TW575420B - Composition for enhancing cellular immunogenicity comprising alpha-glycosylceramides - Google Patents

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575420 A7 ίυ 五、發明説明（1 ) 發明之背t 發明之範疇 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明係關於藉著具有α -糖基神經醯胺構造之化合物 使腫瘤細胞及病原體感染細胞之免疫原性增強之方法。更 詳細而言，係關於使用免疫原性被增強之腫瘤細胞之腫瘤 療法。 背景技術 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 藉著將被化學治療劑、放射線照射殺死之自體或非自體 腫瘤細胞接種於癌症患者，誘導罹癌宿主產生腫瘤特異性 免疫性，而對癌症治療有效之所謂腫瘤療法已在黑色素瘤 (Mitchell，Μ. S. et al.，J· Clin. Oncol·，8, 409 (1990))、腎臟 癌（Neidart，J· A. et al·，Cancer, 46，1128 (1980))、卵巢癌 (Freedman，R. S. et al·，Cynecol· Oncol·，29, 337 (1988))、 大腸癌（Hoover，H· C·，Cancer, 55, 1236(1985))等之癌症患 者中被試驗。但是，腫瘤細胞對生物體而言與細菌那樣之 異物不同，其是藉著原本的宿主細胞形質轉換而產生之細 胞，所以免疫原性低。因此，無法得到期待之效果，只有 對於黑色素瘤、腎臟癌等免疫原性比較高之癌症種類被認 爲多少有些效果（Mullen，C. A. et al.，in Cancer Chemotherapy and Biological Response Modifiers, eds. Pinedo, Η. M. et al·，（Elsevier Science B. V·)，pp 285-294 (1996)) 0 近年以來，伴隨著分子生物學、基因工程學之發展，基 因導入變爲可行，因此可以使用藉由基因導入法而導入癌 相關抗原基因之腫瘤細胞進行腫瘤療法之試驗。亦即將腫 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 A7 β 7 —一，、-…a _ 一‘ --—~~—一 . ______—— 五、發明説明（2 ) 瘤相關抗原基因導入自體腫瘤（或其有困難^ ^下以非自 體腫瘤）細胞中而得到與原本腫瘤細腺相比提同免疫原性 之腫瘤細胞，然後進行將此等腫瘤細胞應用於腫瘤療法之 試驗。但是，由於此種試驗中被認爲町做爲腫瘤相關抗原 之抗原極少，目前僅僅實施於極有I1艮之癌症種類（c〇nry，R· Μ.，et al·，Cancer Res.，54, 1164(1994))。更且’羅癌宿主 之免疫，由於腫瘤細胞產生因子等多顯著疲弱’因此與其 只將腫瘤細胞之抗原性提升，而得不到所期待I治療效 果，倒不如將罹癌宿主方面之免疫修復更爲重要°因此’ 接種導入有細胞激素基因、主要組織適合抗原基因、助刺 激（costimulatory )分子之細胞，使羅癌宿主疲弱之免疫獲 得改善，此爲「提升治療效果」之檢討中主要之試驗。例 如使用導入有 IL-2 (Connor，J. et al·，J· Exp· Med.，177， 1127(1993))、IL-4 (Golumbek，Ρ· Τ· et al·，Science，254, 713(1991))、IL-6 (Porgador，A· et al·，Cancer Res·，52, 3679(1992))、IFN_g (Belldegrun，A. et al·，J· Natl· Cancer Inst.，85, 207 (1993))、CM-CSF(Dranoff，G. et al·，Proc· Natl· Acad. Sci· USA，90，3539(1993))、IL-12 (Tabara，H. et al·， Gene Therapy, 2, 96 (1995)等細胞激素基因之腫瘤細胞， 或者導入有MHC第II類及B7-1基因之腫瘤細胞（Travis，J. et al·，Science，259，310 (1993) ; Basker, S. et al·，J· Exp. Med· 181，619 (1995)之方法被報告。 關於使用藉基因導入而修飾之腫瘤細胞之腫瘤療法，目 前在世界中，其之臨床應用正在試驗中（R〇th，J.A. etal.，J. -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規枱（210X297公釐） ------.--0—^-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 1#^ 經濟部中央榡準局員工消費合作杜印製 575420 kl B7 五、發明説明（3 )

Natl. Cancer Inst·，89, 21 (1997))。但是，該方法基因操作 繁雜（Par doll, D.M·，Immunol. Today, 14，310 (1993))，而且 無法得到具有可滿足治療效果之良好基因導入效率之載 體，因此上述腫瘤療法之進一步改善仍被虽望[Mullen， C.A.et al., in Cancer Chemotherapy and Biological Response Modifiers, eds. Pinedo, H.M. et al. (Elsevier Science B.V.), pp 285-294 (1996)]。在身體中存在種種糖與神經醯胺行A -結合所形成之/?-糖基神經醯胺（Svennerholm L· et al.， Biochem，Biophys. Acta，280，626 (1972) ; Karlsson，K. et al·, Biochem. Biophys. Acta，316，317 (1973))。另一方面，已 知α -糖基神經醯胺具有顯著的免疫賦活作用及抗腫瘤作 用（Morita，Μ. et al·，J. Med. Chem·，38，2176 (1995))，以及 α -糖基神經醯胺之此等作用比_糖基神經醯胺之作用強 許多（Motoki， Κ. et al.，Biol. Pharm. Bull.，18， 1487 (1995))。再者，已知有“_糖基神經醯胺構造之化合物具 有抗原提示細胞活性化作用，以及使用該被具α -糖基神 經醯胺構造之化合物活化之抗原提示細胞之抗原提示細胞 療法，在癌症治療上極爲有用（Yamaguchi，Υ· et al·，Oncol. Res·，8, 399 (1997))。又，在將具糖基神經醯胺構造之 化合物投與至身體内之場合，已知能增加放射線防護作用 以及血小板數及白血球數（Motoki，K. et al.，Biol. Pharm. Bull.，19, 952 (1996))。 但是，就本發明人所知，關於經a -糖基神經醯胺處理 之腫瘤細胞在腫瘤療法上有用以及α -糖基神經醯胺能增 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規枱（210X29h>i ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝_ 訂 575420 A7 五、發明説明（4 ) 強腫瘤細胞之免疫原性之點，未曾被報告。 發明之概要 本發明者今發現，在含有具^ _糖基神經醯胺構造之化 合物之培養基中被試管培養之腫瘤細胞具有高免疫原性， 若將該細胞或該細胞經放射線照射者投與至患癌症之動 物，可以得到顯著之抗腫瘍效果，而且，該腫瘤細胞由於 致腫瘤性消失，所以在腫瘤療法上之安全性亦優。本發明 即是基於此等發現而完成者。 本發明之目的爲提供一種供增強腫瘤細胞之免疫原性之 組合物而能簡便調製在腫瘤療法上有效之腫瘤細胞，一種 供增強病原體感染細胞之免疫原性之組合物而能簡便調製 在感染症等之治療上有效之病原體感染細胞，一種增強細 胞之免疫原性之方法，一種藉[糖基神經醯胺而免疫原 性被增強之細胞，一種含有前述細胞而用於治療此等細胞 引起之疾病（尤其是腫瘤）之醫藥組合物，一種前述細胞在 製造前述醫藥組合物上之用途，以及一種前述細胞引起之 疾病（尤其是腫瘤）之治療方法。 經漪部中央標率局員工消費合作社印製 因此，本發明之細胞免疫原性增強用組合物爲含有下式 (I)之化合物或其鹽類或其溶媒合物者：

(I) 本紙張尺度適财關家辟（CNS ) 575420 A7 ___________β7 五、發明説明（5 ) 式中， R1爲Η或OH ; X爲7〜27中之任一整數； R2爲選自下列（a )〜（e )所組成族群中之取代基（此處，Υ 爲5〜17中之任一整數）： (a) -CH2(CH2)YCH3， (b) -CH(OH)(CH2)YCH3， (c) _CH(OH)(CH2)YCH(CH3)2， (d) -CH=CH(CH2)YCH3， (e) _CH(OH)(CH2)YCH(CH3)CH2CH3 ;以及 R3〜R9爲下列i )或ii)中之任一者定義之取代基： i) R3、R6及 R8爲 Η 時， R4爲 Η、OH、ΝΗ2、NHCOCH3、或選自下列基（Α)〜(D) 所組成族群中之取代基： ------；—-|丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經漓部中央標準局貝工消費合作社印製

HO / w\ 0一 / \ Q- OH

-OH

一 OH B) -Ο -〇

V (C)

HC (〇) R5爲OH、或選自下列基（E)及（F)所組成族群中之取代 基： -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公f ) 575420 A7 }37 五、發明説明（6

-OH

‘〇H

HO -Ο

OH

-OH

OH Ί 0-NHCOCH3

HO (E) F) R7爲Ο H、或選自下列基（A)〜(D)所組成族群中之取代 基：

0

OH 「OH °\ HO /~ ~°\ 0- 0-

裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ (B； (C) (D) R9爲Η、CH3、CH2OH、或選自下列基（A，)〜(D’）所组成族 群中之取代基：

-OH

HO -0 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

0H

OCfV

(c，） ° och2-

(D.) (A.) (B，） ii) R3、R6及 R7 爲 H 時， R4爲 H、OH、NH2、NHCOCH3、或選自下列基（A)〜(D) 9 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規枱（210X297公f ) 575420 A7 -------— —_____B7 五、發明説明（7 ) 一― 所組成族群中之取代基：

(A) (B) (C) (D)R5爲OH、或選自下列基（E)及（F)所組成族群中之取代 基：

(請先閱讀背面之注意事 4 _項再填· 裝— :寫本頁) 、11 (E) ⑺ R8爲Ο Η、或選自下列基（A)〜(D)所組成族群中之取代 基： it 經濟部中央標率局員工消費合作社印製

(A) (B) (C) (D) -10 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格(210Χ2ϋϋ* 575420 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（8 R9爲Η、CH3、CH2OH、或選自下列基（Α’)〜(D’）所組成族 群中之取代基：

-0 OH

OH OCH2-

(Λ*) (Β·) (C，) (〇，) 圖式之簡單説明

0H OCH? 圖1所示爲α -糖基神經醯胺對腫瘤細胞之免疫原性之效 果。免疫原性係以小鼠脾細胞之細胞傷害活性爲指標。 〇：對照組、•： EL-4/V、□ : EL-4/KRN、△ : EU 4/583。 圖2所示爲經α -糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞對el-4肝 轉移模型氣之效果。〇：對照組、φ : EL-4/V、□ : EL 4/KRN、△ : EL-4/583 〇 圖3所示爲經π -糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞對β16黑 色素瘤肺轉移模型鼠之效果。〇：對照組、參：Β丨6/V、 □ : B16/KRN。 圖4所示爲α -糖基神經醯胺對腫瘤細胞致腫瘤性之效 果。〇··未經處理之腫瘤細胞、φ :用載體處理之腫瘤細 胞、:用KRN7000處理之腫瘤細胞。 圖5所示爲經糖基神經醯胺處理以及經或未經放射線 照射之腫瘤細胞對Β16肺轉移模型之效果。〇：對照組、 △:未經放射線照射之B16/V、□ ··經放射線照射之 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規栳（210X 297^^* _—私衣— 〔請先閱讀背面之注意事項、再填寫本頁」 -訂· 4 575420 A7 B7 五、發明説明（9 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 B16/V、▲:未經放射線照射之B16/K、:經放射線照 射之B16/K。 圖6所示爲本發明所使用π -糖基神經酸胺化合物之代表 例（KRN7000)之合成反應路徑之概略圖。 反應路徑中，pyr所示爲吡啶、BrPPh3(CH2)12CH3爲十三 烷基三苯基鳞溴化物、n-BuLi爲正丁基鋰、MsCl爲甲續 醯氯、BnBr爲苄基溴、1·ρΓ〇Η爲丙醇。 圖7所示爲圖6之接續合成反應路徑之概略圖。 反應路徑中，WSC-HC1爲1-乙基-3_(3，_二甲基胺丙基）_ 碳化二亞胺·鹽酸鹽、MS4A爲分子篩4 A、Hex4NBr爲四 己基按溴化物。 圖8所示爲實例1〜3之化合物之化學式。 圖9所示爲實例1〜3之化合物之化學式。圖8之繼續部 分0 發明之具體説明^ 式（1 )之化合物 前述式（1 )之化合物中，神經醯胺部分之χ，以i i〜2 5 之整數爲較佳。 R2中之Y以9〜17之整數爲較佳，而以u〜i52整數爲 更佳。 式（1)之神經醯胺部分之父及“之較佳組合爲：χ爲 2卜25之整數，而R2爲取代基（1?)(式中丫爲“〜丨幻之化 合物。 式⑴之糖部分中之較佳組合爲：r3^r6表示h， -12- (請先閲讀背面之注意事 4 •項再填· 裝— :寫本頁) 、1Τ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) 規拮（210X 297^ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 A7 ----— B7 五、發明説明（10 ) ~~ — —— - R4表示0H或（A)〜(D)基中之任一取代基，R5表示〇H或者 (E)或（F)基之取代基，R7&R8各表示η或〇H之任一者（但 是，R及R兩者不表TF同一基），R9表示CH2〇H、CH3、 Η、或（Af)〜(D〇基中之任一取代基之化合物。 更佳組合則是R3及R6表示Η，R^R5爲〇H，r^r8各表 示Η或OH之任一基（但是，化7及化8兩者不表示同一基）， 且R9爲CH2〇H或（A，)〜(D’）基中之任一取代基之化合物，及 R3、R6 及 R8爲 Η，R4、f及 R、〇II，且 r、CH2〇h 之化 合物。 式（I)化合物之較佳實例爲： X爲21〜25之整數， R爲取代基（b)(式中Y爲11〜15之整數）， R3及R6爲Η， R4爲OH或選自下列基（Α)〜(D)所組成族群中之基， R5爲0H或選自下列基（E)及（F)所組成族群中之基， R7及R8各表示Η或0H (但是，兩者不表示同一基）， R9爲CH2〇H或選自下列基（Α，)〜(D，）所形成組群中之基之 化合物； X爲21〜25之整數， R2爲取代基（b)(式中Y爲11〜15之整數）， R3及R6爲Η， R4及R5爲 OH， R7及R8各表示Η或OH (但是，兩者不表示同一基）， R9爲CH2〇H或選自下列基（A，)〜(D’）所組成族群中之基之 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規掊（210X297公^ ) 一——一 --- ，——一--------1T------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 575420 A7 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 五、發明説明（n ) 化合物；以及 X爲21〜25之整數， R2爲取代基（b)(式中Y爲1 1〜；[5之整數）， R3、R6 及 R8 爲 Η，R4、R5及R7爲 OH， R9爲CH2OH之化合物。 做爲增強細胞免疫原性之化合物之較隹化合物，爲 (2S，3S，4R)-l-〇 吡喃型半乳糖氧基）_2-二十六碳醯胺基-3,4-十八烷二醇（〖^^[7000)。 式（I)之化合物可爲藥學上容許之非毒性鹽類。式（I)化 合物之鹽類，爲酸加成鹽，例如由無機酸（如鹽酸、硫 酸、硝酸、嶙酸等）生成之鹽類，或有機酸（如醋酸、丙 酸、順丁晞二酸、油酸、椋搁酸、檸檬酸、滤拍酸、酒石 酸、反丁烯二酸、谷胺酸、泛酸、月桂基磺酸、甲磺酸及 fe·等）生成之鹽類。 式（I)之化合物可爲溶媒合物（例如水合物）。 式（I)之化合物可由任何以合成α -糖基神經醯胺爲目的 之方法製造。 首先’以來蘇糖爲起始物質合成神經醯胺，其次將糖基 導入此神經醯胺，即可調製成式（1)之化合物。關於此等 以-糖基神經醯胺之一般合成方法，可參考W093/5055號、 W094/2168 號、W094/9020 號及 W094/24142 號。 再者，式（I)之化合物也可由自然界（生物等）之物質經 由管柱層析法單離、精製而得到。 -14-

本紙張尺度適财關家辟（CNS ) A视掊（2H

---J (請先閱讀背面之注意事 4 項再填· 裝— :寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局負工消費合作社印f 575420 --- --〜_ 137 五、發明説明（12 ) ~~ — ―一—~— jgj良免疫原性增且合物 式（I)之化合物顯示在增強細胞之免疫原性上有用（藥理 試驗1〜5)。此處，所謂「免疫原性」者，爲細胞使身體 產生免疫反應之活性，以及被該結果謗導之免疫系統識別 之活性。 本發明之免疫原性增強用組合物，係藉著在試管中與意 圖將免疫原性增強之細胞接觸而被使用。例如，在細胞之 培養基中’將式（I )之化合物以使最終濃度爲〇 1〜⑼〇毫 微克/毫升（而以1〜1000毫微克/毫升爲較佳）之量加入，將 該細胞培養3 0分鐘〜4日（而以3小時〜2日爲較佳），可使 細胞之免疫原性增強。細胞之培養條件及使用之培養基可 選自習用技術。 本發明之免疫原性增強用組合物可以溶液、懸浮液、乳 液之形式添加於意圖將免疫原性增強之細胞之培養液中。 此等各種溶液，可含有藥學上容許之載體或稀釋劑等添 加劑，具體而言，有溶劑（例如水、生理食鹽水）、增溶劑 (例如乙醇、聚山梨酸S旨）、等張化劑、保存劑、抗氧化 劑、賦形劑（例如乳糖、殿粉、結晶纖維素、甘露醇、麥 芽糖、磷酸氫鈣、軟質無水矽酸、碳酸鈣）、粘合劑（例如 殿粉、聚乙晞基峨p各淀酮、經丙基纖維素、乙基纖維素、 羧甲基纖維素、阿拉伯膠）、安定劑（例如乳糖、甘露醇、 麥芽糖、聚山梨酸酯、聚乙二醇類、聚氧化乙烯硬化蓖麻 子油）、潤滑劑（例如硬脂酸鎂、滑石、硬化油）等。 再者，按照需要可加入甘油、二甲基乙醯胺、70%乳酸 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS 規格(210X297^# ) —— ------IT------Aw (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 kl ---------13 7 五、發明説明（13 ) -~~——一~—- 納、界面活性劑、鹼性物質（例如乙二胺、乙醇胺、碳酸 鋼、藻蛋白鹼、甲基葡胺、三胺基甲烷 將與式（I )化合物接觸之腫瘤細胞投與至小鼠，則對該 腫瘤細胞之免疫（細胞傷害活性）將被謗發。再者，意外地 發現’對該腫瘤細胞以外腫瘤細胞之免疫（細胞傷害活性） 亦同時被謗發（參考藥理試驗例J)。 思圖使免疫原性增強之細胞者，包括腫瘤細胞、病原體 感染細胞。其可從患有腫瘤之患者或已感染病原體之患者 單離出來，也可經由試管中人爲製作而產生。 意圖使免疫原性增強之細胞者，基本上包含黑色素瘤、 腎臟癌、子宮癌、胰臟癌、腦腫瘤、神經膠質芽細胞瘤、 大腸癌、肺癌、肝癌、淋巴瘤、白血病、纖維肉瘤等全部 癌症種類，而以黑色素瘤及腎臟癌爲特佳。 再者’病原體感染細胞例如包括小鼠感染細胞。又，此 處所渭「病原體」者，包含衣形病毒、立克次氏體、單核 細胞增生利斯特氏菌、利什曼原蟲、錐形蟲、及鉅鉸蛋白 等類之病原因子。 經由本發明，提供一種細胞免疫原性增強方法，其包含 將細胞與式（1)之化合物或其鹽類，或者其溶媒合物接 觸。細胞與式（I)化合物之接觸可與前述同樣之方法實 施0 患_^原性增強細腧 本發明之免疫原性增強細胞，可由式（1)之化合物或其 鹽類’或者其溶媒合物，在試管中與意圖使免疫原性增強 -16- 本紙張尺度適用中國CNS) -—--- _ Awl 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) )/M20

經濟部^^<標準局員工消費合作社印策 之細胞接觸而得到。多 條件實施。 π原性增強細胞之調製可依照前述 二i疫原性増強細胞做爲抗原，投與於哺乳類，則強 病。 反力，而可治療以該細胞爲起因之疾 b纟發明可提供-種以該細胞爲起因之疾病之、、 劑’其含有藉著與式⑴之化切 「产療丨並眘之細胞。在本説明書中，所謂 。療」八實也含有「預防」之意義。 再者，本發明提供一種以該細胞爲起因之疾病之治療 法，其包含投與藉著與式⑴之化合物或其鹽類，或者复 落媒合物在試管中#觸而得到之細月包。 、 使用免疫原性已增強之腫瘤細胞做爲有效成分時，能治 療該腫瘤，而使用免疫原性已增強之病原體細胞做爲有 成分時，能治療該感染症。 將藉式（I)之化合物所得到之免疫原性已增強之腫瘤 胞投與至體内，可強力地謗發對該腫瘤細胞之免疫，其 果使得腫瘤受到來自體内免疫系統之攻擊，因此可使腫 退縮或消滅。本發明之腫瘤細胞，不只是對黑色素瘤等 疫原性高之腫瘤有效，即使對於T淋巴瘤也可強力謗發 疫（參考藥理試驗例2及3 )。 因而，本發明提供一種腫瘤治療用之醫藥組合物，其含 有與式（I)之化合物或其鹽類，或者其溶媒合物在試管 接觸而得到之腫瘤細胞（免疫原性增強腫瘤細胞）。 效 結 瘤 免 免 中 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -17- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297^# ) 575420 A7 五 、發明説明（Μ ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 再者，本發明提供一種腫瘤之治秦 原性増強之腫瘤細胞。療万心包含投與免疫 本：明書中，所謂「腫瘤」者’係包含黑色素瘤、腎臟 届、子客癌、胰臟癌、腦腫瘤、神經膠質芽細胞瘤'大腸 癌、肺癌、肝癌、淋巴瘤、白血病、纖維肉瘤等癌症。 再者，本説明書中，所謂「腫瘤治療用醫藥組合物」 者，係包含癌症疫苗、癌症細胞疫苗等之癌症治療劑。 ::明中免疫原性增強細胞係以合乎目的之任何投與路 =與，具體而言，可有腹腔内投與、皮下投與、靜脈或 良心血管内投與、藉由注射之局部投與等方法。再者， 在人之場合，可有靜脈内投與、動脈内投與、藉注射之局 :投與、腹腔或胸腔内之投與、皮下投與、肌肉θ内投與等 投與方式。而以靜脈内投與爲最佳。 本發明中之免疫原性增強細胞，可根據常法，以注 ，'懸浮劑、乳化劑之形式投與，且爲了更加增強細胞 疫原性，必要時可懸浮於佛洛因德氏完全佐劑等佐劑中 或與BCG等具有佐劑活性之物質共同投與。本發明之腫艰 =燎用醫藥組合物，可含有前述藥學上容許劑。 本發明之醫藥組合物中各個有效成分，係依照各個 ’兄，可連續地或間歇地投與。具體之投與量係隨投與 法、患者 < 各種狀況，例如年齡、體重、性別、感受性 投與時間、併用之藥物等而變化。例如免疫原性^強腫烟 細胞顯現活性所需之投與量，如以靜脈内投與爲例，對成 射免 瘤 狀方 瘤 j^-辦衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T •19 18 Μ氏張尺度適用中關家標準（CNS ) A~ (210x 297公# ) __—---- 575420 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ________ 五、發明説明（16 ) ~〜 人而言，平均爲每日約1 X 1()5^ X 1〇9細胞數/體重（八 斤），而以1 Χίο6〜5 X 1〇8細胞數/體重（公斤）爲較佳。免产 原性增強細胞以使用注射劑爲較佳，可將預先調節到所定 濃度之製劑以原樣投與，或者在投與之前以注射用生理含 鹽水稀釋到所定濃度而投與。 ' 本發明之免疫原性增強細胞，在投與到患者之前，較佳 以放射線或具有細胞毒性之藥劑處理，以使其死減（喪失 增殖能力）。 實例 雖以以下之實例詳細説明本發明，然而本發明之範圍並 不爲其所限。 化合物之合成以及單齷·精寧j !例1 L2\3S，4|^_l·^ -D_吡喃型半乳糖氫其一 碜醯胺基-3,4-十八烷二醇(^10^7000)之合成 以下彳示越化合物之合成步骤，一律以圖6及7表示。 (1) 化合物G 1之合成 在0_來蘇糖（200公克，1.33莫耳）溶於以氯化躬乾燥之 丙酮之溶液（3.0公升）中，加入硫酸（〇.5亳升），在室溫擅 拌18小時。加入分子篩4A之粉末（1〇〇公克），將反應液 中和後’以石夕藻土過濾，殘渣以丙酮洗淨。濾液及洗液合 併後進行減壓濃縮，可得到G 1之粗生成物。產量24〇公克 (95%)。以上產物不需精製，即用於下一步驟。分析用樣 本藉以己燒：丙酮（9 : 1 )爲溶出溶媒之碎凝膠層析法精 製0 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) ( 210X297^ § T~" ^^裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂 __ 137575420 Α7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（17 ) mp 76-78 °C; FDMS m/z 191 (M+l)+; ^-NMR (500MHz? CDC13) d 5·45 (1H，d，J=l，8Hz)，4·83 (1H，dd，J=3.7, 5.5Hz), 4.64 (1H，d，J=6.1Hz)，4.27-4.30 (1H，m)，3.90-3.99 (2H，m)， 1.48 (3H，s)，1.32 (3H，s)。 (2) 化合物G2之合成 在化合物G1 (239公克，約1·26毫莫耳）之二氯甲烷溶液 (168毫升）中，加入吡啶（1 〇毫升）、三苯甲基氯（39.0公 克），在32 °C攪拌4小時。滴入乙醇（8毫升），並在室溫下 擾拌2小時。以飽和氣化銨水溶液、飽和破酸氫鈉水溶 液、食鹽水洗淨後，進行減壓濃縮。將殘渣在醋酸乙酯中 溶解，在0 °C進行結晶化。產量501公克（自D-來蘇糖計， 產率爲87%)。 mp 174-176 °C ; FDMS m/z 432M+; !H-NMR (500MHz? CDC13) d 7·21-7·49 (15H，m)，5.38 (1H，d，J=2.4Hz)，4.75 (1H，dd，J=3.7，6.1Hz), 4.59 (1H，d，J=6.1Hz)，4.31-4.35 (1H， m)，3.43 (1H，dd，J=4.9, 9·8Ηζ)，3·39 (1H，dd，J=6.7, 9.8Hz)， 1.29 (3H，s)，1·28 (3H，s)。 (3) 化合物G3之合成 在十三烷基三苯銹溴化物（962公克，1.16莫耳）（將卜溴 十二坑、二本騰在140C加熱4.5小時調製而得）之thf溶 液（1500¾升）中’於氧之氣圍氣下’將正丁基麵之25 μ 己烷溶液（462毫升；366毫莫耳）在〇。(：滴入。滴入終了 後，攪掉15分鐘，然後滴入化合物G2 (250公克，579毫 莫耳）之THF溶液（450亳升）。慢慢將溫度升至室溫，同時 -20- it 度 尺 張 紙 準 標 家 國 國

Ns 一題 公 (請先閱讀背面之注意事 4 •項再填· 裝— :寫本頁) 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印f 575420 Μ --------β7 五、發明説明（18 ) ——一™ -- 攪拌1 8小時。將反應液減壓濃縮，在殘渣中加入己烷： 甲醇：水（10 : 7 : 3，1〇〇〇毫升）之混合液，以飽和氯化銨 水溶液洗淨。水層以己烷（500毫升）萃取，將全部之有機 層合併，以無水硫酸鎂乾燥後，減壓濃縮，得到G3之粗 生成物。以上產物不需精製，即用於下一步驟。產量Mg 公克（98% )。分析用樣本藉以己烷：醋酸乙酯（9 :丨）爲溶 出溶媒之矽凝膠層析法精製。 FDMS m/z 598M+; iH-NMR (500MHz，CDC13) J 7.21-7 45 (15H，m)，5.48-5.59 (2H，m)，4.91 (0.7H，t，J=7.3Hz)，4.44 (0.3H，t，J=7.3 Hz)，4.26 (0.3H，dd，J=4.3, 7.3Hz)，4.21 (〇·7Η， dd，J=4.3, 6·7Ηζ)，3·7 (0.7H，m)，3·69 (0.3H，m)，3.24 (0·3Η， dd，J=4.9，9·8Ηζ)，3·17 (0.7H，dd，J=4.9，9·8Ηζ)，3.09-3.14 [1H，（3.11，dd，J=4.9, 9·2Ηζ)，H16bE交疊]，1·75·2·03 (2H，m)， 1.49 (3H，S)，1.39及 1·38 (3H，各s)，1.21-1.34 (20H，m)，0.88 (3H，t，J=6.7Hz)。 (4) 化合物G4之合成 在化合物G3 ( 338公克，約565毫莫耳）之二氣甲烷溶液 ( 1500毫升）中加入吡啶（5〇〇毫升），然後滴入甲磺醯氯 (49毫升，633毫莫耳）並在31 °C攪拌24小時。滴入乙醇 (4 0毫升），在室溫下攪拌1小時。減壓濃縮後，在殘渣中 加入己烷：甲醇··水（1〇 ·· 7 ·· 3，1〇〇〇毫升）之混合液而分 層。水層以己烷（200毫升）萃取3回，將全部之有機層合 併，以無水硫酸鎂乾燥後，減壓濃縮，得到G4之粗生成 物。以上產物不需精製，即用於下一步驟。產量3 63公克 _ -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公i ) -—-0-¾衣------1T------9 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局员工消费合作社印裝 575420 A7 ----- B7 五、發明説明（19 ) (95% )。分析用樣本藉以己烷：醋酸乙酯（9 : 1 )爲溶出溶 媒之矽凝膠層析法精製。 FDMS m/z 676M+; ^-NMR (500MHz9 CDC13) ^ 7.21-7.47 (15H，m)，5.41 (〇·7Η，ddd，J=5.5, 9.2, 11.0Hz)，5.32 (0.7H，bt， J=11.0Hz)，5·22 (0.3H，bdd，J=9.2，15.0Hz)，5.02 (0.3H，dt， Jt=7.3Hz，Jd=15.〇Hz)，4.8 (0.7H，ddd，J=3.1，5.5, 7.9Hz)，4.73 (〇.7H，dd，J=5.5, 9·8Ηζ)，4.64-4.67 (0.3H，m)，4.61 (0.3H，dd， J=5.5, 9.2Hz)，4.48 (0·7Η，dd，J=5.5, 7.9Hz)，4.22 (0.3H，dd， J=5.5, 9·2Ηζ)，3.55 (0.3H，dd，J=2.4, 11.6Hz)，3·45 (0.7H，dd， J=3.2, 11.0Hz)，3.06-3.12 [4H，（3.12, s), (3.11，s)，（3.09, dd， J=3.1，11.0Hz)]，1.66-1.82 (2H，m)，1.47 及 1.46 (3H，各 s)， 1.39 (3H，s)，1.13·1·35 (20H，m)，0·88 (3H，t，J=6.8 Hz)。 (5)化合物G5之合成 化合物G4 (362公克，約536毫莫耳）之二氯甲烷溶液 ( 1500毫升）中，加入甲醇（350毫升），然後滴入濃鹽酸 (200毫升）並在室溫下攪；拌5小時。在反應液中加入碳酸 氫鈉而中和後，進行過濾。濾液經減壓濃縮，在殘渣中加 入醋酸乙酯，再以食鹽水洗淨。水層以醋酸乙酯萃取，將 全部之有機層合併，以無水硫酸鎂乾燥後，進行減壓濃 縮。再以己烷結晶化。產量161公克（自G2計，產率爲 70%) 〇 mp 66-67〇C; FDMS m/z 377 (M-H20)+; ^-NMR (500MHz? CDCI3+D2O) β 5·86 (0.3H，dt，Jt=7.3Hz，Jd=14.7Hz)，5.77 (0.7H, dt，Jt=7.3，Jd=l〇.4Hz)，5·55 (0.3H，br· dd，J=7.3, -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規枱（210X 297公# ) — 裝 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 575420 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 14·7Ηζ)，5.49 (〇·7Η，bt, J=9.8Hz)，4.91-4.97 (1H，m)，4·51 (0.7H，bt，J=9.8Hz)，4·11 (0.3H，bt，J=7.3Hz)，3.94-4.03 (2H， m)，3·67-3·73 [1H，（3.70, dd，J=3.1，6.7Hz)，（3.69, dd，J=3.1， 7.3Hz)]，3.20 及3.19 (3H，各s)，2.05-2.22 (2H，m)，1.22-1.43 (20H，m)，0.88 (3H，t，J=6.7Hz)。 (6) 化合物G6之合成 在化合物G5 ( 160公克，約405毫莫耳）之THF溶液（780 耄升）中’加入5 %飽-硫酸鋇（1 6公克），並將反應容器以 氫氣置換後，在室溫下攪拌2 0小時。將反應液以矽藻土 進行過濾，再以氯仿：甲醇（1 : i )混合液洗淨。將濾液與 洗液合併，進行減壓濃縮。殘渣以醋酸乙酯結晶化。產量 146 公克（91%)。[a ] d+12 (cl, CHCl3/MeOH=l： 1)； mp 124-126〇C; FDMS m/z 397 (M+l)+; b-NMR (500MHz，CDC13/CD30D=1:1) j 4.93-4.96 (1H，m，H2)，3.91 (1H，dd，J=6.7, 12.2Hz)，3.85 (1H， dd，J=4.9，12.2Hz)，3.54-3.60 (1H，m)，3.50 (1H，dd，J=l.8 8.5Hz)，3·19 (3H, s)，1.75-1.83 (1H，m)，1·53-1_62 (1H，m) 1.21-1.45 (24H，m)，0.89 (3H，t，J=6.7Hz)。 (7) 化合物G7之合成 在化合物G6 ( 145公克，365毫莫耳）之DMF溶液（i〇00毫 升）中，加入疊氮化鈉（47公克，730毫升）並在95 X：授掉4 小時。反應液濃縮後，在殘渣中加入醋酸乙酯（450毫升） 並用水洗。水層以醋酸乙醋再度萃取。將全部之有機層人 併，以食鹽水洗淨後，用無水硫酸鎂乾燥，再減壓濃縮， -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規掐（210X 297公f (請先閱讀背面之注意事 4 ，項再填· 裝-- :寫本頁) 、-口 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 A7 ------ B7 五、發明説明（21 ) ^- 得到G7之粗生成物。產量122公克（97%)。以上產物不需 精製，即用於下一步驟。產量126公克（9 5%)。分析用^ 本藉以己坑：醋酸乙酯（9 : i )爲溶出溶媒之矽凝膠層析法 精製。 / [a ]23D+16.5。（c0.5，CHCl3-MeOH，1:1); mp 92_93 X： · FDMS m/z 344 (M+l)+; Wnmr (500MHz，CD3〇D) d 3 91 (1H，dd，J=3.7, 11.6Hz)，3.75 (1H，dd，J=7.9, 11.6Hz)，3·49_ 3.61 (3H，m)，1.50-1.71 (2H，m), 1.22-1.46 (24H，m)，〇 9〇 (3H，t，J=6.7Hz)。 (8) 化合物G8之合成 在化合物G7 ( 121公克，約352毫莫耳）之二氯甲烷溶液 (750亳升）中加入吡啶（25〇毫升）及三苯甲基氯（124公 克，445毫莫耳），在室溫攪拌16小時。滴入乙醇（3()亳 升）滴’在室溫下攪拌3 〇分鐘後，以飽和碳酸氫鈉水溶 液、飽和氣化銨水溶液及食鹽水洗淨，然後用無水硫酸鎂 乾燥，再減壓濃縮。殘渣藉以己烷：醋酸乙酯（10 : 1 )爲 溶出溶媒之矽凝膠層析法精製。產量34 4公克（自G6計， 產率爲52%)。 [“]24d+11.9。（c0.9，CHC13)，FDMS m/z 585 M+; b-NMR (500MHz，CDC13+D20) (ί 7.24-7.61 (15H，m)，3.62-3.66 (2H， m)，3.51-3.57(2H，m)，3.42(lH，dd，J=6.0，10.4Hz)，1.23-1.56 (26H，m)，0.88 (3H，t，J=6.7Hz)。 (9) 化合物G 9之合成 在化合物G8 (33.5公克’ 57.3毫莫耳）之dMF溶液（300 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) MimJTlO X fT *-一—一 批衣------1T------ (請先閲讀背面之注意事項再填{馬本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 A7 ---------B7 五、發明説明（22 ) ——— ——一一~- 寬升）中加入60%氫化鈉（5 5公克，NaH約138毫莫耳）， 然後在室溫攪拌4 0分鐘。反應液冷卻至〇。〇，並滴入苄基 矣（1 5耄升，120耄莫耳）。慢慢升溫回到室溫，同時攪拌 1 8小時。在反應液中加入冰水（1〇〇毫升），反應停止後以 醋酸乙酯萃取。萃取液以食鹽水清洗三回，將全部之有機 層合併，用無水硫酸鎂乾燥，再減壓濃縮，得到G9之粗 生成物。以上產物不需精製，即用於下一步驟。產量42 2 公克（96%)。分析用樣本藉以己垸：醋酸乙酯（1〇〇 : J )爲 溶出溶媒之矽凝膠層析法精製。 [a] 4d+9.8 (cl.0, CHC13)? FDMS m/z 738 (M-N2)+; NMR (500MHz，CDC13) d 7.07-7.48 (25H，m)，4.57 (1H，d， J=11.6Hz)，4.44 (1H，d，J=11.6Hz)，4.41 (2H，s)，3.73-3.79 (1H，m)，3.46-3.56 (2H，m)，3·37 (1H，dd，J=8.6，10.4Hz)， 1.20-1.64 (26H，m)，0.88 (3H，t，J=6.7Hz)。 (10)化合物G10及Gil之合成 在化合物G9 (41.2公克，約54毫莫耳）之丙醇溶液 (250毫升）中加入甲醇（30毫升）、更進而加入5%鈀-碳 (4.1公克）、蟻酸銨（27.1公克，4.3莫耳）。在室溫擺拌1 6 小時後’以醋酸乙酯稀釋，用矽藻土過濾。濾液減壓濃 縮，以醋酸乙酯溶解後，再以飽和碳酸氫鈉水溶液、食鹽 水洗淨二回。將全邵之有機層合併，以無水硫酸鍰乾燥 後，再減壓濃縮，得到G10之粗生成物。產量38 9公克 (98%)。以上產物不需精製，即用於下一步驟。 在化合物G10之一氟甲fe溶液（300毫升）中加入廿六燒 _ -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4^ ( 210x79T^f 7 AWI 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 575420 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 五、發明説明（23 ) 一一 酸（22.4公克，56.5毫莫耳）及〜8(：酸鹽（126公克，64 6毫 莫耳），然後加熱回流2小時。冷卻到室溫後，減壓濃 縮。在殘渣中加入醋酸乙酯（5〇〇毫升），並以〇 5M鹽酸水 /谷液、食鹽水、飽和碳酸氫鈉水溶液及食鹽水接續洗淨。 將全部之有機層合併，以無水硫酸鎂乾燥後，再減壓濃 縮，得到G11之粗生成物。產量53 2公克（88%)。以上產 物不需精製，即用於下一步驟。分析用樣本藉以己烷··醋 酸乙酯（100 : 1 )爲溶出溶媒之矽凝膠層析法精製。 [^]2V5.3° (c0.4? CHC13); FDMS m/z 1118M+; ^-NMR (500 MHz，CDC13) d 7.20-7.38 (25H，m)，5.57 (1H，d，J=9.1Hz)， 4.80 (1H，d，J=11.6Hz)，4.48_4·50 (3H，m)，4.24-4.32 (1H，m)， 3·83 (1H，dd，J=3.0, 6·7Ηζ)，3·43_3·51 (2H，m，Hla)，3·29 (1H， dd，J=4.3, 9.8Hz)，1·98 (2H，t，J=7.3Hz)，1·28_1.60 (72H，m)， 〇·88 (6H，t，J=6.7Hz)。 (11)化合物G12之合成 在化合物Gil (52·2公克，約47毫莫耳）之二氯甲烷溶液 (180毫升）中加入甲醇（36毫升），繼而滴入1〇%鹽酸甲醇 溶液（3.0毫升）並在室溫下攪拌2小時。反應液以粉末狀碳 酸氫鈉（1 8公克）中和後，進行矽藻土過濾。殘渣以二氯 甲燒洗淨。將濾液與洗液合併，再以食鹽水洗淨，有機層 以無水硫酸鎂乾燥後，進行減壓濃縮。殘渣在丙酮中加熱 解，冷部至0C使之沉殿而精製。產量386公克（自 計，產率爲77%)。 [a]24D-29.7。（c〇.7，CHC13); mp 75-76.5 °C; FDMS m/z -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 Ox 297公釐） --------^-裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 575420 A7 -- —------------— _______一-一------- 五、發明説明（¾ ) 876M+; b-NMR (500MHz，CDC13) d 7.30-7.47 (10H，m)， 6.〇3 (1H，d，J=7.9Hz)，4.72 (1H，d，J=11.6Hz)，4.66 (1H，d， J=11.6Hz)，4.61 (1H，d，J=11.6Hz)，4.45 (1H，d，J=11.6Hz)， 4·12·4·17 (1H，m)，4.00 (1H，dt5 Jt=4.3, Jd=7.3Hz)，3.67-3.72 (2H，m)，3·61 (1H，ddd，J=4.3，8.6，11.6Hz)，1.94-2.05 (2H， m)，1.15-1.69 (72H，m)，0.88 (6H，t，J=6.1Hz)。 (12)化合物G13之合成 1 ) 將2,3,4,6-四-〇-芊基_D-吡喃型半乳糖基醋酸酯 (79.8公克）在甲苯（16〇毫升）及異丙醚（520毫升）之混合液 中溶解後，於-10〜〇°C冷卻。於其中，加入含有2·〇等量 HBr之異丙醚溶液（2.8毫莫耳/毫升，約100毫升）。在-10〜0 C擅;摔約9 0分鐘後，在反應液中注入5 %碳酸鼠納水 溶液，攪拌以將過剩之HBr中和。將全量移往分液漏斗分 液後，將水層廢棄，再以10%氯化鈉水溶液洗淨二回。減 壓丨辰縮後得到2,3，4,6-四-O-爷基-仪-D-p比喃型半乳糖基溪化 物（GalBr)之漿液。 2) 在化合物G12 (60.0公克，68.6毫莫耳）、四己基錐 溴化物（89.4公克，206毫莫耳）、分子篩4A ( 6 0公克）之甲 苯溶液（420毫升）中，加入DMF ( 140毫升），繼而加入 GalBr (約137毫莫耳）之甲苯（250毫升）溶液並在室溫攪拌 7 2小時。在反應液中加入甲醇（1 2亳升）並攪拌2小時。以 矽藻土過濾後，再經飽和碳酸氫鈉水溶液、食鹽水洗淨 後，以無水硫酸鎂乾燥，再減壓濃縮。在殘渣中加入乙 昨’攪:摔2小時以產生沉澱。所得到之沉澱物經減壓乾 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Αϋ格（2_1〇ϋ公'§] --- ϋϋ tmumm ·ϋϋ1 ϋ a—·—·— Ism m —ιϋ_— am mu mi i 、 ^ϋι·— ϋϋ i^i— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A7 ' ------ - B7 五、發明説明（25 ) — 一'~ 一—— 燥，得到乾燥粉體。其藉以己烷：醋酸乙酯（8 : 1 )爲溶出 ’各媒之矽凝膠層析法精製。產量7〇 9公克（74%)。 [^ ] 4d+18.8 (c0.9? CHCI3); mp 74-75〇C; FDMS m/z 1399 (M+l) ; !h-NMR (500MHz9 CDC13) ^ 7.21-7.37 (30H, m)? 6·!2 (1H，d，J=9.〇Hz)，4.91 (1H，d，J=11.6Hz)，4·84 (1H，d， J〜3.7Hz)，4.72-4.80 (4H，m)，4.35-4.65 (7H，m)，4.12-4.18 (阳，m)，3.99-4.05 (2H，m)，3.84-3.93 (4H，m)，3.73 (1H，dd， J〜3.7，li.OHz)，3.47-3.51 (2H，m)，3·42 (1H，dd，J=6.1， 1Hz)，1·87_1·99 (2H，m)，1·18·1·70 (72H，m)，0.88 (6H，t， J=7.4Hz)。 (13)化合物KRN7000之合成 將化合物G13 (6〇·〇公克，π;毫莫耳）加入乙醇（96〇毫 升）中使之懸浮，再在其中加入2〇%氫氧化鈀（6 〇公克）之 乙醇綠浮液。繼而加入成爲氫源之4•甲基環己跪（i2〇毫 升，93.5耄莫耳），加熱回流4小時後，過濾除去觸媒。殘 凌以加溫之乙醇洗淨。將濾液置於室溫所產生之白色沉澱 物過濾、、並減壓乾燥。將所得到之粉體懸浮於乙醇：水 (92 : 8，3.5公升）中，一邊攪拌一邊加熱溶解後，藉著置 於室溫而再度產生白色沉澱物。將沉澱物過濾，濾取之塊 體進行減壓乾燥，可得到白色粉末。產量35 〇公克 (95%) 〇 [a] d+43.6 (cl.O，吡啶）；mp 189.5-190.5 °C;陰性 FABMS m/z 857 (M-H) ; IR (cm \ KBr) 3300，2930, 2850，1640，1540, 1470, 1070; 1H-NMR (500MHz，C5D5N)d 8.47 (1H，d，J=8.5 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規枱（210X297公f ] ' ----------- -----------ΦΓ-批衣------1T----- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 575420 kl 五 、發明説明（: B7 26 經 濟 部 t ▲ 標 準 消 t 合 作 社 印 製 Ηζ)，5·58 (1H，d，J=3.7Hz)，5.27 (1H，m)，4.63-4.70 (2H m) 4^6 OH, m)? 4.52 (1H? J=6.1Hz)? 4.37-4.47 (4H? m)/4.33 ，叫，2 45 (2H，t，J=7.3Hz)，2.25-2.34 (1H，m)，m 97 ^叫，™·85 (2H，m)，i 62丄72 (m，蚧 ia]a ^ 0.88 (6H? t? J=6.7Hz) 〇 13C-NMR (125MHz, C5D5N) 173.2 (S)9 101.5 (d)5 76.7 (d)? 73.0 (d)? 72.5 (d)? 71.6 (d) 710 ⑷，70.3 ⑷，68.7 ⑴，62 7 ⑴，51 4 ⑷，％ 8 ⑴，^ * 32.1 (t)? 30.4 (t)? 30.2 (t)? 3〇.〇3 (t)? 30.00 (t)? 29.93 (t) 26.4(t)5 22,

基-(1 — 2)-“-!^；‘岣型 f ?L 之單離及揞！ 將在沖繩縣久米島海底水深15〜25米處採取之海绵康結 ，燥後之粉末447· 1公克以氯仿與甲醇之混合液萃取，將 卒取欣於減壓下濃縮，得到5128公克之萃取液。將其以 醋酸乙酯與水分溶後，將上層及中間層以無水硫酸鈉乾 燥，然後減壓濃縮，分別得到18 37公克及9料公克之部 分液。將上層所得到之部分液以1〇%甲醇水液與正己烷分 /合所得到之/酉精層，及由中間層所得到之部分液合併濃縮 後’在順向TLC上反覆進行矽凝膠管柱層析，得到169 9 耄克之單一活性成分。繼而，使用〇DS_AM管柱（YMC製 造’ 250 ¾米x 20毫米，甲醇，9〇毫升/分鐘），以逆向 HPLC精製（保持時間：3〇 3分），得到純粹之標題化合物 本紙張尺度適财關家縣（CNS ) ;------、玎-----φ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •29- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 B7 五、發明説明（27 ) (S1140B-9) 10.2 毫克。 再者，標題化合物

Chem. 1995, 1477-1481，而單離、精製。 陰性 FABMS m/z 1007 [(M-H)-]; IR; iH-NMR (500MHz， C5D5N，24 °C) β (ppm) 8·55 (1H，d，J=9.2Hz，ΝΗ)，5·60 (1H， d，J=3.7Hz，H")，5·57 (1H，d，J=3.7Hz，Hl"’），5.13 (1H，m， H2)，4.75 (1H，dd, J=3.7, 10.4Hz，H2")，4.62 (2H，m)，4.54 (4H，m)，4.25-4.47 (l〇H，m)，2.17 (2H，m)，1.99 (1H，m)，1.87 (2H，m)，1.75 (1H，m)，1.65 (2H，m)，1.12-1.49 (60H，m)，0.85 (6H，m，終端甲基）；13C NMR (125MHz，C5D5N，45°C) d (ppm) 175.5 (s，Cl’），99.5 (d，Cl"’)，98.6 (d，Cl")，76.7 (d，C2")， 76.0 (d，C3)，72.8 (d，C4)，72.6 (d，C5")，72.6 (d，C4tf)，72.5 (d，C2)，71.3 (d，C3’"），71.0 (d)，70.8 (d)，70·5 (d，C2’"），69.7 (d，C3")，68.6 (t，Cl)，62.7 (t)，62.5 (t)，51.2 (t，C2)，39.4 (t)， 35.6 (t)，33.7 (t)，32.2 (t)，30.5 (t)，30.3 (t)，30_1 (t)，30.0 (t)， 29.7 (t)，29.6 (t)，26.7 (t)，26.0 (t)，23.0 (t)，22.9 (t)，14.3 (q， 終端甲基）。 實例3 下列左欄記載之化合物，係按照右欄文獻記載之方法合 成。 化合物名______文獻名_ (2S，3R)-l-〇 -D-吡喃型半乳糖氧基)-2_ WO93/5055 十四碳醯胺基_3_十八烷醇(AGL·517) (2S，3R)-l-〇 -D_p比喃型葡萄糖氧基)-2- W094/9020 十四碳酸胺基-3-十八坑醇（AGL-563) -30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規掐（210X297公楚了 ------.--裝------訂------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 575420 A7 B7 五、發明説明（28 經濟部中央標準局負工消费合作社印裝 (2S，3R)-l-(6 -去氧吡喃型半乳糖 w〇94/9020 氧基）-2·十四碳醯胺基_3_十八烷醇 (AGL-571) (2S，3R)-l-(/? _1^吡喃型阿拉伯糖氧基）_ 2-十四碳醯胺基_3_十八燒醇(agl-577) 〇-^〇4喃型半乳糖基_(146)_〇_ D-p比喃型半乳糖基-(1 —> i)_<2S，3S，4R)_ 2-胺基-N_二十六碳酿基-ΐ，3,4·十八燒三 醇(AGL-586) 〇1-0-吡喃型半乳糖基_(1->6)-〇1-D_吡喃型葡萄糖基-(1 — 1)-(2S，3S，4R)-2-胺基-N- —十穴破酿基-1，3,4 -十八燒三 醇(AGL-584) Ο-α-D-呋喃型半乳糖基-(1 — 3)-0-α-D-吡喃型半乳糖基-(1 — O-GSJS/R)-2-胺基-N-[(R)-2-#呈基二十四碳醯基]-1，3,4_十八烷三醇（719-7) 〇·(Ν-乙醣基1胺基·2_去氧 “ -D_呋喃W094/24142 型半乳糖基-(1 — 3)·〇·[α-ϋ-吡喃型葡 萄糖基-(1 — 2)]-〇-a_D-p比喃型半乳糖 基 & — l)_(2S，3S，4R)-2_ 胺基 _N-[(R)· 2-樂基二十四碳酸基]-1，3，4_十八燒三醇 (STL-8) (2S，3S，4R)-卜（卢?比喃型半乳糖氧Bioorganic & 基）_2_二十六破酿胺基·3，‘十八祝二醇Medicinal Chemistry (AGL583) Letters，Vol· 5, No. 7, ρρ 699-704(1995) 式（1 )之化合物與上述實例記載之化合物（AGL583除外） 之對應關係，大致如表1所示。 W094/9020 W094/24142 W094/24142 W094/24142 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 31 - ( CNS ) A4^ ( 210X 297,) 575420 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ___ B7 五、發明説明（29 ) 表 1 化合物名 X R 1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 R9 KRN7 0 0 0 2 3 Η (b)Y=13 H OH OH H OH H ch2〇h AGL 5 1 7 11 Η (a)Y=13 H OH OH H OH H C Η 2 〇 H AGL56 3 11 Η (a)Y=13 H OH OH H H OH ch2〇h AGL 5 7 1 11 Η (a)Y=13 H OH OH H OH H ch3 AGL577 11 Η (a)Y=13 H OH OH H OH H H AGL 5 8 6 2 3 Η (b)Y=13 H OH OH H OH H 基(AO AGL 5 8 4 2 3 Η (b)Y=13 H OH OH H H OH 基GO S114 0 B-9 2 1 ΟΗ (b)Y=13 H 基(A) OH H OH H ch2〇h 7 19-7 2 1 〇Η (b)Y=13 H OH 基(E) H OH H ch2〇h STL - 8 2 3 ΟΗ (b)Y=13 H 基⑻ 基(F) H OH H ch9oh (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規枱（2IOX29^># y 575420 A7 B7 五、發明説明（30 ) 生物學之試驗 藥理試驗1 : ^ -糖基神經醯胺對腫瘤細胞免疫原性之效果 使用由日本SLC股份有限公司買入之C57BL/6小鼠進行 試驗。以下實驗係使用實例1所合成之KRN7000做爲具有 π -糖基神經醯胺構造之化合物之代表。再者，陰性對 照，係使用實例3所合成之具有/?·糖基神經醯胺構造之化 合物 AGL-583。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 首先，進行有關載體、KRN7000及AGL-583對腫瘤細胞 免疫原性效果之檢討。腫瘤細胞係使用小鼠Τ淋巴瘤EL-4 細胞（大曰本製藥股份有限公司），將其浮游於含有 10%FCS (牛胎兒血清）、谷胺酸及抗生物質之RPMI1640培 養基中，而於試管中進行培養。在以各個藥劑開始處理之 際，將E L - 4細胞回收，而在新鮮培養基重新接種之後立 即在試管中加入溶媒（0.1%DMSO)、KRN7000 ( 100毫微克 /毫升）及AGL-583 ( 100毫微克/毫升），並培養1日。1曰 後，將溶媒、KRN7000或AGL-583共同存在下培養之EL_ 4/V、EL-4/KRN或EL-4/583等3種類之腫瘤細胞回收，以 培養基洗淨2回之後，再度懸浮於新鮮培養基，並以每隻 小鼠5xl05個細胞之比例由尾靜脈接種至C57BL/6小鼠（8週 齡，雌性）體内。3日後，調製（1 )未進行任何接種之正常 小鼠（對照）之脾細胞、（2 )接種EL_4/V之小鼠之脾細胞、 (3)接種EL-4/KRN之小鼠之脾細胞、或（4)接種EL-4/583 之小鼠之脾細胞而各做爲載體細胞。再者，標乾細胞係使 用51Cr標記之YAC-1 (大曰本製藥股份有限公司）及EL-4 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（〇奶）八4規枱（210'乂 297公^) ' 575420 經滴部中央標率局Κ工消費合作社印製 A7 --------一 B7五、發明説明（31 ) ^ ——— - 】乳腫瘤細胞’將載體細胞及標乾細胞以2 5 : 1、5 〇 : 1及 1 〇〇 · 1之E/T比（載體/標革巴）接種於平皿上，經過4小時培 養後，使用r -計數器測定51Cr之游離量，而以下列公式算 出各個脾細胞之細胞障害活性： (實驗游離-自然游離） 細胞障害活性（％) =____ χ 1〇〇 (最大游離-自然游離） 此處，最大游離表示添加HC1培養時之Mcr游離量，自 然游離爲任何物均無添加時之5iCr游離量，而實驗游離則 各爲各個脾細胞添加時之MCr游離量。結果如圖i所示。 如圖1A中所示，接種ΕΙ^4/ν&ΕΙ^4/583之小鼠之脾細 胞對YAC-1之細胞障害活性，與未進行任何接種之健康小 叭之活性幾乎操任何變化。相對於此，接種之 小鼠之脾細胞，則顯示非常顯著之細胞障害活性。 另一方面，對EL_4而言，如圖1 b所示，雖然接種EL-4/V及EL-4/583之小鼠之脾細胞也比健康小鼠之脾細胞有 較高之細胞障害活性，但接種EL_4/KRN之小鼠之脾細胞 有更高之細胞障害活性。 由以上之結果可以判定藉由添加α ·糖基神經醯胺而培 養腫瘤細胞，可以增加腫瘤細胞之免疫原性，當將其接種 於小鼠時，可謗發非常強力之腫瘤免疫性。再者，接種 EL-4/V及EL-4/583之小鼠之脾細胞，對於EL_4之免疫作 用’只不過是謗發些許具有腫瘤特異性之抗腫瘤免疫而 已；而接種EL-4/KRN之小鼠，則不僅對EL-4，且對屬於 NK感受性細胞之γΑα!，亦謗發非常強烈之腫瘤免疫 •34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規招Τ 2】ΟΧ2ϋ>] 一.，·—- (請先閲讀背面之注意事 4 •項再填· 裝— :寫本頁) 、1Τ # 375420 kl --------— B7 五、發明説明（32 ) ——— - 性。因此，其不僅可謗發特異性之免疫，也可顯著地謗發 非特異性之免疫。 星至試驗2二^經—醯胺處理之後鱼細胞對虹一^ 纪身移模型鼠之治療 由於從藥理試驗1之結果可已明白^糖基神經醯胺在增 加腫瘤細胞t免疫原性上有用，所以接下來對於「藉由接 種α -糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞，是否對原先存在之 腫瘤具抗腫瘤效果」，亦即「接種免疫原性增強之腫瘤細 胞在腫瘤療法上是否實際有效」，進行檢討。 亦即，取得一組（6隻）BDF1小鼠（6週齡，雌性）（曰本 SLC版伤有限公司），藉著將小鼠τ淋巴瘤EL_4細胞以每隻 小鼠4xl05個細胞之量從尾靜脈移植而製作罹癌小鼠，並 以移植日爲第〇日。另一方面，同日依照上述藥理試驗i 所不之方法’在重新接種於新鮮培養基之細胞中加 入落媒（0.1%DMSO)、KRN7000 ( 1〇〇 亳微克/ 毫升）或 AGL- 583 ( 1〇〇晕微克/毫升）。開始培養1日後，將溶媒、

KRN7000 或 AGL-583 共同存在下培養之EL_4/v、EL-4/KRN 經濟部中央標隼局员工消費合作社印製 或EL_4/583回收，以培養基洗淨2回後，各以每隻小鼠 1x10個細胞之量自罹癌小鼠之尾靜脈接種，進而實施各 個抗腫瘤效果之比較檢討。 再者’移植EL-4之小鼠，在以肝臟爲主之臟器形成腫 瘤，使得小鼠在3 0日左右死亡。因此，藉觀察罹癌宿主 之生存期間而判定抗腫瘤效果。結果如圖2所示。 如圖2所示，將用溶媒或a(jL-583刺激之腫瘤細胞接種 -35- 本紙張尺度適用中關家標準（CNS) 575420 kl 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 ___ B7 五、發明説明（33 ) 一 於罹癌小鼠之組，與只移植腫瘤之對照組相較，其生存期 間全部沒有延長，因此不認爲具有明顯的抗腫瘤效果。與 其相對地，接種用KRN7000刺激之腫瘤細胞之組，其生存 期間顯著延長，且有33.0%小鼠長期存活。 由以上之結果，可知以溶媒或具有0 _糖基神經醯胺構 造之化合物或AGL-583處理之腫瘤細胞應用於腫瘤療法， 全部得不到效果，相對地，添加具有❹_糖基神經酸胺構 k之化合物之KRNTOOO而培養之腫瘤細胞應用於腫瘤療 法，可以得到顯著之抗腫瘤效果。因此，可明白經^ _糖 基神經醯胺處理之腫瘤細胞在腫瘤療法上有效。 藥理試驗3 :經α -糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞對b 16 黑色素瘤肺轉移模型鼠之治療效果 更且，將藥理試驗2以外之腫瘤細胞Β16黑色素瘤（大日 本製藥股份有限公司）以^ -糖基神經醯胺處理，並檢討此 腫瘤細胞在腫瘤療法上是否有效。 亦即，取一組（6隻）BDF1小鼠（6週齡，雌性），藉由將 小鼠Β16黑色素瘤細胞以每隻小鼠4x1 〇5個細胞之量從尾靜 脈移植而製作罹癌小鼠，並以移植日爲第〇日。又依照藥 理試驗2，同日在試管中加入溶媒1〇/〇DMSO)或RN7000 (100¾微克/ ¾升），而開始B16之培養。第1日後，將溶媒或KRN7000共同存在下培養1日之B16/V、或B16/KRN 回收，以培養基洗淨2回後，由上述罹癌小鼠之尾靜脈以 每隻小鼠lxlO5個細胞之量接種，再比較各個之抗腫瘤效 果0 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) ( 210X297^17 (請先閱讀背面之注意事 4 項再填· 裝— :寫本頁) 、-口 575420 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ____________β7五、發明説明（34 ) 再者，移植B16之小鼠在肺部形成腫瘤，以致最後在3 〇 日至6 0日死亡。因此，藉觀察罹癌宿主之生存期間而判 定抗腫瘤效果。結果如圖3所示。 如圖3所示，以B16/V接種之組，與只移植腫瘤之對照 組相較，與其説完全沒有抗腫瘤效果，倒不如説其生存期 間反而有比對照組縮短之傾向。與其相對地，以B16/KRN 接種之组’具有顯著之抗腫瘤效果’且至腫瘤移植後7 〇 曰爲止有半數（50%)小鼠存活下來。 由以上之結果，可知使用藥理試驗2以外腫瘤細胞之場 合’以α -糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞接種可得到顯著 之抗腫瘤效果。因此’可判定經“ _糖基神經醯胺處理之 腫瘤細胞在腫瘤療法上有效。 藥理試驗4 :經α -糖基神經醯胺對於腫瘤細胞之致腫瘤 性之效果 由藥理試驗2及3之結果，可知經α -糖基神經龜胺處理 之腫瘤細胞對罹癌小鼠發揮抗腫瘤效果。在通常之腫瘤療 法中’藉由放射線照射等處置使增殖能力消失後再接種爲 常法，否則的話，必須先考慮到接種之癌疫苗本身是否會 形成腫瘤。實際上，藥理試驗3之結果顯示以經溶媒處理 後之腫瘤細胞接種之小鼠之生存期間，只有極微小之變 化’甚至顯示縮短之傾向。與其相對地，以^糖基神經 酿胺處理之腫瘤細胞不只使生存期間延長，且確認得到完 全治癒程度之效果。由此事看來，雖然經^糖基神經醯 胺處理之腫瘤細胞，縱使未經放射線照射等處置使增殖能 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNs ) A4規格（210X 297公f ) ~ 一'— -- (請先閲讀背面之注意事 4 項再填、 裝— :寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 A7 ------- B7 __ 五、發明説明（35 ) 力消失，也有做爲癌疫苗之可能，但仍有必要對其腫瘤形 成能力（致腫瘤性）進行確認。因此進行有關α _糖基神經 酉盈胺對各種小鼠腫瘤之致腫瘤性影響之檢討。 亦即，選取來自C57BL/6小鼠腫瘤之鼠Β16黑色素瘤細 胞（大日本製藥股份有限公司）、小鼠τ淋巴瘤EL_4細胞 (大曰本製藥股份有限公司）、及小鼠肺癌之路易士肺癌細 胞（大日本製藥股份有限公司）等3種腫瘤細胞，與來自 B AL/c小鼠腫瘤之小鼠大腸癌c〇1〇n26細胞（財團法人癌症 研究會）、小鼠白血病LUIO細胞（財團法人癌症研究會）、 及小鼠纖維肉瘤Metha A細胞（財團法人癌症研究會）等總 計6種腫瘤細胞，依照前述藥理試驗，加入溶媒 (0.1%DMSO)或RN7000 ( 1〇〇毫微克/毫升）、或不加入任 何物’進行1日之培養。將各個腫瘤細胞以培養基洗淨2 回之後’再度懸浮於新鮮培養基，而經由同系小鼠之尾靜 脈移植。關於B16、EL-4及LLC，各係以每隻小鼠5xl〇5個 細胞數、每隻小鼠1x1 〇5個細胞數及每隻小鼠5xl05個細胞 之量移植於C57BL/6小鼠（9週齡，雌性），而關於

Colon26、Meth A及L1210，各係以每隻小鼠2xl06個細 胞、每隻小鼠1x1 〇5個細胞及每隻小鼠5χ105個細胞之量移 植於BALB/c小鼠（9週齡，雌性）。 由尾靜脈移植之各個腫瘤細胞，在以肝臟或肺臟爲主體 之臟器形成轉移結節，使得小鼠終至死亡。因此，藉由生 存期間之觀察而調查對致腫瘤性（生著率、腫瘤形成能力） 之影響。 -38 -

本紙張尺度適财關家；f轉（CNS ) Λ4¾¾ ( 210X29T^ f 'T -^1T (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 575420 A7 ---—〜·一 —_ 五、發明説明（36 ) —— ~— 如圖4所示，移植無添加（亦即只以一般培養基）培養之 腫瘤細胞之小鼠全部死亡，其致腫瘤性爲1〇〇%。同樣 地，、移植於溶媒存在下培養丨日之腫瘤細胞之小鼠也全部 夕匕亡，其致腫瘤性亦爲1〇〇%。與其相對地，移植於 KRN7000存在下培養1日之各個腫瘤細胞之組，4〇〜1〇〇% 之小鼠存活，且其致腫瘤性減少或消失。 從上述可知，藉著添加以KRN7〇〇〇爲代表之^糖基神經 醯胺而進行培養者，腫瘤細胞之致腫瘤性顯著降低。再 者，在其他檢討方面，進行KRN7000是否對腫瘤細胞顯示 增殖組害活性之檢討。其結果顯示在與藥理試驗4同樣的 條件下添加KRN7000而培養之腫瘤細胞，與在未添加或添 加溶媒下而培養之腫瘤細胞具有同等之增殖能力。從該事 只知本政果並非起因於對腫瘤細胞直接的細胞毒性，而係 藉由其他的作用。 像這樣，在接種經^ _糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞之 場合’縱使未藉放射線照射使增殖能力消失，仍在做爲癌 疫苗上有用。因而，若總括藥理試驗1至4之結果，可以 #忍知到藉著接種經α -糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞，接 種之腫瘤細胞本身被宿主之免疫作用完全排除之同時，經 由使宿主之免疫擔當細胞活化，而可以謗導對於原存在之 腫瘤之抗腫瘤免疫作用。 再者，在本檢討中，亦實施有關藥理試驗1至3所用之 腫瘤細胞以外者之檢討，藉著用^ _糖基神經醯胺處理， 顯然全部腫瘤細胞之致腫瘤性減少及降低。用從-糖基神 ___-39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) ( 21 ο X 297^ΪΤ~ ' ' — ----;--.I-0-¾衣------IT----- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 575420 A7 ____ B7 五、發明説明（37 ) ~ ^^- 經醯胺處理之B16及EL-4之治療效果被認爲與其之致腫瘤 性低密切相關，B16及EL-4以外之腫瘤細胞亦被認爲可能 應用在腫瘤療法上。 毯^驗5 :經仪-糖基#醯胺复里、且以放射笔腫 瘤細胞對B16黑色素瘤肺轉移模望鼠之治療效果 由藥理試驗2〜4之結果可知’經q _糖基神經酸胺處理之 腫瘤細胞，雖未藉由放射線照射或化學療法藥劑等之處冒 使其死滅，仍可做爲癌疫苗。不過，在通常之腫瘤療法 中，使用以放射線照射而使之死滅之較安全癌疫苗係常 法。所以此處對於經從糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞於 放射線照射後被接種於罹癌小鼠之場合，進行治療效果之 檢討。 經濟、邵中央標準局員工消費合作社印製 取一組（7隻）C57BL/6小鼠（9週齡，雌性），藉由將小鼠 Β16黑色素瘤細胞以每隻小鼠5χ1〇5個細胞之量由尾靜脈移 植而製作罹癌小鼠，並以此日爲第〇曰。又依照藥理試驗 4，同日將Β16細胞重新接種於新鮮培養基，並在試管中 加入溶媒（0.1%DMSO)或RN7000 ( 1〇〇毫微克/毫升），而 開始培養。第1日後，將溶媒或KRN7000共同存在下培養 1日之B16/V或B16/KRN回收，以PBS(鱗酸緩衝食鹽水） 洗淨2回。然後，將所得到之細胞區分爲200Gy放射線照 射組與未照射組等2組，從上述罹癌小鼠之尾靜脈以每隻 小鼠lxlO5個細胞之量接種，再比較各個之抗腫瘤效果。 如圖5所示，以B16/V接種之組，無論有無放射線照 射，與只移植腫瘤之對照組相較，被認爲完全沒有抗腫瘤 __-40- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) ( 210X297^#Ί " 575420 A7 五 、發明説明（38 效果。另一方面，以B16/KRN接種之組，無論有無放射線 照射，皆被認爲有顯著之抗腫瘤效果，且至移植腫瘤後 5 〇日止，依然有60〜70%小鼠存活。 由以上之結果可知，與藥理試驗2及3所示之對α _糖基 神經醯胺處理之腫瘤細胞不實施放射線照射之場合一樣， 實施放射線照射之場合亦可得到顯著之抗腫瘤效果。因 此’可判定對於經[糖基神經醯胺處理之腫瘤細胞，增 加放射線照射等處理可更爲安全地應用在腫瘤療法上。 .--ΐ衣------1Τ------Am. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) 規将（210Χ 297公釐）

Claims (1)

1. 575420 弟〇87115682號專利申請案 AS 中文申請專利範圍修正本(91年10月）$

   申請專利範屬 公告本J 一種腫瘤原體^染細胞之免疫原性增強用組合 物，其含有下式（I)之化合物或其鹽類者：

   "(CH2)X一CH3 .R2 OH \—/ /\ 式中： R1為H或OH ; X為21〜25中之任一^整數 R2為-CH(OH)(CH2)yCH3 (此處，Y為11R3及R6為Η， R4 及 R5 為 OH， 5中之任一整數）， R7及R8中之任一者為Η，而另—者為〇H ’ R9為選自h、ch3及CH2〇H所组成之族群中之取代基。 2.根據申請專利範圍W項之组合物，丨中式⑴之化合物 為α -D4喃㉟半乳糖氧基）_2_二十六碳酿 胺基-3,4·十八垸二醇。 3·根據申請專利範圍第1項之組合物， 切其係應用於腫瘤細 胞之免疫原性之增強。 4. ^據中請專利範圍第丨項之组合物，其㈣用於試管 中。 5·根據申請專利範圍第1項之組合物， 刃其係應用於腫瘤療 _ 1 "* 本紙張尺度適G ®國家標準(CNS) A4規格(21GX 297公爱） 575420 A8 B8 C8 六、申請專利範圍 法所用腫瘤細胞之製造。 6· 一種腫瘤細胞或病原體感染細胞之免疫原性增強方法， 其包含將腫瘤細胞或病原體感染細胞與下列之式（I)化 合物或其鹽類在試管中接觸：

   式中： R1為Η或OH ; X為21〜25中之任一整數； R2為-CH(OH)(CH2)YCH3 (此處，Y為11〜15中之任一整數）， R3及R6為Η， R4及 R5為 OH， R7及R8中之任一者為Η，另一者為〇h， R9為選自Η、CH3及CH2〇H所組成族群中之取代基。 7·根據申請專利範圍第6項之方法，#中該細胞為腫瘤細 胞。 8. —種免疫原性增強之腫瘤細胞或病原體感染細胞之製造 方法，具係將腫瘤細胞或病原體感染細胞與下列式（1) 化合物或其鹽類在試管中接觸者。 -2 -

   575420 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

   式中： R1為Η或OH ; X為21〜25中之任一整數； R2為-CH(OH)(CH2)yCH3 (此處，Y為11〜15中之任一整數）， R3及R6為Η， R4 及 R5 為 OH， R7及R8中之任一者為Η，另一者為oh， R為選自Η、CH3及CHAU所組成族群中之取代基。 9·根據申請專利範圍第8項之細胞之製造方法，其中該細 胞為腫瘤細胞。. 1〇· — ·種治療以腫瘤細胞或病原體感染細胞為起因之疾病之 醫藥組合物注射劑，其包含有效量之申請專利範圍第8 項之製造方法所製得之細胞。 11· 一種腫瘤治療用醫藥組合物注射劑，其包含有效量之申 請專利範圍第9項之製造方法所製得之細胞。