TWI768365B - 皂苷共軛物及含其之疫苗或藥物組合物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種新穎化合物，其親脂性基團(如脂質、脂肪酸、聚乙二醇或萜類)透過共價連接至非醯化或去醯化的三萜皂苷上的3-O-葡萄糖醛酸之羧基。該親脂性基團與皂苷(如皂樹去醯化皂苷、絲瓜苷P或得自霞草屬、肥皂草屬和針珊瑚屬的皂苷)的3-O-葡萄糖醛酸的結合增強了皂苷對體液免疫和細胞免疫所介導的免疫佐劑效果。此外，將親脂性基團連接至非醯化或去醯化皂苷的3-O-葡萄糖醛酸殘基上所得到之皂苷類似物，比起既有皂苷更容易純化、毒性較低、化學上更穩定並且具有同等或更佳佐劑性質。

Description

皂苷共軛物及含其之疫苗或藥物組合物
本發明涉及皂苷共軛物、其合成及其中間體。本發明亦提供包含本發明皂苷共軛物的藥物組合物，以及使用所述皂苷共軛物或組合物治療傳染病、癌症和免疫失調的方法。
在現今的疫苗製劑中，佐劑之功效已被證實。當前的挑戰是，對於治療型疫苗，抗原和佐劑的組合必須同時有效刺激體液免疫和細胞免疫，才能治療複雜的疾病，例如：愛滋病、瘧疾、結核病和癌症。開發新穎疫苗抗原的基礎，在缺少佐劑的協助下，抗原僅能微幅刺激病原特異性T細胞反應，無法有效提供免疫保護力，開發疫苗佐劑為現今疫苗製劑產業的一大研究重點，然而現今仍無核可之佐劑能有效誘導細胞免疫並且在臨床使用上具有高安全性。
皂樹皂苷(Quillaja saponins,Q.saponins)係由智利的皂樹樹皮(Quillaja saponaria Molina)提取的三萜糖苷。其中皂樹皂苷是氣道黏液產生的強刺激劑，並且會引起消化道發炎。已知由皂樹萃取物中分離出四種主要的三萜類糖苷，鑑定為QS-7、QS-17、QS-18和QS-21(皂樹皂苷組分7、17、18和21)，這些皂苷結構擁有相同的三萜類骨幹皂皮酸(quillaic acid)和均在3-O位置連結三醣β-D-Gal-(1→2)-[β-D-Xyl-(1→3)]-β-D-GlcA。QS-21在28-O位置含有一直鏈四醣β-D- Apif/Xylp-(1→3)-β-D-Xyl-(1→4)-α-L-Rha-(1→2)-β-D-Fuc，並具有一個透過岩藻糖4-O-位置鍵結具立體化學脂肪酸鏈1(fucose-linked 4-O-acyl stereochemically rich fatty acyl chain 1)。QS-21及其純化類似物的結構如下表：
Figure 109118307-A0305-02-0004-2
Figure 109118307-A0305-02-0004-3
Apif：呋喃芹菜糖(apiofuranose)；Xylp：哌喃木糖(xylopyranose)；Glcp：哌喃葡萄糖(glucopyranose)；Rhap：哌喃鼠李糖(rhamnopyranose)。
QS-21分子應用於數百項近期和正在進行的疫苗臨床試驗(瘧疾、疱疹、阿茲海默症、人類免疫缺乏病毒第一型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)、黑色素瘤、乳癌、小細胞肺癌、前列腺癌等)，更將其確立為增強免疫反應、節省劑量(dose-sparing)的具前瞻性佐劑。然而QS-21臨床使用上，仍存有四個主要問題：QS-21具劑量限制之毒性(dose limiting toxicity)、安定性差、分子作用機制理解不足以及高品質產品供應有限。
GPI-0100是衍生自皂樹皮萃取物的半合成皂苷混合物。在溫和鹼性水解條件下處理粗製樹皮萃取物，然後透過具水解穩定性的醯胺鍵鏈結直鏈C12脂肪碳鏈(an aliphatic dodeacyl chain)，得到GPI-0100。此修飾使皂樹皂苷分子結構在高溫更安定(more tolerance at higher temperature)，更使皂樹萃取物的內在毒性大幅降低，然而，其佐劑活性卻因此下降。因此，開發能誘導強效細胞免疫且毒性低的皂苷佐劑仍為疫苗研發之重點。本發明開發了新一代基於皂苷的佐劑，其在提升細胞免疫中具有改善的功效，與現有佐劑相比，更適於結合治療性疫苗。
本發明涉及新穎的化合物，在本文中稱為皂苷共軛物，其中一方面，本發明提供式(I)的皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類：
Figure 109118307-A0305-02-0005-4
 其中：●
Figure 109118307-A0305-02-0005-118
為單鍵或雙鍵；●W為甲基(Me)、-CHO、
Figure 109118307-A0305-02-0005-5
、-CH2OR1、-C(O)Rx或CH2ORx；●V為氫或-OR1；●Y為CH2、-O-、-S-、-NR-或-NH-；●Q為CH2、C=O、C=N-OH或C=N-OMe； ●X為CH2、-O-、-NH-、-NH-(C=O)-、-S-或O-(C=O)-；●R為選自由醯基、脂族、雜脂族、芳基、芳基-脂族、環脂族、雜環-脂族、雜芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所組成之群組的任選取代的環狀或非環狀部分；或選自由下列所組成之群組：C1-C18脂族、5-10員芳基-脂族、具有1-4個獨立地選自由氮、氧及硫組成的群組的雜原子的5-10員雜芳基-脂族、具有1-2個獨立選自由氮、氧和硫組成的群組的雜原子的4-7員雜環-脂族；●R1獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；或具有單醣結構的碳水化合物，如：葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N-乙醯葡萄糖胺、N-乙醯半乳糖胺、阿卓糖、阿洛糖、岩藻糖、鼠李糖等；
Figure 109118307-A0305-02-0006-6
其中：■a、b和c每次出現獨立地為0或1；■R0獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；■Ra、Rb、Rc及Rd每次出現獨立地為氫、鹵素、OH、OR、ORx；Rx每次出現獨立地為氫或選自烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯的氧保護基； ●Z為氫；或選自由醯基、脂族、雜脂族、芳基、芳烷基、雜環基和雜芳基所組成之群組的任選取代的環狀或非環狀部分；或具有以下結構的碳水化合物：
Figure 109118307-A0305-02-0007-7
◆其中：◆R2每次出現為氫或具有以下結構的碳水化合物域：
Figure 109118307-A0305-02-0007-8
其中：■a、b和c每次出現獨立地為0、1或2；■d為整數1-5，其中每一括號d中的結構可為相同或不同；前提是括號d中的結構代表呋喃糖或吡喃糖部分，且b和c之和為1或2；■R0為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；■Ra、Rb、Rc及Rd每次出現獨立地為氫、鹵素、OH、OR、ORx、NR2、NHCOR或選自以下的任選取代的基團：醯基、C1-C10脂族、C1-C6雜脂族、6-10員芳基、芳基-脂族；或具有1-4個選自氮、氧或硫組成的群組的雜原子的5-10員雜芳基；或具有1-2個獨立選自氮、氧和硫組成的群組的雜原子的4-7員雜環基；◆R3為氫、鹵素、OH、ORx， ◆R4為氫、鹵素、CH2ORx或選自由醯基、C1-C10脂族組成之群組的任選取代之基團；◆Rx每次出現獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；本發明涵蓋以下認知：由於結構複雜，GPI-0100作為佐劑混合物的臨床應用受到限制，並且難以以純淨形式分離。本發明提供與GPI-0100類似的化合物。
另一方面，本發明化合物已證明可用作佐劑。因此，在某些實施例中，提供一種疫苗，包含一種或多種細菌抗原、病毒抗原、原生動物抗原或腫瘤相關抗原以及一種或多種本發明化合物。在某些實施例中，一種或多種抗原係與醫藥學上可接受的賦形劑非共價結合。在一些實施例中，一種或多種抗原係與醫藥學上可接受的賦形劑共價結合。
另一方面，本發明提供一種增強對抗原的免疫反應的方法，包括將一所提供的疫苗以有效量投予一個體以增強所述個體對所述抗原的免疫反應。
在另一實施例中，本發明提供一種皂苷類物質，其誘導對體液免疫和細胞免疫的免疫反應。
在另一實施例中，本發明提供一種刺激或增強一個體體內細胞激素產生的方法，該方法尤其包括向該個體投予任一種本發明化合物，使免疫細胞分泌細胞激素。
另一方面，本發明提供一種為一個體接種疫苗的方法，包括對所述個體投予所提供的疫苗。在一些實施例中，該個體係人類。在一些實施例中，該疫苗係經口投予。在其他實施例中，該疫苗係肌內施用。在其他實施例中，該 疫苗係皮下投予。在某些實施例中，佐劑化合物的給藥量為10-1000μg。在某些實施例中，佐劑化合物的給藥量為500-1000μg。在某些實施例中，佐劑化合物的給藥量為100-500μg。在某些實施例中，佐劑化合物的給藥量為50-250μg。在某些實施例中，佐劑化合物的給藥量為50-500μg。在某些實施例中，佐劑化合物的給藥量為250-500μg。為該個體接種疫苗的抗原可為癌症抗原、細菌抗原、病毒抗原、原生動物抗原或自體抗原。
另一方面，本發明提供一種藥物組合物，其包含本發明化合物和醫藥學上可接受的賦形劑。在某些實施例中，該藥物組合物係一疫苗，該疫苗包含一抗原及一本發明之佐劑。
另一方面，本發明提供一種套組，其包含本發明化合物的藥物組合物。在一些實施例中，該套組包含處方資訊。在一些實施例中，該套組包括本發明佐劑化合物與另一免疫治療劑(例如疫苗、抗體)的組合。該些製劑可分開包裝或包裝在一起。該套組可選地包括開立藥物處方的說明書。在某些實施例中，該套組包括多種劑量的各試劑。該套組可包括足量的各成分，以治療一個體一週、二週、三週、四週或數個月。在某些實施例中，該套組包括一個免疫療法週期。在某些實施例中，該套組包括足量的藥物組合物以長期使一個體對一抗原免疫。
在一實施例中，本發明提供一種製備式(II)結構所示化合物或其醫藥學上可接受的鹽類的方法：
Figure 109118307-A0305-02-0009-9
 其中： ●
Figure 109118307-A0305-02-0010-115
為單鍵或雙鍵；●W為Me、-CHO、
Figure 109118307-A0305-02-0010-11
、-CH2OR1、-C(O)Rx或CH2ORx；●V為氫或-ORx；●Y為CH3、-OH、-SH、-NHR5、-NH2或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基，其中R5選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組；●Q為CH2、C=O、C=N-OH或C=N-OMe；●X為CH2、-O-、-NH-、-NH-(C=O)-、-S-或O-(C=O)-；●R1獨立地為氫、選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；或具有以下結構的碳水化合物：
Figure 109118307-A0305-02-0010-10
其中：■a、b和c每次出現獨立地為0或1；■R0獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；■Ra、Rb、Rc及Rd每次出現獨立地為氫、鹵素、OH、OR、ORx；Rx每次出現獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；且 ●R為選自由醯基、脂族、雜脂族、芳基、芳基-脂族、環脂族、雜環-脂族、雜芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所組成之群組的環狀或非環狀的部分；或選自以下的任選取代的基團：C1-C18脂族、5-10員芳基脂族、具有1-4個獨立選自氮、氧或硫組成的群組的雜原子的5-10員雜芳基-脂族、具有1-2個獨立選自氮、氧和硫組成的群組的雜原子的4-7員雜環-脂族。
在本發明的一個實施例中，式(II)化合物可透過包括以下步驟的方法獲得：使式(III)結構所示化合物與式(IV)結構所示化合物或其醫藥學上可接受的鹽類反應。
Figure 109118307-A0305-02-0011-12
 式(III)中：●R1獨立地為氫、選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；或具有以下結構的碳水化合物
Figure 109118307-A0305-02-0011-13
 其中：■a、b和c每次出現獨立地為0或1；■R0獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基； ■Ra、Rb、Rc及Rd每次出現獨立地為氫、鹵素、OH、OR、ORx；Rx每次出現獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；■LG為離去基，尤其可為
Figure 109118307-A0305-02-0012-14
 式(IV)中：●
Figure 109118307-A0305-02-0012-114
為單鍵或雙鍵；●W為Me、-CHO、
Figure 109118307-A0305-02-0012-15
、-CH2ORx或-C(O)Rx；●V為氫或-ORx；●Y為CH3、-OH、-SH、-NHR5、-NH2或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；且●Rx或R5獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基。
在本發明的一個實施例中，一種式(I)化合物可透過包括以下步驟的方法獲得：使式(II)與式(V)或其醫藥學上可接受的鹽類反應：
Figure 109118307-A0305-02-0012-16
 其中： ●PG和PG1為選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；●R1獨立地為氫、選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；或具有以下結構的碳水化合物：
Figure 109118307-A0305-02-0013-17
其中：■a、b和c每次出現獨立地為0或1；■R0獨立地為氫或選自烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；■Ra、Rb、Rc及Rd每次出現獨立地為氫、鹵素、OH、OR、ORx；Rx每次出現獨立地為氫或選自由烷基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯組成的群組的氧保護基；●R2獨立地為氫、鹵素、CH2OH或選自低級烷基之任選取代的基團；且●LG為離去基，尤其可為
Figure 109118307-A0305-02-0013-18
定義
如本文所用，除非另外指出，否則將適用以下定義。
「立體異構物」係指在一或多個立構中心具有不同手性的化合物。立體異構物包括鏡像異構物和非鏡像異構物。
「個體」係指哺乳動物，包括人類和非人類哺乳動物。
本文所用的術語「脂族」或「脂族基」或「脂族部分」係指完全飽和或包含一或多個不飽和單元的直鏈(即，非支鏈)或支鏈之經取代或未經取代的烴鏈，或指完全飽和或包含一或多個不飽和單元的單環烴或二環烴，但並非與分子其餘部分具有單個連接點的芳香族(在本文中又稱「碳環」、「脂環族」或「環烷基」)。除非另有說明，否則脂族基包含脂族碳原子。在一些實施例中，脂族基包含1-12個脂族碳原子。在一些實施例中，脂族基包含1-11個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基包含1-10個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基包含1-9個脂族碳原子，而在其他實施例中，脂族基包含1-8個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基包含1-7個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基包含1-6個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基包含1-5個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基包含1-4個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基包含1-3個脂族碳原子，而在其他實施例中，脂族基包含1-2個脂族碳原子。
在一些實施例中，脂環族(或「碳環」或「環烷基」)係指完全飽和或包含一或多個不飽和單元的單環C-C烴，但並非與分子其餘部分具有單個連接點的芳香族。合適的脂族基包括但不限於直鏈或支鏈、經取代或未經取代的烷基、烯基、炔基及其混合物如(環烷基)烷基、(環烯基)烷基或(環烷基)烯基。
術語「雜原子」係指氧、硫、氮、磷或矽中的一種或多種(包括氮、硫、磷或矽之任何氧化形式；四胺化形式之任何鹼性氮或雜環中可取代氮，例如N(如在3,4-二氫-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯啶基中)或NR"(如在N取代的吡咯啶基中))。
如本文所用，術語「不飽和」係指部分(moiety)具有一或多個雙鍵。
術語「鹵素」係指氟、氯、溴或碘。
術語「醯基」單獨使用或為較大部分(moiety)的一部分使用，係指從羧酸除去羥基而形成的基團。
術語「芳烷基」和「芳基脂族」可互換使用，並且意指氫原子被芳基取代的脂族基。所述芳基包括但不限於苯基、聯苯、萘基、肉桂基和二氫肉桂基。
術語「芳基」單獨使用或為較大部分(moiety)的一部分使用，例如在「芳基-脂族」、「雜芳基-脂族」中。
術語「芳氧基-脂族」(或「芳烷氧基(aralkoxy或arylkoxy)」或「芳氧烷基」)係指具有總共5-14個環成員的單環或二環之環系統，其中該系統中的至少一個環為芳香族並且該系統中的每個環包含3-7個環成員。術語「芳基」可與術語「芳香族環」互換使用。
在本發明的某些實施例中，「芳基」係指芳香環系統，其包括但不限於苄基、苯基、聯苯、萘基、蒽基等，其可帶有一或多個取代基。如本文所用，芳香環與零個或一或多個非芳香環稠合而成的基團亦包括在術語「芳基」的範圍內，例如二氫茚基、鄰苯二甲醯亞胺基、萘二甲醯亞胺基、啡啶基或四氫萘基等。
術語「雜芳基」單獨使用或為較大部分(moiety)的一部分使用，例如「雜芳基氧基」或「雜芳基-脂族」或「雜芳基烷基」，係指結構特徵如下的基團：具有5-10個環原子，較佳為5、6或9個環原子；具有共享6、10或14個電子 的環陣列；以及具有除了碳原子以外之1-5個雜原子。術語「雜原子」係指氮、氧或硫，並且包括氮或硫的任何氧化形式，以及鹼性氮的任何四胺化形式。雜芳基包括但不限於噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、
Figure 109118307-A0305-02-0016-109
唑基、異
Figure 109118307-A0305-02-0016-110
唑基、
Figure 109118307-A0305-02-0016-111
二唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、吡啶基、嗒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和喋啶基。
如本文所用，術語「雜芳基」和「雜芳-」還包括雜芳環與一或多個芳基、脂環族或雜環基環稠合而成的基團，其連接點在雜芳環上。非限制性實例包括吲哚基、異吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹[口井]基、咔唑基、吖啶基、啡[口井]基、啡噻[口井]基、啡
Figure 109118307-A0305-02-0016-112
[口井]基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基以及2H-吡啶并[2,3-b]-1,4-
Figure 109118307-A0305-02-0016-121
[口井]-3(4H)-一(2H-pyrido[2,3-b]-1,4-oxazin-3(4H)-one)。雜芳基可為單環或雙環。術語「雜芳基」可與術語「雜芳基環」、「雜芳基團」或「雜芳族」互換使用，並且任何上述術語都包括可選地經取代的環。術語「雜芳基-脂族」和「雜芳基-烷基」係指經雜芳基部分取代的脂族，其中脂族和雜芳基部分係獨立地可選地經取代。
如本文所用，術語「雜脂族」係指其中一個或兩個碳原子獨立地經氧、硫、氮或磷中的一種或多種取代的脂族基。雜脂族基團可為經取代或未經取代的，支鏈或非支鏈，環狀或非環狀，並且包括「雜環(heterocycle)」、「雜環基」、「雜環脂族」或「雜環(heterocyclic)」基團。
如本文所用，術語「雜環(heterocycle)」、「雜環基」和「雜環的(heterocyclic)」可互換使用，係指飽和或部分不飽和的穩定的5-7員單環或7-10員雙環雜環部分，並且除了碳原子以外，還具有一或多個(較佳為1-4個)如上所定義 的雜原子。當提及雜環的環原子時，術語「氮」包括取代的氮，例如，在具有0-3個選自氧、硫或氮的雜原子的飽和或部分不飽和的環中，氮可為N(例如在3,4-二氫-2H-吡咯基中)、NH(例如在吡咯烷基中)或+NR(例如在N-取代的吡咯烷基中)。
雜環基環可在任何雜原子或碳原子上與其側基連接，從而形成穩定的結構，並且任何環原子皆可可選地經取代。此類飽和或部分不飽和雜環殘基的實例包括但不限於四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、
Figure 109118307-A0305-02-0017-107
唑啶基、哌嗪基、二
Figure 109118307-A0305-02-0017-108
烷基、二氧戊環基、二氮呯基、氧氮呯基、硫氮呯基、嗎啉基及[口昆]啶基。
術語「雜環」、「雜環基」、「雜環基環」、「雜環基團」和「雜環部分」在本文中可互換使用，並且還包括其中雜環基環與一或多個芳基、雜芳基或脂環族環稠合的基團，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、苯并二氫哌喃基、啡啶基或四氫喹啉基。雜環基可為單環或雙環。
術語「雜環脂族」係指經雜環基取代的烷基，其中脂族基和雜環部分係獨立地可選地經取代。
如本文所用，術語「部分不飽和」係指環部分包括至少一個雙鍵或三鍵。術語「部分不飽和」旨在涵蓋具有多個不飽和位點的環，但不包括本文所定義的芳基或雜芳基部分。
另一方面，本發明提供「醫藥學上可接受的」組合物，其包含治療有效量的一種或多種本文所述化合物，與一種或多種醫藥學上可接受的載體(添加劑)及/或稀釋劑一起配製。如所詳述的，本發明藥物組合物可特別配製為以固體或液體形式施用，包括適合於以下之形式：經口投予，例如灌藥(水性或非水 性溶液或懸浮液)、錠劑(例如，靶向經頰、舌下及全身吸收之錠劑)、大丸劑、粉劑、粒劑、施用於舌之膏劑；非經腸投予，例如以無菌溶液或懸浮液或緩釋性製劑形式透過肌肉內、皮下、靜脈內或硬膜外注射；局部施用，例如以乳膏、軟膏或控制釋放噴霧劑或貼片形式施用於肺、皮膚或口腔；陰道內或直腸內，例如子宮托、乳膏或泡沫；舌下；經眼；經皮；或經鼻、經肺及於其他黏膜表面。
本文所用片語「醫藥學上可接受的」係指化合物、組合物、材料及/或劑型在合理的醫療判斷範圍內，適用於與人和動物的組織接觸而無過度的毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症，並且具有合理的獲益/風險比。
本文所用片語「醫藥學上可接受的載體」係指醫藥學上可接受的材料、組合物或媒介物。諸如液體或固體填充劑、賦形劑、稀釋劑或溶劑封裝材料，涉及將標的化合物從身體的一部分運輸或攜帶到身體的另一部分。在與製劑的其他成分相容且對患者無害的意義上，每一種載體必須是「可接受的」。可用為醫藥學上可接受的載體的材料的一些實例包括：糖，例如葡萄糖、乳糖、蔗糖；澱粉，例如玉米澱粉和馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素、乙基纖維素和乙酸纖維素；黃蓍膠粉末；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油、紅花子油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二元醇，例如丙二醇；多元醇。例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；pH緩衝溶液；聚酯、聚碳酸酯及/或聚酐；及藥物製劑中使用的其他無毒相容性物質。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受的鹽類」係指在合理的醫療判斷範圍內適用於與人和較低等動物的組織接觸而無過度的毒性、刺激性、過敏 反應等並且具有合理的獲益/風險比的鹽類。醫藥學上可接受的鹽類在本領域中眾所周知。例如，S.M.Berge等人在藥物科學期刊(J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19)中詳述醫藥學上可接受的鹽類，透過引用併入本文。本發明化合物的醫藥學上可接受的鹽類包括衍生自合適的無機和有機酸和鹼的鹽類。醫藥學上可接受的無毒酸加成鹽的實例是胺基與無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和過氯酸)或與有機酸(例如乙酸、乙二酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的鹽，或使用本領域中的其他方法(例如離子交換)形成的胺基的鹽。其他醫藥學上可接受的鹽類包括己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡萄糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、十二烷基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等。
在其他情況下，本發明化合物可包含一或多個酸性官能基，因此能夠與醫藥學上可接受的鹼形成醫藥學上可接受的鹽類。在這些情況下，術語「醫藥學上可接受的鹽類」係指本發明化合物的相對無毒的無機和有機鹼加成鹽。這些鹽同樣可在投藥媒介物或劑型製造過程中原位製備，或使自由酸形式的純化化合物分別與合適的鹼(例如醫藥學上可接受的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸酯或碳酸氫鹽)、與氨或與醫藥學上可接受的有機伯、仲、叔或季胺反應來製備。從適 當的鹼衍生的鹽包括鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽和N(C1-4烷基)鹽。代表性的鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等。其他醫藥學上可接受的鹽類在適當時包括無毒的銨、季銨和使用相反離子(例如鹵離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低級烷基磺酸根和芳基磺酸根)形成的胺陽離子。可用於形成鹼加成鹽的代表性有機胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
除非另有說明，否則本文描述的結構還意在包括結構的所有異構物(例如鏡像異構物、非鏡像異構物和幾何構形)形式；例如，每個立構中心的R和S構形、Z和E雙鍵異構物及Z和E構形異構物。因此，本發明化合物的單一立體化學異構物及鏡像異構物、非鏡像異構物和幾何(或構形)混合物皆在本發明的範圍內。除非另有說明，否則本發明化合物的所有互變異構體皆在本發明的範圍內。
所提供的化合物可包含一或多個醣部分。除非另有說明，否則D-和L-構形及其混合物皆在本發明的範圍內。除非另有說明，否則本發明考慮C-和S-連接的實施例及其混合物。
此外，除非另有說明，否則本文所述的結構還旨在包括差異僅在於存在一或多個同位素濃化原子的化合物。例如，具有包括以氘或氚取代氫或以13C-或14C-濃化碳取代碳的本發明結構的化合物，皆在本發明的範圍內。這樣的化合物例如可用為分析工具、生物分析中的探針或根據本發明的治療劑。
根據本發明的實施例，本文所用片語「保護基」係指暫時修飾之潛在反應性官能基，保護其免於不希望的化學轉變。這樣的保護基的實例分別包括羧酸的酯、醇的矽烷基醚以及醛和酮的縮醛和縮酮。當然，可使用其他適當的保護基。此外，Greene和Wuts描述了多種保護基(如上)。
在本發明的一個實施例中，保護基尤其可為羥基保護基。在本發明的一個實施例中，羥基保護基尤其可為烷基、芳基、芳烷基、矽烷基或醯基。在另一實施例中，保護基尤其可為三甲基矽烷基、三乙基矽烷基、叔丁基二甲基矽烷基(tert-butyldimethylsilyl，TBS)、三異丙基矽烷基(triisopropylsilyl，TIPS)或叔丁基二苯基矽烷基。當然，可使用任何其他合適的保護基。
在一實施例中，芳烷基可經取代或未經取代。在另一實施例中，芳烷基尤其可為芳基甲基。在另一實施例中，保護基尤其可為苄基。在另一實施例中，保護基尤其可為甲氧苄基。在另一實施例中，甲氧苄基尤其可為對甲氧苄基。
在本發明的一個實施例中，保護基尤其可為胺基保護基。在本發明的一個實施例中，胺基保護基尤其可為胺基甲酸酯、醯胺或N-磺醯基胺。在另一實施例中，胺基保護基尤其可為苄氧羰基(carbobenzyloxy，Cbz)、9-茀基甲基氧基羰基(9-fluorenylmethyloxycarbonyl，Fmoc)、叔丁基氧基羰基(t-butyloxycarbonyl，tBoc)、聯苯基異丙基氧基羰基(biphenylisopropyloxycarbonyl)、叔戊基氧基羰基異莰基氧基羰基(t-amyloxycarbonylisobornyloxycarbonyl)、α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧基羰基(alpha-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl)或2-腈基-叔丁氧基羰基(2-cyano-t-butyloxycarbonyl)。
此外，在一實施例中，本發明提供一種用於在一個體中刺激、壓抑、抑制或調節免疫反應的方法，該方法尤其包括向一個體投予本發明的任何一種化合物或其任何組合。
此外，在一實施例中，本發明提供一種用於在一個體中刺激、壓抑、抑制或調節免疫反應的方法，該方法尤其包括向一個體投予一藥物組合物， 所述藥物組合物尤其包括本發明的任何一種化合物或其任何組合以及一種或多種醫藥學上可接受的賦形劑。
此外，在一實施例中，「藥物組合物」係可指適用於在一個體中刺激、壓抑、抑制或調節免疫反應的治療有效量的一種或多種本發明化合物以及合適的賦形劑及/或載體。
在一實施例中，「治療有效量」係可指對於特定狀況和給藥方案提供治療效果的量。在一實施例中，此類組合物可透過本領域已知的任何方法施用。
如本文所述，本發明化合物可包含「可選地經取代的」部分。通常，術語「經取代的」，無論是否冠以術語「可選地」，係指指定部分的一或多個氫被合適的取代基取代。除非另有說明，否則「可選地經取代的」基團可在該基團的每個可取代位置上具有合適的取代基，並且當任何特定結構中一個以上的位置可被一個以上選自特定基團的取代基取代時，每個位置的取代基可為相同或不同。本發明設想的取代基的組合較佳為引起形成穩定或化學上可行的化合物者。
如本文所用，片語「非經腸投予」係指除了經腸及局部施用之外的投藥方式，通常為注射，並且包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內及胸骨內注射及輸注。
本文所用片語「全身性投予(systemic administration或administered systemically)」、「周邊投予(peripheral administration)」係指化合物、藥物或其他 物質除了直接投予中樞神經系統之外的投予，使其進入患者之系統而經歷代謝及其他類似過程，例如皮下投予。
術語「純」係指化合物實質上不含相關的非目標結構的化合物或化學前驅物(化學合成時)。此性質可計量或表示為「純度」。在一些實施例中，一目標化合物具有少於約30%、20%、10%、5%、2%、1%、0.5%和0.1%的非目標結構或化學前驅物。
術語「碳水化合物」係指糖或糖的聚合物。術語「醣」、「多醣」、「碳水化合物」和「寡醣」可互換使用。大多數碳水化合物係具有許多羥基的醛或酮，通常在分子的每個碳原子上帶有一個羥基。碳水化合物通常具有分子式CnH2nOn。碳水化合物可為單醣、雙醣、三醣、寡醣或多醣。最基本的碳水化合物是單醣，例如葡萄糖、半乳糖、蔗糖、核糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖和果糖。雙醣係兩個連接的單醣。示例性的雙醣包括蔗糖、乳糖、纖維雙醣和麥芽糖。通常，寡醣包括三至六個單醣單元(例如棉子糖、水蘇糖)，而多醣包括六個或以上的單醣單元。示例性的多醣包括澱粉、肝醣和纖維素。碳水化合物可包含經修飾的醣單元，例如2'-去氧核糖(其中羥基被除去)、2'-氟代核醣(其中羥基被氟取代)或N-乙醯葡萄糖胺(含氮形式的葡萄糖)。(例如2'-氟代核醣、去氧核糖和己糖)。碳水化合物可以許多不同的形式存在，例如構形異構物、環狀形式、非環狀形式、立體異構物、互變異構物、變旋異構物和同分異構物。
圖1示出使用皂苷和PEK抗原或不使用PEK抗原獲得的IFNγ(左2組)和IL-2(右2組)分泌細胞個數的圖示，其係在第三次投藥後一週時以ELISpot檢測得。
圖2示出第三次投予皂苷一週後T細胞之活化，於整體脾臟之CD3+T細胞中，IFNγ+(y軸)對CD4+或CD8+(x軸)細胞的百分比。
圖3示出第三次投予皂苷一週後T細胞之活化，於整體脾臟之CD3+T細胞中，IL-2+(y軸)對CD4+或CD8+(x軸)細胞的百分比。
圖4示出第三次投予皂苷一週後T細胞之活化，於整體脾臟之CD3+T細胞中，TNFα+(y軸)對CD4+或CD8+(x軸)細胞的百分比。
圖5示出T細胞群的流式細胞儀分析，在第三次投予本發明皂苷後一週時總T細胞群內的脾臟CD62L+(x軸)CD44+(y軸)的代表性散佈圖。將低CD62L且高CD44之細胞群分類為記憶T細胞，並示出活CD8+脾細胞表現IFN-γ、TNF-α或IL-2的頻率。當陽性事件的頻率超過對照組的平均值±平均值標準誤差時，判定為細胞激素陽性。
圖6示出第三次投予皂苷46-49、53-56、56α、57-62、64、66、77α、77 β、78、79、83、92、95一週後T細胞之活化，其中合併脾細胞四重複反應孔中形成點的PEK特異性IFNγ+或IL-2或TNFα細胞的平均值。當陽性事件的頻率超過對照組的平均值±平均值標準誤差時，判定為細胞激素陽性。
圖7示出E7特異性IgG抗體。以PEK/皂苷賦予C57BL/6小鼠免疫的每次免疫作用後收集血清，並透過ELISA測量血清中之E7蛋白特異性IgG抗體。記錄每組血清經稀釋10000倍後之OD450值。數值以平均值±平均值標準誤差表示(n=3)。
圖8(A)為5天內小鼠體重中位數變化的百分比。數值以平均值±平均值標準誤差表示(n=5)。(B)為肝體細胞指數和(C)為脾體細胞指數，數值以平均值±平均值標準誤差表示(n=5)。接受增加劑量的皂苷佐劑56的小鼠的體重中位數變化百分比皆小於5%。與對照組相比，所有實驗組的脾體細胞指數和肝體 細胞指數皆無變化。這些數據表明，皂苷56作為疫苗佐劑是有效且安全的候選藥物。
圖9示出具有皂苷共軛物56的OVA疫苗的信號劑量對雌性C57BL/6小鼠的E.G7-OVA腫瘤的影響。
圖10.將結合化合物56的流感疫苗經皮下及鼻內投藥後，以小鼠流感(PR8)造成威脅之下，小鼠的存活率。
圖11.對小鼠皮下投予SARS-CoV-2(2ug或10ug)和佐劑(明礬和化合物56)之抗體效價。
圖12.皂苷共軛物合成流程1，描述三醣及其類似物的合成。
圖13.皂苷共軛物合成流程2，描述四醣及其類似物的合成。
圖14.皂苷共軛物合成流程3，描述三萜建構組元及其類似物的合成。
圖15.皂苷共軛物合成流程4，演示化合物41-44的製備。
圖16.皂苷共軛物合成流程5，演示根據本發明實施例的式(I)的製備。
圖17.皂苷共軛物合成流程6，演示根據本發明實施例的皂苷類似物的製備。
圖18.皂苷共軛物合成流程7，分支三醣-三萜皂苷的分離和選擇性保護。
圖19.皂苷共軛物合成流程8，演示根據本發明實施例的皂苷類似物的製備。
圖20.根據本發明實施例的皂苷共軛物合成流程。
皂苷共軛物
本發明涉及如上定義的式(I)皂苷共軛物、其合成及其中間體。
式(I)皂苷共軛物可透過以下合成步驟合成。
步驟1-1：三醣供體的合成
三醣的合成從木糖基醯亞胺酯(xylosyl imidate)1和鼠李糖受體2之醣基化開始，透過BF3．OEt2路易士酸催化以58%的產率得到雙醣3(流程1)。之後，將硫代雙醣(thio-disaccharide)3與岩藻糖4α偶合，以58%的產率提供所需的三醣5。此外，這兩個醣基化步驟亦可藉由一鍋法進行，首先使雙醣3共軛，然後將岩藻糖4α和NIS依次添加到反應混合物中，得到三醣5。在室溫下使用嗎福林將三醣5選擇性去保護，然後藉由乙酐將其乙醯化。在氫解和醯亞胺酯的形成下進行所得的五乙醯化三醣6，以提供三醣供體10。優化三醣的方法首先係使木糖1和鼠李糖7偶合以得到雙醣8，然後水解和乙醯化而得到雙醣9。透過雙醣9和岩藻糖4α的醣基化得到三醣6，具有96%的優良產率。還透過雙醣9和阿拉伯糖11α的醣基化以及隨後的氫解和醯亞胺化反應，合成三醣12及13的醯亞胺酯衍生物。
流程1-描述三醣及其類似物的合成，如圖12。
步驟1-2：四醣供體的合成
四醣的合成係使用TMSOTf處理葡萄醣苷基醯亞胺酯(glucosyl imidate)15和鼠李糖苷14，以51%的產率得到具有正確β-(1→3)連接的雙醣16(流程2)。進行硫基水解及醯亞胺酯形成後獲得雙醣醯亞胺酯供體17，然後與岩藻糖4α反應得到三醣18，然後將其用DDQ處理以除去PMB保護基。將得到的三醣受體19進一步與木糖基供體1共軛結合以獲得四醣20。在透過NMR質譜確認結構之後，將四醣20進行氫解和醯亞胺酯的形成，以提供四醣醯亞胺酯21和22。
流程2-描述四醣及其類似物的合成，如圖13。
步驟2：三萜建構組元的合成
首先將烯丙基基團引入C-28羧酸中，得到皂皮酯(quillaic ester)20和刺囊酯(echinocystic ester)21(流程3)。為了提高3-O醣基化的選擇性，透過三步合成進一步以三乙基矽烷基(triethylsilyl，TES)基團保護二醇20上的16-OH基團：選擇性3-O乙醯化，將TES加在16-OH上，然後進行去乙醯化，透過這3個步驟得到60%的皂皮酯25。
流程3-描述三萜建構組元及其類似物的合成，如圖14。
步驟3：經保護的雙醣鏈皂苷(bisdesmosidic saponins)的合成
對於葡萄糖醛酸建構組元，合成具有苯甲醯基(benzoyl，Bz)、異丁醯基(isobutyryl，iPrCO)和三甲基乙醯基(pivaloyl，Piv)基團的葡萄糖醛酸苷。(流程4)。溴化葡萄糖醛酸酯(glucoronate bromide)26與硫代甲苯(thiotoluene)反應生成硫代葡萄糖醛酸苷(thio-glucuronide)27。此後，對化合物27進行去乙醯化並以苯甲醯氯、異丁醯氯和三甲基乙醯基氯化物進行醯化，得到28-30。接著以氧化去除硫基，然後形成三氯乙醯亞胺酯，則葡萄糖醛酸醯亞胺酯(glucuronate imidates)31-33可容易地與皂皮酸偶合。苯甲醯化供體31與皂皮酯23的偶合主要形成原酯。原酯的形成可歸因於平面構形2-O-苯甲醯基缺乏立體障礙造成。因此，引入異丁醯化葡萄糖醛酸酯32，以在羰基位置附近建立屏障。成功以21%產率得到產物但原酯產物仍佔47%，即使如此，此結果仍鼓勵我們使用立體障礙更大的三甲基乙醯基。最後，使用三甲基乙醯化供體33成功地以48%的產率獲得共軛產物34，並且回收29%的皂皮酯23。此外，刺囊酯24與苯甲醯化葡萄糖醛酸酯31的反應成功地以72%的產率獲得產物36。
而後為了使C-28羧酸脫保護，首先在鹼性條件下加熱水解苯甲醯基、三甲基乙醯基和甲氧基。然後將所得到的中間體進行羧酸基苄化及羥基三乙基矽化(triethylsilylation)，得到完全受保護的皂皮酯37和刺囊酯38。此外，基於1H NMR的偶合常數分析，我們注意到葡萄糖醛酸酯的4C1構形翻轉為1C4。葡萄糖醛酸苷34的H-1'-H-2'之間的原始偶合常數從J H-1'-H-2' =7.8Hz降到TES-保護化合物37的J H-1'-H-2' =4.2Hz，同時亦觀察到該葡萄糖醛酸苷上其他氫偶合常數降低的現象。為了進一步獲得葡萄糖醛酸苷受體，在溫和的酸性環境下透過Pd(OAc)2催化水解O-烯丙基酯，得到化合物39和40。在-75℃、以BF3．OEt2促進下，進行寡醣13和葡萄糖醛酸苷39的結合，從而以94%的優良產率獲得41β。含阿拉伯糖的三醣13與皂皮酸39的偶合產生42β和42α，產率分別為75%和16%。同樣，透過將醯亞胺酯10與刺囊酸(echinocystic acid)40醣基化，也能以96%的優異產率獲得刺囊酯43(β)。將四醣供體21與皂皮酸39進行偶合，得到在TLC分析之下變旋異構比(anomeric ratio)為β/α~1/1的產物44。隨後使用N-苯基三氟乙醯亞胺酯22；結果，以46%的產率成功獲得主要產物皂苷44β。
流程4-演示化合物41-44的製備，如圖15。
步驟4：結合醯胺並完全去保護的皂苷的合成
41β氫解後，用HBTU/DIPEA偶合系統連續進行醯胺鍵形成，得到一系列共軛醯胺。之後，將產物進行酸水解和甲醇分解，以提供我們的目標皂苷。流程5中的代表性皂苷包含從甲基到十八烷基的不同長度的脂族碳鏈、各種芳基脂族、雜芳基脂族、雜環脂族化合物。
流程5-演示根據本發明實施例的式(I)的製備，如圖16。
步驟5：皂苷類似物的合成
皂苷的合成含有α-方向的三醣部分(化合物56α，流程6)。以L-阿拉伯糖取代D-岩藻糖，得到皂苷77α/β變旋異構物。合成刺囊酯78，並導出β-連接的四醣酯(β-linked tetrasaccharide ester)79。
流程6-演示根據本發明實施例的皂苷類似物的製備，如圖17。
疫苗組合物
另一方面，本申請涉及一種疫苗組合物，其包含一抗原及作為一佐劑之本申請皂苷類似物。在一些實施例中，該疫苗組合物進一步包含其他佐劑。
本申請疫苗組合物可用為在個體中針對抗原誘導主動免疫的疫苗。可能經歷本發明組合物的有益作用的任何動物，都在可治療的個體的範圍內。在一些實施例中，該個體是哺乳動物。在一些實施例中，該個體是人類。
疫苗(或其引出的抗血清)的施用可能是出於「預防」或「治療」目的。疫苗的預防性施用用於預防或減輕疾病的任何後續表現。預防性地提供疫苗，係在任何疾病症狀之前提供。治療性地提供疫苗，係在檢測到指出動物可能感染病原或患有某種癌症的症狀時或之後提供。疫苗的治療性施用可減緩任何實際的疾病表現。因此，可在疾病開始擴散之前或在實際開始擴散之後提供疫苗。
因此，一方面，本發明提供一種疫苗，其包含一種或多種細菌、病毒、原生動物或腫瘤相關抗原以及一種或多種本發明化合物。在一些實施例中，該疫苗包含與一種本發明化合物組合的單一細菌、原生動物、病毒或腫瘤相關抗原。在一些實施例中，該疫苗包含與一種本發明化合物組合的兩種或更多種細菌、病毒、原生動物或腫瘤相關抗原。在一些實施例中，該疫苗包含與兩種或更多種本發明化合物組合的單一細菌、病毒、原生動物或腫瘤相關抗原。
在一些實施例中，所提供的疫苗中的一種或多種抗原是細菌抗原。在某些實施例中，該細菌抗原是與細菌相關的抗原，所述細菌係選自由百日咳鮑特氏菌(Bordetella pertussis)、副百日咳鮑特氏菌(Bordetella parapertussis)、支氣管炎鮑特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)、疏螺旋體屬(Borrelia spp.)、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)、肺炎披衣菌(Chlamydia pneumoniae)、解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum)、肺炎黴漿菌(Mycoplasma pneumoniae)、葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、鏈球菌屬(Streptococcus spp.)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、草綠色鏈球菌(Streptococcus viridans)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)、沙門桿菌屬(Salmonella spp.)、傷寒沙門氏桿菌(Salmonella typhi)、霍亂弧菌(Vibrio cholera)、鼠疫巴氏桿菌(Pasteurella pestis)、彎曲桿菌屬(Campylobacter spp.)、空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)、梭菌屬(Clostridium spp.)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、白喉棒狀桿菌(Corynebacterium diphtheria)、分枝桿菌屬(Mycobacterium spp.)、結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、密螺旋體屬(Treponema spp.)、鉤端螺旋體屬(Leptospria spp.)、杜克雷氏嗜血桿菌(Hemophilus ducreyi)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、大腸桿菌(Escherichia coli)、志賀氏桿菌屬(Shigella spp.)、艾利希體屬(Ehrlichia spp.)、立克次體屬(Rickettsia spp.)及其組合所組成之群組。
在某些實施例中，所提供的疫苗中的一種或多種抗原是病毒相關抗原。在某些實施例中，該病毒相關抗原是與病毒相關的抗原，所述病毒係選自由流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腺病毒、呼吸道融合性病毒、艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus；EBV)、鼻病毒、脊髓灰白質炎病毒、柯薩奇病毒(coxsackievirus)、艾柯病毒(echo virus)、麻疹病毒、風疹病毒、水痘帶狀疱疹病毒、疱疹病毒、疱疹單純型病毒、微小病毒、巨細胞病毒、肝炎病毒、人類乳突病毒、阿爾法病毒(alphavirus)、黃病毒、布尼雅病毒(bunyavirus)、狂犬病病毒、沙狀病毒、絲狀病毒、HIV-1、HIV-2、HTLV-1、HTLV-II、貓白血病病毒(feline leukemia virus，FeLV)、牛白血病病毒(bovine leukemia virus，bovine LV)、貓免疫缺陷病毒(feline immunodefiency virus，FeIV)、犬瘟熱病毒、犬傳染性肝炎病毒(canine contagious hepatitis virus)、貓杯狀病毒、貓鼻氣管炎病毒、豬傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、口蹄疫病毒、冠狀病毒、登革熱病毒及其組合所組成之群組。
在某些實施例中，所提供的疫苗中的一種或多種抗原是腫瘤相關抗原。在一些實施例中，腫瘤相關抗原是選自以下群組的抗原：已殺死的腫瘤細胞及其溶胞產物；MAGE-1、MAGE-3及其胜肽片段；人絨毛膜促性腺激素及其胜肽片段；癌胚胎抗原及其胜肽片段；甲型胎兒蛋白及其胜肽片段；胰胚胎抗原(pancreatic oncofetal antigen，POA)及其胜肽片段；前列腺特異性抗原及其胜肽片段；MUC-1及其胜肽片段；CA 125、CA 15-3、CA 19-9、CA 549、CA 195及其胜肽片段；前列腺特異性膜抗原及其胜肽片段；扁平上皮細胞癌相關抗原及其胜肽片段；卵巢癌抗原及其胜肽片段；胰臟癌相關抗原及其胜肽片段；Her1/neu及其胜肽片段；gp-100及其胜肽片段；突變型K-Ras蛋白及其胜肽片段；突變型p53 及其胜肽片段；截短型表皮生長因子受體(truncated epidermal growth factor receptor)、嵌合蛋白p210BCR-ABL、STn、Tn、Lewisx、Lewisy、TF、GM1、GM2、GD2、GD3、Gb3、KH-1、Globo-H、SSEA-4；及其混合物。
如上所述，所提供的化合物可與腫瘤相關抗原結合，用為癌症疫苗中的佐劑。在某些實施例中，疫苗可用於治療或預防腫瘤。在某些實施例中，所述腫瘤是良性腫瘤。在其他實施例中，所述腫瘤是惡性腫瘤。使用本發明化合物與抗原可治療任何癌症。
另一方面，本申請涉及使用本申請疫苗組合物使個體免疫的方法。
製劑
本申請皂苷類似物可與醫藥學上可接受的賦形劑組合以形成藥物組合物。在某些實施例中，該藥物組合物包含醫藥學上可接受量的本發明化合物。可與載體材料組合產生單一劑型的活性成分的量將根據所治療的宿主和特定的投藥方式而變化。可與載體材料組合產生單一劑型的活性成分的量通常是能產生治療作用的化合物的量。通常，該量為約1%至約99%的活性成分，較佳為約5%至約70%，最佳為約10%至約30%。
該組合物中亦可包含潤濕劑、乳化劑和潤滑劑，例如硫酸月桂酯鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、控制釋放劑、塗佈劑、甜味劑、調味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑。
本發明製劑包括適於口服、經鼻、局部、經直腸、經陰道及/或腸胃外施用的製劑。所述製劑可便於以單位劑型存在並且可透過藥學領域中眾所周知的任何方法製備。在某些實施例中，本發明製劑包含一賦形劑及一本發明化合 物，該賦形劑係選自由環糊精、脂質體、膠微粒形成劑(例如膽酸)和聚合物載體(例如聚酯和聚酸酐)所組成之群組。在某些實施例中，前述製劑使本發明化合物可口服生物相容。
適於經口投予的本發明製劑可為膠囊、扁囊劑、丸劑、錠劑(tablets)、口含錠(使用調味基料，通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)、粉劑、顆粒劑，或為於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液，或水中油或油中水液體乳液，或酏劑或糖漿劑，或錠劑(pastilles)(使用惰性基質，例如明膠及甘油，或蔗糖及阿拉伯膠)，及/或漱口水等形式，其各含有預定量之本發明化合物作為活性成分。本發明化合物亦可以大丸劑、舐劑或糊劑的形式施用。
本申請製劑可口服、腸胃外、局部或經直腸給予。當然，其係以適合每種投藥途徑的形式給予。例如，以錠劑或膠囊形式投藥；透過注射、吸入、眼藥水、軟膏、栓劑等投藥；透過注射、輸注或吸入投藥；透過洗劑或軟膏局部施用；及經直腸施用栓劑。
不論選擇何種投藥途徑，本申請皂苷類似物可以合適的水合形式使用，且/或本發明藥物組合物可透過本領域技術人員已知的習知方法配製成醫藥學上可接受的劑型。可改變本發明藥物組合物中活性成分的實際劑量濃度，以獲得對特定患者、組合物和投藥方式有效達到所需治療反應的量的活性成分，而對患者不具毒性。
劑量濃度的選擇將取決於多種因素，包括：所使用的本發明特定化合物或其酯、鹽或醯胺的活性；投藥途徑；投藥時間；所用特定化合物的排泄率或代謝率；治療持續時間；與所用特定化合物組合使用的其他藥物、化合物及 /或物質；所治療患者的年齡、性別、體重、病狀、一般健康狀況和先前病史；及醫學領域中眾所周知的因素。
具有本領域普通技術的醫師或獸醫可容易地判斷並開出所需藥物組合物的有效量。例如，醫師或獸醫可將低於達到期望治療效果所需水平的濃度作為藥物組合物中所用本發明化合物的起始劑量，然後逐漸增加劑量直至達到期望效果。
實施例
提供以下實施例以說明本發明的某些方面，並幫助本領域技術人員實施本發明。這些實施例並非限制本發明的範圍。
除非另有說明，否則所有試劑和溶劑皆為試劑級，無須進一步純化即可使用。分子篩在使用前於200℃活化。使用對茴香醛、茚三酮和鉬酸鈰銨(cerium ammonium molybdate)作為顯影劑，在0.25mm之矽膠60 F254(Merck Millipore)上進行薄層層析分析以監測反應進展。採用230-400目矽膠進行快速管柱層析法。
儀器
使用Bruker-AV-400(400MHz)和Bruker-AV-600(600MHz)獲得NMR質譜。化學位移(δ)的單位為ppm，相對於CDCl3的1H：7.26ppm，13C：77.0ppm；相對於CD3OD的1H：3.31ppm，13C：49.0ppm。分裂形式係將單峰以s表示，二重峰以d表示，三重峰以t表示，四重峰以q表示，多重峰以m表示。偶合常數(J)以赫(Hertz，Hz)為單位。逆向高效液相層析法(reverse phase HPLC)純化和分析係採用配備有自動取樣器L-2200、UV檢測器L-2420和泵L-2130的HITACHI D-2000 Elite HPLC系統，或配備有系統控制器CBM-20A、光電二極體陣列偵測器SPD- M20A、泵LC-20AT和自動取樣器SIL-20AHT的SHIMADZU HPLC系統。以VG platform電噴灑游離質譜儀或BioTOF II進行精確的質量測量。
合成例I
Figure 109118307-A0305-02-0035-19
對甲基苯基2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2-O-乙醯基-3-O-茀基甲氧基羰基-1-硫基-α-L-吡喃鼠李糖苷(3)
於-40℃和N2氣體環境下將BF3．OEt2(約48%,11μL,0.08mmol)添加至1(137mg,0.33mmol)、2(87mg,0.16mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(1.6mL)中經攪拌的懸浮液中。3小時後反應完成後，加入飽和NaHCO3以淬滅混合物，然後加熱至室溫。將所得混合物以MgSO4乾燥並在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/4至1/2)將殘留物純化，得到無色漿體狀的3(75mg,58%)：R f 0.36(EtOAc/己烷=1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.78(d,J=7.5Hz,2H),7.64(dd,J=19.0,7.4Hz,2H),7.45-7.41(m,2H),7.39-7.34(m,4H),7.12(d,J=8.0Hz,2H),5.54(dd,J=3.4,1.4Hz,1H,H-2),5.33(d,J=1.4Hz,1H,H-1),5.21(t,J=9.4Hz,1H,H-3'),5.08(dd,J=9.6,3.4Hz,1H,H-3),4.99(td,J=9.4,5.4Hz,1H,H-4'),4.95(dd,J=9.4,7.6Hz,1H,H-2'),4.79(d,J=7.6Hz,1H,H-1'),4.57(dd,J=13.4,10.1Hz,1H,Fmoc CH 2 ),4.35-4.31(m,2H,Fmoc CH 2 and CH),4.28-4.25(m,1H,H-5),4.14(dd,J=11.8,5.4Hz,1H,H-5a '),3.84(t,J=9.5Hz,1H,H-4'),3.40(dd,J=11.8,9.5Hz,1H,H-5b '),2.33(s,3H),2.16(s,3H),2.05(s,3H),2.03(s,3H),1.91(s,3H),1.35(d,J=6.2Hz,3H,H-6)；13C NMR(151MHz,CDCl3)δ 167.0,169.9,169.8,169.5,154.0,143.4,143.1,141.3,141.2,138.2,132.6,129.9,129.3, 128.0,127.3,125.2,125.0,120.1,120.0,100.8(C-1'),85.8(C-1),76.1(C-3),75.9(C-4),72.2(C-3'),71.3(C-2'),71.2(C-2),70.6(Fmoc CH2),69.3(C-4'),68.1(C-5),62.5(C-5'),46.6(Fmoc CH),21.1,20.9,20.7,20.7,20.5,17.5(C-6)ppm；C41H44O14SNa[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值815.2349，實測值815.2352。
Figure 109118307-A0305-02-0036-20
苄基2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2-O-乙醯基-3-O-茀基甲基氧基羰基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(5)
於-50℃和N2氣體環境下將NIS(1.12g,4.99mmol)及BF3．OEt2(0.38mL,1.42mmol)添加至4α(1.05g,3.57mmol)、3(3.40g,4.28mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(2mL)中經攪拌的懸浮液中。1小時後反應完成後，加入飽和NaHCO3和10% Na2S2O3水溶液以淬滅反應。將反應混合物加熱至室溫，攪拌1小時，然後過濾。將濾液用CH2Cl2稀釋，用10% Na2S2O3(aq.)、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，以MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=1/1/6至1/1/4)將殘留物純化，得到白色泡沫狀的5(2.00g,58%)：R f 0.44(EtOAc/CH2Cl2/己烷=1/1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.78(d,J=7.5Hz,2H),7.67(d,J=7.4Hz,1H),7.63(d,J=7.5Hz,1H),7.42(t,J=7.4Hz,2H),7.42(t,J=7.4Hz,2H),7.39-7.27(m,5H),5.50-5.46(m,1H,H-2'),5.19(t,J=9.2Hz,1H,H-3"),5.12-5.10(m,2H,H-1',H-3'),4.99(td,J=9.2,5.5Hz,1H,H-4"),4.94(dd,J=9.2,7.6Hz,1H,H-2"),4.82(d,J=3.5Hz,1H,H-1),4.77(d,J=7.5Hz,1H,H-1"),4.71(d,J=12.3Hz,1H,Bn CH 2 ),4.60-4.51(m,2H,Bn CH 2 ,Fmoc CH 2 ), 4.37-4.31(m,2H,H-3,Fmoc CH),4.28(dd,J=10.0,8.1Hz,1H,Fmoc CH 2 ),4.17-4.09(m,2H,H-5,H-5a "),4.02(dd,J=5.3,2.4Hz,1H,H-4),3.76(dd,J=8.1,3.5Hz,1H,H-2),3.72(t,J=9.6Hz,1H,H-4'),3.65-3.60(m,1H,H-5'),3.40(dd,J=11.6,9.7Hz,1H,H-5b "),2.18(s,3H),2.05(s,3H),2.01(s,3H),1.86(s,3H),1.50(s,3H),1.34(d,J=6.7Hz,3H,H-6),1.32(s,3H),1.18(d,J=6.2Hz,3H,H-6')；C50H58O19Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值985.3463，實測值985.3476。
Figure 109118307-A0305-02-0037-21
苄基2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(6)
在室溫下添加嗎福林(0.5mL)至經攪拌的5(100mg,0.10mmol)在CH2Cl2(5mL)中的懸浮液中。1.5小時後反應完成後，將反應混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NH4Cl、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，用MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/1至3/2)將殘留物純化，得到茀基甲基氧基羰基(Fmoc)-去保護的產物(72mg,95%)。在室溫和N2氣體環境下添加Ac2O(91μL,0.96mmol)、Et3N(201μL,1.4mmol)和DMAP(6mg,0.048mmol)至Fmoc去保護的產物(462mg,0.48mmol)在無水CH2Cl2(10mL)中經攪拌的溶液中。2小時後反應完成後，將反應物用CH2Cl2稀釋，用H2O、鹽水洗滌，用MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=2/3)將殘留物純化，得到白色泡沫狀的6(391mg,96%)：R f 0.48(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.38-7.27(m,5H),5.32(dd,J=3.5,1.6Hz,1H,H-2'),5.26(dd,J=9.3,3.5 Hz,1H,H-3'),5.13(t,J=9.3Hz,1H,H-3"),5.05(d,J=1.5Hz,1H,H-1'),4.96(td,J=9.3,5.4Hz,1H,H-4"),4.91-4.87(dd,J=9.3,7.6Hz,1H,H-2"),4.80(d,J=3.6Hz,1H,H-1),4.71(d,J=12.3Hz,1H,Bn CH 2 ),4.63(d,J=7.6Hz,1H,H-1"),4.54(d,J=12.3Hz,1H,Bn CH 2 ),4.34(dd,J=8.1,5.4Hz,1H,H-3),4.14(qd,J=6.7,2.5Hz,1H,H-5),4.10(dd,J=11.7,5.4Hz,1H,H-5a "),4.02(dd,J=5.4,2.5Hz,1H,H-4),3.74(dd,J=8.1,3.6Hz,1H,H-2),3.62-3.54(m,2H,H-4',H-5'),3.33(dd,J=11.7,9.5Hz,1H,H-5b "),2.13(s,3H),2.08(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,6H),1.49(s,3H),1.34(d,J=6.7Hz,3H,H-6),1.32(s,3H),1.14(d,J=5.6Hz,3H,H-6')ppm；C37H50O18Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值805.2889，實測值805.2898。
Figure 109118307-A0305-02-0038-22
三氯亞氨代乙醯基2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α/β-D-吡喃岩藻糖苷(10)
在室溫下H2(氣球)氣體環境下攪拌6(1.26g,1.6mmol)和10% Pd/C(0.2g)在磷酸鹽緩衝液(100mM Na2HPO4/NaH2PO4(aq.),pH=7.0)/THF/MeOH=1/1/4(30mL)中的懸浮液。攪拌3天後，將混合物以矽藻土過濾並在減壓下濃縮。將殘留物用CH2Cl2稀釋，用H2O、鹽水洗滌，用MgSO4乾燥，濃縮，然後以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/1至3/2)純化，得到半縮醛(0.79g,71%)，為無色漿體。在室溫和N2氣體環境下添加Cl3CCN(16μL,0.16mmol)和DBU(3μL,0.021mmol)至半縮醛(36mg,0.48mmol)在無水CH2Cl2(1mL)中經攪拌的溶液中。攪拌1.5小時後，以TIC分析確認反應完成，在減壓下濃縮混合物。以快速管柱層 析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/1至3/2，包含0.5% Et3N)將殘留物純化，得到黃色漿體狀的10(34mg,78%)。10α：R f 0.46(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 8.67(s,1H),6.30(d,J=3.5Hz,1H,H-1),5.24(dd,J=3.3,1.8Hz,1H,H-2'),5.14-5.08(m,2H,H-3',H-3"),5.03(d,J=1.8Hz,1H,H-1'),4.93(td,J=9.4,5.4Hz,1H,H-4"),4.86(dd,J=9.4,7.7Hz,1H,H-2"),4.58(d,J=7.7Hz,1H,H-1"),4.40(dd,J=7.8,5.4Hz,1H,H-3),4.32(qd,J=6.7,2.5Hz,1H,H-5),4.12-4.07(m,2H,H-5a ",H-4),3.91(dd,J=7.8,3.5Hz,1H,H-2),3.81(dq,J=9.6,6.2Hz,1H,H-5'),3.60(t,J=9.6Hz,1H,H-4'),3.31(dd,J=11.7,9.7Hz,1H,H-5b "),2.13(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.00(s,3H),1.95(s,3H),1.52(s,3H),1.38(d,J=6.7Hz,3H,H-6),1.34(s,3H),1.28(d,J=6.2Hz,3H,H-6')。
Figure 109118307-A0305-02-0039-23
對甲基苯基2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-1-硫基-α-L-吡喃鼠李糖苷(9)
將8(4.6g,8.1mmol)在80% AcOH(100mL)中經攪拌的溶液加熱至60℃ 12小時。使所得混合物蒸發，然後在減壓下與甲苯(50mL)共沸蒸餾兩次。在高真空下乾燥後，在室溫和N2氣體環境下用Ac2O(2.2mL,23mmol)、Et3N(5.2mL,38mmol)和DMAP(9mg,0.074mmol)在CH2Cl2中的溶液處理粗製漿體。2小時後反應完成後，將混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O、鹽水洗滌，以MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=2/3)將殘留物純化，得到白色固體狀的9(3.8g,76%)：R f 0.19(EtOAc/己烷=1/2)；1H NMR(400MHz,CDCl3) δ 7.34(d,J=7.9Hz,2H),7.11(d,J=7.8Hz,2H),5.39(brs,1H,H-2),5.26(brs,1H,H-1),5.22(dd,J=9.6,3.1Hz,1H,H-3),5.14(t,J=9.2Hz,1H,H-3'),5.00-4.93(m,1H,H-4'),4.90(dd,J=9.2,7.6Hz,1H,H-2'),4.66(d,J=7.6Hz,1H,H-1'),4.24(dq,J=9.6,6.1Hz,1H,H-5),4.12(dd,J=11.6,5.3Hz,1H,H-5a '),3.72(t,J=9.6Hz,1H,H-4),3.39-3.30(m,1H,H-5b '),2.31(s,3H),2.11(s,3H),2.09(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,6H,Ac×2),1.31(d,J=6.1Hz,3H)ppm；C28H36O13SNa[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值635.1769，實測值635.1774。
Figure 109118307-A0305-02-0040-24
苄基2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β-L-吡喃阿拉伯糖苷(12)
在-50℃和N2氣體環境下添加NIS(0.23g,1.0mmol)和TMSOTf(12μL,0.066mmol)至9(500mg,0.82mmol)、11α(190mg,0.68mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(7mL)中經攪拌的懸浮液中。0.5小時後反應完成後，加入Et3N、飽和NaHCO3和10% Na2S2O3水溶液以淬滅反應。在室溫下加熱並攪拌1小時後，將反應混合物過濾，用CH2Cl2稀釋，用10% Na2S2O3水溶液、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，以MgSO4乾燥，並在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=2/3至1/1)將殘留物純化，得到白色泡沫狀的12(412mg,79%)：R f 0.25(EtOAc/己烷=2/3)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.38-7.28(m,5H),5.32(dd,J=3.4,1.4Hz,1H,H-2'),5.26(dd,J=9.2,3.4Hz,1H,H-3'),5.13(t,J=9.2Hz,1H,H-3"),5.05(s,1H,H-1'),4.96(td,J=9.2,5.5Hz,1H,H-4"),4.90(dd,J=9.2,7.7Hz, 1H,H-2"),4.82(d,J=3.4Hz,1H,H-1),4.73(d,J=12.3Hz,1H,Bn CH 2 ),4.63(d,J=7.7Hz,1H,H-1"),4.53(d,J=12.3Hz,1H,Bn CH 2 ),4.36(dd,J=7.9,5.6Hz,1H,H-3),4.20(d,J=5.6Hz,1H,H-4),4.10(dd,J=11.7,5.5Hz,1H,H-5a "),3.98(brs,2H,H-5),3.75(dd,J=7.9,3.4Hz,1H,H-2),3.61-3.54(m,2H,H-4',H-5'),3.33(dd,J=11.7,9.6Hz,1H),2.14(s,3H),2.08(s,3H),2.03(s,3H),2.02-2.01(m,6H,Ac CH 3 ×2),1.50(s,3H),1.32(s,3H),1.14(d,J=5.7Hz,3H)ppm；C36H48O18Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值791.2733，實測值791.2735。
Figure 109118307-A0305-02-0041-25
三氯亞氨代乙醯基2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α/β-L-吡喃阿拉伯糖苷(13)
在室溫和H2(氣球)氣體環境下攪拌12(300mg,0.39mmol)和10% Pd/C(150mg)在緩衝液(100mM Na2HPO4/NaH2PO4(aq.),pH=7.0)/THF/MeOH=1/1/4(30mL)中的懸浮液。攪拌3.5天後，將混合物以矽藻土過濾並在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/1至3/2)將殘留物純化，得到半縮醛(166mg,63%)，為白色泡沫。在室溫和N2氣體環境下添加Cl3CCN(22μL,0.22mmol)和DBU(4.3μL,0.029mmol)至半縮醛(50mg,0.074mmol)在無水CH2Cl2(1.5mL)中經攪拌的溶液中。攪拌16小時後，將混合物在減壓下濃縮。以快速管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/1，包含0.5% Et3N)將所得殘留物純化，得到無色漿體狀的13(60mg,98%)。100α：R f 0.43(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 8.69(s,1H,NH),6.30(d,J=3.4Hz,1H,H-1),5.24(dd,J=3.2,1.3Hz,1H,H-2'),5.14-5.08 (m,2H,H-3',H-3"),5.02(d,J=1.3Hz,1H,H-1'),4.93(td,J=9.4,5.4Hz,1H,H-4"),4.85(dd,J=9.5,7.7Hz,1H,H-2"),4.58(d,J=7.7Hz,1H,H-1"),4.42(dd,J=7.6,5.7Hz,1H,H-3),4.31-4.26(m,1H,H-4),4.12(d,J=1.8Hz,2H,H-5),4.09(dd,J=11.7,5.4Hz,1H,H-5a "),3.91(dd,J=7.6,3.4Hz,1H,H-2),3.80(dq,J=9.5,6.2Hz,1H,H-5'),3.60(t,J=9.5Hz,1H,H-4'),3.31(dd,J=11.7,9.4Hz,1H,H-5b "),2.13(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.00(s,3H),1.95(s,3H),1.52(s,3H),1.35(s,3H),1.28(d,J=6.2Hz,3H,H-6')ppm。
Figure 109118307-A0305-02-0042-26
對甲基苯基2,3,4,6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙醯基-4-O-(對甲氧基苄基)-1-硫基-α-L-吡喃鼠李糖苷(16)
在-50℃和N2氣體環境下添加TMSOTf(10μL,0.052mmol)至15(130mg,0.26mmol)、14(114mg,0.26mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(2.5mL)中經攪拌的懸浮液中。0.5小時後反應完成後，加入Et3N以淬滅反應，加熱至室溫，過濾，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/2)將殘留物純化，得到白色泡沫狀的16(102mg,51%)：R f 0.24(EtOAc/己烷=1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.29-7.27(m,4H),7.08(d,J=8.0Hz,2H),6.89(d,J=8.7Hz,2H),5.39(dd,J=3.4,1.4Hz,1H,H-2),5.30(d,J=1.4Hz,1H,H-1),5.18(t,J=9.7Hz,1H,H-3'),5.06(dd,J=9.7,8.0Hz,1H,H-2'),5.03(t,J=9.7Hz,1H,H-4'),4.79(d,J=8.0Hz,1H,H-1'),4.71(d,J=10.5Hz,1H),4.46(d,J=10.5Hz,1H),4.19-4.13(m,2H),4.09(dd,J=12.2,2.2Hz,1H'),4.06(dd,J=9.5,3.4Hz,1H),3.79 (s,3H,3.70(ddd,J=9.7,5.7,2.2Hz,1H,H-5'),3.48(t,J=9.5Hz,1H,H-4),2.29(s,3H),2.10(s,3H),2.09(s,3H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.83(s,3H),1.25(d,J=6.2Hz,3H,H-6)ppm；C37H46O15SNa[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值785.2450，實測值785.2457。
Figure 109118307-A0305-02-0043-27
三氯亞氨代乙醯基2,3,4,6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙醯基-4-O-(對甲氧基苄基)-α/β-L-吡喃鼠李糖苷(17)
在室溫下添加NBS(35mg,0.19mmol)於16(37mg,0.049mmol)在丙酮/H2O(1mL)中經攪拌的溶液中。攪拌2小時後，加入飽和NaHCO3和10% Na2S2O3(aq.)以淬滅混合物。在室溫下攪拌所得混合物1小時，然後在減壓下除去溶劑。將殘留物用CH2Cl2稀釋，用10% Na2S2O3(aq.)、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，用MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=3/2)將殘留物純化，得到半縮醛(26mg,82%)，為無色漿體。在室溫和N2氣體環境下添加Cl3CCN(12μL,0.12mmol)和DBU(2.4μL,0.016mmol)至半縮醛(26mg,0.040mmol)在無水CH2Cl2(1mL)中經攪拌之溶液中。攪拌1小時後，將混合物在減壓下濃縮。以快速管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/2，包含0.5% Et3N)將殘留物純化，得到白色泡沫狀的17(25mg,79%)。17：R f 0.44(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.68(s,1H),7.29(d,J=8.4Hz,2H),6.91(d,J=8.4Hz,2H),6.15(s,1H,H-1),5.34(s,1H,H-2),5.20(t,J=9.4Hz,1H,H-3'),5.12-5.06(m,2H, H-2',H-4'),4.84(d,J=7.9Hz,1H,H-1'),4.72(d,J=10.3Hz,1H,PMB CH 2 ),4.49(d,J=10.3Hz,1H,PMB CH 2 ),4.21-4.13(m,2H,H-3,H-6a '),4.09(t,J=11.0Hz,1H,H6b '),3.89(dq,J=9.6,6.1Hz,1H,H-5),3.81(s,3H,PMB OCH 3 ),3.66(d,J=9.7Hz,1H,H-5'),3.52(t,J=9.6Hz,1H,H-4),2.15(s,3H),2.07(s,3H),2.01(s,3H),2.00(s,3H),1.88(s,3H),1.29(d,J=6.1Hz,3H,H-6)ppm。
Figure 109118307-A0305-02-0044-28
苄基2,3,4,6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙醯基-4-O-(對甲氧基苄基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(18)
在-50℃和N2氣體環境下添加TMSOTf(1μL,0.0062mmol)於17(25mg,0.31mmol)、4α(9mg,0.31mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(1.5mL)中經攪拌的懸浮液中。1小時後反應完成後，加入Et3N以淬滅反應，加熱至室溫，過濾，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=2/3)將殘留物純化，得到白色泡沫狀的18(24mg,82%)：R f 0.43(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.34(d,J=7.2Hz,2H),7.29(t,J=7.5Hz,2H),7.26-7.24(m,3H),6.89(d,J=8.7Hz,2H),5.30(dd,J=3.6,1.7Hz,1H,H-2'),5.16(t,J=9.5Hz,1H,H-3"),5.09-5.04(m,H-2",H-4"),5.03(d,J=1.7Hz,1H,H-1'),4.85(d,J=3.6Hz,1H,H-1),4.77(d,J=7.9Hz,1H,H-1"),4.70(d,J=10.8Hz,1H,PMB CH 2 ),4.69(d,J=12.2Hz,1H,Bn CH 2 ),4.51(d,J=12.2Hz,1H,Bn CH 2 ),4.45(d,J=10.8Hz,1H,PMB CH 2 ),4.29(dd,J=8.1,5.4Hz,1H,H-3),4.21(dd,J=12.2,4.9Hz,1H,H-6a "),4.14-4.09(m,1H,H-5),4.08(dd,J=9.5,3.6Hz,1H,H-3'),4.04-3.99(m,2H, H-4,H-6b "),3.81(s,3H,PMB OCH 3 ),3.74(dd,J=8.1,3.6Hz,1H,H-2),3.70-3.61(m,2H,H-5",H-5'),3.40(t,J=9.5Hz,1H,H-4'),2.10(s,3H),2.07(s,3H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.77(s,3H),1.48(s,3H),1.33(d,J=6.7Hz,3H,H-6),1.31(s,3H),1.14(d,J=6.2Hz,3H,H-6')；C46H60O20Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值955.3570，實測值955.3579。
Figure 109118307-A0305-02-0045-29
苄基2,3,4,6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-2-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(19)
在室溫下添加DDQ(9mg,0.039mmol)於18(24mg,0.026mmol)在CH2Cl2/H2O=18/1(1mL)中經攪拌的溶液中。將反應混合物攪拌3小時，然後以飽和NaHCO3淬滅。所得混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/1)純化，得到無色漿體狀的19(17mg,81%)：R f 0.30(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.37-7.29(m,5H),5.24(dd,J=3.6,1.7Hz,1H,H-2'),5.20(t,J=9.6Hz,1H,H-3"),5.04-4.99(m,3H,H-2",H-1',H-4"),4.87(d,J=3.6Hz,1H,H-1),4.72(d,J=12.1Hz,1H,Bn CH 2 ),4.70(d,J=7.8Hz,1H,H-1"),4.53(d,J=12.1Hz,1H,Bn CH 2 ),4.30(dd,J=8.2,5.3Hz,1H,H-3),4.22(dd,J=12.3,5.0Hz,1H,H-6a "),4.12(qd,J=6.7,2.6Hz,1H,H-5),4.05-4.03(m,2H,H-4,H-6b "),3.85(dd,J=9.0,3.6Hz,1H,H-3'),3.74(dd,J=8.2,3.6Hz,1H,H-2),3.71(ddd,J=10.1,5.0, 2.2Hz,1H,H-5"),3.63-3.56(m,2H,H-4',H-5'),2.46(d,J=2.2Hz,1H,OH),2.08(s,3H),2.07(s,3H),2.05(s,3H),2.02(s,3H),2.00(s,3H),1.48(s,3H),1.33(d,J=6.7Hz,3H,H-6),1.32(s,3H),1.19(d,J=5.7Hz,3H,H-6')ppm；C38H52O19Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值835.2995，實測值835.3000。
Figure 109118307-A0305-02-0046-30
苄基2,3,4,6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4))-2-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α-D-吡喃岩藻糖苷(20)
在-50℃和N2氣體環境下添加TMSOTf(0.4μL,0.0021mmol)於1(13mg,0.031mmol)、19(17mg,0.021mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(1mL)中經攪拌的懸浮液中。0.5小時後反應完成後，加入Et3N以淬滅反應，加熱至室溫，過濾，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/1)純化，得到無色漿體狀的20(20mg,89%)：R f 0.27(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.39-7.30(m,5H),5.30(dd,J=3.6,1.8Hz,1H,H-2'),5.16(t,J=9.5Hz,1H,H-4"),5.11(t,J=8.2Hz,1H,H-3'''),5.04-4.98(m,2H,H-2",H-3"),4.96(d,J=1.8Hz,1H,H-1'),4.91(td,J=8.3,4.9Hz,1H,H-4'''),4.86(dd,J=8.2,6.3Hz,1H,H-2'''),4.82(d,J=3.6Hz,1H,H-1),4.80(d,J=6.3Hz,1H,H-1'''),4.73(d,J=7.7Hz,1H,H-1"),4.69(d,J=12.1Hz,1H,Bn CH 2 ),4.50(d,J=12.1Hz,1H,Bn CH 2 ),4.25(dd,J=8.2,5.3Hz,1H,H-3),4.16-4.09(m,2H,H-6a ",H-5),4.09-4.03(m,2H,H-5a ''',H-3'),4.03-3.99(m,2H,H-4,H-6b "),3.75(t,J=9.5Hz,1H,H-4'), 3.71-3.66(m,2H,H-2,H-5"),3.54(dq,J=9.5,6.2Hz,1H,H-5'),3.37(dd,J=11.9,8.3Hz,1H,H-5b '''),2.19(s,3H),2.08(s,3H),2.08(s,3H),2.08(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.99(s,3H),1.97(s,3H),1.46(s,3H),1.33(d,J=6.7Hz,3H,H-6),1.29(s,3H),1.10(d,J=6.2Hz,3H,H-6')ppm；C49H66O26Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1093.3735，實測值1093.3734。
Figure 109118307-A0305-02-0047-102
N-苯基-2,2,2-三氟乙醯亞胺基2,3,4,6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4))-2-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-α/β-D-吡喃岩藻糖苷(22)
在室溫和H2(氣球)氣體環境下攪拌20(255mg,0.24mmol)和20% Pd(OH)2/C(25mg)在THF(5mL)中的懸浮液。攪拌24小時後，將混合物透過矽藻土過濾並在減壓下濃縮。將殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=3/2至2/1)純化，得到半縮醛(180mg,77%)，為白色泡沫。在室溫和N2氣體環境下添加N-苯基-2,2,2-三氟乙醯亞胺氯(N-phenyl-2,2,2-trifluoroacetimidoyl chloride,19μL,0.12mmol)和DBU(3.7μL,0.024mmol)於半縮醛(20mg,0.020mmol)在無水CH2Cl2(1mL)中經攪拌的溶液中。攪拌1.5小時後，將混合物在減壓下濃縮。殘留物以快速管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/1至3/2，包含0.5% Et3N)純化，得到無色漿體狀的22(16mg,68%)。22α：R f 0.61(EtOAc/己烷=3/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.33(t,J=7.8Hz,2H),7.12(t,J=7.4Hz,1H),6.85(d,J=7.6Hz,2H),5.58(brs, 1H,H-1),5.20(s,1H,H-1'),5.19-5.15(m,2H),5.10(t,J=9.7Hz,1H),5.06(t,J=7.0Hz,1H),4.99(dd,J=9.3,7.9Hz,1H),4.92(d,J=5.1Hz,1H,H-1'''),4.86(td,J=6.9,4.2Hz,1H),4.80(dd,J=6.7,5.3Hz,1H),4.72(d,J=7.9Hz,1H,H-1"),4.23-4.08(m,5H),4.00-3.98(m,2H),3.89(brs,1H),3.84-3.77(m,2H),3.66-3.63(m,1H),3.45(dd,J=12.1,7.0Hz,1H),2.16(s,3H),2.11(s,3H),2.09(s,3H),2.06(s,3H),2.04(s,4H),2.02(s,3H),1.99(s,3H),1.99(s,3H),1.53(s,3H),1.39(d,J=6.3Hz,3H),1.32(s,3H),1.27(d,J=5.6Hz,3H)ppm。
28-O-烯丙基-3-O-(甲基2,3,4-三-O-三甲基乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)
Figure 109118307-A0305-02-0048-32
皂皮酯(34)
在室溫和N2氣體環境下添加B(PhF5)3(42mg,0.083mmol)至33(500mg,0.83mmol)、23(435mg,0.83mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(8mL)中經攪拌的懸浮液中。0.5小時後反應完成後，加入Et3N以淬滅反應，過濾，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=1/1/6)純化，得到白色固體狀的34(385mg,48%)：R f 0.57(EtOAc/己烷=1：2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.40(s,1H,H-23),5.88-5.81(m,1H，烯丙基內部烯基CH),5.37(t,J=3.3Hz,1H,H-12),5.31-5.27(m,2H,H-3'，烯丙基末端烯基CH a ),5.20-5.16(m,2H,H-4'，烯丙基末端烯基CH b ),4.98(t,J=8.0Hz,H-2'),4.52-4.44(m,4H,H-1',H-16，烯丙基CH 2 ),3.99(d,J=10.0Hz,1H,H-5'),3.84(dd,J=11.8,4.7Hz,1H,H-3),3.72(s,3H,OCH 3 ,3.05(dd,J=14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.15(t,J=13.6Hz,1H,H- 19a),1.92-1.85(m,4H),1.80-1.70(m,4H),1.68-1.63(m,3H),,1.50-1.41(m,2H),1.35-1.28(m,4H),1.25-1.17(m,3H),1.14(s,9H),1.12-1.10(m,10H),1.09-1.08(m,12H),1.05-0.97(m,2H),0.96(s,3H),0.94(s,3H),0.89(s,3H),0.70(s,3H)ppm；C55H84O14Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值991.5753，實測值991.5758。
28-O-烯丙基-3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(37)
Figure 109118307-A0305-02-0049-33
添加1.0N KOH(3mL)於34(358mg,0.37mmol)在THF(15mL)中經攪拌的溶液中，並在回流下加熱66℃。將反應混合物攪拌24小時，然後冷卻至室溫。將反應混合物用Amberlyst IR-120H+中和，過濾，濃縮並在減壓下乾燥。然後在室溫下用DMF(7mL)中的溴化苄基(88μL,0.73mmol)和K2CO3(102mg,0.73mmol)處理殘留物。攪拌2小時後，將反應混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠，MeOH/CH2Cl2=1/15)純化，得到苄酯，為黃色固體。在室溫和N2氣體環境下添加TESOTf(0.6mL,2.7mmol)和2,6-二甲吡啶(0.4mL,3.4mmol)於苄酯(266mg,0.34mmol)在無水CH2Cl2(5mL)中經攪拌的溶液中。將反應混合物攪拌2小時，然後添加飽和NaHCO3以將其淬滅。將混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/40)純化，得到無色漿體狀的37(310mg，三步收率67%)：Rf 0.71(EtOAc/己烷=1/10)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.34(s,1H,H-23),7.39-7.30(m,5H),5.90-5.80 (m,1H，烯丙基內部烯基CH),5.35(s,1H,H-12),5.29(d,J=17.2Hz,1H，烯丙基末端烯基CH a ),5.20(d,J=10.7Hz,1H，末端烯基CH b ),5.17-5.15(m,2H,Bn CH 2 ),4.58-4.57(m,2H,H-1',H-16),4.53-4.40(m,2H，烯丙基CH 2 ),4.27(dd,J=6.2,4.9Hz,1H,H-4'),4.22(d,J=6.2Hz,1H,H-5'),3.81(dd,J=11.4,3.8Hz,1H,H-3),3.61(d,J=4.9Hz,1H,H-3'),3.57(d,J=3.4Hz,1H,H-2'),3.02(d,J=11.6Hz,1H,H-18),2.23(t,J=13.5Hz,1H,H-19),1.99(d,J=10.8Hz,1H),1.91-1.79(m,4H),1.75-1.53(m,5H),1.48-1.31(m,5H),1.30-1.22(m,1H),1.20-1.23(m,3H),1.11-1.06(m,4H),1.03-0.85(m,47H),0.72-0.52(m,27H)ppm；C70H120O11Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1271.7800，實測值1271.7829。
Figure 109118307-A0305-02-0050-34
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酸(39)
在室溫下將預混合的在1,4-二噁烷(2.5mL)中的甲酸(0.38mL,10mmol)/Et3N(1.3mL,9.6mmol)以及在1,4-二噁烷(2.5mL)中的Pd(OAc)2(54mg,0.24mmol)加入37(0.60g,0.48mmol)和PPh3(0.31g,1.2mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中經攪拌之溶液中。將反應混合物攪拌12小時，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/6)純化，得到白色泡沫狀的39(0.48g,83%)：R f 0.25(EtOAc/己烷=1/6)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.36(s,1H,H-23),7.37-7.30(m,5H),5.34(t,J=3.4Hz,1H,H-12),5.16(s,2H,Bn CH 2 ),4.59(d,J=4.4Hz,1H,H-1'),4.53(s,1H,H-16),4.28(dd,J=6.2,5.3Hz,1H,H-4'),4.22(d,J=6.2Hz,1H,H-5'),3.82(dd,J=11.8,4.6Hz,1H,H-3),3.61(d,J=5.3Hz,1H,H-3'),3.58(d,J= 4.4,1H,H-2'),2.95(dd,J=14.3,4.0Hz,1H,H-18),2.21(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),2.03-1.95(m,1H),1.90-1.80(m,4H),1.78-1.61(m,4H),1.57(d,J=13.4Hz,1H),1.47-1.37(m,2H),1.35(s,3H),1.27(d,J=13.6Hz,1H),1.21-1.12(m,3H),1.10-1.03(m,4H),1.02-0.87(m,46H),0.70-0.53(m,27H)ppm；C67H116O11Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1231.7487，實測值1231.7507。
Figure 109118307-A0305-02-0051-35
28-O-烯丙基-3-O-(甲基2,3,4-三-O-苯甲醯基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)刺囊酯(36)
在室溫和N2氣體環境下添加B(PhF5)3(1.5mg,0.0030mmol)至31(20mg,0.030mmol)、24(7.7mg,0.015mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(0.6mL)中經攪拌的懸浮液中。0.5小時後反應完成後，加入Et3N以淬滅反應，過濾，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=1/1/6)純化，得到白色固體狀的36(11mg,72%)：R f 0.42(EtOAc/己烷=1：2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.95-7.91(m,4H),7.85(dd,J=8.4,1.3Hz,2H),7.53-7.49(m,2H),7.45-7.42(m,1H),7.40-7.35(m,4H),7.31-7.28(m,2H),5.91(t,J=9.7Hz,1H,H-3'),5.89-5,82(m,1H，烯丙基內部烯基CH),5.64(t,J=9.7Hz,1H,H-4'),5.59(dd,J=9.7,7.8Hz,1H,H-2'),5.39(t,J=3.6Hz,1H,H-12),5.29(dt,J=17.2,1.5Hz,1H,烯丙基末端烯基CH a ),5.20(dt,J=10.5,1.3Hz,1H，烯丙基末端烯基CH b ),4.89(d,J=7.8Hz,1H,H-1'),4.53-4.45(m,3H,H-16，烯丙基CH 2 ),4.30(d,J=9.7Hz,1H,H-5'),3.69(s,3H,OCH 3 ),3.16(dd,J=11.7,4.6Hz,1H,H-3),3.06(dd,J=14.4,4.3Hz,1H,H-18),2.14(dd,J=13.7Hz,1H,H-19a),1.90-1.85(m,4H,H-2a,H-11ab,H- 22a),1.82-1.71(m,4H,H-2b,H-15a,H-21a,H-22b),1.65-1.61(m,1H,H-1a),1.55-1.52(m,2H,H-9,16-OH),1.44-1.34(m,2H,H-6a,H-7a),1.34-1.30(m,4H,H-15b,H-27),1.26-1.19(m,3H,H-6b,H-7b,H-21b),1.14-1.10(m,1H,H-19b),0.97(s,3H,H-30),0.94-0.92(m,1H,H-1b),0.90(s,3H,H-29),0.88(s,3H,H-25),0.71(s,3H,H-23),0.70-0.65(m,4H,H-5,H-26),0.62(s,3H,H-24)ppm；C61H74O13Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1037.5022，實測值1037.5026。
Figure 109118307-A0305-02-0052-36
28-O-烯丙基-3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基矽烷基刺囊酯(38)
添加1.0N KOH(5mL)於36(0.45g,0.41mmol)在THF(25mL)中經攪拌之溶液中，並在45℃下加熱。將反應混合物攪拌12小時，然後冷卻至室溫。將反應混合物以Amberlyst IR-120H+中和，過濾，濃縮，然後在減壓下乾燥。隨後在室溫下用DMF(8mL)中的溴化苄基(98μL,0.82mmol)和K2CO3(113mg,0.82mmol)處理殘留物。攪拌12小時後，將反應混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠，MeOH/CH2Cl2=1/20)純化，得到苄酯。在室溫和N2氣體環境下添加TESOTf(0.74mL,3.3mmol)和2,6-二甲吡啶(0.48mL,4.1mmol)至苄酯在無水CH2Cl2(8mL)中經攪拌之溶液中。將反應混合物攪拌2小時，然後添加飽和NaHCO3以將其淬滅。將混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/40)純化，得到無色漿體狀的38(0.21 g,41%)：Rf 0.41(EtOAc/己烷=1/20)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.39-7.28(m,5H),5.92-5.82(m,1H，烯丙基內部烯基CH),5.35(s,1H,H-12),5.33-5.27(m,1H,烯丙基末端烯基CH),5.20(d,J=10.3Hz,1H，烯丙基末端烯基CH),5.16(s,2H,Bn CH 2 ),4.77(d,J=4.2Hz,1H,H-1'),4.59(s,1H,H-16),4.53-4.43(m,2H，烯丙基CH 2 ),4.34(dd,J=6.1,5.1Hz,1H,H-4'),4.27(d,J=6.1Hz,1H,H-5'),3.73(d,J=4.2Hz,1H,H-2'),3.65(d,J=5.1Hz,1H,H-3'),3.06-2.98(m,2H,H-3,H-18),2.23(t,J=13.5Hz,1H,H-19a),1.96(d,J=10.8Hz,1H),1.89-1.80(m,4H),1.77-1.62(m,3H),1.58-1.40(m,4H),1.34(s,3H),1.31-1.23(m,3H),1.16-1.04(m,2H),1.04-0.90(m,42H),0.89-0.84(s,7H),0.78(s,3H),0.72-0.55(m,28H)ppm；C70H122O10Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1257.8007，實測值1257.8019。
Figure 109118307-A0305-02-0053-37
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-16-O-三乙基矽烷基刺囊酸(40)
在室溫下將預混合的在1,4-二噁烷(2mL)中的甲酸(150μL,3.3mmol)/Et3N(430μL,3.1mmol)以及在1,4-二噁烷(2mL)中的Pd(OAc)2(17mg,0.078mmol)加入38(194mg,0.16mmol)和PPh3(1.03mg,0.39mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中經攪拌之溶液中。將反應混合物攪拌12小時，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/6)純化，得到白色泡沫狀的40(168mg,89%)：R f 0.58(EtOAc/己烷=1/6)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.40-7.28(m,5H),5.34(s,1H,H-12),5.16(s,2H,Bn CH 2 ),4.78(d,J=4.3Hz,1H,H-1'),4.55(s,1H, H-16),4.34(t,J=5.5Hz,1H,H-4'),4.27(d,J=5.8Hz,1H,H-5'),3.73(d,J=3.9Hz,1H,H-2'),3.66(d,J=5.0Hz,1H,H-3'),3.02(dd,J=11.5,3.7Hz,1H,H-3),2.95(d,J=11.3Hz,1H,H-18),2.21(t,J=13.5Hz,1H,H-19a),1.96(d,J=11.1Hz,1H),1.92-1.62(m,7H),1.62-1.40(m,4H),1.34(s,3H),1.31-1.23(m,3H),1.17-1.04(m,2H),1.02-0.91(m,42H),0.90-0.84(s,7H),0.79(s,3H),0.73-0.55(m,28H)ppm；C67H118O10Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1217.7694，實測值1217.7703。
Figure 109118307-A0305-02-0054-38
3-O-(苄 基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β/α-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(41β/α)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,12μL,0.044mmol)於10(276mg,0.33mmol)、39(266mg,0.22mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(11mL)中經攪拌的懸浮液中。0.5小時後反應完成後，加入Et3N以淬滅反應，加熱至室溫，過濾，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=2/1/5)純化，得到無色漿體狀的41β(391mg,94%)。41β：R f 0.64(EtOAc/己烷=1：1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.35(s,1H,H-23),7.40-7.28(m,5H),5.41(d,J=7.5Hz,1H,H-1'),5.34(t,J=3.5Hz,1H,H-12),5.25(dd,J=3.5,1.6Hz,1H,H-2"),5.21(dd,J=9.8,3.5Hz,1H,H-3"),5.16(s,2H,Bn CH 2 ),5.13(t,J=9.2Hz,1H,H-3'''),4.98(d,J=1.6Hz,1H,H-1"),4.96(td,J=9.2,5.5Hz,1H, H-4'''),4.85(dd,J=9.2,7.7Hz,1H,H-2'''),4.63(d,J=7.7Hz,1H,H-1'''),4.58(d,J=4.3Hz,1H,H-1''''),4.49(s,1H,H-16),4.27(t,J=6.3Hz,1H,H-4''''),4.22(d,J=6.3Hz,1H,H-5''''),4.18(t,J=6.0Hz,1H,H-3'),4.13(dd,J=11.7,5.4Hz,1H,H-5a '''),4.01(dd,J=6.0,2.0Hz,1H,H-4'),3.87(qd,J=6.5,2.0Hz,1H,H-5'),3.84-3.79(m,2H,H-3,H-5"),3.66(dd,J=7.5,6.3Hz,1H,H-2'),3.64-3.60(m,2H,H-3'''',H-4"),3.57(dd,J=4.3,0.9Hz,1H,H-2''''),3.34(dd,J=11.7,9.3Hz,1H,H-5b '''),2.94(dd,J=14.2,4.0Hz,1H,H-18),2.23(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.06(s,3H),2.03(s,3H),2.00(s,3H,),1.99-1.97(m,4H,H-2,Ac CH 3 ),1.88-1.75(m,5H,H-11ab,H-21a,H-22ab),1.73-1.65(m,2H,H-2a,H-15a),1.63-1.60(m,1H,H-9),1.57-1.55(m,1H,H-1a),1.53(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.47-1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.35(s,3H,H-27),1.34(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.29(d,J=6.5Hz,4H,H-6'),1.27-1.24(m,H-6",H-15b),1.19-1.16(m,2H,H-5,H-6b),1.12(d,J=7.8Hz,1H,H-21b),1.09(s,3H,H-24),1.05(dd,J=12.1,4.0Hz,1H,H-19b),1.01-0.89(m,44H,TES CH 3 ,H-1b,H-7b,H-25,H-30),0.89(s,3H,H-29),0.73(s,3H,H-26),0.69-0.55(m,24H,TES CH 2 )ppm；C97H158O28Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1906.9937，實測值1906.9959。
41α：R f 0.69(EtOAc/己烷=1：1),1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.34(s,1H,H-23),7.37-7.30(m,5H),6.02(d,J=3.7Hz,1H,H-1"),5.39(t,J=3.6Hz,1H,H-12),5.21(dd,J=3.5,1.7Hz,1H,H-2'''),5.16(s,2H,Bn CH 2 ),5.11(t,J=9.0Hz,1H,H-3''''),5.08-5.06(m,2H,H-1''',H-3'''),4.93(td,J=9.0,5.3Hz,1H,H-4''''),4.80(dd,J=9.0,7.4Hz,1H,H-2''''),4.66(d,J=7.4Hz,1H,H-1''''),4.58(d,J=4.4Hz,1H,H-1'),4.56(s,1H,H-16),4.27(t,J=6.3Hz,1H,H-4'),4.21(d,J=6.3Hz,1H,H-5'),4.19(dd,J=8.0,5.1Hz,1H,H-3"),4.13-4.09(dd,J=11.8,5.2Hz,1H,H-5a ''''), 4.06-4.01(m,2H,H-4",H-5"),3.87(dd,J=8.0,3.7Hz,1H,H-2"),3.81(dd,J=11.8,4.7Hz,1H,H-3),3.70-3.64(m,1H,H-5'''),3.63-3.58(m,2H,H-4''',H-3'),3.57(dd,J=4.4,1.1Hz,1H,H-2'),3.35(dd,J=11.8,9.0Hz,1H,H-5b ''''),3.00(dd,J=14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.19(t,J=13.2Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.02(s,3H),2.00-1.97(m,1H,H-2a),1.96(s,3H),1.95-1.83(m,3H,H-22a,H-11ab),1.81-1.65(m,3H,H-21a,H-22b,H-2b),1.62-1.52(m,3H,H-9,H-1a,H-15a),1.51(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.48-1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.35(s,3H,H-27),1.34(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.32(d,J=6.5Hz,3H,H-6"),1.29-1.27(m,4H,H-15b,H-6'''),1.23-1.11(m,3H,H-21b,H-5,H-6b),1.09-1.05(m,4H,H-24,H-19b),1.01(m,TES CH 3 ×3),0.96-0.90(m,35H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH 3 ×9),0.88(s,3H,H-29),0.73(s,3H,H-26),0.67(m,6H,TES CH 2 ×3),0.62-0.54(m,18H,TES CH 2 ×9)ppm；C97H158O28Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1906.9937，實測值1906.9967。
Figure 109118307-A0305-02-0056-39
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β/α-L-吡喃阿拉伯糖基)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(42β/α)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,1.5μL,0.0058mmol)至13(67mg,0.081mmol)、39(65mg,0.054mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(6mL)的經攪拌之懸浮液中。0.5小時後反應完成後，用Et3N淬滅反應，加熱至室溫。所得混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=2/1/5)純化，得到無色漿體狀的101(101β：76mg,75%,101α：15mg,16%)。42β：R f 0.24(EtOAc/CH2Cl2/己烷=2/1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.36(s,1H,H-23),7.39-7.29(m,5H),5.76(d,J=3.8Hz,1H,H-1'),5.35(s,1H,H-12),5.21(s,1H,H-2"),5.19-5.15(m,3H,H-3",Bn CH 2 ),5.13(t,J=9.2Hz,1H,H-3'''),4.97-4.92(m,2H,H-1",H-4'''),4.86(dd,J=9.2,7.6Hz,1H,H-2'''),4.63(d,J=7.6Hz,1H,H-1'''),4.58(d,J=4.2Hz,1H,H-1''''),4.55(s,1H,H-16),4.35(q,J=6.2Hz,1H,H-4'),4.27(t,J=5.8Hz,1H,H-4''''),4.21(d,J=6.3Hz,1H,H-5''''),4.17(t,J=5.4Hz,1H,H-3'),4.12(dd,J=11.5,5.1Hz,1H,H-5a '''),3.85-3.76(m,4H,H-3,H-2',H-5a ',H-5"),3.71(dd,J=11.7,8.2Hz,1H,H-5b '),3.64-3.60(m,2H,H-4",H-3''''),3.57(d,J=4.2Hz,1H,H-2''''),3.33(t,J=10.6Hz,1H,H-5b '''),2.98(d,J=11.8Hz,1H,H-18),2.24(t,J=13.5Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.07(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),2.00-1.97(m,4H,Ac CH 3 ,H-2a),1.89-1.65(m,7H,H-2b,H-11ab,H-15a,H-21a,H-22ab),1.63-1.60(m,1H,H-9),1.56(d,J=13.5Hz,1H,H-1a),1.51(s,3H,CH 3 )1.48-1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.35(s,6H,H-27,CH 3 ),1.27-1.24(m,4H,H-15b,H-6"),1.20-1.12(m,3H,H-5,H-6b,H-21b),1.09(s,3H,H-24),1.06(d,J=13.2Hz,1H,H-19b),1.01-0.90(m,44H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH 3 ),0.89(s,3H,H-29),0.72(s,3H,H-26),0.69-0.53(m,24H)ppm；C96H156O28Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1892.9793，實測值1892.9791。
42α：R f 0.29(EtOAc/CH2Cl2/己烷=2/1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.35(s,1H,H-23),7.39-7.30(m,5H),6.07(d,J=3.3Hz,1H,H-1"),5.39(t,J=3.5Hz,1H,H-12),5.22(dd,J=3.5,1.3Hz,1H,H-2'''),5.16(s,2H,Bn CH 2 ),5.11(t,J=8.9Hz,1H,H-3''''),5.07(dd,J=9.7,3.5Hz,1H,H-3'''),5.05(d,J=1.3Hz,1H,H-1'''),4.94(td,J=8.9,5.3Hz,1H,H-4''''),4.81(dd,J=8.9,7.4Hz,1H,H-2''''),4.67(d,J=7.4Hz,1H,H-1''''),4.58(d,J=4.4Hz,1H,H-1'),4.57(s,1H,H-16),4.27(t,J=5.8Hz,1H,H-4'),4.25-4.20(m,3H,H-3",H-4",H-5'),4.11(dd,J=11.8,5.3Hz,1H,H-5a ''''),4.05-4.01(d,J=13.4Hz,1H,H-5a "),3.91-3.84(m,2H,H-2",H-5b "),3.81(dd,J=11.8,4.6Hz,1H,H-3),3.69(dq,J=9.5,6.1Hz,1H,H-5'''),3.64-3.59(m,2H,H-4''',H-3'),3.57(d,J=4.4Hz,1H,H-2'),3.36(dd,J=11.8,9.1Hz,1H,H-5b ''''),2.99(dd,J=14.4,4.0Hz,1H,H-18),2.20(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),2.14(s,3H),2.04(s,3H),2.03(s,3H),2.02(s,3H),2.00-1.99(m,1H,H-2a),1.97(s,3H),1.95-1.83(m,3H,H-22a,H-11ab),1.81-1.65(m,3H,H-21a,H-22b,H2b),1.65-1.62(m,1H,H-9),1.58-1.53(m,2H,H-1a,H-15a),1.51(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.45-1.40(m,2H,H-6a,H-7a),1.36-1.35(m,6H,H-27，亞異丙基CH 3 ),1.32(dd,J=14.5,1.6Hz,1H,H-15b),1.29(d,J=6.1Hz,3H,H-6'''),1.23-1.15(m,3H,H-5,H-6b,H-21b),1.10-1.05(m,4H,H-19b,H-24),1.04-0.89(m,44H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH 3 ×12),0.88(s,3H,H-29),0.73(s,3H,H-26),0.71-0.54(m,24H,TES CH 2 ×12)ppm；C96H156O28Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1892.9793，實測值1892.9780。
Figure 109118307-A0305-02-0059-40
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基矽烷基刺囊酯(43β)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,7.0μL,0.026mmol)至10(166mg,0.20mmol)、40(158mg,0.13mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(6.5mL)的經攪拌之懸浮液中。0.5小時後反應完成後，用Et3N淬滅反應，加熱至室溫。所得混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=2/1/5)純化，得到無色漿體狀的43β(237mg,96%)。102β：R f 0.23(EtOAc/CH2Cl2/己烷=2/1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 7.37-7.29(m,5H),5.42(d,J=7.5Hz,1H,H-1'),5.34(s,1H,H-12),5.26(dd,J=3.4,1.5Hz,1H,H-2"),5.21(dd,J=9.8,3.4Hz,1H,H-3"),5.16(d,J=3.2Hz,2H,Bn CH 2 ),5.13(t,J=9.3Hz,1H,H-3'''),4.99(d,J=1.5Hz,1H,H-1"),4.95(td,J=9.3,5.4Hz,1H,H-4'''),4.85(dd,J=9.3,7.6Hz,1H,H-2'''),4.77(d,J=4.4Hz,1H,H-1''''),4.64(d,J=7.6Hz,1H,H-1'''),4.50(s,1H,H-16),4.33(dd,J=6.1,5.8Hz,1H,H-4''''),4.26(d,J=6.1Hz,1H,H-5''''),4.18(t,J=6.0Hz,1H,H-3'),4.12(dd,J=11.7,5.4Hz,1H,H-5a '''),4.01(dd,J=6.0,1.8Hz,1H,H-4'),3.89-3.81(m,2H,H-5',H-5"),3.72(d,J=4.4Hz,1H,H-2''''),3.68-3.61(m,3H,H-2',H-3'''',H-4"),3.34(dd,J=11.9,9.3Hz,1H,H-5b '''),3.01(dd,J=11.7,4.3 Hz,1H,H-3),2.93(dd,J=14.2,3.7Hz,1H,H-18),2.23(t,J=13.5Hz,1H,H-19a),2.13(s,3H),2.07(s,3H),2.03(s,3H),2.00(s,3H),1.98(s,3H),1.97-1.93(m,1H,H-2a),1.86-1.76(m,6H,H-11ab,H-22a,H-21a,H-22b),1.76-1.71(m,1H,H-15a),1.67-1.65(m,1H,H-2b),1.54(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.53-1.42(m,4H,H-9,H-1a,H-6a,H-7a),1.34-1.33(m,6H,H-27，亞異丙基CH 3 ),1.31-1.24(m,9H,H-6',H-6",H-6b,H-7b,H-15b),1.11-1.10(m,1H,H-21b),1.07-1.02(m,2H,H-19b),1.01-0.91(m,42H,H-23,H-30,TES CH 3 ),0.89(s,3H,H-25),0.88(s,5H,H-29),0.79(s,3H,H-24),0.73(s,3H,H-26),0.70-0.55(m,25H,H-5,TES CH 2 )ppm；C97H160O27Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1893.0144，實測值1893.0150。
Figure 109118307-A0305-02-0060-41
3-O-(苄基2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯)-28-O-(2,3,4,6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4))-2-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(44β)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,2.0μL,0.0076mmol)至22(22mg,0.019mmol)、39(23mg,0.019mmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(1mL)中經攪拌的懸浮液中。0.5小時後反應完成後，加入飽和NaHCO3以淬滅反應，加熱至室溫。所得混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3、 鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在減壓下濃縮。殘留物以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=4/1/7)純化，得到無色漿體狀的103(44β：19mg,46%；44α：2mg,5%)。44β：R f 0.60(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.36(s,1H,H-23),7.38-7.30(m,5H),5.39(d,J=7.3Hz,1H,H-1'),5.32(t,J=3.6Hz,1H,H-12),5.17(dd,J=3.5,1.8Hz,1H,H-2"),5.16(d,J=1.8Hz,2H,Bn CH 2 ),5.15-5.09(m,3H,H-3''',H-4''',H-3''''),5.02(m,J=7.8Hz,1H,H-2'''),4.95(d,J=1.8Hz,1H,H-1"),4.91(td,J=8.0,4.9Hz,1H,H-4''''),4.85-4.81(m,2H,H-2'''',H-1''''),4.68(d,J=7.8Hz,1H,H-1'''),4.58(d,J=4.4Hz,1H,H-1'''''),4.47(s,1H,H-16),4.28-4.25(m,2H,H-4''''',H-6a '''),4.21(d,J=6.3Hz,1H,H-5'''''),4.16(t,J=6.0Hz,1H,H-3'),4.14-4.09(m,2H,H-6b ''',H-5a ''''),4.03(dd,J=6.0,1.9Hz,1H,H-4'),3.99(dd,J=9.4,3.5Hz,1H,H-3"),3.86(qd,J=6.5,1.9Hz,1H,H-5'),3.81(dd,J=11.8,4.6Hz,1H,H-3),3.76(t,J=9.4Hz,1H,H-4"),3.71-3.62(m,3H,H-5",H-2',H-5'''),3.61(dd,J=5.4,1.2Hz,1H,H-3'''''),3.57(dd,J=4.4,1.2Hz,1H,H-2'''''),3.40(dd,J=11.9,8.1Hz,1H,H-5b ''''),2.91(dd,J=14.4,4.2Hz,1H,H-18),2.22(t,J=13.5Hz,1H,H-19a),2.18(s,3H),2.11(s,3H),2.09(s,6H),2.04(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),2.00(s,3H),1.99-1.97(m,1H,H-2a),1.87-1.84(m,2H,H-11ab),1.80(s,3H,H-21a,H-22ab),1.70-1.68(m,2H,H-2b,H-15a),1.59-1.56(m,2H,H-9,H-1a),1.54(s,3H,亞異丙基CH 3 ),1.45-1.41(m,2H,H-6b,H-7a),1.34(s,6H,H-27，亞異丙基CH 3 ),1.28(d,J=6.5Hz,3H,H-6'),1.26-1.24(m,1H,H-15b),1.22(d,J=6.1Hz,3H,H-6"),1.18-1.16(m,2H,H-5,H-6b),1.13-1.11(m,1H,H-21b),1.08(s,3H,H-24),1.06-1.02(m,1H,H-19b),1.00-0.92(m,44H,H-1b,H-7b,H-25,H-30,TES CH 3 ),0.88(s,3H,H-29),0.74(s,3H,H-26),0.68-0.55(m,24H,TES CH 2 )ppm；C109H174O36Si4Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值2195.0788，實測值2195.0785。
形成醯胺鍵的通用步驟：
Figure 109118307-A0305-02-0062-42
在室溫和H2氣體環境(氣球)下攪拌苄酯原料(1當量)和10% Pd/C(10% w/v)在THF(50mM)中的懸浮液。將反應混合物攪拌12至24小時。將得到的混合物透過矽藻土過濾，濃縮，然後在減壓下乾燥以提供粗製酸中間體。在室溫和N2氣體環境下添加烷基胺(3當量)於粗製酸中間體、HBTU(3當量)和DIPEA(3當量)在無水CH2Cl2(50mM)中經攪拌的溶液中。將反應混合物攪拌4小時。將所得混合物濃縮，然後以管柱層析法(矽膠，EtOAc/CH2Cl2/己烷=2/1/5至1/1/2)純化，得到醯胺產物，二步驟產率為61-95%。
在一些實施例中，在氫解條件下將矽烷基隨機去保護，使隨後的醯胺偶合步驟產生不可分離的混合物。因此，透過短管柱(二氧化矽，EtOAc/CH2Cl2/己烷=1/1/2)過濾後，將混合物直接進行整體去保護步驟而無結構示性。
整體去保護的通用步驟：
Figure 109118307-A0305-02-0062-43
在0℃下向原料的CH2Cl2(10mM)溶液中添加預冷的TFA/H2O=4/1溶液(相對於CH2Cl2為50% v/v)，並攪拌30分鐘。在0℃和減壓(<1托)下將溶劑蒸發，然後在室溫和高真空下乾燥1小時。添加K2CO3(20當量)至殘留物的MeOH(10mM)溶液中，並在室溫下攪拌12小時。將懸浮液離心，然後透過HPLC純化液體(HPLC管柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；移動相：20分鐘內由20% ACN/H2O升至90% ACN/H2O之梯度，然後90% ACN/H2O等度(isocratic)15分鐘；流速：5mL/min)，以30-75%的二步收率得到產物。
Figure 109118307-A0305-02-0063-44
3-O-(N-((十二烷基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(46)
按照整體去保護的通用步驟，以68%的產率得到白色固體狀的46：[α]D 20-68.0(c 0.15,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.43(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),5.41(d,J=1.7Hz,1H,H-1"),5.31(t,J=3.5Hz,1H,H-12),5.28(d,J=8.2Hz,1H,H-1'),4.49-4.48(m,2H,H-1''',H-16),4.26(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.92-3.79(m,6H,H-2",H-3,H-5''',H-3",H-2',H-5"),3.69-3.64(m,3H,H-5',H-3',H-5''''),3.57-3.53(m,2H,H-4',H-4"),3.49-3.42(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3-30(m,2H,H-3''',H-3''''),3.28-3.26(m,1H,-NHCH a -),3.24-3.17(m,3H,-NHCH b -,H-2''',H-5'''),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.1,4.3 Hz,1H,H-18),2.30(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.97-1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84-1.64(m,5H,H-2b,H-22b,H-9,H-1a,H-15a),1.58-1.48(m,4H,H-6a,H-7a，碳鏈CH 2 ),1.45(dd,J=14.8,2.7Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37-1.27(m,23H,H-5,H-6b,H-6"，碳鏈CH 2 ×9),1.22(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.19-1.16(m,1H,H-21b),1.14(s,3H,H-24),1.12-1.09(m,1H,H-1b),1.07-1.04(m,1H,H-19b),1.02(s,3H,H-25),0.98-0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.91(t,J=7.0Hz,3H，碳鏈CH 3 ),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,144.9(C-13),123.1(C-12),107.0(C-1'''),105.1(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),84.0(C-4"),83.5(C-3),78.2(C-3'''),77.6(C-3''''),76.7(C-3'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.2(C-4''''),72.7(C-5"),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.8(C-5'),67.3(C-5'''),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.1(碳鏈CH2),39.5(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),33.1(碳鏈CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.9(碳鏈CH2),30.9(碳鏈CH2),30.8(碳鏈CH2),30.8(碳鏈CH2),30.6(碳鏈CH2),30.5(碳鏈CH2),30.3(碳鏈CH2),28.0(碳鏈CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),23.8(碳鏈CH2),21.6(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-6'),16.4(C-25),14.5(碳鏈CH3),10.6(C-24)ppm；C65H107NO22Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1276.7177，實測值1276.7209。
Figure 109118307-A0305-02-0065-45
3-O-(N-(甲基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(47)
按照整體去保護的通用步驟，以36%的產率獲得白色固體狀的47：[α]D 20-26.8(c 0.22,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.52(s,1H，醯胺NH),5.40(d,J=1.7Hz,1H,H-1"),5.31(t,1H,J=3.5Hz,H-12),5.28(d,J=8.2Hz,1H,H-1'),4.49-4.47(m,2H,H-1''',H-16),4.24(d,J=7.9Hz,1H,H-1''''),3.90(dd,J=3.3,1.7Hz,1H,H-2"),3.89-3.79(m,5H,H-3,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.69-3.64(m,3H,H-5',H-3',H-5''''),3.56-3.53(m,2H,H-4',H-4"),3.46(ddd,J=10.4,8.8,5.4Hz,1H,H-4'''),3.41(t,J=9.1Hz.1H,H-4''''),3.33-3.30(m,2H,H-3''',H-3'''')3.23-3.17(m,2H,H-2''',H-5b '''),3.13(dd,J=9.2,7.9Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.6,4.1Hz,1H,H-18),2.80(s,3H,-NHCH 3 ),2.30(t,J=13.7Hz,1H,H-19a),1.94-1.91(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.81-1.66(m,5H,H-2b,H-22b,H-9,H-1a,H-15a),1.55-1.43(m,3H,H-6a,H-7a,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.35-1.31(m,5H,H-5,H-6b,H-6"),1.22(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.18(d,J=10.3,2.5Hz,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.10(dd,J=13.2,4.02Hz,1H,H-1b),1.05(dd,J=13.4,3.5Hz,1H,H-19b),1.02(s,3H,H-25),0.97-0.95(m,4H,H-7b,H-30),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.3(C-23),177.2(C-28),172.3,144.8(C-13),123.2(C-12),107.0(C-1'''),104.8(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),84.1(C-4"),83.3(C-3),78.2(C-3'''),77.5(C-3''''),76.7(C-3'),76.5(C-5''''), 76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.4(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.8(C-5"),67.3(C-5'''),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),39.3(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),32.0(C-22),31.3(C-20),27.2(C-27),26.2(-NHCH3),25.8(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.5(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-6'),16.3(C-25),10.5(C-24)ppm；C54H86NO22[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1100.5636，實測值1100.5667。
Figure 109118307-A0305-02-0066-46
3-O-(N-(己基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(48)
按照整體去保護的通用步驟，以45%的產率得到白色固體狀的48：[α]D 20-17.35(c 0.34,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),5.40(d,J=1.6Hz,1H,H-1"),5.31(t,J=3.4Hz,1H,H-12),5.28(d,J=8.2Hz,1H,H-1'),4.49-4.48(m,2H,H-16,H-1'''),4.26(d,J=7.9Hz,1H,H-1''''),3.92-3.77(m,6H,H-2",H-3,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.70-3.62(m,3H,H-5',H-3',H-5''''),3.56-3.53(m,2H,H-4',H-4"),3.49-3.41(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3.30(m,2H,H-3''',H-3''''),3.29-3.17(m,4H,-NHCH 2 -,H-2''',H-5b '''),3.14(dd,J=9.2,7.9Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.1,4.0Hz,1H,H-18),2.30(t,J=13.8Hz,1H,H-19a),1.96-1.90(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84-1.64(m,5H,H-2b,H-22b,H-9,H-1a,H-15a),1.55-1.49(m,4H,H-6a,H-7a，碳鏈CH 2 ),1.45(dd,J=14.8,2.7Hz, 1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.36-1.29(m,13H,H-5,H-6b,H-6"，碳鏈CH 2 ×4),1.22(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.18-1.17(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.12-1.09(m,1H,H-1b),1.05(dd,J=12.6,3.0Hz,1H,H-19b),1.01(s,3H,H-25),0.95(s,4H,H-7b,H-30),0.92(t,J=7.0Hz,3H，碳鏈CH 3 ),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.3(C-23),177.2(C-28),171.5,144.8(C-13),123.2(C-12),106.9(C-1'''),104.9(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),84.0(C-4"),83.3(C-3),78.2(C-3'''),77.6(C-3''''),76.7(C-3'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.1(C-2'),73.6(C-4'),73.2(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.8(C-5"),67.3(C-5'''),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9,C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.1(碳鏈CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),32.8(碳鏈CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.3(碳鏈CH2),27.6(碳鏈CH2),27.2(C-27),25.9(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),23.8(碳鏈CH2),21.5(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-6'),16.3(C-25),14.5(碳鏈CH3),10.6(C-24)ppm；C59H96NO22[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1170.6418，實測值1170.6448。
Figure 109118307-A0305-02-0067-47
3-O-(N-(十八烷基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(49)
按照整體去保護的通用步驟(HPLC管柱：Alltima C8 150mm×4.6mm，5μm，流速：1mL/min)，以30%的產率得到白色固體狀的49：[α]D 20-27.4(c 0.27,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.43(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),5.41(d,J=1.6Hz,1H,H-1"),5.31(t,J=3.4Hz,1H,H-12),5.28(d,J=8.2Hz,1H,H-1'),4.49(d,J=7.6Hz,2H,H-16,H-1'''),4.26(d,J=7.9Hz,1H,H-1''''),3.92-3.77(m,6H,H-2",H-3,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.69-3.63(m,3H,H-5',H-3',H-5''''),3.57-3.53(m,2H,H-4',H-4"),3.49-3.41(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3.27(m,3H,H-3''',H-3'''',-NHCH a -),3.24-3.17(m,3H,H-2''',H-5b ''',-NHCH b -),3.14(dd,J=9.2,7.9Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.30(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.98-1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H21a,H-22a),1.84-1.64(m,5H,H-2b,H-9,H-22b,H-1a,H-15a),1.55-1.49(m,4H,H-6a,H-7a，碳鏈CH 2 ),1.45(dd,J=14.8,2.5Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37-1.25(m,35H,H-5,H-6b,H-6"，碳鏈CH 2 ×15),1.22(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.20-1.15(m,1H,H-21b),1.14(s,3H,H-24),1.13-1.08(m,1H,H-1b),1.06(dd,J=12.6,3.0Hz,1H,H-19b),1.02(s,3H,H-25),0.97-0.95(m,4H,H-7b,H-30),0.90(t,J=7.0Hz,3H，碳鏈CH 3 ),0.88(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,144.9(C-13),123.1(C-12),107.0(C-1'''),105.1(C-1''''),101.1(C-1"),95.7(C-1'),84.0(C-4"),83.5(C-3),78.2(C-3'''),77.6(C-3''''),76.7(C-3'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.2(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.7(C-5"),67.3(C-5'''),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.3(C-18),41.1(C-8),40.0(碳鏈CH 2 ),39.5(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),33.6(C-6),33.4(C-29),33.1(碳鏈CH 2 ),32.0(C-22),31.4(C-20),30.9(碳鏈CH 2 ),30.9(碳鏈CH 2 ),30.8(碳鏈CH 2 ),30.8(碳鏈 CH 2 ),30.6(碳鏈CH 2 ),30.5(碳鏈CH 2 ),30.3(碳鏈CH 2 ),28.0(碳鏈CH 2 ),27.2(C-27),26.0(C-2),24.9(C-30),24.5(C-11),23.8(碳鏈CH 2 ),21.6(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-6'),16.4(C-25),14.5(碳鏈CH 3 ),10.6(C-24)ppm；C71H120NO22[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1338.8297，實測值1338.3327。
Figure 109118307-A0305-02-0069-48
3-O-(N-(8-(4-甲氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(53)
按照整體去保護的通用步驟，以54%的產率得到白色固體狀的53：[α]D 20-123.3(c 0.06,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.07(d,J=8.7Hz,2H),6.82(d,J=8.7Hz,2H),5.41(d,J=1.8Hz,1H,H-1"),5.30-5.27(m,2H,H-12,H-1'),4.49-4.48(m,2H,H-16,H-1'''),4.26(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.91(dd,J=3.3,1.8Hz,1H,H-2"),3.90-3.79(m,5H,H-3,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.76(s,3H,OCH 3 ),3.69-3.66(m,2H,H-5',H-3'),3.64(d,J=9.7Hz,1H,H-5''''),3.58-3.53(m,2H,H-4',H-4"),3.49-3.42(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3-30(m,2H,H-3''',H-3''''),3.28-3.25(m,1H,-NHCH a -),3.24-3.17(m,3H,H-2''',H-5b ''',-NHCH b -),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.54(t,J=7.4Hz 2H，碳鏈CH 2 Ph),2.30(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.97-1.88(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84-1.72(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.71-1.66m,2H,H-1a,H-15a),1.62-1.47(m,6H，碳鏈CH 2 ×2,H-6a,H-7a), 1.47-1.43(m,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37-1.30(m,13H,H-5,H-6b,H-6"，碳鏈CH 2 ×4),1.22(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.18-1.16(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.10-1.08(m,1H,H-1b),1.05(dd,J=12.1,3.6Hz,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.97-0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.87(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,159.2,144.8(C-13),135.9,130.3,123.1(C-12),114.8,107.0(C-1'''),105.0(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),84.0(C-4"),83.5(C-3),78.2(C-3'''),77.6(C-3''''),76.7(C-3'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.2(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.8(C-5"),67.3(C-5'''),56.1(C-4),55.7(OCH3),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-19),48.0(C-9),42.8(C-14),42.3(C-18),41.1(C-8),40.0(碳鏈CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.7(碳鏈CH2),33.6(C-6),33.4(C-29),33.0(碳鏈CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.7(碳鏈CH2),30.5(碳鏈CH2),30.3(碳鏈CH2),30.2(碳鏈CH2),27.9(碳鏈CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.6(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-6'),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C68H106NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1326.6970，實測值1326.6978。
Figure 109118307-A0305-02-0070-49
3-O-(N-(8-(4-氟苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(54)
按照整體去保護的通用步驟，以56%的產率獲得白色固體狀的54：[α]D 20-28.3(c 0.18,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.17(dd,J=8.8,5.4Hz,2H),6.98(t,J=8.8Hz,2H),5.41(d,J=1.7Hz,1H,H-1"),5.29-5.27(m,2H,H-12,H-1'),4.49-4.48(m,2H,H-16,H-1'''),4.26(d,J=7.9Hz,1H,H-1''''),3.92-3.78(m,6H,H-2",H-3,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.70-3.63(m,3H,H-5',H-3',H-5''''),3.57-3.52(m,2H,H-4',H-4"),3.48-3.41(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3.30(m,2H,H-3''',H-3''''),3.28-3.25(m,1H,-NHCH a -),3.24-3.16(m,3H,H-2''',H-5b ''',-NHCH b -),3.13(dd,J=9.2,7.9Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.3,4.5Hz,1H,H-18),2.59(t,J=7.6Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.29(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.96-1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83-1.72(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.72-1.64(m,2H,H-1a,H-15a),1.63-1.58(m,2H，碳鏈CH 2 ),1.56-1.48(m,4H,H-6a,H-7a),1.45(dd,J=14.9,2.6Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.36-1.31(m,13H,H-5,H-6b,H-6"，碳鏈CH 2 ×4),1.22(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.18-1.16(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.11-1.08(m,1H,H-1b),1.05-1.03(m,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.96-0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.86(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,162.6(J=241Hz),144.9(C-13),139.8,130.9(J=8Hz),123.1(C-12),115.8(J=21Hz),107.0(C-1'''),105.0(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),84.0(C-4"),83.4(C-3),78.2(C-3"'),77.6(C-3''''),76.7(C-3'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.2(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.8(C-5"),67.3(C-5'''),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0(碳鏈CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.1(碳鏈CH2),33.6(C-6),33.4(C-29),32.9(C-),32.0(C-22), 31.3(C-20),30.7(碳鏈CH2),30.5(碳鏈CH2),30.3(碳鏈CH2),30.3(碳鏈CH2),30.2(碳鏈CH2),27.9(碳鏈CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.5(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-)6',16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C67H102FNO22Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1314.6770，實測值1314.6794。
Figure 109118307-A0305-02-0072-50
3-O-(N-(8-(4-氟苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(55)
按照整體去保護的通用步驟，以75%的產率得到白色固體狀的55：[α]D 20-32.5(c 0.24,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.29(d,J=8.3Hz,2H),7.08(d,J=8.3Hz,2H),5.41(d,J=1.7Hz,1H,H-1"),5.31(t,J=3.6Hz,1H,H-12),5.29(d,J=8.2Hz,1H,H-1'),4.49-4.48(m,2H,H-1''',H-16),4.26(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.91-3.78(m,6H,H-2",H-3,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.69-3.63(m,3H,H-5',H-3',H-5''''),3.57-3.53(m,2H,H-4',H-4"),3.48-3.42(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3.30(m,2H,H-3''',H-3''''),3.29-3.25(m,1H,-NHCH a -),3.23-3.17(m,3H,H-2''',H-5b ''',-NHCH a -),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.5,4.3Hz,1H,H-18),2.57(m,J=7.6Hz,2H,碳鏈CH 2 Ph),2.30(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.97-1.89(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83-1.72(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.72-1.64(m,2H,H-1a,H-15a),1.63-1.57(m,2H，碳鏈CH 2 ),1.56-1.47(m,4H,H-6a,H-7a，碳鏈CH 2 ),1.47-1.43(m,1H, H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.36-1.28(m,22H,H-5,H-6b,H-6"，碳鏈CH 2 ×4,tBu CH 3 ×3),1.22(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.19-1.15(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.11-1.08(m,1H,H-1b),1.08-1.03(m,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.96-0.94(m,4H,H-7b,H-30),0.86(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.2(C-23),177.2(C-28),171.5,149.5,144.8(C-13),140.8,129.1,126.1,123.1(C-12),107.0(C-1'''),105.0(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),84.1(C-4"),83.5(C-3),78.2(C-3'''),77.6(C-3''''),76.7(C-3'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.2(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.8(C-5"),67.1(C-5'''),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0(碳鏈CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.4(C-15,C-21，碳鏈CH2),35.2(tBu 4℃),33.6(C-6),33.4(C-29),32.8(碳鏈CH2),31.9(C-22,tBu CH3×3),31.3(C-20),30.7(碳鏈CH2),30.5(碳鏈CH2),30.4(碳鏈CH2),30.2(碳鏈CH2),27.9(碳鏈CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.6(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-6'),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C71H111NO22Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1352.7490，實測值1352.7515。
Figure 109118307-A0305-02-0073-51
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(56)
按照整體去保護的通用步驟，得到白色固體狀的56，產率為46%：[α]D 20-71.4(c 0.07,MeOH)；1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.32(dd,J=8.6,7.5Hz,2H),7.17(dd,J=8.6,1.0Hz,2H),7.07(tt,J=7.5,1.0Hz,1H),6.95(d,J=8.6Hz,2H),6.91(d,J=8.6Hz,2H),5.41(d,J=1.7Hz,1H,H-1"),5.30(s,1H,H-12),5.27(d,J=8.2Hz,1H,H-1'),4.49-4.47(m,2H,H-16,H-1'''),4.26(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.91-3.79(m,6H,H-2",H-3,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.67-3.63(m,3H,H-5',H-3',H-5''''),3.56-3.53(m,2H,H-4',H-4"),3.49-3.42(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3.25(m,3H,H-3''',H-3'''',-NHCH a -),3.23-3.17(m,3H,H-2''',H-5b ''',-NHCH b -),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H,H-2''''),2.94(dd,J=14.2,4.4Hz,1H,H-18),2.60(t,J=7.5Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.29(t,J=13.1Hz,1H,H-19a),1.98-1.87(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.82-1.76(m,3H,H-2b,H-9,H-22b),1.71-1.65(m,2H,H-1a,H-15a),1.64-1.60(m,2H，碳鏈CH 2 ),1.56-1.48(m,4H,H-6a,H-7a),1.45(dd,J=14.9,2.6Hz,1H,H-15b),1.40(s,3H,H-27),1.37-1.31(m,13H,H-5,H-6b,H-6"，碳鏈CH 2 ),1.21(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.18-1.15(m,1H,H-21b),1.13(s,3H,H-24),1.11-1.08(m,1H,H-1b),1.06-1.03(m,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.97-0.93(m,4H,H-7b,H-30),0.85(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.2(C-23),177.1(C-28),171.5,159.2,156.5,144.9(C-13),139.2,130.8,130.7,124.0,123.1(C-12),120.0,119.4,107.0(C-1'''),105.0(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),84.1(C-4"),83.5(C-3),78.2(C-3'''),77.6(C-3''''),76.7(C-3'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.7(C-2''''),74.6(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.2(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.7(C-5"),67.3(C-5'''),56.1(C-4),50.0(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0(碳鏈CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.2 (碳鏈CH2),33.6(C-6),33.4(C-29),32.9(碳鏈CH2),32.0(C-22),31.3(C-20),30.7(碳鏈CH2),30.5(碳鏈CH2),30.4(碳鏈CH2),30.3(碳鏈CH2),27.9(碳鏈CH2),27.2(C-27),26.0(C-2),24.8(C-30),24.5(C-11),21.6(C-7),18.3(C-6"),17.7(C-26),16.5(C-6'),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C73H107NO23Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1388.7126，實測值1388.7172。
Figure 109118307-A0305-02-0075-52
3-O-(N-(4-苯氧基苯-1-基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(57)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的57，產率為23%：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.45(s,1H),8.55(s,1H),7.61(d,J=8.9Hz,2H),7.34(t,J=7.7Hz,2H),7.09(t,J=7.1Hz,1H),7.00-6.95(m,4H),5.41(d,J=1.6Hz,1H),5.30(t,J=3.6Hz,1H),5.28(d,J=8.2Hz,1H),4.50-4.47(m,2H),4.32(d,J=7.8Hz,1H),3.93(dd,J=11.8,4.6Hz,1H),3.90(dd,J=3.2,1.8Hz,1H),3.87-3.77(m,5H),3.67-3.65(m,2H),3.60-3.53(m,3H),3.46(ddd,J=10.4,9.0,5.4Hz,1H),3.36(t,J=9.0Hz,1H),3.33-3.30(m,1H)3.24-3.17(m,3H),2.93(dd,J=14.4,4.3Hz,1H),2.29(t,J=13.6Hz,1H),2.00-1.90(m,5H),1.86-1.64(m,5H),1.61-1.48(m,2H),1.45(dd,J=14.8,2.6Hz,1H),1.39(s,3H),1.37-1.33(m,2H),1.31(d,J=6.2Hz,3H),1.21(d,J=6.4Hz,3H),1.20-1.16(m,1H),1.15(s,3H),1.13-1.08(m,1H),1.06-1.02(m,1H),1.01(s,3H),0.97-0.94(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ 209.4,177.2,170.3,169.4,159.0,155.2,144.7,134.8, 130.9,124.3,123.2,120.3,119.5,106.9,105.2,101.1,95.2,84.0,83.4,78.2,77.6,77.6,77.6,76.7,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.0,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.2,50.0,49.6,48.0,48.0,42.8,42.3,41.1,39.3,37.1,36.5,36.5,36.5,33.4,32.0,31.3,27.2,24.8,21.6,18.3,17.7,16.5,16.3,10.6ppm；C65H92NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1254.6055，實測值1254.6060。
Figure 109118307-A0305-02-0076-53
3-O-(N-(2-(4-苯氧基苯-1-基)乙基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(58)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的58，產率為58%：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.40(s,1H),8.55(s,1H),7.33(dd,J=8.5,7.5Hz,2H),7.23(d,J=8.5Hz,2H),7.09(t,J=7.5Hz,1H),6.95(d,J=8.5Hz,2H),6.93(d,J=8.6Hz,2H),5.41(d,J=1.7Hz,1H),5.30-5.27(m,2H),4.50-4.47(m,2H),4.23(d,J=7.9Hz,1H),3.91(dd,J=3.2,1.7Hz,1H),3.87-3.77(m,5H),3.70-3.65(m,2H),3.63(d,J=9.7Hz,1H),3.57-3.50(m,3H),3.50-3.43(m,2H),3.40(t,J=9.3Hz,1H),3.33-3.29(m,2H),3.23-3.17(m,2H),3.11(dd,J=9.2,7.9Hz,1H),2.94(dd,J=14.3,4.1Hz,1H),2.83(t,J=6.8Hz,2H),2.30(t,J=13.6Hz,1H),1.98-p1.79(m,8H),1.77(dd,J=13.8,4.3Hz,1H),1.74-1.64(m,4H),1.58-1.41(m,3H),1.39(s,3H),1.35(d,J=11.7Hz,1H),1.34-1.28(m,5H),1.22(d,J=6.4Hz,3H),1.18(d,J=12.8Hz,1H),1.11(s,3H),1.08-1.02(m,2H),0.97(s,3H),0.96-0.92(m,4H),0.89(s,3H),0.76(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.3,177.2,171.7,159.0,157.0, 144.7,135.6,131.3,130.9,124.2,123.2,120.2,119.5,106.9,104.9,101.1,95.2,84.0,83.5,78.2,77.5,76.7,76.4,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.4,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.0,48.0,42.8,42.3,41.5,41.1,39.4,37.0,36.5,36.5,35.4,33.6,33.4,32.0,31.3,27.2,25.9,24.8,24.6,21.5,18.3,17.7,16.5,16.3,10.6ppm；C67H96NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1282.6368，實測值1282.6370。
Figure 109118307-A0305-02-0077-54
3-O-(N-(16-(4-苯氧基苯-1-基)十六烷基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(59)
按照整體去保護的通用步驟(HPLC管柱：Alltima C8 150mm×4.6mm，5μm，流速：1mL/min)，獲得白色固體狀的59，產率為34%：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.42(s,1H),8.55(s,1H),7.32(dd,J=8.5,7.5Hz,2H),7.16(d,J=8.5Hz,2H),7.07(t,J=7.5Hz,1H),6.94(d,J=8.5Hz,2H),6.89(d,J=8.5Hz,2H),5.41(d,J=1.6Hz,1H),5.31(brs,1H),5.28(d,J=8.2Hz,1H),4.50-4.47(m,2H),4.26(d,J=7.8Hz,1H),3.92-3.78(m,6H),3.68-3.63(m,3H),3.57-3.53(m,2H),3.48-3.42(m,2H),3.35-3.27(m,3H),3.24-3.16(m,3H),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H),2.97-2.92(m,1H),2.60(t,J=7.7Hz,2H),2.30(t,J=13.6Hz,1H),1.97-1.90(m,5H),1.83-1.65(m,5H),1.63-1.59(m,2H),1.56-1.43(m,5H),1.40(s,3H),1.38-1.27(m,29H),1.21(d,J=6.4Hz,3H),1.17(d,J=12.6Hz,1H),1.13(s,3H),1.09(d,J=13.4Hz,1H),1.07-1.03(m,1H),1.01(s,3H),0.97-0.92(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)； BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ 209.2,177.1,171.5,159.2,156.4,144.9,139.3,130.8,130.7,124.0,123.1,112.0,119.4,106.9,105.1,101.1,95.2,84.0,83.5,78.2,77.8,76.7,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,73.9,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.2,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,37.1,36.5,36.5,36.2,33.6,33.4,32.8,31.4,30.9,30.9,30.9,30.8,30.8,30.7,30.7,30.6,30.6,30.5,30.3,28.0,27.2,26.0,24.9,24.5,21.6,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C81H124NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1478.8559，實測值1478.8560。
Figure 109118307-A0305-02-0078-55
3-O-(N-(8-(4-(4-氟苯氧基)苯-1-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(60)
按照醯胺鍵形成和整體去保護的通用步驟，得到白色固體狀的60，產率為40%：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.42(s,1H),7.16(d,J=8.5Hz,2H),7.09-7.04(m,2H),6.99-6.95(m,2H),6.88(d,J=8.5Hz,2H),5.41(d,J=1.6Hz,1H),5.29-5.27(m,2H),4.50-4.48(m,2H),4.26(d,J=7.8Hz,1H),3.92-3.77(m,6H),3.67-3.63(m,3H),3.57-3.52(m,2H),3.48-3.43(m,2H),3.33-3.30(m,2H),3.29-3.26(m,1H),3.23-3.17(m,3H),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H),2.93(dd,J=14.3,4.1Hz,1H),2.60(t,J=7.6Hz,2H),2.29(t,J=13.6Hz,1H),1.97-1.88(m,5H),1.83-1.64(m,5H),1.63-1.59(m,2H),1.57-1.48(m,4H),1.45(dd,J=14.7,2.4Hz,1H),1.39(s,3H), 1.38-1.30(m,13H),1.21(d,J=6.4Hz,3H),1.19-1.15(m,1H),1.13(s,3H),1.11-1.07(m,1H),1.04(dd,J=13.6,3.7Hz,1H),0.99(s,3H),0.96(d,J=11.6Hz,1H),0.92(s,3H),0.85(s,3H),0.76(s,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ 209.2,177.1,171.5,160.8,159.2,156.9,155.1,144.9,139.1,130.8,123.1,121.2,121.2,119.5,117.3,117.1,106.9,105.1,101.0,95.2,84.0,83.5,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,73.9,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,36.2,33.6,33.4,32.9,32.0,31.3,30.7,30.5,30.4,30.2,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C73H107FNO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1384.7212，實測值1384.7224。
Figure 109118307-A0305-02-0079-56
3-O-(N-(8-(4-羥基苯-1-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(61)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的61，產率為23%：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.42(s,1H),8.55(s,1H),6.97(d,J=8.5Hz,2H),6.69(d,J=8.5Hz,2H),5.41(d,J=1.7Hz,1H),5.30(t,J=3.1Hz,1H),5.29(d,J=8.2Hz,1H),4.49(d,J=7.7Hz,2H),4.26(d,J=7.8Hz,1H),3.93-3.77(m,6H),3.69-3.63(m,3H),3.58-3.52(m,2H),3.49-3.41(m,2H),3.33-3.25(m,3H),3.24-3.16(m,3H),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H),2.94(dd,J=14.2,4.2Hz,1H),2.50(t,J=7.5Hz,2H),2.30(t,J=13.6Hz,1H),1.98-1.88(m,5H),1.83-1.64(m,5H),1.60-1.48(m,6H), 1.47-1.43(m,1H),1.40(s,3H),1.37-1.27(m,13H),1.22(d,J=6.4Hz,3H),1.18-1.16(m,1H),1.13(s,3H),1.11-1.03(m,2H),1.00(s,3H),0.96-0.95(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ 209.2,177.2,171.5,156.3,144.8,134.8,130.3,123.2,116.1,106.9,105.0,101.1,95.2,84.0,83.4,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,36.1,33.6,33.4,33.1,32.0,31.3,30.7,30.5,30.3,30.3,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C67H104NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1290.6994，實測值19690.7008。
Figure 109118307-A0305-02-0080-57
3-O-(N-(8-(4-嗎啉基苯-1-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(62)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的62，產率為43%：1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H),8.55(s,1H),7.07(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),5.41(d,J=1.1Hz,1H),5.31-5.27(m,2H),4.49(d,J=7.6Hz,1H),4.48(brs,1H)4.26(d,J=7.8Hz,1H),3.92-3.90(m,1H),3.89-3.77(m,9H),3.69-3.63(m,3H),3.57-3.52(m,2H),3.49-3.42(m,2H),3.33-3.26(m,3H),3.24-3.16(m,3H),3.13(dd,J=9.2,7.8Hz,1H),3.11-3.08(m,4H),2.94(dd,J=14.3,4.0Hz,1H),2.53(t,J=7.6Hz,2H),2.29(t,J=13.6Hz,1H),1.98-1.86(m,5H),1.82-1.63(m,5H), 1.62-61.47(m,6H),1.47-1.43(m,1H),1.40(s,3H),1.37-1.29(m,13H),1.22(d,J=6.4Hz,3H),1.17(d,J=13.4Hz,1H),1.13(s,3H),1.11-1.02(m,2H),0.99(s,3H),0.96-0.94(m,4H),0.87(s,3H),0.76(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ 209.2,177.1,171.5,150.9,144.8,135.9,130.0,123.1,117.4,106.9,105.1,101.1,95.1,84.0,83.6,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,68.0,67.3,56.1,51.4,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,36.1,33.6,33.4,33.0,32.0,31.3,30.8,30.5,30.3,30.2,27.9,27.2,26.0,24.9,24.1,21.5,18.3,17.8,16.5,16.4,10.6ppm；C71H111N2O23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1359.7572，實測值1359.7580。
Figure 109118307-A0305-02-0081-58
3-O-(N-(8-(呋喃-2-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(66)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的66，產率為23%：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.42(s,1H),8.55(s,1H),7.33(d,J=1.1Hz,1H),6.30-6.26(m,1H),5.99(d,J=3.1Hz,1H),5.41(d,J=1.4Hz,1H),5.30-5.27(m,2H),4.50-4.47(m,2H),4.26(d,J=7.8Hz,1H),3.93-3.76(m,6H),3.71-3.62(m,3H),3.58-3.50(m,2H),3.48-3.42(m,2H),3.33-3.25(m,3H),3.23-3.16(m,3H),3.13(dd,J=9.0,7.8Hz,1H),2.94(dd,J=14.3,4.2Hz,1H),2.62(d,J=7.5Hz,2H),2.31(d,J=13.4Hz,1H),1.99-1.87(m,5H),1.84-1.59(m,7H),1.59-1.48(m,4H),1.45(dd,J=14.8,2.5 Hz,1H),1.40(s,3H),1.37-1.30(m,13H),1.22(d,J=6.4Hz,3H),1.18(d,J=11.0Hz,1H),1.13(s,3H),1.12-1.08(m,1H),1.07-1.03(m,1H),1.01(s,3H),0.97-1.94(m,4H),0.87(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(151MHz,CD3OD)δ 209.2,177.2,171.5,157.5,144.8,141.9,123.2,111.0,106.9,105.7,105.0,101.1,95.2,84.0,83.4,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.1,68.7,67.3,56.1,50.0,49.8,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.5,33.6,33.4,32.0,31.3,30.6,30.5,30.2,29.3,28.9,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.3,10.6ppm；C65H102NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1264.6837，實測值1264.6846。
Figure 109118307-A0305-02-0082-59
3-O-(N-(8-(吡啶-3-基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(68)
按照醯胺鍵形成和整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的68，產率為42%：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.42(s,1H),8.55(s,1H),8.38(d,J=1.8Hz,1H),8.36(dd,J=4.8,1.8Hz,1H),7.70(dt,J=7.8,1.8Hz,1H),7.37(dd,J=7.7,4.8Hz,1H),5.41(d,J=1.6Hz,1H),5.29-5.27(m,2H),4.50-4.47(m,2H),4.26(d,J=7.8Hz,1H),3.92-3.77(m,6H),3.69-3.63(m,3H),3.56-3.53(m,2H),3.49-3.42(m,2H),3.33-3.25(m,3H),3.23-3.17(m,3H),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H),2.93(dd,J=14.3,4.2Hz,1H),2.67(t,J=7.6Hz,2H),2.29(t,J=13.6Hz,1H),1.98-1.87(m,5H),1.83-1.62(m,7H),1.56-1.48(m,4H),1.45(dd,J=14.7,2.4Hz, 1H),1.39(s,3H),1.38-1.28(m,13H),1.22(d,J=6.4Hz,3H),1.19-1.15(m,1H),1.13(s,3H),1.10(d,J=13.5Hz,1H),1.06-1.01(m,1H),1.00(s,3H),0.96-0.94(m,4H),0.86(s,3H),0.76(s,3H)；13C NMR(151MHz,CD3OD)δ 209.2,177.2,171.5,170.3,150.0,147.5,144.8,140.3,138.3,130.9,125.2,123.1,106.9,105.0,101.1,95.2,84.08,83.4,78.2,77.6,76.7,76.6,76.1,74.7,74.6,74.0,73.6,73.2,72.7,72.2,71.9,71.2,68.7,67.3,56.1,50.0,49.6,48.1,48.0,42.8,42.3,41.1,40.0,39.4,37.1,36.5,36.4,33.8,33.6,33.4,32.4,32.0,31.3,30.8,30.8,30.6,30.4,30.3,30.2,27.9,27.2,26.0,24.8,24.5,21.5,18.3,17.7,16.5,16.4,10.6ppm；C66H103N2O22[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1275.6997，實測值1275.7031。
Figure 109118307-A0305-02-0083-60
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(56α)
按照整體去保護的通用步驟，得到白色固體狀的56α，產率為47%：1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.41(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.32(dd,J=8.6,7.5Hz,2H),7.16(d,J=8.6Hz,2H),7.07(t,J=7.4Hz,1H),6.95(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),6.06(d,J=3.7Hz,1H,H-1'),5.33(t,J=3.4Hz,1H,H-12),4.87(d,J=1.7Hz,1H,H-1")4.49(s,1H,H-16),4.42(d,J=7.7Hz,1H,H-1'''),4.26(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.97(dd,J=3.2,1.7Hz,1H,H-2"),3.92-3.86(m,3H,H-3,H-2',H-5'),3.85-3.80(m,2H,H-3',H-5a '''),3.77(dd,J=9.4,3.2Hz,1H,H-3"),3.72(d,J=3.0Hz,1H,H-4'),3.65(d,J=9.7Hz,1H,H-5''''),3.53(dq,J=9.4, 6.0Hz,1H,H-5"),3.49(t,J=9.4Hz,1H,H-4"),3.45-3.41(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3.25(m,3H,H-3''',H-3'''',-NHCH a -),3.23-3.16(m,3H,H-2''',H-5b ''',-NHCH b -),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H,H-2''''),2.98(dd,J=14.3,4.1Hz,1H,H-18),2.60(t,J=7.7Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.26(t,J=13.7Hz,1H),2.01-1.88(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83-1.74(m,3H,H-2b,H-22b,H-9),1.70(d,J=13.4Hz,1H,H-1a),1.65-1.59(m,3H,H-15a，碳鏈CH 2 ),1.58-1.47(m,4H,H-6a,H-7a，碳鏈CH 2 ),1.41-1.38(m,4H,H-15b,H-27),1.37-1.31(m,9H,H-5，碳鏈CH 2 ×4),1.24(d,J=6.0Hz,3H,H-6"),1.23-1.19(m,2H,H-6b,H-21b),1.17(d,J=6.5Hz,3H,H-6'),1.12(s,3H,H-24),1.11-1.08(m,H-1b),1.05(dd,J=11.7,4.3Hz,1H,H-19b),1.01(s,3H,H-25),0.95-0.91(m,4H,H-7b,H-30),0.87(s,3H,H-29),0.79(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.1(C-23),176.8(C-28),171.5,159.2,156.5,144.7(C-13),139.1,130.8,130.7,124.0,123.4(C-12),120.0,119.4,107.1(C-1'''),105.0(C-1''''),104.5(C-1"),93.0(C-1'),84.5(C-4"),83.3(C-3),78.4(C-3'''),77.6(C-3''''),76.9(C-2'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),75.0(C-16),74.7(C-2''''),73.5(C-4'),73.2(C-4''''),72.5(C-3"),71.6(C-2"),71.0(C-4'''),71.0(C-3'),70.5(C-5'),68.8(C-5"),67.2(C-5'''),56.1(C-4),50.6(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9),48.0(C-19),42.8(C-14),42.1(C-18),41.0(C-8),40.0,39.4(C-1),37.1(C-10),36.3(C-21,C-15),36.2,33.6(C-6),33.4(C-29),32.9,32.4(C-22),31.4(C-20),30.7,30.4,30.3,30.2,27.9,27.2(C-27),26.0(C-2),25.3(C-30),24.5(C-11),21.4(C-7),18.0(C-26),17.9(C-6"),16.8(C-6'),16.3(C-25),10.5(C-29)ppm；C73H108NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1366.7307，實測值1366.7318。
Figure 109118307-A0305-02-0085-61
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-L-吡喃阿拉伯糖基)皂皮酯(77β)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的77β，產率為67%：1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.32(dd,J=8.5,7.4Hz,2H),7.16(dd,J=8.5,1.0Hz,2H),7.07(tt,J=7.6,1.0Hz,1H),6.95(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),5.61(d,J=3.7Hz,1H,H-1'),5.35(t,J=3.5Hz,1H,H-12),5.02(s,1H,H-1"),4.51(d,J=7.7Hz,1H,H-1'''),4.49(s,1H,H-16),4.26(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.92-3.79(m,7H,H-5a ',H-3,H-3',H-2",H-3",H-5a ''',H-4'),3.77(dd,J=5.2,3.7Hz,1H,H-2'),3.73-3.67(m,1H,H-5"),3.65(d,J=9.7Hz,1H,H-5''''),3.57(t,J=9.1Hz,1H,H-4"),3.50-3.41(m,3H,H-5b ',H-4''',H-4''''),3.33-3.26(m,3H,H-3''',H-3'''',-NHCH a -),3.23-3.16(m,3H,H-2''',H-5b ''',-NHCH b -),3.14(dd,J=9.2,7.8Hz,1H,H-2''''),3.05(dd,J=14.3,4.2Hz,1H,H-18),2.60(t,J=7.6Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.28(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.97-1.87(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.84-1.66(m,5H,H-2a,H-22b,H-9,H-15a,H-1a),1.66-1.59(m,2H，碳鏈CH 2 ),1.59-1.50(m,3H,H-6a，碳鏈CH 2 ),1.42-1.37(m,4H,H-15b,H-27),1.36-1.32(m,9H,H-5，碳鏈CH 2 ×4),1.31-1.27(m,5H,H-6b,H-7a,H-6"),1.17-1.12(m,4H,H-21b,H-24),1.12-1.07(m,1H,H-1b),1.04(dd,J=12.7,3.1Hz,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.97-0.92(m,4H,H-30,H-7b),0.86(s,3H,H-29), 0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.1(C-23),176.9(C-28),171.5,159.2,156.5,144.9(C-13),139.1,130.8,130.7,124.0,123.4(C-12),120.0,119.4,106.6(C-1'''),105.0(C-1''''),1013(C-1"),94.0(C-1'),83.4(C-3),83.3(C-4"),78.1(C-3'''),77.6(C-3''''),766(C-5''''),76.0(C-2'''),75.5(C-2'),74.7(C-2''''),74.6(C-16),73.2(C-4''''),72.3(C-3"),72.1(C-2"),71.1(C-3',C-4'''),69.0(C-5"),67.2(C-5'''),67.0(C-4'),637(C-5'),56.1(C-4),50.2(C-17),49.6(C-5),48.1(C-9),47.7(C-19),42.8(C-14),42.1(C-18),41.1(C-8),40.0(碳鏈CH2),39.4(C-1),37.1(C-10),36.4(C-21),36.3(C-15),36.2(碳鏈CH2),33.5(C-6),33.4(C-29),32.9(碳鏈CH2),32.0(C-22),31.4(C-20),30.7(碳鏈CH2),30.5(碳鏈CH2),30.3(碳鏈CH2),30.3(碳鏈CH2),27.9(碳鏈CH2),27.3(C-27),26.0(C-2),25.1(C-30),24.5(C-11),21.5(C-7),18.1(C-6"),17.9(C-26),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C72H105NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1352.7150，實測值1352.7167。
Figure 109118307-A0305-02-0086-62
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基)皂皮酯(77α)
按照整體去保護的通用步驟，以35%的產率獲得白色固體狀的77α：1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.41(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.32(dd,J=8.6,7.4Hz,2H),7.16(d,J=8.6Hz,2H),7.07(t,J=7.4Hz,1H),6.95(d,J=8.6Hz,2H),6.90(d,J=8.6Hz,2H),6.09(d,J=3.6Hz,1H,H-1'),5.34(t,J=3.5Hz, 1H,H-12),4.89(d,J=1.7Hz,H-1")4.49(s,1H,H-16),4.43(d,J=7.7Hz,1H,H-1'''),4.26(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.96(dd,J=3.1,1.7Hz,1H,H-2"),3.94(dd,J=10.1,3.6Hz,1H,H-2'),3.92-3.90(m,H-4'),3.89(dd,J=11.8,4.7Hz,1H,H-3),3.85(dd,J=10.1,3.3Hz,1H,H-3'),3.83(dd,J=11.4,5.4Hz,1H,H-5a '''),3.80-3.76(m,2H,H-5a ',H-3"),3.67(dd,J=12.4,1.8Hz,1H,H-5b '),3.65(d,J=9.7Hz,1H,H-5''''),3.58-3.53(m,1H,H-5"),3.49(t,J=9.4Hz,1H,H-4"),3.46-3.41(m,2H,H-4''',H-4''''),3.33-3.26(m,3H,H-3''',H-3'''',-NHCH a -),3.23-3.12(m,4H,H-2''',H-5b ''',H-2'''',-NHCH b -),2.98(dd,J=14.4,4.2Hz,1H,H-18),2.60(t,J=7.6Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.26(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),2.00-1.87(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.83-1.78(m,2H,H-2b,H-22b),1.75(dd,J=10.9,6.7Hz,1H,H-9),1.73-1.65(m,2H,H-1a,H-15a),1.65-1.60(m,2H，碳鏈CH 2 ),1.60-1.46(m,4H,H-6a,H-7a，碳鏈CH 2 ),1.43-1.38(m,4H,H-15b,H-27),1.37-1.32(m,9H,H-5，碳鏈CH 2 ×4),1.26-1.24(m,4H,H-6b,H-6"),1.21(d,J=12.5Hz,1H,H-21b),1.12(s,3H,H-24),1.10(dd,J=13.7,3.6Hz,1H,H-1b),1.05(dd,J=12.4,3.7Hz,1H,H-19b),1.01(s,3H,H-25),0.95-0.91(m,4H,H-7b,H-30),0.87(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.0(C-23),176.8(C-28),171.5,170.3,159.2,156.5,144.5(C-13),139.2,130.8,130.7,124.0,123.5(C-12),120.0,119.4,107.1(C-1'''),105.0(C-1''''),104.3(C-1"),93.5(C-1'),84.4(C-4"),83.3(C-3),78.4(C-3'''),77.6(C-3''''),77.0(C-2'),76.6(C-5''''),76.1(C-2'''),74.9(C-16),74.7(C-2''''),73.2(C-4''''),72.5(C-3"),71.6(C-2"),71.0(C-4'''),70.7(C-4'),70.1(C-3'),68.8(C-5"),67.2(C-5'''),66.5(C-5'),56.1(C-4),50.7(C-17),49.6(C-5),48.0(C-9),47.9(C-19),42.8(C-14),42.2(C-18),41.1(C-8),40.0(碳鏈CH 2 ),39.4(C-1),37.1(C-10),36.4(C-21),36.3(C-15),36.2(碳鏈CH 2 ),33.7(C-6),33.3(C-29),32.9(碳鏈CH 2 ),32.3(C-22),31.4(C-20),30.7 (碳鏈CH 2 ),30.4(碳鏈CH 2 ),30.3(碳鏈CH 2 ),30.2(碳鏈CH 2 ),27.9(碳鏈CH 2 ),27.2(C-27),26.0(C-2),25.3(C-30),24.5(C-11),21.4(C-7),17.9(C-6"),17.9(C-26),16.3(C-25),10.5(C-24)ppm；C72H106NO23[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1352.7150，實測值1352.7159。
Figure 109118307-A0305-02-0088-63
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)刺囊酯(78)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的78，產率為69%：1H NMR(600MHz,MeOD)δ 8.55(s,1H，醯胺NH),7.32(dd,J=8.6,7.4Hz,2H),7.16(dd,J=8.6,1.0Hz,2H),7.06(tt,J=7.4,1.0Hz,1H),6.95(d,J=8.6Hz,2H),6.90(d,J=8.6Hz,2H),5.41(d,J=1.7Hz,1H,H-1"),5.30-5.27(m,2H,H-12,H-1'),4.51-4.48(m,2H,H-1''',H-16),4.40(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''),3.92(dd,J=3.3,1.7Hz,1H,H-2"),3.88-3.79(m,4H,H-5a ''',H-3",H-2',H-5"),3.69-3.62(m,3H,H-5'''',H-3',H-5'),3.58-3.53(m,2H,H-4",H-4'),3.50-3.45(m,2H,H-4''',H-4''''),3.38(t,J=9.1Hz,1H,H-3''''),3.35-3.28(m,2H,H-3''',-NHCH a -),3.27-3.24(m,2H,H-2''',H-2''''),3.23-3.17(m,3H,H-3,H-5b ''',-NHCH b -),2.93(dd,J=14.3,4.2Hz,1H,H-18),2.60(m,J=7.5Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.29(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.96-1.82(m,5H,H-2a,H-11ab,H-21a,H-22a),1.80-1.66(m,3H,H-22b,H-2b,H-15a),1.66-1.55(m,5H,H-1a,H-7a,H-9，碳鏈CH 2 ),1.55-1.49(m,3H,H-6a，碳鏈CH 2 ),1.48-1.41 (m,2H,H-15b,H-6b),1.40-1.36(m,4H,H-7b,H-27),1.36-1.32(m,11H,H-6"，碳鏈CH 2 ×4),1.21(d,J=6.4Hz,3H,H-6'),1.16(dd,J=10.8,3.8Hz,1H,H-21b),1.06(s,3H,H-23),1.03(dd,J=12.1,8.9Hz,1H,H-19b),0.98(dd,J=13.4,3.5Hz,1H,H-1b),0.95(s,3H,H-25),0.92(s,3H,H-30),0.86(s,3H,H-24),0.85(s,3H,H-29),0.78(d,J=12.0Hz,1H,H-5),0.76(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 177.1(C-28),171.7,159.2,156.5,144.8(C-13),139.1,130.8,130.7,124.0,123.4(C-12),120.1,119.4,107.0(C-1'''),106.8(C-1''''),101.1(C-1"),95.2(C-1'),91.0(C-3),84.1(C-4"),78.1(C-3'''),77.8(C-3''''),76.7(C-3'),76.5(C-5''''),76.1(C-2'''),75.2(C-2''''),74.7(C-16),74.0(C-2'),73.6(C-4'),73.4(C-4''''),72.7(C-5'),72.2(C-3"),71.9(C-2"),71.1(C-4'''),68.7(C-5"),67.3(C-5'''),57.2(C-5),50.0(C-17),48.1(C-9),48.1(C-19),42.7(C-14),42.3(C-18),40.8(C-8),40.2(C-4),40.0(C-1),39.9,37.9(C-10),36.5(C-21),36.5(C-15),36.4,34.3(C-6),33.4(C-29),32.9,32.0(C-22),31.3(C-20),30.7,30.6,30.4,30.3,28.5(C-23),27.9,27.3(C-2),27.2(C-27),24.8(C-30),24.6(C-11),19.4(C-7),18.3(C-6"),17.8(C-26),17.0(C-24),16.5(C-6'),16.3(C-25)ppm；C73H110NO22[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1352.7514，實測值1352.7532。
Figure 109118307-A0305-02-0089-64
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-28-O-(β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(β-D-吡喃木糖基-(1→4))-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(79)
按照整體去保護的通用步驟，獲得白色固體狀的79，產率為33%：1H NMR(600MHz,MeOD)δ 9.42(s,1H,H-23),8.55(s,1H，醯胺NH),7.32(dd,J=8.5,7.5Hz,2H),7.17(d,J=8.5Hz,2H),7.07(t,J=7.5Hz,1H),6.95(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),5.29(s,1H,H-12),5.26(d,J=8.1Hz,1H,H-1'),5.23(s,1H,H-1"),4.70(d,J=7.9Hz,1H,H-1''''),4.53(d,J=7.3Hz,1H,H-1'''),4.46(s,1H,H-16),4.27-4.25(m,2H,H-2",H-1'''''),3.95(dd,J=9.5,3.0Hz,1H,H-3"),3.90-3.81(m,4H,H-5",H-3,H-6a ''',H-5a ''''),3.74(dd,J=10.2,8.1Hz,1H,H-2'),3.71-3.60(m,5H,H-4",H-6b ''',H-5''''',H-5',H-3'),3.55(d,J=2.6Hz,1H,H-4'),3.49-3.41(m,2H,H-4'''',H-4'''''),3.33-3.25(m,7H,H-2''',H-3''',H-4''',H-5''',H-3'''',H-3''''',-NHCH a -),3.23-3.08(m,4H,H-2'''',H-5b '''',H-2'''''),2.95-2.88(m,1H,H-18),2.60(t,J=7.6Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.28(t,J=13.6Hz,1H,H-19a),1.98-1.86(m,5H,H-2a,H-21a,H-22a,H-11ab),1.86-1.77(m,2H,H-22b,H-2b),1.76-1.67(m,3H,H-9,H-15a,H-1a),1.65-1.59(m,2H，碳鏈CH 2 ),1.58-1.48(m,4H,H-6a,H-7a，碳鏈CH 2 ),1.41-1.38(m,4H,H-15b,H-27),1.37-1.31(m,9H,H-5，碳鏈CH 2 ×4),1.30-1.26(m,4H,H-6b,H-6"),1.21(d,J=6.3Hz,3H,H-6'),1.16(d,J=11.2Hz,1H,H-21b),1.14(s,3H,H-24),1.10(d,J=16.7Hz,2H,H-1b),1.04(d,J=10.1Hz,1H,H-19b),1.00(s,3H,H-25),0.96-0.94(m,1H,H-7b),0.93(s,3H,H-30),0.85(s,3H,H-29),0.79(s,3H,H-26)；13C NMR(151MHz,MeOD)δ 209.4(C-23),177.2(C-28),171.5,159.2,156.5,144.8(C-13),139.2,130.8,130.7,124.0,123.1(C-12),120.0,119.4,105.4(C-1'''),105.1(C-1'''''),105.0(C-1''''),101.5(C-1"),95.4(C-1'),83.5(C-3),83.0(C-3"),78.7(C-4"),78.6(C-3'''),78.3(C-3''''),77.8(C-2'''),77.6(C-3'''''),76.6(C-5'''''),75.9(C-3'),75.7(C-2''''),75.3(C-4'''),74.9(C-2'),74.8(C-16),74.7(C-2'''''),73.5(C-4'),73.2(C-4'''''),72.7(C-5'),71.5(C-4''''),71.3(C-2"),71.1(C-5'''),69.1(C-5"),67.0(C- 5''''),62.4(C-6'''),56.1(C-4),49.9(C-17),49.5(C-5),48.1(C-19),48.0(C-9),42.8(C-14),42.4(C-18),41.1(C-8),40.0,39.4(C-1),37.1(C-10),36.5(C-15,C-21),36.2,33.8(C-6),33.4(C-29),32.9,31.8(C-22),31.3(C-20),30.7,30.5,30.4,30.3,27.9,27.3(C-27),26.0(C-2),24.9(C-30),24.5(C-11),21.4(C-7),18.6(C-6"),17.8(C-26),16.5(C-6'),16.4(C-25),10.6(C-24)；C79H118NO28[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1528.7835，實測值1528.7847。
合成例II
原皂苷元與三醣偶合。
考慮到葡萄糖醛酸酯與皂皮酯共軛結合的漫長過程，我們進一步應用半合成方法來獲得皂苷核心。在鹼性條件下進行起始物Quillaja Ultra Dry100-Q(Desert King，批次：QDU-100-121213-2)水解連接C-28的寡醣。經過三乙基矽化和選擇性苄化作用後，透過三個步驟提供原皂苷元核心(流程7)。
流程7-分支三醣-三萜皂苷的分離和選擇性保護，如圖18。
於原皂苷元上多樣化連接子之醯胺鍵形成。
三醣與原皂苷元的偶合可容易地實現而提供皂苷核心。經過去保護和醯胺鍵形成，提供具有多元化碳鏈的目標皂苷。
流程8-演示根據本發明實施例的皂苷類似物的製備，如圖19。
實驗細節
Figure 109118307-A0305-02-0091-65
3-O-(2,3,4,6-四-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃木糖基-(1→3))-3-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸))-16-O-三乙基矽烷基皂皮酸(81)
在室溫和N2氣體環境下，添加TESOTf(5.0mL,22.1mmol)至原皂苷元(1.72g)在無水吡啶(25mL)的經攪拌之懸浮液中。將反應混合物攪拌2天，然後添加TESOTf(1.3mL,5.8mmol)，然後在24小時後再添加1次(1.0mL,4.4mmol)。將反應混合物攪拌總共5天。將所得混合物濃縮，並使其通過矽膠管柱，用己烷/EtOAc(2：1)沖提。在減壓下將沖出物濃縮並乾燥，得到黃色油狀物。將所得黃色油狀物溶於MeOH/THF(1：1)(80mL)，並在室溫下將溶液攪拌3天。將反應混合物在減壓下濃縮，然後以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/6至1/4)純化，得到81(0.66g,~19%)，為白色固體泡沫。R f 0.47(EtOAc/苯=1/4)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.68(s,1H),5.35(br.s,1H,H-12),4.56(br.s,1H,H-16),4.54(d,J=7.4Hz,1H,H-1'''),4.42(d,J=7.4Hz,1H,H-1"),4.41(d,J=6.4Hz,1H,H-1'),3.96-3.88(m,4H,H-4",H-3',H-5',H-3"),3.84-3.82(m,2H,H-5a''',H-2'),3.77(t,J=9.2Hz,1H,H-6a"),3.65-3.61(m,3H,H-3,H-2",H-6b"),3.52-3.49(m,1H,H-4'''),3.53-3.51(m,1H,H-4'),3.42-3.35(m,2H,H-3''',H-5"),3.27(t,J=7.8Hz,1H,H-2'''),3.12(t,J=10.7Hz,1H,H-5'''),2.96(dd,J=13.3Hz,J=3.1Hz,1H,H-18),2.22(t,J=13.8Hz,1H,H-19),1.92-1.86(m,4H),1.84-1.71(m,4H),1.68(t,J=8.9Hz,1H,H-19a),1.63-1.31(m,1H,H-1),1.57-1.50(m,1H),1.49-1.41(m,2H,H-6),1.39-1.36(m,5H,H-5,H-27),1.29-1.25(m,5H,H-15,H-24),1.12-1.15(m,2H,H-21),1.11-1.07(m,1H,H-9),1.04-0.94(m,94H),0.91(s,3H,H-29),0.75-0.62(m,54H)ppm；C101H199O20Si9[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1986.2504，實測值1986.3361。
Figure 109118307-A0305-02-0093-66
3-O-(苄基2,3,4,6-四-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃木糖基-(1→3))-3-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯))-16-O-三乙基矽烷基皂皮酸(82)
在N2氣體環境下添加CBzCl(47μL,0.33mmol)至81(253mg,127μmol)、TBP(319mg,1.29mmol)和無水吡啶(94μL,1.2mmol)在CH2Cl2(2.2mL)中經攪拌的懸浮液中。14小時後反應完成後，將反應混合物在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/20至1/10)將殘留物純化，得到82(207mg,65%)，為白色固體泡沫。R f 0.74(EtOAc/苯=1/9)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.68(s,1H),7.33-7.29(m,5H),5.31(br.s,1H,H-12),5.23(d,J=12.4Hz,1H Bn CH 2),5.07(d,J=12.0Hz,1H Bn CH 2),4.53(d,J=7.6Hz,1H,H-1'''),4.51(br.s,1H,H-16),4.40(d,J=7.2Hz,1H,H-1"),4.12(d,J=7.2Hz,1H,H-1'),3.93-3.79(m,4H,H-4",H-3',H-5',H-3"),3.878-3.74(m,2H,H-5a''',H-2'),3.72(t,J=9.1Hz,1H,H-6a"),3.61-3.52(m,3H,H-3,H-2",H-6b"),3.49-3.42(m,1H,H-4'''),3.40-3.35(m,1H,H-4'),3.39-3.29(m,2H,H-3''',H-5"),3.23(t,J=7.7Hz,1H,H-2'''),3.11(t,J=11.0Hz,1H,H-5b'''),2.91(dd,J=13.8Hz,J=3.6Hz,1H,H-18),2.19(t,J=13.6Hz,1H,H-19),1.89-1.79(m,4H),1.55-1.45(m,4H),1.42-1.30(m,5H,H-5,H-27),1.30-1.23(m,5H,H-15,H-24),1.16-1.09(m,2H,H-21),1.08-1.01(m,1H,H-9),1.00-0.90(m,94H),0.88(s,3H,H-29),0.73-0.57(m,54H)ppm；C108H204O20Si9Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值2099.2803，實測值2099.3005。
Figure 109118307-A0305-02-0094-67
3-O-(N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(β-D-吡喃木糖基-(1→3))-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺)-皂皮酸(83)
在N2氣體環境下依序添加DIPEA(5μL,25μmol)、8-(4-苯氧基苯基)辛-1-胺(4mg,14μmol)至皂苷二酸(26mg,13μmol)和HBTU(7mg,25μmol)在無水THF(1mL)中經攪拌的懸浮液中。1小時後反應完成後，將反應混合物在減壓下濃縮，用CH2Cl2稀釋，用H2O洗滌兩次，用鹽水洗滌，用MgSO4乾燥，然後在壓力下濃縮。然後透過快速管柱(矽膠，EtOAc/己烷=1/20至1/10)將殘留物純化。然後將粗製產物溶於1mL THF中，並在pH 1酸性條件下攪拌6小時。用NaHCO3中和後，將混合物透過0.22μm過濾板過濾，將濾液濃縮，然後藉由HPLC純化(HPLC管柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；移動相：20分鐘內由20% ACN/H2O升至90% ACN/H2O之梯度，然後90% ACN/H2O等度15分鐘；流速：4mL/min)，以80%的產率提供白色固體狀的產物83(2mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.44(s,1H,H-23),7.32(t,J=7.7Hz,2H),7.16(d,J=8.3Hz,2H),7.07(t,J=7.2Hz,1H),6.95(d,J=8.2Hz,2H),6.90(d,J=8.2Hz,1H),5.28(br.s,1H,H-12),4.79(d,J=7.1Hz,1H,H-1"),4.45(s,1H,H-16),4.57(d,J=7.7Hz,1H,H-1'''),4.43(d,J=7.4Hz,1H,H-1'),3.89(dd,J=11.5 & 5.5Hz,1H,H-3),3.85(dd,J=11.8 & 4.4 Hz,1H,H-5a'''),3.81(d,J=2.5Hz,1H,H-4")3.75(d,J=6.2Hz,2H,H-6"),3.70-3,63(m,4H,H-2''',H-2',H-5',H-3'),3.56-3.41(m,5H,H-2",H-3',H-4',H-5",H-4'''),3.26-3.19(m,4H,H-3''',H-5b''',-NHCH 2 -),3.00(dd,J=14.1Hz & 4.1Hz,1H,H-18),2.60(t,J=7.6Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.29(t,J=13.4Hz,1H,H-19a),1.99-1.87(m,5H),1.80-1.72(m,3H),1.71-1.66(m,1H),1.65-1.60(m,2H),1.55-1.49(m,3H),1.38(s,1H,H-27),1.36-1.29(m,14H),1.15(s,3H,H-23),1.02(m=3H),0.98(s,3H,H-25),0.95(s,3H,H-30),0.86(s,3H,H-24),0.78(s,3H,H-26)ppm；C67H97NO20Na[M+Na]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1258.6496，實測值1258.6510。
Figure 109118307-A0305-02-0095-68
3-O-(苄基2,3,4,6-四-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-(2,3,4-三-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃木糖基-(1→3))-(3-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸酯))-28-O-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(84)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,4μL,24μmol)至10(68.8mg,83.6μmol)、82(130mg,62.3μmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(3.0mL)的經攪拌之懸浮液中。0.5小時後反應完成後，用Et3N淬滅反應，加熱至室溫。將所得混合物用CH2Cl2稀釋並透過5μm濾紙過濾。在減壓下將所得 濾液濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/CH2Cl2/己烷=1/1/6至1/1/4)將殘留物純化，得到84(160mg,93%)，為白色固體泡沫。R f 0.63(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.67(s,1H),7.32-7.29(m,5H),5.38(d,J=7.4Hz,1H,H-1''''),5.30(t,J=3.71H,H-12),5.26(d,J=12.0Hz,1H Bn CH 2),5.23-5.21(m,1H,H-2'''''),5.19(dd,J=9.8Hz,J=3.5Hz,1H,H-3'''''),5.07(d,J=12.4Hz,1H Bn CH 2),4.97(d,J=0.8Hz,1H,H-1'''''),4.93(dt,J=9.2Hz,J=5.5Hz,1H,H-4''''''),4.83(dd,J=9.2Hz,J=5.5Hz,1H,H-2''''''),4.61(d,J=7.8Hz,1H,H-1''''''),4.53(d,J=7.8Hz,1H,H-1'''),4.46(s,1H,H-16),4.39(d,J=7.2Hz,1H,H-1"),4.17-4.14(m,2H,H-1',H-3''''),4.12-4.07(m,2H,H-3',H-5a''''''),3.99(dd,J=5.8Hz,J=1.9Hz,1H,H-4''''),3.91-3.88(m,2H,H-4',H-5'),3.86-3.81(m,3H,H-4",H-5'''',H-3"),3.81-3.75(m,3H,H-5''',H-5a''',H-2'),3.72(t,J=9.2Hz,1H,H-6a"),3.66-3.60(m,2H,H-2'''',H-5'''''),3.59-3.53(m,3H,H-2",H-6b",H-3),3.47-3.42(m,1H,H-4'''),3.36(dd,J=9.4Hz,J=2.2Hz,1H,H-4''''),3.34-3.29(m,3H,H-3''',H-5",H-5b''''''),3.22(t,J=7.4Hz,1H,H-2'''),3.10,(t,J=11.0Hz,1H,H-5b'''),2.90(dd,J=14.1Hz,J=3.7Hz,1H,H-18),2.21(t,J=13.7Hz,1H,H-19),2.11(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.99(s,3H),1.95(s,3H),1.83-1.77(m,4H,H-11,H-22),1.76-1.62(m,4H),1.62-1.55(m,3H),1.52(s,3H,H-27),1.50-1.47(m,1H),1.33(s,1H,H-5),1.31(s,6H，亞異丙基CH 3),1.27(s,3H,H-24),1.26-1.25(m,3H,H-6''''),1.25-1.24(d,3H,H-6'''''),1.24-1.22(m,4H),0.98-0.91(m,94H),0.91-0.89(m,10H,H-1,H-7,H-15,H-20),0.69-0.56(m,54 H)ppm；C138H246O37Si9Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值2772.5224，實測值2772.5586。
Figure 109118307-A0305-02-0097-69
3-O-{β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-[N-(8-(4-甲氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺]}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酯(92)
在N2氣體環境下添加DIPEA(10μL,58μmol)於50(8mg,6μmol)、8-(4-甲氧基苯基)辛-1-胺(13mg,58μmol)和HBTU(22mg,58μmol)在無水DMA(0.5mL)的經攪拌之懸浮液中。24小時後反應完成後，將反應混合物在減壓下濃縮，用MeOH稀釋，然後透過5μm濾紙過濾。將濾液濃縮，然後透過HPLC純化(HPLC管柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；移動相：20分鐘內由30% ACN/H2O升至80% ACN/H2O之梯度，然後90% ACN/H2O等度15分鐘；流速：5mL/min)，以30%的產率提供白色固體狀的產物51b(2mg)；C79H123NO32Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1620.7920，實測值1620.7920。
Figure 109118307-A0305-02-0098-70
3-O-{β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-[N-(8-(4-苯氧基苯基)辛基)-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛醯胺]}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酯(95)
在N2氣體環境下添加DIPEA(6μL,40μmol)至50(5mg,4μmol)、8-(4-苯氧基苯基)辛-1-胺(10mg,40μmol)和HBTU(12mg,40μmol)在無水DMA(0.5mL)的經攪拌之懸浮液中。24小時後反應完成後，將反應混合物在減壓下濃縮，用MeOH稀釋，然後透過5μm濾紙過濾。將濾液濃縮，然後透過HPLC純化(HPLC管柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；移動相：20分鐘內由20% ACN/H2O升至90% ACN/H2O之梯度，然後90% ACN/H2O等度15分鐘；流速：2.4mL/min)，以80%的產率提供白色固體狀的產物51a(2mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.45(s,1H,H-23),8.54(s,1H，醯胺NH),7.33(dd,J=8.5Hz &7.6Hz,2H),7.18(d,J=8.5Hz,2H),7.08(t,J=7.4Hz,1H),6.95(d,J=7.8Hz,2H),6.91(d,J=8.5Hz,1H),5.37(d,J=1.5Hz,1H,H-1'''''),5.28(t,J=3.4Hz,1H,H-12),5.27(d,J=8.2Hz,1H,H-1''''),4.79(d,J=7.1Hz,1H,H-1"),4.62(s,1H,H-16),4.57(d,J=7.7Hz,1H,H-1'''),4.47(d,J=7.7Hz,1H,H-1''''''),4.43(d,J=7.4Hz,1H,H-1'),3.93(m,1H,H-2'''''),3.89(m,1H,H-5a'''),3.82(m,6H,H-4",H-2'''',H-3'''',H-3''''',H-5''''',H- 5a''''''),3.75(m,2H,H-6"),3.69(m,1H,H-2'''),3.65(m,5H,H-2',H-5',H-3",H-4'''',H-5''''),3.49(m,9H,H-3,H-3',H-4',H-5",H-4''',H-3''''',H-4''''',H-2'''''',H-4''''''),3.22(m,6H,H-2",H-3''',H-5b''',H-3'''''',H-5b'''''',-NHCH a -),2.95(m,2H,H-18,-NHCH b -),2.60(t,J=7.6Hz,2H，碳鏈CH 2 Ph),2.29(t,J=13.4Hz,1H,H-19a),1.95(m,2H),1.90(m,4H),1.76(m,3H),1.69(m,2H),1.63(m,4H),1.53(m,3H),1.46(m,3H),1.38(s,1H,H-27),1.34(m,13H),1.30(m,11H),1.20(d,J=6.4Hz,3H,H-6'''''),1.16(s,3H,H-23),1.15(m,1H),1.08(m,3H),0.98(s,3H,H-25),0.92(s,3H,H-30),0.90(m,2H),0.86(s,3H,H-24),0.74(s,3H,H-26)；C84H125NO32Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1682.8077，實測值1682.8079。
6-N-糖基皂皮酯
皂皮酯與疊氮基葡萄糖的共軛結合成功產出產率為70%之產物117。有趣的是，該結果表明3-O醣基化在16-O位置上的選擇性。
請參閱圖20。有了醣苷117，進行進一步的修飾以將C-28羧酸去遮蔽。首先，在鹼性條件及升高的溫度下將苯甲醯基水解。令人驚訝的是，在這種強鹼的嚴苛環境下，28-O-烯丙酯沒有受到影響。將所得疊氮基醣苷進行三乙基矽化後，將疊氮基還原為胺，然後透過與親脂性長鏈酸偶合而形成醯胺，以得到完全經保護的皂皮酯119a/b/c。在低酸性環境下以Pd(OAc)2催化水解O-烯丙酯119a/b/c，得到醣苷受體120a/b。在-78℃下以路易斯酸催化，使一元酸120a/b/c與三醣10共軛結合，以56%的產率獲得121a/b/c。在H2氣體環境下使完全經保護的皂苷121a/b/c與Pd(OH)2懸浮在THF/MeOH中，以將葡萄糖的3-O和4-O上的苄基水解。完成酸性水解和鹼性甲醇分解後，進行HPLC純化，以13%、16%、30%的產率獲得122a/b/c。
Figure 109118307-A0305-02-0100-71
3-O-(6-疊氮基-2-O-苯甲醯基-3,4-二-O-苄基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-28-O-烯丙基-皂皮酯(117)：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.17(s,1H,H-23),8.04-8.01(m,2H,Bz),7.61-7.56(m,1H,Bz),7.48-7.44(m,2H,Bz),7.36-7.24(m,5H,Bn),7.14-7.09(m,5H,Bn),5.88-5.80(m,1H，烯丙基內部烯基CH),5.33(t,J=3.5Hz,1H,H-12),5.28(d,J=17.6Hz,1H，烯丙基末端烯基CH a ),5.21-15(m,2H,H-2'，烯丙基末端烯基CH b ),4.85(d,J=11.2Hz,1H,Bn CH a ),4.68(d,J=11.1Hz,1H,Bn CH b ),4.62(d,J=11.1Hz,1H,Bn CH a ),4.57(d,J=11.2Hz,1H,Bn CH b ),4.52-4.45(m,3H,H-16，烯丙基CH 2 ),4.43(d,J=7.9Hz 1H,H-1'),3.80-3.73(m,2H,H-3,H-3'),3.53-3.50(m,2H,H-4',H-5'),3.41-3.38(m,1H,H-6a '),3.32-3.28(m,1H,H-6b '),3.05(dd,J=14.4,4.4Hz,1H,H-18),2.13(t,J=13.4Hz,1H,H-19),1.93-1.82(m,4H),1.80-1.69(m,4H),1.66-1.60(m,3H),1.59(br.s,3H),1.43-1.33(m,2H),1.31(s,3H),1.30-1.26(m,1H),1.21-1.14(m,3H),1.10(dd,J=12.8,3.6Hz,1H),1.03-0.99(m,1H),0.97-0.94(m,6H),0.90-0.88(m,6H)ppm；C60H75N3O10Na[M+Na]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1020.5345，實測值1020.5350。
Figure 109118307-A0305-02-0100-72
3-O-(6-疊氮基-3,4-二-O-苄基-6-去氧-2-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基矽烷基-28-O-烯丙基-皂皮酯(118)：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.45(s,1H,H-23),7.61-7.56(m,1H,Bz),7.48-7.44(m,2H,Bz),7.36-7.26(m,8H,Bn),7.18-7.12(m,2H,Bn),5.92-5.80(m,1H，烯丙基內部烯基CH),5.40-5.26(m,2H,H-12，烯丙基末端烯基CH a ),5.21(d,J=10.4Hz,1H，烯丙基末端烯基CH b ),4.85(br.s,2H,Bn CH 2 ),4.73(d,J=11.0Hz,1H,Bn CH b ),4.59(br.s,1H,Bn CH a ),4.55-4.41(m,3H,H-16，烯丙基CH 2 ),4.14(d,J=6.2Hz 1H,H-1'),3.99(dd,J=11.1,4.6Hz,1H,H-3),3.50-3.34(m,5H,H-2',H-3',H-4',H-5',H-6a '),3.32-3.23(m,1H,H-6b '),3.07-2.99(m,1H,H-18),2.23(t,J=13.3Hz,1H,H-19),1.93-1.80(m,5H),1.78-1.59(m,6H),1.54-1.40(m,2H),1.37(br.s,3H),1.32-1.18(m,4H),1.15(br.s,5H),1.06-0.88(m,30H),0.73-0.59(m,15H)ppm；C65H100N3O9Si2[M+H]+之HRMS(ESI-TOF)計算值1233.6993，實測值1122.7010。
Figure 109118307-A0305-02-0101-73
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷醯胺基)-2-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基矽烷基-28-O-烯丙基-皂皮酯(119a)
添加PPh3(200mg,0.76mmol)至118(282mg,0.25mmol)在THF(15mL)中經攪拌之溶液中。將混合物攪拌12小時後，加入0.5mL H2O，然後在35℃和減壓下除去THF。將所得殘留物用CH2Cl2稀釋，然後用H2O、鹽水洗滌，用MgSO4乾燥，然後在壓力下濃縮。將所得混合物在THF(7mL)的經攪拌之溶液，使用11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一酸(187mg,0.50mmol)、HBTU(286mg,0.75 mmol)、DIPEA(132μL,0.75mmol)和THF(7mL)的預混合懸浮液處理。在30℃下攪拌2小時後反應完成後，將殘留物在減壓下濃縮以除去THF。將殘留物用CH2Cl2稀釋，用H2O、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，然後在壓力下濃縮。以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/8)將殘留物純化，得到119a(349mg,96%)，為白色泡沫狀固體：R f 0.29(EtOAc/己烷=1/5)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.45(s,1H,H-23),7.33-7.26(m,4H),7.22-7.17(m,2H),7.10(d,J=8.5Hz,2H),7.01-6.96(m,2H),6.95-6.91(m,2H),6.86(d,J=8.5Hz,2H),5.87-5.81(m,1H，內部烯基CH),5.32(t,J=3.7Hz,1H,H-12),5.28(dq,J=17.0Hz & 1.2Hz,1 H，末端烯基CH a ),5.18(dt,J=10.6Hz & 1.2Hz,1H，末端烯基CH b ),4.83(q,J=10.5Hz,2H,Bn CH 2 ),4.67(d,J=10.5Hz,1H,Bn CH a ),4.56(br.s,1H,H-16),4.51(d,J=10.6Hz,1H,Bn CH b ),4.45(dt,J=19.9Hz & 1.4Hz,2H，烯丙基CH 2 ),4.02(d,J=6.8Hz,1H,H-1'),3.93(dd,J=11.2Hz & 5,2Hz,1H,H-3),3.59(dt,J=13.9Hz & 5.9Hz,1H,H-6a '),3.47(dt,J=13.9Hz & 5.9Hz,1H,H-6b '),3.43-3.37(m,2H,H-2',H-4'),3.36-3.22(m,2H,H-3',H-5'),3.00(dd,J=14.3Hz & 4.0Hz,1H,H-18),2.54(t,J=6.7Hz,2H,CH 2 PhOPhF),2.32(t,J=7.6Hz,1H,NHCH a ),2.20(m,1H,H-19a),2.15(td,J=13.6Hz & 3.1Hz,1H,H-19b),1.90-1.85(m,2H),1.84-1.76(m,3H),1.72-1.65(m,3H),1.64-1.53(m,9H),1.48-1.40(m,2H),1.34(s,2H),1.31-1.23(m,22H),1.16(s,2H),1.13-1.08(m,2H),1.06-1.02(m,2H),1.00-0.95(m,10H),0.95-0.92(m,4H),0.92-0.91(m,2H),0.91-0.90(m,3H),0.89-0.88(m,2H),0.87-0.85(m,4H),0.69-0.63(m,8H),0.63-0.57(m,6H)ppm；C88H129FNO11Si2[M+Na]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1451.9113，實測值1451.9095。
Figure 109118307-A0305-02-0103-74
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-癸醯胺基-6-去氧-2-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基矽烷基-28-O-烯丙基-皂皮酯(119b)
按照如上所述的疊氮化物還原和醯胺形成步驟，以56%的產率獲得白色固體狀的119b：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.40(s,1H,H-23),7.33-7.24(m,5H),7.24-7.15(m,5H),5.87-5.80(m,1H，內部烯基CH),5.31(t,J=3.4Hz,1H,H-12),5.30-5.25(m,2H，末端烯基CH a ,NHCH2),5.18(dd,J=10.5Hz & 1.1Hz,1H,末端烯基CH b ),4.87-4.80(m,2H,Bn CH 2 ),4.65(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH a ),4.58-4.52(m,2H,H-16,Bn CH b ),4.46(qd,J=13.6Hz & 1.1Hz,2H，烯丙基CH 2 ),4.07(d,J=6.8Hz,1H,H-1'),3.98-3.91(m,1H,H-3),3.65-3.54(m,1H,H-4'),3.50-3.30(m,4H,H-2',H-5',H-6'),3.29-3.22(m,1H,H-3'),3.00(dd,J=14.2Hz & 3.8Hz,1H,H-18),2.31(t,J=7.4Hz,1H,NHCH a ),2.20(t,J=12.8Hz,1H,H-19a),1.90-1.75(m,7H),1.72-1.63(m,4H),1.63-1.58(m,3H),1.45-1.40(m,2H),1.39(s,3H),1.31-1.21(m,16H),1.78-1.15(m,1H),1.12(s,3H),1.06-1.02(m,2H),0.98(t,J=3.7Hz,3H),0.97(s,3H),0.96(br.s,2H),0.95-0.92(m,6H),0.91(br.s,2H),0.90(s,3H),0.89(s,3H),0.87-0.84(m,6H),0.67-0.62(m,9H),0.62-0.56(m,6H)ppm；C75H120NO10Si2[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1251.8475，實測值1251.8426。
Figure 109118307-A0305-02-0104-76
3-O-{2-O-三乙基矽烷基-3,4-二-O-苄基-6-[9-(4-苯氧基-苯基)壬醯胺基]-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-16-O-三乙基矽烷基-28-O-烯丙基-皂皮酯(119c)
按照如上所述的疊氮化物還原和醯胺形成步驟，以56%的產率獲得白色固體狀的119b：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.45(s,1H,H-23),7.31-7.21(m,2H),7.10(d,J=8.4Hz,2H),7.04(t,J=7.4Hz,2H),6.96(dd,J=8.7Hz & 1.0Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),5.89-5.80(m,2H，醯胺NH，內部烯基CH),5.32(t,J=3.7Hz,1H,H-12),5.28(d,J=18.2Hz,1H，末端烯基CH a ),5.17(dd,J=10.4Hz & 1.3Hz,1H，末端烯基CH b ),4.83(q,J=11.7Hz,2H,Bn CH 2 ),4.67(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH a ),4.57(br.s,1H,H-16),4.51(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH b ),4.45(ddt,J=11.4Hz & 5.6Hz & 1.1Hz,2H，烯丙基CH 2 ),4.02(d,J=6.8Hz,1H,H-1'),3.94(dd,J=10.2Hz & 5.8Hz,1H,H-3),3.63-3.56(m,1H),3.51-3.39(m,3H),3.32-3.21(m,2H),3.00(dd,J=14.2Hz & 3.9Hz,1H,H-18),2.55(t,J=7.5Hz,2H,CH 2 PhOPh),2.33-2.13(m,3H,H-19a,NHCOCH 2 ),1.91-1.83(m,3H),1.83-1.76(m,3H),1.75-1.52(m,11H),1.49-1.40(m,2H),1.34(s,3H),1.29(br.s,11H),1.23(s,3H),1.15(s,3H),1.14-1.00(m,4H),0.98-0.86(m,31H),0.69-0.57(m,16H)；BBD 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ 207.5(C-23),176.4(C-28),173.1(NHCO),157.7,154.8,143.5(C-13),138.5,137.8,137.5,132.2,129.6129.4,128.4,128.2,128.1,127.9,127.2,126.8,122.7, 121.7(C-12),118.9,118.4,117.8(烯丙基末端烯基CH2),101.0(C-1'),85.5(C-3),79.3,79.0,75.2(Bn CH2),75.0,75.0(Bn CH2),74.9(C-16),73.1,65.0(C-6'),54.5,48.9,48.8,46.6,46.3,41.3,40.4,40.0,39.5,38.1,36.7,36.0,35.2,35.1,34.5,33.8,32.7,32.3,31.5×2,30.5,29.6,29.3×2,29.2,29.1,29.0,26.3,25.7,24.7,24.6,24.2,23.2,20.1,16.9,15.5,10.4,7.1,6.9,5.0,4.9ppm；C86H125NO11Si2[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值140.8894，實測值1405.8984。
Figure 109118307-A0305-02-0105-77
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷醯胺基)-2-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基矽烷基-皂皮酸(120a)
在室溫下將預混合之在1,4-二噁烷(2mL)中的甲酸(129μL,3.4mmol)/Et3N(456μL,3.2mmol)以及在1,4-二噁烷(2mL)中的Pd(OAc)2(18mg,0.08mmol)添加至119a(237mg,0.16mmol)和PPh3(107mg,0.41mmol)在1,4-二噁烷(4mL)的經攪拌之溶液中。將反應混合物攪拌12小時，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/4至1/2)將殘留物純化，得到白色固體狀的120a(186mg,81%)：R f 0.36(EtOAc/己烷=1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.41(s,1H,H-23),7.27-7.26(m,1H),7.25(br.s,1H),7.34-7.25(m,6H),7.06(d,J=8.4Hz,1H),6.98-6.64(m,6H),6.82(d,J=8.4Hz,1H),5.82(t,J=5.2Hz，醯胺NH),5.30(br.s, 1H,H-12),4.83-4.76(m,2H,Bn CH 2 ),4.63(d,J=10.3Hz,1H,Bn CH a ),4.50-4.53(m,2H,H-16,Bn CH b ),3.98(d,J=6.6Hz,1H,H-1'),3.90(dd,J=11.2Hz & 4.9Hz,1H,H-3),3.60-3.53(m,1H,H-6a '),3.48-3.41(m,1H,H-6b '),3.41-3.34(m,2H,H-2',H-4'),3.27-3.19(m,2H,H-3',H-5'),2.90(dd,J=14.1Hz & 3.6Hz,1H,H-18),2.50(t,J=7.6Hz,2H,CH 2 PhOPhF),2.31(t,J=7.4Hz,1H,NHCH a ),2.19-2.09(m,3H),1.87-1.68(m,7H),1.68-1.59(m,3H),1.59-1.49(m,4H),1.44-1.36(m,2H),1.30(s,3H,H-27),1.28-1.16(m,17H),1.11(s,3H,H-29),1.09-1.08(m,1H),1.03-0.97(m,2H),0.94(s,2H),0.93(s,3H),0.92(s,3H),0.89-0.87(m,5H),0.87(s,3H),0.85(s,2H),0.82(s,3H),0.66-0.53(m,17H)ppm；C85H125FNO11Si2[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1411.8800，實測值1411.8742。
Figure 109118307-A0305-02-0106-78
3-O-(2-O-三乙基矽烷基-3,4-二-O-苄基-6-癸醯胺基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-16-O-三乙基矽烷基-28-O-烯丙基-皂皮酸(120b)
在室溫下將預混合之在1,4-二噁烷(2mL)中的甲酸(129μL,3.4mmol)/Et3N(456μL,3.2mmol)以及在1,4-二噁烷(2mL)中的Pd(OAc)2(18mg,0.08mmol)添加至119b(200mg,0.16mmol)和PPh3(107mg,0.41mmol)在1,4-二噁烷(4mL)的經攪拌之溶液中。將反應混合物攪拌12小時，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/4至1/2)將殘留物純化，得到白色固體狀的120b(154mg,80%)：R f 0.36(EtOAc/己烷=1/2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.45(s,1H,H-23),7.32-7.24(m,6H),7.24-7.19(m,4H),5.85(t,J=5.0Hz，醯胺NH),5.30(t,J= 3.7Hz 1H,H-12),4.86-4.80(m,2H,Bn CH 2 ),4.66(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH a ),4.54-4.49(m,2H,H-16,Bn CH b ),4.03(d,J=6.8Hz,1H,H-1'),3.94(dd,J=11.2Hz & 4.9Hz,1H,H-3),3.59-3.55(m,1H),3.52-3.46(m,1H),3.44-3.38(m,2H),3.31-3.24(m,2H),2.94(dd,J=14.2Hz & 4.0Hz,1H,H-18),2.31(t,J=7.5Hz,1H,NHCH a ),2.19-2.09(m,3H),1.87-1.68(m,7H),1.68-1.59(m,3H),1.59-1.49(m,4H),1.44-1.36(m,2H),1.30(s,3H,H-27),1.28-1.16(m,17H),1.11(s,3H),1.09-1.08(m,1H),1.03-0.97(m,2H),0.94(s,2H),0.93(s,3H),0.92(s,3H),0.89-0.87(m,5H),0.87(s,3H),0.85(s,2H),0.82(s,3H),0.66-0.53(m,17H)；BBD 13C NMR(150MHz,CDCl3)δ 207.4(C-23),182.7(C-28),173.3(NHCO),143.3(C-13),138.6,137.6,128.4,128.2,126.9,121.8(C-12),101.1(C-1'),85.5,79.5,79.2(C-3),75.2(Bn CH2),75.0(Bn CH2),74.9,74.8(C-16),73.2,54.5,49.0,48.6,46.6,46.3,41.3,40.1(C-6'),39.5(C-8),38.2,36.8(-NHCOCH2-),36.1,35.1,34.6,34.0,32.6,32.,31.8,31.6,30.5,29.5,29.4,29.3,29.2,29.0,26.4,25.8,24.7,24.2,23.2,22.7,20.1,16.9,15.5,14.1,10.4,7.1,7.0,5.1,5.0ppm ppm；C72H116NO10Si2[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1210.8132，實測值1210.8108。
Figure 109118307-A0305-02-0107-79
3-O-{2-O-三乙基矽烷基-3,4-二-O-苄基-6-[9-(4-苯氧基-苯基)壬醯胺基]-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-16-O-三乙基矽烷基-28皂皮酸(120c)
在室溫下將預混合之在1,4-二噁烷(2mL)中的甲酸(129μL,3.4mmol)/Et3N(456μL,3.2mmol)以及在1,4-二噁烷(2mL)中的Pd(OAc)2(18mg,0.08mmol)添加至119c(224mg,0.16mmol)和PPh3(107mg,0.41mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中經攪拌之溶液中。將反應混合物攪拌12小時，然後在減壓下濃縮。以管柱層析法(矽膠，EtOAc/己烷=1/4至1/2)將殘留物純化，得到白色固體狀的120c(154mg,80%)：R f 0.36(EtOAc/己烷=1/2)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.45(s,1H,H-23),7.31-7.21(m,2H),7.10(d,J=8.4Hz,2H),7.04(t,J=7.4Hz,2H),6.96(dd,J=8.7Hz & 1.0Hz,2H),6.90(d,J=8.5Hz,2H),5.89-5.80(m,2H，醯胺NH，內部烯基CH),5.32(t,J=3.7Hz,1H,H-12),4.83(q,J=11.7Hz,2H,Bn CH 2 ),4.67(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH a ),4.57(br.s,1H,H-16),4.51(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH b ),4.02(d,J=6.8Hz,1H,H-1'),3.94(dd,J=10.2Hz & 5.8Hz,1H,H-3),3.63-3.56(m,1H),3.51-3.39(m,3H),3.32-3.21(m,2H),3.00(dd,J=14.2Hz & 3.9Hz,1H,H-18),2.55(t,J=7.5Hz,2H,CH 2 PhOPh),2.33-2.13(m,3H,H-19a,NHCOCH 2 ),1.91-1.83(m,3H),1.83-1.76(m,3H),1.75-1.52(m,11H),1.49-1.40(m,2H),1.34(s,3H),1.29(br.s,11H),1.23(s,3H),1.15(s,3H),1.14-1.00(m,4H),0.98-0.86(m,31H),0.69-0.57(m,16H)；BBD 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ 207.5(C-23),182.0(C-28),173.2(NHCO),157.7,154.8,143.5(C-13),138.5,137.5,132.2,129.6129.4,128.4,128.2,128.1,127.9,127.2,126.8,122.7,121.7(C-12),118.9,118.4,101.0(C-1'),85.5(C-3),79.3,79.0,75.2(Bn CH2),75.0,75.0(Bn CH2),74.9(C-16),73.1,65.0(C-6'),54.5,48.9,48.8,46.6,46.3,41.3,40.4,40.0,39.5,38.1,36.7,36.0,35.2,35.1,34.5,33.8,32.7,32.3,31.5×2,30.5,29.6,29.3×2,29.2,29.1,29.0,26.3,25.7,24.7,24.6,24.2,23.2,20.1,16.9,15.5,10.4,7.1,6.9,5.0,4.9ppm；C83H122NO11Si2[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1364.8551，實測值1364.8567。
Figure 109118307-A0305-02-0109-80
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷醯胺基)-2-O-三乙基矽烷基-β-D-吡喃葡萄糖基)-28-O-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(121a)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,4μL,24μmol)至10(40mg,48μmol)、120a(50mg,35μmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(0.5mL)的經攪拌之懸浮液中。0.5小時後反應完成後，用Et3N淬滅反應，並加熱至室溫。將所得混合物用CH2Cl2稀釋並透過5μm濾紙過濾。在減壓下將所得濾液濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/5至1/2)將殘留物純化，得到121a(37mg,50%)，為白色固體泡沫。R f 0.56(EtOAc/己烷=1/1)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ 9.49(s,1H,H-23),7.33-7.26(m,6H),7.26-7.21(m,4H),7.12(d,J=8.4Hz,1H),7.02-7.00(m,2H),6.96-6.93(m,2H),6.88(d,J=8.6Hz,1H),6.82(d,J=8.4Hz,1H),5.86(t,J=5.1Hz，醯胺NH),5.41(d,J=7.6Hz,1H,H-1"),5.33(t,J=3.4Hz,1H,H-12),5.25(dd,J=3.4Hz & 1.3Hz,1H,H-2'''),5.20(dd,J=9.8Hz & 3.5Hz,1H,H-3'''),5.13(t,J=9.4Hz,1H,H-3''''),4.98(d,J=1.3Hz,1H,H-1'''),4.97-4.94(m,1H,H-4''''),4.88-4.82(m,3H,H-2'''',Bn CH 2 ),5.68(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH a ),4.63(d,J=7.7Hz,1H,H-1''''),4.53(d,J=10.4Hz,1H,Bn CH b ),4.50(br.s,1H,H-16),4.17(t,J=6.0Hz,1H,H-3"),4.12-4.10(m,1H,H-5a ''''),4.04-4.00(m,2H,H-1', H-4"),3.98-3.94(m,1H,H-3),3.89-3.84(m,1H,H-5"),3.84-3.79(m,1H,H-5'''),368-3,64(m,1H,H-2"),3.64-3.59(m,2H,H-6a ',H-4'),3.49(dt,J=13.9Hz,& 3.8Hz,1H H-6b '),3.45-3.39(m,2H,H-2',H-4'),3.36-3.24(m,3H,H-3',H-5',H-5b ''''),2.93(dd,J=14.2Hz & 3.8Hz,1H,H-18),2.56(t,J=7.6Hz,2H,CH 2 PhOPhF),2.22(m,1H,H-19a),2.17(td,J=7.5Hz & 3.4Hz,2H,-NHCOCH 2 -),2.13(s,3H),2.06(s,3H),2.03(s,3H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.90-1.86(m,2H),1.86-1.82(m,1H),1.83-1.76(m,3H),1.74-1.67(m,4H),1.67-1.56(m,5H),1.52(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.52-1.49(m,1H),1.34(s,3H,H-27),1.33(s,3H，亞異丙基CH 3 ),1.30-1.25(m,24H),1.23-1.32(m,1H),1.19(s,3H,H-24),1.13-1.10(m,1H),1.05-1.03(m,1H),1.03-1.01(m,1H),1.01-0.96(m,15H,H-25,TES CH3×4),0.92(s,H,H-30),0.91(s,3H,TES CH3),0.90(s,3H,TES CH3),0.88(s,3H,H-29),0.74(s,3H,H-26),0.68-0.58(m,12H,TES CH2×6)ppm；C115H167FNO28Si2[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值2086.1223，實測值2086.1222。
Figure 109118307-A0305-02-0110-103
3-O-(3,4-二-O-苄基-6-癸醯胺基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-28-O-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(121b)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,4μL,24μmol)至10(40mg,48μmol)、120b(42mg,35μmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(0.5mL)的經攪拌之懸浮液中。0.5小時後反應完成後，用Et3N淬滅反應，並加熱 至室溫。將所得混合物用CH2Cl2稀釋並透過5μm濾紙過濾。在減壓下將所得濾液濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/5至1/2)將殘留物純化，得到121b(37mg,50%)，為白色固體泡沫。R f 0.56(EtOAc/己烷=1/1)；得到121b α/β混合物，為白色固體泡沫。
Figure 109118307-A0305-02-0111-82
3-O-(2-O-三乙基矽烷基-3,4-二-O-苄基-6-[9-(4-苯氧基-苯基)壬醯胺基}-28-O-(2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-2,3-二-O-乙醯基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3,4-O-亞異丙基-β-D-吡喃岩藻糖基)-16-O-三乙基矽烷基皂皮酯(121c)
在-75℃和N2氣體環境下添加BF3．OEt2(約48%,4μL,24μmol)至10(40mg,48μmol)、120c(42mg,35μmol)和活化4Å分子篩粉末在無水CH2Cl2(0.5mL)的經攪拌之懸浮液中。0.5小時後反應完成後，用Et3N淬滅反應，並加熱至室溫。將所得混合物用CH2Cl2稀釋並透過5μm濾紙過濾。在減壓下將所得濾液濃縮。以管柱層析法(矽膠；EtOAc/己烷=1/5至1/2)將殘留物純化，得到121c(37mg,50%)，為白色固體泡沫。R f 0.56(EtOAc/己烷=1/1)；得到121c α/β混合物，為白色固體泡沫。
Figure 109118307-A0305-02-0112-83
3-O-(6-去氧-6-(11-(4-(4-氟苯氧基)苯基)十一烷醯胺基)-β-D-吡喃葡萄糖基)-28-O-(β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基)皂皮酯(122a)
在室溫和1atm H2氣體環境下攪拌121a(32mg,15μmol)和10% Pd(OH)2/C(5mg,4μmol)在THF/MeOH=4/1(1.5mL)中的懸浮液。將反應混合物攪拌12小時。在0℃下將預冷的TFA/H2O=4/1(0.5mL)添加至粗製四醣皂苷在CH2Cl2(0.5mL)中經攪拌的溶液中，並攪拌30分鐘。在0℃及減壓(<1托)下將溶劑蒸發，然後在室溫和高真空下乾燥1小時。添加K2CO3(40mg,300μmol)至殘留物的MeOH(1mL)經攪拌之溶液中，並攪拌12小時。將懸浮液過濾，濃縮，然後透過HPLC純化(HPLC管柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；移動相：25分鐘內由20% ACN/H2O升至90% ACN/H2O之梯度，然後90% ACN/H2O等度15分鐘；流速：5mL/min)，以16%的產率提供白色固體狀的產物122a(3.6mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.41(s,1H,H-23),7.16(d,J=8.4Hz,2H),7.07(t,J=8.8Hz,2H),6.98-6.95(m,4H),6.87(d,J=8.6Hz,2H),5.40(d,J=1.4Hz,1H,H-1'''),5.31(br.s,1H,H-12),5.29(d,J=8.2Hz,1H,H-1"),4.50-4.47(m,2H,H-16,H-1''''),4.14(d,J=7.7Hz,1H,H-1'),3.91-3.89(m,1H,H-2'''),3.86-3.78(m,5H,H-3,H-2",H-3''',H-5''',H-5a ''''),3.68-3.64(m,2H,H-3",H-5"),3.60-3.56(m,1H,H-6a '), 3.56-3.53(m,2H,H-4",H-4'''),3.49-3.42(m,2H,H-5',H-4''''),3.29-3.25(m,3H,H-3',H-6b ',H-3''''),3.23-3.16(m,2H,H-2'''',H-5b ''''),3.09-3.05(m,2H,H-2',H-4'),2.45(dd,J=13.4Hz & 3.2Hz,H-18),2.60(t,J=7.6Hz,2H,CH 2 PhOPhF),2.30(m,1H,H-19a),2.21(t,J=7.6Hz,2H,-NHCOCH 2 -),1.99-1.95(m,1H),1.95-1.91(m,1H),1.80-1.71(m,4H),1.70-1.65(m,1H),1.64-1.59(m,4H),1.55-1.50(m,2H)1.49-1.44(m,1H),1.40(s,3H,H-27),1.36-1.29(m,19H,H-6'''，碳鏈CH 2 ×8),1.20(d,J=6.5Hz,3H,H-6"),1.12(s,3H,H-24),1.10-1.06(m,1H),1.01(s,3H,25),0.99-0.96(m,1H),0.93(s,3H,H-30),0.92-0.89(m,1H),0.87(s,3H,H-29),0.77(s,3H,H-26)；BBD 13C NMR(150MHz,CD3OD)δ 209.3(C-23),177.1(C-28),176.7(醯胺NHCO),160(d,J=240Hz),156.8,155.1,144.9(C-13),139.2,130.8,123.1(C-12),121.2(d,J=8Hz),119.5,117.2(d,J=23Hz),107.0,(C-1''''),105.0(C-1'),101.1(C-1'''),95.2(C-1"),84.0(C-4'''),83.4(C-3),78.2(C-3''''),77.6(C-3'),76.7(C-3"),76.1(C-2''''),75.6(C-2'),75.2(C-5'),74.6(C-16),74.0(C-2"),73.6(C-4"),73.3(C-4'),72.7(C-5"),72.2(C-3'''),71.9(C-2'''),71.1(C-4''''),68.7(C-5'''),67.3(C-5''''),56.1(C-5),50.0(C-17),48.1(C-19,C-9),42.8(C-14),42.4(C-18),41.9(C-6'),41.1(C-8),39.6(C-1),37.3(C-1),36.8(-NHCOCH2-),37.1(C-10),,36.5(C-21),36.2(-CH2PhOPhF),33.6(C-16),3.4(C-29),32.9(C-6),32.0(C-22),31.4(C-20),30.8,30.7,30.6,30.4,27.3(C-2),20.2(C-27),26.0,25.9(C-2),24.9(C-30),24.6(C-11),21.6,(C-7),18.3(C-6'''),17.7(C-26),16.5(C-6"),16.4(C-25),10.6(C-24)ppm；C76H112FNO23Si2Na[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1448.7501，實測值1448.7558。
Figure 109118307-A0305-02-0114-84
3-O-{6-癸醯胺基-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酯(122b)
在室溫和1atm H2氣體環境下攪拌121b(28mg,15μmol)和10% Pd(OH)2/C(5mg,4μmol)在THF/MeOH=4/1(1.5mL)中的懸浮液。將反應混合物攪拌12小時。在0℃下添加預冷的TFA/H2O=4/1(0.5mL)至粗製四醣皂苷在CH2Cl2(0.5mL)中經攪拌的溶液中，並攪拌30分鐘。在0℃及減壓(<1托)下將溶劑蒸發，然後在室溫和高真空下乾燥1小時。添加K2CO3(40mg,300μmol)至殘留物的MeOH(1mL)經攪拌之溶液中，並攪拌12小時。將懸浮液過濾，濃縮，然後透過HPLC純化(HPLC管柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；移動相：25分鐘內由20% ACN/H2O升至90% ACN/H2O之梯度，然後90% ACN/H2O等度15分鐘；流速：5mL/min)，以13%的產率提供白色固體狀的產物122b(2.3mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.42(s,1H,H-23),5.40(s,1H,H-1'''),5.31(br.s,1H,H-12),5.29(d,J=8.2Hz,1H,H-1"),4.51-4.46(m,2H,H-16,H-1''''),4.15(d,J=7.7Hz,1H,H-1'),3.93-3.90(m,1H),3.87-3.78(m,5H),3.71-3.66(m,2H,),3.60-3.53(m,3H),3.49-3.41(m,2H),3.29-3.25(m,3H),3.24-3.17(m,2H),3.09-3.04(m,2H),2.95(d,J=14.1Hz,1H,H-18),2.30(m,1H,H-19a),2.21(t,J=7.6Hz,2H,-NHCOCH2-),2.04-1.88(m,3H),1.69-1.60(m,3H),1.55-1.44(m,4H),1.40(s,3H,H-27),1.35-1.29(m,18H),1.20(d,J=6.5Hz,3H,H-6"),1.12(s,3H),1.10-1.06(m,1H),1.01(s,3H), 0.99-0.96(m,1H),0.95(s,3H),0.93-0.89(m,3H),0.88(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(150MHz,CD3OD)δ 209.4(C-23),177.2(C-28),176.7(醯胺NHCO),144.9(C-13),123.1(C-12),106.9,(C-1''''),105.0(C-1'),101.1(C-1'''),95.2(C-1"),84.0(C-4'''),83.3(C-3),78.1(C-3''''),77.6,76.6,76.1,75.6,75.,74.6(C-16),74.0,73.6,73.3,72.7,72.2,71.9,71.0,68.7,67.3,56.1,50.0,48.1,42.8,42.3(C-18),41.8(C-6'),41.1,39.6,37.3,37.1,36.8(-NHCOCH2-),36.5,36.4,33.6,33.4,33.1,32.0,31.3,30.8,30.7,30.6,30.5,27.3,27.2,26.0,24.8,24.5,23.8,21.6,18.3(C-6'''),17.7,16.5(C-6"),16.3,14.6(碳鏈末端-CH3),10.6ppm；C63H104NO22[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1226.7059，實測值1226.7059。
Figure 109118307-A0305-02-0115-85
3-O-{[9-(4-苯氧基-苯基)壬醯胺基]-6-去氧-β-D-吡喃葡萄糖基}-28-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖基]皂皮酯(122c)
在室溫和1atm H2氣體環境下攪拌121c(20mg,15μmol)和10% Pd(OH)2/C(5mg,4μmol)在THF/MeOH=4/1(1.5mL)中的懸浮液。將反應混合物攪拌12小時。在0℃下將預冷的TFA/H2O=4/1(0.5mL)添加於粗製四醣皂苷在CH2Cl2(0.5mL)中經攪拌的溶液中，並攪拌30分鐘。在0℃和減壓(<1托)下將溶劑蒸發，然後在室溫和高真空下乾燥1小時。將K2CO3(40mg,300μmol)添加至殘留 物的MeOH(1mL)經攪拌之溶液中，並攪拌12小時。將懸浮液過濾，濃縮，然後透過HPLC純化(HPLC管柱：SUPELCO Ascentis C18 25cm×10mm，5μm；移動相：25分鐘內由20% ACN/H2O升至90% ACN/H2O之梯度，然後90% ACN/H2O等度15分鐘；流速：5mL/min)，以30%的產率提供白色固體狀的產物122c(6.2mg)：1H NMR(600MHz,CD3OD)δ 9.41(s,1H,H-23),7.32(t,J=8.2Hz,2H),7.17(d,J=8.4Hz,2H),7.06(t,J=7.5Hz,1H),6.94(d,J=8.2Hz,2H),6.90(d,J=8.2Hz,2H),5.40(br.s,1H,H-1'''),5.31(br.s,1H,H-12),5.28(d,J=8.2Hz,1H,H-1"),4.50-4.46(m,2H,H-16,H-1''''),4.15(d,J=7.8Hz,1H,H-1'),3.92-3.90(m,1H,H-2'''),3.87-3.79(m,5H),3.67-3.64(m,2H),3.60-3.56(m,1H,H-6a '),3.56-3.53(m,2H),3.49-3.42(m,1H,H-4''''),3.36-3.33(m,1H),3.30-3.16(m,5H),3.09-3.05(m,2H),2.97-2.92(m,1H,H-18),2.61(t,J=7.8Hz,2H,CH 2 PhOPh),2.30(m,1H,H-19a),2.21(t,J=7.7Hz,2H，-NHCOCH 2 -),1.98-1.88(m,5H),1.80-1.69(m,4H),1.67-1.59(m,4H),1.55-1.43(m,3H),1.40(s,3H,H-27),1.39-1.33(m,10H),1.31(d,J=6.2Hz,3H,H-6''',),1.29(s,1H),1.20(d,J=6.4Hz,3H,H-6"),1.13(s,3H),1.10-1.03(m,2H),1.00(s,3H),0.98-0.94(m,1H),0.92(s,3H),0.85(s,3H),0.77(s,3H)；BBD 13C NMR(150MHz,CD3OD)δ 209.4(C-23),177.2(C-28),176.7(醯胺NHCO),159.3,156.5,155.1,144.9(C-13),139.2,130.8,124.0,123.1(C-12),120.0,119.4,107.0,(C-1''''),104.9(C-1'),101.1(C-1'''),95.2(C-1"),84.2,83.3(C-3),78.2,77.7(C-3'),76.6,76.2,75.6,75.3,74.6(C-16),74.0,73.6,73.3,72.7,72.3,71.9,71.1,68.8,67.2,56.1,50.1,48.1,42.8,42.4(C-18),41.9(C-6'),41.2,39.6,37.1,37.3,36.5(-NHCOCH2-),36.5,36.2(-CH2PhOPh),33.6,33.4,32.8,31.9,31.3,30.7,30.5,30.3,27.3,27.2,26.0,25.0,24.6,21.6,,18.3(C-6'''),17.8,16.5(C-6"),16.4,10.6ppm；C74H110NO23[M+H]+之HRMS+(ESI-TOF)計算值1380.7463，實測值1380.7476。
實驗例I-皂苷之免疫評估
材料和方法
佐劑原液
將樣本粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。投藥前，將具有0.5%(w/w)Tween 20的原液稀釋至0.5mg/mL，並透過PTFE(0.1μm)過濾。回溶PEK凍乾餅(1mg/mL PEK和0.5mg/mL佐劑)或OVA(100mg)，安慰劑為PBS。
動物和疫苗接種
C57BL/6小鼠獲自台灣國家實驗研究院國家實驗動物中心。透過皮下途徑為週齡4至8週的小鼠接種100μL疫苗，每週一劑，持續三週。第三次疫苗接種後經過一週犧牲小鼠，收集血清和脾細胞。
脾細胞樣本製備和流式細胞儀分析
從小鼠中分離出脾臟組織，並使用PP微量離心機樣本杵將其處理成單細胞懸浮液。以2×107/2mL將脾細胞接種在6孔盤上，使用或不使用HPV16E7-胜肽刺激，並在CO2培養箱中培養2小時。2小時後，在37℃下使用蛋白質轉運抑制劑莫能菌素(Monensin,Invitrogen，目錄編號00-4505-51)和布雷菲爾德菌素(Brefeldin,Invitrogen，目錄編號00-4506-51)處理細胞4小時。之後，收集細胞，用PBS洗滌兩次，然後在4℃下對表面CD3(BioLegend，目錄編號100290)、CD4(Invitrogen，目錄編號56-0041-82)、CD8(Invitrogen，目錄編號12-0081-82)染色30分鐘。洗滌後，在室溫下使用IC固定緩衝液(Invitrogen，目錄編號00-8222-49)將細胞固定30分鐘，然後在通透緩衝液(Invitrogen，目錄編號00-8333-56)中洗滌細胞，並用IFNγ抗體(Invitrogen，目錄編號53-7311-82)染色。在流式細胞儀分析儀(Backman Coulter Gallions)上獲得2000萬個細胞事件。使用Kaluza軟體(1.2版)分析流量數 據。首先將族群圈選在CD3+T細胞上，然後使用前向和側向散射光圈選在活單核細胞上。隨後，次圈選在CD4+/IFNγ+雙重陽性細胞或CD8+/IFNγ+雙重陽性細胞上。
酶聯免疫斑點法(Enzyme-Linked ImmunoSpot,ELISpot)
MabTech小鼠IFNγ ELISpot PLUS套組(3321-4HPW-2)和IL2 ELISpot PLUS套組(3441-4HPW-2)用於評估IFNγ和IL2的產生。按照製造商的說明，使用捕獲抗體將細胞預先平盤培養過夜。由經接種的動物中分離出脾細胞並進行紅血球裂解。然後以2×106/mL使細胞再懸浮，並使100μL細胞與100μL刺激混合試劑(stimulation master mix)結合。該混合試劑包括10μg/mL HPV16E7-pET32a、2μg/mL HPV16E7-胜肽。於37℃在酶聯免疫斑點微孔盤(ELISPOT plate)中培養細胞24小時，並按照製造商的說明進行ELISpot分析。使用AID vSpot Spectrum分析微孔盤。以三重複的平均值計算其值。
酶聯免疫吸附分析(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)
於4℃以100mM碳酸酯緩衝液在96孔盤(1μg/孔，Nunc Maxisorb)中將PEK平盤培養過夜。在37℃下用阻斷緩衝液(含5%牛奶的PBS溶液)阻斷孔盤至少1小時，然後用PBS+0.05% Tween 20洗滌。將2倍連續稀釋的血清樣本添加到孔盤中。1小時後，用PBS+0.05% Tween 20洗滌孔盤，並加入二級抗體。分別添加在1%牛奶-PBS中以1：4000稀釋的過氧化物標記的山羊抗小鼠免疫球蛋白goat anti-mouse IgG1(Southernbiotech，目錄編號1070-05)和goat anti-mouse IgG2b(Southernbiotech，目錄編號1090-05)1小時。用PBS+0.05% Tween 20洗滌孔盤，並用TMB色原溶液(Invitrogen，目錄編號00-2023)顯影15分鐘，然後用終止溶液(0.2N H2SO4)處理。記錄405nm的吸光度。
脾細胞樣本製備和流式細胞儀分析(記憶T細胞)
從小鼠中分離出脾臟組織，並使用PP微量離心機樣本杵將其處理成單細胞懸浮液。以2×107/2mL將脾細胞接種在6孔盤上，在CO2培養箱中培養2小時。2小時後，在37℃下使用或不使用E7胜肽刺激2小時，然後在37℃下用蛋白質轉運抑制劑莫能菌素(Invitrogen，目錄編號00-4505-51)和布雷菲爾德菌素(Invitrogen，目錄編號00-4506-51)處理細胞4小時。之後，收集細胞，用PBS洗滌兩次，然後在4℃下對表面CD3(BioLegend，目錄編號100222)、CD4(BioLegend，目錄編號100540)、CD8(Invitrogen，目錄編號11-0081-86)、CD44(BioLegend，目錄編號103008)、CD62L(BioLegend，目錄編號104412)染色30分鐘。洗滌後，在室溫下使用IC固定緩衝液(Invitrogen，目錄編號00-8222-49)將細胞固定30分鐘，然後在通透緩衝液(Invitrogen，目錄編號00-8333-56)中洗滌細胞，並染以IFNγ抗體(Invitrogen，目錄編號48-7311-82)、IL-2抗體(Invitrogen，目錄編號25-7021-82)和TNFα抗體(Invitrogen，目錄編號48-7321-82)。在流式細胞儀分析儀(Backman Coulter Gallions)上獲得150萬個細胞事件。使用Kaluza軟體(1.2版)分析流量數據。首先使用前向和側向散射光將族群圈選在活單核細胞上，然後圈選在CD3+/CD4+或CD3+/CD8+ T細胞上。接下來，次圈選CD62L-/CD44+記憶T細胞。隨後，在CD4+/IFNγ+、CD8+/IFNγ+CD4+/IL-2+、CD8+/IL-2+、CD4+/TNFα+和CD8+/TNFα+雙重陽性細胞中次圈選。
結果
小鼠疫苗接種模型係使用抗原PE-E7-K3(PEK)、由假單胞桿菌外毒素、人類乳突病毒蛋白E7(HPV16 E7)和KDEL3胜肽序列組成之融合蛋白，用於評估佐劑的效果。每組五隻小鼠，每隔三週使用50μg皂苷和PEK(100μg)進行 免疫三次。然後透過流式細胞儀、ELISpot和ELISA分析本發明皂苷和GPI-0100(作為陽性對照)調節免疫反應的能力。
特異性T細胞活化
第三次投藥後一週，收集小鼠的脾細胞，並以ELISpot量度這些具有PEK抗原的皂苷佐劑對細胞激素(IFNγ和IL-2)產生的影響(圖1)。皂苷佐劑56、63、79大幅增進細胞激素IFNγ的分泌，是GPI-0100的三到四倍，並且在誘導IL-2方面也適中(圖1)。
T細胞活化
以流式細胞儀分析抗原特異性T細胞活化。第三次投藥後一週，收集小鼠的脾細胞，並在流式細胞儀分析儀(Backman Coulter Gallions)上獲得2000萬個細胞事件。首先將族群圈選在CD3+T細胞上，然後使用前向和側向散射光圈選在活單核細胞上。隨後，在CD4+/IFNγ+(或TNFα)雙重陽性細胞或CD8+/IFNγ+(或TNFα)雙重陽性細胞中次圈選。
根據流式細胞儀分析結果(圖2至4)，與GPI-0100相比，脂族鏈修飾的皂苷所導致的PEK特異性CD4+和CD8+ T細胞活化較弱。與GPI-0100相比，末端芳基取代的皂苷56、62、79所誘導的PEK特異性IFN-γ分泌CD8+和TNF-α分泌CD8+ T細胞增殖高4至8倍。然而，皂苷對CD4+ T細胞的誘導作用並不顯著。這些結果表明，本發明的這些皂苷主要介導CD8+ T細胞免疫。
記憶T細胞刺激
已知初始與活化的T細胞表現不同的黏附分子，其被認為因表現顯然有別的黏附分子而表現出不同的移行模式。與初始及活化/記憶T細胞分化相關的兩種黏附分子是CD62L(L-選擇素)和CD44(H-CAM)。已證明初始T細胞表現 出高CD62L和低CD44表型，而記憶T細胞表現出低CD62L和高CD44表型。以活CD8+或CD4+脾細胞表現IFN-γ、TNF-α或IL-2的頻率對T細胞(個別小鼠)進行流式細胞儀分析。測定細胞激素陽性率。流式細胞儀分析證實，相較於接種GPI-0100的小鼠，皂苷56、62、79表現出更高的CD8+ T細胞頻率，這些細胞對IFN-γ或TNF-α呈陽性(圖5和圖6)。顯然，未檢測到任何細胞激素陽性CD4+ T細胞。這些結果表明56、62、79可提供針對E7抗原的持久細胞免疫保護。
抗體生產測定
在每次投藥後，使用ELISA測定血清PEK(由E7包被)特異性IgG抗體效價。如圖7所示，PEK/GPI-0100在C57BL/6小鼠中誘導最高水平的抗體生產。其中，化合物53-56能夠誘導中等程度的E7特異性抗體生產。由於細胞免疫與體液免疫相互抑制，因此化合物誘導較高的細胞毒性T細胞免疫而降低抗體生產是合理的。
對本發明化合物進行免疫分析後的疫苗接種，表明化合物46-62、64、66、77-79、83、92、95是有效的基於皂苷的佐劑，可增進宿主的細胞免疫。具有這些特性的佐劑可與癌症、細菌(結核病)、病毒(HIV、疱疹)、原生動物(瘧疾)等的治療性疫苗結合使用。
毒性
用增加劑量的100μg至1000μg的皂苷56檢驗急毒性。結果以每組5隻小鼠(雌性BALB/c小鼠，9週)在7天內的存活數呈現。測試後，所有小鼠皆存活，其活動性和飲食行為皆無明顯異常。(圖8)
Figure 109118307-A0305-02-0121-86
Figure 109118307-A0305-02-0122-87
結果
結果如圖8所示。接受增加劑量的皂苷佐劑56的小鼠的體重中位數變化百分比皆小於5%。與對照組相比，所有實驗組的脾體細胞指數和肝體細胞指數皆無變化。這些數據表明，皂苷56作為疫苗佐劑是有效且安全的候選藥物。
實驗例II-OVA胜肽疫苗對腫瘤的挑戰
材料和方法
佐劑原液
將樣本粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。
動物和疫苗接種
從台灣國家實驗研究院國家實驗動物中心獲得6-8週齡的雌性C57BL/6小鼠。以200μL含有1.5×106 E.G7-OVA(表現OVA之EL4淋巴瘤)細胞之PBS溶液將小鼠皮下注射。使用游標尺以規則的間隔測量腫瘤體積，並藉以下公式計算：腫瘤體積(mm3)=(長直徑)×(短直徑)2×0.52。當平均腫瘤體積達到約100mm3(第7天)時，將100mL含有100μg OVA的PBS溶液(含有或不含有50μg化合物56)、明礬、QS-21和GPI-0100皮下注射於腫瘤周圍。PBS(200μL)作為對照組。
結果
結合使用小鼠疫苗接種模型與抗原OVA以評估抗腫瘤效用。每組五隻小鼠，每隔三週使用50μg皂苷和100μg OVA進行免疫兩次。使用游標尺分析化合物56和陽性對照組(明礬、QS-21和GPI-0100)的抗腫瘤效用。
抗腫瘤效用
在第7天、第14天兩次對帶有E.G7-OVA腫瘤的小鼠進行皮內接種不同的製劑。與對照組(PBS)相比，以OVA和OVA+明礬治療的小鼠起初表現出輕微的腫瘤生長抑制作用，但治療效果不佳，隨後腫瘤迅速恢復生長。相反，以OVA+化合物56、OVA+QS-21和OVA+GPI-0100治療的小鼠表現出顯著的腫瘤生長抑制作用。此外，OVA+化合物56達到最高的存活率(圖9)。
實驗例III-OVA胜肽疫苗對流感的挑戰
材料和方法
佐劑原液
將樣本粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。
動物和疫苗接種
透過皮下注射100μL疫苗或鼻內途徑投予30μL疫苗對6-8週齡的雌性C57BL/6小鼠進行免疫。所有疫苗液體皆新鮮配製，並用0.5% Tween 20 PBS稀釋。用於皮下注射的疫苗含有單獨或與化合物56(50μg)結合的免疫原NP366-374/NP311-325胜肽。用於鼻內途徑的疫苗含有單獨或與化合物56(30μg)結合的免疫原。兩次疫苗接種後，以110個活PR8病毒的蝕斑形成單位(plaque forming unit，PFU)經鼻內感染小鼠。
結果
結合使用小鼠疫苗接種模型與抗原OVA以評估抗流感效用。每組五隻小鼠以化合物56和NPI/II免疫兩次。兩次疫苗接種後，以110個活PR8病毒的蝕斑形成單位(PFU)經鼻內感染小鼠。相較於僅用NPI和NPII(NPI/II)胜肽免疫的小鼠，使用NPI/II加化合物56免疫的小鼠在PR8感染後具有更高的存活率(圖10)。
實驗例IV-結合SARS-CoV-2抗原與化合物56免疫佐劑之免疫評估
材料和方法
佐劑原液
將樣本粉末溶解在DMSO中至20mg/mL。投藥前，將原液用0.5%(w/w)Tween 20稀釋至0.5mg/mL，並通過PTFE(0.1μm)過濾。
動物和疫苗接種
經由皮下途徑為6至8週齡的雌性C57BL/6小鼠接種SARS-CoV-2棘蛋白且不含明礬或化合物56，並以六週的間隔注射三次。為了測定IgG水平，在每次免疫後10天經由尾動脈收集小鼠的血液。
ELISA
使塗有SARS-CoV-2棘狀RBD His蛋白(0.5μg/孔)的Maxisorp微量滴定盤(Nunc International，Roskilde，丹麥)在硼酸鹽緩衝液(BBS；100mM NaCl,50mM硼酸，1.2mM Na2B4O7,pH 8.2)中於4℃過夜進行ELISA，以測定每組針對SARS-CoV-2棘蛋白的特異性血清IgG的水平。在37℃下用阻斷緩衝液(含5%牛奶的PBS)將微量滴定盤阻斷至少1小時，然後用PBS+0.05% Tween 20洗滌。將5倍連續稀釋的血清樣本添加於微量滴定盤中。1小時後，用PBS+0.05% Tween 20洗滌微量滴定盤。加入在1% BSA-PBS中以1：3000稀釋的過氧化物標記的抗小鼠免疫球蛋白goat anti-mouse IgG(Invitrogen，目錄編號81-6520)1小時。將微量滴定盤用PBS+0.05% Tween 20洗滌，並用TMB色原溶液(Invitrogen，目錄編號00-2023)顯影15分鐘，然後用終止溶液(0.2N H2SO4)處理。記錄450nm處的吸光度。
結果
結合使用小鼠疫苗接種模型與抗原SARS-CoV-2棘狀RBD His蛋白，以評估抗COVID-19的效用。小鼠分為三組：化合物56(50μg)、SARS-CoV-2(2μg)+化合物56(50μg)、SARS-CoV-2(10μg)+明礬(10μg)。
抗體生產測定
在每次投藥後使用ELISA測定血清SARS-CoV-2特異性IgG抗體效價。如圖11所示，SARS-CoV-2+化合物56組在C57BL/6小鼠中誘導最高水平的抗體生產。其中，SARS-CoV-2/化合物56組僅藉由20%的抗原即提高抗體效價1000倍。
Figure 109118307-A0202-11-0002-1

Claims (19)

  1. 一種如式(I)的皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，
    Figure 109118307-A0305-02-0126-88
     其中：
    Figure 109118307-A0305-02-0126-106
    為單鍵或雙鍵；●W為甲基(Me)、-CHO、
    Figure 109118307-A0305-02-0126-89
    、-CH2ORx、-C(O)Rx，其中，Rx為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基；●V為H或OH；●Y為CH2、-O-、-S-、-NR-或-NH-；●Q為CH2、C=O、C=N-OH或C=N-OMe；●X為CH2、-O-、-NH-、-NH-(C=O)-、-S-或O-(C=O)-；●R為選自由醯基、至少5個碳原子的脂族、雜脂族、芳基、芳基-脂族、環脂族、雜環-脂族、雜芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所組成之群組的任選取代的環狀或非環狀的部分，或選自由下列所組成之群組：C5-C18脂族、5至10員芳基脂族、具有1至4個獨 立選自氮、氧及硫組成之群組的雜原子的5至10員雜芳基-脂族、具有1至2個獨立選自氮、氧和硫組成之群組的雜原子的4至7員雜環-脂族，或具有以下結構
    Figure 109118307-A0305-02-0127-90
    Figure 109118307-A0305-02-0127-91
    ，其中，Rz為烷基，Xa為O、NH、或S，n為1至20；●R1獨立地為氫、氧保護基或具有單醣結構的碳水化合物，該氧保護基選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組；及●Z為氫、直鏈寡醣、支鏈寡醣或為選自由胺、醯胺、醯基、芳烷基、芳基、雜芳基、脂族、雜脂族、脂環族和雜環基所組成之群組的任選取代的部分。
  2. 如請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，其中R為雜脂族、芳基-脂族、雜環-脂族、雜芳基-脂族、烷氧基-脂族或芳氧基-脂族。
  3. 如請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，其中Z為直鏈四醣或直鏈三醣，其中第一個糖殘基直接與Y相連。
  4. 如請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，其中W為CHO且V為OH。
  5. 如請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，其中Q為C=O且X為-NH-。
  6. 如請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，其中Q為CH2且X為O-C(=O)。
  7. 如請求項2之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，其中R為：
    Figure 109118307-A0305-02-0128-92
     ，其中，Rz為烷基。
  8. 如請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類，該皂苷共軛物具有以下結構：
    Figure 109118307-A0305-02-0129-94
  9. 一種疫苗組合物，其包含一抗原和請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類。
  10. 如請求項9之疫苗組合物，其進一步包含一附加佐劑。
  11. 如請求項9之疫苗組合物，其進一步包含一醫藥學上可接受的載體或稀釋劑。
  12. 如請求項9之疫苗組合物，其中該抗原係選自由細菌抗原、病毒相關抗原和腫瘤相關抗原所組成之群組。
  13. 如請求項12之疫苗組合物，其中該細菌抗原是與細菌相關的抗原，所述細菌係選自由百日咳鮑特氏菌(Bordetella pertussis)、副百日咳鮑特氏菌(Bordetella parapertussis)、支氣管炎鮑特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)、疏螺旋體屬(Borrelia spp.)、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)、肺炎披衣菌(Chlamydia pneumoniae)、解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum)、肺炎黴漿菌(Mycoplasma pneumoniae)、葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、鏈球菌屬(Streptococcus spp.)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、草綠色鏈球菌(Streptococcus viridans)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)、沙門桿菌屬(Salmonella spp.)、傷寒沙門氏桿菌(Salmonella typhi)、霍亂弧菌(Vibrio cholera)、鼠疫巴氏桿菌(Pasteurella pestis)、彎曲桿菌屬(Campylobacter spp.)、空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)、梭菌屬(Clostridium spp.)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、白喉棒狀桿菌(Corynebacterium diphtheria)、分枝桿菌屬(Mycobacterium spp.)、結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、密螺旋體屬(Treponema spp.)、鉤端螺旋體屬(Leptospria spp.)、杜克雷氏嗜血桿菌(Hemophilus ducreyi)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、大腸桿菌(Escherichia coli)、志賀氏桿菌屬 (Shigella spp.)、艾利希體屬(Ehrlichia spp.)、立克次體屬(Rickettsia spp.)及其組合所組成之群組。
  14. 如請求項12之疫苗組合物，其中該病毒相關抗原是與病毒相關的抗原，所述病毒係選自由流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腺病毒、呼吸道融合性病毒、艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus；EBV)、鼻病毒、脊髓灰白質炎病毒、柯薩奇病毒(coxsackievirus)、艾柯病毒(echo virus)、麻疹病毒、風疹病毒、水痘帶狀疱疹病毒、疱疹病毒、疱疹單純型病毒、微小病毒、巨細胞病毒、肝炎病毒、人類乳突病毒、阿爾法病毒(alphavirus)、黃病毒、布尼雅病毒(bunyavirus)、狂犬病病毒、沙狀病毒、絲狀病毒、HIV-1、HIV-2、HTLV-1、HTLV-II、貓白血病病毒(feline leukemia virus，FeLV)、牛白血病病毒(bovine leukemia virus，bovine LV)、貓免疫缺陷病毒(feline immunodefiency virus，FeIV)、犬瘟熱病毒、犬傳染性肝炎病毒(canine contagious hepatitis virus)、貓杯狀病毒、貓鼻氣管炎病毒、豬傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、口蹄疫病毒、冠狀病毒、登革熱病毒及其組合所組成之群組。
  15. 如請求項12之疫苗組合物，其中該腫瘤相關抗原是選自以下群組的抗原：已殺死的腫瘤細胞及其溶胞產物；MAGE-1、MAGE-3及其胜肽片段；人絨毛膜促性腺激素及其胜肽片段；癌胚胎抗原及其胜肽片段；甲型胎兒蛋白及其胜肽片段；胰胚胎抗原(pancreatic oncofetal antigen，POA)及其胜肽片段；前列腺特異性抗原及其胜肽片段；MUC-1及其胜肽片段；CA 125、CA 15-3、CA 19-9、CA 549、CA 195及其胜肽片段；前列腺特異性膜抗原及其胜肽片段； 扁平上皮細胞癌相關抗原及其胜肽片段；卵巢癌抗原及其胜肽片段；胰臟癌相關抗原及其胜肽片段；Her1/neu及其胜肽片段；gp-100及其胜肽片段；突變型K-Ras蛋白及其胜肽片段；突變型p53及其胜肽片段；截短型表皮生長因子受體(truncated epidermal growth factor receptor)、嵌合蛋白p210BCR-ABL、STn、Tn、Lewisx、Lewisy、TF、GM1、GM2、GD2、GD3、Gb3、KH-1、Globo-H、SSEA-4；及其混合物。
  16. 一種藥物組合物，其包含一種或多種請求項1之皂苷共軛物或其醫藥學上可接受的鹽類。
  17. 如請求項16之藥物組合物，其進一步包含醫藥學上可接受的賦形劑。
  18. 一種如式(II)的皂苷共軛物中間體或其醫藥學上可接受的鹽類：
    Figure 109118307-A0305-02-0132-95
     其中：●
    Figure 109118307-A0305-02-0132-122
    為單鍵或雙鍵；●W為Me、-CHO、
    Figure 109118307-A0305-02-0132-96
    、-C(O)Rx或CH2ORx，其中Rx獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基；●V為氫或-ORx； ●Y為CH3、-OH、-SH、-NHR5、-NH2或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯及碳酸酯所組成群組的氧保護基，其中R5選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組；●Q為CH2、C=O、C=N-OH或C=N-OMe；●X為CH2、-O-、-NH-、-NH-(C=O)-、-S-、O-(C=O)-或-N3；●R1獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基，或具有以下結構的碳水化合物
    Figure 109118307-A0305-02-0133-97
     其中：■a、b和c每次出現獨立地為0或1；■R0獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基； ■Ra、Rb、Rc及Rd每次出現獨立地為氫、鹵素、OH、OR、ORx；Rx每次出現獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基；且●R為選自由醯基、至少5個碳原子的脂族、雜脂族、芳基、芳基-脂族、環脂族、雜環-脂族、雜芳基-脂族、烷氧基-脂族及芳氧基-脂族所組成之群組的任選取代的環狀或非環狀部分，或選自由下列所組成之群組：C5-C18脂族、5至10員芳基脂族、具有1至4個獨立選自氮、氧及硫的雜原子所組成的群組的5至10員雜芳基-脂族、具有1至2個獨立選自氮、氧和硫所組成的群組的雜原子的4至7員雜環脂族，或不存在。
  19. 如請求項18之式(II)皂苷共軛物中間體或其醫藥學上可接受的鹽類，其係藉由使式(III)結構所示化合物與式(IV)結構所示化合物或其醫藥學上可接受的鹽類反應而獲得，
    Figure 109118307-A0305-02-0134-98
     式(III)中：●R1獨立地為氫、或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基或具有以下結構的碳水化合物
    Figure 109118307-A0305-02-0135-99
     其中：■a、b和c每次出現獨立地為0或1；■R0獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基；■Ra、Rb、Rc及Rd每次出現獨立地為氫、鹵素、OH、OR、ORx；Rx每次出現獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基；■LG為離去基
    Figure 109118307-A0305-02-0135-100
     式(IV)中：●
    Figure 109118307-A0305-02-0135-104
    為單鍵或雙鍵；●W為Me、-CHO、
    Figure 109118307-A0305-02-0135-101
    、-CH2ORx或-C(O)Rx；●V為氫或-ORx； ●Y為CH3、-OH、-SH、-NHR5、-NH2或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基；且R2、Rx或R5獨立地為氫或選自由烷基醚、烯丙基醚、苄基醚、矽烷基醚、縮醛、縮酮、酯、胺基甲酸酯和碳酸酯所組成的群組的氧保護基。
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