CN114040918A - 皂苷缀合物及含其的疫苗或药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新颖化合物，其亲脂性基团(如脂质、脂肪酸、聚乙二醇或萜类)通过共价连接至非酰化或去酰化的三萜皂苷上的3‑O‑葡萄糖醛酸的羧基。该亲脂性基团与皂苷(如皂树去酰化皂苷、丝瓜苷P或得自霞草属、肥皂草属和针珊瑚属的皂苷)的3‑O‑葡萄糖醛酸的结合增强了皂苷对体液免疫和细胞免疫所介导的免疫佐剂效果。此外，与既有皂苷相比，将亲脂性基团连接至非酰化或去酰化皂苷的3‑O‑葡萄糖醛酸残基上所得到的皂苷类似物更容易纯化、毒性较低、化学上更稳定并且具有同等或更佳佐剂性质。

Description

皂苷缀合物及含其的疫苗或药物组合物
技术领域
本发明涉及皂苷缀合物、其合成及其中间体。本发明还提供包含本发明皂苷缀合物的药物组合物，以及使用所述皂苷缀合物或组合物治疗传染病、癌症和免疫失调的方法。
背景技术
在现今的疫苗制剂中，佐剂的功效已被证实。当前的挑战是，对于治疗型疫苗，抗原和佐剂的组合必须同时有效刺激体液免疫和细胞免疫，才能治疗复杂的疾病，例如：艾滋病、疟疾、结核病和癌症。开发新颖疫苗抗原的基础，在缺少佐剂的协助下，抗原仅能微幅刺激病原特异性T细胞反应，无法有效提供免疫保护力，开发疫苗佐剂为现今疫苗制剂产业的一大研究重点，然而现今仍无核准的佐剂能有效诱导细胞免疫并且在临床使用上具有高安全性。
皂树皂苷(Quillaja saponins,Q.saponins)是从智利的皂树树皮(Quillajasaponaria Molina)提取的三萜糖苷。其中皂树皂苷是气道粘液产生的强刺激剂，并且会引起消化道发炎。已知由皂树萃取物中分离出四种主要的三萜类糖苷，鉴定为QS-7、QS-17、QS-18和QS-21(皂树皂苷组分7、17、18和21)，这些皂苷结构拥有相同的三萜类骨干皂皮酸(quillaic acid)且均在3-O位置连结三糖β-D-Gal-(1→2)-[β-D-Xyl-(1→3)]-β-D-GlcA。QS-21在28-O位置含有直链四糖β-D-Apif/Xylp-(1→3)-β-D-Xyl-(1→4)-α-L-Rha-(1→2)-β-D-Fuc，并具有一个通过岩藻糖4-O-位置键结的立体化学丰富的脂肪酸链1(fucose-linked 4-O-acyl stereochemically rich fatty acyl chain 1)。QS-21及其纯化类似物的结构如下表：
Figure GDA0003437676220000021
Figure GDA0003437676220000022
Apif：呋喃芹菜糖(apiofuranose)；Xylp：吡喃木糖(xylopyranose)；
Glcp：吡喃葡萄糖(glucopyranose)；Rhap：吡喃鼠李糖(rhamnopyranose)。
QS-21分子应用于数百项近期和正在进行的疫苗临床试验(疟疾、疱疹、阿兹海默症、1型人类免疫缺乏病毒(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)、黑色素瘤、乳癌、小细胞肺癌、前列腺癌等)，还将其确立为增强免疫反应、节省剂量(dose-sparing)的具有前瞻性的佐剂。然而QS-21临床使用上，仍存有四个主要问题：QS-21具有剂量限制毒性(doselimiting toxicity)、安定性差、分子作用机制理解不足以及高质量产品供应有限。
GPI-0100是衍生自皂树皮提取物的半合成皂苷混合物。在温和碱性水解条件下处理粗制树皮萃取物，然后通过具有水解稳定性的酰胺键连接直链C12脂肪碳链(analiphatic dodeacyl chain)，得到GPI-0100。这种修饰使皂树皂苷分子结构在高温更稳定(more tolerance at higher temperature)，还使皂树萃取物的内在毒性大幅降低，然而，其佐剂活性却因此下降。因此，开发能诱导强效细胞免疫且毒性低的皂苷佐剂仍为疫苗研发的重点。本发明开发了新一代基于皂苷的佐剂，其在提升细胞免疫中具有改善的功效，与现有佐剂相比，更适于结合治疗性疫苗。
发明内容
本发明涉及新颖的化合物，在本文中称为皂苷缀合物，其中
一方面，本发明提供式(I)的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类：
Figure GDA0003437676220000031
其中：
·
Figure GDA0003437676220000032
为单键或双键；
·W为甲基(Me)、—CHO、
Figure GDA0003437676220000033
—CH2OR1、—C(O)Rx或CH2ORx；
·V为氢或—OR1；
·Y为CH2、—O—、—S—、—NR—或—NH—；
·Q为CH2、C＝O、C＝N—OH或C＝N—OMe；
·X为CH2、—O—、—NR—、—NH—(C＝O)—、—S—或O—(C＝O)—；
·R为选自由酰基、脂族、杂脂族、芳基、芳基-脂族、环脂族、杂环-脂族、杂芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所组成的组的任选取代的环状或非环状部分；或选自由下列所组成的组：C1-C18脂族、5-10元芳基-脂族、具有1-4个独立地选自由氮、氧及硫组成的组的杂原子的5-10元杂芳基-脂族、具有1-2个独立选自由氮、氧和硫组成的组的杂原子的4-7元杂环-脂族；
·R1独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；或具有单糖结构的碳水化合物，如：葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖胺、N-乙酰半乳糖胺、阿卓糖、阿洛糖、岩藻糖、鼠李糖等；
Figure GDA0003437676220000034
其中：
■a、b和c每次出现独立地为0或1；
■R0独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
■Ra、Rb、Rc及Rd每次出现独立地为氢、卤素、OH、OR、ORx；Rx每次出现独立地为氢或选自烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯的氧保护基；
·Z为氢；或选自由酰基、脂族、杂脂族、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基所组成的组的任选取代的环状或非环状部分；或具有以下结构的碳水化合物：
Figure GDA0003437676220000041
◆其中：
◆R2每次出现为氢或具有以下结构的碳水化合物域：
Figure GDA0003437676220000042
其中：
■a、b和c每次出现独立地为0、1或2；
■d为整数1-5，其中每一括号d中的结构可以是相同或不同；前提是括号d中的结构代表呋喃糖或吡喃糖部分，且b与c的和为1或2；
■R0为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
■Ra、Rb、Rc及Rd每次出现独立地为氢、卤素、OH、OR、ORx、NR2、NHCOR或选自以下的任选取代的基团：酰基、C1-C10脂族、C1-C6杂脂族、6-10元芳基、芳基-脂族；或具有1-4个选自氮、氧或硫组成的组的杂原子的5-10元杂芳基；或具有1-2个独立选自氮、氧和硫组成的组的杂原子的4-7元杂环基；
◆R3为氢、卤素、OH、ORx，
◆R4为氢、卤素、CH2ORx或选自由酰基、C1-C10脂族组成的组的任选取代的基团；
◆Rx每次出现独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
本发明涵盖以下认知：由于结构复杂，GPI-0100作为佐剂混合物的临床应用受到限制，并且难以以纯净形式分离。本发明提供与GPI-0100类似的化合物。
另一方面，本发明化合物已证明可用作佐剂。因此，在某些实施例中，提供一种疫苗，包含一种或多种细菌抗原、病毒抗原、原生动物抗原或肿瘤相关抗原以及一种或多种本发明化合物。在某些实施例中，一种或多种抗原与医药学上可接受的赋形剂非共价结合。在一些实施例中，一种或多种抗原与医药学上可接受的赋形剂共价结合。
另一方面，本发明提供一种增强对抗原的免疫反应的方法，包括将所提供的疫苗以有效量给药至个体以增强所述个体对所述抗原的免疫反应。
在另一实施例中，本发明提供一种皂苷类物质，其诱导对体液免疫和细胞免疫的免疫反应。
在另一实施例中，本发明提供一种刺激或增强个体体内细胞因子产生的方法，该方法尤其包括向该个体给药任一种本发明化合物，使免疫细胞分泌细胞因子。
另一方面，本发明提供一种为个体接种疫苗的方法，包括对所述个体给药所提供的疫苗。在一些实施例中，该个体是人类。在一些实施例中，该疫苗经口给药。在其他实施例中，该疫苗是肌内给药。在其他实施例中，该疫苗是皮下给药。在某些实施例中，佐剂化合物的给药量为10-1000μg。在某些实施例中，佐剂化合物的给药量为500-1000μg。在某些实施例中，佐剂化合物的给药量为100-500μg。在某些实施例中，佐剂化合物的给药量为50-250μg。在某些实施例中，佐剂化合物的给药量为50-500μg。在某些实施例中，佐剂化合物的给药量为250-500μg。为该个体接种疫苗的抗原可以是癌症抗原、细菌抗原、病毒抗原、原生动物抗原或自体抗原。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含本发明化合物和医药学上可接受的赋形剂。在某些实施例中，该药物组合物是疫苗，该疫苗包含抗原和本发明的佐剂。
另一方面，本发明提供一种试剂盒，其包含本发明化合物的药物组合物。在一些实施例中，该试剂盒包含处方信息。在一些实施例中，该试剂盒包括本发明佐剂化合物与另一免疫治疗剂(例如疫苗、抗体)的组合。这些制剂可分开包装或包装在一起。该试剂盒任选地包括开立药物处方的说明书。在某些实施例中，该试剂盒包括多种剂量的各试剂。该试剂盒可包括足量的各成分，以将个体治疗一周、二周、三周、四周或数个月。在某些实施例中，该试剂盒包括一个免疫疗法周期。在某些实施例中，该试剂盒包括足量的药物组合物以长期使个体对抗原免疫。
在一个实施例中，本发明提供一种制备式(II)结构所示化合物或其医药学上可接受的盐类的方法：
Figure GDA0003437676220000051
其中：
·
Figure GDA0003437676220000052
为单键或双键；
·W为Me、—CHO、
Figure GDA0003437676220000053
—CH2OR1、—C(O)R或CH2ORx；
·V为氢或—OR1；
·Y为CH2、—O—、—S—、—NR—、—NH—或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
·Q为CH2、C＝O、C＝N—OH或C＝N—OMe；
·X为CH2、—O—、—NR—、—NH—(C＝O)—、—S—或O—(C＝O)—；
·R1独立地为氢、选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；或具有以下结构的碳水化合物：
Figure GDA0003437676220000061
其中：
■a、b和c每次出现独立地为0或1；
■R0独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
■Ra、Rb、Rc及Rd每次出现独立地为氢、卤素、OH、OR、ORx；Rx每次出现独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；且
·R为选自由酰基、脂族、杂脂族、芳基、芳基-脂族、环脂族、杂环-脂族、杂芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所组成的组的环状或非环状的部分；或选自以下的任选取代的基团：C1-C18脂族、5-10元芳基脂族、具有1-4个独立选自氮、氧或硫组成的组的杂原子的5-10元杂芳基-脂族、具有1-2个独立选自氮、氧和硫组成的组的杂原子的4-7元杂环-脂族。
在本发明的一个实施例中，式(II)化合物可通过包括以下步骤的方法获得：
使式(III)结构所示化合物与式(IV)结构所示化合物或其医药学上可接受的盐类反应。
Figure GDA0003437676220000062
式(III)中：
·R1独立地为氢、选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；或具有以下结构的碳水化合物
Figure GDA0003437676220000063
其中：
■a、b和c每次出现独立地为0或1；
■R0独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
■Ra、Rb、Rc及Rd每次出现独立地为氢、卤素、OH、OR、ORx；Rx每次出现独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
■LG为离去基，尤其可以是
Figure GDA0003437676220000071
式(IV)中：
·
Figure GDA0003437676220000072
为单键或双键；
·W为Me、—CHO、
Figure GDA0003437676220000073
—CH2OR或—C(O)R；
·V为氢或—OR1；
·Y为CH2、—O—、—NR—、—NH—或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；且
·R、Rx或R1独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基。
在本发明的一个实施例中，一种式(I)化合物可通过包括以下步骤的方法获得：
使式(II)与式(V)或其医药学上可接受的盐类反应：
Figure GDA0003437676220000074
其中：
·PG和PG1为选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
·R1独立地为氢、选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；或具有以下结构的碳水化合物：
Figure GDA0003437676220000075
其中：
■a、b和c每次出现独立地为0或1；
■R0独立地为氢或选自烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
■Ra、Rb、Rc及Rd每次出现独立地为氢、卤素、OH、OR、ORx；Rx每次出现独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯组成的组的氧保护基；
·R2独立地为氢、卤素、CH2OH或选自低级烷基的任选取代的基团；且
·LG为离去基，尤其可以是
Figure GDA0003437676220000081
定义
如本文所用，除非另外指出，否则将适用以下定义。
“立体异构体”是指在一个或多个立构中心具有不同手性的化合物。立体异构体包括镜像异构体和非镜像异构体。
“个体”是指哺乳动物，包括人类和非人类哺乳动物。
本文所用的术语“脂族”或“脂族基”或“脂族部分”是指完全饱和或包含一个或多个不饱和单元的直链(即，非支链)或支链的经取代或未经取代的烃链，或指完全饱和或包含一或多个不饱和单元的单环烃或二环烃，但并非与分子其余部分具有单个连接点的芳香族(在本文中又称“碳环”、“脂环族”或“环烷基”)。除非另有说明，否则脂族基包含脂族碳原子。在一些实施例中，脂族基包含1-12个脂族碳原子。在一些实施例中，脂族基包含1-11个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基包含1-10个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基包含1-9个脂族碳原子，而在其他实施例中，脂族基包含1-8个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基包含1-7个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基包含1-6个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基包含1-5个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基包含1-4个脂族碳原子。在其他实施例中，脂族基包含1-3个脂族碳原子，而在其他实施例中，脂族基包含1-2个脂族碳原子。
在一些实施例中，脂环族(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或包含一个或多个不饱和单元的单环C-C烃，但并非与分子其余部分具有单个连接点的芳香族。合适的脂族基包括但不限于直链或支链、经取代或未经取代的烷基、烯基、炔基及其混合物如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
术语(杂原子)是指氧、硫、氮、磷或硅中的一种或多种(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；季铵化形式的任何碱性氮或杂环中可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯啶基中)或NR"(如在N取代的吡咯啶基中))。
如本文所用，术语“不饱和”是指部分(moiety)具有一个或多个双键。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“酰基”单独使用或为较大部分(moiety)的一部分使用，是指从羧酸除去羟基而形成的基团。
术语“芳烷基”和“芳基脂族”可互换使用，并且意为氢原子被芳基取代的脂族基。所述芳基包括但不限于苯基、联苯、萘基、肉桂基和二氢肉桂基。
术语“芳基”单独使用或为较大部分(moiety)的一部分使用，例如在“芳基-脂族”、“杂芳基-脂族”中。
术语“芳氧基-脂族”(或“芳烷氧基(aralkoxy或arylkoxy)”或“芳氧烷基”)是指具有总共5-14个环成员的单环或二环的环系统，其中该系统中的至少一个环为芳香族并且该系统中的每个环包含3-7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳香族环”互换使用。
在本发明的某些实施例中，“芳基”是指芳香环系统，其包括但不限于苄基、苯基、联苯、萘基、蒽基等，其可带有一或多个取代基。如本文所用，芳香环与零个或一个或多个非芳香环稠合而成的基团也包括在术语“芳基”的范围内，例如二氢茚基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基、啡啶基或四氢萘基等。
术语“杂芳基”单独使用或为较大部分(moiety)的一部分使用，例如“杂芳基氧基”或“杂芳基-脂族”或“杂芳基烷基”，是指结构特征如下的基团：具有5-10个环原子，优选5、6或9个环原子；具有共享6、10或14个电子的环阵列；以及具有除了碳原子以外的1-5个杂原子。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式，以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和喋啶基。
如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括杂芳环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合而成的基团，其连接点在杂芳环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹噁啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基以及2H-吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单环或双环。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”、“杂芳基团”或“杂芳族”互换使用，并且任何上述术语都包括任选地经取代的环。术语“杂芳基-脂族”和“杂芳基-烷基”是指经杂芳基部分取代的脂族，其中脂族和杂芳基部分独立地任选经取代。
如本文所用，术语“杂脂族”是指其中一个或两个碳原子独立地经氧、硫、氮或磷中的一种或多种取代的脂族基。杂脂族基团可以是经取代或未经取代的，支链或非支链，环状或非环状，并且包括“杂环(heterocycle)”、“杂环基”、“杂环脂族”或“杂环(heterocyclic)”基团。
如本文所用，术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基”和“杂环的(heterocyclic)”可互换使用，是指饱和或部分不饱和的稳定的5-7元单环或7-10元双环杂环部分，并且除了碳原子以外，还具有一或多个(优选为1-4个)如上所定义的杂原子。当提及杂环的环原子时，术语“氮”包括取代的氮，例如，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和的环中，氮可以是N(例如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(例如在吡咯烷基中)或+NR(例如在N-取代的吡咯烷基中)。
杂环基环可在任何杂原子或碳原子上与其侧基连接，从而形成稳定的结构，并且任何环原子均可任选地经取代。此类饱和或部分不饱和杂环残基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑啶基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂环庚基、氧氮杂环庚烷基、硫氮杂环庚烷基、吗啉基及奎宁环基。
术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基团”和“杂环部分”在本文中可互换使用，并且还包括其中杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或脂环族环稠合的基团，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、苯并二氢哌喃基、啡啶基或四氢喹啉基。杂环基可以是单环或双环。
术语“杂环脂族”是指经杂环基取代的烷基，其中脂族基和杂环部分独立地任选经取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”是指环部分包括至少一个双键或三键。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但不包括本文所定义的芳基或杂芳基部分。
另一方面，本发明提供“医药学上可接受的”组合物，其包含治疗有效量的一种或多种本文所述化合物，与一种或多种医药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制。如所详述的，本发明药物组合物可特别配制为以固体或液体形式给药，包括适合于以下的形式：经口给药，例如灌药(水性或非水性溶液或悬浮液)、片剂(例如，靶向经颊、舌下及全身吸收的片剂)、大丸剂、粉剂、粒剂、给药于舌的膏剂；非经肠给药，例如以无菌溶液或悬浮液或缓释性制剂形式通过肌肉内、皮下、静脉内或硬膜外注射；局部给药，例如以乳膏、软膏或控制释放喷雾剂或贴片形式给药于肺、皮肤或口腔；阴道内或直肠内，例如子宫托、乳膏或泡沫；舌下；经眼；经皮；或经鼻、经肺及于其他粘膜表面。
本文所用短语“医药学上可接受的”是指化合物、组合物、材料及/或剂型在合理的医疗判断范围内，适用于与人和动物的组织接触而无过度的毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，并且具有合理的获益/风险比。
本文所用短语“医药学上可接受的载体”是指医药学上可接受的材料、组合物或媒介物。诸如液体或固体填充剂、赋形剂、稀释剂或溶剂封装材料，涉及将标的化合物从身体的一部分运输或携带到身体的另一部分。在与制剂的其他成分相容且对患者无害的意义上，每一种载体必须是“可接受的”。可用为医药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，例如葡萄糖、乳糖、蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素、乙基纤维素和乙酸纤维素；黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花子油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二元醇，例如丙二醇；多元醇。例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；pH缓冲溶液；聚酯、聚碳酸酯及/或聚酐；及药物制剂中使用的其他无毒相容性物质。
如本文所用，术语“医药学上可接受的盐类”是指在合理的医疗判断范围内适用于与人和较低等动物的组织接触而无过度的毒性、刺激性、过敏反应等并且具有合理的获益/风险比的盐类。医药学上可接受的盐类在本领域中众所周知。例如，S.M.Berge等人在药物科学期刊(J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19)中详述医药学上可接受的盐类，通过引用并入本文。本发明化合物的医药学上可接受的盐类包括衍生自合适的无机和有机酸和碱的盐类。医药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是胺基与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或与有机酸(例如乙酸、乙二酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或使用本领域中的其他方法(例如离子交换)形成的氨基的盐。其他医药学上可接受的盐类包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
在其他情况下，本发明化合物可包含一个或多个酸性官能团，因此能够与医药学上可接受的碱形成医药学上可接受的盐类。在这些情况下，术语“医药学上可接受的盐类”是指本发明化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐同样可在给药媒介物或剂型制造过程中原位制备，或使自由酸形式的纯化化合物分别与合适的碱(例如医药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸酯或碳酸氢盐)、与氨或与医药学上可接受的有机伯、仲、叔或季胺反应来制备。从适当的碱衍生的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N(C1-4烷基)盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。其他医药学上可接受的盐类在适当时包括无毒的铵、季铵和使用相反离子(例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根)形成的胺阳离子。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
除非另有说明，否则本文描述的结构还意在包括结构的所有异构体(例如镜像异构体、非镜像异构体和几何构型)形式；例如，每个立构中心的R和S构型、Z和E双键异构体及Z和E构型异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体及镜像异构体、非镜像异构体和几何(或构型)混合物均在本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明化合物的所有互变异构体均在本发明的范围内。
所提供的化合物可包含一个或多个糖部分。除非另有说明，否则D-和L-构型及其混合物均在本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明考虑C-和S-连接的实例及其混合物。
此外，除非另有说明，否则本文所述的结构还旨在包括差异仅在于存在一个或多个同位素浓化原子的化合物。例如，具有包括以氘或氚取代氢或以13C-或14C-浓化碳取代碳的本发明结构的化合物，均在本发明的范围内。这样的化合物例如可用为分析工具、生物分析中的探针或根据本发明的治疗剂。
根据本发明的实施例，本文所用短语“保护基”是指暂时修饰的潜在反应性官能团，保护其免于不希望的化学转变。这样的保护基的实例分别包括羧酸的酯、醇的硅烷基醚以及醛和酮的缩醛和缩酮。当然，可使用其他适当的保护基。此外，Greene和Wuts描述了多种保护基(如上)。
在本发明的一个实施例中，保护基尤其可以是羟基保护基。在本发明的一个实施例中，羟基保护基尤其可以是烷基、芳基、芳烷基、硅烷基或酰基。在另一实施例中，保护基尤其可以是三甲基硅烷基、三乙基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基(tert-butyldimethylsilyl，TBS)、三异丙基硅烷基(triisopropylsilyl，TIPS)或叔丁基二苯基硅烷基。当然，可使用任何其他合适的保护基。
在一个实施例中，芳烷基可经取代或未经取代。在另一实施例中，芳烷基尤其可以是芳基甲基。在另一实施例中，保护基尤其可以是苄基。在另一实施例中，保护基尤其可以是甲氧苄基。在另一实施例中，甲氧苄基尤其可以是对甲氧苄基。
在本发明的一个实施例中，保护基尤其可以是氨基保护基。在本发明的一个实施例中，氨基保护基尤其可以是氨基甲酸酯、酰胺或N-磺酰基胺。在另一实施例中，氨基保护基尤其可以是苄氧羰基(carbobenzyloxy，Cbz)、9-芴基甲基氧基羰基(9-fluorenylmethyloxycarbonyl，Fmoc)、叔丁基氧基羰基(t-butyloxycarbonyl，tBoc)、联苯基异丙基氧基羰基(biphenylisopropyloxycarbonyl)、叔戊基氧基羰基异冰片基氧基羰基(t-amyloxycarbonylisobornyloxycarbonyl)、α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧基羰基(alpha-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl)或2-腈基-叔丁氧基羰基(2-cyano-t-butyloxycarbonyl)。
此外，在一个实施例中，本发明提供一种用于在个体中刺激、压抑、抑制或调节免疫反应的方法，该方法尤其包括向个体给药本发明的任何一种化合物或其任何组合。
此外，在一个实施例中，本发明提供一种用于在个体中刺激、压抑、抑制或调节免疫反应的方法，该方法尤其包括向个体给药一种药物组合物，所述药物组合物尤其包括本发明的任何一种化合物或其任何组合以及一种或多种医药学上可接受的赋形剂。
此外，在一个实施例中，“药物组合物”是可指适用于在一个体中刺激、压抑、抑制或调节免疫反应的治疗有效量的一种或多种本发明化合物以及合适的赋形剂及/或载体。
在一个实施例中，“治疗有效量”是可指对于特定状况和给药方案提供治疗效果的量。在一个实施例中，此类组合物可通过本领域已知的任何方法给药。
如本文所述，本发明化合物可包含“任选经取代的”部分。通常，术语“经取代的”，无论是否冠以术语“任选地”，是指指定部分的一或多个氢被合适的取代基取代。除非另有说明，否则“任选地经取代的”基团可在该基团的每个可取代位置上具有合适的取代基，并且当任何特定结构中一个以上的位置可被一个以上选自特定基团的取代基取代时，每个位置的取代基可以相同或不同。本发明设想的取代基的组合优选为引起形成稳定或化学上可行的化合物的取代基。
如本文所用，短语“非经肠给药”是指除了经肠及局部给药之外的给药方式，通常为注射，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内及胸骨内注射及输注。
本文所用短语“全身性给药(systemic administration或administeredsystemically)”、“周边给药(peripheral administration)”是指化合物、药物或其他物质除了直接给药至中枢神经系统之外的给药，使其进入患者的系统而经历代谢及其他类似过程，例如皮下给药。
术语“纯”是指化合物实质上不含相关的非目标结构的化合物或化学前体(化学合成时)。此性质可计量或表示为“纯度”。在一些实施例中，目标化合物具有少于约30％、20％、10％、5％、2％、1％、0.5％和0.1％的非目标结构或化学前体。
术语“碳水化合物”是指糖或糖的聚合物。术语“糖”、“多糖”、“碳水化合物”和“寡糖”可互换使用。大多数碳水化合物是具有许多羟基的醛或酮，通常在分子的每个碳原子上带有一个羟基。碳水化合物通常具有分子式CnH2nOn。碳水化合物可以是单糖、二糖、三糖、寡糖或多糖。最基本的碳水化合物是单糖，例如葡萄糖、半乳糖、蔗糖、核糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖和果糖。二糖是两个连接的单糖。示例性的二糖包括蔗糖、乳糖、纤维二糖和麦芽糖。通常，寡糖包括三至六个单糖单元(例如棉子糖、水苏糖)，而多糖包括六个或以上的单糖单元。示例性的多糖包括淀粉、糖原和纤维素。碳水化合物可包含经修饰的糖单元，例如2'-去氧核糖(其中羟基被除去)、2'-氟代核糖(其中羟基被氟取代)或N-乙酰葡萄糖胺(含氮形式的葡萄糖)。(例如2'-氟代核糖、去氧核糖和己糖)。碳水化合物可以许多不同的形式存在，例如构型异构体、环状形式、非环状形式、立体异构体、互变异构体、端基异构体和同分异构体。
附图说明
图1示出使用皂苷和PEK抗原或不使用PEK抗原获得的IFNγ(左2组)和IL-2(右2组)分泌细胞个数的图示，在第三次投药后一周时以ELISpot检测得。
图2示出第三次投药皂苷一周后T细胞的活化，于整体脾脏的CD3+T细胞中，IFNγ+(y轴)对CD4+或CD8+(x轴)细胞的百分比。
图3示出第三次投药皂苷一周后T细胞的活化，于整体脾脏的CD3+T细胞中，IL-2+(y轴)对CD4+或CD8+(x轴)细胞的百分比。
图4示出第三次投药皂苷一周后T细胞的活化，于整体脾脏的CD3+T细胞中，TNFα+(y轴)对CD4+或CD8+(x轴)细胞的百分比。
图5示出T细胞群的流式细胞仪分析，在第三次投药本发明皂苷后一周时总T细胞群内的脾脏CD62L+(x轴)CD44+(y轴)的代表性散布图。将低CD62L且高CD44的细胞群分类为记忆T细胞，并示出活CD8+脾细胞表达IFN-γ、TNF-α或IL-2的频率。当阳性事件的频率超过对照组的平均值±平均值标准误差时，判定为细胞因子阳性。
图6示出第三次投药皂苷46-49、53-56、56α、57-62、64、66、77α、77β、78、79、83、92、95一周后T细胞的活化，其中合并脾细胞四重复反应孔中形成点的PEK特异性IFNγ+或IL-2或TNFα细胞的平均值。当阳性事件的频率超过对照组的平均值±平均值标准误差时，判定为细胞因子阳性。
图7示出E7特异性IgG抗体。以PEK/皂苷赋予C57BL/6小鼠免疫的每次免疫作用后收集血清，并通过ELISA测量血清中的E7蛋白特异性IgG抗体。记录每组血清经稀释10000倍后的OD450值。数值以平均值±平均值标准误差表示(n＝3)。
图8(A)为5天内小鼠体重中位数变化的百分比。数值以平均值±平均值标准误差表示(n＝5)。(B)为肝体细胞指数且(C)为脾体细胞指数，数值以平均值±平均值标准误差表示(n＝5)。接受增加剂量的皂苷佐剂56的小鼠的体重中位数变化百分比均小于5％。与对照组相比，所有实验组的脾体细胞指数和肝体细胞指数均无变化。这些数据表明，皂苷56作为疫苗佐剂是有效且安全的候选药物。
图9示出具有皂苷缀合物56的OVA疫苗的信号剂量对雌性C57BL/6小鼠的E.G7-OVA肿瘤的影响。
图10.将结合化合物56的流感疫苗经皮下及鼻内投药后，以小鼠流感(PR8)造成威胁下，小鼠的存活率。
图11.对小鼠皮下给药SARS-CoV-2(2ug或10ug)和佐剂(明矾和化合物56)的抗体效价。
具体实施方式
皂苷缀合物
本发明涉及如上定义的式(I)皂苷缀合物、其合成及其中间体。
式(I)皂苷缀合物可通过以下合成步骤合成。
步骤1-1：三糖供体的合成
三糖的合成从木糖基酰亚胺酯(xylosyl imidate)1和鼠李糖受体2的糖基化开始，通过BF3·OEt2路易斯酸催化以58％的产率得到二糖3(流程1)。之后，将硫代二糖(thio-disaccharide)3与岩藻糖4α偶合，以58％的产率提供所需的三糖5。此外，这两个糖基化步骤也可通过一锅法进行，首先使二糖3缀合，然后将岩藻糖4α和NIS依次添加到反应混合物中，得到三糖5。在室温下使用吗啉将三糖5选择性去保护，然后通过乙酐将其乙酰化。在氢解和酰亚胺酯的形成下进行所得的五乙酰化三糖6，以提供三糖供体10。优化三糖的方法首先使木糖1和鼠李糖7偶合以得到二糖8，然后水解和乙酰化而得到二糖9。通过二糖9和岩藻糖4α的糖基化得到三糖6，具有96％的优良产率。还通过二糖9和阿拉伯糖11α的糖基化以及随后的氢解和酰亚胺化反应，合成三糖12及13的酰亚胺酯衍生物。
流程1-描述三糖及其类似物的合成。
Figure GDA0003437676220000161
(流程1)
步骤1-2：四糖供体的合成
四糖的合成是使用TMSOTf处理葡萄糖苷基酰亚胺酯(glucosyl imidate)15和鼠李糖苷14，以51％的产率得到具有正确β-(1→3)连接的二糖16(流程2)。进行硫基水解及酰亚胺酯形成后获得二糖酰亚胺酯供体17，然后与岩藻糖4α反应得到三糖18，然后将其用DDQ处理以除去PMB保护基。将得到的三糖受体19进一步与木糖基供体1缀合以获得四糖20。在通过NMR质谱确认结构之后，将四糖20进行氢解和酰亚胺酯的形成，以提供四糖酰亚胺酯21和22。
流程2-描述四糖及其类似物的合成。
Figure GDA0003437676220000171
(流程2)
步骤2：三萜建构模块的合成
首先将烯丙基基团引入C-28羧酸中，得到皂皮酸酯(quillaic ester)20和刺囊酸酯(echinocystic ester)21(流程3)。为了提高3-O糖基化的选择性，通过三步合成进一步以三乙基硅烷基(triethylsilyl，TES)基团保护二醇20上的16-OH基团：选择性3-O乙酰化，将TES加在16-OH上，然后进行去乙酰化，通过这3个步骤得到60％的皂皮酸酯25。
流程3-描述三萜建构模块及其类似物的合成。
Figure GDA0003437676220000181
(流程3)
步骤3：经保护的二糖链皂苷(bisdesmosidic saponins)的合成
对于葡萄糖醛酸建构模块，合成具有苯甲酰基(benzoyl，Bz)、异丁酰基(isobutyryl，iPrCO)和三甲基乙酰基(pivaloyl，Piv)基团的葡萄糖醛酸苷。(流程4)。溴化葡萄糖醛酸酯(glucoronate bromide)26与硫代甲苯(thiotoluene)反应生成硫代葡萄糖醛酸苷(thio-glucuronide)27。此后，对化合物27进行去乙酰化并以苯甲酰氯、异丁酰氯和三甲基乙酰基氯化物进行酰化，得到28-30。接着以氧化去除硫基，然后形成三氯乙酰亚胺酯，则葡萄糖醛酸酰亚胺酯(glucuronate imidates)31-33可容易地与皂皮酸偶合。苯甲酰化供体31与皂皮酸酯23的偶合主要形成原酸酯。原酸酯的形成可归因于平面构型2-O-苯甲酰基缺乏立体障碍造成。因此，引入异丁酰化葡萄糖醛酸酯32，以在羰基位置附近建立屏障。成功以21％产率得到产物但原酸酯产物仍占47％，即使如此，该结果仍鼓励我们使用立体障碍更大的三甲基乙酰基。最后，使用三甲基乙酰化供体33成功地以48％的产率获得缀合产物34，并且回收29％的皂皮酸酯23。此外，刺囊酸酯24与苯甲酰化葡萄糖醛酸酯31的反应成功地以72％的产率获得产物36。
而后为了使C-28羧酸脱保护，首先在碱性条件下加热水解苯甲酰基、三甲基乙酰基和甲氧基。然后将所得到的中间体进行羧酸基苄化及羟基三乙基硅化(triethylsilylation)，得到完全受保护的皂皮酸酯37和刺囊酸酯38。此外，基于1H NMR的耦合常数分析，我们注意到葡萄糖醛酸酯的4C1构型翻转为1C4。葡萄糖醛酸苷34的H-1’-H-2’之间的原始耦合常数从J H-1’-H-2’＝7.8Hz降到TES-保护化合物37的J H-1’-H-2’＝4.2Hz，同时也观察到该葡萄糖醛酸苷上其他氢耦合常数降低的现象。为了进一步获得葡萄糖醛酸苷受体，在温和的酸性环境下通过Pd(OAc)2催化水解O-烯丙基酯，得到化合物39和40。在-75℃、以BF3·OEt2促进下，进行寡糖13和葡萄糖醛酸苷39的结合，从而以94％的优良产率获得41β。含阿拉伯糖的三糖13与皂皮酸39的偶合产生42β和42α，产率分别为75％和16％。同样，通过将酰亚胺酯10与刺囊酸(echinocystic acid)40糖基化，也能以96％的优异产率获得刺囊酸酯43(β)。将四糖供体21与皂皮酸39进行偶合，得到在TLC分析的下端基异构比(anomeric ratio)为β/α～1/1的产物44。随后使用N-苯基三氟乙酰亚胺酯22；结果，以46％的产率成功获得主要产物皂苷44β。
流程4-演示化合物41-44的制备。
Figure GDA0003437676220000201
(流程4)
步骤4：结合酰胺并完全去保护的皂苷的合成
41β氢解后，用HBTU/DIPEA偶合系统连续进行酰胺键形成，得到一系列缀合酰胺。之后，将产物进行酸水解和甲醇分解，以提供我们的目标皂苷。流程5中的代表性皂苷包含从甲基到十八烷基的不同长度的脂族碳链、各种芳基脂族、杂芳基脂族、杂环脂族化合物。
流程5-演示根据本发明实施例的式(I)的制备。
Figure GDA0003437676220000211
(流程5)
步骤5：皂苷类似物的合成
皂苷的合成含有α-方向的三糖部分(化合物56α，流程6)。以L-阿拉伯糖取代D-岩藻糖，得到皂苷77α/β端基异构体。合成刺囊酸酯78，并导出β-连接的四糖酯(β-linkedtetrasaccharide ester)79。
流程6-演示根据本发明实施例的皂苷类似物的制备。
Figure GDA0003437676220000221
(流程6)
疫苗组合物
另一方面，本申请涉及一种疫苗组合物，其包含抗原及作为佐剂的本申请皂苷类似物。在一些实施例中，该疫苗组合物进一步包含其他佐剂。
本申请疫苗组合物可用为在个体中针对抗原诱导主动免疫的疫苗。可能经历本发明组合物的有益作用的任何动物，都在可治疗的个体的范围内。在一些实施例中，该个体是哺乳动物。在一些实施例中，该个体是人类。
疫苗(或其引出的抗血清)的给药可能是出于“预防”或“治疗”目的。疫苗的预防性给药用于预防或减轻疾病的任何后续表现。预防性地提供疫苗，是在任何疾病症状之前提供。治疗性地提供疫苗，是在检测出动物可能感染病原或患有某种癌症的症状时或之后提供。疫苗的治疗性给药可减缓任何实际的疾病表现。因此，可在疾病开始扩散之前或在实际开始扩散之后提供疫苗。
因此，一方面，本发明提供一种疫苗，其包含一种或多种细菌、病毒、原生动物或肿瘤相关抗原以及一种或多种本发明化合物。在一些实施例中，该疫苗包含与一种本发明化合物组合的单一细菌、原生动物、病毒或肿瘤相关抗原。在一些实施例中，该疫苗包含与一种本发明化合物组合的两种或更多种细菌、病毒、原生动物或肿瘤相关抗原。在一些实施例中，该疫苗包含与两种或更多种本发明化合物组合的单一细菌、病毒、原生动物或肿瘤相关抗原。
在一些实施例中，所提供的疫苗中的一种或多种抗原是细菌抗原。在某些实施例中，该细菌抗原是与细菌相关的抗原，所述细菌选自由百日咳鲍特氏菌(Bordetellapertussis)、副百日咳鲍特氏菌(Bordetella parapertussis)、支气管炎鲍特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、疏螺旋体属(Borrelia spp.)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、链球菌属(Streptococcus spp.)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、草绿色链球菌(Streptococcus viridans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、沙门氏菌属(Salmonella spp.)、伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphi)、霍乱弧菌(Vibrio cholera)、鼠疫巴氏杆菌(Pasteurella pestis)、弯曲杆菌属(Campylobacter spp.)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)、梭菌属(Clostridiumspp.)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、白喉棒状杆菌(Corynebacteriumdiphtheria)、分枝杆菌属(Mycobacterium spp.)、结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、密螺旋体属(Treponemaspp.)、钩端螺旋体属(Leptospria spp.)、杜克雷氏嗜血杆菌(Hemophilus ducreyi)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、志贺氏杆菌属(Shigella spp.)、埃立克体属(Ehrlichia spp.)、立克次体属(Rickettsia spp.)及其组合所组成的组。
在某些实施例中，所提供的疫苗中的一种或多种抗原是病毒相关抗原。在某些实施例中，该病毒相关抗原是与病毒相关的抗原，所述病毒选自由流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腺病毒、呼吸道融合性病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus；EBV)、鼻病毒、脊髓灰白质炎病毒、柯萨奇病毒(coxsackievirus)、埃柯病毒(echo virus)、麻疹病毒、风疹病毒、水痘带状疱疹病毒、疱疹病毒、疱疹单纯型病毒、微小病毒、巨细胞病毒、肝炎病毒、人类乳突病毒、阿尔法病毒(alphavirus)、黄病毒、布尼亚病毒(bunyavirus)、狂犬病病毒、沙状病毒、丝状病毒、HIV-1、HIV-2、HTLV-1、HTLV-II、猫白血病病毒(felineleukemia virus，FeLV)、牛白血病病毒(bovine leukemia virus，bovine LV)、猫免疫缺陷病毒(feline immunodefiency virus，FeIV)、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒(caninecontagious hepatitis virus)、猫杯状病毒、猫鼻气管炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、口蹄疫病毒、冠状病毒、登革热病毒及其组合所组成的组。
在某些实施例中，所提供的疫苗中的一种或多种抗原是肿瘤相关抗原。在一些实施例中，肿瘤相关抗原是选自以下组的抗原：已杀死的肿瘤细胞及其溶胞产物；
MAGE-1、MAGE-3及其肽片段；人绒毛膜促性腺激素及其肽片段；癌胚胎抗原及其肽片段；甲胎蛋白及其肽片段；胰胚胎抗原(pancreatic oncofetal antigen，POA)及其肽片段；前列腺特异性抗原及其肽片段；MUC-1及其肽片段；CA125、CA 15-3、CA 19-9、CA549、CA195及其肽片段；前列腺特异性膜抗原及其肽片段；扁平上皮细胞癌相关抗原及其肽片段；卵巢癌抗原及其肽片段；胰脏癌相关抗原及其肽片段；Her1/neu及其肽片段；gp-100及其肽片段；突变型K-Ras蛋白及其肽片段；突变型p53及其肽片段；截短型表皮生长因子受体(truncated epidermal growth factor receptor)、嵌合蛋白p210BCR-ABL、STn、Tn、Lewisx、Lewisy、TF、GM1、GM2、GD2、GD3、Gb3、KH-1、Globo-H、SSEA-4；及其混合物。
如上所述，所提供的化合物可与肿瘤相关抗原结合，用为癌症疫苗中的佐剂。在某些实施例中，疫苗可用于治疗或预防肿瘤。在某些实施例中，所述肿瘤是良性肿瘤。在其他实施例中，所述肿瘤是恶性肿瘤。使用本发明化合物与抗原可治疗任何癌症。
另一方面，本申请涉及使用本申请疫苗组合物使个体免疫的方法。
制剂
本申请皂苷类似物可与医药学上可接受的赋形剂组合以形成药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物包含医药学上可接受量的本发明化合物。可与载体材料组合产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主和特定的给药方式而变化。可与载体材料组合产生单一剂型的活性成分的量通常是能产生治疗作用的化合物的量。通常，该量为约1％至约99％的活性成分，优选为约5％至约70％，最优选为约10％至约30％。
该组合物中也可包含润湿剂、乳化剂和润滑剂，例如硫酸月桂酯钠和硬脂酸镁，以及着色剂、控释剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。
本发明制剂包括适于口服、经鼻、局部、经直肠、经阴道及/或肠胃外给药的制剂。所述制剂可便于以单位剂型存在并且可通过药学领域中众所周知的任何方法制备。在某些实施例中，本发明制剂包含赋形剂及本发明化合物，该赋形剂选自由环糊精、脂质体、胶微粒形成剂(例如胆酸)和聚合物载体(例如聚酯和聚酸酐)所组成的组。在某些实施例中，前述制剂使本发明化合物可口服生物相容。
适于经口给药的本发明制剂可以是胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂(tablets)、口含片(使用调味基料，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、粉剂、颗粒剂，或为于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或水中油或油中水液体乳液，或酏剂或糖浆剂，或锭剂(pastilles)(使用惰性基质，例如明胶及甘油，或蔗糖及阿拉伯胶)，及/或漱口水等形式，其各自含有预定量的本发明化合物作为活性成分。本发明化合物也可以大丸剂、药糖剂或糊剂的形式给药。
本申请制剂可口服、肠胃外、局部或经直肠给予。当然，其以适合每种投药途径的形式给予。例如，以片剂或胶囊形式给药；通过注射、吸入、眼药水、软膏、栓剂等给药；通过注射、输注或吸入给药；通过洗剂或软膏局部给药；及经直肠给药栓剂。
不论选择何种给药途径，本申请皂苷类似物可以合适的水合形式使用，且/或本发明药物组合物可通过本领域技术人员已知的周知方法配制成医药学上可接受的剂型。可改变本发明药物组合物中活性成分的实际剂量浓度，以获得对特定患者、组合物和给药方式有效达到所需治疗反应的量的活性成分，而对患者不具毒性。
剂量浓度的选择将取决于多种因素，包括：所使用的本发明特定化合物或其酯、盐或酰胺的活性；给药途径；给药时间；所用特定化合物的排泄率或代谢率；治疗持续时间；与所用特定化合物组合使用的其他药物、化合物及/或物质；所治疗患者的年龄、性别、体重、病状、一般健康状况和先前病史；及医学领域中众所周知的因素。
具有本领域普通技术的医师或兽医可容易地判断并开出所需药物组合物的有效量。例如，医师或兽医可将低于达到期望治疗效果所需水平的浓度作为药物组合物中所用本发明化合物的起始剂量，然后逐渐增加剂量直至达到期望效果。
实施例
提供以下实施例以说明本发明的某些方面，并帮助本领域技术人员实施本发明。这些实施例并非限制本发明的范围。
除非另有说明，否则所有试剂和溶剂均为试剂级，无须进一步纯化即可使用。分子筛在使用前于200℃活化。使用对茴香醛、茚三酮和钼酸铈铵(cerium ammoniummolybdate)作为显影剂，在0.25mm的硅胶60F254(Merck Millipore)上进行薄层色谱分析以监测反应进展。采用230-400目硅胶进行快速柱色谱法。
仪器
使用Bruker-AV-400(400MHz)和Bruker-AV-600(600MHz)获得NMR质谱。化学位移(δ)的单位为ppm，相对于CDCl3的1H：7.26ppm，13C：77.0ppm；相对于CD3OD的1H：3.31ppm，13C：49.0ppm。分裂形式为单峰以s表示，二重峰以d表示，三重峰以t表示，四重峰以q表示，多重峰以m表示。耦合常数(J)以赫兹(Hertz，Hz)为单位。逆向高效液相色谱法(reverse phaseHPLC)纯化和分析采用配备有自动采样器L-2200、UV检测器L-2420和泵L-2130的HITACHID-2000Elite HPLC系统，或配备有系统控制器CBM-20A、光电二极管阵列检测器SPD-M20A、泵LC-20AT和自动采样器SIL-20AHT的SHIMADZU HPLC系统。以VG platform电喷雾电游离质谱仪或BioTOF II进行精确的质量测量。
合成例I
Figure GDA0003437676220000261
对甲基苯基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2-O-乙酰基-3-O-芴基甲氧基羰基-1-硫代-α-L-吡喃鼠李糖苷(3)
于-40℃和N2气体环境下将BF3·OEt2(约48％,11μL,0.08mmol)添加至1(137mg,0.33mmol)、2(87mg,0.16mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000263
分子筛粉末在无水CH2Cl2(1.6mL)中经搅拌的悬浮液中。3小时后反应完成后，加入饱和NaHCO3以淬灭混合物，然后加热至室温。将所得混合物以MgSO4干燥并在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/4至1/2)将残留物纯化，得到无色浆体状的3(75mg,58％)：Rf 0.36(EtOAc/己烷＝1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.78(d,J＝7.5Hz,2H),7.64(dd,J＝19.0,7.4Hz,2H),7.45–7.41(m,2H),7.39–7.34(m,4H),7.12(d,J＝8.0Hz,2H),5.54(dd,J＝3.4,1.4Hz,1H,H-2),5.33(d,J＝1.4Hz,1H,H-1),5.21(t,J＝9.4Hz,1H,H-3’),5.08(dd,J＝9.6,3.4Hz,1H,H-3),4.99(td,J＝9.4,5.4Hz,1H,H-4'),4.95(dd,J＝9.4,7.6Hz,1H,H-2’),4.79(d,J＝7.6Hz,1H,H-1’),4.57(dd,J＝13.4,10.1Hz,1H,Fmoc CH2 ),4.35–4.31(m,2H,Fmoc CH2 and CH),4.28–4.25(m,1H,H-5),4.14(dd,J＝11.8,5.4Hz,1H,H-5a’),3.84(t,J＝9.5Hz,1H,H-4’),3.40(dd,J＝11.8,9.5Hz,1H,H-5b’),2.33(s,3H),2.16(s,3H),2.05(s,3H),2.03(s,3H),1.91(s,3H),1.35(d,J＝6.2Hz,3H,H-6)；13C NMR(151MHz,CDCl3)δ
167.0,169.9,169.8,169.5,154.0,143.4,143.1,141.3,141.2,138.2,132.6,129.9,129.3,128.0,127.3,125.2,125.0,120.1,120.0,100.8(C-1’),85.8(C-1),76.1(C-3),75.9(C-4),72.2(C-3’),71.3(C-2’),71.2(C-2),70.6(Fmoc CH2),69.3(C-4’),68.1(C-5),62.5(C-5’),46.6(Fmoc CH),21.1,20.9,20.7,20.7,20.5,17.5(C-6)ppm；C41H44O14SNa[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值815.2349，实测值815.2352。
Figure GDA0003437676220000262
苄基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2-O-乙酰基-3-O-芴基甲基氧基羰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(5)
于-50℃和N2气体环境下将NIS(1.12g,4.99mmol)及BF3·OEt2(0.38mL,1.42mmol)添加至4α(1.05g,3.57mmol)、3(3.40g,4.28mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000264
分子筛粉末在无水CH2Cl2(2mL)中经搅拌的悬浮液中。1小时后反应完成后，加入饱和NaHCO3和10％Na2S2O3水溶液以淬灭反应。将反应混合物加热至室温，搅拌1小时，然后过滤。将滤液用CH2Cl2稀释，用10％Na2S2O3(aq.)、饱和NaHCO3、盐水洗涤，以MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝1/1/6至1/1/4)将残留物纯化，得到白色泡沫状的5(2.00g,58％)：Rf0.44(EtOAc/CH2Cl2/己烷＝1/1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.78(d,J＝7.5Hz,2H),7.67(d,J＝7.4Hz,1H),7.63(d,J＝7.5Hz,1H),7.42(t,J＝7.4Hz,2H),7.42(t,J＝7.4Hz,2H),7.39–7.27(m,5H),5.50–5.46(m,1H,H-2’),5.19(t,J＝9.2Hz,1H,H-3”),5.12–5.10(m,2H,H-1’,H-3’),4.99(td,J＝9.2,5.5Hz,1H,H-4”),4.94(dd,J＝9.2,7.6Hz,1H,H-2”),4.82(d,J＝3.5Hz,1H,H-1),4.77(d,J＝7.5Hz,1H,H-1”),4.71(d,J＝12.3Hz,1H,Bn CH2 ),4.60–4.51(m,2H,Bn CH2 ,Fmoc CH2 ),4.37–4.31(m,2H,H-3,Fmoc CH),4.28(dd,J＝10.0,8.1Hz,1H,Fmoc CH2 ),4.17–4.09(m,2H,H-5,H-5a”),4.02(dd,J＝5.3,2.4Hz,1H,H-4),3.76(dd,J＝8.1,3.5Hz,1H,H-2),3.72(t,J＝9.6Hz,1H,H-4’),3.65–3.60(m,1H,H-5’),3.40(dd,J＝11.6,9.7Hz,1H,H-5b”),2.18(s,3H),2.05(s,3H),2.01(s,3H),1.86(s,3H),1.50(s,3H),1.34(d,J＝6.7Hz,3H,H-6),1.32(s,3H),1.18(d,J＝6.2Hz,3H,H-6’)；C50H58O19Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值985.3463，实测值985.3476。
Figure GDA0003437676220000271
苄基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(6)
在室温下添加吗啉(0.5mL)至经搅拌的5(100mg,0.10mmol)在CH2Cl2(5mL)中的悬浮液中。1.5小时后反应完成后，将反应混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NH4Cl、饱和NaHCO3、盐水洗涤，用MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/1至3/2)将残留物纯化，得到芴基甲基氧基羰基(Fmoc)-去保护的产物(72mg,95％)。在室温和N2气体环境下添加Ac2O(91μL,0.96mmol)、Et3N(201μL,1.4mmol)和DMAP(6mg,0.048mmol)至Fmoc去保护的产物(462mg,0.48mmol)在无水CH2Cl2(10mL)中经搅拌的溶液中。2小时后反应完成后，将反应物用CH2Cl2稀释，用H2O、盐水洗涤，用MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝2/3)将残留物纯化，得到白色泡沫状的6(391mg,96％)：Rf 0.48(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.38–7.27(m,5H),5.32(dd,J＝3.5,1.6Hz,1H,H-2’),5.26(dd,J＝9.3,3.5Hz,1H,H-3’),5.13(t,J＝9.3Hz,1H,H-3”),5.05(d,J＝1.5Hz,1H,H-1’),4.96(td,J＝9.3,5.4Hz,1H,H-4”),4.91–4.87(dd,J＝9.3,7.6Hz,1H,H-2”),4.80(d,J＝3.6Hz,1H,H-1),4.71(d,J＝12.3Hz,1H,Bn CH2 ),4.63(d,J＝7.6Hz,1H,H-1”),4.54(d,J＝12.3Hz,1H,Bn CH2 ),4.34(dd,J＝8.1,5.4Hz,1H,H-3),4.14(qd,J＝6.7,2.5Hz,1H,H-5),4.10(dd,J＝11.7,5.4Hz,1H,H-5a”),4.02(dd,J＝5.4,2.5Hz,1H,H-4),3.74(dd,J＝8.1,3.6Hz,1H,H-2),3.62–3.54(m,2H,H-4’,H-5’),3.33(dd,J＝11.7,9.5Hz,1H,H-5b”),2.13(s,3H),2.08(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,6H),1.49(s,3H),1.34(d,J＝6.7Hz,3H,H-6),1.32(s,3H),1.14(d,J＝5.6Hz,3H,H-6’)ppm；C37H50O18Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值805.2889，实测值805.2898。
Figure GDA0003437676220000281
三氯亚氨代乙酰基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α/β-D-吡喃岩藻糖苷(10)
在室温下H2(气球)气体环境下搅拌6(1.26g,1.6mmol)和10％Pd/C(0.2g)在磷酸盐缓冲液(100mM Na2HPO4/NaH2PO4(aq.),pH＝7.0)/THF/MeOH＝1/1/4(30mL)中的悬浮液。搅拌3天后，将混合物以硅藻土过滤并在减压下浓缩。将残留物用CH2Cl2稀释，用H2O、盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，然后以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/1至3/2)纯化，得到半缩醛(0.79g,71％)，为无色浆体。在室温和N2气体环境下添加Cl3CCN(16μL,0.16mmol)和DBU(3μL,0.021mmol)至半缩醛(36mg,0.48mmol)在无水CH2Cl2(1mL)中经搅拌的溶液中。搅拌1.5小时后，以TLC分析确认反应完成，在减压下浓缩混合物。以快速柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/1至3/2，包含0.5％Et3N)将残留物纯化，得到黄色浆体状的10(34mg,78％)。10α:Rf0.46(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.67(s,1H),6.30(d,J＝3.5Hz,1H,H-1),5.24(dd,J＝3.3,1.8Hz,1H,H-2’),5.14–5.08(m,2H,H-3’,H-3”),5.03(d,J＝1.8Hz,1H,H-1’),4.93(td,J＝9.4,5.4Hz,1H,H-4”),4.86(dd,J＝9.4,7.7Hz,1H,H-2”),4.58(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”),4.40(dd,J＝7.8,5.4Hz,1H,H-3),4.32(qd,J＝6.7,2.5Hz,1H,H-5),4.12–4.07(m,2H,H-5a”,H-4),3.91(dd,J＝7.8,3.5Hz,1H,H-2),3.81(dq,J＝9.6,6.2Hz,1H,H-5’),3.60(t,J＝9.6Hz,1H,H-4’),3.31(dd,J＝11.7,9.7Hz,1H,H-5b”),2.13(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.00(s,3H),1.95(s,3H),1.52(s,3H),1.38(d,J＝6.7Hz,3H,H-6),1.34(s,3H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H,H-6’)。
Figure GDA0003437676220000282
对甲基苯基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-1-硫代-α-L-吡喃鼠李糖苷(9)
将8(4.6g,8.1mmol)在80％AcOH(100mL)中经搅拌的溶液加热至60℃，加热12小时。使所得混合物蒸发，然后在减压下与甲苯(50mL)共沸蒸馏两次。在高真空下干燥后，在室温和N2气体环境下用Ac2O(2.2mL,23mmol)、Et3N(5.2mL,38mmol)和DMAP(9mg,0.074mmol)在CH2Cl2中的溶液处理粗制浆体。2小时后反应完成后，将混合物用CH2Cl2稀释，用H2O、盐水洗涤，以MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝2/3)将残留物纯化，得到白色固体状的9(3.8g,76％)：Rf 0.19(EtOAc/己烷＝1/2)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(d,J＝7.9Hz,2H),7.11(d,J＝7.8Hz,2H),5.39(brs,1H,H-2),5.26(brs,1H,H-1),5.22(dd,J＝9.6,3.1Hz,1H,H-3),5.14(t,J＝9.2Hz,1H,H-3’),5.00–4.93(m,1H,H-4’),4.90(dd,J＝9.2,7.6Hz,1H,H-2’),4.66(d,J＝7.6Hz,1H,H-1’),4.24(dq,J＝9.6,6.1Hz,1H,H-5),4.12(dd,J＝11.6,5.3Hz,1H,H-5a’),3.72(t,J＝9.6Hz,1H,H-4),3.39–3.30(m,1H,H-5b’),2.31(s,3H),2.11(s,3H),2.09(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,6H,Ac×2),1.31(d,J＝6.1Hz,3H)ppm；C28H36O13SNa[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值635.1769，实测值635.1774。
Figure GDA0003437676220000291
苄基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β-L-吡喃阿拉伯糖苷(12)
在-50℃和N2气体环境下添加NIS(0.23g,1.0mmol)和TMSOTf(12μL,0.066mmol)至9(500mg,0.82mmol)、11α(190mg,0.68mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000292
分子筛粉末在无水CH2Cl2(7mL)中经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，加入Et3N、饱和NaHCO3和10％Na2S2O3水溶液以淬灭反应。在室温下加热并搅拌1小时后，将反应混合物过滤，用CH2Cl2稀释，用10％Na2S2O3水溶液、饱和NaHCO3、盐水洗涤，以MgSO4干燥，并在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝2/3至1/1)将残留物纯化，得到白色泡沫状的12(412mg,79％)：Rf 0.25(EtOAc/己烷＝2/3)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.38–7.28(m,5H),5.32(dd,J＝3.4,1.4Hz,1H,H-2’),5.26(dd,J＝9.2,3.4Hz,1H,H-3’),5.13(t,J＝9.2Hz,1H,H-3”),5.05(s,1H,H-1’),4.96(td,J＝9.2,5.5Hz,1H,H-4”),4.90(dd,J＝9.2,7.7Hz,1H,H-2”),4.82(d,J＝3.4Hz,1H,H-1),4.73(d,J＝12.3Hz,1H,Bn CH2 ),4.63(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”),4.53(d,J＝12.3Hz,1H,Bn CH2 ),4.36(dd,J＝7.9,5.6Hz,1H,H-3),4.20(d,J＝5.6Hz,1H,H-4),4.10(dd,J＝11.7,5.5Hz,1H,H-5a”),3.98(brs,2H,H-5),3.75(dd,J＝7.9,3.4Hz,1H,H-2),3.61–3.54(m,2H,H-4’,H-5’),3.33(dd,J＝11.7,9.6Hz,1H),2.14(s,3H),2.08(s,3H),2.03(s,3H),2.02–2.01(m,6H,Ac CH3 ×2),1.50(s,3H),1.32(s,3H),1.14(d,J＝5.7Hz,3H)ppm；C36H48O18Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值791.2733，实测值791.2735。
Figure GDA0003437676220000301
三氯亚氨代乙酰基2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α/β-L-吡喃阿拉伯糖苷(13)
在室温和H2(气球)气体环境下搅拌12(300mg,0.39mmol)和10％Pd/C(150mg)在缓冲液(100mM Na2HPO4/NaH2PO4(aq.),pH＝7.0)/THF/MeOH＝1/1/4(30mL)中的悬浮液。搅拌3.5天后，将混合物以硅藻土过滤并在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/1至3/2)将残留物纯化，得到半缩醛(166mg,63％)，为白色泡沫。在室温和N2气体环境下添加Cl3CCN(22μL,0.22mmol)和DBU(4.3μL,0.029mmol)至半缩醛(50mg,0.074mmol)在无水CH2Cl2(1.5mL)中经搅拌的溶液中。搅拌16小时后，将混合物在减压下浓缩。以快速柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/1，包含0.5％Et3N)将所得残留物纯化，得到无色浆体状的13(60mg,98％)。100α:Rf 0.43(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.69(s,1H,NH),6.30(d,J＝3.4Hz,1H,H-1),5.24(dd,J＝3.2,1.3Hz,1H,H-2’),5.14–5.08(m,2H,H-3’,H-3”),5.02(d,J＝1.3Hz,1H,H-1’),4.93(td,J＝9.4,5.4Hz,1H,H-4”),4.85(dd,J＝9.5,7.7Hz,1H,H-2”),4.58(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”),4.42(dd,J＝7.6,5.7Hz,1H,H-3),4.31–4.26(m,1H,H-4),4.12(d,J＝1.8Hz,2H,H-5),4.09(dd,J＝11.7,5.4Hz,1H,H-5a”),3.91(dd,J＝7.6,3.4Hz,1H,H-2),3.80(dq,J＝9.5,6.2Hz,1H,H-5’),3.60(t,J＝9.5Hz,1H,H-4’),3.31(dd,J＝11.7,9.4Hz,1H,H-5b”),2.13(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.00(s,3H),1.95(s,3H),1.52(s,3H),1.35(s,3H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H,H-6’)ppm。
Figure GDA0003437676220000302
对甲基苯基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙酰基-4-O-(对甲氧基苄基)-1-硫代-α-L-吡喃鼠李糖苷(16)
在-50℃和N2气体环境下添加TMSOTf(10μL,0.052mmol)至15(130mg,0.26mmol)、14(114mg,0.26mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000303
分子筛粉末在无水CH2Cl2(2.5mL)中经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，加入Et3N以淬灭反应，加热至室温，过滤，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/2)将残留物纯化，得到白色泡沫状的16(102mg,51％)：Rf0.24(EtOAc/己烷＝1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.29–7.27(m,4H),7.08(d,J＝8.0Hz,2H),6.89(d,J＝8.7Hz,2H),5.39(dd,J＝3.4,1.4Hz,1H,H-2),5.30(d,J＝1.4Hz,1H,H-1),5.18(t,J＝9.7Hz,1H,H-3’),5.06(dd,J＝9.7,8.0Hz,1H,H-2’),5.03(t,J＝9.7Hz,1H,H-4’),4.79(d,J＝8.0Hz,1H,H-1’),4.71(d,J＝10.5Hz,1H),4.46(d,J＝10.5Hz,1H),4.19–4.13(m,2H),4.09(dd,J＝12.2,2.2Hz,1H’),4.06(dd,J＝9.5,3.4Hz,1H),3.79(s,3H,3.70(ddd,J＝9.7,5.7,2.2Hz,1H,H-5’),3.48(t,J＝9.5Hz,1H,H-4),2.29(s,3H),2.10(s,3H),2.09(s,3H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.83(s,3H),1.25(d,J＝6.2Hz,3H,H-6)ppm；C37H46O15SNa[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值785.2450，实测值785.2457。
Figure GDA0003437676220000311
三氯亚氨代乙酰基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙酰基-4-O-(对甲氧基苄基)-α/β-L-吡喃鼠李糖苷(17)
在室温下添加NBS(35mg,0.19mmol)于16(37mg,0.049mmol)在丙酮/H2O(1mL)中经搅拌的溶液中。搅拌2小时后，加入饱和NaHCO3和10％Na2S2O3(aq.)以淬灭混合物。在室温下搅拌所得混合物1小时，然后在减压下除去溶剂。将残留物用CH2Cl2稀释，用10％Na2S2O3(aq.)、饱和NaHCO3、盐水洗涤，用MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝3/2)将残留物纯化，得到半缩醛(26mg,82％)，为无色浆体。在室温和N2气体环境下添加Cl3CCN(12μL,0.12mmol)和DBU(2.4μL,0.016mmol)至半缩醛(26mg,0.040mmol)在无水CH2Cl2(1mL)中经搅拌的溶液中。搅拌1小时后，将混合物在减压下浓缩。以快速柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/2，包含0.5％Et3N)将残留物纯化，得到白色泡沫状的17(25mg,79％)。17：Rf 0.44(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(s,1H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),6.91(d,J＝8.4Hz,2H),6.15(s,1H,H-1),5.34(s,1H,H-2),5.20(t,J＝9.4Hz,1H,H-3’),5.12–5.06(m,2H,H-2’,H-4’),4.84(d,J＝7.9Hz,1H,H-1’),4.72(d,J＝10.3Hz,1H,PMB CH2 ),4.49(d,J＝10.3Hz,1H,PMB CH2 ),4.21–4.13(m,2H,H-3,H-6a’),4.09(t,J＝11.0Hz,1H,H6b’),3.89(dq,J＝9.6,6.1Hz,1H,H-5),3.81(s,3H,PMB OCH3 ),3.66(d,J＝9.7Hz,1H,H-5’),3.52(t,J＝9.6Hz,1H,H-4),2.15(s,3H),2.07(s,3H),2.01(s,3H),2.00(s,3H),1.88(s,3H),1.29(d,J＝6.1Hz,3H,H-6)ppm。
Figure GDA0003437676220000321
苄基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙酰基-4-O-(对甲氧基苄基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(18)
在-50℃和N2气体环境下添加TMSOTf(1μL,0.0062mmol)于17(25mg,0.31mmol)、4α(9mg,0.31mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000323
分子筛粉末在无水CH2Cl2(1.5mL)中经搅拌的悬浮液中。1小时后反应完成后，加入Et3N以淬灭反应，加热至室温，过滤，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝2/3)将残留物纯化，得到白色泡沫状的18(24mg,82％)：Rf 0.43(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.34(d,J＝7.2Hz,2H),7.29(t,J＝7.5Hz,2H),7.26–7.24(m,3H),6.89(d,J＝8.7Hz,2H),5.30(dd,J＝3.6,1.7Hz,1H,H-2’),5.16(t,J＝9.5Hz,1H,H-3”),5.09–5.04(m,H-2”,H-4”),5.03(d,J＝1.7Hz,1H,H-1’),4.85(d,J＝3.6Hz,1H,H-1),4.77(d,J＝7.9Hz,1H,H-1”),4.70(d,J＝10.8Hz,1H,PMB CH2 ),4.69(d,J＝12.2Hz,1H,Bn CH2 ),4.51(d,J＝12.2Hz,1H,Bn CH2 ),4.45(d,J＝10.8Hz,1H,PMB CH2 ),4.29(dd,J＝8.1,5.4Hz,1H,H-3),4.21(dd,J＝12.2,4.9Hz,1H,H-6a”),4.14–4.09(m,1H,H-5),4.08(dd,J＝9.5,3.6Hz,1H,H-3’),4.04–3.99(m,2H,H-4,H-6b”),3.81(s,3H,PMBOCH3 ),3.74(dd,J＝8.1,3.6Hz,1H,H-2),3.70–3.61(m,2H,H-5”,H-5’),3.40(t,J＝9.5Hz,1H,H-4’),2.10(s,3H),2.07(s,3H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.77(s,3H),1.48(s,3H),1.33(d,J＝6.7Hz,3H,H-6),1.31(s,3H),1.14(d,J＝6.2Hz,3H,H-6’)；C46H60O20Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值955.3570，实测值955.3579。
Figure GDA0003437676220000322
苄基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(19)
在室温下添加DDQ(9mg,0.039mmol)于18(24mg,0.026mmol)在CH2Cl2/H2O＝18/1(1mL)中经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌3小时，然后以饱和NaHCO3淬灭。所得混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/1)纯化，得到无色浆体状的19(17mg,81％)：Rf 0.30(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.37–7.29(m,5H),5.24(dd,J＝3.6,1.7Hz,1H,H-2’),5.20(t,J＝9.6Hz,1H,H-3”),5.04–4.99(m,3H,H-2”,H-1’,H-4”),4.87(d,J＝3.6Hz,1H,H-1),4.72(d,J＝12.1Hz,1H,Bn CH2 ),4.70(d,J＝7.8Hz,1H,H-1”),4.53(d,J＝12.1Hz,1H,BnCH2 ),4.30(dd,J＝8.2,5.3Hz,1H,H-3),4.22(dd,J＝12.3,5.0Hz,1H,H-6a”),4.12(qd,J＝6.7,2.6Hz,1H,H-5),4.05–4.03(m,2H,H-4,H-6b”),3.85(dd,J＝9.0,3.6Hz,1H,H-3’),3.74(dd,J＝8.2,3.6Hz,1H,H-2),3.71(ddd,J＝10.1,5.0,2.2Hz,1H,H-5”),3.63–3.56(m,2H,H-4’,H-5’),2.46(d,J＝2.2Hz,1H,OH),2.08(s,3H),2.07(s,3H),2.05(s,3H),2.02(s,3H),2.00(s,3H),1.48(s,3H),1.33(d,J＝6.7Hz,3H,H-6),1.32(s,3H),1.19(d,J＝5.7Hz,3H,H-6’)ppm；C38H52O19Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值835.2995，实测值835.3000。
Figure GDA0003437676220000331
苄基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4))-2-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(20)
在-50℃和N2气体环境下添加TMSOTf(0.4μL,0.0021mmol)于1(13mg,0.031mmol)、19(17mg,0.021mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000332
分子筛粉末在无水CH2Cl2(1mL)中经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，加入Et3N以淬灭反应，加热至室温，过滤，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/1)纯化，得到无色浆体状的20(20mg,89％)：Rf 0.27(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.39–7.30(m,5H),5.30(dd,J＝3.6,1.8Hz,1H,H-2’),5.16(t,J＝9.5Hz,1H,H-4”),5.11(t,J＝8.2Hz,1H,H-3”’),5.04–4.98(m,2H,H-2”,H-3”),4.96(d,J＝1.8Hz,1H,H-1’),4.91(td,J＝8.3,4.9Hz,1H,H-4”’),4.86(dd,J＝8.2,6.3Hz,1H,H-2”’),4.82(d,J＝3.6Hz,1H,H-1),4.80(d,J＝6.3Hz,1H,H-1”’),4.73(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”),4.69(d,J＝12.1Hz,1H,Bn CH2 ),4.50(d,J＝12.1Hz,1H,Bn CH2 ),4.25(dd,J＝8.2,5.3Hz,1H,H-3),4.16–4.09(m,2H,H-6a”,H-5),4.09–4.03(m,2H,H-5a”’,H-3’),4.03–3.99(m,2H,H-4,H-6b”),3.75(t,J＝9.5Hz,1H,H-4’),3.71–3.66(m,2H,H-2,H-5”),3.54(dq,J＝9.5,6.2Hz,1H,H-5’),3.37(dd,J＝11.9,8.3Hz,1H,H-5b”’),2.19(s,3H),2.08(s,3H),2.08(s,3H),2.08(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.99(s,3H),1.97(s,3H),1.46(s,3H),1.33(d,J＝6.7Hz,3H,H-6),1.29(s,3H),1.10(d,J＝6.2Hz,3H,H-6’)ppm；C49H66O26Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1093.3735，实测值1093.3734。
Figure GDA0003437676220000341
N-苯基-2,2,2-三氟亚氨代乙酰基2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4))-2-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-α/β-D-吡喃岩藻糖苷(22)
在室温和H2(气球)气体环境下搅拌20(255mg,0.24mmol)和20％Pd(OH)2/C(25mg)在THF(5mL)中的悬浮液。搅拌24小时后，将混合物通过硅藻土过滤并在减压下浓缩。将残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝3/2至2/1)纯化，得到半缩醛(180mg,77％)，为白色泡沫。在室温和N2气体环境下添加N-苯基-2,2,2-三氟亚氨代乙酰氯(N-phenyl-2,2,2-trifluoroacetimidoyl chloride,19μL,0.12mmol)和DBU(3.7μL,0.024mmol)于半缩醛(20mg,0.020mmol)在无水CH2Cl2(1mL)中经搅拌的溶液中。搅拌1.5小时后，将混合物在减压下浓缩。残留物以快速柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/1至3/2，包含0.5％Et3N)纯化，得到无色浆体状的22(16mg,68％)。22α：Rf 0.61(EtOAc/己烷＝3/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.33(t,J＝7.8Hz,2H),7.12(t,J＝7.4Hz,1H),6.85(d,J＝7.6Hz,2H),5.58(brs,1H,H-1),5.20(s,1H,H-1’),5.19–5.15(m,2H),5.10(t,J＝9.7Hz,1H),5.06(t,J＝7.0Hz,1H),4.99(dd,J＝9.3,7.9Hz,1H),4.92(d,J＝5.1Hz,1H,H-1”’),4.86(td,J＝6.9,4.2Hz,1H),4.80(dd,J＝6.7,5.3Hz,1H),4.72(d,J＝7.9Hz,1H,H-1”),4.23–4.08(m,5H),4.00–3.98(m,2H),3.89(brs,1H),3.84–3.77(m,2H),3.66–3.63(m,1H),3.45(dd,J＝12.1,7.0Hz,1H),2.16(s,3H),2.11(s,3H),2.09(s,3H),2.06(s,3H),2.04(s,4H),2.02(s,3H),1.99(s,3H),1.99(s,3H),1.53(s,3H),1.39(d,J＝6.3Hz,3H),1.32(s,3H),1.27(d,J＝5.6Hz,3H)ppm。
Figure GDA0003437676220000342
28-O-烯丙基-3-O-(甲基2,3,4-三-O-三甲基乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)皂皮酸酯(34)
在室温和N2气体环境下添加B(PhF5)3(42mg,0.083mmol)至33(500mg,0.83mmol)、23(435mg,0.83mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000343
分子筛粉末在无水CH2Cl2(8mL)中经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，加入Et3N以淬灭反应，过滤，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝1/1/6)纯化，得到白色固体状的34(385mg,48％)：Rf 0.57(EtOAc/己烷＝1:2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.40(s,1H,H-23),5.88–5.81(m,1H,烯丙基内部烯基CH),5.37(t,J＝3.3Hz,1H,H-12),5.31–5.27(m,2H,H-3’,烯丙基末端烯基CHa ),5.20–5.16(m,2H,H-4’,烯丙基末端烯基CHb ),4.98(t,J＝8.0Hz,H-2’),4.52–4.44(m,4H,H-1’,H-16,烯丙基CH2 ),3.99(d,J＝10.0Hz,1H,H-5’),3.84(dd,J＝11.8,4.7Hz,1H,H-3),3.72(s,3H,OCH3 ,3.05(dd,J＝14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.15(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.92–1.85(m,4H),1.80–1.70(m,4H),1.68–1.63(m,3H),,1.50–1.41(m,2H),1.35–1.28(m,4H),1.25–1.17(m,3H),1.14(s,9H),1.12–1.10(m,10H),1.09–1.08(m,12H),1.05–0.97(m,2H),0.96(s,3H),0.94(s,3H),0.89(s,3H),0.70(s,3H)ppm；C55H84O14Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值991.5753，实测值991.5758。
Figure GDA0003437676220000351
28-O-烯丙基-3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(37)
添加1.0N KOH(3mL)于34(358mg,0.37mmol)在THF(15mL)中经搅拌的溶液中，并在回流下加热66℃。将反应混合物搅拌24小时，然后冷却至室温。将反应混合物用AmberlystIR-120H+中和，过滤，浓缩并在减压下干燥。然后在室温下用DMF(7mL)中的溴化苄基(88μL,0.73mmol)和K2CO3(102mg,0.73mmol)处理残留物。搅拌2小时后，将反应混合物用CH2Cl2稀释，用H2O、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶，MeOH/CH2Cl2＝1/15)纯化，得到苄酯，为黄色固体。在室温和N2气体环境下添加TESOTf(0.6mL,2.7mmol)和2,6-二甲吡啶(0.4mL,3.4mmol)于苄酯(266mg,0.34mmol)在无水CH2Cl2(5mL)中经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌2小时，然后添加饱和NaHCO3以将其淬灭。将混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/40)纯化，得到无色浆体状的37(310mg,三步收率67％)：Rf 0.71(EtOAc/己烷＝1/10)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.34(s,1H,H-23),7.39–7.30(m,5H),5.90–5.80(m,1H,烯丙基内部烯基CH),5.35(s,1H,H-12),5.29(d,J＝17.2Hz,1H,烯丙基末端烯基CHa ),5.20(d,J＝10.7Hz,1H,末端烯基CHb ),5.17–5.15(m,2H,Bn CH2 ),4.58–4.57(m,2H,H-1’,H-16),4.53–4.40(m,2H,烯丙基CH2 ),4.27(dd,J＝6.2,4.9Hz,1H,H-4’),4.22(d,J＝6.2Hz,1H,H-5’),3.81(dd,J＝11.4,3.8Hz,1H,H-3),3.61(d,J＝4.9Hz,1H,H-3’),3.57(d,J＝3.4Hz,1H,H-2’),3.02(d,J＝11.6Hz,1H,H-18),2.23(t,J＝13.5Hz,1H,H-19),1.99(d,J＝10.8Hz,1H),1.91–1.79(m,4H),1.75–1.53(m,5H),1.48–1.31(m,5H),1.30–1.22(m,1H),1.20–1.23(m,3H),1.11–1.06(m,4H),1.03–0.85(m,47H),0.72–0.52(m,27H)ppm；C70H120O11Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1271.7800，实测值1271.7829。
Figure GDA0003437676220000361
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸(39)
在室温下将预混合的在1,4-二氧六环(2.5mL)中的甲酸(0.38mL,10mmol)/Et3N(1.3mL,9.6mmol)以及在1,4-二氧六环(2.5mL)中的Pd(OAc)2(54mg,0.24mmol)加入37(0.60g,0.48mmol)和PPh3(0.31g,1.2mmol)在1,4-二氧六环(5mL)中经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌12小时，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/6)纯化，得到白色泡沫状的39(0.48g,83％)：Rf 0.25(EtOAc/己烷＝1/6)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.36(s,1H,H-23),7.37–7.30(m,5H),5.34(t,J＝3.4Hz,1H,H-12),5.16(s,2H,BnCH2 ),4.59(d,J＝4.4Hz,1H,H-1’),4.53(s,1H,H-16),4.28(dd,J＝6.2,5.3Hz,1H,H-4’),4.22(d,J＝6.2Hz,1H,H-5’),3.82(dd,J＝11.8,4.6Hz,1H,H-3),3.61(d,J＝5.3Hz,1H,H-3’),3.58(d,J＝4.4,1H,H-2’),2.95(dd,J＝14.3,4.0Hz,1H,H-18),2.21(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),2.03–1.95(m,1H),1.90–1.80(m,4H),1.78–1.61(m,4H),1.57(d,J＝13.4Hz,1H),1.47–1.37(m,2H),1.35(s,3H),1.27(d,J＝13.6Hz,1H),1.21–1.12(m,3H),1.10–1.03(m,4H),1.02–0.87(m,46H),0.70–0.53(m,27H)ppm；C67H116O11Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1231.7487，实测值1231.7507。
Figure GDA0003437676220000362
28-O-烯丙基-3-O-(甲基2,3,4-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)刺囊酸酯(36)
在室温和N2气体环境下添加B(PhF5)3(1.5mg,0.0030mmol)至31(20mg,0.030mmol)、24(7.7mg,0.015mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000363
分子筛粉末在无水CH2Cl2(0.6mL)中经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，加入Et3N以淬灭反应，过滤，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝1/1/6)纯化，得到白色固体状的36(11mg,72％)：Rf 0.42(EtOAc/己烷＝1:2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.95–7.91(m,4H),7.85(dd,J＝8.4,1.3Hz,2H),7.53–7.49(m,2H),7.45–7.42(m,1H),7.40–7.35(m,4H),7.31–7.28(m,2H),5.91(t,J＝9.7Hz,1H,H-3’),5.89–5,82(m,1H,烯丙基内部烯基CH),5.64(t,J＝9.7Hz,1H,H-4’),5.59(dd,J＝9.7,7.8Hz,1H,H-2’),5.39(t,J＝3.6Hz,1H,H-12),5.29(dt,J＝17.2,1.5Hz,1H,烯丙基末端烯基CHa ),5.20(dt,J＝10.5,1.3Hz,1H,烯丙基末端烯基CHb ),4.89(d,J＝7.8Hz,1H,H-1’),4.53–4.45(m,3H,H-16,烯丙基CH2 ),4.30(d,J＝9.7Hz,1H,H-5’),3.69(s,3H,OCH3 ),3.16(dd,J＝11.7,4.6Hz,1H,H-3),3.06(dd,J＝14.4,4.3Hz,1H,H-18),2.14(dd,J＝13.7Hz,1H,H-19a),1.90–1.85(m,4H,H-2a,H-11ab,H-22a),1.82–1.71(m,4H,H-2b,H-15a,H-21a,H-22b),1.65–1.61(m,1H,H-1a),1.55–1.52(m,2H,H-9,16-OH),1.44–1.34(m,2H,H-6a,H-7a),1.34–1.30(m,4H,H-15b,H-27),1.26–1.19(m,3H,H-6b,H-7b,H-21b),1.14–1.10(m,1H,H-19b),0.97(s,3H,H-30),0.94–0.92(m,1H,H-1b),0.90(s,3H,H-29),0.88(s,3H,H-25),0.71(s,3H,H-23),0.70–0.65(m,4H,H-5,H-26),0.62(s,3H,H-24)ppm；C61H74O13Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1037.5022，实测值1037.5026。
Figure GDA0003437676220000371
28-O-烯丙基-3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基硅烷基刺囊酸酯(38)
添加1.0N KOH(5mL)于36(0.45g,0.41mmol)在THF(25mL)中经搅拌的溶液中，并在45℃下加热。将反应混合物搅拌12小时，然后冷却至室温。将反应混合物以Amberlyst IR-120H+中和，过滤，浓缩，然后在减压下干燥。随后在室温下用DMF(8mL)中的溴化苄基(98μL,0.82mmol)和K2CO3(113mg,0.82mmol)处理残留物。搅拌12小时后，将反应混合物用CH2Cl2稀释，用H2O、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶，MeOH/CH2Cl2＝1/20)纯化，得到苄酯。在室温和N2气体环境下添加TESOTf(0.74mL,3.3mmol)和2,6-二甲吡啶(0.48mL,4.1mmol)至苄酯在无水CH2Cl2(8mL)中经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌2小时，然后添加饱和NaHCO3以将其淬灭。将混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/40)纯化，得到无色浆体状的38(0.21g,41％)：Rf 0.41(EtOAc/己烷＝1/20)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39–7.28(m,5H),5.92–5.82(m,1H,烯丙基内部烯基CH),5.35(s,1H,H-12),5.33–5.27(m,1H,烯丙基末端烯基CH),5.20(d,J＝10.3Hz,1H,烯丙基末端烯基CH),5.16(s,2H,Bn CH2 ),4.77(d,J＝4.2Hz,1H,H-1’),4.59(s,1H,H-16),4.53–4.43(m,2H,烯丙基CH2 ),4.34(dd,J＝6.1,5.1Hz,1H,H-4’),4.27(d,J＝6.1Hz,1H,H-5’),3.73(d,J＝4.2Hz,1H,H-2’),3.65(d,J＝5.1Hz,1H,H-3’),3.06–2.98(m,2H,H-3,H-18),2.23(t,J＝13.5Hz,1H,H-19a),1.96(d,J＝10.8Hz,1H),1.89–1.80(m,4H),1.77–1.62(m,3H),1.58–1.40(m,4H),1.34(s,3H),1.31–1.23(m,3H),1.16–1.04(m,2H),1.04–0.90(m,42H),0.89–0.84(s,7H),0.78(s,3H),0.72–0.55(m,28H)ppm；C70H122O10Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1257.8007，实测值1257.8019。
Figure GDA0003437676220000381
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基硅烷基刺囊酸(40)
在室温下将预混合的在1,4-二氧六环(2mL)中的甲酸(150μL,3.3mmol)/Et3N(430μL,3.1mmol)以及在1,4-二氧六环(2mL)中的Pd(OAc)2(17mg,0.078mmol)加入38(194mg,0.16mmol)和PPh3(1.03mg,0.39mmol)在1,4-二氧六环(4mL)中经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌12小时，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/6)纯化，得到白色泡沫状的40(168mg,89％)：Rf 0.58(EtOAc/己烷＝1/6)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40–7.28(m,5H),5.34(s,1H,H-12),5.16(s,2H,Bn CH2 ),4.78(d,J＝4.3Hz,1H,H-1’),4.55(s,1H,H-16),4.34(t,J＝5.5Hz,1H,H-4’),4.27(d,J＝5.8Hz,1H,H-5’),3.73(d,J＝3.9Hz,1H,H-2’),3.66(d,J＝5.0Hz,1H,H-3’),3.02(dd,J＝11.5,3.7Hz,1H,H-3),2.95(d,J＝11.3Hz,1H,H-18),2.21(t,J＝13.5Hz,1H,H-19a),1.96(d,J＝11.1Hz,1H),1.92–1.62(m,7H),1.62–1.40(m,4H),1.34(s,3H),1.31–1.23(m,3H),1.17–1.04(m,2H),1.02–0.91(m,42H),0.90–0.84(s,7H),0.79(s,3H),0.73–0.55(m,28H)ppm；C67H118O10Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1217.7694，实测值1217.7703。
Figure GDA0003437676220000382
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β/α-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(41β/α)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,12μL,0.044mmol)于10(276mg,0.33mmol)、39(266mg,0.22mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000383
分子筛粉末在无水CH2Cl2(11mL)中经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，加入Et3N以淬灭反应，加热至室温，过滤，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝2/1/5)纯化，得到无色浆体状的41β(391mg,94％)。41β：Rf 0.64(EtOAc/己烷＝1:1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.35(s,1H,H-23),7.40–7.28(m,5H),5.41(d,J＝7.5Hz,1H,H-1’),5.34(t,J＝3.5Hz,1H,H-12),5.25(dd,J＝3.5,1.6Hz,1H,H-2”),5.21(dd,J＝9.8,3.5Hz,1H,H-3”),5.16(s,2H,Bn CH2 ),5.13(t,J＝9.2Hz,1H,H-3”’),4.98(d,J＝1.6Hz,1H,H-1”),4.96(td,J＝9.2,5.5Hz,1H,H-4”’),4.85(dd,J＝9.2,7.7Hz,1H,H-2”’),4.63(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”’),4.58(d,J＝4.3Hz,1H,H-1””),4.49(s,1H,H-16),4.27(t,J＝6.3Hz,1H,H-4””),4.22(d,J＝6.3Hz,1H,H-5””),4.18(t,J＝6.0Hz,1H,H-3’),4.13(dd,J＝11.7,5.4Hz,1H,H-5a”’),4.01(dd,J＝6.0,2.0Hz,1H,H-4’),3.87(qd,J＝6.5,2.0Hz,1H,H-5’),3.84–3.79(m,2H,H-3,H-5”),3.66(dd,J＝7.5,6.3Hz,1H,H-2’),3.64–3.60(m,2H,H-3””,H-4”),3.57(dd,J＝4.3,0.9Hz,1H,H-2””),3.34(dd,J＝11.7,9.3Hz,1H,H-5b”’),2.94(dd,J＝14.2,4.0Hz,1H,H-18),2.23(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.06(s,3H),2.03(s,3H),2.00(s,3H,),1.99–1.97(m,4H,H-2,Ac CH3 ),1.88–1.75(m,5H,H-11ab,H-21a,H-22ab),1.73–1.65(m,2H,H-2a,H-15a),1.63–1.60(m,1H,H-9),1.57–1.55(m,1H,H-1a),1.53(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.47–1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.35(s,3H,H-27),1.34(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.29(d,J＝6.5Hz,4H,H-6’),1.27–1.24(m,H-6”,H-15b),1.19–1.16(m,2H,H-5,H-6b),1.12(d,J＝7.8Hz,1H,H-21b),1.09(s,3H,H-24),1.05(dd,J＝12.1,4.0Hz,1H,H-19b),1.01–0.89(m,44H,TES CH3 ,H-1b,H-7b,H-25,H-30),0.89(s,3H,H-29),0.73(s,3H,H-26),0.69–0.55(m,24H,TES CH2 )ppm；C97H158O28Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1906.9937，实测值1906.9959。
41α：Rf 0.69(EtOAc/己烷＝1:1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.34(s,1H,H-23),7.37–7.30(m,5H),6.02(d,J＝3.7Hz,1H,H-1”),5.39(t,J＝3.6Hz,1H,H-12),5.21(dd,J＝3.5,1.7Hz,1H,H-2”’),5.16(s,2H,Bn C-H2 ),5.11(t,J＝9.0Hz,1H,H-3””),5.08–5.06(m,2H,H-1”’,H-3”’),4.93(td,J＝9.0,5.3Hz,1H,H-4””),4.80(dd,J＝9.0,7.4Hz,1H,H-2””),4.66(d,J＝7.4Hz,1H,H-1””),4.58(d,J＝4.4Hz,1H,H-1’),4.56(s,1H,H-16),4.27(t,J＝6.3Hz,1H,H-4’),4.21(d,J＝6.3Hz,1H,H-5’),4.19(dd,J＝8.0,5.1Hz,1H,H-3”),4.13–4.09(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H,H-5a””),4.06–4.01(m,2H,H-4”,H-5”),3.87(dd,J＝8.0,3.7Hz,1H,H-2”),3.81(dd,J＝11.8,4.7Hz,1H,H-3),3.70–3.64(m,1H,H-5”’),3.63–3.58(m,2H,H-4”’,H-3’),3.57(dd,J＝4.4,1.1Hz,1H,H-2’),3.35(dd,J＝11.8,9.0Hz,1H,H-5b””),3.00(dd,J＝14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.19(t,J＝13.2Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.02(s,3H),2.00–1.97(m,1H,H-2a),1.96(s,3H),1.95–1.83(m,3H,H-22a,H-11ab),1.81–1.65(m,3H,H-21a,H-22b,H-2b),1.62–1.52(m,3H,H-9,H-1a,H-15a),1.51(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.48–1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.35(s,3H,H-27),1.34(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.32(d,J＝6.5Hz,3H,H-6”),1.29–1.27(m,4H,H-15b,H-6”’),1.23–1.11(m,3H,H-21b,H-5,H-6b),1.09–1.05(m,4H,H-24,H-19b),1.01(m,TES CH3 ×3),0.96–0.90(m,35H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH3 ×9),0.88(s,3H,H-29),0.73(s,3H,H-26),0.67(m,6H,TES CH2 ×3),0.62–0.54(m,18H,TES CH2 ×9)ppm；C97H158O28Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1906.9937，实测值1906.9967。
Figure GDA0003437676220000401
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β/α-L-吡喃阿拉伯糖基)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(42β/α)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,1.5μL,0.0058mmol)至13(67mg,0.081mmol)、39(65mg,0.054mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000402
分子筛粉末在无水CH2Cl2(6mL)的经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，用Et3N淬灭反应，加热至室温。所得混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝2/1/5)纯化，得到无色浆体状的101(101β:76mg,75％,101α:15mg,16％)。42β：Rf 0.24(EtOAc/CH2Cl2/己烷＝2/1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.36(s,1H,H-23),7.39–7.29(m,5H),5.76(d,J＝3.8Hz,1H,H-1’),5.35(s,1H,H-12),5.21(s,1H,H-2”),5.19–5.15(m,3H,H-3”,Bn CH2 ),5.13(t,J＝9.2Hz,1H,H-3”’),4.97–4.92(m,2H,H-1”,H-4”’),4.86(dd,J＝9.2,7.6Hz,1H,H-2”’),4.63(d,J＝7.6Hz,1H,H-1”’),4.58(d,J＝4.2Hz,1H,H-1””),4.55(s,1H,H-16),4.35(q,J＝6.2Hz,1H,H-4’),4.27(t,J＝5.8Hz,1H,H-4””),4.21(d,J＝6.3Hz,1H,H-5””),4.17(t,J＝5.4Hz,1H,H-3’),4.12(dd,J＝11.5,5.1Hz,1H,H-5a”’),3.85–3.76(m,4H,H-3,H-2’,H-5a’,H-5”),3.71(dd,J＝11.7,8.2Hz,1H,H-5b’),3.64–3.60(m,2H,H-4”,H-3””),3.57(d,J＝4.2Hz,1H,H-2””),3.33(t,J＝10.6Hz,1H,H-5b”’),2.98(d,J＝11.8Hz,1H,H-18),2.24(t,J＝13.5Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.07(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),2.00–1.97(m,4H,Ac CH3 ,H-2a),1.89–1.65(m,7H,H-2b,H-11ab,H-15a,H-21a,H-22ab),1.63–1.60(m,1H,H-9),1.56(d,J＝13.5Hz,1H,H-1a),1.51(s,3H,CH3 )1.48–1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.35(s,6H,H-27,CH3 ),1.27–1.24(m,4H,H-15b,H-6”),1.20–1.12(m,3H,H-5,H-6b,H-21b),1.09(s,3H,H-24),1.06(d,J＝13.2Hz,1H,H-19b),1.01–0.90(m,44H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH3 ),0.89(s,3H,H-29),0.72(s,3H,H-26),0.69–0.53(m,24H)ppm；C96H156O28Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1892.9793，实测值1892.9791。
42α：Rf 0.29(EtOAc/CH2Cl2/己烷＝2/1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.35(s,1H,H-23),7.39–7.30(m,5H),6.07(d,J＝3.3Hz,1H,H-1”),5.39(t,J＝3.5Hz,1H,H-12),5.22(dd,J＝3.5,1.3Hz,1H,H-2”’),5.16(s,2H,Bn CH2 ),5.11(t,J＝8.9Hz,1H,H-3””),5.07(dd,J＝9.7,3.5Hz,1H,H-3”’),5.05(d,J＝1.3Hz,1H,H-1”’),4.94(td,J＝8.9,5.3Hz,1H,H-4””),4.81(dd,J＝8.9,7.4Hz,1H,H-2””),4.67(d,J＝7.4Hz,1H,H-1””),4.58(d,J＝4.4Hz,1H,H-1’),4.57(s,1H,H-16),4.27(t,J＝5.8Hz,1H,H-4’),4.25–4.20(m,3H,H-3”,H-4”,H-5’),4.11(dd,J＝11.8,5.3Hz,1H,H-5a””),4.05–4.01(d,J＝13.4Hz,1H,H-5a”),3.91–3.84(m,2H,H-2”,H-5b”),3.81(dd,J＝11.8,4.6Hz,1H,H-3),3.69(dq,J＝9.5,6.1Hz,1H,H-5”’),3.64–3.59(m,2H,H-4”’,H-3’),3.57(d,J＝4.4Hz,1H,H-2’),3.36(dd,J＝11.8,9.1Hz,1H,H-5b””),2.99(dd,J＝14.4,4.0Hz,1H,H-18),2.20(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),2.14(s,3H),2.04(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.00–1.99(m,1H,H-2a),1.97(s,3H),1.95–1.83(m,3H,H-22a,H-11ab),1.81–1.65(m,3H,H-21a,H-22b,H2b),1.65–1.62(m,1H,H-9),1.58–1.53(m,2H,H-1a,H-15a),1.51(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.45–1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.36–1.35(m,6H,H-27,亚异丙基CH3 ),1.32(dd,J＝14.5,1.6Hz,1H,H-15b),1.29(d,J＝6.1Hz,3H,H-6”’),1.23–1.15(m,3H,H-5,H-6b,H-21b),1.10–1.05(m,4H,H-19b,H-24),1.04–0.89(m,44H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH3 ×12),0.88(s,3H,H-29),0.73(s,3H,H-26),0.71–0.54(m,24H,TES CH2 ×12)ppm；C96H156O28Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1892.9793，实测值1892.9780。
Figure GDA0003437676220000411
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基硅烷基刺囊酸酯(43β)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,7.0μL,0.026mmol)至10(166mg,0.20mmol)、40(158mg,0.13mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000412
分子筛粉末在无水CH2Cl2(6.5mL)的经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，用Et3N淬灭反应，加热至室温。所得混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝2/1/5)纯化，得到无色浆体状的43β(237mg,96％)。102β：Rf 0.23(EtOAc/CH2Cl2/己烷＝2/1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.37–7.29(m,5H),5.42(d,J＝7.5Hz,1H,H-1’),5.34(s,1H,H-12),5.26(dd,J＝3.4,1.5Hz,1H,H-2”),5.21(dd,J＝9.8,3.4Hz,1H,H-3”),5.16(d,J＝3.2Hz,2H,Bn CH2 ),5.13(t,J＝9.3Hz,1H,H-3”’),4.99(d,J＝1.5Hz,1H,H-1”),4.95(td,J＝9.3,5.4Hz,1H,H-4”’),4.85(dd,J＝9.3,7.6Hz,1H,H-2”’),4.77(d,J＝4.4Hz,1H,H-1””),4.64(d,J＝7.6Hz,1H,H-1”’),4.50(s,1H,H-16),4.33(dd,J＝6.1,5.8Hz,1H,H-4””),4.26(d,J＝6.1Hz,1H,H-5””),4.18(t,J＝6.0Hz,1H,H-3’),4.12(dd,J＝11.7,5.4Hz,1H,H-5a”’),4.01(dd,J＝6.0,1.8Hz,1H,H-4’),3.89–3.81(m,2H,H-5’,H-5”),3.72(d,J＝4.4Hz,1H,H-2””),3.68–3.61(m,3H,H-2’,H-3””,H-4”),3.34(dd,J＝11.9,9.3Hz,1H,H-5b”’),3.01(dd,J＝11.7,4.3Hz,1H,H-3),2.93(dd,J＝14.2,3.7Hz,1H,H-18),2.23(t,J＝13.5Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.07(s,3H),2.03(s,3H),2.00(s,3H),1.98(s,3H),1.97–1.93(m,1H,H-2a),1.86–1.76(m,6H,H-11ab,H-22a,H-21a,H-22b),1.76–1.71(m,1H,H-15a),1.67–1.65(m,1H,H-2b),1.54(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.53–1.42(m,4H,H-9,H-1a,H-6a,H-7a),1.34–1.33(m,6H,H-27,亚异丙基CH3 ),1.31–1.24(m,9H,H-6’,H-6”,H-6b,H-7b,H-15b),1.11–1.10(m,1H,H-21b),1.07–1.02(m,2H,H-19b),1.01–0.91(m,42H,H-23,H-30,TES CH3 ),0.89(s,3H,H-25),0.88(s,5H,H-29),0.79(s,3H,H-24),0.73(s,3H,H-26),0.70–0.55(m,25H,H-5,TES CH2 )ppm；C97H160O27Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1893.0144，实测值1893.0150。
Figure GDA0003437676220000421
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4))-2-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(44β)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,2.0μL,0.0076mmol)至22(22mg,0.019mmol)、39(23mg,0.019mmol)和活化
Figure GDA0003437676220000422
分子筛粉末在无水CH2Cl2(1mL)中经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，加入饱和NaHCO3以淬灭反应，加热至室温。所得混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在减压下浓缩。残留物以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝4/1/7)纯化，得到无色浆体状的103(44β:19mg,46％；44α:2mg,5％)。44β：Rf 0.60(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.36(s,1H,H-23),7.38–7.30(m,5H),5.39(d,J＝7.3Hz,1H,H-1’),5.32(t,J＝3.6Hz,1H,H-12),5.17(dd,J＝3.5,1.8Hz,1H,H-2”),5.16(d,J＝1.8Hz,2H,Bn CH2 ),5.15–5.09(m,3H,H-3”’,H-4”’,H-3””),5.02(m,J＝7.8Hz,1H,H-2”’),4.95(d,J＝1.8Hz,1H,H-1”),4.91(td,J＝8.0,4.9Hz,1H,H-4””),4.85–4.81(m,2H,H-2””,H-1””),4.68(d,J＝7.8Hz,1H,H-1”’),4.58(d,J＝4.4Hz,1H,H-1””’),4.47(s,1H,H-16),4.28–4.25(m,2H,H-4””’,H-6a”’),4.21(d,J＝6.3Hz,1H,H-5””’),4.16(t,J＝6.0Hz,1H,H-3’),4.14–4.09(m,2H,H-6b”’,H-5a””),4.03(dd,J＝6.0,1.9Hz,1H,H-4’),3.99(dd,J＝9.4,3.5Hz,1H,H-3”),3.86(qd,J＝6.5,1.9Hz,1H,H-5’),3.81(dd,J＝11.8,4.6Hz,1H,H-3),3.76(t,J＝9.4Hz,1H,H-4”),3.71–3.62(m,3H,H-5”,H-2’,H-5”’),3.61(dd,J＝5.4,1.2Hz,1H,H-3””’),3.57(dd,J＝4.4,1.2Hz,1H,H-2””’),3.40(dd,J＝11.9,8.1Hz,1H,H-5b””),2.91(dd,J＝14.4,4.2Hz,1H,H-18),2.22(t,J＝13.5Hz,1H,H-19a),2.18(s,3H),2.11(s,3H),2.09(s,6H),2.04(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),2.00(s,3H),1.99–1.97(m,1H,H-2a),1.87–1.84(m,2H,H-11ab),1.80(s,3H,H-21a,H-22ab),1.70–1.68(m,2H,H-2b,H-15a),1.59–1.56(m,2H,H-9,H-1a),1.54(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.45–1.41(m,2H,H-6b,H-7a),1.34(s,6H,H-27,亚异丙基CH3 ),1.28(d,J＝6.5Hz,3H,H-6’),1.26–1.24(m,1H,H-15b),1.22(d,J＝6.1Hz,3H,H-6”),1.18–1.16(m,2H,H-5,H-6b),1.13–1.11(m,1H,H-21b),1.08(s,3H,H-24),1.06–1.02(m,1H,H-19b),1.00–0.92(m,44H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH3 ),0.88(s,3H,H-29),0.74(s,3H,H-26),0.68–0.55(m,24H,TESCH2 )ppm；C109H174O36Si4Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值2195.0788，实测值2195.0785。
形成酰胺键的通用步骤：
Figure GDA0003437676220000431
在室温和H2气体环境(气球)下搅拌苄酯原料(1当量)和10％Pd/C(10％w/v)在THF(50mM)中的悬浮液。将反应混合物搅拌12至24小时。将得到的混合物通过硅藻土过滤，浓缩，然后在减压下干燥以提供粗制酸中间体。在室温和N2气体环境下添加烷基胺(3当量)于粗制酸中间体、HBTU(3当量)和DIPEA(3当量)在无水CH2Cl2(50mM)中经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌4小时。将所得混合物浓缩，然后以柱色谱法(硅胶，EtOAc/CH2Cl2/己烷＝2/1/5至1/1/2)纯化，得到酰胺产物，二步骤产率为61-95％。
在一些实施例中，在氢解条件下将硅烷基随机去保护，使随后的酰胺偶合步骤产生不可分离的混合物。因此，通过短柱(二氧化硅，EtOAc/CH2Cl2/己烷＝1/1/2)过滤后，将混合物直接进行整体去保护步骤而未经结构表征。
整体去保护的通用步骤：
Figure GDA0003437676220000441
在0℃向原料的CH2Cl2(10mM)溶液中添加预冷的TFA/H2O＝4/1溶液(相对于CH2Cl2为50％v/v)，并搅拌30分钟。在0℃和减压(<1托)下将溶剂蒸发，然后在室温和高真空下干燥1小时。添加K2CO3(20当量)至残留物的MeOH(10mM)溶液中，并在室温下搅拌12小时。将悬浮液离心，然后通过HPLC纯化液体(HPLC柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；流动相：20分钟内由20％ACN/H2O升至90％ACN/H2O的梯度，然后90％ACN/H2O等度(isocratic)15分钟；流速：5mL/min)，以30-75％的二步收率得到产物。
Figure GDA0003437676220000442
3-O-(N-((十二烷基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(46)
按照整体去保护的通用步骤，以68％的产率得到白色固体状的46：[α]D 20-68.0(c0.15,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.43(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),5.41(d,J＝1.7Hz,1H,H-1”),5.31(t,J＝3.5Hz,1H,H-12),5.28(d,J＝8.2Hz,1H,H-1’),4.49–4.48(m,2H,H-1”’,H-16),4.26(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.92–3.79(m,6H,H-2”,H-3,H-5”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.69–3.64(m,3H,H-5’,H-3’,H-5””),3.57–3.53(m,2H,H-4’,H-4”),3.49–3.42(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3-30(m,2H,H-3”’,H-3””),3.28–3.26(m,1H,–NHCHa –),3.24–3.17(m,3H,–NHCHb –,H-2”’,H-5”’),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.1,4.3Hz,1H,H-18),2.30(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.97–1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84–1.64(m,5H,H-2b,H-22b,H-9,H-1a,H-15a),1.58–1.48(m,4H,H-6a,H-7a,碳链CH2 ),1.45(dd,J＝14.8,2.7Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37–1.27(m,23H,H-5,H-6b,H-6”,碳链CH2 ×9),1.22(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.19–1.16(m,1H,H-21b),1.14(s,3H,H-24),1.12–1.09(m,1H,H-1b),1.07–1.04(m,1H,H-19b),1.02(s,3H,H-25),0.98–0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.91(t,J＝7.0Hz,3H,碳链CH3 ),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13CNMR(151MHz,MeOD)δ209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,144.9(C-13),123.1(C-12),107.0(C-1”’),105.1(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),84.0(C-4”),83.5(C-3),78.2(C-3”’),77.6(C-3””),76.7(C-3’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.2(C-4””),72.7(C-5”),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.8(C-5’),67.3(C-5”’),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.1(碳链CH2),39.5(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),33.1(碳链CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.9(碳链CH2),30.9(碳链CH2),30.8(碳链CH2),30.8(碳链CH2),30.6(碳链CH2),30.5(碳链CH2),30.3(碳链CH2),28.0(碳链CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),23.8(碳链CH2),21.6(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-6’),16.4(C-25),14.5(碳链CH3),10.6(C-24)ppm；C65H107NO22Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1276.7177，实测值1276.7209。
Figure GDA0003437676220000451
3-O-(N-(甲基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(47)
按照整体去保护的通用步骤，以36％的产率获得白色固体状的47：[α]D 20-26.8(c0.22,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.52(s,1H,酰胺NH),5.40(d,J＝1.7Hz,1H,H-1”),5.31(t,1H,J＝3.5Hz,H-12),5.28(d,J＝8.2Hz,1H,H-1’),4.49–4.47(m,2H,H-1”’,H-16),4.24(d,J＝7.9Hz,1H,H-1””),3.90(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H,H-2”),3.89–3.79(m,5H,H-3,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.69–3.64(m,3H,H-5’,H-3’,H-5””),3.56–3.53(m,2H,H-4’,H-4”),3.46(ddd,J＝10.4,8.8,5.4Hz,1H,H-4”’),3.41(t,J＝9.1Hz.1H,H-4””),3.33–3.30(m,2H,H-3”’,H-3””)3.23–3.17(m,2H,H-2”’,H-5b”’),3.13(dd,J＝9.2,7.9Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.6,4.1Hz,1H,H-18),2.80(s,3H,–NHCH3 ),2.30(t,J＝13.7Hz,1H,H-19a),1.94–1.91(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.81–1.66(m,5H,H-2b,H-22b,H-9,H-1a,H-15a),1.55–1.43(m,3H,H-6a,H-7a,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.35–1.31(m,5H,H-5,H-6b,H-6”),1.22(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.18(d,J＝10.3,2.5Hz,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.10(dd,J＝13.2,4.02Hz,1H,H-1b),1.05(dd,J＝13.4,3.5Hz,1H,H-19b),1.02(s,3H,H-25),0.97–0.95(m,4H,H-7b,H-30),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.3(C-23),177.2(C-28),172.3,144.8(C-13),123.2(C-12),107.0(C-1”’),104.8(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),84.1(C-4”),83.3(C-3),78.2(C-3”’),77.5(C-3””),76.7(C-3’),76.5(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.4(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.8(C-5”),67.3(C-5”’),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),39.3(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),32.0(C-22),31.3(C-20),27.2(C-27),26.2(–NHCH3),25.8(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.5(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-6’),16.3(C-25),10.5(C-24)ppm；C54H86NO22[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1100.5636，实测值1100.5667。
Figure GDA0003437676220000461
3-O-(N-(己基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(48)
按照整体去保护的通用步骤，以45％的产率得到白色固体状的48：[α]D 20-17.35(c0.34,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),5.40(d,J＝1.6Hz,1H,H-1”),5.31(t,J＝3.4Hz,1H,H-12),5.28(d,J＝8.2Hz,1H,H-1’),4.49–4.48(m,2H,H-16,H-1”’),4.26(d,J＝7.9Hz,1H,H-1””),3.92–3.77(m,6H,H-2”,H-3,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.70–3.62(m,3H,H-5’,H-3’,H-5””),3.56–3.53(m,2H,H-4’,H-4”),3.49–3.41(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3.30(m,2H,H-3”’,H-3””),3.29–3.17(m,4H,–NHCH2 –,H-2”’,H-5b”’),3.14(dd,J＝9.2,7.9Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.1,4.0Hz,1H,H-18),2.30(t,J＝13.8Hz,1H,H-19a),1.96–1.90(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84–1.64(m,5H,H-2b,H-22b,H-9,H-1a,H-15a),1.55–1.49(m,4H,H-6a,H-7a,碳链CH2 ),1.45(dd,J＝14.8,2.7Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.36–1.29(m,13H,H-5,H-6b,H-6”,碳链CH2 ×4),1.22(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.18–1.17(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.12–1.09(m,1H,H-1b),1.05(dd,J＝12.6,3.0Hz,1H,H-19b),1.01(s,3H,H-25),0.95(s,4H,H-7b,H-30),0.92(t,J＝7.0Hz,3H,碳链CH3 ),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.3(C-23),177.2(C-28),171.5,144.8(C-13),123.2(C-12),106.9(C-1”’),104.9(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),84.0(C-4”),83.3(C-3),78.2(C-3”’),77.6(C-3””),76.7(C-3’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.1(C-2’),73.6(C-4’),73.2(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.8(C-5”),67.3(C-5”’),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9,C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.1(碳链CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),32.8(碳链CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.3(碳链CH2),27.6(碳链CH2),27.2(C-27),25.9(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),23.8(碳链CH2),21.5(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-6’),16.3(C-25),14.5(碳链CH3),10.6(C-24)ppm；C59H96NO22[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1170.6418，实测值1170.6448。
Figure GDA0003437676220000471
3-O-(N-(十八烷基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(49)
按照整体去保护的通用步骤(HPLC柱：Alltima C8 150mm×4.6mm，5μm，流速：1mL/min)，以30％的产率得到白色固体状的49：[α]D 20-27.4(c 0.27,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.43(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),5.41(d,J＝1.6Hz,1H,H-1”),5.31(t,J＝3.4Hz,1H,H-12),5.28(d,J＝8.2Hz,1H,H-1’),4.49(d,J＝7.6Hz,2H,H-16,H-1”’),4.26(d,J＝7.9Hz,1H,H-1””),3.92–3.77(m,6H,H-2”,H-3,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.69–3.63(m,3H,H-5’,H-3’,H-5””),3.57–3.53(m,2H,H-4’,H-4”),3.49–3.41(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3.27(m,3H,H-3”’,H-3””,–NHCHa –),3.24–3.17(m,3H,H-2”’,H-5b”’,–NHCHb –),3.14(dd,J＝9.2,7.9Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.30(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.98–1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H21a,H-22a),1.84–1.64(m,5H,H-2b,H-9,H-22b,H-1a,H-15a),1.55–1.49(m,4H,H-6a,H-7a,碳链CH2 ),1.45(dd,J＝14.8,2.5Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37–1.25(m,35H,H-5,H-6b,H-6”,碳链CH2 ×15),1.22(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.20–1.15(m,1H,H-21b),1.14(s,3H,H-24),1.13–1.08(m,1H,H-1b),1.06(dd,J＝12.6,3.0Hz,1H,H-19b),1.02(s,3H,H-25),0.97–0.95(m,4H,H-7b,H-30),0.90(t,J＝7.0Hz,3H,碳链CH3 ),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,144.9(C-13),123.1(C-12),107.0(C-1”’),105.1(C-1””),101.1(C-1”),95.7(C-1’),84.0(C-4”),83.5(C-3),78.2(C-3”’),77.6(C-3””),76.7(C-3’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.2(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.7(C-5”),67.3(C-5”’),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.3(C-18),41.1(C-8),40.0(碳链CH2 ),39.5(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),33.1(碳链CH2 ),32.0(C-22),31.4(C-20),30.9(碳链CH2 ),30.9(碳链CH2 ),30.8(碳链CH2 ),30.8(碳链CH2 ),30.6(碳链CH2 ),30.5(碳链CH2 ),30.3(碳链CH2 ),28.0(碳链CH2 ),27.2(C-27),26.0(C-2),24.9(C-30),24.5(C-11),23.8(碳链CH2 ),21.6(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-6’),16.4(C-25),14.5(碳链CH3 ),10.6(C-24)ppm；C71H120NO22[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1338.8297，实测值1338.3327。
Figure GDA0003437676220000481
3-O-(N-(8-(4-甲氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(53)
按照整体去保护的通用步骤，以54％的产率得到白色固体状的53：[α]D 20-123.3(c0.06,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),6.82(d,J＝8.7Hz,2H),5.41(d,J＝1.8Hz,1H,H-1”),5.30–5.27(m,2H,H-12,H-1’),4.49–4.48(m,2H,H-16,H-1”’),4.26(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.91(dd,J＝3.3,1.8Hz,1H,H-2”),3.90–3.79(m,5H,H-3,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.76(s,3H,OCH3 ),3.69–3.66(m,2H,H-5’,H-3’),3.64(d,J＝9.7Hz,1H,H-5””),3.58–3.53(m,2H,H-4’,H-4”),3.49–3.42(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3-30(m,2H,H-3”’,H-3””),3.28–3.25(m,1H,–NHCHa –),3.24–3.17(m,3H,H-2”’,H-5b”’,–NHCHb –),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.54(t,J＝7.4Hz 2H,碳链CH2 Ph),2.30(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.97–1.88(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84–1.72(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.71–1.66m,2H,H-1a,H-15a),1.62–1.47(m,6H,碳链CH2 ×2,H-6a,H-7a),1.47–1.43(m,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37–1.30(m,13H,H-5,H-6b,H-6”,碳链CH2 ×4),1.22(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.18–1.16(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.10–1.08(m,1H,H-1b),1.05(dd,J＝12.1,3.6Hz,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.97–0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.87(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,159.2,144.8(C-13),135.9,130.3,123.1(C-12),114.8,107.0(C-1”’),105.0(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),84.0(C-4”),83.5(C-3),78.2(C-3”’),77.6(C-3””),76.7(C-3’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.2(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.8(C-5”),67.3(C-5”’),56.1(C-4),55.7(OCH3),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-19),48.0(C-9),42.8(C-14),42.3(C-18),41.1(C-8),40.0(碳链CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.7(碳链CH2),33.6(C-6),33.4(C-29),33.0(碳链CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.7(碳链CH2),30.5(碳链CH2),30.3(碳链CH2),30.2(碳链CH2),27.9(碳链CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.6(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-6’),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C68H106NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1326.6970，实测值1326.6978。
Figure GDA0003437676220000491
3-O-(N-(8-(4-氟苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(54)
按照整体去保护的通用步骤，以56％的产率获得白色固体状的54：[α]D 20-28.3(c0.18,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.17(dd,J＝8.8,5.4Hz,2H),6.98(t,J＝8.8Hz,2H),5.41(d,J＝1.7Hz,1H,H-1”),5.29–5.27(m,2H,H-12,H-1’),4.49–4.48(m,2H,H-16,H-1”’),4.26(d,J＝7.9Hz,1H,H-1””),3.92–3.78(m,6H,H-2”,H-3,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.70–3.63(m,3H,H-5’,H-3’,H-5””),3.57–3.52(m,2H,H-4’,H-4”),3.48–3.41(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3.30(m,2H,H-3”’,H-3””),3.28–3.25(m,1H,–NHCHa –),3.24–3.16(m,3H,H-2”’,H-5b”’,–NHCHb –),3.13(dd,J＝9.2,7.9Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.3,4.5Hz,1H,H-18),2.59(t,J＝7.6Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.29(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.96–1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83–1.72(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.72–1.64(m,2H,H-1a,H-15a),1.63–1.58(m,2H,碳链CH2 ),1.56–1.48(m,4H,H-6a,H-7a),1.45(dd,J＝14.9,2.6Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.36–1.31(m,13H,H-5,H-6b,H-6”,碳链CH2 ×4),1.22(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.18–1.16(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.11–1.08(m,1H,H-1b),1.05–1.03(m,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.96–0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.86(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,162.6(J＝241Hz),144.9(C-13),139.8,130.9(J＝8Hz),123.1(C-12),115.8(J＝21Hz),107.0(C-1”’),105.0(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),84.0(C-4”),83.4(C-3),78.2(C-3”’),77.6(C-3””),76.7(C-3’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.2(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.8(C-5”),67.3(C-5”’),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0(碳链CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.1(碳链CH2),33.6(C-6),33.4(C-29),32.9(C-),32.0(C-22),31.3(C-20),30.7(碳链CH2),30.5(碳链CH2),30.3(碳链CH2),30.3(碳链CH2),30.2(碳链CH2),27.9(碳链CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.5(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-)6’,16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C67H102FNO22Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1314.6770，实测值1314.6794。
Figure GDA0003437676220000501
3-O-(N-(8-(4-氟苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(55)
按照整体去保护的通用步骤，以75％的产率得到白色固体状的55：[α]D 20-32.5(c0.24,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.29(d,J＝8.3Hz,2H),7.08(d,J＝8.3Hz,2H),5.41(d,J＝1.7Hz,1H,H-1”),5.31(t,J＝3.6Hz,1H,H-12),5.29(d,J＝8.2Hz,1H,H-1’),4.49–4.48(m,2H,H-1”’,H-16),4.26(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.91–3.78(m,6H,H-2”,H-3,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.69–3.63(m,3H,H-5’,H-3’,H-5””),3.57–3.53(m,2H,H-4’,H-4”),3.48–3.42(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3.30(m,2H,H-3”’,H-3””),3.29–3.25(m,1H,–NHCHa –),3.23–3.17(m,3H,H-2”’,H-5b”’,–NHCHa –),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.5,4.3Hz,1H,H-18),2.57(m,J＝7.6Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.30(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.97–1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83–1.72(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.72–1.64(m,2H,H-1a,H-15a),1.63–1.57(m,2H,碳链CH2 ),1.56–1.47(m,4H,H-6a,H-7a,碳链CH2 ),1.47–1.43(m,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.36–1.28(m,22H,H-5,H-6b,H-6”,碳链CH2 ×4,tBu CH3 ×3),1.22(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.19–1.15(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.11–1.08(m,1H,H-1b),1.08–1.03(m,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.96–0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.86(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,149.5,144.8(C-13),140.8,129.1,126.1,123.1(C-12),107.0(C-1”’),105.0(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),84.1(C-4”),83.5(C-3),78.2(C-3”’),77.6(C-3””),76.7(C-3’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.2(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.8(C-5”),67.1(C-5”’),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0(碳链CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.4(C-15,C-21,碳链CH2),35.2(tBu 4℃),33.6(C-6),33.4(C-29),32.8(碳链CH2),31.9(C-22,tBu CH3×3),31.3(C-20),30.7(碳链CH2),30.5(碳链CH2),30.4(碳链CH2),30.2(碳链CH2),27.9(碳链CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.6(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-6’),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C71H111NO22Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1352.7490，实测值1352.7515。
Figure GDA0003437676220000511
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(56)
按照整体去保护的通用步骤，得到白色固体状的56，产率为46％：[α]D 20-71.4(c0.07,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.32(dd,J＝8.6,7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝8.6,1.0Hz,2H),7.07(tt,J＝7.5,1.0Hz,1H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),5.41(d,J＝1.7Hz,1H,H-1”),5.30(s,1H,H-12),5.27(d,J＝8.2Hz,1H,H-1’),4.49–4.47(m,2H,H-16,H-1”’),4.26(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.91–3.79(m,6H,H-2”,H-3,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.67–3.63(m,3H,H-5’,H-3’,H-5””),3.56–3.53(m,2H,H-4’,H-4”),3.49–3.42(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3.25(m,3H,H-3”’,H-3””,–NHCHa –),3.23–3.17(m,3H,H-2”’,H-5b”’,–NHCHb –),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H,H-2””),2.94(dd,J＝14.2,4.4Hz,1H,H-18),2.60(t,J＝7.5Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.29(t,J＝13.1Hz,1H,H-19a),1.98–1.87(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.82–1.76(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.71–1.65(m,2H,H-1a,H-15a),1.64–1.60(m,2H,碳链CH2 ),1.56–1.48(m,4H,H-6a,H-7a),1.45(dd,J＝14.9,2.6Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37–1.31(m,13H,H-5,H-6b,H-6”,碳链CH2 ),1.21(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.18–1.15(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.11–1.08(m,1H,H-1b),1.06–1.03(m,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.97–0.93(m,4H,H-7b,H-30),0.85(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.2(C-23),177.1(C-28),171.5,159.2,156.5,144.9(C-13),139.2,130.8,130.7,124.0,123.1(C-12),120.0,119.4,107.0(C-1”’),105.0(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),84.1(C-4”),83.5(C-3),78.2(C-3”’),77.6(C-3””),76.7(C-3’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.7(C-2””),74.6(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.2(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.7(C-5”),67.3(C-5”’),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0(碳链CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.2(碳链CH2),33.6(C-6),33.4(C-29),32.9(碳链CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.7(碳链CH2),30.5(碳链CH2),30.4(碳链CH2),30.3(碳链CH2),27.9(碳链CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.6(C-7),18.3(C-6”),17.7(C-26),16.5(C-6’),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C73H107NO23Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1388.7126，实测值1388.7172。
Figure GDA0003437676220000521
3-O-(N-(4-苯氧基苯-1-基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(57)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的57，产率为23％：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.45(s,1H),8.55(s,1H),7.61(d,J＝8.9Hz,2H),7.34(t,J＝7.7Hz,2H),7.09(t,J＝7.1Hz,1H),7.00–6.95(m,4H),5.41(d,J＝1.6Hz,1H),5.30(t,J＝3.6Hz,1H),5.28(d,J＝8.2Hz,1H),4.50–4.47(m,2H),4.32(d,J＝7.8Hz,1H),3.93(dd,J＝11.8,4.6Hz,1H),3.90(dd,J＝3.2,1.8Hz,1H),3.87–3.77(m,5H),3.67–3.65(m,2H),3.60–3.53(m,3H),3.46(ddd,J＝10.4,9.0,5.4Hz,1H),3.36(t,J＝9.0Hz,1H),3.33–3.30(m,1H)3.24–3.17(m,3H),2.93(dd,J＝14.4,4.3Hz,1H),2.29(t,J＝13.6Hz,1H),2.00–1.90(m,5H),1.86–1.64(m,5H),1.61–1.48(m,2H),1.45(dd,J＝14.8,2.6Hz,1H),1.39(s,3H),1.37–1.33(m,2H),1.31(d,J＝6.2Hz,3H),1.21(d,J＝6.4Hz,3H),1.20–1.16(m,1H),1.15(s,3H),1.13–1.08(m,1H),1.06–1.02(m,1H),1.01(s,3H),0.97–0.94(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)；13CNMR(151MHz,CD3OD)δ209.4,177.2,170.3,169.4,159.0,155.2,144.7,134.8,130.9,124.3,123.2,120.3,119.5,106.9,105.2,101.1,95.2,84.0,83.4,78.2,77.6,77.6,77.6,76.7,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.0,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.2,50.0,49.6,48.0,48.0,42.8,42.3,41.1,39.3,37.1,36.5,36.5,36.5,33.4,32.0,31.3,27.2,24.8,21.6,18.3,17.7,16.5,16.3,10.6ppm；C65H92NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1254.6055，实测值1254.6060。
Figure GDA0003437676220000522
3-O-(N-(2-(4-苯氧基苯-1-基)乙基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(58)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的58，产率为58％：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.40(s,1H),8.55(s,1H),7.33(dd,J＝8.5,7.5Hz,2H),7.23(d,J＝8.5Hz,2H),7.09(t,J＝7.5Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,2H),6.93(d,J＝8.6Hz,2H),5.41(d,J＝1.7Hz,1H),5.30–5.27(m,2H),4.50–4.47(m,2H),4.23(d,J＝7.9Hz,1H),3.91(dd,J＝3.2,1.7Hz,1H),3.87–3.77(m,5H),3.70–3.65(m,2H),3.63(d,J＝9.7Hz,1H),3.57–3.50(m,3H),3.50–3.43(m,2H),3.40(t,J＝9.3Hz,1H),3.33–3.29(m,2H),3.23–3.17(m,2H),3.11(dd,J＝9.2,7.9Hz,1H),2.94(dd,J＝14.3,4.1Hz,1H),2.83(t,J＝6.8Hz,2H),2.30(t,J＝13.6Hz,1H),1.98–p1.79(m,8H),1.77(dd,J＝13.8,4.3Hz,1H),1.74–1.64(m,4H),1.58–1.41(m,3H),1.39(s,3H),1.35(d,J＝11.7Hz,1H),1.34–1.28(m,5H),1.22(d,J＝6.4Hz,3H),1.18(d,J＝12.8Hz,1H),1.11(s,3H),1.08–1.02(m,2H),0.97(s,3H),0.96–0.92(m,4H),0.89(s,3H),0.76(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.3,177.2,171.7,159.0,157.0,144.7,135.6,131.3,130.9,124.2,123.2,120.2,119.5,106.9,104.9,101.1,95.2,84.0,83.5,78.2,77.5,76.7,76.4,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.4,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.0,48.0,42.8,42.3,41.5,41.1,39.4,37.0,36.5,36.5,35.4,33.6,33.4,32.0,31.3,27.2,25.9,24.8,24.6,21.5,18.3,17.7,16.5,16.3,10.6ppm；C67H96NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1282.6368，实测值1282.6370。
Figure GDA0003437676220000531
3-O-(N-(16-(4-苯氧基苯-1-基)十六烷基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(59)
按照整体去保护的通用步骤(HPLC柱：Alltima C8 150mm×4.6mm，5μm，流速：1mL/min)，获得白色固体状的59，产率为34％：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.42(s,1H),8.55(s,1H),7.32(dd,J＝8.5,7.5Hz,2H),7.16(d,J＝8.5Hz,2H),7.07(t,J＝7.5Hz,1H),6.94(d,J＝8.5Hz,2H),6.89(d,J＝8.5Hz,2H),5.41(d,J＝1.6Hz,1H),5.31(brs,1H),5.28(d,J＝8.2Hz,1H),4.50–4.47(m,2H),4.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.92–3.78(m,6H),3.68–3.63(m,3H),3.57–3.53(m,2H),3.48–3.42(m,2H),3.35–3.27(m,3H),3.24–3.16(m,3H),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H),2.97–2.92(m,1H),2.60(t,J＝7.7Hz,2H),2.30(t,J＝13.6Hz,1H),1.97–1.90(m,5H),1.83–1.65(m,5H),1.63–1.59(m,2H),1.56–1.43(m,5H),1.40(s,3H),1.38–1.27(m,29H),1.21(d,J＝6.4Hz,3H),1.17(d,J＝12.6Hz,1H),1.13(s,3H),1.09(d,J＝13.4Hz,1H),1.07–1.03(m,1H),1.01(s,3H),0.97–0.92(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ209.2,177.1,171.5,159.2,156.4,144.9,139.3,130.8,130.7,124.0,123.1,112.0,119.4,106.9,105.1,101.1,95.2,84.0,83.5,78.2,77.8,76.7,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,73.9,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.2,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,37.1,36.5,36.5,36.2,33.6,33.4,32.8,31.4,30.9,30.9,30.9,30.8,30.8,30.7,30.7,30.6,30.6,30.5,30.3,28.0,27.2,26.0,24.9,24.5,21.6,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C81H124NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1478.8559，实测值1478.8560。
Figure GDA0003437676220000541
3-O-(N-(8-(4-(4-氟苯氧基)苯-1-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(60)
按照酰胺键形成和整体去保护的通用步骤，得到白色固体状的60，产率为40％：1HNMR(600MHz,CD3OD)δ9.42(s,1H),7.16(d,J＝8.5Hz,2H),7.09–7.04(m,2H),6.99–6.95(m,2H),6.88(d,J＝8.5Hz,2H),5.41(d,J＝1.6Hz,1H),5.29–5.27(m,2H),4.50–4.48(m,2H),4.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.92–3.77(m,6H),3.67–3.63(m,3H),3.57–3.52(m,2H),3.48–3.43(m,2H),3.33–3.30(m,2H),3.29–3.26(m,1H),3.23–3.17(m,3H),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H),2.93(dd,J＝14.3,4.1Hz,1H),2.60(t,J＝7.6Hz,2H),2.29(t,J＝13.6Hz,1H),1.97–1.88(m,5H),1.83–1.64(m,5H),1.63–1.59(m,2H),1.57–1.48(m,4H),1.45(dd,J＝14.7,2.4Hz,1H),1.39(s,3H),1.38–1.30(m,13H),1.21(d,J＝6.4Hz,3H),1.19–1.15(m,1H),1.13(s,3H),1.11–1.07(m,1H),1.04(dd,J＝13.6,3.7Hz,1H),0.99(s,3H),0.96(d,J＝11.6Hz,1H),0.92(s,3H),0.85(s,3H),0.76(s,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ209.2,177.1,171.5,160.8,159.2,156.9,155.1,144.9,139.1,130.8,123.1,121.2,121.2,119.5,117.3,117.1,106.9,105.1,101.0,95.2,84.0,83.5,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,73.9,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,36.2,33.6,33.4,32.9,32.0,31.3,30.7,30.5,30.4,30.2,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C73H107FNO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1384.7212，实测值1384.7224。
Figure GDA0003437676220000551
3-O-(N-(8-(4-羟基苯-1-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(61)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的61，产率为23％：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.42(s,1H),8.55(s,1H),6.97(d,J＝8.5Hz,2H),6.69(d,J＝8.5Hz,2H),5.41(d,J＝1.7Hz,1H),5.30(t,J＝3.1Hz,1H),5.29(d,J＝8.2Hz,1H),4.49(d,J＝7.7Hz,2H),4.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.93–3.77(m,6H),3.69–3.63(m,3H),3.58–3.52(m,2H),3.49–3.41(m,2H),3.33–3.25(m,3H),3.24–3.16(m,3H),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H),2.94(dd,J＝14.2,4.2Hz,1H),2.50(t,J＝7.5Hz,2H),2.30(t,J＝13.6Hz,1H),1.98–1.88(m,5H),1.83–1.64(m,5H),1.60–1.48(m,6H),1.47–1.43(m,1H),1.40(s,3H),1.37–1.27(m,13H),1.22(d,J＝6.4Hz,3H),1.18–1.16(m,1H),1.13(s,3H),1.11–1.03(m,2H),1.00(s,3H),0.96–0.95(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ209.2,177.2,171.5,156.3,144.8,134.8,130.3,123.2,116.1,106.9,105.0,101.1,95.2,84.0,83.4,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,36.1,33.6,33.4,33.1,32.0,31.3,30.7,30.5,30.3,30.3,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C67H104NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1290.6994，实测值19690.7008。
Figure GDA0003437676220000552
3-O-(N-(8-(4-吗啉基苯-1-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(62)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的62，产率为43％：1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H),8.55(s,1H),7.07(d,J＝8.5Hz,2H),6.90(d,J＝8.5Hz,2H),5.41(d,J＝1.1Hz,1H),5.31–5.27(m,2H),4.49(d,J＝7.6Hz,1H),4.48(brs,1H)4.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.92–3.90(m,1H),3.89–3.77(m,9H),3.69–3.63(m,3H),3.57–3.52(m,2H),3.49–3.42(m,2H),3.33–3.26(m,3H),3.24–3.16(m,3H),3.13(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H),3.11–3.08(m,4H),2.94(dd,J＝14.3,4.0Hz,1H),2.53(t,J＝7.6Hz,2H),2.29(t,J＝13.6Hz,1H),1.98–1.86(m,5H),1.82–1.63(m,5H),1.62–61.47(m,6H),1.47–1.43(m,1H),1.40(s,3H),1.37–1.29(m,13H),1.22(d,J＝6.4Hz,3H),1.17(d,J＝13.4Hz,1H),1.13(s,3H),1.11–1.02(m,2H),0.99(s,3H),0.96–0.94(m,4H),0.87(s,3H),0.76(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ209.2,177.1,171.5,150.9,144.8,135.9,130.0,123.1,117.4,106.9,105.1,101.1,95.1,84.0,83.6,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,68.0,67.3,56.1,51.4,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,36.1,33.6,33.4,33.0,32.0,31.3,30.8,30.5,30.3,30.2,27.9,27.2,26.0,24.9,24.1,21.5,18.3,17.8,16.5,16.4,10.6ppm；C71H111N2O23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1359.7572，实测值1359.7580。
Figure GDA0003437676220000561
3-O-(N-(8-(呋喃-2-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(66)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的66，产率为23％：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.42(s,1H),8.55(s,1H),7.33(d,J＝1.1Hz,1H),6.30–6.26(m,1H),5.99(d,J＝3.1Hz,1H),5.41(d,J＝1.4Hz,1H),5.30–5.27(m,2H),4.50–4.47(m,2H),4.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.93–3.76(m,6H),3.71–3.62(m,3H),3.58–3.50(m,2H),3.48–3.42(m,2H),3.33–3.25(m,3H),3.23–3.16(m,3H),3.13(dd,J＝9.0,7.8Hz,1H),2.94(dd,J＝14.3,4.2Hz,1H),2.62(d,J＝7.5Hz,2H),2.31(d,J＝13.4Hz,1H),1.99–1.87(m,5H),1.84–1.59(m,7H),1.59–1.48(m,4H),1.45(dd,J＝14.8,2.5Hz,1H),1.40(s,3H),1.37–1.30(m,13H),1.22(d,J＝6.4Hz,3H),1.18(d,J＝11.0Hz,1H),1.13(s,3H),1.12–1.08(m,1H),1.07–1.03(m,1H),1.01(s,3H),0.97–1.94(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ209.2,177.2,171.5,157.5,144.8,141.9,123.2,111.0,106.9,105.7,105.0,101.1,95.2,84.0,83.4,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.8,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,33.6,33.4,32.0,31.3,30.6,30.5,30.2,29.3,28.9,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.3,10.6ppm；C65H102NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1264.6837，实测值1264.6846。
Figure GDA0003437676220000571
3-O-(N-(8-(吡啶-3-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(68)
按照酰胺键形成和整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的68，产率为42％：1HNMR(600MHz,CD3OD)δ9.42(s,1H),8.55(s,1H),8.38(d,J＝1.8Hz,1H),8.36(dd,J＝4.8,1.8Hz,1H),7.70(dt,J＝7.8,1.8Hz,1H),7.37(dd,J＝7.7,4.8Hz,1H),5.41(d,J＝1.6Hz,1H),5.29–5.27(m,2H),4.50–4.47(m,2H),4.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.92–3.77(m,6H),3.69–3.63(m,3H),3.56–3.53(m,2H),3.49–3.42(m,2H),3.33–3.25(m,3H),3.23–3.17(m,3H),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H),2.93(dd,J＝14.3,4.2Hz,1H),2.67(t,J＝7.6Hz,2H),2.29(t,J＝13.6Hz,1H),1.98–1.87(m,5H),1.83–1.62(m,7H),1.56–1.48(m,4H),1.45(dd,J＝14.7,2.4Hz,1H),1.39(s,3H),1.38–1.28(m,13H),1.22(d,J＝6.4Hz,3H),1.19–1.15(m,1H),1.13(s,3H),1.10(d,J＝13.5Hz,1H),1.06–1.01(m,1H),1.00(s,3H),0.96–0.94(m,4H),0.86(s,3H),0.76(s,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ209.2,177.2,171.5,170.3,150.0,147.5,144.8,140.3,138.3,130.9,125.2,123.1,106.9,105.0,101.1,95.2,84.08,83.4,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.2,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.4,33.8,33.6,33.4,32.4,32.0,31.3,30.8,30.8,30.6,30.4,30.3,30.2,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C66H103N2O22[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1275.6997，实测值1275.7031。
Figure GDA0003437676220000572
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(56α)
按照整体去保护的通用步骤，得到白色固体状的56α，产率为47％：1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.41(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.32(dd,J＝8.6,7.5Hz,2H),7.16(d,J＝8.6Hz,2H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,2H),6.90(d,J＝8.5Hz,2H),6.06(d,J＝3.7Hz,1H,H-1’),5.33(t,J＝3.4Hz,1H,H-12),4.87(d,J＝1.7Hz,1H,H-1”)4.49(s,1H,H-16),4.42(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”’),4.26(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.97(dd,J＝3.2,1.7Hz,1H,H-2”),3.92–3.86(m,3H,H-3,H-2’,H-5’),3.85–3.80(m,2H,H-3’,H-5a”’),3.77(dd,J＝9.4,3.2Hz,1H,H-3”),3.72(d,J＝3.0Hz,1H,H-4’),3.65(d,J＝9.7Hz,1H,H-5””),3.53(dq,J＝9.4,6.0Hz,1H,H-5”),3.49(t,J＝9.4Hz,1H,H-4”),3.45–3.41(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3.25(m,3H,H-3”’,H-3””,–NHCHa –),3.23–3.16(m,3H,H-2”’,H-5b”’,–NHCHb –),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H,H-2””),2.98(dd,J＝14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.60(t,J＝7.7Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.26(t,J＝13.7Hz,1H),2.01–1.88(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83–1.74(m,3H,H-2b,H-22b,H-9),1.70(d,J＝13.4Hz,1H,H-1a),1.65–1.59(m,3H,H-15a,碳链CH2 ),1.58–1.47(m,4H,H-6a,H-7a,碳链CH2 ),1.41–1.38(m,4H,H-15b,H-27),1.37–1.31(m,9H,H-5,碳链CH2 ×4),1.24(d,J＝6.0Hz,3H,H-6”),1.23–1.19(m,2H,H-6b,H-21b),1.17(d,J＝6.5Hz,3H,H-6’),1.12(s,3H,H-24),1.11–1.08(m,H-1b),1.05(dd,J＝11.7,4.3Hz,1H,H-19b),1.01(s,3H,H-25),0.95–0.91(m,4H,H-7b,H-30),0.87(s,3H,H-29),0.79(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.1(C-23),176.8(C-28),171.5,159.2,156.5,144.7(C-13),139.1,130.8,130.7,124.0,123.4(C-12),120.0,119.4,107.1(C-1”’),105.0(C-1””),104.5(C-1”),93.0(C-1’),84.5(C-4”),83.3(C-3),78.4(C-3”’),77.6(C-3””),76.9(C-2’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),75.0(C-16),74.7(C-2””),73.5(C-4’),73.2(C-4””),72.5(C-3”),71.6(C-2”),71.0(C-4”’),71.0(C-3’),70.5(C-5’),68.8(C-5”),67.2(C-5”’),56.1(C-4),50.6(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.1(C-18),41.0(C-8),40.0,39.4(C-1),37.1(C-10),36.3(C-21,C-15),36.2,33.6(C-6),33.4(C-29),32.9,32.4(C-22),31.4(C-20),30.7,30.4,30.3,30.2,27.9,27.2(C-27),26.0(C-2),25.3(C-30),24.5(C-11),21.4(C-7),18.0(C-26),17.9(C-6”),16.8(C-6’),16.3(C-25),10.5(C-29)ppm；C73H108NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1366.7307，实测值1366.7318。
Figure GDA0003437676220000581
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-L-吡喃阿拉伯糖基)皂皮酸酯(77β)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的77β，产率为67％：1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.32(dd,J＝8.5,7.4Hz,2H),7.16(dd,J＝8.5,1.0Hz,2H),7.07(tt,J＝7.6,1.0Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,2H),6.90(d,J＝8.5Hz,2H),5.61(d,J＝3.7Hz,1H,H-1’),5.35(t,J＝3.5Hz,1H,H-12),5.02(s,1H,H-1”),4.51(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”’),4.49(s,1H,H-16),4.26(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.92–3.79(m,7H,H-5a’,H-3,H-3’,H-2”,H-3”,H-5a”’,H-4’),3.77(dd,J＝5.2,3.7Hz,1H,H-2’),3.73–3.67(m,1H,H-5”),3.65(d,J＝9.7Hz,1H,H-5””),3.57(t,J＝9.1Hz,1H,H-4”),3.50–3.41(m,3H,H-5b’,H-4”’,H-4””),3.33–3.26(m,3H,H-3”’,H-3””,–NHCHa –),3.23–3.16(m,3H,H-2”’,H-5b”’,–NHCHb –),3.14(dd,J＝9.2,7.8Hz,1H,H-2””),3.05(dd,J＝14.3,4.2Hz,1H,H-18),2.60(t,J＝7.6Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.28(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.97–1.87(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84–1.66(m,5H,H-2a,H-22b,H-9,H-15a,H-1a),1.66–1.59(m,2H,碳链CH2 ),1.59–1.50(m,3H,H-6a,碳链CH2 ),1.42–1.37(m,4H,H-15b,H-27),1.36–1.32(m,9H,H-5,碳链CH2 ×4),1.31–1.27(m,5H,H-6b,H-7a,H-6”),1.17–1.12(m,4H,H-21b,H-24),1.12–1.07(m,1H,H-1b),1.04(dd,J＝12.7,3.1Hz,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.97–0.92(m,4H,H-30,H-7b),0.86(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.1(C-23),176.9(C-28),171.5,159.2,156.5,144.9(C-13),139.1,130.8,130.7,124.0,123.4(C-12),120.0,119.4,106.6(C-1”’),105.0(C-1””),101.3(C-1”),94.0(C-1’),83.4(C-3),83.3(C-4”),78.1(C-3”’),77.6(C-3””),76.6(C-5””),76.0(C-2”’),75.5(C-2’),74.7(C-2””),74.6(C-16),73.2(C-4””),72.3(C-3”),72.1(C-2”),71.1(C-3’,C-4”’),69.0(C-5”),67.2(C-5”’),67.0(C-4’),63.7(C-5’),56.1(C-4),50.2(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),47.7(C-19),42.8(C-14),42.1(C-18),41.1(C-8),40.0(碳链CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.4(C-21),36.3(C-15),36.2(碳链CH2),33.5(C-6),33.4(C-29),32.9(碳链CH2),32.0(C-22),31.4(C-20),30.7(碳链CH2),30.5(碳链CH2),30.3(碳链CH2),30.3(碳链CH2),27.9(碳链CH2),27.3(C-27),26.0(C-2),25.1(C-30),24.5(C-11),21.5(C-7),18.1(C-6”),17.9(C-26),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C72H105NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1352.7150，实测值1352.7167。
Figure GDA0003437676220000591
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基)皂皮酸酯(77α)
按照整体去保护的通用步骤，以35％的产率获得白色固体状的77α：1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.41(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.32(dd,J＝8.6,7.4Hz,2H),7.16(d,J＝8.6Hz,2H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),6.90(d,J＝8.6Hz,2H),6.09(d,J＝3.6Hz,1H,H-1’),5.34(t,J＝3.5Hz,1H,H-12),4.89(d,J＝1.7Hz,H-1”)4.49(s,1H,H-16),4.43(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”’),4.26(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.96(dd,J＝3.1,1.7Hz,1H,H-2”),3.94(dd,J＝10.1,3.6Hz,1H,H-2’),3.92–3.90(m,H-4’),3.89(dd,J＝11.8,4.7Hz,1H,H-3),3.85(dd,J＝10.1,3.3Hz,1H,H-3’),3.83(dd,J＝11.4,5.4Hz,1H,H-5a”’),3.80–3.76(m,2H,H-5a’,H-3”),3.67(dd,J＝12.4,1.8Hz,1H,H-5b’),3.65(d,J＝9.7Hz,1H,H-5””),3.58–3.53(m,1H,H-5”),3.49(t,J＝9.4Hz,1H,H-4”),3.46–3.41(m,2H,H-4”’,H-4””),3.33–3.26(m,3H,H-3”’,H-3””,–NHCHa –),3.23–3.12(m,4H,H-2”’,H-5b”’,H-2””,–NHCHb –),2.98(dd,J＝14.4,4.2Hz,1H,H-18),2.60(t,J＝7.6Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.26(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),2.00–1.87(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83–1.78(m,2H,H-2b,H-22b),1.75(dd,J＝10.9,6.7Hz,1H,H-9),1.73–1.65(m,2H,H-1a,H-15a),1.65–1.60(m,2H,碳链CH2 ),1.60–1.46(m,4H,H-6a,H-7a,碳链CH2 ),1.43–1.38(m,4H,H-15b,H-27),1.37–1.32(m,9H,H-5,碳链CH2 ×4),1.26–1.24(m,4H,H-6b,H-6”),1.21(d,J＝12.5Hz,1H,H-21b),1.12(s,3H,H-24),1.10(dd,J＝13.7,3.6Hz,1H,H-1b),1.05(dd,J＝12.4,3.7Hz,1H,H-19b),1.01(s,3H,H-25),0.95–0.91(m,4H,H-7b,H-30),0.87(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.0(C-23),176.8(C-28),171.5,170.3,159.2,156.5,144.5(C-13),139.2,130.8,130.7,124.0,123.5(C-12),120.0,119.4,107.1(C-1”’),105.0(C-1””),104.3(C-1”),93.5(C-1’),84.4(C-4”),83.3(C-3),78.4(C-3”’),77.6(C-3””),77.0(C-2’),76.6(C-5””),76.1(C-2”’),74.9(C-16),74.7(C-2””),73.2(C-4””),72.5(C-3”),71.6(C-2”),71.0(C-4”’),70.7(C-4’),70.1(C-3’),68.8(C-5”),67.2(C-5”’),66.5(C-5’),56.1(C-4),50.7(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9),47.9(C-19),42.8(C-14),42.2(C-18),41.1(C-8),40.0(碳链CH2 ),39.4(C-1),37.1(C-10),36.4(C-21),36.3(C-15),36.2(碳链CH2 ),33.7(C-6),33.3(C-29),32.9(碳链CH 2 ),32.3(C-22),31.4(C-20),30.7(碳链CH2 ),30.4(碳链CH2 ),30.3(碳链CH2 ),30.2(碳链CH2 ),27.9(碳链CH2 ),27.2(C-27),26.0(C-2),25.3(C-30),24.5(C-11),21.4(C-7),17.9(C-6”),17.9(C-26),16.3(C-25),10.5(C-24)ppm；C72H106NO23[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1352.7150，实测值1352.7159。
Figure GDA0003437676220000601
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)刺囊酸酯(78)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的78，产率为69％：1H NMR(600MHz,MeOD)δ8.55(s,1H,酰胺NH),7.32(dd,J＝8.6,7.4Hz,2H),7.16(dd,J＝8.6,1.0Hz,2H),7.06(tt,J＝7.4,1.0Hz,1H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),6.90(d,J＝8.6Hz,2H),5.41(d,J＝1.7Hz,1H,H-1”),5.30–5.27(m,2H,H-12,H-1’),4.51–4.48(m,2H,H-1”’,H-16),4.40(d,J＝7.8Hz,1H,H-1””),3.92(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H,H-2”),3.88–3.79(m,4H,H-5a”’,H-3”,H-2’,H-5”),3.69–3.62(m,3H,H-5””,H-3’,H-5’),3.58–3.53(m,2H,H-4”,H-4’),3.50–3.45(m,2H,H-4”’,H-4””),3.38(t,J＝9.1Hz,1H,H-3””),3.35–3.28(m,2H,H-3”’,–NHCHa –),3.27–3.24(m,2H,H-2”’,H-2””),3.23–3.17(m,3H,H-3,H-5b”’,–NHCHb –),2.93(dd,J＝14.3,4.2Hz,1H,H-18),2.60(m,J＝7.5Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.29(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.96–1.82(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.80–1.66(m,3H,H-22b,H-2b,H-15a),1.66–1.55(m,5H,H-1a,H-7a,H-9,碳链CH2 ),1.55–1.49(m,3H,H-6a,碳链CH2 ),1.48–1.41(m,2H,H-15b,H-6b),1.40–1.36(m,4H,H-7b,H-27),1.36–1.32(m,11H,H-6”,碳链CH2 ×4),1.21(d,J＝6.4Hz,3H,H-6’),1.16(dd,J＝10.8,3.8Hz,1H,H-21b),1.06(s,3H,H-23),1.03(dd,J＝12.1,8.9Hz,1H,H-19b),0.98(dd,J＝13.4,3.5Hz,1H,H-1b),0.95(s,3H,H-25),0.92(s,3H,H-30),0.86(s,3H,H-24),0.85(s,3H,H-29),0.78(d,J＝12.0Hz,1H,H-5),0.76(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ177.1(C-28),171.7,159.2,156.5,144.8(C-13),139.1,130.8,130.7,124.0,123.4(C-12),120.1,119.4,107.0(C-1”’),106.8(C-1””),101.1(C-1”),95.2(C-1’),91.0(C-3),84.1(C-4”),78.1(C-3”’),77.8(C-3””),76.7(C-3’),76.5(C-5””),76.1(C-2”’),75.2(C-2””),74.7(C-16),74.0(C-2’),73.6(C-4’),73.4(C-4””),72.7(C-5’),72.2(C-3”),71.9(C-2”),71.1(C-4”’),68.7(C-5”),67.3(C-5”’),57.2(C-5),50.0(C-17),48.1(C-9),48.1(C-19),42.7(C-14),42.3(C-18),40.8(C-8),40.2(C-4),40.0(C-1),39.9,37.9(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.4,34.3(C-6),33.4(C-29),32.9,32.0(C-22),31.3(C-20),30.7,30.6,30.4,30.3,28.5(C-23),27.9,27.3(C-2),27.2(C-27),24.8(C-30),24.6(C-11),19.4(C-7),18.3(C-6”),17.8(C-26),17.0(C-24),16.5(C-6’),16.3(C-25)ppm；C73H110NO22[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1352.7514，实测值1352.7532。
Figure GDA0003437676220000611
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-28-O-(β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(β-D-吡喃木糖基-(1→4))-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(79)
按照整体去保护的通用步骤，获得白色固体状的79，产率为33％：1H NMR(600MHz,MeOD)δ9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H,酰胺NH),7.32(dd,J＝8.5,7.5Hz,2H),7.17(d,J＝8.5Hz,2H),7.07(t,J＝7.5Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,2H),6.90(d,J＝8.5Hz,2H),5.29(s,1H,H-12),5.26(d,J＝8.1Hz,1H,H-1’),5.23(s,1H,H-1”),4.70(d,J＝7.9Hz,1H,H-1””),4.53(d,J＝7.3Hz,1H,H-1”’),4.46(s,1H,H-16),4.27–4.25(m,2H,H-2”,H-1””’),3.95(dd,J＝9.5,3.0Hz,1H,H-3”),3.90–3.81(m,4H,H-5”,H-3,H-6a”’,H-5a””),3.74(dd,J＝10.2,8.1Hz,1H,H-2’),3.71–3.60(m,5H,H-4”,H-6b”’,H-5””’,H-5’,H-3’),3.55(d,J＝2.6Hz,1H,H-4’),3.49–3.41(m,2H,H-4””,H-4””’),3.33–3.25(m,7H,H-2”’,H-3”’,H-4”’,H-5”’,H-3””,H-3””’,–NHCHa –),3.23–3.08(m,4H,H-2””,H-5b””,H-2””’),2.95–2.88(m,1H,H-18),2.60(t,J＝7.6Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.28(t,J＝13.6Hz,1H,H-19a),1.98–1.86(m,5H,H-2a,H-21a,H-22a,H-11ab),1.86–1.77(m,2H,H-22b,H-2b),1.76–1.67(m,3H,H-9,H-15a,H-1a),1.65–1.59(m,2H,碳链CH2 ),1.58–1.48(m,4H,H-6a,H-7a,碳链CH2 ),1.41–1.38(m,4H,H-15b,H-27),1.37–1.31(m,9H,H-5,碳链CH2 ×4),1.30–1.26(m,4H,H-6b,H-6”),1.21(d,J＝6.3Hz,3H,H-6’),1.16(d,J＝11.2Hz,1H,H-21b),1.14(s,3H,H-24),1.10(d,J＝16.7Hz,2H,H-1b),1.04(d,J＝10.1Hz,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.96–0.94(m,1H,H-7b),0.93(s,3H,H-30),0.85(s,3H,H-29),0.79(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ209.4(C-23),177.2(C-28),171.5,159.2,156.5,144.8(C-13),139.2,130.8,130.7,124.0,123.1(C-12),120.0,119.4,105.4(C-1”’),105.1(C-1””’),105.0(C-1””),101.5(C-1”),95.4(C-1’),83.5(C-3),83.0(C-3”),78.7(C-4”),78.6(C-3”’),78.3(C-3””),77.8(C-2”’),77.6(C-3””’),76.6(C-5””’),75.9(C-3’),75.7(C-2””),75.3(C-4”’),74.9(C-2’),74.8(C-16),74.7(C-2””’),73.5(C-4’),73.2(C-4””’),72.7(C-5’),71.5(C-4””),71.3(C-2”),71.1(C-5”’),69.1(C-5”),67.0(C-5””),62.4(C-6”’),56.1(C-4),49.9(C-17),49.5(C-5),48.1(C-19),48.0(C-9),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0,39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-15,C-21),36.2,33.8(C-6),33.4(C-29),32.9,31.8(C-22),31.3(C-20),30.7,30.5,30.4,30.3,27.9,27.3(C-27),26.0(C-2),24.9(C-30),24.5(C-11),21.4(C-7),18.6(C-6”),17.8(C-26),16.5(C-6’),16.4(C-25),10.6(C-24)；C79H118NO28[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1528.7835，实测值1528.7847。
合成例II
原皂苷元与三糖偶合。
考虑到葡萄糖醛酸酯与皂皮酸酯缀合的漫长过程，我们进一步应用半合成方法来获得皂苷核心。在碱性条件下进行起始物Quillaja Ultra Dry100-Q(Desert King，批次：QDU-100-121213-2)水解连接C-28的寡糖。经过三乙基硅化和选择性苄化作用后，通过三个步骤提供原皂苷元核心(流程7)。
流程7-分支三糖-三萜皂苷的分离和选择性保护。
Figure GDA0003437676220000631
(流程7)
多样化连接子于原皂苷元上的酰胺键形成。
三糖与原皂苷元的偶合可容易地实现而提供皂苷核心。经过去保护和酰胺键形成，提供具有多元化碳链的目标皂苷。
流程8-演示根据本发明实施例的皂苷类似物的制备。
Figure GDA0003437676220000641
(流程8)
实验细节
Figure GDA0003437676220000642
3-O-(2,3,4,6-四-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃木糖基-(1→3))-3-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸))-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸(81)
在室温和N2气体环境下，添加TESOTf(5.0mL,22.1mmol)至原皂苷元(1.72g)在无水吡啶(25mL)的经搅拌的悬浮液中。将反应混合物搅拌2天，然后添加TESOTf(1.3mL,5.8mmol)，然后在24小时后再添加1次(1.0mL,4.4mmol)。将反应混合物搅拌总共5天。将所得混合物浓缩，并使其通过硅胶柱，用己烷/EtOAc(2:1)洗脱。在减压下将洗出物浓缩并干燥，得到黄色油状物。将所得黄色油状物溶于MeOH/THF(1:1)(80mL)，并在室温下将溶液搅拌3天。将反应混合物在减压下浓缩，然后以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/6至1/4)纯化，得到81(0.66g,～19％)，为白色固体泡沫。Rf 0.47(EtOAc/苯＝1/4)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.68(s,1H),5.35(br.s,1H,H-12),4.56(br.s,1H,H-16),4.54(d,J＝7.4Hz,1H,H-1”'),4.42(d,J＝7.4Hz,1H,H-1”),4.41(d,J＝6.4Hz,1H,H-1'),3.96-3.88(m,4H,H-4”,H-3',H-5',H-3”),3.84-3.82(m,2H,H-5a”',H-2'),3.77(t,J＝9.2Hz,1H,H-6a”),3.65-3.61(m,3H,H-3,H-2”,H-6b”),3.52-3.49(m,1H,H-4”'),3.53-3.51(m,1H,H-4'),3.42-3.35(m,2H,H-3”',H-5”),3.27(t,J＝7.8Hz,1H,H-2”'),3.12(t,J＝10.7Hz,1H,H-5”'),2.96(dd,J＝13.3Hz,J＝3.1Hz,1H,H-18),2.22(t,J＝13.8Hz,1H,H-19),1.92-1.86(m,4H),1.84-1.71(m,4H),1.68(t,J＝8.9Hz,1H,H-19a),1.63-1.31(m,1H,H-1),1.57-1.50(m,1H),1.49-1.41(m,2H,H-6),1.39-1.36(m,5H,H-5,H-27),1.29-1.25(m,5H,H-15,H-24),1.12-1.15(m,2H,H-21),1.11-1.07(m,1H,H-9),1.04-0.94(m,94H),0.91(s,3H,H-29),0.75-0.62(m,54H)ppm；C101H199O20Si9[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1986.2504，实测值1986.3361。
Figure GDA0003437676220000651
3-O-(苄基2,3,4,6-四-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃木糖基-(1→3))-3-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯))-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸(82)
在N2气体环境下添加CBzCl(47μL,0.33mmol)至81(253mg,127μmol)、TBP(319mg,1.29mmol)和无水吡啶(94μL,1.2mmol)在CH2Cl2(2.2mL)中经搅拌的悬浮液中。14小时后反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/20至1/10)将残留物纯化，得到82(207mg,65％)，为白色固体泡沫。Rf 0.74(EtOAc/苯＝1/9)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.68(s,1H),7.33-7.29(m,5H),5.31(br.s,1H,H-12),5.23(d,J＝12.4Hz,1H Bn CH 2),5.07(d,J＝12.0Hz,1H Bn CH 2),4.53(d,J＝7.6Hz,1H,H-1”'),4.51(br.s,1H,H-16),4.40(d,J＝7.2Hz,1H,H-1”),4.12(d,J＝7.2Hz,1H,H-1'),3.93-3.79(m,4H,H-4”,H-3',H-5',H-3”),3.878-3.74(m,2H,H-5a”',H-2'),3.72(t,J＝9.1Hz,1H,H-6a”),3.61-3.52(m,3H,H-3,H-2”,H-6b”),3.49-3.42(m,1H,H-4”'),3.40-3.35(m,1H,H-4'),3.39-3.29(m,2H,H-3”',H-5”),3.23(t,J＝7.7Hz,1H,H-2”'),3.11(t,J＝11.0Hz,1H,H-5b”'),2.91(dd,J＝13.8Hz,J＝3.6Hz,1H,H-18),2.19(t,J＝13.6Hz,1H,H-19),1.89-1.79(m,4H),1.55-1.45(m,4H),1.42-1.30(m,5H,H-5,H-27),1.30-1.23(m,5H,H-15,H-24),1.16-1.09(m,2H,H-21),1.08-1.01(m,1H,H-9),1.00-0.90(m,94H),0.88(s,3H,H-29),0.73-0.57(m,54H)ppm；C108H204O20Si9Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值2099.2803，实测值2099.3005。
Figure GDA0003437676220000661
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(β-D-吡喃木糖基-(1→3))-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺)-皂皮酸(83)
在N2气体环境下依序添加DIPEA(5μL,25μmol)、8-(4-苯氧基苯基)辛烷-1-胺(4mg,14μmol)至皂苷二酸(26mg,13μmol)和HBTU(7mg,25μmol)在无水THF(1mL)中经搅拌的悬浮液中。1小时后反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，用CH2Cl2稀释，用H2O洗涤两次，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，然后在压力下浓缩。然后通过快速柱(硅胶，EtOAc/己烷＝1/20至1/10)将残留物纯化。然后将粗制产物溶于1mL THF中，并在pH 1酸性条件下搅拌6小时。用NaHCO3中和后，将混合物通过0.22μm过滤板过滤，将滤液浓缩，然后通过HPLC纯化(HPLC柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；流动相：20分钟内由20％ACN/H2O升至90％ACN/H2O的梯度，然后90％ACN/H2O等度15分钟；流速：4mL/min)，以80％的产率提供白色固体状的产物83(2mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.44(s,1H,H-23),7.32(t,J＝7.7Hz,2H),7.16(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(t,J＝7.2Hz,1H),6.95(d,J＝8.2Hz,2H),6.90(d,J＝8.2Hz,1H),5.28(br.s,1H,H-12),4.79(d,J＝7.1Hz,1H,H-1”),4.45(s,1H,H-16),4.57(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”'),4.43(d,J＝7.4Hz,1H,H-1'),3.89(dd,J＝11.5&5.5Hz,1H,H-3),3.85(dd,J＝11.8&4.4Hz,1H,H-5a”'),3.81(d,J＝2.5Hz,1H,H-4”)3.75(d,J＝6.2Hz,2H,H-6”),3.70-3,63(m,4H,H-2”',H-2',H-5',H-3'),3.56-3.41(m,5H,H-2”,H-3',H-4',H-5”,H-4”'),3.26-3.19(m,4H,H-3”',H-5b”',-NHCH2 -),3.00(dd,J＝14.1Hz&4.1Hz,1H,H-18),2.60(t,J＝7.6Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.29(t,J＝13.4Hz,1H,H-19a),1.99-1.87(m,5H),1.80-1.72(m,3H),1.71-1.66(m,1H),1.65-1.60(m,2H),1.55-1.49(m,3H),1.38(s,1H,H-27),1.36-1.29(m,14H),1.15(s,3H,H-23),1.02(m＝3H),0.98(s,3H,H-25),0.95(s,3H,H-30),0.86(s,3H,H-24),0.78(s,3H,H-26)ppm；C67H97NO20Na[M+Na]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1258.6496，实测值1258.6510。
Figure GDA0003437676220000671
3-O-(苄基2,3,4,6-四-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(2,3,4-三-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃木糖基-(1→3))-(3-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯))-28-O-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(84)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,4μL,24μmol)至10(68.8mg,83.6μmol)、82(130mg,62.3μmol)和活化
Figure GDA0003437676220000672
分子筛粉末在无水CH2Cl2(3.0mL)的经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，用Et3N淬灭反应，加热至室温。将所得混合物用CH2Cl2稀释并通过5μm滤纸过滤。在减压下将所得滤液浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/CH2Cl2/己烷＝1/1/6至1/1/4)将残留物纯化，得到84(160mg,93％)，为白色固体泡沫。Rf 0.63(EtOAc/己烷＝1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.67(s,1H),7.32-7.29(m,5H),5.38(d,J＝7.4Hz,1H,H-1””),5.30(t,J＝3.7 1H,H-12),5.26(d,J＝12.0Hz,1H Bn CH 2),5.23-5.21(m,1H,H-2””'),5.19(dd,J＝9.8Hz,J＝3.5Hz,1H,H-3””'),5.07(d,J＝12.4Hz,1H Bn CH 2),4.97(d,J＝0.8Hz,1H,H-1””'),4.93(dt,J＝9.2Hz,J＝5.5Hz,1H,H-4”””),4.83(dd,J＝9.2Hz,J＝5.5Hz,1H,H-2”””),4.61(d,J＝7.8Hz,1H,H-1”””),4.53(d,J＝7.8Hz,1H,H-1”'),4.46(s,1H,H-16),4.39(d,J＝7.2Hz,1H,H-1”),4.17-4.14(m,2H,H-1',H-3””),4.12-4.07(m,2H,H-3',H-5a”””),3.99(dd,J＝5.8Hz,J＝1.9Hz,1H,H-4””),3.91-3.88(m,2H,H-4',H-5'),3.86-3.81(m,3H,H-4”,H-5””,H-3”),3.81-3.75(m,3H,H-5”',H-5a”',H-2'),3.72(t,J＝9.2Hz,1H,H-6a”),3.66-3.60(m,2H,H-2””,H-5””'),3.59-3.53(m,3H,H-2”,H-6b”,H-3),3.47-3.42(m,1H,H-4”'),3.36(dd,J＝9.4Hz,J＝2.2Hz,1H,H-4””),3.34-3.29(m,3H,H-3”',H-5”,H-5b”””),3.22(t,J＝7.4Hz,1H,H-2”'),3.10,(t,J＝11.0Hz,1H,H-5b”'),2.90(dd,J＝14.1Hz,J＝3.7Hz,1H,H-18),2.21(t,J＝13.7Hz,1H,H-19),2.11(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.99(s,3H),1.95(s,3H),1.83-1.77(m,4H,H-11,H-22),1.76-1.62(m,4H),1.62-1.55(m,3H),1.52(s,3H,H-27),1.50-1.47(m,1H),1.33(s,1H,H-5),1.31(s,6H,亚异丙基CH 3),1.27(s,3H,H-24),1.26-1.25(m,3H,H-6””),1.25-1.24(d,3H,H-6””'),1.24-1.22(m,4H),0.98-0.91(m,94H),0.91-0.89(m,10H,H-1,H-7,H-15,H-20),0.69-0.56(m,54H)ppm；C138H246O37Si9Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值2772.5224，实测值2772.5586。
Figure GDA0003437676220000681
3-O-{β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-[N-(8-(4-甲氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺]}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酸酯(92)
在N2气体环境下添加DIPEA(10μL,58μmol)于50(8mg,6μmol)、8-(4-甲氧基苯基)辛-1-胺(13mg,58μmol)和HBTU(22mg,58μmol)在无水DMA(0.5mL)的经搅拌的悬浮液中。24小时后反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，用MeOH稀释，然后通过5μm滤纸过滤。将滤液浓缩，然后通过HPLC纯化(HPLC柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；流动相：20分钟内由30％ACN/H2O升至80％ACN/H2O的梯度，然后90％ACN/H2O等度15分钟；流速：5mL/min)，以30％的产率提供白色固体状的产物51b(2mg)；C79H123NO32Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1620.7920，实测值1620.7920。
Figure GDA0003437676220000682
3-O-{β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-[N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酰胺]}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酸酯(95)
在N2气体环境下添加DIPEA(6μL,40μmol)至50(5mg,4μmol)、8-(4-苯氧基苯基)辛烷-1-胺(10mg,40μmol)和HBTU(12mg,40μmol)在无水DMA(0.5mL)的经搅拌的悬浮液中。24小时后反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，用MeOH稀释，然后通过5μm滤纸过滤。将滤液浓缩，然后通过HPLC纯化(HPLC柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；流动相：20分钟内由20％ACN/H2O升至90％ACN/H2O的梯度，然后90％ACN/H2O等度15分钟；流速：2.4mL/min)，以80％的产率提供白色固体状的产物51a(2mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.45(s,1H,H-23),8.54(s,1H,酰胺NH),7.33(dd,J＝8.5Hz&7.6Hz,2H),7.18(d,J＝8.5Hz,2H),7.08(t,J＝7.4Hz,1H),6.95(d,J＝7.8Hz,2H),6.91(d,J＝8.5Hz,1H),5.37(d,J＝1.5Hz,1H,H-1””'),5.28(t,J＝3.4Hz,1H,H-12),5.27(d,J＝8.2Hz,1H,H-1””),4.79(d,J＝7.1Hz,1H,H-1”),4.62(s,1H,H-16),4.57(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”'),4.47(d,J＝7.7Hz,1H,H-1”””),4.43(d,J＝7.4Hz,1H,H-1'),3.93(m,1H,H-2””'),3.89(m,1H,H-5a”'),3.82(m,6H,H-4”,H-2””,H-3””,H-3””',H-5””',H-5a”””),3.75(m,2H,H-6”),3.69(m,1H,H-2”'),3.65(m,5H,H-2',H-5',H-3”,H-4””,H-5””),3.49(m,9H,H-3,H-3',H-4',H-5”,H-4”',H-3””',H-4””',H-2”””,H-4”””),3.22(m,6H,H-2”,H-3”',H-5b”',H-3”””,H-5b”””,-NHCHa -),2.95(m,2H,H-18,-NHCHb -),2.60(t,J＝7.6Hz,2H,碳链CH2 Ph),2.29(t,J＝13.4Hz,1H,H-19a),1.95(m,2H),1.90(m,4H),1.76(m,3H),1.69(m,2H),1.63(m,4H),1.53(m,3H),1.46(m,3H),1.38(s,1H,H-27),1.34(m,13H),1.30(m,11H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H,H-6””'),1.16(s,3H,H-23),1.15(m,1H),1.08(m,3H),0.98(s,3H,H-25),0.92(s,3H,H-30),0.90(m,2H),0.86(s,3H,H-24),0.74(s,3H,H-26)；C84H125NO32Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1682.8077，实测值1682.8079。
6-N-糖基皂皮酸酯
皂皮酸酯与叠氮基葡萄糖的缀合成功产出产率为70％的产物117。有趣的是，该结果表明3-O糖基化在16-O位置上的选择性。
Figure GDA0003437676220000701
有了糖苷117，进行进一步的修饰以将C-28羧酸去遮蔽。首先，在碱性条件及升高的温度下将苯甲酰基水解。令人惊讶的是，在这种强碱的严苛环境下，28-O-烯丙酯没有受到影响。将所得叠氮基糖苷进行三乙基硅化后，将叠氮基还原为胺，然后通过与亲脂性长链酸偶合而形成酰胺，以得到完全经保护的皂皮酸酯119a/b/c。在低酸性环境下以Pd(OAc)2催化水解O-烯丙酯119a/b/c，得到糖苷受体120a/b。在-78℃下以路易斯酸催化，使一元酸120a/b/c与三糖10缀合，以56％的产率获得121a/b/c。在H2气体环境下使完全经保护的皂苷121a/b/c与Pd(OH)2悬浮在THF/MeOH中，以将葡萄糖的3-O和4-O上的苄基水解。完成酸性水解和碱性甲醇分解后，进行HPLC纯化，以13％、16％、30％的产率获得122a/b/c。
Figure GDA0003437676220000711
3-O-(6-叠氮基-2-O-苯甲酰基-3,4-二-O-苄基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-28-O-烯丙基-皂皮酸酯(117)：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.17(s,1H,H-23),8.04-8.01(m,2H,Bz),7.61-7.56(m,1H,Bz),7.48-7.44(m,2H,Bz),7.36-7.24(m,5H,Bn),7.14-7.09(m,5H,Bn),5.88–5.80(m,1H,烯丙基内部烯基CH),5.33(t,J＝3.5Hz,1H,H-12),5.28(d,J＝17.6Hz,1H,烯丙基末端烯基CHa ),5.21-15(m,2H,H-2’,烯丙基末端烯基CHb ),4.85(d,J＝11.2Hz,1H,Bn CHa ),4.68(d,J＝11.1Hz,1H,Bn CHb ),4.62(d,J＝11.1Hz,1H,Bn CHa ),4.57(d,J＝11.2Hz,1H,BnCHb ),4.52–4.45(m,3H,H-16,烯丙基CH2 ),4.43(d,J＝7.9Hz 1H,H-1’),3.80-3.73(m,2H,H-3,H-3’),3.53-3.50(m,2H,H-4’,H-5’),3.41-3.38(m,1H,H-6a’),3.32-3.28(m,1H,H-6b’),3.05(dd,J＝14.4,4.4Hz,1H,H-18),2.13(t,J＝13.4Hz,1H,H-19),1.93–1.82(m,4H),1.80–1.69(m,4H),1.66-1.60(m,3H),1.59(br.s,3H),1.43–1.33(m,2H),1.31(s,3H),1.30–1.26(m,1H),1.21–1.14(m,3H),1.10(dd,J＝12.8,3.6Hz,1H),1.03-0.99(m,1H),0.97–0.94(m,6H),0.90–0.88(m,6H)ppm；C60H75N3O10Na[M+Na]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1020.5345，实测值1020.5350。
Figure GDA0003437676220000712
3-O-(6-叠氮基-3,4-二-O-苄基-6-去氧-2-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基硅烷基-28-O-烯丙基-皂皮酸酯(118)：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.45(s,1H,H-23),7.61-7.56(m,1H,Bz),7.48-7.44(m,2H,Bz),7.36-7.26(m,8H,Bn),7.18-7.12(m,2H,Bn),5.92–5.80(m,1H,烯丙基内部烯基CH),5.40-5.26(m,2H,H-12,烯丙基末端烯基CHa ),5.21(d,J＝10.4Hz,1H,烯丙基末端烯基CHb ),4.85(br.s,2H,Bn CH2 ),4.73(d,J＝11.0Hz,1H,Bn CHb ),4.59(br.s,1H,Bn CHa ),4.55–4.41(m,3H,H-16,烯丙基CH2 ),4.14(d,J＝6.2Hz 1H,H-1’),3.99(dd,J＝11.1,4.6Hz,1H,H-3),3.50-3.34(m,5H,H-2’,H-3’,H-4’,H-5’,H-6a’),3.32-3.23(m,1H,H-6b’),3.07-2.99(m,1H,H-18),2.23(t,J＝13.3Hz,1H,H-19),1.93–1.80(m,5H),1.78–1.59(m,6H),1.54-1.40(m,2H),1.37(br.s,3H),1.32–1.18(m,4H),1.15(br.s,5H),1.06–0.88(m,30H),0.73–0.59(m,15H)ppm；C65H100N3O9Si2[M+H]+的HRMS(ESI-TOF)计算值1233.6993，实测值1122.7010。
Figure GDA0003437676220000721
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷酰胺基)-2-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基硅烷基-28-O-烯丙基-皂皮酸酯(119a)
添加PPh3(200mg,0.76mmol)至118(282mg,0.25mmol)在THF(15mL)中经搅拌的溶液中。将混合物搅拌12小时后，加入0.5mL H2O，然后在35℃和减压下除去THF。将所得残留物用CH2Cl2稀释，然后用H2O、盐水洗涤，用MgSO4干燥，然后在压力下浓缩。将所得混合物在THF(7mL)的经搅拌的溶液，使用11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一酸(187mg,0.50mmol)、HBTU(286mg,0.75mmol)、DIPEA(132μL,0.75mmol)和THF(7mL)的预混合悬浮液处理。在30℃下搅拌2小时后反应完成后，将残留物在减压下浓缩以除去THF。将残留物用CH2Cl2稀释，用H2O、盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后在压力下浓缩。以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/8)将残留物纯化，得到119a(349mg,96％)，为白色泡沫状固体：Rf 0.29(EtOAc/己烷＝1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.45(s,1H,H-23),7.33-7.26(m,4H),7.22-7.17(m,2H),7.10(d,J＝8.5Hz,2H),7.01-6.96(m,2H),6.95-6.91(m,2H),6.86(d,J＝8.5Hz,2H),5.87–5.81(m,1H,内部烯基CH),5.32(t,J＝3.7Hz,1H,H-12),5.28(dq,J＝17.0Hz&1.2Hz,1H,末端烯基CHa ),5.18(dt,J＝10.6Hz&1.2Hz,1H,末端烯基CHb ),4.83(q,J＝10.5Hz,2H,Bn CH2 ),4.67(d,J＝10.5Hz,1H,Bn CHa ),4.56(br.s,1H,H-16),4.51(d,J＝10.6Hz,1H,Bn CHb ),4.45(dt,J＝19.9Hz&1.4Hz,2H,烯丙基CH2 ),4.02(d,J＝6.8Hz,1H,H-1’),3.93(dd,J＝11.2Hz&5,2Hz,1H,H-3),3.59(dt,J＝13.9Hz&5.9Hz,1H,H-6a’),3.47(dt,J＝13.9Hz&5.9Hz,1H,H-6b’),3.43-3.37(m,2H,H-2’,H-4’),3.36-3.22(m,2H,H-3’,H-5’),3.00(dd,J＝14.3Hz&4.0Hz,1H,H-18),2.54(t,J＝6.7Hz,2H,CH2 PhOPhF),2.32(t,J＝7.6Hz,1H,NHCHa ),2.20(m,1H,H-19a),2.15(td,J＝13.6Hz&3.1Hz,1H,H-19b),1.90–1.85(m,2H),1.84–1.76(m,3H),1.72-1.65(m,3H),1.64-1.53(m,9H),1.48-1.40(m,2H),1.34(s,2H),1.31-1.23(m,22H),1.16(s,2H),1.13-1.08(m,2H),1.06-1.02(m,2H),1.00-0.95(m,10H),0.95-0.92(m,4H),0.92-0.91(m,2H),0.91-0.90(m,3H),0.89-0.88(m,2H),0.87-0.85(m,4H),0.69-0.63(m,8H),0.63-0.57(m,6H)ppm；C88H129FNO11Si2[M+Na]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1451.9113，实测值1451.9095。
Figure GDA0003437676220000731
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-癸酰胺基-6-去氧-2-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基硅烷基-28-O-烯丙基-皂皮酸酯(119b)
按照如上所述的叠氮化物还原和酰胺形成步骤，以56％的产率获得白色固体状的119b：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.40(s,1H,H-23),7.33-7.24(m,5H),7.24-7.15(m,5H),5.87–5.80(m,1H,内部烯基CH),5.31(t,J＝3.4Hz,1H,H-12),5.30-5.25(m,2H,末端烯基CHa ,NHCH2),5.18(dd,J＝10.5Hz&1.1Hz,1H,末端烯基CHb ),4.87-4.80(m,2H,Bn CH2 ),4.65(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHa ),4.58-4.52(m,2H,H-16,Bn CHb ),4.46(qd,J＝13.6Hz&1.1Hz,2H,烯丙基CH2 ),4.07(d,J＝6.8Hz,1H,H-1’),3.98-3.91(m,1H,H-3),3.65-3.54(m,1H,H-4’),3.50-3.30(m,4H,H-2’,H-5’,H-6’),3.29-3.22(m,1H,H-3’),3.00(dd,J＝14.2Hz&3.8Hz,1H,H-18),2.31(t,J＝7.4Hz,1H,NHCHa ),2.20(t,J＝12.8Hz,1H,H-19a),1.90–1.75(m,7H),1.72–1.63(m,4H),1.63-1.58(m,3H),1.45-1.40(m,2H),1.39(s,3H),1.31-1.21(m,16H),1.78-1.15(m,1H),1.12(s,3H),1.06-1.02(m,2H),0.98(t,J＝3.7Hz,3H),0.97(s,3H),0.96(br.s,2H),0.95-0.92(m,6H),0.91(br.s,2H),0.90(s,3H),0.89(s,3H),0.87-0.84(m,6H),0.67-0.62(m,9H),0.62-0.56(m,6H)ppm；C75H120NO10Si2[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1251.8475，实测值1251.8426。
Figure GDA0003437676220000732
3-O-{2-O-三乙基硅烷基-3,4-二-O-苄基-6-[9-(4-苯氧基-苯基)壬酰胺基]-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-16-O-三乙基硅烷基-28-O-烯丙基-皂皮酸酯(119c)
按照如上所述的叠氮化物还原和酰胺形成步骤，以56％的产率获得白色固体状的119b：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.45(s,1H,H-23),7.31-7.21(m,2H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),7.04(t,J＝7.4Hz,2H),6.96(dd,J＝8.7Hz&1.0Hz,2H),6.90(d,J＝8.5Hz,2H),5.89–5.80(m,2H,酰胺NH,内部烯基CH),5.32(t,J＝3.7Hz,1H,H-12),5.28(d,J＝18.2Hz,1H,末端烯基CHa ),5.17(dd,J＝10.4Hz&1.3Hz,1H,末端烯基CHb ),4.83(q,J＝11.7Hz,2H,Bn CH2 ),4.67(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHa ),4.57(br.s,1H,H-16),4.51(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHb ),4.45(ddt,J＝11.4Hz&5.6Hz&1.1Hz,2H,烯丙基CH2 ),4.02(d,J＝6.8Hz,1H,H-1’),3.94(dd,J＝10.2Hz&5.8Hz,1H,H-3),3.63-3.56(m,1H),3.51-3.39(m,3H),3.32-3.21(m,2H),3.00(dd,J＝14.2Hz&3.9Hz,1H,H-18),2.55(t,J＝7.5Hz,2H,CH2 PhOPh),2.33-2.13(m,3H,H-19a,NHCOCH2 ),1.91-1.83(m,3H),1.83–1.76(m,3H),1.75-1.52(m,11H),1.49-1.40(m,2H),1.34(s,3H),1.29(br.s,11H),1.23(s,3H),1.15(s,3H),1.14-1.00(m,4H),0.98-0.86(m,31H),0.69-0.57(m,16H)；BBD13C NMR(100MHz,CDCl3)δ207.5(C-23),176.4(C-28),173.1(NHCO),157.7,154.8,143.5(C-13),138.5,137.8,137.5,132.2,129.6 129.4,128.4,128.2,128.1,127.9,127.2,126.8,122.7,121.7(C-12),118.9,118.4,117.8(烯丙基末端烯基CH2),101.0(C-1’),85.5(C-3),79.3,79.0,75.2(Bn CH2),75.0,75.0(Bn CH2),74.9(C-16),73.1,65.0(C-6’),54.5,48.9,48.8,46.6,46.3,41.3,40.4,40.0,39.5,38.1,36.7,36.0,35.2,35.1,34.5,33.8,32.7,32.3,31.5×2,30.5,29.6,29.3×2,29.2,29.1,29.0,26.3,25.7,24.7,24.6,24.2,23.2,20.1,16.9,15.5,10.4,7.1,6.9,5.0,4.9ppm；C86H125NO11Si2[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值140.8894，实测值1405.8984。
Figure GDA0003437676220000741
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷酰胺基)-2-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基硅烷基-皂皮酸(120a)
在室温下将预混合的在1,4-二氧六环(2mL)中的甲酸(129μL,3.4mmol)/Et3N(456μL,3.2mmol)以及在1,4-二氧六环(2mL)中的Pd(OAc)2(18mg,0.08mmol)添加至119a(237mg,0.16mmol)和PPh3(107mg,0.41mmol)在1,4-二氧六环(4mL)的经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌12小时，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/4至1/2)将残留物纯化，得到白色固体状的120a(186mg,81％)：Rf 0.36(EtOAc/己烷＝1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.41(s,1H,H-23),7.27-7.26(m,1H),7.25(br.s,1H),7.34-7.25(m,6H),7.06(d,J＝8.4Hz,1H),6.98-6.64(m,6H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),5.82(t,J＝5.2Hz,酰胺NH),5.30(br.s,1H,H-12),4.83-4.76(m,2H,Bn CH2 ),4.63(d,J＝10.3Hz,1H,Bn CHa ),4.50-4.53(m,2H,H-16,Bn CHb ),3.98(d,J＝6.6Hz,1H,H-1’),3.90(dd,J＝11.2Hz&4.9Hz,1H,H-3),3.60-3.53(m,1H,H-6a’),3.48-3.41(m,1H,H-6b’),3.41-3.34(m,2H,H-2’,H-4’),3.27-3.19(m,2H,H-3’,H-5’),2.90(dd,J＝14.1Hz&3.6Hz,1H,H-18),2.50(t,J＝7.6Hz,2H,CH2 PhOPhF),2.31(t,J＝7.4Hz,1H,NHCHa ),2.19-2.09(m,3H),1.87–1.68(m,7H),1.68-1.59(m,3H),1.59-1.49(m,4H),1.44-1.36(m,2H),1.30(s,3H,H-27),1.28-1.16(m,17H),1.11(s,3H,H-29),1.09-1.08(m,1H),1.03-0.97(m,2H),0.94(s,2H),0.93(s,3H),0.92(s,3H),0.89-0.87(m,5H),0.87(s,3H),0.85(s,2H),0.82(s,3H),0.66-0.53(m,17H)ppm；C85H125FNO11Si2[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1411.8800，实测值1411.8742。
Figure GDA0003437676220000751
3-O-(2-O-三乙基硅烷基-3,4-二-O-苄基-6-癸酰胺基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基硅烷基-28-O-烯丙基-皂皮酸(120b)
在室温下将预混合的在1,4-二氧六环(2mL)中的甲酸(129μL,3.4mmol)/Et3N(456μL,3.2mmol)以及在1,4-二氧六环(2mL)中的Pd(OAc)2(18mg,0.08mmol)添加至119b(200mg,0.16mmol)和PPh3(107mg,0.41mmol)在1,4-二氧六环(4mL)的经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌12小时，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/4至1/2)将残留物纯化，得到白色固体状的120b(154mg,80％)：Rf 0.36(EtOAc/己烷＝1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.45(s,1H,H-23),7.32-7.24(m,6H),7.24-7.19(m,4H),5.85(t,J＝5.0Hz,酰胺NH),5.30(t,J＝3.7Hz 1H,H-12),4.86-4.80(m,2H,Bn CH2 ),4.66(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHa ),4.54-4.49(m,2H,H-16,Bn CHb ),4.03(d,J＝6.8Hz,1H,H-1’),3.94(dd,J＝11.2Hz&4.9Hz,1H,H-3),3.59-3.55(m,1H),3.52-3.46(m,1H),3.44-3.38(m,2H),3.31-3.24(m,2H),2.94(dd,J＝14.2Hz&4.0Hz,1H,H-18),2.31(t,J＝7.5Hz,1H,NHCHa ),2.19-2.09(m,3H),1.87–1.68(m,7H),1.68-1.59(m,3H),1.59-1.49(m,4H),1.44-1.36(m,2H),1.30(s,3H,H-27),1.28-1.16(m,17H),1.11(s,3H),1.09-1.08(m,1H),1.03-0.97(m,2H),0.94(s,2H),0.93(s,3H),0.92(s,3H),0.89-0.87(m,5H),0.87(s,3H),0.85(s,2H),0.82(s,3H),0.66-0.53(m,17H)；BBD13C NMR(150MHz,CDCl3)δ207.4(C-23),182.7(C-28),173.3(NHCO),143.3(C-13),138.6,137.6,128.4,128.2,126.9,121.8(C-12),101.1(C-1’),85.5,79.5,79.2(C-3),75.2(Bn CH2),75.0(Bn CH2),74.9,74.8(C-16),73.2,54.5,49.0,48.6,46.6,46.3,41.3,40.1(C-6’),39.5(C-8),38.2,36.8(-NHCOCH2-),36.1,35.1,34.6,34.0,32.6,32.,31.8,31.6,30.5,29.5,29.4,29.3,29.2,29.0,26.4,25.8,24.7,24.2,23.2,22.7,20.1,16.9,15.5,14.1,10.4,7.1,7.0,5.1,5.0ppm ppm；C72H116NO10Si2[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1210.8132，实测值1210.8108。
Figure GDA0003437676220000761
3-O-{2-O-三乙基硅烷基-3,4-二-O-苄基-6-[9-(4-苯氧基-苯基)壬酰胺基]-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-16-O-三乙基硅烷基-28皂皮酸(120c)
在室温下将预混合的在1,4-二氧六环(2mL)中的甲酸(129μL,3.4mmol)/Et3N(456μL,3.2mmol)以及在1,4-二氧六环(2mL)中的Pd(OAc)2(18mg,0.08mmol)添加至119c(224mg,0.16mmol)和PPh3(107mg,0.41mmol)在1,4-二氧六环(4mL)中经搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌12小时，然后在减压下浓缩。以柱色谱法(硅胶，EtOAc/己烷＝1/4至1/2)将残留物纯化，得到白色固体状的120c(154mg,80％)：Rf 0.36(EtOAc/己烷＝1/2)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.45(s,1H,H-23),7.31-7.21(m,2H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),7.04(t,J＝7.4Hz,2H),6.96(dd,J＝8.7Hz&1.0Hz,2H),6.90(d,J＝8.5Hz,2H),5.89–5.80(m,2H,酰胺NH,内部烯基CH),5.32(t,J＝3.7Hz,1H,H-12),4.83(q,J＝11.7Hz,2H,Bn CH2 ),4.67(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHa ),4.57(br.s,1H,H-16),4.51(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHb ),4.02(d,J＝6.8Hz,1H,H-1’),3.94(dd,J＝10.2Hz&5.8Hz,1H,H-3),3.63-3.56(m,1H),3.51-3.39(m,3H),3.32-3.21(m,2H),3.00(dd,J＝14.2Hz&3.9Hz,1H,H-18),2.55(t,J＝7.5Hz,2H,CH2 PhOPh),2.33-2.13(m,3H,H-19a,NHCOCH2 ),1.91-1.83(m,3H),1.83–1.76(m,3H),1.75-1.52(m,11H),1.49-1.40(m,2H),1.34(s,3H),1.29(br.s,11H),1.23(s,3H),1.15(s,3H),1.14-1.00(m,4H),0.98-0.86(m,31H),0.69-0.57(m,16H)；BBD 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ207.5(C-23),182.0(C-28),173.2(NHCO),157.7,154.8,143.5(C-13),138.5,137.5,132.2,129.6 129.4,128.4,128.2,128.1,127.9,127.2,126.8,122.7,121.7(C-12),118.9,118.4,101.0(C-1’),85.5(C-3),79.3,79.0,75.2(Bn CH2),75.0,75.0(Bn CH2),74.9(C-16),73.1,65.0(C-6’),54.5,48.9,48.8,46.6,46.3,41.3,40.4,40.0,39.5,38.1,36.7,36.0,35.2,35.1,34.5,33.8,32.7,32.3,31.5×2,30.5,29.6,29.3×2,29.2,29.1,29.0,26.3,25.7,24.7,24.6,24.2,23.2,20.1,16.9,15.5,10.4,7.1,6.9,5.0,4.9ppm；C83H122NO11Si2[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1364.8551，实测值1364.8567。
Figure GDA0003437676220000771
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷酰胺基)-2-O-三乙基硅烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-28-O-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(121a)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,4μL,24μmol)至10(40mg,48μmol)、120a(50mg,35μmol)和活化
Figure GDA0003437676220000772
分子筛粉末在无水CH2Cl2(0.5mL)的经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，用Et3N淬灭反应，并加热至室温。将所得混合物用CH2Cl2稀释并通过5μm滤纸过滤。在减压下将所得滤液浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/5至1/2)将残留物纯化，得到121a(37mg,50％)，为白色固体泡沫。Rf 0.56(EtOAc/己烷＝1/1)；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ9.49(s,1H,H-23),7.33-7.26(m,6H),7.26-7.21(m,4H),7.12(d,J＝8.4Hz,1H),7.02-7.00(m,2H),6.96-6.93(m,2H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),5.86(t,J＝5.1Hz,酰胺NH),5.41(d,J＝7.6Hz,1H,H-1”),5.33(t,J＝3.4Hz,1H,H-12),5.25(dd,J＝3.4Hz&1.3Hz,1H,H-2”’),5.20(dd,J＝9.8Hz&3.5Hz,1H,H-3”’),5.13(t,J＝9.4Hz,1H,H-3””),4.98(d,J＝1.3Hz,1H,H-1”’),4.97-4.94(m,1H,H-4””),4.88-4.82(m,3H,H-2””,Bn CH2 ),5.68(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHa ),4.63(d,J＝7.7Hz,1H,H-1””),4.53(d,J＝10.4Hz,1H,Bn CHb ),4.50(br.s,1H,H-16),4.17(t,J＝6.0Hz,1H,H-3”),4.12-4.10(m,1H,H-5a””),4.04-4.00(m,2H,H-1’,H-4”),3.98-3.94(m,1H,H-3),3.89-3.84(m,1H,H-5”),3.84-3.79(m,1H,H-5”’),3.68-3,64(m,1H,H-2”),3.64-3.59(m,2H,H-6a’,H-4’),3.49(dt,J＝13.9Hz,&3.8Hz,1H H-6b’),3.45-3.39(m,2H,H-2’,H-4’),3.36-3.24(m,3H,H-3’,H-5’,H-5b””),2.93(dd,J＝14.2Hz&3.8Hz,1H,H-18),2.56(t,J＝7.6Hz,2H,CH2 PhOPhF),2.22(m,1H,H-19a),2.17(td,J＝7.5Hz&3.4Hz,2H,-NHCOCH2 -),2.13(s,3H),2.06(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.90-1.86(m,2H),1.86-1.82(m,1H),1.83-1.76(m,3H),1.74-1.67(m,4H),1.67-1.56(m,5H),1.52(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.52-1.49(m,1H),1.34(s,3H,H-27),1.33(s,3H,亚异丙基CH3 ),1.30-1.25(m,24H),1.23-1.32(m,1H),1.19(s,3H,H-24),1.13-1.10(m,1H),1.05-1.03(m,1H),1.03-1.01(m,1H),1.01-0.96(m,15H,H-25,TES CH3×4),0.92(s,H,H-30),0.91(s,3H,TES CH3),0.90(s,3H,TES CH3),0.88(s,3H,H-29),0.74(s,3H,H-26),0.68-0.58(m,12H,TES CH2×6)ppm；C115H167FNO28Si2[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值2086.1223，实测值2086.1222。
Figure GDA0003437676220000781
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-癸酰胺基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-28-O-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(121b)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,4μL,24μmol)至10(40mg,48μmol)、120b(42mg,35μmol)和活化
Figure GDA0003437676220000783
分子筛粉末在无水CH2Cl2(0.5mL)的经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，用Et3N淬灭反应，并加热至室温。将所得混合物用CH2Cl2稀释并通过5μm滤纸过滤。在减压下将所得滤液浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/5至1/2)将残留物纯化，得到121b(37mg,50％)，为白色固体泡沫。Rf 0.56(EtOAc/己烷＝1/1)；得到121bα/β混合物，为白色固体泡沫。
Figure GDA0003437676220000782
3-O-(2-O-三乙基硅烷基-3,4-二-O-苄基-6-[9-(4-苯氧基-苯基)壬酰胺基}-28-O-(2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙酰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亚异丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基硅烷基皂皮酸酯(121c)
在-75℃和N2气体环境下添加BF3·OEt2(约48％,4μL,24μmol)至10(40mg,48μmol)、120c(42mg,35μmol)和活化
Figure GDA0003437676220000784
分子筛粉末在无水CH2Cl2(0.5mL)的经搅拌的悬浮液中。0.5小时后反应完成后，用Et3N淬灭反应，并加热至室温。将所得混合物用CH2Cl2稀释并通过5μm滤纸过滤。在减压下将所得滤液浓缩。以柱色谱法(硅胶；EtOAc/己烷＝1/5至1/2)将残留物纯化，得到121c(37mg,50％)，为白色固体泡沫。Rf 0.56(EtOAc/己烷＝1/1)；得到121cα/β混合物，为白色固体泡沫。
Figure GDA0003437676220000791
3-O-(6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷酰胺基)-β-D-吡喃葡萄糖基)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酸酯(122a)
在室温和1atm H2气体环境下搅拌121a(32mg,15μmol)和10％Pd(OH)2/C(5mg,4μmol)在THF/MeOH＝4/1(1.5mL)中的悬浮液。将反应混合物搅拌12小时。在0℃下将预冷的TFA/H2O＝4/1(0.5mL)添加至粗制四糖皂苷在CH2Cl2(0.5mL)中经搅拌的溶液中，并搅拌30分钟。在0℃及减压(<1托)下将溶剂蒸发，然后在室温和高真空下干燥1小时。添加K2CO3(40mg,300μmol)至残留物的MeOH(1mL)经搅拌的溶液中，并搅拌12小时。将悬浮液过滤，浓缩，然后通过HPLC纯化(HPLC柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；流动相：25分钟内由20％ACN/H2O升至90％ACN/H2O的梯度，然后90％ACN/H2O等度15分钟；流速：5mL/min)，以16％的产率提供白色固体状的产物122a(3.6mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.41(s,1H,H-23),7.16(d,J＝8.4Hz,2H),7.07(t,J＝8.8Hz,2H),6.98-6.95(m,4H),6.87(d,J＝8.6Hz,2H),5.40(d,J＝1.4Hz,1H,H-1”’),5.31(br.s,1H,H-12),5.29(d,J＝8.2Hz,1H,H-1”),4.50-4.47(m,2H,H-16,H-1””),4.14(d,J＝7.7Hz,1H,H-1’),3.91-3.89(m,1H,H-2”’),3.86-3.78(m,5H,H-3,H-2”,H-3”’,H-5”’,H-5a””),3.68-3.64(m,2H,H-3”,H-5”),3.60-3.56(m,1H,H-6a’),3.56-3.53(m,2H,H-4”,H-4”’),3.49-3.42(m,2H,H-5’,H-4””),3.29-3.25(m,3H,H-3’,H-6b’,H-3””),3.23-3.16(m,2H,H-2””,H-5b””),3.09-3.05(m,2H,H-2’,H-4’),2.45(dd,J＝13.4Hz&3.2Hz,H-18),2.60(t,J＝7.6Hz,2H,CH2 PhOPhF),2.30(m,1H,H-19a),2.21(t,J＝7.6Hz,2H,-NHCOCH2 -),1.99-1.95(m,1H),1.95-1.91(m,1H),1.80-1.71(m,4H),1.70-1.65(m,1H),1.64-1.59(m,4H),1.55-1.50(m,2H)1.49-1.44(m,1H),1.40(s,3H,H-27),1.36-1.29(m,19H,H-6”’,碳链CH2 ×8),1.20(d,J＝6.5Hz,3H,H-6”),1.12(s,3H,H-24),1.10-1.06(m,1H),1.01(s,3H,25),0.99-0.96(m,1H),0.93(s,3H,H-30),0.92-0.89(m,1H),0.87(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；BBD 13C NMR(150MHz,CD3OD)δ209.3(C-23),177.1(C-28),176.7(酰胺NHCO),160(d,J＝240Hz),156.8,155.1,144.9(C-13),139.2,130.8,123.1(C-12),121.2(d,J＝8Hz),119.5,117.2(d,J＝23Hz),107.0,(C-1””),105.0(C-1’),101.1(C-1”’),95.2(C-1”),84.0(C-4”’),83.4(C-3),78.2(C-3””),77.6(C-3’),76.7(C-3”),76.1(C-2””),75.6(C-2’),75.2(C-5’),74.6(C-16),74.0(C-2”),73.6(C-4”),73.3(C-4’),72.7(C-5”),72.2(C-3”’),71.9(C-2”’),71.1(C-4””),68.7(C-5”’),67.3(C-5””),56.1(C-5),50.0(C-17),48.1(C-19,C-9),42.8(C-14),42.4(C-18),41.9(C-6’),41.1(C-8),39.6(C-1),37.3(C-1),36.8(-NHCOCH2-),37.1(C-10),,36.5(C-21),36.2(-CH2PhOPhF),33.6(C-16),3.4(C-29),32.9(C-6),32.0(C-22),31.4(C-20),30.8,30.7,30.6,30.4,27.3(C-2),20.2(C-27),26.0,25.9(C-2),24.9(C-30),24.6(C-11),21.6,(C-7),18.3(C-6”’),17.7(C-26),16.5(C-6”),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C76H112FNO23Si2Na[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1448.7501，实测值1448.7558。
Figure GDA0003437676220000801
3-O-{6-癸酰胺基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酸酯(122b)
在室温和1atm H2气体环境下搅拌121b(28mg,15μmol)和10％Pd(OH)2/C(5mg,4μmol)在THF/MeOH＝4/1(1.5mL)中的悬浮液。将反应混合物搅拌12小时。在0℃下添加预冷的TFA/H2O＝4/1(0.5mL)至粗制四糖皂苷在CH2Cl2(0.5mL)中经搅拌的溶液中，并搅拌30分钟。在0℃及减压(<1托)下将溶剂蒸发，然后在室温和高真空下干燥1小时。添加K2CO3(40mg,300μmol)至残留物的MeOH(1mL)经搅拌的溶液中，并搅拌12小时。将悬浮液过滤，浓缩，然后通过HPLC纯化(HPLC柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；流动相：25分钟内由20％ACN/H2O升至90％ACN/H2O的梯度，然后90％ACN/H2O等度15分钟；流速：5mL/min)，以13％的产率提供白色固体状的产物122b(2.3mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.42(s,1H,H-23),5.40(s,1H,H-1”’),5.31(br.s,1H,H-12),5.29(d,J＝8.2Hz,1H,H-1”),4.51-4.46(m,2H,H-16,H-1””),4.15(d,J＝7.7Hz,1H,H-1’),3.93-3.90(m,1H),3.87-3.78(m,5H),3.71-3.66(m,2H,),3.60-3.53(m,3H),3.49-3.41(m,2H),3.29-3.25(m,3H),3.24-3.17(m,2H),3.09-3.04(m,2H),2.95(d,J＝14.1Hz,1H,H-18),2.30(m,1H,H-19a),2.21(t,J＝7.6Hz,2H,-NHCOCH2-),2.04-1.88(m,3H),1.69-1.60(m,3H),1.55-1.44(m,4H),1.40(s,3H,H-27),1.35-1.29(m,18H),1.20(d,J＝6.5Hz,3H,H-6”),1.12(s,3H),1.10-1.06(m,1H),1.01(s,3H),0.99-0.96(m,1H),0.95(s,3H),0.93-0.89(m,3H),0.88(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13CNMR(150MHz,CD3OD)δ209.4(C-23),177.2(C-28),176.7(酰胺NHCO),144.9(C-13),123.1(C-12),106.9,(C-1””),105.0(C-1’),101.1(C-1”’),95.2(C-1”),84.0(C-4”’),83.3(C-3),78.1(C-3””),77.6,76.6,76.1,75.6,75.,74.6(C-16),74.0,73.6,73.3,72.7,72.2,71.9,71.0,68.7,67.3,56.1,50.0,48.1,42.8,42.3(C-18),41.8(C-6’),41.1,39.6,37.3,37.1,36.8(-NHCOCH2-),36.5,36.4,33.6,33.4,33.1,32.0,31.3,30.8,30.7,30.6,30.5,27.3,27.2,26.0,24.8,24.5,23.8,21.6,18.3(C-6”’),17.7,16.5(C-6”),16.3,14.6(碳链末端-CH3),10.6ppm；C63H104NO22[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1226.7059，实测值1226.7059。
Figure GDA0003437676220000811
3-O-{[9-(4-苯氧基-苯基)壬酰胺基]-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酸酯(122c)
在室温和1atm H2气体环境下搅拌121c(20mg,15μmol)和10％Pd(OH)2/C(5mg,4μmol)在THF/MeOH＝4/1(1.5mL)中的悬浮液。将反应混合物搅拌12小时。在0℃下将预冷的TFA/H2O＝4/1(0.5mL)添加于粗制四糖皂苷在CH2Cl2(0.5mL)中经搅拌的溶液中，并搅拌30分钟。在0℃和减压(<1托)下将溶剂蒸发，然后在室温和高真空下干燥1小时。将K2CO3(40mg,300μmol)添加至残留物的MeOH(1mL)经搅拌的溶液中，并搅拌12小时。将悬浮液过滤，浓缩，然后通过HPLC纯化(HPLC柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；流动相：25分钟内由20％ACN/H2O升至90％ACN/H2O的梯度，然后90％ACN/H2O等度15分钟；流速：5mL/min)，以30％的产率提供白色固体状的产物122c(6.2mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ9.41(s,1H,H-23),7.32(t,J＝8.2Hz,2H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.06(t,J＝7.5Hz,1H),6.94(d,J＝8.2Hz,2H),6.90(d,J＝8.2Hz,2H),5.40(br.s,1H,H-1”’),5.31(br.s,1H,H-12),5.28(d,J＝8.2Hz,1H,H-1”),4.50-4.46(m,2H,H-16,H-1””),4.15(d,J＝7.8Hz,1H,H-1’),3.92-3.90(m,1H,H-2”’),3.87-3.79(m,5H),3.67-3.64(m,2H),3.60-3.56(m,1H,H-6a’),3.56-3.53(m,2H),3.49-3.42(m,1H,H-4””),3.36-3.33(m,1H),3.30-3.16(m,5H),3.09-3.05(m,2H),2.97-2.92(m,1H,H-18),2.61(t,J＝7.8Hz,2H,CH2 PhOPh),2.30(m,1H,H-19a),2.21(t,J＝7.7Hz,2H,-NHCOCH2 -),1.98-1.88(m,5H),1.80-1.69(m,4H),1.67-1.59(m,4H),1.55-1.43(m,3H),1.40(s,3H,H-27),1.39-1.33(m,10H),1.31(d,J＝6.2Hz,3H,H-6”’,),1.29(s,1H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H,H-6”),1.13(s,3H),1.10-1.03(m,2H),1.00(s,3H),0.98-0.94(m,1H),0.92(s,3H),0.85(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(150MHz,CD3OD)δ209.4(C-23),177.2(C-28),176.7(酰胺NHCO),159.3,156.5,155.1,144.9(C-13),139.2,130.8,124.0,123.1(C-12),120.0,119.4,107.0,(C-1””),104.9(C-1’),101.1(C-1”’),95.2(C-1”),84.2,83.3(C-3),78.2,77.7(C-3’),76.6,76.2,75.6,75.3,74.6(C-16),74.0,73.6,73.3,72.7,72.3,71.9,71.1,68.8,67.2,56.1,50.1,48.1,42.8,42.4(C-18),41.9(C-6’),41.2,39.6,37.1,37.3,36.5(-NHCOCH2-),36.5,36.2(-CH2PhOPh),33.6,33.4,32.8,31.9,31.3,30.7,30.5,30.3,27.3,27.2,26.0,25.0,24.6,21.6,,18.3(C-6”’),17.8,16.5(C-6”),16.4,10.6ppm；C74H110NO23[M+H]+的HRMS+(ESI-TOF)计算值1380.7463，实测值1380.7476。
实验例I-皂苷的免疫评估
材料和方法
佐剂原液
将样品粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。给药前，将具有0.5％(w/w)Tween 20的原液稀释至0.5mg/mL，并通过PTFE(0.1μm)过滤。回溶PEK冻干饼(1mg/mL PEK和0.5mg/mL佐剂)或OVA(100mg)，安慰剂为PBS。
动物和疫苗接种
C57BL/6小鼠获自中国台湾省台湾实验研究院台湾实验动物中心。通过皮下途径向周龄4至8周的小鼠接种100μL疫苗，每周一剂，持续三周。第三次疫苗接种后经过一周牺牲小鼠，收集血清和脾细胞。
脾细胞样品制备和流式细胞分析
从小鼠中分离出脾脏组织，并使用PP微量离心机样品杵将其处理成单细胞悬浮液。以2x 107/2mL将脾细胞接种在6孔盘上，使用或不使用HPV16E7-肽刺激，并在CO2培养箱中培养2小时。2小时后，在37℃下使用蛋白质转运抑制剂莫能菌素(Monensin，Invitrogen，目录编号00-4505-51)和布雷菲尔德菌素(Brefeldin，Invitrogen，目录编号00-4506-51)处理细胞4小时。之后，收集细胞，用PBS洗涤两次，然后在4℃对表面CD3(BioLegend，目录编号100290)、CD4(Invitrogen，目录编号56-0041-82)、CD8(Invitrogen，目录编号12-0081-82)染色30分钟。洗涤后，在室温下使用IC固定缓冲液(Invitrogen，目录编号00-8222-49)将细胞固定30分钟，然后在透化缓冲液(Invitrogen，目录编号00-8333-56)中洗涤细胞，并用IFNγ抗体(Invitrogen，目录编号53-7311-82)染色。在流式细胞分析仪(BackmanCoulter Gallions)上获得2000万个细胞事件。使用Kaluza软件1.2版分析流量数据。首先将族群圈选在CD3+T细胞上，然后使用前向和侧向散射光圈选在活单核细胞上。随后，次圈选在CD4+/IFNγ+双重阳性细胞或CD8+/IFNγ+双重阳性细胞上。
酶联免疫斑点法(Enzyme-Linked ImmunoSpot,ELISpot)
MabTech小鼠IFNγELISpot PLUS试剂盒(3321-4HPW-2)和IL2 ELISpot PLUS试剂盒(3441-4HPW-2)用于评估IFNγ和IL2的产生。按照制造商的说明，使用捕获抗体将细胞预先平盘培养过夜。由经接种的动物中分离出脾细胞并进行红血球裂解。然后以2x 106/mL使细胞再悬浮，并使100μL细胞与100μL刺激混合试剂(stimulation master mix)结合。该混合试剂包括10μg/mL HPV16E7-pET32a、2μg/mL HPV16E7-肽。于37℃在酶联免疫斑点微孔盘(ELISPOT plate)中培养细胞24小时，并按照制造商的说明进行ELISpot分析。使用AIDvSpot Spectrum分析微孔盘。以三重复的平均值计算其值。
酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)
于4℃以100mM碳酸酯缓冲液在96孔盘(1μg/孔,Nunc Maxisorb)中将PEK平盘培养过夜。在37℃下用阻断缓冲液(含5％牛奶的PBS溶液)阻断孔盘至少1小时，然后用PBS+0.05％Tween 20洗涤。将2倍连续稀释的血清样品添加到孔盘中。1小时后，用PBS+0.05％Tween 20洗涤孔盘，并加入二抗。分别添加在1％牛奶-PBS中以1：4000稀释的过氧化物标记的山羊抗小鼠IgG1(Southernbiotech，目录编号1070-05)和山羊抗小鼠IgG2b(Southernbiotech，目录编号1090-05)，添加时间为1小时。用PBS+0.05％Tween 20洗涤孔盘，并用TMB色原溶液(Invitrogen，目录编号00-2023)显影15分钟，然后用终止溶液(0.2NH2SO4)处理。记录405nm的吸光度。
脾细胞样品制备和流式细胞分析(记忆T细胞)
从小鼠中分离出脾脏组织，并使用PP微量离心机样品杵将其处理成单细胞悬浮液。以2x 107/2mL将脾细胞接种在6孔盘上，在CO2培养箱中培养2小时。2小时后，在37℃使用或不使用E7肽刺激2小时，然后在37℃用蛋白质转运抑制剂莫能菌素(Invitrogen，目录编号00-4505-51)和布雷菲尔德菌素(Invitrogen，目录编号00-4506-51)处理细胞4小时。之后，收集细胞，用PBS洗涤两次，然后在4℃对表面CD3(BioLegend，目录编号100222)、CD4(BioLegend，目录编号100540)、CD8(Invitrogen，目录编号11-0081-86)、CD44(BioLegend，目录编号103008)、CD62L(BioLegend，目录编号104412)染色30分钟。洗涤后，在室温使用IC固定缓冲液(Invitrogen，目录编号00-8222-49)将细胞固定30分钟，然后在透化缓冲液(Invitrogen，目录编号00-8333-56)中洗涤细胞，并以IFNγ抗体(Invitrogen，目录编号48-7311-82)、IL-2抗体(Invitrogen，目录编号25-7021-82)和TNFα抗体(Invitrogen，目录编号48-7321-82)染色。在流式细胞分析仪(Backman Coulter Gallions)上获得150万个细胞事件。使用Kaluza软件1.2版分析流量数据。首先使用前向和侧向散射光将族群圈选在活单核细胞上，然后圈选在CD3+/CD4+或CD3+/CD8+T细胞上。接下来，次圈选CD62L-/CD44+记忆T细胞。随后，在CD4+/IFNγ+、CD8+/IFNγ+CD4+/IL-2+、CD8+/IL-2+、CD4+/TNFα+和CD8+/TNFα+双重阳性细胞中次圈选。
结果
小鼠疫苗接种模型使用抗原PE-E7-K3(PEK)、由假单胞杆菌外毒素、人类乳突病毒蛋白E7(HPV16 E7)和KDEL3肽序列组成的融合蛋白，用于评估佐剂的效果。每组五只小鼠，每隔三周使用50μg皂苷和PEK(100μg)免疫三次。然后通过流式细胞仪、ELISpot和ELISA分析本发明皂苷和GPI-0100(作为阳性对照)调节免疫反应的能力。
特异性T细胞活化
第三次投药后一周，收集小鼠的脾细胞，并以ELISpot测量这些具有PEK抗原的皂苷佐剂对细胞因子(IFNγ和IL-2)产生的影响(图1)。皂苷佐剂56、63、79大幅增进细胞因子IFNγ的分泌，是GPI-0100的三到四倍，并且在诱导IL-2方面也适中(图1)。
T细胞活化
以流式细胞仪分析抗原特异性T细胞活化。第三次投药后一周，收集小鼠的脾细胞，并在流式细胞分析仪(Backman Coulter Gallions)上获得2000万个细胞事件。首先将族群圈选在CD3+T细胞上，然后使用前向和侧向散射光圈选在活单核细胞上。随后，在CD4+/IFNγ+(或TNFα)双重阳性细胞或CD8+/IFNγ+(或TNFα)双重阳性细胞中次圈选。
根据流式细胞分析结果(图2至4)，与GPI-0100相比，脂族链修饰的皂苷所导致的PEK特异性CD4+和CD8+T细胞活化较弱。与GPI-0100相比，末端芳基取代的皂苷56、62、79所诱导的PEK特异性IFN-γ分泌CD8+和TNF-α分泌CD8+T细胞增殖高4至8倍。然而，皂苷对CD4+T细胞的诱导作用并不显著。这些结果表明，本发明的这些皂苷主要介导CD8+T细胞免疫。
记忆T细胞刺激
已知初始与活化的T细胞表达不同的粘附分子，其被认为因表达显然有别的粘附分子而表现出不同的移行模式。与初始及活化/记忆T细胞分化相关的两种粘附分子是CD62L(L-选择素)和CD44(H-CAM)。已证明初始T细胞表达高CD62L和低CD44表型，而记忆T细胞表达低CD62L和高CD44表型。以活CD8+或CD4+脾细胞表达IFN-γ、TNF-α或IL-2的频率对T细胞(个体小鼠)进行流式细胞分析。测定细胞因子阳性率。流式细胞分析证实，相较于接种GPI-0100的小鼠，皂苷56、62、79显示出更高的CD8+T细胞频率，这些细胞对IFN-γ或TNF-α呈阳性(图5和图6)。显然，未检测到任何细胞因子阳性CD4+T细胞。这些结果表明56、62、79可提供针对E7抗原的持久细胞免疫保护。
抗体生产测定
在每次投药后，使用ELISA测定血清PEK(由E7包被)特异性IgG抗体效价。如图7所示，PEK/GPI-0100在C57BL/6小鼠中诱导最高水平的抗体生产。其中，化合物53-56能够诱导中等程度的E7特异性抗体生产。由于细胞免疫与体液免疫相互抑制，因此化合物诱导较高的细胞毒性T细胞免疫而降低抗体生产是合理的。
对本发明化合物进行免疫分析后的疫苗接种，表明化合物46-62、64、66、77-79、83、92、95是有效的基于皂苷的佐剂，可增进宿主的细胞免疫。具有这些特性的佐剂可与癌症、细菌(结核病)、病毒(HIV、疱疹)、原生动物(疟疾)等的治疗性疫苗结合使用。
毒性
用增加剂量的100μg至1000μg的皂苷56检验急毒性。结果以每组5只小鼠(雌性BALB/c小鼠，9周)在7天内的存活数呈现。测试后，所有小鼠均存活，其活动性和饮食行为均无明显异常。(图8)
表1.皂苷56的急毒性。
Figure GDA0003437676220000851
结果
结果如图8所示。接受增加剂量的皂苷佐剂56的小鼠的体重中位数变化百分比均小于5％。与对照组相比，所有实验组的脾体细胞指数和肝体细胞指数均无变化。这些数据表明，皂苷56作为疫苗佐剂是有效且安全的候选药物。
实验例II-OVA肽疫苗对肿瘤的挑战
材料和方法
佐剂原液
将样品粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。
动物和疫苗接种
从中国台湾省台湾实验研究院台湾实验动物中心获得6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠。以200μL含有1.5x 106E.G7-OVA(表达OVA的EL4淋巴瘤)细胞的PBS溶液将小鼠皮下注射。使用游标卡尺以规则的间隔测量肿瘤体积，并通过以下公式计算：肿瘤体积(mm3)＝(长直径)x(短直径)2x 0.52。当平均肿瘤体积达到约100mm3(第7天)时，将100mL含有100μg OVA的PBS溶液(含有或不含有50μg化合物56)、明矾、QS-21和GPI-0100皮下注射于肿瘤周围。PBS(200μL)作为对照组。
结果
结合使用小鼠疫苗接种模型与抗原OVA以评估抗肿瘤效用。每组五只小鼠，每隔三周使用50μg皂苷和100μg OVA免疫两次。使用游标卡尺分析化合物56和阳性对照组(明矾、QS-21和GPI-0100)的抗肿瘤效用。
抗肿瘤效用
在第7天、第14天两次对荷E.G7-OVA肿瘤的小鼠进行皮内接种不同的制剂。与对照组(PBS)相比，以OVA和OVA+明矾治疗的小鼠起初表现出轻微的肿瘤生长抑制作用，但治疗效果不佳，随后肿瘤迅速恢复生长。相反，以OVA+化合物56、OVA+QS-21和OVA+GPI-0100治疗的小鼠表现出显著的肿瘤生长抑制作用。此外，OVA+化合物56达到最高的存活率(图9)。
实验例III-OVA肽疫苗对流感的挑战
材料和方法
佐剂原液
将样品粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。
动物和疫苗接种
通过皮下注射100μL疫苗或鼻内途径给药30μL疫苗对6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠进行免疫。所有疫苗液体均新鲜配制，并用0.5％Tween 20PBS稀释。用于皮下注射的疫苗含有单独或与化合物56(50μg)结合的免疫原NP366–374/NP311–325肽。用于鼻内途径的疫苗含有单独或与化合物56(30μg)结合的免疫原。两次疫苗接种后，以110个活PR8病毒的蚀斑形成单位(plaque forming unit，PFU)经鼻内感染小鼠。
结果
结合使用小鼠疫苗接种模型与抗原OVA以评估抗流感效用。每组五只小鼠以化合物56和NPI/II免疫两次。两次疫苗接种后，以110个活PR8病毒的蚀斑形成单位(PFU)经鼻内感染小鼠。相较于仅用NPI和NPII(NPI/II)肽免疫的小鼠，使用NPI/II加化合物56免疫的小鼠在PR8感染后具有更高的存活率(图10)。
实验例IV-结合SARS-CoV-2抗原与化合物56免疫佐剂的免疫评估
材料和方法
佐剂原液
将样品粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。给药前，将原液用0.5％(w/w)Tween 20稀释至0.5mg/mL，并通过PTFE(0.1μm)过滤。
动物和疫苗接种
经由皮下途径为6至8周龄的雌性C57BL/6小鼠接种SARS-CoV-2纤突蛋白且不含明矾或化合物56，并以六周的间隔注射三次。为了测定IgG水平，在每次免疫后10天经由尾动脉收集小鼠的血液。
ELISA
使涂有SARS-CoV-2纤突RBD His蛋白(0.5μg/孔)的Maxisorp微量滴定盘(NuncInternational,Roskilde,Denmark)在硼酸盐缓冲液(BBS；100mM NaCl、50mM硼酸、1.2mMNa2B4O7，pH 8.2)中于4℃过夜进行ELISA，以测定每组针对SARS-CoV-2纤突蛋白的特异性血清IgG的水平。在37℃下用阻断缓冲液(含5％牛奶的PBS)将微量滴定盘阻断至少1小时，然后用PBS+0.05％Tween 20洗涤。将5倍连续稀释的血清样品添加于微量滴定盘中。1小时后，用PBS+0.05％Tween 20洗涤微量滴定盘。在1％BSA-PBS中添加以1：3000稀释的过氧化物标记的山羊抗小鼠IgG(Invitrogen，目录编号81-6520)，添加时间为1小时。将微量滴定盘用PBS+0.05％Tween 20洗涤，并用TMB色原溶液(Invitrogen，目录编号00-2023)显影15分钟，然后用终止溶液(0.2N H2SO4)处理。记录450nm处的吸光度。
结果
结合使用小鼠疫苗接种模型与抗原SARS-CoV-2纤突RBD His蛋白，以评估抗COVID-19的效用。小鼠分为三组：化合物56(50μg)、SARS-CoV-2(2μg)+化合物56(50μg)、SARS-CoV-2(10μg)+明矾(10μg)。
抗体生产测定
在每次投药后使用ELISA测定血清SARS-CoV-2特异性IgG抗体效价。如图11所示，SARS-CoV-2+化合物56组在C57BL/6小鼠中诱导最高水平的抗体生产。其中，SARS-CoV-2/化合物56组仅通过20％的抗原即提高抗体效价1000倍。

Claims (19)

1.一种如式(I)的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，
Figure FDA0003391153230000011
其中：
Figure FDA0003391153230000012
为单键或双键；
·W为Me、—CHO、
Figure FDA0003391153230000013
—CH2OH或—CH3；
·V为H或OH；
·Y为CH2、—O—、—S—、—NR—或—NH—；
·Q为CH2、C＝O、C＝N—OH或C＝N—OMe；
·X为CH2、—O—、—NR—、—NH—(C＝O)—、—S—或O—(C＝O)—；
·R为选自由酰基、脂族、杂脂族、芳基、芳基-脂族、环脂族、杂环-脂族、杂芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所组成的组的任选取代的环状或非环状的部分，或选自由下列所组成的组：C1-C18脂族、5-10元芳基脂族、具有1-4个独立选自氮、氧及硫组成的组的杂原子的5-10元杂芳基-脂族、具有1-2个独立选自氮、氧和硫组成的组的杂原子的4-7元杂环-脂族；
·R1独立地为氢、氧保护基或具有单糖结构的碳水化合物，所述氧保护基选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组；及
·Z为直链寡糖、支链寡糖或为选自由胺、酰胺、酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族、杂脂族、脂环族和杂环基所组成的组的任选取代的部分。
2.根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，其中R为杂脂族、芳基-脂族、杂环-脂族、杂芳基-脂族、烷氧基-脂族或芳氧基-脂族。
3.根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，其中Z为直链四糖或直链三糖，其中第一个糖残基直接附接至Y。
4.根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，其中W为CHO且V为OH。
5.根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，其中Q为C＝O且X为—NH—。
6.根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，其中Q为CH2且X为O-C(＝O)。
7.根据权利要求2所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，其中R为：
R＝烷基诸如十二烷基、甲基、己基、十八烷基、乙基、丙基、戊基等
Figure FDA0003391153230000021
8.根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类，所述皂苷缀合物具有以下结构：
Figure FDA0003391153230000031
9.一种疫苗组合物，其包含抗原和根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类。
10.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其进一步包含附加佐剂。
11.根据权利要求9所述的疫苗组合物，其进一步包含医药学上可接受的载体或稀释剂。
12.根据权利要求9的疫苗组合物，其中所述抗原选自由细菌抗原、病毒相关抗原和肿瘤相关抗原所组成的组。
13.根据权利要求12所述的疫苗组合物，其中所述细菌抗原是与细菌相关的抗原，所述细菌选自由百日咳鲍特氏菌、副百日咳鲍特氏菌、支气管炎鲍特氏菌、伯氏疏螺旋体、疏螺旋体属、沙眼衣原体、幽门螺杆菌、肺炎衣原体、解脲支原体、肺炎支原体、葡萄球菌属、金黄色葡萄球菌、酿脓链球菌、链球菌属、肺炎链球菌、草绿色链球菌、粪肠球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、炭疽芽孢杆菌、沙门氏菌属、伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌、鼠疫巴氏杆菌、弯曲杆菌属、空肠弯曲杆菌、梭菌属、艰难梭菌、白喉棒状杆菌、分枝杆菌属、结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌、密螺旋体属、钩端螺旋体属、杜克雷氏嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌、志贺氏杆菌属、埃立克体属、立克次体属及其组合所组成的组。
14.根据权利要求12所述的疫苗组合物，其中所述病毒相关抗原是与病毒相关的抗原，所述病毒选自由流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腺病毒、呼吸道融合性病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、鼻病毒、脊髓灰白质炎病毒、柯萨奇病毒、埃柯病毒、麻疹病毒、风疹病毒、水痘带状疱疹病毒、疱疹病毒、疱疹单纯型病毒、微小病毒、巨细胞病毒、肝炎病毒、人类乳突病毒、阿尔法病毒、黄病毒、布尼亚病毒、狂犬病病毒、沙状病毒、丝状病毒、HIV-1、HIV-2、HTLV-1、HTLV-II、猫白血病病毒、牛白血病病毒、猫免疫缺陷病毒、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒、猫杯状病毒、猫鼻气管炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒、口蹄疫病毒、冠状病毒、登革热病毒及其组合所组成的组。
15.根据权利要求12所述的疫苗组合物，其中所述肿瘤相关抗原是选自以下组的抗原：已杀死的肿瘤细胞及其溶胞产物；MAGE-1、MAGE-3及其肽片段；人绒毛膜促性腺激素及其肽片段；癌胚胎抗原及其肽片段；甲胎蛋白及其肽片段；胰胚胎抗原及其肽片段；前列腺特异性抗原及其肽片段；MUC-1及其肽片段；CA 125、CA 15-3、CA19-9、CA 549、CA 195及其肽片段；前列腺特异性膜抗原及其肽片段；扁平上皮细胞癌相关抗原及其肽片段；卵巢癌抗原及其肽片段；胰脏癌相关抗原及其肽片段；Her1/neu及其肽片段；gp-100及其肽片段；突变型K-Ras蛋白及其肽片段；突变型p53及其肽片段；截短型表皮生长因子受体、嵌合蛋白p210BCR-ABL、STn、Tn、Lewisx、Lewisy、TF、GM1、GM2、GD2、GD3、Gb3、KH-1、Globo-H、SSEA-4；及其混合物。
16.一种药物组合物，其包含一种或多种根据权利要求1所述的皂苷缀合物或其医药学上可接受的盐类。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其进一步包含医药学上可接受的赋形剂。
18.一种如式(II)的皂苷缀合物中间体或其医药学上可接受的盐类：
Figure FDA0003391153230000051
其中：
·
Figure FDA0003391153230000052
为单键或双键；
·W为Me、—CHO、
Figure FDA0003391153230000053
—CH2OR1、—C(O)R或CH2ORx；
·V为氢或—OR1；
·Y为CH2、—O—、—NR—、—NH—或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯及碳酸酯所组成的组的氧保护基；
·Q为CH2、C＝O、C＝N—OH或C＝N—OMe；
·X为CH2、—O—、—NR—、—NH—(C＝O)—、—S—或O—(C＝O)—；
·R1独立地为氢或选自烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基或具有以下结构的碳水化合物
Figure FDA0003391153230000061
其中：
■a、b和c每次出现独立地为0或1；
■R0独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基；
■Ra、Rb、Rc及Rd每次出现独立地为氢、卤素、OH、OR、ORx；Rx每次出现独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基；且
·R为选自由酰基、脂族、杂脂族、芳基、芳基-脂族、环脂族、杂环-脂族、杂芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所组成的组的任选取代的环状或非环状部分，或选自由下列所组成的组：C1-C18脂族、5-10元芳基脂族、具有1-4个独立选自氮、氧及硫的杂原子所组成的组的5-10元杂芳基-脂族、具有1-2个独立选自氮、氧和硫所组成的组的杂原子的4-7元杂环脂族。
19.根据权利要求18所述的式(II)皂苷缀合物中间体或其医药学上可接受的盐类，其通过使式(III)结构所示化合物与式(IV)结构所示化合物或其医药学上可接受的盐类反应而获得，
Figure FDA0003391153230000062
式(III)中：
·R1独立地为氢、或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基或具有以下结构的碳水化合物
Figure FDA0003391153230000071
其中：
■a、b和c每次出现独立地为0或1；
■R0独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基；
■Ra、Rb、Rc及Rd每次出现独立地为氢、卤素、OH、OR、ORx；Rx每次出现独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基；
■LG为离去基
Figure FDA0003391153230000072
式(IV)中：
·
Figure FDA0003391153230000073
为单键或双键；
·W为Me、—CHO、
Figure FDA0003391153230000074
—CH2OR或—C(O)R；
·V为氢或—OR1；
·Y为CH2、—O—、—S—、—NR—、—NH—或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基；且
·R、Rx或R1独立地为氢或选自由烷基醚、苄基醚、硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯所组成的组的氧保护基。
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