JPH07501825A

JPH07501825A - 高められた抗真菌活性を有するアンフォテリシンｂ組成物

Info

Publication number: JPH07501825A
Application number: JP5511060A
Authority: JP
Inventors: パイアリンジャー，ロナルド　エイ．; ヘインズ，メアリー　ピー．; ベド，ハレシュ　エス．; カバカンガン，アーリンダ　エイ．
Original assignee: テンプル　ユニバーシティ　オブ　ザ　コモンウェルス　システム　オブ　ハイアーエデュケイション
Priority date: 1991-12-11
Filing date: 1992-12-10
Publication date: 1995-02-23
Also published as: AU3246093A; US5444052A; CA2123780A1; WO1993011777A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】高められた抗真菌活性を有するアンフォテリシンＢ及１とた野この発明は、アンフォテリシンＢの抗真菌組成物及びその使用に関する。

免肚匹１１後天性免疫不全症候群（エイズ、Ａ　Ｉ　ＤＳ）はウィルス性疾患であり、それについてはまだ治療法又は有効なワクチンがない。この病気の患者はウィルスの破壊作用によって損なわれた免疫系を有する。この状態はエイズ患者を、健康な個体にはほとんど病気をもたらさない微生物だがしかしエイズ患者にとってはその死因の９０％にもなっている微生物によって引き起こされる、相手を選んだ（ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ）感染症に罹りやす（する（ミルズ（Ｍｉｌｌｓ）ら、「サイエンティフィック・アメリカン（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ）　Ｊ　、　２６３．５０〜５７　（１９８６年））。これらの感染症の多くは、単細胞真菌である酵母によって引き起こされる。エイズ患者の５８〜８１％が真菌感染症に罹る（ホルムバーブ（Ｈｏｌｍｂｅｒｇ）ら、ｒｓｃａｎｄ、　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、Ｊ　、Ｌ　８．１７９〜１８２　（１９８６年））。

カンジダ・アルビカンス（（：ａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）はエイズ患者における真菌感染症の最も一般的な原因である。

これは、カンジダ性口腔咽頭炎（ｃａｎｄｉｄａｌ　ｏｒｏｐｈａｒｙｎｇｉｔｉｓ）　（鵞口ｆｆ１）、食道炎、髄膜炎及び気管支又は肺カンジダ症を引き起こす（Ｉｄ、）、感染源は内因性であると思われ、おそら（腸からのものであろう。

クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｌ）ｔｏｃｏｃｃｕｓｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　）はひどい髄膜炎を引き起こす原因となり、これは、肺の初期感染から起こるものと考えられている。この真菌は血流に侵入し、脳を覆う膜である髄膜に留まる（ミルズら、前述の文献）。クリプトコックス・ネオフォルマンスはカンジダ・アルビカンスよりたやすく皮膚及び粘膜を越えて拡がる。このクリプトコックス・ネオフォルマンスは滑らかな外側被膜を有し、この膜は、大食細胞（マクロファージ）及び他の顆粒球のような免疫細胞がクリプトコックスを摂取するのをじゃまする（届、）。この被膜はまた、この真菌が大食細胞からの酵素による損傷に抵抗するのを助ける（Ｉｄ、）。

過去３０年間、アンフォテリシンＢは、生命にかかわる真菌感染症を処置するために利用できる唯一の静脈内投与用の抗真菌薬であった。これは依然として最も普通に用いられる抗真菌剤である。これは、真菌の細胞膜中のエルゴステロールと結合する。アンフォテリシンＢはこの膜を損傷させ、真菌の内容物を漏れ出させる。しかしながら、アンフォテリシンＢはまた、細胞膜中のコレステロールと結合することによって赤血球をも損傷させ、貧血を起こさせる。アンフォテリシンＢはまた、腎臓に害を及ぼすこともある。

これらの毒性作用のために、アンフォテリシンＢは侵入している真菌を殺すのに充分に高い薬量で投与することができない。この病気にも拘らず生きている患者は、１週間に１〜２回の静脈内経路の処置の予防的治療を一生受は続けなければならない（Ｉｄ、　）。

イミダゾールの一種であるフルコナゾールが抗真菌剤として提唱されている。これは経口投与しなければならず、その有効性はまだ立証されなければならないものである。フルオルシトシンはアンフォテリシンＢと組合せて用いられている。

しかしながら、これは人間の細胞に対して毒性がある。従って、有効な抗真菌剤は欠乏している。エイズ患者、癌患者、臓器移植患者及び他の損なわれた免疫系を有する個体を襲う、相手を選んだ真菌感染症によってもたらされる数多くの死を防ぐことが大いに必要とされている。

及朋ｎ又以下のものを含む製薬組成物が提供される。

（ａ）アンフォテリシンＢ並びに（ｂ）（ｉ）ＨＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ，０Ｒ１（ｉｉｌＨＯｃＨｉ　ＣＨ（ＯＲｔ　）ＣＨａ　ＯＨ１及び（ｉｉｉ）それらの組合せ（式中、Ｒ及びＲ１はそれぞれＣｌｌ−０１ｓアルキル及びＣ６〜ＣＩ＠アルケニルより成る群から選択される）より成る群から選択されるグリセロールエーテル。

用語「アルケニル」とは、−５二又は多不飽和アルキル基を意味し、−不飽和、即ち単一の炭素−炭素二重結合を有するものが好ましい。グリセロールエーテルは、１−グ’）　セロ−ルｓ−−テＪＬ／、即ちＨＯＣＨ，ＣＨＯＨＣＨ，ＯＲ化合物であるのが好ましく、そして（又は）、グリセロールエーテルは、Ｒ及びＲ＋がｃ１０〜ＣＩ４アルキル又はアルケニルから選択される化合物であるのが好ましく、Ｒ及びＲ３がＣＩ０〜ＣＩ４アルキルである化合物であるのがより好ましく、Ｒ及びＲ１がＣＩ２アルキルである化合物であるのがさらにより好ましい。

真菌感染症の処置方法もまた提供される。有効抗真菌量のアンフォテリシンＢ及び１種以上の前記のグリセロールエーテルが、かかる処置を必要としている哨乳動物、特に人間に投与される。

ｌ瓦県且１図１は、生体外でのクリプトコックス・ネオフォルマンスに対するアンフォテリシンＢ及びｒａｃ−１−０−ドデシルグリセロール（ｒａｃ−１−ＤＤＧ）の相乗性抗真菌作用のプロットであり、ば、連続的に振り混ぜ且つ充分に通気しながら薬剤組合せ物と共に２５℃において２４時間インキュベートした後にミクロ滴定プレート分析に従って行なったもの、マは、同じ条件下で薬剤組合せ物と共に寒天プレート分析に従って行なったものである。各プロットは３回の試験の平均を示す。

図２は、図１の場合と同じ条件下でのカンジダ・アルビカンスに対するアンフォテリシンＢ及びｒａｃ−１−ＤＤＧの相乗性抗真菌作用のプロットである（△はミクロ滴定プレート、ムは寒天プレート）。

図３は、インキュベート温度が３７℃だったことを除いて図１と同様のものである（口はミクロ滴定プレート、■は寒天プレート）。

図４は、インキュベート温度が３７℃だったことを除いて図２と同様のものである（○はミクロ滴定プレート、・は寒天プレート）。

図５は２５℃において２４時間インキュベートした後の生体外でのクリプトコックス・ネオフオルマンスに対するアンフォテリシンＢ及びｒａｃ−１−０−ウンデシルグリセロールの相乗性抗真菌効果のプロットであり、○はミクロプレート分析によって測定、・は寒天プレート分析によって測定した場合を示す。

図６は、微生物がカンジダ・アルビカンスだったことを除いて図５と同様のものである（口はミクロプレート、閣は寒天プレート）、。

図７（クリプトコックス・ネオフォルマンス）は、グリセロールエーテルがｒａｃ−１−０−トリデシルグリセロールだったことを除いて図５と同様のものである（口はミクロプレート、■は寒天プレート）。

図８は、微生物がカンジダ・アルビカンスだったことを除いて図７と同様のものである（Ｏはミクロプレート、・は寒天プレート）。

図９（クリプトコックス・ネオフォルマンス）は、グリセロールエーテルがｒａｃ−１−０−テトラデシルグリセロールだったことを除いて図５と同様のものである（△はミクロプレート、ムは寒天プレート）。

図１０は、微生物がカンジダ・アルビカンスだったことを除いて図９と同様のものである（口はミクロプレート、■は寒天プレート）。

図１１は、３７℃において２４時間インキュベートした後のクリプトコックス・ネオフォルマンスに対するアンフォテリシンＢの抗真菌作用についての５ｎ−１ −ＤＤＧ（ロ）、２−ＤＤＧ（・）及び５ｎ−３−ＤＤＧ（△）の相乗効果のプロットである。

図１２は、被検微生物がカンジダ・アルビカンスだったことを除いて図１１と同様のものであり、Ｏは５ｎ−１−ＤＤＧ、△は２−ＤＤＧ、そして口は５ｎ−３ −ＤＤＧについてのものである。

日の萱　な舌日本発明者は、ある種のグリセロールエーテルがアンフォテリシンＢの抗真菌活性を強化し、その逆もまた同じである（即ちアンフォテリシンＢがある種のグリセロールエーテルの抗真菌活性を強化する）ということを見出した。アンフォテリシンＢ単独では、人間の細胞に対する毒性が強過ぎて、感染している真菌を完全に殺すのに充分に高い濃度で静脈内経路で用いることができないので、この相乗効果は有意義である。グリセロールエーテルと組合せることによって、アンフオテリシンＢの有効抗真菌濃度が、赤血球及び他の宿主組織の細胞に対する毒性が有意に低い濃度に低減される。

アンフォテリシンＢは、ストレプトミセス・ノドサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｎｏｄｏｓｕｓ）　Ｍ　４５７５から得られる抗真菌ポリエン抗生物質である。アンフオテリシンＢは化学的には［ＩＲ−（ＩＲ″″、３Ｓ’、５Ｒ”、６Ｒ”、９Ｒ”、ＩＩＲ’、１５Ｓ”、１６Ｒ”、１７Ｒ”、１８Ｓ”　、１９Ｅ、２１Ｅ、２３Ｅ、２５Ｅ、２７Ｅ、２９Ｅ、３１Ｅ、３３Ｒ’　、３５Ｓｓ、３６Ｒ”、３７Ｓ”）］　−３３−［（３−アミノ−３，６−シデオキシーβ− Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］−１，３，５，６゜９．１１，１７．３７−オクタヒドロキシ−１５，１６，１８−トリメチル−１３−オキソ−１４，３９− ジオキサビシクロ［３３，３，１］ノナトリアコンタ−１９，２１，２３，２５，２７，２９，３１−ヘプタエン−３６−カルボン酸と称される。結晶状アンフオテリシンＢは水に不溶性である。従って、この抗生物質は、典型的には、デオキシコール酸ナトリウムを添加することによって「可溶化」され、再構成（一度乾燥させた製品に水等を加久て元に戻すこと）の後に静脈内注入用のコロイド分散体を提供する混合物を形成する。アンフオテリシンＢはよく効く抗真菌剤であるが、細菌、リケッチア属及びウィルス類に対する効果は持たない。

前記の式を満たす全ての光学異性体及び幾何異性体並びにかかる異性体の全てのラセミ体混合物、ジアステレオマー混合物又は他の混合物を含めて、前記の式に従う全てのグリセロールエーテルが本発明の範囲内に包含される。１−グリセロールエーテルは光学的に活性である。「脂質（Ｌｉｐｉｄｓ）　Ｊ　、１２．４５５〜４６８　（１９７７年）に報告されているｒ１９７６年版脂質の命名法のための薦め（１９７６Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｔｈｅ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｌｉｐｉｄｓ　）　Ｊ　（ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢコミッション・オン・バイオケミカル・ノウメンクレイチャー（ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃ。

ｍｍ１ｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）　ｌによれば、グリセロールの炭素原子は立体特異的に番号付けされる。フィッシャーの投影図によって左にＣ−２ヒドロキシルを持つ垂直の炭素鎖を示した場合にこの投影図の頂上に現れる炭素原子をＣ−１と称する。かかる番号付けを立体情報を何ら持たない慣用の番号付けから区別するために、接頭辞ｒｓｎＪ　（立体特異的に番号付けされた（ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ　ｎｕｍｂｅｒｅｄ　）の略）を用いる・接頭辞ｒｒａｃＪ　（ラセモ（ｒａｃｅｍｏ）の略Ｙは、対車体の両方の化合物の等量混合物である。この申し合わせに従えば、１−〇−ドデシルグリセロールの２種の光学異性体はｒｓｎ−１−０−ドデシルグリセロール」及びｒｓｎ−３−〇−ドデシルグリセロール」と称される。

対応するラセミ化合物はｒｒａｃ−１−０−ドデシルグリセロール」と称される。

グリセロールエーテルは、「ジャーナル・オブ・オルガニック・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ｊ、２９．３０５５〜３０５７　（１９６４年）に記載されたボーマン（Ｂａｕｍａｎ）らの方法（これは、「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・テクノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）　Ｊ　、２５９．８１１５〜８１２１　（１９８４年）にも記載されている）に従って、好適なＣ，−Ｃ，、飽和又は不飽和アルコールと１．２−〇−イソプロピリデングリセロールとから合成することができる。簡潔に説明すると、ＲＯＨ又はＲ，ＯＨ（ここで、Ｒ及びＲ，は前に定義した通りである）をピリジン中で塩化メタンスルホニルと反応させる。エチルエーテルで抽出し、低沸点石油エーテル、例えば５ＫＥＬＬＹＳＯＬＶＥＦ（米国７４１０２オクラホマ州タルサ、ボルダ−ストリート１４３７所在のスケリー・オイル社（５ｋｅｌｌｙＯｉｌ　Ｃｏ、）　）から再結晶することによって、対応するメタンスルホン酸アルキル又はアルケニルを得る。この生成物をトルエン中でＫＯＨ及び１．２−０−インプロピリデングリセロールと反応させる。エチルエーテルで抽出し、ＨＣＱで加水分解してインプロピリデン基を除去した後に、所望のグリセロールエーテルが石油エーテルから再結晶される。この方法に従えば、出発物質として適当なアルコールを用いることによって、様々なアルキル又はアルケニル鎖長を持つグリセロールエーテルを合成することができる。

グリセロールエーテルの炭素側鎖は、０６〜Ｃ１，の飽和又は−、二若しくは多不飽和の枝分かれした又は技分かれしていない鎖から成っていてよい。この炭素鎖は枝分かれしていなくて且つ飽和であるのが好ましい、１０〜１４個の炭素原子を有する炭素鎖が特に好ましい。

好ましいグリセロールエーテルであるＤＤＧは、無臭の白色粉末である。これは脂質エーテルであるが、比較的良好な水中での溶解性を有する。これは３９℃において融解する。ＤＤＧは、実験動物に非常に高い薬量で供給した場合にさえ、毒性であるようには見えない。つニーバー（Ｗｅｂｅｒ　）らによって「ジャーナル・オブ・リビッド・リサーチ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）Ｊ　、　２６．１４１２〜１４２０　（１９８５年）に報告された研究においては、ｒａｃ−１−０−ドデシルグリセロールをＩｇ／ｋｇ／日の薬量で４週間供給した場合に、マウスの臓器重量及び体重はそれほど変化しなかった。ｒａＣ−１−〇−ドデシルグリセロールを供給している間は全脂質の飽和アシル部分が著しく増加し、それに伴ってリルオリル部分が減少したにも拘らず、餌から化合物を取り除いて４週間後には、臓器及び組織の脂質は対照用グループのマウスのそれらと非常に類似していた。

本発明に従えば、グリセロールエーテル及びアンフォテリシンＢは、哺乳動物、特に人間に、真菌感染症を処置するのに充分な量で投与される。各薬剤の量は、感染している個体の大きさ、重量、年齢及び性別、処置が予防のためか治癒のためかの違い、感染の性状、段階及び度合い、感染している微生物の種類、投与経路並びに他のファクターに応じて変化し得る。静脈内経路の投与のためには、アンフォテリシンＢに対する耐性が違うので、薬量は、各患者に必要な量に調節すべきである。静脈内経路で投与されるアンフォテリシンＢの量は、１日当たりに、処置を受ける個体の体重１ｋｇにつき約０９Ｏ１〜約１．５ｍｇの範囲であるのが好ましい。この量は、より好ましくは１日当たりに約０．０２５〜約１．０ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ、特に好ましくは１日当たりに０．３〜０゜７　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇである。１ｍｇ／ｋｇのアンフォテリシンＢの薬量において、注入終了までに約２〜３μｇ　／　ｍρのピーク血清濃度が達成され、典型的にはその後２４時間までの間、０．５μｇ　／　ｍ　０以上に維持される。グリセロールエーテル脂質の量は、アンフォテリシンＢの抗真菌活性を高めるのに有用な任意の量である。２種の薬剤を単一の製薬組成物の形におけるように同時に投与するのが好ましいが、これら２種の薬剤を別々に順番に投与することもできる。

アンフォテリシンＢとグリセロールエーテルとの間の相乗作用は、広範なそれぞれの物質の相対量にわたって生じる。活性成分は、重量百分率基準でアンフオテリシンＢ約０．４〜約９０％及びグリセロールエーテル約９９．６〜約１０％から成るのが有利であり、アンフォテリシンＢ約４０〜約６０％及びグリセロールエーテル約６０〜約４０％から成るのが好ましい。組成物の前記の活性薬剤以外の残りの部分は、製薬担体及び随意成分から成る。

組成物は、アンフォテリシンＢを投与するのに適した任意の経路で投与される。

従って、この組成物は主として、局所投与及び（又は）静脈内注入（注射や点滴）によって投与することができる。両方の活性薬剤を同じ経路で投与するのが現時点では好ましいが、異なる経路で投与することもできる。例えば、グリセロールエーテル（２種以上でもよい）を経口投与し、アンフオテリシンＢを静脈内経路で投与することもできる。アンフオテリシンＢ及びグリセロールエーテルを静脈内経路又は局所経路で投与するのが好ましい。

静脈内経路で投与するためには、生理学的に適合する物質、例えば塩化ナトリウム、グリシン等を含有し、生理学的条件に適合する緩衝ｐＨを有する任意の好適な静脈内経路用ビヒクルと組合せて活性薬剤を投与することができる。結晶状アンフォテリシンＢは水に不溶であるため、ビヒクルには１種以上の可溶化剤、より好ましくはデオキシコール酸ナトリウムを含有させるのが有利である。静脈内経路の投与のためのアンフオテリシンＢは、アンフォテリシン８５０ｍｇ、デオキシコール酸ナトリウム４１ｍｇ及び緩衝剤としての燐酸ナトリウム２０、２ｍｇを提供する凍結乾燥したケークとして入手できる。再構成の際に静脈内注入用のコロイド懸濁液が形成される。グリセロールエーテル成分は、エタノール中に溶解させ、無菌水によって必要とされる有効濃度に希釈するのが有利である。

静脈内経路のアンフォテリシンＢの投与は、アンフォテリシンＢの使用について現存する推奨に従って実施するのが有利である。従って、静脈内経路用物質は、ゆっくりした静脈内注入によって、好ましくは静脈内経路の治療のための通常の注意事項を観察しながら約６時間がけて、投与すべきである。

局所的に投与するためには、局所投与するのに好適な任意の慣用のビヒクル中に活性成分を含有させる。局所用組成物は、局部的な真菌感染症、例えば皮膚及び粘膜のカンジダ感染症の処置のためのクリーム、軟膏又はローションを含んでいてよい。アンフォテリシンＢを局所的に放出するために用いられる好適なビヒクルは周知であり、このようなビヒクルを本発明の実施において有利に用いることができる。「フィジシャンズ・デスク・レフエレンス（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ　Ｄｅｓｋ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）　Ｊ　、第４５版（１９９１年）、第２１４７頁を参照されたい、１つの具体例に従えば、３重量％アンフォテリシンＢ含有クリーム、ローション又は軟膏が好ましい。

真菌感染症を処置するために、真菌感染症に苦しめられている哺乳動物にアンフォテリシンＢとグリセロールエーテルとの組合せ物を投与することができる。より特定的には、従来アンフォテリシンＢのみを用いて処置されていた又は処置可能である任意の真菌感染症を処置するために前記組合せ物を投与することができる。かがる感染症には、以下の真菌による感染症が包含されるが、これらに限定されない：ヒストブラスマ・カブスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ　ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）　、コクシジオイデスイミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ　ｉＩｌｍｉｔｉｓ）　、様々なカンジダ種、プラストミセス・デルマティティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ　ｄｅｒｍａｔｔｔｉｄｉｓ）　、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　）　、様々なりリブトコックス種、スポロトリクス・ジエンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ　５ｃｈｅｎｃｋｉｉ）　、ムコール・ムセド（Ｍｕｃｏｒ　ｍｕｃｅｄｏ）　、アスペルギルス・フミガッス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｆｆｌｉｇａｔｕｓ　）　ａ前記のものは全て、生体外で０．０３〜１．０μｇ　／　ｍ　１２の範囲の濃度のアンフォテリシンＢによって抑止される。この製薬組合せ物は特に、重大な人間の真菌性病原体であるカンジダ及びクリプトコックスの２つの属の真菌、特にカンジダ・アルビカンス及びクリプトコックス・ネオフォルマンスの感染症を処置するのに用いることができる。

任意の理論に結びつけられることは望まないが、グリセロールエーテルは真菌の莢膜（ｃａｐｓｕｌｅ　）合成を妨害することによフてアンフォテリシンＢの活性を高めるものと信じられる。クリプトコックス・ネオフォルマンスは多糖類の莢膜を持ち、これがこの酵母に毒性を与える、莢膜のない変異菌はマウスにおける毒性がない（コゼル（Ｋｏｚｅｌ　）ら、ｒＲｅｖ、　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓ、Ｊ　、　ｌ　Ｏ１補遺２．５４３６〜５４３９　（１９８８年））。

本発明者は、グリセロールエーテルの存在下で増殖したクリプトコックス・ネオフォルマンスは莢膜を少量しか作らないということを見出した。莢膜の合成がこれほど少ないということは、外観上異常なことである。任意の理論に結びつけられることは望まないが、多糖類の莢膜が除去されることによって、親油性薬剤であるアンフォテリシンＢが、親水性多糖類で被覆されていた菌の形質膜中のエルゴステロールと作用する機会がより多くなると信じられる。莢膜形成を抑止することによって、酵母の毒性が大いに低減され、酵母が食作用を受ける可能性が大きくなる。食細胞はまた、ＤＤＧによって刺激されて異質物質を摂取する（ヤマモトら、ｒＣａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｉｍｍｕｎ。

ｔｈｅｒ、　Ｊ　、　２５．１８５〜１９２　（１９８７年））。

以下、非限定的な実施例によって本発明の実施を例示する。

例」。

クリプトコックス・　、オフォルマンスに・するｒａｃ−１−ＤＤＧの　ハ　° Ｐ　びアンフォテリシンＢとの　六　の°、１クログスタット（Ｋｒｏｇｓｔａｄｔ　）らの「チェッカーボード（ｃｈｅｃｋｅｒｂｏａｒｄ）　Ｊ技術（「ファンダメンタルズ・オブ・メディカル・バクテリオロジー・アンド・マイコロジー（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｙｃｏｌｏｇｙ）」、第２版、５２１〜５２５，５４４〜５５０　（１９８０年））によって、ｒａｃ−１−０−ドデシルグリセロール及びアンフォテリシンＢ（シグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　、アンフォテリシン８４５％、デオキシコール酸ナトリウム３５％、燐酸ナトリウム２０％）を１個々に又は組合せて、段階分けした濃度で用いた場合のクリプトコックス・ネオフォルマンスの増殖の有無及び生存力を測定した。簡潔に説明すると、９６個のウェル（ｗｅｌｌ）を持つミクロ滴定プレート中で真菌の増殖を測定した。段階分けしたＤＤＧ及びアンフォテリシンＢの組合せ物を含有させた増殖培地（ウェル１個当たりに１００μＩ２）に、６７５ｎｍの波長における光学密度０．１の対数増殖期の培養物５μＣを接種した。増殖接種物を濁度測定法によって測定した。連続的に振り混ぜ且つ通気しながら２４時間後に、ミクロ滴定プレートの各ウェルについて増殖の有無を視覚的に測定した（ミクロ滴定プレート分析）。単細胞の死を保証するために、はっきりした増殖を視覚的に何ら示さないウェルのそれぞれを、２％寒天プレート、１％バクトベプトンプレート、２％グルコースプレートの上に置き、３７℃において２４時間インキュベートし、増殖について分析した（寒天プレート分析）、そのデータを図１　（２５℃ においてインキュベートした後のミクロ滴定プレート分析（）及び寒天プレート分析（マ））並びに図３（３７℃においてインキュベートした後のミクロ滴定分析（ロ）及び寒天プレート分析（■））に示す、各グラフは、３回の別個の試験の平均を示す、これらのデータから生じた急勾配の双曲線は、クリプトコックス・ネオフォルマンスに対するアンフォテリシンＢとＤＤＧとの間の強い相乗効果を示すものである。相乗効果とは、２種の抗真菌剤がそれぞれのＭＩＣ（最小抑止濃度）の半分以下の濃度で存在する下でその真菌が全く増殖しないことと定義される。表１かられかるように、２５℃においてｒａｃ−１−ＤＤＧがそのＭＩＧの半分の濃度（７゜５μｇ　／　ｍ　１２　）で存在する場合、アンフォテリシンＢについてのＭＩＣは２．２５ｕｇ／ｍＩ２から０．０４７μｇ　／　ｍρ に低減した。これは、アンフォテリシンＢＢのＭＩＣが４８分の１に低減したことを表わす。アンフォテリシンＢがそのＭＩＣの半分の濃度（１，１２μｇ／ｍｌ２）で存在する場合、ｒａｃ−１−ＤＤＧのＭＩＣは０．１２５μｇ／ｍｊ２に低減し、これは１２０分の１に減少したことになる。生存率の研究（データは示さない）では、酵母は、ＤＤＧ及びアンフォテリシンＢによってただ増殖が抑止されるだけではなくて殺されるということが示された。

医ｌカンジダ・アルビカンスに・するｒａｃ−１−、ＤＤＧの　２　びアンフォテリシンＢとの　の１クリプトコツクス・ネオフォルマンスをカンジダ・アルビカンスに置き換えて、例１の手順に従った。そのデータを図２（２５℃においてインキュベートした後のミクロ滴定プレート分析（Δ）及び寒天プレート分析（ム））並びに図４（３７℃においてインキュベートした後のミクロ滴定分析（０）及び寒天プレート分析（・））に示す、各グラフは、３回の別個の試験の平均を示す。

これらのデータから生じた急勾配の双曲線は、アンフォテリシンＢとｒａｃ−１ −ＤＤＧとの間の強い相乗効果を再び示すものである。このデータを表２にまとめる。

医］ユニ旦クリプトコックス・ネオフォルマンス　びカンジダ・アルビカンスに・　る　のグリセロールエーテルの２　びアンフォテリシンＢとの　の１２５℃において２４時間のインキュベートを用い、ｒａｃ−１−ＤＤＧをｒａｃ −１−０−ウンデシルグリセロール、ｒａｃ−１−０−トリデシルグリセロール又はｒａｃ−１−０−テトラデシルグリセロールに置き換えて、例１及び２の手順に従った。そのデータを図５〜１０に記載する。表３は、図５〜１０の解釈するための鍵を含む。

各グラフは、３回の別個の試験の平均を示す。急勾配の双曲線は、アンフォテリシンＢとグリセロールエーテルとの間の強い相乗効果を再び示すものである。

九ｌニュ１アンフォテ１シンＢの　２　に・　るＤＤＧ　の　の３７℃において２４時間のインキュベートを用い、しかしアンフォテリシンＢと組合せてＤＤＧ異性体を用いて、例１及び２の手順に従った。そのデータを図１１（クリプトコックス・ネオフォルマンス）及び図１２（カンジダ・アルビカンス）に記載する。表４は、図１１〜１２の解釈するための鍵を含む。

急勾配の双曲線は、アンフォテリシンＢとグリセロールエーテルとの間の強い相乗効果を再び示すものである、図１１及び１２中の曲線の実質的な重なりは、２種の１−ＤＤＧ光学異性体はアンフォテリシンＢの抗真菌活性の強化において実質的に均等であるということ、並びに１−ＤＤＧ光学異性体はこの点に関して２ −ＤＤＧ位置異性体と実質的に均等であるということを示す。

クリプトコックス・ネオフォルマンス及びカンジダ・アルビカンスは免疫を損なわれた患者の脳に感染するものなので、本発明者が実施した研究では、酵母をニューロンの初代培養物に添加し１次いでこれを相乗作用濃度のアンフォテリシンＢ及びｒａｃ−１−ＤＤＧで処理した０位相差顕微鏡分析によって、酵母を殺す濃度のＤＤＧ及びアンフォテリシンＢはニューロンの増殖パターンに悪い変化をもたらさないということが示された。実際、ＤＤＧはニューロンの増殖を現実に促進することが知られている（ヴエド（Ｖｅｄ　）ら、ｒ　Ｊ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ　Ｒｅｓ、Ｊ、３０．３５３〜３５８　（１９９１年））。

合成、製造及び分析操作に関して引用した全ての文献は、参照用に本明細書に取り入れられる。

本発明は、その技術思想又は本質的な特性から逸脱することな（他の特定的な形で実施することができ、従って、本発明の範囲を示す際には、以上の明細書の記載よりもむしろ添付した請求の範囲を参照すべきである。

ＦＩＧＵＲＥ　１ −５　０　５　１０　＋５　２０　２５ｒａｃ−１−ＤＤＧ　（μｇ／ｍ１）ＦＩＧＵＲＥ　２ −５　０　５　１ｏ　Ｆ＋　２ｏ　２５ｒａｃ−１−ＤＤＧ　（μｇ／ｍ１）Ｆ丁ＧＵ、ＲＥ　３ −５　０　５　ＴＯ１５２０２５匝−１−ＤＤＧ　（μｇ／而）ＦＩＧＵＲＥ　４ｒａｃ−１−ＤＤＧ　（μｇ／ｍ１）ＦＩＧＵＲＥ　５ｒａｃ−１−０−ウンデシルグリセロール（μｇ／ｍ１）ＦＩＧＵＲＥ　６ｒａｃ−１イトウンデシルグリセロール（μｇ／ｍ１）ＦＩＧｔＪＲＥ　７ＦＩＧＵＲＥ　８ −５　０　５　Ｔｏ　１５　２０巨１ｃｍ１−０−）リゾシルグリセロール（μｇ／ｍ１）ＦＩＧＵＲＥ　、９ＦＩＧＵＲＥ　１０ −５　０　５　ｉｏ　＋５　２０ｒａｃ−１＝Ｏ−テ）ラブシルグリセロール（μｇ／ｍ１）ＦＩＧＵＲＥ　１１ −５　０　５　１０　＋５　２０　２５ＤＤＧ　（μｇ／ｍｌ）ＦＩＧＵＲＥ　１２ＤＤＧ　（μｇ／ｍｌ）フロントページの続き（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＰＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、　ＭＲ，ＳＮ、　ＴＤ。

ＴＧ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ、ＣＨ。

Ｃ３，ＤＥ、ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＬＵ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　ＮＯ、ＮＺ、ＰＬ、ＰＴ、Ｒ○、ＲＵ、ＳＤ、５Ｅ（７２）発明者　ヘインズ、メアリー　ビー。

ゴー、ウェストビュー　ロード　６２４（７２）発明者　ベト、ハレシュ　ニス。

アメリカ合衆国　１９０８２　ペンシルベニア。

アバ−ダービー、ラーチウッド　アベニュー　５３８（７２）発明者　カバカンガン、アーリンダ　エイ。

アメリカ合衆国　１９１４１　ペンシルベニア。

フィラデルフィア、ノース　マービン　ストリー）−５４４９

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）アンフォテリシンＢ並びに（ｂ）（ｉ）ＨＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２０Ｒ、（ｉｉ）ＨＯＣＨ２ＣＨ（ＯＲ１）ＣＨ２０Ｈ、及び（ｉｉｉ）それらの組合せ（式中、Ｒ及びＲ１はそれぞれＣ８〜Ｃ１８アルキル及びＣ８〜Ｃ１８アルケニルより成る群から選択される）より成る群から選択されるグリセロールエーテルを特徴とする製薬組成物。２．Ｒ及びＲ１がＣ８〜Ｃ１８アルキル基及び二重結合１個を有するＣ８〜Ｃｌ８アルケニル基から選択される、請求の範囲第１項記載の組成物。３．アルキル及びアルケニル基が枝分かれしてしいない、請求の範囲第２項記載の組成物。４．グリセロールエーテルがＨＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２０Ｒであり、ＲがＣ８〜Ｃ１８アルキル及びＣ８〜ＣＩ８アルケニルより成る群から選択される、請求の範囲第３項記載の組成物。５．Ｒ及びＲ１がそれぞれデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル及びテトラデシルより成る群から選択されるアルキル基である、請求の範囲第３項記載の組成物６．Ｒがデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル及びテトラデシルより成る群から選択されるアルキル基である、請求の範囲第４項記載の組成物。７．Ｒ及びＲ１がドデシルである、請求の範囲第５項記載の組成物。８．Ｒがドデシルである、請求の範囲第６項記載の組成物。９．グリセロールエーテルがｓｎ−１−Ｏ−ドデシルグリセロールである、請求の範囲第８項記載の組成物。１０．グリセロールエーテルがｓｎ−３−Ｏ−ドデシルグリセロールである、請求の範囲第８項記載の組成物。１１．グリセロールエーテルが２−Ｏ−ドデシルグリセロールである、請求の範囲第７項記載の組成物。１２．製薬上許容できる担体をさらに含む、請求の範囲第１項記載の組成物。１３．担体を除いて、アンフォテリシンＢ約０．４〜約９０重量％及びグリセロールエーテル約１０〜約９９．６重量％を特徴とする、請求の範囲第１項記載の組成物１４．担体を除いて、アンフォテリシンＢ約４０〜約６０重量％及びグリセロールエーテル約６０〜約４０重量％を特徴とする、請求の範囲第１３項記載の組成物。１５．Ｒ及びＲ１がそれぞれデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル及びテトラデシルより成る群から選択されるアルキル基である、請求の範囲第１３項記載の組成物。１６．Ｒ及びＲ１がドデシルである、請求の範囲第１５項記載の組成物。１７．グリセロールエーテルがｓｎ−１−Ｏ−ドデシルグリセロールである、請求の範囲第１６項記載の組成物１８．グリセロールエーテルがｓｎ−３−Ｏ−ドデシルグリセロールである、請求の範囲第１６項記載の組成物１９．グリセロールエーテルが２−Ｏ−ドデシルグリセロールである、請求の範囲第１６項記載の組成物。２０．哺乳動物の真菌感染症を処置する方法であって、かかる処置を必要とする哺乳動物に抗真菌的に有効量の（ａ）アンフォテリシンＢ並びに（ｂ）（ｉ）ＨＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２０Ｒ、（ｉｉ）ＨＯＣＨ２ＣＨ（ＯＲ１）ＣＨ２０Ｈ、及び（ｉｉｉ）それらの組合せ（式中、Ｒ及びＲ１はそれぞれＣ８〜Ｃ１８アルキル及びＣ８〜Ｃ１８アルケニルより成る群から選択される）より成る群から選択されるグリセロールエーテルを投与することを特徴とする、前記方法。２１．Ｒ及びＲ１がＣ８〜Ｃ１８アルキル基及び二重結合１個を有するＣ８〜Ｃ１８アルケニル基から選択される、請求の範囲第２０項記載の方法。２２．アルキル及びアルケニル基が枝分かれしていない請求の範囲第２１項記載の方法。２３．グリセロールエーテルがＨＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２０Ｒであり、ＲがＣ８〜Ｃ１８アルキル及びＣ８〜ＣＩ８アルケニルより成る群から選択される、請求の範囲第２２項記載の方法。２４．Ｒ及びＲ１がそれぞれデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル及びテトラデシルより成る群から選択されるアルキル基である、請求の範囲第２２項記載の方法。２５．Ｒがデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル及びテトラデシルより成る群から選択されるアルキル基である、請求の範囲第２３項記載の方法。２６．Ｒ及びＲ１がドデシルである、請求の範囲第２４項記載の方法。２７．アンフォテリシンＢ約０．４〜約９０重量％及びグリセロールエーテル約１０〜約９９．６重量％の量でアンフォテリシンＢ及びグリセロールエーテルを投与することを特徴とする、請求の範囲第２０項記載の方法。２８．アンフォテリシンＢ約４０〜約６０重量％及びグリセロールエーテル約６０〜約４０重量％を投与することを特徴とする、請求の範囲第２７項記載の方法。２９．Ｒ及びＲ１がデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル及びテトラデシルより成る群から選択されるアルキル基である、請求の範囲第２７項記載の方法。３０．Ｒ及びＲ１がドデシルである、請求の範囲第２９項記載の方法。３１．アンフォテリシンＢの薬量が１日当たり処理すべき哺乳動物の体重１ｋｇにつき約０．０１〜約１．５ｍｇである、請求の範囲第２０項記載の方法。３２．アンフォテリシンＢの薬量が１日当たり処理すべき哺乳動物の体重１ｋｇにつき約０．０２５〜約１ｍｇである、請求の範囲第３１項記載の方法。３３．感染している真菌がクリブトコックス・ネオフォルマンスである、請求の範囲第２０項記載の方法。３４．染している真菌がカンジダ・アルビカンスである、請求の範囲第２０項記載の方法。３５．アンフォテリシンＢを静脈内投与することを特徴とする請求の範囲第２０項記載の方法。３６．アンフォテリシンＢを静脈内投与し且つグリセロールエーテルを経口投与することを特徴とする、請求の範囲第３５項記載の方法。３７．アンフォテリシンＢ及びグリセロールエーテルを静脈内投与することを特徴とする、請求の範囲第３５項記載の方法。３８．（ａ）アンフォテリシンＢ、（ｂ）（ｉ）ＨＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２０Ｒ、（ｉｉ）ＨＯＣＨ２ＣＨ（ＯＲ１）ＣＨ２ＯＨ、及び（ｉｉｉ）それらの組合せ（式中、Ｒ及びＲ１はそれぞれＣ８〜Ｃ１８アルキル及びＣ８〜Ｃ１８アルケニルより成る群から選択される）より成る群から選択されるグリセロールエーテル並びに（ｃ）好適な静脈注射用ビヒクルを特徴とする、注射可能組成物。３９．Ｒ及びＲ１がそれぞれ枝分かれしていないデシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル及びテトラデシル基より成る群から選択される、請求の範囲第３８項記載の組成物。４０．Ｒ及びＲ１がドデシルである、請求の範囲第３９項記載の組成物。