WO1999015627A1 - Composition a base de glycosylceramide alpha pouvant potentialiser l'immunogenicite cellulaire - Google Patents

Composition a base de glycosylceramide alpha pouvant potentialiser l'immunogenicite cellulaire Download PDF

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WO1999015627A1
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tumor
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cells
cell
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PCT/JP1998/004249
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Kazuhiro Motoki
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Kirin Beer Kabushiki Kaisha
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Definitions

  • the present invention relates to a method for enhancing the immunogenicity of tumor cells and pathogen-infected cells with a compound having a glycosylceramide structure, and more particularly to a tumor therapy using a tumor cell with enhanced immunogenicity.
  • tumor cells are unlikely to be foreign to living organisms, such as bacteria, and have low immunogenicity because they are cells that are originally generated by transformation from host cells. Therefore, it was clarified that the expected effect was not obtained, and only a small effect was observed only for relatively immunogenic cancer types such as melanoma and kidney cancer (Mullen, CA et al.). al., in Cancer Cb emot erapy and Biological Response Modifiers, eds. Pinedo, HM et al., (Elsevier Science B, I), pp 285-294 (1996)).
  • the present inventor has now concluded that tumor cells cultured in vitro in a medium containing a compound having a glycosylceramide structure have high and immunogenic properties. Irradiation of these cells with tumor cells gives a remarkable tumor effect when administered to tumor-bearing animals, and these tumor cells have lost tumorigenicity, so they are safe in tumor therapy. I found it to be excellent.
  • the present invention is based on this finding.
  • the present invention relates to a composition for enhancing the immunogenicity of tumor cells, which can easily prepare tumor cells effective for tumor therapy, and a pathogen-infected cell, which can easily prepare pathogen-infected cells effective for treating infectious diseases, etc.
  • composition for enhancing cell immunogenicity comprises a compound of the following formula (I) or a salt or solvate thereof:
  • R 1 is H or 0 H
  • X is an integer between 7 and 27,
  • R is a substituent selected from the group consisting of the following (a) to (e) (where Y is any integer from 5 to 17); (a) -CH 2 (CH 2 ) y CH 3
  • R 4 is H, ⁇ H, NH 9 , NHCOCH, or the following groups (A) to (D)
  • Shaku 5 is ⁇ ⁇ 1, or the following groups (E) and (F): H 3
  • R 7 is, 0H or down saying ⁇ (A) ⁇ (D) :
  • R 9 is H, CH, CH 2 OH, or the following groups (A ′) to (D ′):
  • R 4 is H, 0H, NH 0 , NHCOCH, or the following groups (A) to (D)
  • R 8 is OH or the following groups (A) to (D)
  • R 9 is H, CH 3 , CH 2 ⁇ H or the following group (A *) to (D ′
  • FIG. 1 shows the effect of a-glycosylceramide on the immunogenicity of tumor cells.
  • the immunogenicity was determined by using the cytotoxic activity of mouse splenocytes as an index.
  • ⁇ Control
  • Parable EL-4ZV
  • ⁇ EL-4ZKRN
  • ⁇ EL-4Z583.
  • FIG. 2 shows the effect of glycosylceramide-treated tumor cells on EL-4 liver metastasis model mice.
  • ⁇ Control
  • ⁇ EL—4 / V
  • ⁇ EL-4 / K RN
  • ⁇ EL-4 / 583 0
  • FIG. 3 shows the effect of ⁇ -glycosylceramide-treated tumor cells on B16 melanoma lung metastasis model mice.
  • ⁇ Control
  • ⁇ ⁇ 16ZV
  • ⁇ B16 / KRN.
  • Figure 4 shows the effect of -zaricosylceramide on tumorigenicity of tumor cells.
  • ⁇ untreated tumor cells
  • ⁇ tumor cells treated with vehicle
  • ⁇ tumor cells treated with KRN 7000.
  • FIG. 5 shows the effect of -glycosylceramide-treated irradiated and unirradiated tumor cells on the B16 lung metastasis model.
  • ⁇ Control
  • ⁇ No irradiation B 16ZV
  • ⁇ Irradiation B 16 / V
  • ⁇ No irradiation B 16ZK
  • ⁇ Irradiation ⁇ 16 ⁇ .
  • FIG. 6 is a schematic diagram showing a synthetic reaction route of a typical example (KR N7000) of an a-glycosylceramide compound used in the present invention.
  • pyr is pyridine
  • Br PP h 3 (CH 9 ) ⁇ CH 3 is tridecantrifenyl phosphonium bromide
  • n—Bu L i is n-butyl lithium
  • M s C 1 is methane chloride.
  • Sulfonyl, BnBr represents benzyl bromide
  • 1-PrOH represents propyl alcohol.
  • FIG. 7 is a schematic diagram showing the synthesis reaction route following FIG.
  • WS C—HC 1 is 1-ethyl-3- (3 ′)-dimethylaminopro Pill) monocarposimid.
  • Hydrochloride, MS 4A is molecular sieves 4A, and Hex4NBr is tetrahexylammonium bromide.
  • FIG. 8 shows the Eich formula of the compounds of Examples 1-3.
  • FIG. 9 shows the chemical formulas of the compounds of Examples 1-3. This is a continuation of Figure 8.
  • X in the ceramide moiety is preferably an integer of 11 to 25.
  • Y in R 2 is preferably an integer of 9 to 17, more preferably 11 to 15.
  • X is an integer of 21 to 25, and 1 ⁇ 2 is a substituent (1 :) (where Y is 11 to 15) It is a compound showing.
  • R to R 9 in the sugar moiety of formula (I) is R 3 and R are preferably H, and R 4 is ⁇ or any of the substituents of groups ( ⁇ ) to (D); 15 represents 0 £ 1 or a substituent of the group ( ⁇ ) or (F), and R 7 and R 8 represent either ⁇ or (, respectively, provided that both R 7 and R 8 are R 9 is a compound wherein R 9 represents CH 2 ⁇ H, CH, ⁇ , or any of the substituents of groups ( ⁇ ′) to (D ′).
  • R 3 and R 6 are ⁇
  • R 4 and R ⁇ are ⁇
  • R ′ and R 8 each represent either ⁇ ⁇ ⁇ or ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ (provided that R 7 and R 8 Both do not represent the same group)
  • R 9 represents CH 2 ⁇ H or a substituent of any of the groups ( ⁇ ′) to (D ′); and
  • R 3 , R 0 and R 8 is H, R 4, R J and R is OH, and include compounds wherein R 9 is CH 0 0H.
  • Preferred examples of the compound of the formula (I) include:
  • X is an integer from 21 to 25,
  • R 2 is a substituent (b), wherein Y is an integer of 11 to 15,
  • R t3 and R 6 are H
  • R 4 is 0 ⁇ 1 or a group selected from the group consisting of the groups (A) to (D);
  • R 5 is OH or a group selected from the group consisting of the groups (E) and (F) ,
  • R ′ and R 0 are each H or OH, provided that they do not represent the same group,
  • R 9 is CH 2 OH or a group selected from the group consisting of groups ( ⁇ ′) to (D ′),
  • X is an integer from 21 to 25,
  • R 2 is a substituent (b) wherein Y is an integer from 11 to 15,
  • R 7 and R 8 are each H or OH, provided that they do not represent the same group
  • R 9 is CH 2 OH or a group selected from the group consisting of groups ( ⁇ ′) to (D ′), and
  • X is an integer from 21 to 25,
  • R 2 is a substituent (b) wherein Y is an integer from 11 to 15,
  • R 3 , R 6 , and R 8 are H
  • R 4 , R 5 , and R 7 are OH
  • R 9 is CH.
  • Preferred compounds as compounds that enhance the immunogenicity of cells are (2 S, 3 S, 4R) — 1— ( ⁇ —D—galactobyranosiloxy) 1-2-hexacosanoylamino-3,4-tatucutanediol (KRN 7000).
  • the compound of formula (I) can be a pharmaceutically acceptable non-toxic salt.
  • Salts of the compounds of formula (I) include acid addition salts, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric, sulfuric, nitric, phosphoric) or organic acids (eg, acetic, propionic, maleic, oleic acid) , Palmitic acid, cunic acid, succinic acid, tartaric acid, fumaric acid, glutamic acid, pantothenic acid, laurylsulfonic acid, methanesulfonic acid and phthalic acid).
  • inorganic acids eg, hydrochloric, sulfuric, nitric, phosphoric
  • organic acids eg, acetic, propionic, maleic, oleic acid
  • Compounds of formula (I) can be solvates (eg, hydrates).
  • the compounds of formula (I) can be prepared by any suitable method for synthesizing a-glycosylceramide.
  • a compound of the formula (I) can be prepared by synthesizing a ceramide moiety using D-lyxose as a starting material and then introducing a sugar into the ceramide.
  • a general synthesis method of such a monoglycosylceramide for example, WO 93/5055, WO 94/2168, WO 94/9020, and WO 94/24142 can be referred to.
  • the compound of the formula (I) can be isolated and purified from the natural world (such as living organisms) by column chromatography or the like.
  • compositions for enhancing immunogenicity refers to the activity of a cell to cause an immune response in a living body and the activity recognized by the immune system induced as a result.
  • the composition for enhancing immunogenicity according to the present invention is used by in vitro contact with cells intended to enhance immunogenicity.
  • the composition for enhancing immunogenicity according to the present invention may be added to a cell culture medium at a final concentration of the compound of formula (I) of 0. 1 to: L000 ng Zmi (preferably 1 to L0000 ng / m1), and the cells are added for 30 minutes to 4 days (preferably, 3 hours to 2 days). ) Culturing can enhance the immunogenicity of the cells.
  • the conditions for culturing the cells and the medium used can be selected according to conventional techniques.
  • composition for enhancing cell immunogenicity according to the present invention can be added to a culture of cells intended to enhance immunogenicity in the form of a solution, suspension, or emulsion.
  • additives such as pharmaceutically acceptable carriers or diluents, specifically, solvents (eg, water, physiology: ⁇ water), solubilizers (eg, ethanol, polysorbate), Isotonizing agents, preservatives, antioxidants, excipients (eg, lactose, starch, microcrystalline cellulose, mannitol, maltose, calcium hydrogen phosphate, soft gay anhydride, calcium carbonate), binders (eg, Starch, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose, gum arabic ⁇ Stabilizers (eg, lactose, mannitol, maltose, polysorbates, macrogol, polyoxyethylene hydrogenated castor oil ), Disintegrant (eg, starch, carboxymethylcellulose cal Um), lubricants (e.g., magnesium stearate, talc, hydrogenated oil) and the like can contain.
  • solvents eg
  • glycerin, dimethylacetamide, 70% sodium lactate, surfactants, and basic substances eg, ethylenediamine, ethanolamine, sodium carbonate, arginine, medalmin, trisaminomethane) ) Can also be added.
  • tumor cells contacted with the compound of the formula (I) are administered to mice, immunity (cytotoxic activity) against the tumor cells is induced. Surprisingly, immunity (cytotoxic activity) is also induced against tumor cells other than the tumor cells (see Pharmacological Test Example 1).
  • Cells intended to enhance immunogenicity include tumor cells and pathogen-sensitive cells. These may be isolated from a patient with a tumor or infected with a pathogen, or may be artificially created in vitro.
  • Cells that are intended to enhance immunogenicity are basically melanoma, kidney cancer, uterine cancer, kidney cancer, brain tumor, glioblastoma, colon cancer, lung cancer, liver cancer, lymphoma And all carcinomas, including leukemia, fibrosarcoma, etc., with melanoma and kidney cancer being particularly preferred.
  • pathogen-infected cells examples include virus-sensitive cells.
  • pathogen includes pathogenic factors such as chlamydia, rickettsia, Listeria monocytogenes, leishmania, trivanosoma, and prion protein.
  • a method for enhancing cell immunogenicity comprising contacting a cell with a compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof.
  • the contact of the cells with the compound of formula (I) can be carried out as described above.
  • the immunogenicity-enhancing cells according to the present invention can be obtained by contacting a compound of formula (I) or a salt or solvate thereof with cells intended to enhance immunogenicity in vitro. it can. Preparation of immunogenic ⁇ strong cells can be performed according to the above conditions.
  • a cure for a disease caused by a cell including a cell obtainable by bringing the compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof into an in vitro mouth.
  • treatment is used to mean “prevention”.
  • a method for treating a disease caused by a cell which comprises administering a cell obtained by in vitro contact with a compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof. A treatment is provided.
  • the tumor can be treated, and when pathogen cells with enhanced immunogenicity are used as the active ingredient, the infectious disease can be treated. Can be treated.
  • a tumor treatment comprising a tumor cell (immunogenicity-enhanced tumor cell) obtainable by bringing a compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof into contact with an in vivo mouth.
  • a pharmaceutical composition for use is provided.
  • a method for treating a tumor which comprises administering an immunogenicity-enhanced TO cell.
  • tumor refers to cancers such as melanoma, kidney cancer, uterine cancer, kidney cancer, brain tumor, glioblastoma, colon cancer, lung cancer, liver cancer, lymphoma, leukemia, and »sarcoma. including.
  • the “pharmaceutical composition for treating tumor” includes cancer control such as cancer vaccine and cancer cell vaccine.
  • the immunogenicity-enhancing cells are obtained by any suitable route of administration, specifically, by a method such as intraperitoneal administration, subcutaneous administration, intravenous administration to a vein or artery, or local administration by injection. It can be administered. In the case of human, intravenous administration, intraarterial administration, local administration by injection, intraperitoneal or pleural administration, subcutaneous administration, It can be administered by intramuscular administration or the like. Intravenous administration is most preferred.
  • the immunogenicity-enhancing cells can be administered in the form of injections, suspensions, emulsifiers, etc. according to a conventional method, and if necessary, further enhance the immunogenicity of the cells. It may be suspended in an adjuvant such as Freund's complete adjuvant, or administered together with a substance having adjuvant activity such as BCG.
  • the pharmaceutical composition for treating tumor according to the present invention may include the pharmaceutically acceptable carriers and additives as described above.
  • the active ingredient in the pharmaceutical composition according to the present invention can be administered continuously or intermittently according to individual circumstances.
  • the specific dosage varies depending on the method of administration, patient conditions, for example, age, body weight, ij, sensitivity, administration time, concomitant medication, and the like.
  • immunogenicity-enhancing cells are preferably in the form of an att agent, which can be administered in the form of an att which has been adjusted in advance as it is, or can be administered immediately before administration by diluting it to a predetermined length with physiological saline for injection or the like. it can.
  • the immunogenicity-enhancing cells according to the present invention may be killed (or lose their fertility) by treating them with radiation or a cytotoxic agent for administration to a patient.
  • Difficult example 1 (2 S, 3 S, 4R) — 1— (a—D—galactoviranosiloxy) —2—hexacosanoylamino-1 34 1-year-old kutadecanediol (KRN700 Combination of 0)
  • Tridecanetriphenylphosphonium bromide (962 g, 1.16mo 1;
  • Example 2 0—a—D—galactoviranosyl (1—2) —0—a—D—galactopyranosyl (1—1) — (2S, 3S, 4R) —2-aminolN — [( R) —2—Hydroxytetracosanoyl ⁇ —1,3,4-octadecanetriol
  • the alcohol layer obtained by partitioning the fraction obtained from the upper layer with 10% aqueous methanol and n-hexane, and the fraction obtained from the intermediate layer were combined, concentrated, and then subjected to silica gel column chromatography. 169.9 mg of one active ingredient were obtained.
  • the product was further purified by reverse-phase HPLC using a ⁇ DS-AM column (YMC, 250 mm X 20 mm diameter, methanol, 9. Oml / min) (retention time: 30.3 min) to give the pure title compound (S1140B-9) 10.2 mg was obtained.
  • the title compound can also be isolated and purified with reference to F. Caiieri et al., Liebigs Ann. Chein. 1995, 1477-1481.
  • Pharmacological Test 1 Effect of a-Glycosylceramide on Immunogenicity of Tumor Cells Representative of compounds having c ⁇ -glycosylceramide structure tested in C57B LZ6 mice purchased from SLC Japan The KRN 7000 synthesized in Example 1 was used in the following experiments. As a negative control, AGL-583, which is a compound having a / 3-glycosylceramic structure synthesized in Example 3, was used.
  • EL-4ZV EL-4ZV
  • EL-4ZKRN EL-4 / 583
  • KRN 7000 or AGL-583 EL-4 / 583
  • C57BL / 6 mice 8-week-old, female
  • spleen cells of a healthy mouse (control) without any inoculation (2) spleen cells of a mouse inoculated with EL-4ZV, and (3) a mouse inoculated with EL-4 / KRN Of spleen cells or (4) splenocytes of mice inoculated with EL-4 / 583 were prepared as effector cells.
  • target cells YAC-1 (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) and EL-4 mouse tumor cells labeled with 5 l Cr were used, and effector cells and target cells were E / T (effector Z target).
  • mice inoculated with EL-4ZV and EL-4Z583 on YAC-1 were almost the same as the activity of healthy mice without any inoculation.
  • mouse splenocytes inoculated with EL-4ZKRN showed very significant cytotoxic activity.
  • spleen cells of EL-4 / V and EL-4 / 583 inoculated mice with EL-4 have higher cytotoxic activity than spleen cells of healthy mice.
  • spleen cells of mice inoculated with EL-4 / KRN showed even higher cytotoxic activity.
  • Pharmacological test 2 Therapeutic effect of tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide on EL-4 liver metastasis model mice
  • Pharmacological test 1 shows that a-glycosylceramide is useful for enhancing the immunogenicity of tumor cells.
  • inoculate tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide To determine whether tumor effects were observed on the tumor that originally existed, that is, whether the inoculation of tumor cells with enhanced immunogenicity was actually effective for tumor therapy (Tumor Therapy) was done.
  • BDF 1 mice (6 weeks old, female) (Japan SLC Co., Ltd.) were grouped into 6 mice, and mouse T-lymphoma EL-4 cells 4 XI 0 cell count Z mice were transplanted from the tail vein to produce tumor-bearing mice.
  • Day 0. On the other hand, on the same day, vehicle (0.1% DMS ⁇ ), KRN 7000 (100 ng / ml) were added to EL-4 cells replated on fresh medium according to the method described in pharmacological test 1 above.
  • AGL-583 (100 ng / ml) was added.
  • the EL-4ZV, EL-4ZKRN or EL-4 / 583 cultured in the presence of the vehicle, KRN7000 or AGL-583 was collected, washed twice with the medium, and then 1 ⁇ 10 5 Five cells were inoculated from the tail vein of a tumor-bearing mouse at the ratio of Z mice, and the ⁇ tumor effects of each were compared and examined.
  • mice transplanted with EL-4 tumor power is formed in organs mainly in the liver, and the mice die about 30 days ago. Therefore, the antitumor effect was determined by observing the survival time of the tumor-bearing host. The result is shown in figure 2.
  • tumor cells treated with AGL-583 which is a compound having a vehicle or a 3-glycosylceramide structure, have no effect when applied to tumor therapy, whereas -glycosylceramide has no effect.
  • a remarkable tumor effect was obtained by applying tumor cells cultured with the addition of KR N7000, a compound having a structure, to tumor therapy.
  • KR N7000 a compound having a structure
  • Pharmacological test 3 Therapeutic effect of tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide on B16 melanoma lung metastasis model mice
  • ⁇ 16 melanoma (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), a tumor cell separate from pharmacological test 2, was treated with ⁇ -glycosylceramide to examine whether these tumor cells were effective for tumor therapy. .
  • BDF1 mice (6 weeks old, female) were grouped into 6 mice, and the number of B16 melanoma cells 4 x 10 5 cells was transplanted from the tail vein to produce tumor-bearing mice. No. 0.
  • vehicle (0.1% DMS ⁇ ) or KRN 7000 (100 ng Zml) was added at the in-vitro mouth to start the culture of B16.
  • B16ZV or B16ZKRN cultured for 1 day in the presence of the vehicle or KRN7000 is collected, washed twice in the culture medium, and 1 ⁇ 10 5 cells from the tail vein of the tumor-bearing mouse Z
  • the mice were inoculated in proportions and the antitumor effects of each were compared.
  • Pharmacological test 4 Effect of ⁇ -glycosylceramide on tumorigenicity of tumor cells Based on the results of pharmacological tests 2 and 3, tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide exhibit antitumor effect on tumor-bearing mice It became clear to do. Here, in normal tumor therapy, it is usual to inoculate the cells after losing their proliferative capacity by treatment such as irradiation, or otherwise, the inoculated cancer vaccine itself may form a strong tumor. It can be considered. In fact, the results of pharmacological test 3 show that the survival time of mice inoculated with tumor cells treated with the vehicle tends to be slightly shorter and shorter.
  • tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide have been shown to have an effect that not only prolongs the survival time but also produces a completely cured case.
  • tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide are considered to be cancer pectins that can be used without losing their proliferative ability by treatment such as irradiation, etc.
  • the tumor-forming ability (tumorigenicity) It is necessary to confirm about. Therefore, the effect of —glycosylceramide on the tumorigenicity of various mouse tumors was examined.
  • mouse melanoma ⁇ ⁇ 16 cells (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), mouse ⁇ lymphoma EL-4 cells (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) and mouse lung cancer lewislungcarcin oma cells (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) and three types of tumor cells and BAL BZc mouse-derived tumor Intestinal cancer C o 1 on 26 cells (Cancer Research Foundation), mouse leukemia L 1210 cells (Cancer Research Foundation) and mouse fibrosarcoma Meth A cells (Cancer Research Foundation), a total of 6 mouse tumor types
  • the cells were cultured for 1 day with or without vehicle (0.1% DMS0) or KRN 7000 (100 ng / ml) according to the pharmacological test described above.
  • mice For the EL- 4, LLC, 5 x 10 5 cells Z mice each implanted 1 X 10 "Itoda cells / mouse, 5x1 0 5 cells / mouse C 57 in a ratio of B LZ6 (9 weeks old, female) to and, Co lon 26, Me th a , the L 1210 is, 2 x 10 ° cells Z mice each, 1 10 5 cells Z mice, 5 x 10 5 cells Z mice percentage in B AL BZC mice (9 weeks old, Female).
  • Each tumor cell transplanted from the tail vein forms a metastatic nodule in the liver, an organ mainly consisting of the lung, and ultimately death. Therefore, the effects on tumorigenicity (survival rate and tumorigenicity) were examined by observing the survival time.
  • mice transplanted with the respective tumor cells cultured without addition that is, only in the normal medium, died, and their tumorigenicity was 100%.
  • all mice transplanted with each tumor cell cultured in the presence of vehicle for one day died, and their tumorigenicity was 100%.
  • 40 to 100% of the mouse had a strong tumor, and its tumorigenicity was reduced or eliminated.
  • Pharmacological test 5 Therapeutic effect of tumor cells treated with monoglycosyl ceramide and radiated on ⁇ 16 melanoma lung metastasis model mice
  • tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide may be useful as a cancer vaccine even if they are not killed by irradiation or chemotherapy. It became clear. However, in usual tumor therapy, it is usual to use a safer tumor vaccine that has been killed by irradiation or the like. Therefore, we investigated whether a therapeutic effect could be obtained when tumor cells treated with monoglycosylceramide were inoculated into tumor-bearing mice after irradiation.
  • mice C5 7 BLZ 6 mice (9-week-old, female) were grouped into 7 mice, and mice B 16 melanoma cells 5 X 10 5 cells ⁇ This day was designated as the 0th day.
  • vehicle (0.1% DMSO) or KRN 7000 (100 ng / m 1) was added in vitro to B16 cells replated in fresh medium according to pharmacological test 4. The culture was started. On the first day, B16 / V or B16 / KRN cultured for 1 day in the presence of vehicle or KRN700 was collected and washed twice with PBS (Phosphatebufferedsalin).
  • PBS Phosphatebufferedsalin
  • the obtained cells were divided into two groups, a group irradiated with 200 Gy radiation and a group not irradiated with 200 Gy radiation, and inoculated at a ratio of 1 ⁇ 10 3 cells Z mice from the tail vein of the above-mentioned tumor-bearing mice, and the effect of each tumor was evaluated. Compared.
  • tumor cells treated with ⁇ -glycosyl ceramide were not irradiated with radiation, as was the case without irradiation. It has become clear that a remarkable antitumor effect can be obtained. Therefore, it was revealed that tumor cells treated with ⁇ -glycosylceramide could be more safely applied to tumor therapy by applying treatments such as irradiation.

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Description

明 細 書 a -グリコシルセラミ ドを含有する細胞免疫原性増強用組成物 発 明 の 背景
発明の分野
本発明は、 -グリ コシルセラミ ド構造を有する化合物による腫瘍細胞および 病原体感染細胞の免疫原性の増強法に関し、 更に詳細には、 免疫原性が増強され た腫瘍細胞を用 ゝた腫瘍療法に関する。
背景技術
化学療' ^や放射線照射により死滅させた自己あるいは非自己の腫瘍細胞を、 癌患者に接種することにより、 担癌宿主に腫瘍特異的な免疫を誘導し、 癌治療に ¾ Ϊてようといった腫瘍療法 （Tumor Therapy ) 力く、 メラノーマ （melanoma)
(Mitchell, M. S. et al., J. Clin. Oncol. , 8, 409 (1990)) 、 '腎臓癌 (Neid rt, J. A. et al. , Cancer, 46, 1128 (1980))、 卵巣癌 (Freedman, R. S. et a 1. , Gynecol. Oncol. , 29, 33 ? (1988)) 、 大腸癌 (Hoover, H. C. , Cancer, 55,
1236 (1985))等の癌患者に試されてきた。 しかしながら、 腫瘍細胞は、 細菌のよ うな生体にとつての異物とは異なり、 もともと宿主の細胞より形質転換して発生 した細胞であるがゆえに、 免疫原性が低い。 従って、 期待したほどの効果が得ら れず、 メラノ一マや腎臓癌などの比較的免疫原性の高い癌種にのみ多少の効果を 認めるにすぎないことが明らかとなった （Mullen, C. A. et al. , in Cancer Cb emot erapy and Biological Response Modif iers, eds. P i nedo, H. M. e t al., (Elsevier Science B, I ) , pp 285-294 (1996)) 。
近年になり、 生物^ 遺 工学の発展に伴い、 遺 導入が可能になる と、 遺 »導入法により癌関連抗原遺 を導入した腫瘍細胞を用 、た腫瘍療法 が試みられるようになつてきた。 すなわち、 自己あるいはそれが困難な場合は非 自己の腫瘍細胞に腫瘍関連抗原遺 »を導入し、 元の腫瘍細胞より免疫原性を高 めた腫瘍細胞を腫瘍療法に応用するといった試みがなされるようになってきた。 しかしながら、 このような試みは、 腫瘍関連抗原として同定されている抗原が極 めて少ないために、 極限られた癌種にしか実施されていないの力現状である （Co nry, R. )i , et al. , Cancer Res., 54, U64(1994))。 さらに、 担癌宿主の免疫 は、 腫瘍細胞力 <産生する因子等により著しく疲弊していること力多いために、 腫 瘍細胞の抗原性を上げただけでは、 治療効果が期待したほど得られず、 むしろ担 癌宿主側の免疫を修復することが重要であることが明らかとなつてきた。 そのた め、 現状においては、 サイトカイン遺 や、 主要組織適合抗原遺 、 costirn ulatory mo cu 1 e等を導入した細胞を接種することにより、 担癌宿主の疲弊した 免疫を改善し、 治療効果を上げようといった検討力《主に試みられている。 例えば、 IL-2 (Connor, J. et aし J. Exp. Med., 1Π, 1127(1993))、 IL-4 (Golumbek, P. T. et al. , Science, 254, 713 (1991))、 IL-6 (Porgador, A. et aし， Cance r Res., 52, 3679 (1992)) 、 IFN-g (Be 1 idegrun, A. et al. , I. Natl. Cancer Inst. , 85, 207 (1993)) 、 G -CSF (Dranof f, G. et al. , Proc. Natl. Acad. Sc i. USA, 90, 3539 (1993)) 、 IL-12 (Tahara, H. et al. , Gene Therapy, 2, 96 ( 1995))等のサイト力イン遺伝子を導入した腫瘍細胞、 あるいは MHC class IIおよ び B 7 - 1遺 を導入した腫瘍細胞 (Travis, J. et al,, Science, 259, 310 (1993 ) ; Basker, S. et al., J. Exp. Med, 181, 619 (1995)) を用いる方法が報告され ている。
このように、 遺 導入により修飾した腫瘍細胞を用いた腫瘍療法は、 現在、 世界中でその臨床応用が試みられている （Roth, J. A., et al. , I. Natl. Catice r Inst., 89, 21 (1997))。 しかし、 この方法は遺 操作力く煩雑であり （Pardol 1, D. M. , Immunol. Today, 14, 310 (1993)) 、 また、 治¾¾果を満足する十分 な遺伝子導入効率をもたらすベクターも得られておらず、 上記腫瘍療法のより一 層の改善か'求められていた（Mu 11 en, C. A. et al. , in Cancer Chemotherapy an d Biological Response Modif iers, eds, P i nedo, H. M. e t a 1. (Elsevier Sci ence B. V. ) , pp 285-294 (1996))。
ここで、 生体内には種々の糖がセラミ ドと /3結合している 5—グリコシルセラ ミ ドか'存在している (S HIK rho lm, L. e t aし， Biochem. Biophys. Acta, 280, 626 (1972) ; arlsson, K. et al. , Biochem. Biophys. Acta, 316, 317 (1973))。 一方、 グリコシルセラミ ドが顕著な免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有する こと （Morita, M. et al. , J. Med. Chem. , 38, 2176 (1995)) および ーグリコ シルセラミ ドのこれらの作用は、 グリコシルセラミ ドの作用よりもはるかに 強力であること（Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull., 18, 1487 (1995) )が知 られている。 さらに、 グリコシルセラミ ド構造を有する化合物は、 抗原 ϋ^: 細胞活性化作用を有し、 ーグリコシルセラミ ド構造を有する化合物により活性 化した抗原提示細胞を用いた抗原提示細胞療法が癌治療に極めて有用であること も知られている (Yamaguchi, Y. et al. , Oncol. Res. , 8, 399 (1997))。 また、 な一グリコシルセラミ ド構造を有する化合物は、 生体内に投与した場合に、 放射 線隨作用 (Motoki, K. et aし, Bioorg. Med. Chem. Lett., a, 2413 (1995)) 、 および血小板数や白血球数を増加させることも知られている （Motoki, . et al .' Biol. Pharm. Bull., 19, 952 (1996)) 。
し力、し、 α—グリコシルセラミ ドにより処理された腫瘍細胞が、 腫瘍療法に有 用であることはもちろんのこと、 グリコシルセラミ ドが腫瘍細胞の免疫原性 を増強するということについても、 本発明者力く知る限り報告されていない。
発 明 の 概要
本発明者は、 今般、 ひ—グリコシルセラミ ド構造を有する化合物を含有する培 地でインビトロ培養した腫瘍細胞が高 、免疫原性を有すること、 この細胞あるい はこの細胞に放射線照射したものを担癌動物に投与すると顕著な ¾ 瘍効果が得 られること、 そして、 この腫瘍細胞は、 造腫瘍性が消失しているため腫瘍療法に おいて安全性にも優れていることを見い出した。 本発明は、 かかる知見に基づく ものである。
本発明は、 腫瘍療法に有効な腫瘍細胞を簡便に調製できる腫瘍細胞の免疫原性 を増強するための組成物、 感染症等の治療に有効な病原体感染細胞を簡便に調製 できる病原体感染細胞の免疫原性を増強するための組成物、 細胞の免疫原性を増 強する方法、 α—グリコシルセラミ ドにより免疫原性が増強された細胞、 前記細 胞を含むその細胞に起因する疾患、 特に腫瘍、 の治療用医薬組成物、 前記医薬組 成物の製造のための前記細胞の使用、 および前記細胞に起因する疾患、 特に腫瘍、 の治療方法を提供することをその目的とする。
そして、 本発明による細胞免疫原性増強用組成物は、 下記式 （I ) の化合物ま たはその塩もしくは溶媒和物を含んでなるものである ：
Figure imgf000006_0001
(上記式中、
R 1は Hまたは 0 Hであり、
Xは 7〜 2 7の 、ずれかの整数であり、
R は下記 （a ) 〜 （e ) からなる群から選択される置換基であり （こ で、 Yは 5〜1 7のいずれかの整数である） 、 (a) -CH2 (CH2) yCH3
(b) 一 CH (OH) (CH2) YCH3
(c) 一 CH (OH) (CH2) YCH (CH3) 2
(d) - CH = CH (CH2) YCHつ
(e) -CH (OH) (CHo) yCH (CHつ） CH2 CH3、 そして 1 0〜1^9は下記の1)または ） のいずれかで定義される置換基である ： i) R3、 R0、 および R 8が Hのとき
R4は H、 〇H、 NH9、 NHCOCHつ、 または下記基 (A) 〜 （D)
Figure imgf000007_0001
(A) (B) (C) D) からなる群から選択される置換基であり、
尺5は〇^1、 または下記基 （E) および （F) ： H3
Figure imgf000007_0002
( E)
からなる群から選択される置換基であり、
R7は、 0Hまたは下言^ (A) 〜 （D) ：
Figure imgf000008_0001
(A) ( B) (C) ( D) からなる群から選択される置換基であり、
R9は H、 CHつ、 CH2OH、 または下記基 （A' ) ~ (D' ) ：
Figure imgf000008_0002
(A' ( Β': ( ) (D') からなる群から選択される置換基である ；
i i) R3、 R 6および R 7が Hのとき
R4は H、 0H、 NH0、 NHCOCHつ、 または下記基 （A) 〜 （D)
Figure imgf000008_0003
(A) ( B; D ' からなる群から選択される置換基であり、
R^iOH、 または下記基 (E) および （F) ： H3
Figure imgf000009_0001
(E)
からなる群から選択される置換基であり、
R8はOH、 または下記基 (A) 〜 （D)
Figure imgf000009_0002
(A) ( B C) ( D) からなる群から選択される置換基であり、
R 9は H、 CH3、 CH2〇Hまたは下記基 (A* ) 〜 （D'
Figure imgf000009_0003
(Α' ) ( Β' (〇'） D') からなる群から選択される置換基である。 ） 図面の簡単な説明
図 1は、 腫瘍細胞の免疫原性に対する a -グリコシルセラミ ドの効果を示す。 免疫原性はマウス脾細胞の細胞傷害活性を指標とした。 〇： コントロール、 譬： EL— 4ZV、 □： EL— 4ZKRN、 Δ： EL— 4Z583。
図 2は、 E L— 4肝転移モデルマウスに対する グリコシルセラミ ド処理腫 瘍細胞の効果を示す。 〇： コントロール、 ·： EL— 4/V、 □： EL-4/K RN、 Δ： EL-4/5830
図 3は、 B 16メラノーマ肺転移モデルマウスに対する α—グリコシルセラミ ド処理腫瘍細胞の効果を示す。 〇： コントロール、 ·： Β 16ZV、 □： B 16 /KRN。
図 4は、 腫瘍細胞の造腫瘍性に対する —ザリコシルセラミ ドの効果を示す。 〇：無処置の腫瘍細胞、 ·： ビヒクルで処置した腫瘍細胞、 ■： KRN 7000 で処置した腫瘍細胞。
図 5は、 B 16肺転移モデルに対する —グリコシルセラミ ド処理放射線照射 および無照射腫瘍細胞の効果を示す。 〇： コントロール、 △：放射線無照射 B 1 6ZV、 □：放射線照射 B 16/V、 ▲：放射線無照射 B 16ZK、 酾：放射線 照射 Β 16ΖΚ。
図 6は、 本発明で使用する a -グリコシルセラミ ド化合物の代表例 （K R N 7 000) の合成反応経路を示した概略図である。
反応経路中、 p y rはピリジン、 B r P P h 3 (CH9) ^ C H 3はトリデカ ントリフエニルホスホニゥムブロミ ド、 n— B u L iは n—ブチルリチウム、 M s C 1は塩化メタンスルホニル、 Bn B rは臭化ベンジル、 1— P r OHはプロ ピルアルコールを表す。
図 7は、 図 6に続く合成反応経路を示した概略図である。
反応経路中、 WS C— HC 1は 1—ェチル一3— (3' —ジメチルァミノプロ ピル） 一カルポジイミ ド.塩酸塩、 MS 4 Aはモレキュラーシーブス 4 A、 He x 4NB rはテトラへキシルアンモニゥムブロミ ドである。
図 8は、 実施例 1〜 3の化合物のィヒ学式を示す。
図 9は、 実施例 1〜 3の化合物の化学式を示す。 図 8のつづきである。
発明の具体的説明
式 （ I ) の化合物
前記式 (I) の化合物中、 セラミ ド部分の Xは、 好ましくは 11〜25の整数 である。
R2における Yは好ましくは 9〜17の整数、 より好ましくは 11~15であ る。
式 （I) のセラミ ド部分における Xおよび R 2の好ましい組み合わせは、 Xが 21〜25の整数であり、 1^2が置換基 （1:) (式中、 Yは 11〜15である） を表す化合物である。
式 （I) の糖部分における R 〜R 9の好ましい組み合わせは、 R3および R Ό力く Hを表し、 R4が ΟΗまたは基 （Α) 〜 （D) のいずれかの置換基を表し、 1 5が0£1または基 （Ε) もしくは （F) の置換基を表し、 R 7および R 8がそ れぞれ Ηまたは ΟΗのいずれかを表し （但し、 R 7および R 8の両方が同一の基 を表すことはない） 、 R9がCH2〇H、 CHつ、 Η、 または基 （Α' ) 〜 （D' ) のいずれかの置換基を表す化合物である。
更に好ましい組み合わせとしては、 R 3および R 6が Ηであり、 R4および R ϋが ΟΗであり、 R 'および R8がそれぞれ Ηまたは ΟΗのいずれかを表し （但 し、 R 7および R 8の両方が同一の基を表すことはない） 、 かつ R9が CH2〇 Hまたは基 （Α' ) 〜 （D' ) のいずれかの置換基を表す化合物、 および R3、 R 0および R 8が Hであり、 R4、 RJおよび R が OHであり、 かつ R9が C H00Hである化合物が挙げられる。 式 （I) の化合物の好ましい例としては、
Xが 21〜25の整数であり、
R2が置換基 (b) (式中、 Yは 11〜15の整数である） であり、
Rt3ぉょびR6がHでぁり、
4が0^1または基 （A) 〜 （D) からなる群から選択される基であり、 R5が OHまたは基 （E) および （F) 力、らなる群から選択される基であり、 R 'および R0がそれぞれ Hまたは OHであり （但し、 両方が同一の基を表す ことはない） 、
R9が CH2 OHまたは基 （Α' ) 〜 （D' ) からなる群から選択される基で ある化合物、
Xが 21〜25の整数であり、
R2が置換基 （b) (式中、 Yは 11〜15の整数である） であり、
1¾ ぉょび1 ^が11でぁり、
1 ぉょび1^ が0^1でぁり、
R 7および R 8がそれぞれ Hまたは OHであり （但し、 両方が同一の基を表す ことはない） 、
R9がCH2OHまたは基 （Α' ) 〜 （D' ) からなる群から選択される基で ある化合物、 および
Xが 21〜25の整数であり、
R2が置換基 （b) (式中、 Yは 11〜15の整数である） であり、
R3、 R6、 および R 8が Hであり、
R4、 R5、 および R 7が OHであり、
R 9が C H。 0 Hである化合物
が挙げられる。
細胞の免疫原性を増強する化合物として好ましい化合物は、 (2 S， 3 S, 4R) — 1— (α— D—ガラク トビラノシルォキシ） 一2—へキ サコサノィルァミノ一 3, 4—才クタデカンジオール （KRN 7000) である。 式 （I) の化合物は、 薬学上許容される非毒性塩であることができる。 式 （I) の化合物の塩としては、 酸付加塩、 例えば、 無機酸 （例えば塩酸、 硫酸、 硝酸、 リン酸） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 プロピオン酸、 マレイン酸、 ォレイン酸、 パルミチン酸、 クェン酸、 コハク酸、 酒石酸、 フマル酸、 グルタミ ン酸、 パントテン酸、 ラウリルスルホン酸、 メタンスルホン酸およびフタル酸） との塩が挙げられる。
式 （I) の化合物は溶媒和物 （例えば、 水和物） であることができる。
式 （I) の化合物は、 a—グリコシルセラミ ドを合成するための合目的的な任 意の方法により製造することができる。
まず、 D—リキソースを出発物質としてセラミ ド部分を合成し、 次いで、 この セラミ ドに糖を導入することによって、 式 （I) の化合物を調製することができ る。 このようなな一グリコシルセラミ ドの一般的な合成方法については、 例えば、 WO 93/5055号、 WO 94/2168号、 WO 94/9020号、 および WO 94/24142号を参照することができる。
また、 式 （I) の化合物は、 自然界 （生物等） からカラムクロマトグラフィー 等によって単離、 精製することもできる。
細胞免疫原性増強用組成物
式 （I) の化合物は、 細胞免疫原性の増強に有用であることが示された （薬理 試験例 1〜5) 。 ここで、 「免疫原性」 とは、 細胞が生体に免疫応答を引き起こ す活性およびその結果誘導される免疫システムにより認識される活性をいう。 本発明による免疫原性増強用組成物は、 免疫原性を増強することが意図される 細胞とインビトロで接触させることによって使用される。 例えば、 細胞の培養培 地に本発明による免疫原性増強用組成物を、 式 （I) の化合物の最終濃度が 0. 1〜： L 0 0 0 0 n g Zm i (好ましくは 1〜： L 0 0 0 n g /m 1 ) となるように 加え、 該細胞を 3 0分間〜 4日間 （好ましくは、 3時間〜 2日間） 培養すること によって、 細胞の免疫原性を増強することができる。 細胞の培養条件および使用 される培地は慣用技術に従って選択できる。
本発明による細胞免疫原性増強用組成物は、 溶液、 懸濁剤、 乳液の形態で免疫 原性を増強することが意図される細胞の培養液に添加することができる。
これらの各種溶液は、 薬学上許容される担体あるいは希釈剤等の添加剤、 具体 的には、 溶剤 （例えば、 水、 生理:^水） 、 可溶化剤 （例えば、 エタノール、 ポ リソルベート剤） 、 等張化剤、 保存剤、 抗酸化剤、 賦形剤 （例えば、 乳糖、 デン プン、 結晶セルロース、 マンニトール、 マルトース、 リン酸水素カルシウム、 軟 質無水ゲイ酸、 炭酸カルシウム） 、 結合剤 （例えば、 デンプン、 ポリビニルピロ リ ドン、 ヒ ドロキシプロピルセルロース、 ェチルセルロース、 カルボキシメチル セルロース、 アラビアゴム） ヽ 安定剤 （例えば、 乳糖、 マンニトール、 マルトー ス、 ポリソルベート類、 マクロゴール類、 ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油） 、 崩壞剤 （例えば、 デンプン、 カルボキシメチルセルロースカルシウム） 、 滑沢剤 (例えば、 ステアリン酸マグネシウム、 タルク、 硬化油） 等、 を含有することが できる。
また、 必要に応じて、 グリセリン、 ジメチルァセトアミ ド、 7 0 %乳酸ナトリ ゥム、 界面活性剤、 塩基性物質 （例えば、 エチレンジアミン、 エタノールアミン、 炭酸ナトリウム、 アルギニン、 メダルミ ン、 トリスァミノメタン） を添加するこ ともできる。
式 （I ) の化合物と接触させた腫瘍細胞をマウスに投与すると、 その腫瘍細胞 に対する免疫 （細胞傷害活性） 力誘導される。 また、 意外にも、 その腫瘍細胞以 外の腫瘍細胞に対しても免疫 （細胞傷害活性） が誘導される （薬理試験例 1参 照） 。 免疫原性を増強することが意図される細胞としては、 腫瘍細胞や病原体感 ¾田 胞が挙げられる。 これらは、 腫瘍を有する患者や病原体に感染した患者から単離 されたものであっても、 インビトロで人為的に作製されたものであってもよい。 免疫原性を増強することが意図される 細胞としては、 基本的にはメラノー マ、 腎臓癌、 子宮癌、 脬臓癌、 脳腫瘍、 神経グリア芽細胞腫、 大腸癌、 肺癌、 肝 臓癌、 リンパ腫、 白血病、 ¾維肉腫等を含むすべての癌腫が挙げられ、 特に、 メ ラノーマおよび腎臓癌が好ましい。
また、 病原体感染細胞としては、 ウィルス感 田胞が挙げられる。 なお、 ここ にいう 「病原体」 とは、 クラミジァ、 リケッチア、 リステリアモノシトゲネス、 リーシュマニア、 トリバノソーマ、 およびプリオンタンパクのような病原因子を 含む。
本発明によれば、 細胞を式 （I ) の化合物またはその塩もしくは溶媒和物と接 触させることを含む細胞免疫原性増強法が提供される。 細胞と式 （I ) の化合物 との接触は前記と同様にして実施することができる。
免疫原性増強細胞
本発明による免疫原性増強細胞は、 式 （I ) の化合物またはその塩もしくは溶 媒和物とインビトロにおいて免疫原性を増強することが意図される細胞と接触さ せることによつて得ることができる。 免疫原性增強細胞の調製は前記条件に準じ て実施することができる。
免疫原性が増強された細胞を抗原としてほ乳類に投与すると、 その細胞に対す る免疫が強力に誘導され、 飄田胞に起因する疾患を治療することができる。
従って、 本発明によれば、 式 （I ) の化合物またはその塩もしくは溶媒和物と インビト口で接触させることによって得ることができる細胞を含む、 その細胞に 起因する疾患の治 が提供される。 本明細書において、 「治療」 とは 「予防」 を含む意味で用いられるものとする。 また、 本発明によれば、 式 （I ) の化合物またはその塩もしくは溶媒和物とィ ンビトロで接触させることによつて得ることができる細胞を投与することを含む、 その細胞に起因する疾患の治療法が提供される。
有効成分として免疫原性が増強されたある種の腫瘍細胞を用いた場合、 その腫 瘍を治療することができ、 有効成分として免疫原性が増強された病原体細胞を用 いた場合、 その感染症を治療することができる。
式 （I ) の化合物によりその免疫原性力増強された腫瘍細胞を生体に投与する と、 M¾細胞に対する強い免疫が誘導され、 その結果として、 生体内の免疫系に より腫瘍が攻撃を受け、 腫瘍を退縮あるいは消滅させることができる。 本発明に よる腫瘍細胞は、 メラノーマのような免疫原性が高いとされている腫瘍のみなら ず、 Tリ ンパ腫に対しても強い免疫を誘導した （薬理試験例 2および 3参照） 。 従って、 本発明によれば、 式 （I ) の化合物またはその塩もしくは溶媒和物と インビ卜口で接触させることによつて得ることができる腫瘍細胞 （免疫原性増強 腫瘍細胞） を含む腫瘍治療用医薬組成物が提供される。
また、 本発明によれば、 免疫原性増強 TO細胞を投与することを含む、 腫瘍の 治療法が提供される。
本明細書において、 「腫瘍」 とは、 メラノーマ、 腎臓癌、 子宮癌、 脬臓癌、 脳 腫瘍、 神経グリア芽細胞腫、 大腸癌、 肺癌、 肝臓癌、 リンパ腫、 白血病、 »肉 腫等のガンを含む。
また、 本明細書において、 「腫瘍治療用医薬組成物」 とは、 ガンワクチンゃガ ン細胞ワクチンのようなガン治自を含む。
本発明において、 免疫原性増強細胞は、 合目的な任意の投与経路によって、 具 体的には、 腹腔内投与、 皮下投与、 静脈または動脈への血管内投与、 注射による 局所投与などの方法によって、 投与可能である。 また、 ヒ卜の場合には、 静脈内 投与、 動脈内投与、 注射による局所投与、 腹腔または胸腔への投与、 皮下投与、 筋肉内投与などにより投与することができる。 静脈内投与がもっとも好ましい。 本発明において、 免疫原性増強細胞は、 常法に基づいて、 注射剤、 懸濁剤、 乳 化剤等の形態で投与することができ、 必要に応じて、 細胞の免疫原性を更に増強 する目的でフロインド完全アジュバンド等のアジュバンドに懸濁するか、 あるい は B C Gのようなアジュバンド活性を有する物質と共に投与することも可能であ る。 本発明による腫瘍治療用医薬組成物は、 前記のような薬学上許容される担体 や添加剤を含むことができる。
本発明による医薬組成物における^ 効成分は、 個々の状況に応じて連続的ま たは間欠的に投与できる。 具体的な投与量は、 投与方法、 患者の諸条件、 たとえ ば、 年齢、 体重、 ij、 感受性、 投与時間、 併用薬剤などにより変化する。 例え ば、 免疫原性増麵瘍細胞の活性発現に必要な投与量は、 たとえば静脈内投与で は、 ヒト成人に対して 1日あたり 1 X 1 0 1 X 1 09細胞数 Z体重 (k g) 離である力 1 X 1 06 5 X 1 08細胞数 Z体重 (k g) 力く好ましい。 免疫 原性増強細胞は、 att剤にするのが好ましく、 あらかじめ所定 に調節された ものをそのまま投与する力、、 あるいは投与直前に注射用生理食塩水等で所定'^ に希釈し投与することができる。
本発明による免疫原性増強細胞は、 患者への投与に 5^つて放射線あるいは細 胞毒性を有する薬剤で処置することにより死滅させても （增殖能を失わせても） よい。
魏例
以下の 例により本発明を詳細に説明するが、 本発明はこれらに限定される ものではない。
化合物の合成および単離 ·精製
難例 1 (2 S, 3 S, 4R) — 1— (a— D—ガラク トビラノシルォキシ） —2—へキサコサノィルァミノ一 3 4一才クタデカンジオール （KRN700 0) の合成
表題化合物の合成工程は、 図 6および 7に示される通りである。
(1) 化合物 G 1の合成
D—リキソース （200 g、 1. 33mo 1) に塩化カルシウムで乾燥したァ セトン溶液 (3. 0L) に硫酸 (0. 5mL) を加え、 18時間室温で攪拌した。 モレキュラーシーブス 4 Aの粉末 （100 g) を加え、 反応液を中和後、 セライ ト濾過し、 残渣をアセトンで洗浄した。 濾液と洗液をあわせて'减圧濃縮し、 G1 の ffi ^物を得た。 iK»240 g (95%) 。 これ以上の精製を行わずに次のェ 程に用いた。 分析用のサンプルは、 へキサン ： アセトン （9 ·· 1) を溶出溶媒と してシリカゲルクロマトグラフィ一により精製した。
mp 76 - 78°C； FDMS m/z 191 ( + 1) 1 ； 1H-NMR (50 OMH z, CDC 13) δ 5. 45 (1 H, d, J = 1. 8Hz) , 4. 83 (1H, d d, J = 3. 7, 5. 5Hz) , 4. 64 (1 H, d, J = 6. 1 Hz) , 4. 27-4. 30 (1 H, m) , 3. 90— 3. 99 (2H, m) , 1. 48 (3H, s) , 1. 32 (3H, s) 。
(2) 化合物 G 2の合成
化合物 G 1 (239 g、 約 1. 26mmo 1) の塩化メチレン溶液 (168m
1) に、 ピリジン （10m I) 、 塩化トリチル （39. 0 g) を加え、 32°Cで 4時間攪拌した。 エタノール （8m l) を滴下し、 室温で 2時間攪拌した。 飽和 塩化アンモニゥム水溶液、 飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液、 食塩水で洗浄後、 減 圧濃縮した。 残渣は酢酸ェチルに溶解し、 0°Cに冷却して結晶化した。 収量 50 1 g (D—リキソースより 87%) 。
mp l 74-176°C ; FDMS m/z 432 M ； 1 H-NMR (50 0MHz， CD C 1 3) δ 7. 21-7. 49 (15 Η, m) , 5. 38 (1Η, d， J =2. 4Hz) , 4. 75 (1Η, d d, J =3. 7, 6. 1Hz) , 4. 59 (1H, d, J =6. 1 H z) , 4. 31—4. 35 (1H， m) , 3. 4
3 (1 H, d d, J =4. 9, 9. 8Hz) , 3. 39 (1 H, d d, J =6.
7, 9. 8Hz) ， 1. 29 (3H， s) , 1. 28 (3H， s) 。
(3) 化合物 G 3の合成
トリデカントリフエニルホスホニゥムブロミ ド （962 g、 1. 16mo 1 ；
1一ブロモトリデカン、 トリフヱニルホスフィ ンを 4. 5時間、 140°Cに加熱 して調製した） の THF溶液 （150 Om 1) に、 アルゴン雰囲気下、 n—プチ ルリチウムの 2. 5 Mへキサン溶液 (462mL ； 366 mm o 1) を 0°Cで滴 下した。 滴下終了後、 15分間攪拌し、 化合物 G2 (250 g、 579mmo 1) の THF溶液 （450m i) を滴下した。 室温まで、 徐々に温度を上げつつ 18 時間攪拌した。 反応液を減圧濃縮し、 残渣にへキサン：メタノール：水 （10 ：
7 : 3、 1000m l) の混液を加え、 飽和塩ィ匕アンモニゥム水溶液で洗浄した。 水層はへキサン （500m l) で抽出し、 すべての有機層をあわせて無水硫酸マ グネシゥムで乾燥後、 減圧濃縮し、 G3の 物を得た。 これ以上の精製を行 わずに次の工程に用いた。 収量 339 g (98%) 。 分析用のサンプルは、 へキ サン：酢酸ェチル （9 ： 1) を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーに より精製した。
FDMS m/z 598 i 1 ； 1 H-NMR (50 OMH z, CDC I 3) 07. 21-7. 45 (15H， m) ， 5. 48-5. 59 (2H, m) , 4. 91 (0. 7H, t, J = 7. 3Hz) , 4. 44 (0. 3 H, t， J =7. 3 Hz) , 4. 26 (0. 3H, d d, J =4. 3, 7. 3Hz) , 4. 21 (0. 7H, dd， J =4. 3, 6. 7Hz) , 3. 75 (0. 7 H, m) , 3. 69
(0. 3H， m) , 3. 24 (0. 3 H, d d, J =4. 9, 9. 8Hz) , 3. 17 (0. 7H, dd， J =4. 9， 9. 8Hz) ， 3. 09-3. 14 [1H,
(3. 11, dd, J =4. 9, 9. 2Hz) , H 1 b E ove r 1 apped] , 1. 7 5-2. 03 (2H, m) , 1. 49 (3H， s) , 1. 39 a n d 1. 38 (3H, e a c h s) , 1. 21— 1. 34 (2 OH, m) , 0. 88 (3H, t, J =6. 7Hz) o
(4) 化合物 G 4の合成
化合物 G 3 (338 g、 約 565 mm o l) の塩ィ匕メチレン溶液 (1500m 1) にピリジン （500m 1) を加え、 塩化メタンスルホニル （49m 1、 63 3mmo 1) を滴下し、 31°Cで 24時間攪拌した。 エタノール （40m 1) を 滴下し、 室温で 1時間攪拌した。 減圧濃縮後、 残渣にへキサン： メタノール：水 (10 : 7 : 3、 1000m l) の混液を加え、 分液した。 水層はへキサン （2 00ml) で 3回抽出し、 すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾 燥後、 減圧濃縮し、 G 4の 成物を得た。 これ以上の精製を行わずに次の工程 に用いた。 iRS363 g (95%) 。 分析用のサンプルは、 へキサン：酢酸ェチ ル （9 ： 1) を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
FDMS m/z 676M+ ； 1 H-NMR (500MH z, CDC δ 7. 21— 7. 47 (15 Η, m) , 5. 41 (0. 7 H, d d d， J =5. 5， 9. 2, 11. 0Hz) , 5. 32 (0. 7 H， b t, J = 11. 0Hz) ， 5. 22 (0. 3H， b dd, J =9. 2, 15. 0Hz) , 5. 02 (0. 3 H, d t, J t =7. 3Hz， J d =15. 0Hz) , 4. 8 (0. 7 H, d d d, J = 3. 1, 5. 5, 7. 9Hz) , 4. 73 (0. 7 H, d d， J = 5. 5, 9. 8Hz) , 4. 64 -4. 67 (0. 3 H, m) , 4. 61 (0. 3 H, d d, J =5. 5， 9. 2Hz) , 4. 48 (0. 7 H， d d, J =5. 5， 7. 9Hz) , 4. 22 (0. 3H， d d, J =5. 5, 9. 2 H z) , 3. 55 (0. 3H, dd, J =2. 4， 11. 6Hz) , 3. 45 (0. 7 H, d d, J = 3. 2, 11. 0Hz) , 3. 06— 3. 12 [4H， （3. 12， s) ， (3. 11, s) ， (3. 09， d d, J = 3. 1, 11. OH z) ] , 1. 6 6-1. 82 (2H, m) ， 1. 47 a n d 1. 46 (3H， e a c h s) , 1. 39 (3H, s) , 1. 13-1. 35 (2 OH, m) , 0. 88 (3H, t, J =6. 8 H z) o
(5) 化合物 G 5の合成
化合物 G 4 (362 g、 約 536mmo 1) の塩化メチレン溶液 （1500m 1) にメタノール （350m l) を加え、 これに濃塩酸 （200m l) を滴下し、 5 h室温で攪拌した。 反応液に炭酸水素ナトリゥムを加えて中和後、 濾過した。 濾液を'减圧濃縮し、 残渣に酢酸ェチルを加え、 ： ^水で洗浄した。 水層は酢酸ェ チルで抽出し、 すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、 減圧 濃縮した。 へキサンより結晶ィ匕した。 収量 161 g (G2より 70%) 。
m P 66 - 67°C； FDMS m/z 377 (M-H90) ÷ . 1 H-NM
R (50 OMH z, CDC 1 Q+D20) o 5. 86 (0. 3 H, d t, J . = 7. 3Hz, J d =14. 7Hz) ， 5. 77 (0. 7H， d t, J ( =7. 3, J d =10. 4Hz) , 5. 55 (0. 3 H, b r. dd, J = 7. 3, 14. 7Hz) , 5. 49 (0. 7H, b t， J =9. 8Hz) , 4. 91-4. 97
(1H, m) ， 4. 51 (0. 7 H, b t, J =9. 8Hz) , 4. 11 (0. 3H, b t, J =7. 3Hz) , 3. 94— 4. 03 (2H, m) , 3. 67- 3. 73 [1H, (3. 70, d d， J = 3. 1, 6. 7H z) , (3. 69, dd, J =3. 1, 7. 3Hz) ] , 3. 20 a n d 3. 19 (3H, e a c h s) , 2. 05 -2. 22 (2H, m) , 1. 22- 1. 43 (2 OH, m) ， 0. 88 (3H， t, J =6. 7Hz) 。
(6) 化合物 G 6の合成
化合物 G5 (160 g、 405mmo 1) の THF溶液 （780m i) に 5% パラジウム一硫酸バリゥム （16 g) を加え、 反応容器を水素ガスで置換後、 室 温にて 20時間攪拌した。 反応液をセライ ト濾過後、 クロ口ホルム：メタノール の混液 （1 ： 1) で洗浄した。 瀘液と洗液をあわせ、 減圧濃縮した。 残渣は酢酸 ェチルより結晶化した。 収量 146 g (91%) 。
[a] 23 D + 12° (c l, CHC 1 3/Me OH- 1 ： 1) ； mp 124- 126°C； FDMS m/z 397 (M+l) + ； 1H-NMR (500MH z, CDC 1 o/CD Q OD= 1 ： 1) o 4. 93— 4. 96 (1 H, m， H2) , 3. 91 (1H, d d, J = 6. 7, 12. 2Hz) , 3. 85 (1 H, d d, J =4. 9, 12. 2Hz) , 3. 54- 3. 60 (1 H, m) , 3. 50 (1 H， dd， J = 1. 8, 8. 5Hz) , 3. 19 (3H, s) , 1. 75-1. 83 (1H, m) , 1. 53 - 1. 62 (1 H, m) , 1. 21— 1. 45 (2 4H， m) , 0. 89 (3H， t , J =6. 7Hz) 。
(7) 化合物 G 7の合成
化合物 G 6 (145 g、 365mmo 1) の DMF溶液 （1000m 1) にァ ジ化ナトリウム （47 g、 730mmo l) を加え、 95 °Cで 4時間攪拌した。 反応液を濃縮し、 残渣に酢酸ェチル （450m l) を加え、 7j洗した。 水層は酢 酸ェチルで再抽出した。 すべての有機層をあわせて食塩水で洗浄後、 無水硫酸マ グネシゥムで乾燥、 '减圧濃縮し、 G 7の粗生成物を得た。 収量 122 g (97 %) 。 これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。 26 g (95%) 。 分析用のサンプルは、 へキサン：詐酸ェチル （9 ： 1) を溶出溶媒としてシリカ ゲルクロマトグラフィーにより精製した。
[a] 23 D+ 16. 5° (c 0. 5， CHC 1 3- Me OH, 1 : 1) ； mp 92 -93。C ; FDMS m/z 344 (M+l) ； 1 H-NMR (500 MHz， CD o OD) o 3. 91 (1 H, d d， J =3. 7， 11. 6Hz) , 3. 75 (1 H， d d, J = 7. 9， 11. 6Hz) , 3. 49— 3. 61 (3 H, m) ， 1. 50-1. 71 (2H, m) , 1. 22— 1. 46 (24H, m) , 0. 90 (3H, t , J =6. 7H z) o (8) 化合物 G 8の合成
化合物 G 7 (121 g、 約 3 52mmo 1 ) の塩化メチレン溶液 （750m l) にピリジン （250m l) 、 塩化トリチル （ 1 24 g、 445 mm o 1 ) を加え、 室温で 1 6時間攪拌した。 エタノール （30m l) を滴下し、 室温で 30分間攪 拌した後、 飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液、 飽和塩化アンモニゥム水溶液、 ^ . 水で洗浄後、 無水硫酸マグネシウムで乾燥、 減圧濃縮した。 残渣は、 へキサン： 酢酸ェチル （1 0 ： 1) を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより 精製した。 収量 34. 4 (06ょり 52%) 。
[a] 24 D+ 1 1. 9° (c 0. 9, CHC 1 3) . FDMS m/z 58 5M+ ； 1 H-Ni R (50 0 MH z, CDC 1 3 +D 0) o 7. 24-7. 61 (1 5 H, m) , 3. 62— 3. 66 (2 H, m) , 3. 5 1 -3. 57 (2H, m) , 3. 42 (1 H, d d, J =6. 0, 1 0. 4H z) , 1. 23 - 1. 56 (26 H, m) ， 0. 88 (3H， t, J = 6. 7H z) 。
(9) 化合物 G 9の合成
化合物 G 8 (3 3. 5 g、 5 7. 3mmo 1 ) の DMF溶液 （3 0 On ) に 60%水素化ナトリウム （5. 5 g、 N a Hとして約l 38mmo 1) を加え、 室温で 40分間攪拌した。 反応液を 0°Cに冷却し、 臭化べンジル （15m 1、 1 2 Ommo 1) を滴下した。 室温まで徐々に' をあげながら 1 8時間攪拌した。 反応液に氷水 （1 00m l ) を加えて、 反応を停止した後、 酢酸ェチルを用いて 抽出した。 抽出液は食塩水で 3回洗浄し、 すべての有機層をあわせて無水硫酸マ グネシゥムで乾燥後、 減圧濃縮し、 G9の ffi^物を得た。 これ以上の精製を行 わずに次の工程に用いた。 収量 42. 2 g (96%) 。 分析用のサンプルは、 へ キサン：酢酸ェチル （1 00 ： 1) を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフ ィーにより精製した。
[a 24 D + 9. 8° (c l. 0, CHC 1 つ） ， FDMS m/z 738 (M - N2) ' ； 1 H-NMR (500 MHz, CDC 1 3) 07. 07-7. 48 (25 H, m) , 4. 57 (1H, d, J =11. 6Hz) , 4. 44 (1 H, d, J = 11. 6Hz) , 4. 41 (2 H, s) , 3. 73— 3. 79 (1 H， m)， 3. 46 - 3. 56 (2 H, m) , 3. 37 (1 H， d d, J =8. 6, 10. 4Hz) , 1. 20 - 1. 64 (26H, m) , 0. 88 (3H, t, J =6. 7 H z) o
(10) 化合物 G 10および G 11の合成
化合物 G 9 (41. 2 g、 約 54mmo 1) の 1—プロパノール溶液 （250 m l) にメタノール （30m l) を加え、 更に 5%パラジウム炭素 （4. 1 )、 蟻酸アンモニゥム （27. l g、 4. 3mo 1) を加えた。 室温で 16時間攪拌 後、 酢酸ェチルで希釈し、 セライ ト濾過した。 瀘液を減圧濃縮し、 酢酸ェチルで 溶解後、 飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液、 食塩水で 3回洗浄し、 すべての有機層 をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、 減圧濃縮し、 G10の 物を得 た。 収量 38. 9 g (98%) 。 得られた G 10は、 これ以上の精製を行わずに 次の工程に用いた。
化合物 G 10の塩化メチレン溶液 (300m l) に、 へキサコサン酸 （22. 4 g、 56. 5mmo 1)、 WS C塩酸塩 （12. 6 g、 64, 6mmo l) を 加え、 2時間加熱還流した。 室温まで冷却後、 減圧濃縮した。 残渣に酢酸ェチル (500m l) を加え、 0. 5 M塩酸水溶液、 食塩水、 飽和炭酸水素ナトリウム 水溶液、 更に食塩水で洗浄した。 すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシゥ ムで乾燥後、 減圧濃縮し、 G 11の ffi ^物を得た。 iK»53. 2 g (88%) 。 得られた G l 1は、 これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。 分析用のサン プルは、 へキサン：酢酸ェチル （100 ： 1) を溶出溶媒としてシリカゲルクロ マトグラフィ一により精製した。
ί ] 2 D + 5. 3° (c 0. 4, CHC 1 3) ； FDMS m/z 111 8 † ； 1 H- MR (5 00 MH z, CDC 1 3) δ 7. 20 -7. 38 (2 5H, m) , 5. 57 (1 H, d, J =9. l H z) ， 4. 80 (1 H, d, J = 1 1. 6 H z) , 4. 48 -4. 50 (3 H， m) ， 4. 24— 4. 32 (1 H， m) , 3. 8 3 (1 H， d d, J = 3. 0, 6. 7 H z) , 3. 43 -3. 51 (2 H, m， H 1 a) , 3. 29 (1 H, d d, J =4. 3， 9. 8 H z) ,
I. 92 (2 H， t， J = 7. 3 H z) , 1. 28— 1. 60 (72H， m) , 0. 88 (6 H， t, J = 6. 7H z) 0
(11)化合物 Gl 2の合成
化合物 G i l (52. 2 g、 約 47mmo 1 ) の塩ィヒメチレン溶液 （1 8 0m 1) にメタノール （36m l ) を加え、 次いで 1 0%塩酸メタノール溶液 （3. Om l) を滴下し、 室温で 2時間攪拌した。 反応液は粉状の炭酸水素ナトリウム (18 g) で中和し、 セライ ト濾過した。 残渣は塩化メチレンで洗浄した。 濾液 と洗液をあわせ、 食塩水で洗浄し、 有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、 減 圧濃縮した。 残渣をアセトンに加熱溶解し、 o°cに冷却して沈殿化により精製し た。 収量 38. 6 g (G9より 77%) 。
[a] n-29. 7° (c O. 7, CHC 1 つ） ； mp 75 - 76. 5°C ； FDMS mZz 876MT ； 1 H-NMR (500 MHz, CDC 1 3) δ 7. 30 - 7. 47 (1 0 H, m) , 6. 03 (1 H, d, J =7. 9 H z) ， 4. 72 (1 H, d, J = 1 1. 6H z) , 4. 66 (1 H, d, J = 1 1. 6 H z) , 4. 61 (1 H, d, J = 1 1. 6 H z) , 4. 45 (1 H, d， J =
I I. 6H z) , 4. 12— 4. 1 7 (1 H, m) , 4. 00 (1 H, d t, J t =4. 3， J d = 7. 3 H z) , 3. 6 7- 3. 72 (2 H, m) , 3. 6 1
(1 H, d d d, J =4. 3， 8. 6， 1 1. 6H z) , 1. 94 -2. 05 (2H, m) , 1. 1 5 - 1. 69 (72 H, m) , 0. 88 (6H, t, J = 6. 1 H z) 。 (12) 化合物 Gl 3の合成
1) 2, 3, 4, 6—テトラ一 0—べンジル一D—ガラク トピラノシルァセテ ート （79. 8 g) をトルエン （160m l) およびィソプロピルエーテル （5 20m l) の混液に溶解し、 一 10〜0°Cに冷却した。 これに、 2. 0等量の H B rを含むイソプロピルエーテル溶液を加えた （2. 8mmo 、 約 10 0 m 1 ) 。 — 10〜 0 °Cで約 90分間攪拌後、 反応液に 5 %炭酸水素ナトリウム 水溶液を注ぎ、 攪拌して過剰の HB rを中和した。 全量を分液ロートに移して分 液後、 水層を廃棄し、 10%塩化ナトリゥム水溶液で 2回洗浄した。 減圧濃縮し て 2， 3, 4, 6—テトラー 0—ベンジル一 一 D—ガラク トピラノシルプロミ ド （G a 1 B r) のシロップを得た。
2) 化合物 G 12 (60. 0 g、 68. 6mmo 1 ) 、 テトラへキシルアンモ ニゥムブロミ ド （89. 4 g、 206mmo 1 ) 、 モレキュラーシーブス 4 A
(60 g) のトルエン溶液 （420m l) に、 DMF (140m l) 次いで、 G a 1 B r (約 137mmo 1) のトルエン溶液 (250m l) を力 Πえ、 室温で 7 2時間攪拌した。 反応液にメタノール （12m l) を加え、 2時間攪拌した。 セ ライト濾過後、 飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液、 食塩水で洗浄後、 無水硫酸マグ ネシゥムで乾燥し、 減圧濃縮した。 残渣にァセトニトリルを加え、 2時間攪拌し、 沈殿を得た。 得られた «を減圧乾燥し、 乾燥粉体を得た。 これをへキサン ：酢 酸ェチル （8 ： 1) を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製 した。 収量 70. 9 g (74%) o
[ ] 24 D+18. 8° (c 0. 9， CHC 1 ゥ） ； mP 74-75°C ; FD MS mZz 1399 (M+ 1) τ ； 丄 H- NMR (50 OMH z, CDC 1 ) δ 7. 21 - 7. 37 (30 H, m) , 6. 12 (1 H, d， J =9. OH z)， 4. 91 (1H, d, J = 11. 6Hz) , 4. 84 (1H, d, J =3. 7Hz) , 4. 72 -4. 80 (4H, m)， 4. 35— 4. 65 (7H, m)， 4. 12-4. 18 (1H, m) , 3. 99— 4. 05 (2 H, m) , 3. 84 —3. 93 (4H， m) , 3. 73 (1H, d d, J = 3. 7， 11. 0Hz) , 3. 47-3. 51 (2H， m) , 3. 42 (1H, d d, J =6. 1, 9. 1 Hz) , 1. 87 - 1. 99 (2H, m) , 1. 18— 1. 70 (72H， m) ， 0. 88 (6H, t, J =7. 4Hz) o
(13) 化合物 KRN 7000の合成
化合物 G 13 (60. 0 g、 42. 9mmo 1) をエタノール （960m l) に加えて懸濁させ、 これに 20%水酸化パラジウム （6. 0 g) のエタノール懸 濁液を加えた。 更に水素源となる 4—メチルシクロへキセン （120m l、 93. 5mmo 1) を加え、 4時間加熱還流した後、 濾過し、 を除いた。 残渣は加 温したエタノールで洗浄した。 濾液を室温放置することによって得た白色沈殿を 濾過、 減圧乾燥した。 得られた粉体をエタノール：水 （92 : 8、 3. 5 L) に 懸濁し、 攪拌しながら加熱溶解後、 室温放置することによって再度沈殿化した。 沈殿液を濾過し、 濾取したケーキを ffi乾燥し、 白色粉末を得た。 収量 35. 0 g (95%) 。
[ひ] 23 D + 43. 6° (c l. 0, pyridine) ； mp 189. 5 - 190. 5°C； negativeF ABMS m/z 857 (M-H) " ; I R (cm—1, KB 0 3300， 2930, 2850, 1640, 1540, 1470, 1070 1 H-NMR (500MHz, C 5 D F N) o 8. 47 (1H, d, J =8. 5 Hz) , 5. 58 (1H, d， J =3. 7Hz) , 5. 27 (1 H, m) , 4. 63 -4. 70 (2 H, m) ， 4. 56 (1H, m) , 4. 52 (1H， t, J =6. 1 H z) , 4. 37— 4. 47 (4H， m) ， 4. 33 (2H， m) , 2. 45 (2H, t, J =7. 3Hz) , 2. 25-2. 34 (1 H， m) , 1. 8 7-1. 97 (2H, m) ， 1. 78— 1. 85 (2H, m) , 1. 62— 1. 72 (1H, m) ， 1. 26 - 1. 45 (66H, m) , 0. 88 (6H, t, J =6. 7 H z) , 13C-NMR (125 MHz, C 5 D 5 N) 5173. 2
(s) , 101. 5 (d) , 76. 7 (d) , 73. 0 (d) , 72. 5 (d) , 71. 6 (d) , 71. 0 (d) , 70. 3 (d) , 68. 7 (t) , 62. 7
(t) , 51. (d) , 36. 8 (t) ， 34. 4 (t) , 32. 1 (t) , 30. 4 (t) , 30. 2 (t) , 30. 03 (t) , 30. 00 (t) ， 29. 93 (t) , 29. 87 (t) , 29. 81 (t) , 29. 76 (t) , 29. 6 (t) , 26. 5 (t) , 26. 4 (t) , 22. 9 (t) , 14. 3 (q) 。
例 2 0— a— D—ガラク トビラノシル一 （1— 2) — 0— a— D—ガラ ク トピラノシルー （1— 1) — (2 S， 3 S, 4R) — 2—ァミノ一 N— [ (R) —2—ヒ ドロキシテトラコサノィル Ί —1, 3, 4—ォクタデカントリオール
(S 1140 B-9) の単離および精製
沖緙県久米島の海底水深 15-25mで採取された海綿を、 凍結乾燥した粉末 447. 1 gをクロ口ホルムとメタノールの混液で抽出し、 抽出液を減圧下濃縮 して 51. 28 gのエキスを得た。 これを酢酸ェチルと水で分配後、 上層と中間 層を無水硫酸ナトリゥムで乾燥後、 減圧下濃縮してそれぞれ 18. 37 gと 9. 44 gのフラクションを得た。 上層より得たフラクションを 10%水性メノ夕一 ルと n—へキサンとで分配したアルコール層と、 中間層より得たフラクションを 合わせて濃縮後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィーに繰り返して順相 TLC 上単一の活性成分を 169. 9mg得た。 さらに〇DS— AMカラム （YMC製、 250mm X20mm径、 メタノール、 9. Oml/min) を用いた逆相 H P L Cで精製し (保持時間： 30. 3分） 、 純粋な表題化合物 (S1140B-9) を 10. 2mg得た。 なお、 表題化合物は、 F. Caiieri et al. , Liebigs Ann. Chein. 1995, 1477-14 81を参照し、 単離、 精製することもできる。
n e ga t i v e F ABMS m/z 1007 [ (M-H) ― ] ； I R； 1 HNMR (50 OMH z, C r D 5 N, 24°C) δ (p pm) 8. 55 (1 H, d, J =9. 2Hz, NH) , 5. 60 (1H, d, J =3. 7Hz, HI'') , 5. 57 (1H, d, J = 3. 7Hz, HI'" ) , 5. 13 (1 H, m, H2) , 4. 75 (1 H, d d, J = 3. 7, 10. 4Hz, H2") , 4. 62 (2 H, m) , 4. 54 (4H， m) , 4. 25-4. 47 (1 OH, m) , 2. 1 7 (2H, m) , 1. 99 (1 H, m) , 1, 87 (2H, m) , 1. 75 (1 H， m) , 1. 65 (2H, m) , 1. 12-1. 49 (6 OH, m) , 0. 8 5 (6H, m, t e rm i na l me t hy l) ; 1 3 C NMR (125M Hz, C 5 D 5N, 45°C) o (p pm) 175. 5 (s, C I' ) , 99. 5
(d, C I'" ) , 98. 6 (d, C I") , 76. 7 (d, C 2") , 76. 0 (d, C 3) , 72. 8 (d, C4) ， 72. 6 (d, C 5") , 72. 6
(d, C4'' ) ， 72. 5 (d， C 2) , 71. 3 (d, C 3"' ) ， 71. 0
(d) , 70. 8 (d) , 70. 5 (d, C2'" ) , 69. 7 (d, C3") , 68. 6 (t, C l) ， 62. 7 (t) , 62. 5 (t) , 51. 2 (t, C 2) , 39. 4 (t) , 35. 6 (t) , 33. 7 (t) , 32. 2 (t) , 30. 5 (t) , 30. 3 (t) , 30. 1 (t) , 30. 0 (t) ， 29. 7 (t) , 29. 6 (t) , 26. 7 (t) , 26. 0 (t) , 23. 0 (t) , 22. 9
( t ) , 14. 3 (q, t e rm i na l me t hy l) 。
難例 3
下 ¾欄に記載の化合物は、 その右欄の文献に記載の方法に従って合成した。 化合物名 文献名
(2 S, 3R) — 1— ( 一 D—ガラク トピラノシル W093/5055 ォキシ） 一2—テトラデカノィルァミノ一 3—才クタ
デカノール （AGL— 517)
(2 S, 3 R) - 1 - — D—グルコピラノシルォ WO 94/9020 キシ） 一 2—テトラデカノィルアミノー 3—ォクタデ 力ノール （AGL— 563)
(2 S, 3R) 一 1一 （6' —デォキシ一 一 D—ガ WO 94/9020 ラク トピラノシルォキシ） 一2—テトラデカノィルァ
ミノ一 3—ォクタデカノール （AGL— 571)
(2 S, 3R) — 1 - ( 3— L—ァラビノピラノシル WO 94/9020 ォキシ） 一2—テトラデカノィルアミノー 3—ォクタ
デカノール （AGL— 577)
0— α— D—ガラク トビラノシル一 （1→6) -0- W094/24142 a— D—ガラク トピラノシル一 （1— 1) - (2 S,
3 S, 4R) —2—ァミノ一 Ν—へキサコサノィルー
1, 3, 4—才クタデカントリオール （AGL— 586)
〇一 a— D—ガラク トビラノシル一 （1— 6) — 0— W094/24142 α— D—ダルコピラノシル一 （1→1) ― (2 S,
3 S, 4R) — 2—ァミノ一 Ν—へキサコサノィル一
1, 3, 4—才クタデカントリオール （AGL— 584)
0— α— D—ガラク トフラノシル一 （1— 3) —0— W094/24142 α— D—ガラク トビラノシル一 （1→1) 一 (2 S,
3 S, 4R) — 2—ァミノ一 N— [ (R) — 2—ヒ ド
口キシテトラコサノィル] 一 1, 3, 4—ォクタデカ
ントリオール （719— 7)
0- (N—ァセチル一 2—ァミノ一 2—デォキシ一 W094/24142 — D—カラク トビラノシル一 （1~ 3) —〇一 ί - D—ダルコビラノシルー （1→2) ] -O-a-D- ガラク トビラノシル一 （1— 1) - (2 S, 3 S, 4
R) — 2—ァミノ一 Ν— [ (R) —2—ヒ ドロキシテ トラコサノィル] 一 1, 3, 4—才クタデカントリオ
ール （STL— 8)
(2 S, 3 S, 4R) — 1一 （ — D—ガラク トピラ Si 00 rgani c & ノシルォキシ） 一 2—へキサコサノィルァミノ一 3, edi c i na IChemi s try 4—ォク夕デカンジオール （AGL 583) Letters, Vol.5, No,
PP 699 -704 (1995) 式 （I) の化合物と上記 例に記載の化合物 （AGL 583を除く） との対 応は、 下 §己表 1に示されるとおりである。
HOSHO HO H m (8)S ci=A(q) HO ε z 8 - Ί丄 S
EOZH H HO H (3)« HO H HO て z L- Q l L
K 02 H D K HO H HO (V)S u. ci=A(q) HO T 2 6 -80 F T T S um HO H H HO HO H ci=A(q) H ε z 8 S 1 OV し Y)S H HO H HO HO H si=A(q) H c z 98 S TOY
H H HO H HO HO H H T T
H HO HO HO H H T I τ A g i o v
HO 2Hつ HO H H HO HO H H I ΐ S 9 S 10V
H06KD H HO K HO HO H H T T i, I 910 V
H06HO H HO n HO HO H EI=A(q) H ε z 000丄 !Ή¾ d 9^7 X 3 ^ 3
2¾ o ε
6 肩 86dI7丄〕 d ム S 1/66 OM 生物学的試験
薬理試験 1 ：腫瘍細胞の免疫原性に対する a -グリコシルセラミ ドの効果 日本 S L C株式会社より購入した C 5 7 B LZ6マウスを用いて実験を行った c α—グリコシルセラミ ド構造を有する化合物の代表として、 実施例 1で合成され た KRN 7000を以下の実験に用いた。 また、 陰性対照として、 例 3で合 成された /3—グリコシルセラミ Η¾造を有する化合物である AGL— 583を用 いた。
まず、 ビヒクル、 KRN7000および AGL— 583の腫瘍細胞の免疫原性 に対する効果について検討を行った。 腫瘍細胞にはマウス Τリンパ腫 E L— 4細 胞 （大日本製薬株式会社） を用い、 1 0%F C S (ゥシ胎児血清） 、 グル夕ミン および抗生物質を含む R PiM 1 1 64 0培地に浮遊させて、 ィンビトロにて培養 を行った。 各薬剤にて処理を開始する際に、 E L— 4細胞を回収し、 新鮮な培地 に播き直した後直ぐにインビトロにてビヒクル （0. 1% DMS〇） 、 KRN 7000 (1 00 n g/m 1) 、 あるいは AGL— 583 (1 00 n g/m 1) を添加して 1日培養した。 1日後に、 ビヒクル、 KRN 7000あるいは AGL -583共存下にて培養した E L— 4ZV、 E L— 4ZKRNあるいは E L— 4 /583の 3種類の腫瘍細胞を回収し、 培地にて 2回洗浄した後に新鮮な培地に 再度懸濁し、 C 57 B L/6マウス （8週齢、 メス） に 5X 10 D細胞数/マウ スの割合で尾静脈より接種した。 その 3日後に、 （1) 何も接種しなかった健常 マウス （コントロール） の脾細胞、 (2) E L— 4ZVを接種したマウスの脾細 胞、 （3) E L— 4/KRNを接種したマウスの脾細胞、 あるいは （4) EL- 4/583を接種したマウスの脾細胞を、 それぞれエフヱクタ一細胞として調製 した。 また、 ターゲッ ト細胞には、 5lC rでラベルした YAC— 1 (大日本製薬 株式会社） および E L— 4マウス腫瘍細胞を用い、 エフェクター細胞およびター ゲッ ト細胞を E/T (エフヱクタ一 Zターゲッ ト） 比が 25 ： 1、 50 ： 1、 お よび 1 00 ： 1となるようにプレートにまき、 4時間培養後に、 51C rの遊 を 7—カウンタ一で測定し、 各々のマウス脾細胞の細胞障害活性を以下の式にて
^LUしァこ。
(実験遊離—自然遊離）
細胞障害活性 （％) = 100
(最大遊離-自然遊離）
ここで、 最大遊離は HC 1を添加して培養した時の51 C r遊離量を、 自然遊離 は何も添加しないで培養した時の51 C r遊 を、 そして、 実験遊離は各脾細胞 を添加した時の31 C r遊離量をそれぞれ示す。 結果を図 1に示す。
図 1 Aに示すように、 EL— 4ZVおよび EL— 4Z583を接種したマウス の脾細胞の Y A C― 1に対する細胞障害活性は、 何も接種しなかった健常マウス の活性とほとんど変わらなかった。 これに対し、 EL— 4ZKRNを接種したマ ウスの脾細胞は、 非常に顕著な細胞障害活性を示した。
—方、 EL— 4に対しては、 図 1 Bに示すように、 EL— 4/Vおよび EL— 4/583を接種したマウスの脾細胞でも、 健常マウスの脾細胞よりも高い細胞 障害活性が認められたが、 EL— 4/KRNを接種したマウスの脾細胞では、 更 に高い細胞障害活性が認められた。
以上の結果から、 ーグリコシルセラミ ドを添加して腫瘍細胞を培養すること により、 腫瘍細胞の免疫原性が増加する結果、 これを接種したマウスには、 非常 に強力な腫瘍免疫が誘導されること力《判明した。 また、 EL— 4ZVおよび EL — 4Z583を接種したマウスの脾細胞では、 EL— 4に対する免疫、 すなわち 腫瘍特異的な抗腫瘍免疫のみが若干誘導されていたにすぎなかったが、 E L— 4 ZKRNを接種したマウスにおいては、 E L— 4のみならず NK感受性細胞であ る YAC—1に対しても非常に強力な腫瘍免疫力 <誘導されていた。 従って、 特異 的な免疫のみならず、 非特異的な免疫も誘導されることが明らかとなつた。
薬理試験 2 ： α—グリコシルセラミ ドで処理した腫瘍細胞の E L— 4肝転移モ デルマウスに対する治療効果
薬理試験 1の結果から、 a -グリコシルセラミ ドが腫瘍細胞の免疫原性を増強 するのに有用であることが明らかとなったため、 次に、 α—グリコシルセラミ ド で処理した腫瘍細胞を接種することにより、 元から存在した腫瘍に対する ¾ 瘍 効果カヾ認められるか否か、 すなわち、 免疫原性が増強された腫瘍細胞の接種が実 際に腫瘍療法 (Tumor Therapy ) に有効か否か、 検討を行った。
すなわち、 BDF 1マウス （6週齢、 メス） （日本 S L C株式会社） を 1群 6 匹とし、 マウス Tリンパ腫 EL— 4細胞 4 X I 0 細胞数 Zマウスを尾静脈より 移植することにより担癌マウスを作製し、 移植日を第 0日目とした。 また一方で、 同日に、 上述の薬理試験 1に示した方法に準じて、 新鮮な培地に播き直した EL —4細胞に、 ビヒクル （0. 1% DMS〇）、 KRN 7000 (100 n g/ m l) . あるいは AGL— 583 (100 n g/m 1) を添加した。 培養開始 1 日後に、 ビヒクル、 KRN7000あるいは AGL— 583共存下にて培養した EL— 4ZV、 EL— 4 ZKRNあるいは EL— 4/583を回収し、 培地にて 2回洗浄した後、 それぞれ 1 X 105細胞数 Zマウスの割合で担癌マウスの尾静 脈より接種し、 各々の δΐ 瘍効果の比較検討を した。
なお、 EL— 4を移植したマウスには、 肝臓を主とした臓器に腫瘍力形成され、 マウスは 30日前後に死亡する。 従って、 担癌宿主の生存期間を観察することに より抗腫瘍効果の判定を行った。 結果を図 2に示す。
図 2に示すように、 ビヒクルあるいは AG L— 583で刺激した腫瘍細胞を担 癌マウスに接種してた群では、 腫瘍を移植しただけのコントロール群と比較して、 その生存期間は全く延長せず、 明らかな ίΐΜ瘍効果力く認められなかった。 これに 対し、 KRN 7000で刺激した腫瘍細胞を接種した群では、 その生存期間が顕 著に延長し、 33. 3%のマウス力く長期にわたり生存した。
以上の結果より、 ビヒクルあるいは3—グリコシルセラミ ド構造を有する化合 物である AGL— 583で処理した腫瘍細胞を腫瘍療法に応用しても、 全く効果 が得られないのに対し、 ーグリコシルセラミ ド構造を有する化合物である KR N7000を添加して培養した腫瘍細胞を腫瘍療法に応用することにより顕著な ¾ 瘍効果が得られた。 従って、 グリコシルセラミ ドで処理した腫瘍細胞が 腫瘍療法に有効であることが明らカ、となつた。
薬理試験 3 ： α—グリコシルセラミ ドで処理した腫瘍細胞の B16メラノ一マ 肺転移モデルマウスに対する治療効果
さらに、 薬理試験 2とは別の腫瘍細胞である Β 16メラノーマ （大日本製薬株 式会社） を、 α—グリコシルセラミ ドで処理し、 この腫瘍細胞が腫瘍療法に有効 か否か検討を行った。
すなわち、 BDF1マウス （6週齢、 メス） を 1群 6匹とし、 マウス B16メ ラノーマ細胞 4 X 105細胞数 Ζマゥスを尾静脈より移植することにより担癌マ ウスを作製し、 移植日を第 0曰目とする。 薬理試験 2に準じ、 同日よりインビト 口にてビヒクル （0. 1% DMS〇） あるいは KRN 7000 (100 n gZ ml) を添加して B 16の培養を開始した。 第 1日目にビヒクルあるいは KRN 7000共存下で 1日培養した B 16ZVあるいは B 16ZKRNを回収し、 培 地にて 2回洗浄した後、 上記担癌マウスの尾静脈より 1 X 105細胞数 Zマウス の割合で接種し、 各々の抗腫瘍効果を比較した。
なお、 B 16を移植したマウスでは、 腫瘍が肺に形成され、 最終的に 30日か ら 60日で死に至る。 従って、 その生存期間を観察することにより、 抗腫瘍効果 の判定を行つた。 結果を図 3に示す。
図 3に示すように、 B 16ZVを接種した群では、 腫瘍を移植しただけのコン トロール群と比較して、 全く ¾®瘍効果が認められず、 むしろ生存期間がコント ロール群よりも短縮する傾向が認められた。 これに対し、 B 1 6ZKRNを接種 した群では、 顕著な抗腫瘍効果が認められ、 腫瘍移植後 70日まで半数 （50%) のマウス力く生存した。
以上の結果より、 薬理試験 2とは別の腫瘍細胞を用いた場合にも、 α—グリコ シルセラミ ドで処理した腫瘍細胞を担癌マウスに接種することにより、 顕著な抗 腫瘍効果が得られることが明らかとなつた。 従って、 a—グリコシルセラミ ドで 処理した腫瘍細胞が腫瘍療法に有効であることが明らかとなった。
薬理試験 4 ：腫瘍細胞の造腫瘍性に対する α—グリコシルセラミ ドの効果 薬理試験 2および 3の結果より、 α—グリコシルセラミ ドで処理した腫瘍細胞 は、 担癌マウスに対して抗腫瘍効果を発揮することが明らかとなった。 ここで、 通常の腫瘍療法では、 放射線照射等の処置により増殖能を消失させた後に接種す るのが常法であり、 さもないと場合によっては、 接種した癌ワクチン自体力腫瘍 を形成してしまう事が考えられる。 実際、 薬理試験 3の結果では、 ビヒクルで処 理した腫瘍細胞を接種したマウスの生存期間が、 ごく僅かではあるカヾ、 短縮する 傾向を示している。 これに対し、 α—グリコシルセラミ ドで処理した腫瘍細胞で は、 生存期間が延長するだけでなく、 完治例が得られる程の効果が認められてい る。 このことから、 α—グリコシルセラミ ドで処理した腫瘍細胞は、 放射線照射 等の処置により増殖能を消失させずとも使用可能な癌ヮクチンであると考えられ る力 その腫瘍形成能 （造腫瘍性） について確認する必要がある。 そこで、 各種 マウス腫瘍の造腫瘍性に対する —グリコシルセラミ ドの影響に関する検討を実 施した。
すなわち C 57 B L/6マウス由来の腫瘍であるマウスメラノーマ Β 1 6細胞 (大日本製薬株式会社） 、 マウス Τリンパ種 E L— 4細胞 （大日本製薬株式会社） およびマゥス肺癌 l ew i s l u n g c a r c i n oma細胞 （大日本製薬 株式会社） の 3種類の腫瘍細胞と BAL BZcマウス由来の腫瘍であるマウス大 腸癌 C o 1 o n 26細胞 （財団法人 癌研究会）、マウス白血病 L 1210細胞 (財団法人 癌研究会） およびマウス線維肉腫 Me t h A細胞 （財団法人 癌 研究会） の計 6種のマウス腫瘍細胞を、 前記の薬理試験に準じ、 ビヒクル （0. 1%DMS0)又は KRN 7000 (100 n g/m 1) を添加、 あるいは無添 加にて 1日培養した。 各々の腫瘍細胞を、 培地にて 2回洗浄した後、 再度新鮮な 培地に懸濁し、 同系マウスの尾静脈より移植した。 B16、 EL— 4、 LLCに ついては、 それぞれ 5 x 105 細胞 Zマウス、 1 X 10"糸田胞/マウス、 5x1 05 細胞 /マウスの割合で C 57 B LZ6 (9週齢、 メス） に移植し、 Co l o n 26、 Me t h A、 L 1210については、 それぞれ 2 x 10°細胞 Zマウス、 1 105 細胞 Zマウス、 5 x 105 細胞 Zマウスの割合で B AL BZcマウス (9週齢、 メス） に移植した。
尾静脈より移植した各々の腫瘍細胞は、 肝臓ある L、は肺を主体とした臓器に転 移結節を形成し、 最終的に死に至る。 そのため、 生存期間を観察することで、 造 腫瘍性 （生着率 ·腫瘍形成能） に対する影響を調べた。
図 4に示すように、 無添加すなわち通常の培地だけで培養した各々の腫瘍細胞 を移植したマウスは、 全例が死亡し、 その造腫瘍性は 100%であった。 同様に、 ビヒクル存在下で 1日培養した各々の腫瘍細胞を移植したマウスも全例が死亡し、 その造腫瘍性は 100%であった。 これに対し、 KRN 7000存在下で 1日培 養した各々の腫瘍細胞を移植した群では、 40〜100%のマウス力く存在し、 そ の造腫瘍性が減少あるいは消失していた。
以上より、 KRN7000を代表とする α—グリコシルセラミ ドを添加して培 養することにより、 腫瘍細胞の造腫瘍性が著しく低下することが明らかとなつた。 また、 別検討にて、 KRN 7000力腫瘍細胞に対し増殖阻害活性を示すか否か 検討を行った。 その結果、 薬理試験 4と同様の条件で KRN 7000を添加し培 養した腫瘍細胞でも、 無添加あるいはビヒクル添加にて培養した腫瘍細胞と同等 の増殖能を示した。 このことから、 本効果は、 腫瘍細胞に対する直接的な細胞毒 性に起因するものではなく、 別の作用によるものであると考えられた。
このように、 α—グリコシルセラミ ドで処理した腫瘍細胞を接種する場合に、 放射線照射によりその増殖能を消失させなくとも、 癌ワクチンとして有用である ことが示された。 従って、 薬理試験 1から 4までの結果を総括すると、 α—グリ コシルセラ ドで処理した腫瘍細胞を接種することにより、 接種した腫瘍細胞自体 は宿主の免疫によりほぼ完全に排除されると共に、 宿主の免疫担当細胞が活性化 させることにより、 元から存在した腫瘍に対しても OT«免疫が誘導されると考 えられる。
また、 本検討では、 薬理試験 1カヽら 3までに使用した腫瘍細胞以外についても 検討を実施し、 一グリコシルセラミ ドで処理することにより、 全ての腫瘍細胞 の造腫瘍性が減少ある 、は低下することが明らかとなつた。 a—グリコシルセラ ミ ドで処理した B 1 6および E L— 4の治療効果が、 その造腫瘍性の低下と密接 に相関することから考えると、 B 1 6および E L— 4以外の Μ¾細胞についても 腫瘍療法が可能であると考えられる。
薬理試験 5 ： 一グリコシルセラミ ドで処理し、 かつ放射線を放射した腫瘍細 胞の Β 1 6メラノーマ肺転移モデルマウスに対する治療効果
薬理試験 2 - 4の結果から、 α—グリコシルセラミ ドで処置した腫瘍細胞は、 放射線照射ある 、は化学療'^等の処置により死滅させなくても、 癌ワクチンと して有用であることが明らかとなった。 しかしながら、 通常の腫瘍療法では、 放 射線照射等により死滅させたより安全な腫瘍ワクチンを使用することが常である。 そこで、 一グリ コシルセラミ ドで処置した腫瘍細胞を、 放射線照射後に担癌マ ゥスに接種した場合にも治療効果が得られるか検討を実施した。
C 5 7 B L Z 6マウス （9週齢、 メス） を 1群 7匹とし、 マウス B 1 6メラノ 一マ細胞 5 X 1 0 5 細胞 Ζマウスを尾静脈より移植することにより担癌マウスを 作製し、 この日を第 0日目とした。 また同日に、 薬理試験 4に準じ、 新鮮な培地 に播き直した B 1 6細胞に、 インビトロにてビヒクル （0. 1% DMSO) あ るいは KRN 7000 (1 00 n g/m 1 ) を添加し、 培養を開始した。 第 1日 目に、 ビヒクルあるいは KRN 7 0 00共存下にて 1日培養した B 1 6/Vある いは B 1 6/KRNを回収し、 P B S (P h o s p h a t e b u f f e r e d s a l i n e) にて 2回洗浄した。 次いで、 得られた細胞を 200 Gy放射線 を照射する群としない群の 2群に分け、 上記担癌マウスの尾静脈より 1 X 1 03 細胞 Zマウスの割合で接種し、 各々の 瘍効果を比較した。
図 5に示すように、 B 1 6ZVを接種した群では、 放射線照射の有無に依らず、 腫瘍を移植しただけのコントロール群と比較して、 全く ¾ 瘍効果が認められな かった。 一方、 B 16ZKRNを接種した群では、 放射線照射の有無に拘らず、 共に顕著な抗腫瘍効果が認められ、 腫瘍移植後 50日まで約 60〜 70%のマウ スか'生存した。
以上の結果より、薬理試験 2および 3の場合のように、 α—グリコシルセラミ ドで処置した腫瘍細胞に対して放射線照射を実施しなかつた場合と同様に、 放射 線照射を実施した場合にも、 顕著な抗腫瘍効果が得られることが明らかとなつた。 従って、 α—グリコシルセラミ ドで処置した腫瘍細胞に対し、 更に放射線照射等 の処理を加えることによって、 より安全に腫瘍療法に応用できることが判明した。

Claims

請 求 の 範 囲
1. 式 （ I ) の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む、 腫瘍細胞また は病原体感染細胞の免疫原性増強用組成物。
Figure imgf000041_0001
(I)
(上記式中、
R 1は Hまたは〇Hであり、
Xは 7〜 27の 、ずれかの整数であり、
R2は下記 （a) 〜 （e) からなる群から選択される置換基であり （ここで、 Yは 5〜17のいずれかの整数である） 、
(a) -CH2 (CH2) YCH3
(b) 一 CH (OH) (CH2) YCH o
(c) -CH (OH) (CHつ） YCH (CHつ） 2
(d) — CH = CH (CH2) YCHつ
(e) — CH (OH) (CH o) yCH (CHつ） CH9 CH3、 そして 3〜1^9は下記の0または^) のいずれかで定義される置換基である ： i ) R3、 R0、 および R。が Hのとき
R4は H、 0H、 NH2、 NHCOCHつ、 または下記基 （A) 〜 （D)
Figure imgf000042_0001
(A) ( B) (C) D) からなる群から選択される置換基であり、
5は〇^1、 または下記基 （E) および （F) ：
H3
Figure imgf000042_0002
( E からなる群から選択される置換基であり、
R7は、 OHまたは下 ^ (A) 〜 （D) ：
Figure imgf000042_0003
(A) (C) ( D) からなる群から選択される置換基であり、
R9は H、 CH3、 CH2OH、 または下記基 (A* ) 〜（D' )
Figure imgf000043_0001
(Α') Β'： (C) (D.)
からなる群から選択される置換基である ；
ii) R3、 1^6ぉょび 'が のとき
R4は H、 0H、 H または下記基 (A)
Figure imgf000043_0002
〜（D)
Figure imgf000043_0003
(A) ( B) ( C) D' からなる群から選択される置換基であり、
5は0 、 または下記基 （E) および （F) ：
Figure imgf000044_0001
(F)
(E
からなる群から選択される置換基であり、
R8はOH、 または下記基 (A) 〜 （D)
Figure imgf000044_0002
(Α) (日: (C)
からなる群から選択される置換基であり、
R9は H、 CH3、 CH20Hまたは下記基 （Α' ) 〜 （D' )
Figure imgf000044_0003
A') (C) (D' からなる群から選択される置換基である。 )
2. 式 （I) の化合物中、 R"3および R6が Hを表し、 R4が OHまたは基 (A) 〜 （D) のいずれかの置換基を表し、 1¾5が0!1または基 （E) もしくは (F) の置換基を表し、 R および R8がそれぞれ Hまたは OHのいずれかを表 し （但し、 R 7および R 8の両方が同一の基を表すことはない） 、 R9が CH2 OH、 CH3、 H、 または基 （Α' ) 〜 （D' ) のいずれかの置換基を表す、 請 求項 1に記載の組成物。
3. 式 （I) の化合物中、 Xが 21〜25の整数であり、 R2が置換基 (b) (式中、 Yは 11〜15である） を表す、 請求項 1または 2に記載の組成物。
4. 式 （I) の化合物が、 （2 S, 3 S， 4R) — 1— (α—D—ガラク ト ピラノシルォキシ） 一 2—へキサコサノィルァミノ一 3, 4—ォクタデカンジォ —ルである、 請求項 1記載の組成物。
5. 腫瘍細胞の免疫原性の増強に用いられる、 請求項 1に記載の組成物。
6. インビト口において用いられる、 請求項 1に記載の組成物。
7. 腫瘍療法に用いられる腫瘍細胞の作製に用いられる、 請求項 1に記載の 組成物。
8. 腫瘍細胞または病原体感染細胞を、 式 （I) の化合物またはその塩もし くは溶媒和物とインビトロで接触させることを含む、 腫瘍細胞または病原体感染 細胞の免疫原性増強法。
R9
OC -"" (CH2)x— CH3 (上記式中、
R 1は Hまたは OHであり、
Xは 7〜 27の 、ずれかの整数であり、
R2は下記 (a) 〜 （e) からなる群から選択される置換基であり （ここで、 Yは 5〜17のいずれかの整数である） 、
(a) -CH2 (CHつ） YCH π
(b) -CH (OH) (CH 9) YCH3
(c) 一 CH (OH) (CH2) YCH (CH3) 2
(d) - CH = CH (CH2) yCH 3
(e) 一 CH (OH) (CH 9) yCH (CHつ） CH CHg. そして R3〜R9は下記の i)または ii) のいずれかで定義される置換基である ： i) R3、 R0、 および R 8が Hのとき
R 4は H、 OH、 NH2、 NHC〇CH3、 または下記基 (A) 〜 (D)
Figure imgf000046_0001
(A) B) (C) ( D)
からなる群から選択される置換基であり、
R5は0H、 または下記基 (E) および （F) ： H3
Figure imgf000047_0001
E
からなる群から選択される置換基であり、
R7は、 0Hまたは下 ΪΞ¾ (A) 〜 （D) ：
Figure imgf000047_0002
(A) B) C) からなる群から選択される置換基であり、
R 93は H、 CH3、 CH20H、 または下記基 （Α' ) 〜 （D' )
Figure imgf000047_0003
(Α') (Β') (C) (D' からなる群から選択される置換基である ；
ii) R3、 6ぉょび <が 1のとき
R4は H、 OH、 NHo、 NHCOCHつ、 または下記基 (A) 〜 （D)
Figure imgf000048_0001
(A) C (D) からなる群から選択される置換基であり、
1¾5は0^1、 または下記基 （E) および （F) ：
Figure imgf000048_0002
からなる群から選択される置換基であり、
8は0 、 または下S¾ (A) 〜 （D) ：
Figure imgf000049_0001
(A) ( B; ( C) ( D) からなる群から選択される置換基であり、
R9は H、 CH 、 CH2〇Hまたは下記基 （Α' ) 〜（D' ) ：
Figure imgf000049_0002
A' ' ( Β' (C) からなる群から選択される置換基である。 ）
9. 細胞が腫瘍細胞である、 請求項 8に記載の方法。
10. 式 （I) の化合物またはその塩もしくは溶媒和物とインビトロで接触 させることによって得ることができる、 免疫原性が増強された腫瘍細胞または病 原体感染細胞。
Figure imgf000049_0003
(I) (上記式中、
R 1は Hまたは OHであり、
Xは 7〜 27の 、ずれかの整数であり、
R2は下記 （a) 〜 （e) からなる群から選択される置換基であり （ここで、 Yは 5〜17のいずれかの整数である） 、
(a) — CH2 (CH2) yCH3
(b) 一 CH (OH) (CH 9) YCH 3
(c) 一 CH (OH) (CH2) yCH (CH3) 2
(d) -CH = CH (CH2) YCH 3
(e) — CH (OH) (CH2) VCH (CHg) CH9 CH3、 そして R3〜R9は下記の i)または i i) のいずれかで定義される置換基である ： i ) R3、 R6、 および R0が Hのとき
R 4は H、 〇H、 NH2、 NHCOCHつ、 または下記基 (A) 〜 （D)
Figure imgf000050_0001
(A) ( B (C) ( D)
からなる群から選択される置換基であり、
1 5は0^1、 または下記基 （E) および （F) ：
Figure imgf000051_0001
からなる群から選択される置換基であり、
R7は、 0Hまたは下記基 （A) 〜 (D)
Figure imgf000051_0002
(Α) ( Β C
からなる群から選択される置換基であり、
R 9は H、 CHつ、 CH20H、 または下記基 （Α' ) 〜 （D' )
Figure imgf000051_0003
(Α') ( Β'; (C) (ひ からなる群から選択される置換基である ；
ii) R3、 R 6および R 7が Hのとき
R4は H、 〇H、 NH2、 NHCOCH3、 または下記基 (A)〜（D)
Figure imgf000052_0001
(A) (B) (C) D)
からなる群から選択される置換基であり、
5は〇^1、 または下記基 (E) および （F) ：
Figure imgf000052_0002
(E)
からなる群から選択される置換基であり、
1 8は0^1、 または下記基 （A)〜（D) ：
Figure imgf000053_0001
(A) B) C D' からなる群から選択される置換基であり、
R 9yは H、 CHつ、 CHnOHまたは下記基 (Α' ) 〜 （D' ) ：
Figure imgf000053_0002
(Α') ( Β': (〇'） (ひ : からなる群から選択される置換基である。 ）
11. 腫瘍細胞である、 請求項 10に記載の細胞。
12. 有効量の請求項 10に記載の細胞を含む、 その細胞に起因する疾患の 治療用医薬組成物。
13. 有効量の請求項 11に記載の細胞を含む、 腫瘍治療用医薬組成物。
14. 有効量の請求項 10に記載の細胞を哺? に投与することを含む、 そ の細胞に起因する疾患の治療法。
15. 有効量の請求項 11に記載の細胞を哺? L®に投与することを含む、 腫 瘍の治療法。
1 6. 請求項 1 0に記載の細胞の、 その細胞に起因する疾患の治療用薬剤の 製造のための使用。
1 7. 請求項 1 1に記載の細胞の、 腫瘍治療用薬剤の製造のための使用。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001098317A2 (en) * 2000-06-22 2001-12-27 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Alpha-glycosylceramides for treating bacterial and fungal infections
WO2003009812A2 (en) * 2001-07-25 2003-02-06 New York University Use of glycosylceramides as adjuvants for vaccines against infections and cancer
WO2007074788A1 (ja) 2005-12-27 2007-07-05 University Of The Ryukyus 抗腫瘍剤及び免疫賦活剤
WO2009119692A1 (ja) * 2008-03-25 2009-10-01 独立行政法人理化学研究所 新規糖脂質及びその用途
JP2009263391A (ja) * 2009-07-06 2009-11-12 Kotobuki Seiyaku Kk 新規糖脂質誘導体及びこれを有効成分とする製剤
JP2010001291A (ja) * 2009-07-06 2010-01-07 Kotobuki Seiyaku Kk 糖脂質誘導体の製造方法
US7771726B2 (en) 2003-10-08 2010-08-10 New York University Use of synthetic glycolipids as universal adjuvants for vaccines against cancer and infectious diseases

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7419958B2 (en) 2001-03-26 2008-09-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Method of attenuating reactions to skin irritants
ATE342910T1 (de) * 2001-08-16 2006-11-15 Daiichi Asubio Pharma Co Ltd Neues glykolipid, und heilmittel für autoimmunerkrankungen, das dieses als wirkstoff enthält
US20040171522A1 (en) * 2003-02-27 2004-09-02 Yaron Ilan Regulation of immune responses by manipulation of intermediary metabolite levels
US8513008B2 (en) * 2004-10-07 2013-08-20 Argos Therapeutics, Inc. Mature dendritic cell compositions and methods for culturing same
WO2006042177A2 (en) 2004-10-07 2006-04-20 Argos Therapeutics, Inc. Mature dendritic cell compositions and methods for culturing same
CN101031307B (zh) 2004-11-02 2012-09-05 小利兰斯坦福大学托管委员会 抑制nkt细胞的制药用途
WO2006058243A2 (en) * 2004-11-24 2006-06-01 Yale University Leishmania antigens and related compositions and uses
US20070231344A1 (en) * 2005-10-28 2007-10-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Conjugate vaccines for non-proteinaceous antigens
EP2060252A1 (en) 2007-11-19 2009-05-20 Wittycell New formulation of galactosylceramide derivatives
US9878036B2 (en) 2009-08-12 2018-01-30 Sigmoid Pharma Limited Immunomodulatory compositions comprising a polymer matrix and an oil phase
GB201212010D0 (en) 2012-07-05 2012-08-22 Sigmoid Pharma Ltd Formulations
CN104497065B (zh) * 2014-11-24 2017-10-24 浙江大学 α‑半乳糖神经酰胺新异构体及其用途
CN104497064B (zh) * 2014-11-24 2017-10-24 浙江大学 α‑半乳糖神经酰胺新异构体及其合成方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3806565A1 (de) * 1988-03-01 1989-09-14 Deutsches Krebsforsch Virusmodifizierte tumorvakzinen fuer die immuntherapie von tumormetastasen
JPH0559081A (ja) * 1991-08-29 1993-03-09 Kirin Brewery Co Ltd 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用
TW261533B (ja) * 1992-07-16 1995-11-01 Kirin Brewery
AU683653B2 (en) * 1993-04-15 1997-11-20 Kirin Pharma Kabushiki Kaisha Novel sphingoglycolipid and use thereof
US5858776A (en) * 1993-11-03 1999-01-12 Repligen Corporation Tumor cells with increased immunogenicity and uses therefor
TW555562B (en) * 1996-12-27 2003-10-01 Kirin Brewery Method for activation of human antigen-presenting cells, activated human antigen-presenting cells and use thereof
ES2318236T3 (es) * 1997-04-10 2009-05-01 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Agentes activadores de celulas nkt que contienen alfa-glucosilceramidas.

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MOTOKI K. ET AL.: "EFFECTS OF ALPHA-GALACTOSYLCCRAMIDES ON BONE MARROW CELLS IN VITRO AND HEMATOPOIESIS IN VIVO.", BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN (OF JAPAN), PHARMACEUTICAL SOCIETY OF JAPAN, TOKYO., JP, vol. 19., no. 07., 1 January 1996 (1996-01-01), JP, pages 952 - 955., XP002915329, ISSN: 0918-6158 *
YAMAGUCHI Y., ET AL.: "ENHANCING EFFECTS OF 2S,3S,4R)-1-O-(ASPIRE-D-GALACTOPYRANOSYL)-2- (N-HEXACOSANOYLAMINO)-1,3,4-OCTADECANCTRIOL (KRN7000) ON ANTIGEN- PRESENTING FUNCTION OF ANTIGEN-PRESENTING CELLS AND ANTIMETASTATIC ACTIVITY OF KRN7000-PRETREATED ANTIGEN-PRESENTING CELLS.", ONCOLOGY RESEARCH., PERGAMON PRESS, NEW YORK, NY., US, vol. 08., no. 10/11, 1 January 1996 (1996-01-01), US, pages 399 - 407., XP002915330, ISSN: 0965-0407 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001098317A2 (en) * 2000-06-22 2001-12-27 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Alpha-glycosylceramides for treating bacterial and fungal infections
WO2001098317A3 (en) * 2000-06-22 2002-09-26 Brigham & Womens Hospital Alpha-glycosylceramides for treating bacterial and fungal infections
WO2003009812A2 (en) * 2001-07-25 2003-02-06 New York University Use of glycosylceramides as adjuvants for vaccines against infections and cancer
WO2003009812A3 (en) * 2001-07-25 2004-04-29 Univ New York Use of glycosylceramides as adjuvants for vaccines against infections and cancer
US7488491B2 (en) 2001-07-25 2009-02-10 New York University Use of glycosylceramides as adjuvants for vaccines against infections and cancer
US7771726B2 (en) 2003-10-08 2010-08-10 New York University Use of synthetic glycolipids as universal adjuvants for vaccines against cancer and infectious diseases
WO2007074788A1 (ja) 2005-12-27 2007-07-05 University Of The Ryukyus 抗腫瘍剤及び免疫賦活剤
WO2009119692A1 (ja) * 2008-03-25 2009-10-01 独立行政法人理化学研究所 新規糖脂質及びその用途
US8551959B2 (en) 2008-03-25 2013-10-08 Riken Glycolipid and use thereof
JP5561700B2 (ja) * 2008-03-25 2014-07-30 独立行政法人理化学研究所 新規糖脂質及びその用途
JP2009263391A (ja) * 2009-07-06 2009-11-12 Kotobuki Seiyaku Kk 新規糖脂質誘導体及びこれを有効成分とする製剤
JP2010001291A (ja) * 2009-07-06 2010-01-07 Kotobuki Seiyaku Kk 糖脂質誘導体の製造方法

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