~Head and Neck Surgery * 1 0 2 期:639-49 頁（1990 年）。 Π卜啉除了可全身性使用來診斷並治療腫瘤之外，也可用在各種其他治療應用中。舉例之，如美國專利第4， 517，762寒號及4，577，636案號所揭示，光敏劑可用於動脈粥瘤硬化性斑之偵測及治療上。美國專利第4，500，507案號及4，485，806案號係揭示經輻射標記之卩卜啉化合物於腫瘤影像之用途。如美國專利第4，753，958案號所揭示，D卜啉化合物也可局部性地用來治療各種皮虜疾病。若干的D卜啉光敏劑製劑已揭示於治療應用上。早期階段用於偵測與治療之光力治療期間所廣泛使用之光敏劑製本紙張尺度適用中國國家標準（CNsYa4規格（210X297公釐） " 一 (請先閲讀背面之注意事丨-- 寫本頁) 訂 ¥ 585785 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（4 ) 織母細胞等，而致光敏劑在腫瘤組織內的分佈可能相當的不均勻。對於那些不均勻且含有各組份（其具有不同程度之氫化一或脂溶度）之混合物的光敏劑而言，此現像乃特別眞確〇 Z h ο ϋ 等人之 Photochemistryand Photobi ο 1 ogy . 4 8期:第4 8 > 7 — 9 2頁（1 9 8 8年）。某些做爲腫瘤定域劑的此類試劑，其低選擇性會導致副效果，如不想要的全身性對光過敏。所以，活性區域的硏究已可增加已知之D卜啉光敏劑的腫瘤選擇性，並可鑑定出這些可展現更高腫瘤選擇性之II卜啉光敏劑。一般而言，有更多親脂性之光敏劑將易於展現更大的腫瘤射靶能力。Spikes等人之 Lasers in Medical Science, 2 期••第 3 頁，3 - 1 5 頁 (1 9 8 6 年）。近來，已顯現出，投藥之前先將某些藥物包封入微脂粒中，對藥力學、組織分佈、代謝、及治療劑效能會有顯著效果。在增加D卜啉光敏劑之腫瘤選擇性的努力中，P卜啉化合物已可摻入單薄層微脂粒內，經由培養有害細胞及活體內之實驗性腫瘤即可產生較大的蓄積作用及更長久的光敏劑滯留。J g r丨等人之Br · J · Cancer · 4 8期:第3 0 7 —309 頁（1983 年）；Cozzani 等人之 I n Porphyr-i π s in Turner Phototherapy > 第 177 - 183 頁， Plenum Press(Andreoni 等人編著，1 9 8 4 年）。此種、藉由與微脂粒相關之D卜啉而更有效％尋找腫瘤組織目標可能是由於能部份地將磷脂胞特殊傳送至血清脂蛋白質之故，經顯示這些血清脂蛋白質會經由受體調介之細胞內包涵本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）· η _ · (請先閲讀背面之注意事 urn 寫太寫本頁) 、1T-

585785 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（6 ) 係與粒子尺寸減小步驟相關。由於癌症治療中光力治療的重要性，因此對鑑定那此不僅具安定性且能選擇性傳送光敏劑至目標組織中，同時還能大規模地輕鬆製造的新穎光敏劑調製物乃有持續性需求。 Farmer等人之美國專利第4，776，991案號揭示了以大規模方式將血紅素包封在具有狹窄之微脂粒尺寸分布的微脂粒中，其包含有如下組份做爲磷酯類化合物。 (1)氫化大豆磷脂醯膽鹼（>HSPC# ，約略含有8 5%二硬脂醯磷脂醯膽鹼及1 5%二棕櫚醯磷脂醯膽鹼）； (2 )膽甾醇； (3)負電荷之DMPC;及 (4 ) α —維生素E。 (Farmer等人之第3攔第5 2-6 9行。）這些脂質係於氯仿中混合以形成溶液；再將氯仿蒸發掉以便形成脂質薄膜；在3 5°C ( 3 0 - 3 7 °C)下邊溫和攪拌地將消菌過之血紅素加入該薄膜中達4 5分鐘，即可獲得單薄層微脂粒。在4 °C (2 - 6 °C)下持繼地旋轉式攪拌該等微脂粒 1 0 - 1 6小時，再將該等微脂粒強制通過Micro fluidi-zerTM以便使多薄層微脂粒散開而產生較大的單薄層微脂粒^ MicrofluidizerTM2交互作用室係維持在5 — 7 °C (、第4欄，第1 一 14行；第7欄，第3 - 9行及第19 一 2 1行）。然而，這些選擇來製造微脂粒之脂質在通過一標準化0. 22 lm無菌濾器以減壓過濾來消毒殺菌之本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（21〇><297公釐）一 g _ (請先閱讀背面之注意事β填寫本頁) IJ脅 _填空

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585785 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7五、發明説明（7 ) 前，須藉由滲透過速之震盪（已添加鹽液）而暫時性收縮。（第4欄；第18 - 22行；第9欄，第55 - 58行 )° Kappas等人之1 9 9 1年4月2 3曰公佈美國專利第 5 , 010，073案號揭示了製備含有金屬卩卜啉與做爲脂質之蛋磷脂醯膽鹼（>EPC^ )的微脂粒。EPC先溶於氯仿中，再加入金屬卩卜啉，並蒸發該溶液至乾燥。在室溫下使用經磷酸鹽緩衝之鹽液以水合該脂質薄膜，並％劇烈地旋轉'該混合物。在4 °C下經由離心來收集固體。 E P C對金屬D卜啉之重量比可大於1 0 ( Kappas等人之第 6欄，第46 — 65行）。然而Kappas等人建議在注射之前應將該所得之金屬卩卜啉微脂粒以超音波處理以防止聚集物產生（第6欄，第66行到第七欄。第1行）。 Schneider*等人於1 9 9 3年1 2月1 4日公佈之美國專利第5，2 7 0，0 5 3案號係揭示出不含固態粒子及較大的液態聚集物之微脂粒（Schneider·等人之第3欄，第52—54行）。然而，卻需要一特殊之合成液體存在（第2攔，第51 - 66行）。舉例之，在第13及化櫊處之實施例2 1中，係將5 0克兩個此類合成液體的混合物溶解於第三一丁醇中，然後再與0. 5克鋅一酞菁溶液混合。藉由動力混合器，將此溶液與1 0升已冷卻至4、 °C之乳糖介質混合以產生藍色微乳白光之分散液。若需要時可藉由已知之分離方法，如膠凝過濾或沈積作用，以從小微脂粒中分離及離析出大微脂粒（第7欄，第1 1 一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） ~ -1U - (請先閲讀背面之注意事i填寫本頁) 訂

585785 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（u) 6C)、烷基（1 一 6C) -橫醯基、芳基（6 - 10C )一磺醯基、芳基（6 一 10C)、氰基’及一 C〇NR5C〇一（其中R5表示芳基（6 — 1 0C)或垸基（1 一 6C))。然而較佳地’ R1及R2每一個係表示烷氧羰基（2-6C)。圖1中之R3係獨自地表示焼氧鐵基（2 一 6C)或彼之鹽、醯胺、醋或醯基腙’或表不烷基（1一6C)。較佳地R3係表示一 CH2CH2C00H_彼之酸、醯胺、酯或醯基腙。 R4 表示一 CH=CH2; — CH0R4,其中 R4^ 表示Η或烷基（1 一 6 c )，且視需要可經一親水性取代取代；一CH〇；一C00R4一； - CH -（DR4” CH3: - ch(or4，）ch2〇r4’： -CH (SR4 — ) CH3; - CH (NR4、）C Η 3 ；一 CH (CN) CH3; — CH (C〇〇R4^ ) C H 3 ； -CH (〇〇CR4〆 — CH (鹵基）CH3; 一 CH (鹵基）CH2 (鹵基）：導源於乙烯基之直接或非直接衍生作用之< 1 2 C的有機基；或者 R 4可組成化學式爲一 L 一 P之1 一 3四吡咯形態核，其中一L一係選自如下 · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）_ (請先閲讀背面之注意事本頁) 、τ

585785 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（l6 ) 於約1 0 0 - 5 0 0毫升或更少之較小批次時，若以顯著量500毫升、1升、5升、40升或更多量來操作將特別有利。經認爲，此體積效應乃由於較大的均化裝置較不易於提供在小規模上即可輕易完成的充份攪拌之故。舉例之，大尺寸的MicrofluidizeTM ，比那些較小尺寸者具有較不充份的交互作用室。在最高至500毫升的小批次中，莫耳比爲1. 05 :3 : 5 的 BPD — MA: EPG:DMPC C 亦即比 1:8. 0光敏劑：磷脂還稍微少的磷脂）可提供最低限度的可接受濾過率。然而，若欲製造大體積的組成物時，較高莫耳比的磷脂將可提供更確實地可信賴之無菌壚過率。而且，在定比例增加之批次中常見的因至少部份之濾過率問題而致的相當效能損失就可避免。冷保護劑及等滲試劑任何已知可用於製備凍乾調製物技藝之冷保護劑，如二-或多糖或其他膨鬆劑如賴氨酸都可使用在本發明中。再者，典型地添加以維持與體液等莫耳濃度之等滲試劑也可使用。在較佳具體實施例中，係使用二糖或多糖，並使二者作用爲冷保護劑及等滲試劑。在更佳之具體實施例中，磷脂（DMPC及EPG)、與二糖或多糖之特別組成物可形成一具有特別窄粒子尺寸分佈之微脂粒的微脂粒組成物。若延長脂質薄膜之水合程序，就易於形成較大的微脂粒，或者光敏劑便會開始沈澱本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格( 210X297公釐) ~ (請先閲讀背面之注意事

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585785 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製五、發明説明（l7 ) 。二糖或多糖之添加可提供瞬間的水合作用及供藥物一磷脂錯合物之薄膜沈積的最大表面積。此一薄膜可提供更快的水合，如此，當經由加入水相而開始形成微脂粒時，所形成之微脂粒將具有更小且更均一之粒子尺寸。從輕鬆製造的角度來看，此舉顯著地有利益。然而，若糖類係存在於本發明之組成物中時，也可行的是，在乾燥之脂質薄膜形成後才加入以做爲水合作用所用之水溶液的一部份。在更佳之具體實施例中，糖類係於水合期間加入於乾燥的脂質薄膜中。對本目的而言*二糖或多糖化單糖還佳。爲了使本發明之微脂粒組成物的滲透壓保持和血液相似，應加入不大於4 一 5%單糖。對照下，使用約9 一 10%二糖也不會產生無法接受之滲透壓。較高量的二糖可提供較大的表面積，因而，在使脂質薄膜水合期間就可形成較小的粒子尺寸。據此，本發明之較佳的微脂粒組成物除了光敏劑及 DMP C與E P G磷脂之混合物外，還含有二糖或多糖。若有二糖或多糖存在時，較佳地係選自乳糖、海藻糖、麥芽糖、麥芽三糖、巴拉汀糖（Pal at i nose)、乳果糖或蔗糖，而以乳糖或海藻糖較佳。甚而更佳地是微脂粒包含有乳糖或海藻糖。、同時，若存在有二糖或多糖時，其將被調配成個自地約 10 — 20 個糖對 0· 5 — 6. 0DMPC/EPG 磷脂混合物的較佳比例，更佳地係在約10至1. 5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事寫本頁) 丨寫本訂

-20 - 585785 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（19) 劑）組合起來而製備。合適之有機溶劑包括揮發性有機溶劑，如乙醚、丙酮、二氯甲烷、氯仿、呢啶、哌啶一水混合物、甲醇、第三一丁醇、二甲基亞硕、N —甲基一乙一吡咯烷酮、及彼等之混合物。較佳地，該有機溶劑係水不互溶，如二氯甲烷，但水不互溶性並非必須的。在任何情況中，所選擇之溶劑應不僅能溶解脂質薄膜的所有組份，同時與這些組份也不會有顯著程度的反應，否則別方面將有不利影響。接著，從該所得之溶液中除去有機溶劑，以便藉由對乾脂質薄膜及光敏劑無害之已知的實驗室技巧形成乾燥的脂質薄膜。較佳地係藉將溶液放在真空下直到溶劑蒸發爲止而除掉該溶劑。固體殘留物便是本發明之乾脂質薄膜，脂質薄膜之厚度並沒有界限，但通常係在約3 0至約45 毫克/平方公尺中變化，端視固體殘留物之基及玻璃瓶壁的總面積而定。一旦形成薄膜後，即可在水合前貯存很長的期間，較佳地是不大於4至2 1天，脂質薄膜貯存期間的溫度並非重要因素，較佳地是在室溫以下，最佳地係在約一 2 0至約4 °C範圍內。然後，將乾脂質薄膜分散於水溶液（較佳地係含有二糖或多糖）中，並使之均化以形成所需的粒子尺寸。水合步驟期間所用之有效的水溶液實例包括無菌水；不含鈣及鎂之經磷酸鹽緩衝（ρΗ7· 2 — 7. 4).的氯化鈉溶液 ;9. 75%w/v乳糖溶液；乳糖鹽液溶液；5%右旋糖；或任何其他生理上可接受之具一或多個電解質的水溶 (請先閲讀背面之注意事

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本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） 22 585785 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（22 ) 水合溫度如約3 5至4 5 °C，在無菌過濾期間會使光敏劑沈澱或聚集而導致光敏劑效能損失。然後，在不超過約3 0°C，較佳地在比該於水合步驟中形成之光敏劑-磷脂錯合物的玻璃轉化溫度還低下，更佳地係在低於約2 5 °C的室溫下，使水合中首度形成之粗糙微脂粒的粒子尺寸均化成更均一的尺寸，再減至範圍在約1 5 0至3 0 0 n m的較小尺寸。均化步驟期間可使用各種高速度攪拌裝置，例如MicrofluidizerTM，舉例之有 MicrofluidizerTM型號1 1 0 F ;超音波器；高切削力混合器；均化器；標準化實驗室搖動器。頃發現，均化溫度應在室溫下或更低，亦即1 5 -2 0°C。在較高之均化溫度下，例如約3 2 — 4 2 °C，由於如預期般增加了流動性；所以微脂粒組成物之相對濾過率起初會增進；但是意想不到地，由於粒子尺寸的增加。隨著連續攪拌而使相對濾過率趨於減低。較佳地可使用一高壓裝置如MicrofluidizerTM來攪拌。在微流化作用中，流體通過高壓式交互作用室的短時間內會產生大量熱。在交互作用室中，兩股高速下之流體股體會以9 0度角互相碰撞。當微流化溫度增高時，膜的流動性也會增加，如預期般此舉最初會使粒子尺寸之減小變得較輕鬆容易。舉例之，在最初幾次的通過Microfluidio zer裝置中濾過率可增加四倍。雙層膜流動性之增加會促道粒子尺寸減小，而使得最終組成物之過濾變得較容易。在最初數個通次中，此增加之流動性機製將有利地支配著本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ " -^5 - (請先閲讀背面之注意事 1¾ 本頁) 訂

585785 A7 _ B7 五、發明説明（30 ) 表1 調製物莫耳比莫耳比莫耳比 1.05:3:5 1.0:3:5 1.0:3:7 光敏劑 0· 21 克 0· 21 克 0· 21 克 EPG 0· 65克 0· 68克 0· 68克 DMPC 0. 94克 0· 99克 1· 38克丁基化羥基甲苯 0·0002克 0·0002克 0.0002克 ("BHT") 抗壞血酸 0·002克 0.002克 0·002克 6-軟脂酸酯可注射之乳糖 10克 10克 10克 NF結晶注射用水適量 1 0 0毫升 100毫升 100毫 (請先閱讀背面之注意事

m -ii A :寫本頁) 訂根據下列方法試驗此三個批次之濾過率；將微脂粒組成物通過MicrofluidizerTM三次後，用注射器抽回試樣。抽回之試樣體積係根據該組成物濾過率的肉眼判斷而定。此注射器係連接到一0· 22親水性濾器，然後再放置於注射器泵內。活塞的移動速率則設定在1 〇毫升/分鐘，收集濾出液直到減器被大的微脂粒聚集物阻塞爲止。測量濾出液體積並記錄成毫升/平方公分。其結果係摘述於下表2中。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） •%1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 585785 A7 B7 五、發明説明（31 ) 表2 調製物總液體濃度濾過率 (BPD-MA: (克/平方公分） EPG：DMPC) (%w/V) 莫耳比1. 0 5 : 3 : 5 1. 59 1. 57 莫耳比1. 0 : 3 : 5 1. 67 3. 58 莫耳比1. 0 : 3 : 7 2.06 12. 6 (請先閲讀背面之注意事經濟部中央標準局員工消費合作社印製表1顯示出，第一個調製物（其脂質比1 : 8. 0光敏劑/DMP C - EPG脂質混合物還稍微小一些）之濾過率係小於第二個調製物（其具有1 : 8 . 0莫耳比）約 2. 3倍，且小於1:1〇· 〇莫耳比之第三個調製物約 8倍。圖3係顯示以克/平方公分之濾過濾對總液體濃度 (%，w/v )之繪圖。令人驚奇地其關係竟是線性，且 r一平方爲〇· 9985。從此繪圖中可獲得下列之實驗方程式：濾過率=〔23. 36總液體濃度（％，w/v) - 3 5 . 5 1〕根據此方程式之斜度，DMP C或E P G脂質每增加 1克時，即可使微脂粒調製物之濾過率達成2 3倍之增進。此繪圖進一步指出，若總液體濃度小於1 . 5 2 %，且 BPD-MA光敏劑濃度爲2.1毫克/毫升，該微脂粒組成物將不能再經由〇. 22#m濾器過濾。本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）_私 585785 A7 _ B7 五、發明説明（32 ) 奮施例2 宏比例增加之批次的濾過率及效能在室溫下（約20°C)使用莫耳比1 : 3 : 5 (光敏劑）：EPG : DMPC)製備大批次之BPD—MA微脂粒（1. 2升，亦即12倍實施例1之1〇〇毫升批次 )。該組成物之含量係如下表3般說明 (請先閲讀背面之注意事丨^衣— 本頁訂表3 組份量莫耳比莫耳數分子量 BPD-MA 2· 60克 1 0.00362 718 EPG 8· 38克 3 0.01086 772 DMPC 12·26克 5 0.01811 677 BHT 0.0024克一一一經濟部中央標隼局員工消費合作社印製抗壞血酸 0.024克一一一 6-軟脂酸酯可注射之乳 120克一-一糖NF結晶注射用水適量1. 2升 — — 一在此大批次中係使用二倍厚度的脂質薄膜以便提供莫耳比爲1 : 8. 0的更激烈試驗。如下表4所示般，該結果與1/12批次且僅具有稍微小的DMPC及EPG脂質者比較時，顯示了顯著增進之濾過率。

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 35 - 585785 A7 B7五、發明説明（33 ) 表4 效能調製物 (BPD-MA：批次大小濾過率預過濾後過濾 PG：DMPC) (毫升） (克/平方公分）莫耳比 1.05:3.5 100 1. 57 2. 11 2.10 莫耳比 1:3:5 100 3. 58 2. 05 2. 02 莫耳比 1:3:7 100 12. 60 2. 11 2. 23 莫耳比 1:3:5 1,200 5. 00 2. 09 2. 08 (請先閲讀背面之注意. 1填寫本頁) 裝. 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製些微地增加脂質含量會大大地增加微脂粒組成物之滤過率。而且，產量將接近1 〇〇% ’並在無菌過濾後還可維持9 9. 5% (藉由HPLC分析）光敏劑效能。實施例水合溫度藉使用不同的薄膜水合溫度以製備4個批次之各具有相同光敏劑/DMPC—EPG脂質莫耳比（1 〇5: 3 ·· 5)的BPD - MA微脂粒組成物。此4個批次之數本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS〉A4規格（210x297公釐）一 36 一〜

585785 A7 _ B7 五、發明説明（34 ) 據則示於下表5中，並相互比較以說明效能損失與薄膜水合溫度的關係。表5 水合溫度（°C ) 效能損失（％ ) 批次 1 3 0 9 . 5 2 室溫（約2 5 °C ) 4 . 8 3 3 0 1 6 . 7 4 4 0 8 5 · 0 (請先閲讀背面之注意事丨-- 本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 k 此結果顯示出，水合溫度增高超過室溫時，將與光敏劑效能顯著地損失有關聯。眚施例4 提高均化溫度的效果使用兩個0· 53升批次（光敏劑：EPG: DMPC : 1. 05 : 3 : 5)來研究濾過率與均化溫度之間的關係。如實施例1般，組成物係使用4 5 °C水合溫度及具有設定在3 5°C之出口溫度的製備。這些數據顯示出，在髙水合及均化溫度下，如預期般於最初通過 Microf luidizerTM (#1 或 #2)後 BPD - MA微脂粒組成物之相對濾過率會增加，但接著額外的本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ -37 - 訂

585785 A7 ______ _B7 _______五、發明説明（35 ) 通次（# 2至# 4 )後則會減小，如下表所示 1 2 3 4 表6 濾過率（毫升/平方公分） 0.10 0.27 0.22 0.19 使用第二個〇· 53升批次（光敏劑：EPG: DMPC=1· 〇5 : 3 : 5 以研究通過 Microflluidiz-erTM之次數、濾過率、與粒子尺寸分佈之間的關係。在此一批次中皆使用高水合溫度（4 0°C)與高均化溫度（ MicrofluidizerTMa 口溫度設定在4 2°C)。數據則列於表7中。 (請先閲讀背面之注意事

裝-- - :寫本頁) 訂 .¾ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製通次# 1 2 3 4 5 6

表7 濾過率（毫升/平方公分） N / A N / A 0 . 0 . 0 . 0 . 2 5 2 5 5 0 5 0 粒子尺寸分佈 7 10 7 10 2 6 5 2 5 0 2 5 0 2 4 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -38 - 585785 A7 B7 五、發明説明（36 ) 7 0 . 3 0 3 0 2 8 0 . 2 5 3 0 2 9 0 . 2 5 2 9 5 此數據顯示出，如預期般通次# 3至# 5會增加濾過率，但在通次#6至#9又降回原來的值。對照下’組成物中之微脂粒的平均粒子尺寸則從通次# 1的7 1 〇 nm 減低至在通次# 6下如2 4 7 nm般小。然而’當再進行額外的通次時，粒子尺寸則意想不到地增至約3 0 0 nm (請先閱讀背面之注意· 寫‘ 本頁) 裝· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製眚施例5 本發明之微脂粒的製備在室溫下（約2 0°C)使用下列一般性步驟製備一 1 0 0毫升批次之BPD - MA微脂粒。將BPD - MA ，丁基化羥基甲苹（、BMT")，軟脂酸抗壞血酸酯，及磷脂DMP C與E P G溶解於二氯甲烷中。光敏劑： EPG:DMPC之莫耳比爲1. 0:3:7，且具有下列組成物：光敏劑 0 . 2 1克 E P G 0 · 6 8 克 D Μ P C 1 · 3 8 克本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）〇Λ -39 - 訂

585785 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（37 ) Β Η T 抗壞血酸6 -軟脂酸酯可注射之乳糖N F結晶注射用水，適量使用上述之調製物時，總脂質濃度（％w/v )係約 2. 06。經由一0. 22#m濾器過濾該所得之溶液，然後使用旋轉式蒸發器於真空中乾燥。持績乾燥直到固體殘留物中之二氯甲烷的量不再由氣相層析法偵測到爲止。接著，製備一 1 0%乳糖/注射用水之溶液，並經由 0. 22//m濾器過濾。讓乳糖/水溶液維持在室溫（約 2 5 °C)下，而不用加溫至約3 5 °C溫度，以便加入於該含有光敏劑/磷脂之固體殘留物的瓶中。在室溫下將此固體殘留物分散於10%乳糖/水溶液中，攪拌約1小時，並通過化器三至四次，而出口溫度控制至約2〇 — 2 5<>〇。然後，經由〇.2 2#111〇11180(^6 ，親水性濾器過濾該溶液。藉由下列步驟試驗此批次之滤過率。待微脂粒組成物已通過MicrofluidizerTMH次之後，用注射器抽回試樣。抽回之試樣體積約2 0毫升，端視該組成物之濾過率的肉眼評估及微脂粒品質的評估而定。注射器係連接到 ~ 0. 22ym親水性濾器上，然後再放於注射器泵內。活塞的移動速率設定在1 0毫升/分鐘，收集濾出液直到濾器被大的微脂粒聚集物阻塞爲止。測量濾出液並以毫升/ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 0 · 0 0 0 2 克 0 · 0 0 2 克 1 0克 1 0 0毫升 (請先閲讀背面之注意事 - - - - I 一 :寫本頁) 裝. 訂

-40 - 585785 A7 B7 五、發明説明（38 ) 平方公分或克/平方公分記錄。該組成物以克/平方公分表示之濾出率典型地係大於約1 0。而且，經由HPLC分析產量係約1 〇〇%，且典型地縱使無菌過濾後也還能保持光敏劑效能。平均粒子尺寸係在約1 50至約300nm (土 50nm)中變化〇熟諳此藝者將清楚知悉，只要不違背本文以下主張之本發明範圍，皆可進行該所揭示說明之主題物質的修正及 /或變異。 (請先閲讀背面之注意· ---裝-- 寫本買) 訂

經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）一 41 —

Claims

585785 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍附,2A :―_ 第85 1 09287號專利申請案修止日中文申請專利範圍替換本 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) _____ 1 民國92年1 1月1〇臼修正 1 · 一種供製造含有微脂粒之藥學組成物的方法，其中該微脂粒包含一治療上可接受量之氫化-單苯並D卜啉光敏劑及一含有蛋磷脂醯甘油（E P G 〃）與二肉豆寇醯磷脂醯膽鹼（'、D Μ P C 〃）之磷脂混合物；此方法包括步驟： a ·在有機溶劑存在下光敏劑與磷脂以莫耳比高於1 :7 · 〇而加以組合； b ·除去有機溶劑以便形成一脂質薄膜； c .在低於光敏劑：磷脂錯合物之玻璃轉化溫度下用水溶液使光敏劑：磷脂錯合物水合，以便形成含有該光敏劑-磷脂錯合物之粗糙微脂粒；以及 d ·在低於3 0 t之溫度下均化或減小該等粗糙微脂粒之粒子尺寸至3 0 0 nm以下之粒子尺寸範圍內，其中該氫化一單苯並卟啉光敏劑具有如下化學式1 - 6中之一個：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 585785 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍經濟部智慧財產局員工消費合作社印製，

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） μ/85 Α8 Β8 C8 D8 ”專利範圍ch3 r4

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製値〃有〜或多個在6 7 0 一 7 8 ο n m之間的光吸收最大 ’或者係爲彼等之金屬化形態或檫記形態，其中：每一 Ri及R2係獨立地選自烷氧羰基（2 — 6 C ) n 燒基（1 — 6C)—磺醯基、芳基（6 — l〇C) 石黃酿基、芳基（6_10)、氰基，及一 NR5C〇一（其中R5表示芳基（6 — i〇c)或烷基（1 〜6 C )); 每一 R3係獨立地表示烷氧羰基（2 - 6 C )或彼之鹽、醯胺、酯或醯基，或表示烷基（1 一 6 C )以及； R4係表示一 CH = CH2; CHOR4 '其中R4〆表示Η或烷基（1 一 6 C )，且視需要可經一親水性取代本紙張尺度逋用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐）、1Τ 585785 C Η ( 〇 R A8 B8 C8 D8 V、申請專利範圍基取代；一CHO ; — C〇〇R —CH—(〇R4^)CH3; )C Η 2 〇 R -CH(SR4^) CH3；-CH(NR4^) CHs； —CH (CN) CH3；-CH(COOR4^)CH3； -CH (COOCR4") - CHa；一 CH (鹵基）CH3; — CH (鹵基）CH2(鹵基）; 導源於乙烯基之直接或非直接衍生作用之小於1 2 C的有機基；或者R4係表示化學式爲-L-P之1 一 3四吡咯形態核，其中一 L 一係選自如下 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -CH-0-CH#I I Hm Mm -CHNHCH-,I I Me Me (b) -CH-CH-CH- .1 Me (c) Me Hle c1Μ ύ=ο - Η C (d) e 7¾ -CH-C-CH 反·Ι 11Me q U) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製而P是第二個Gp，其爲化學式i — 6中之一個，但卻缺少R 4且經由被R 4佔據之位置而與L共軛；或者 P表示另一個卟啉基。 2 ·如申請專利範圍桌1項之方法，其中該溫度係該光敏劑-磷脂錯合物的玻璃轉化溫度。 3 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該氫化一單苯並卟啉光敏劑對磷脂之莫耳比係高於1 : 8 . 〇。 4 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該有機溶劑係二氯甲院。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 585785 A8 B8 C8 D8 A、申請專利範圍 5 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該有機溶劑係於步驟'' b 〃中藉在減壓下蒸發而除去。 6 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該水溶液含有二糖或多糖。 7 .如申請專利範圍第6項之方法，其中該二糖或多糖係選自乳糖或海藻糖。 8 ·如申請專利範圍第6項之方法，其中該二糖或多糖對該磷脂化合物之濃度比係1 〇 - 2 0至0 · 5 — 6 . 〇〇 9 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中p表示該另一個卟啉基時，具有如下化學式：

其中：每一 R獨自地表示Η或低碳烷基（1 一 4C)；在毗鄰環上所示之未被佔據的四個鍵中之兩個係與R 3 連接；而剩餘未被佔據之鍵的一個則與R 4連接；以及另一個係連接到L上；但條件是，若R4表示一 CH = CH2時，該等R3基則皆不能表示烷氧羧基乙基。 1 0 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中每一 R 3係本紙張尺度適用中國固家梂準（CNS ) A4祕（210X297公釐）穿-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

585785 A8 B8 C8 D8 _ 々、申請專利範圍表示一CH2CH2C〇〇H或彼之鹽、醯胺、酯或醯基。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 i •如申請專利範圍第1項之方法，其中每一 R 1及 R2 3係表示烷氧羰基（2 - 6C)。 1 2 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該光敏劑係具有如下化學式之B P D— MA :

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 3 .如申請專利範圍第1項之方法’其中該水合步驟c 〃係在室溫下或低於室溫之溫度下完成。 2 1 4 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該均化或減小步驟'、d 〃係在室溫下或低於室溫之溫度下完成。 3 1 5 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該粒子尺寸將減小至2 5 0 n m以下的範圍。 585785 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 (1 )蛋磷脂醯甘油（E P G 〃）及 (2)二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼（''DMPC〃）其中該光敏劑與該磷脂混合物的莫耳比係高於1 : 7 ·〇，以及該氫化-單苯並卟啉（G p )具有如下化學式1 一 6中之一個： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 585785 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

專利範圍 A8 B8 C8 D8

及 R1

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 且具有値，或每烷基（基、芳、?T 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製〜或多個在6 7 0 — 7 8 〇 n m之間的光吸收最大考係爲彼等之金屬化形態或標記形態，其中：〜R1及R2係獨立地選自烷氧羰基（2 一 6C)、 1 一 6C) 一磺醯基、芳基（6 一 1〇 c)—磺醯 ® ( 6 - 1 〇 C )、氰基，及一C〇NR5C〇一（其中R5表示芳基（6 — 10C)或烷基（1 — 6C)); 每〜R3係獨立地表示烷氧羰基（2 — 6 C)或彼之鹽、酸胺、酯或醯基，或表示烷基（1 一 6C)以及； R4 係表示一 CH=CH2; CHOR4/ 其中 R4,表示Η或烷基（1 一 6 C )，且視需要可經一親水性取代基取代；一CH〇；一C〇〇R4'; 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）絲 585785 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 )C Η -C H (OR4 —ch(or4”ch2〇r4，； -CH(SR4^)CH3；-CH(NR )C Η -CH (CN) CH3；-CH (COOR^-) CH3； —CH (〇〇CR4〆） CH3-CH (鹵素）cH3; —CH (鹵基）CH2 (鹵基）；導源於乙烯基之直接或非直接衍生作用之小於1 2 C的有機基；或者R 4係表示化學式爲一 L 一 P之1 一 3四吼咯形態核，其中—l 一係選自如下 •CH-0-CH,I I Hm Μα -CHNHCH-Me Me (b) CH» CH ~CH*I Me (c) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •CH-CH-CH-, Me (d) •CH-C-CH-, II I 0 Me 及 -CH-C-CH· • I II Me 0 (f) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製而P是第二個Gp，其爲化學式1 一 6中之一個，但缺少R 4且經由被R 4佔據之位置而與L共軛；或者 P表不另一個卩卜琳基。 1 8 .如申請專利範圍第1 7項之組成物，其中該光敏劑對該磷脂混合物之莫耳比係高於1 : 8 . 0。 1 9 ·如申請專利範圍第1 7項之組成物，其中P表示該另一個卟啉基時，具有如下化學式：本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) A4規格（2.ι〇χ297公釐） 585785 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中：每一 R獨自地表不Η或低碳院基（1 一 4 C ); 在毗鄰環上所示之未被佔據的四個鍵中之兩個係與R 3 連接；而剩餘未被佔據之鍵的一個則與R 4連接；以及另一個係連接到L上；但條件是，若R 4表示一 C H = C Η 2時，該等R 3基則皆不能表示烷氧羧基乙基。 2 0 ·如申請專利範圍第1 9項之組成物，其中每一 R3係表示一 CH2CH2C〇〇Η或彼之鹽、醯胺、酯或醯基。 2 1 .如申請專利範圍第1 7項之組成物，其中每一 R1及R2係表示烷氧羰基（2 - 6C)。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2 2 ·如申請專利範圍第1 7項之組成物，其中該氫化-單苯並卟啉光敏劑係具有如下化學式之B P D — Μ A 本紙張尺度適用中國國家標準（CNi ) A4規格（210X297公釐） 585785 A8 B8 C8 D8

2 3 .如申請專利範圍第1 7項之組成物，其中該粒子尺寸係2 2 0 n m以下。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閲背背面之注意事項再填寫本頁)

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