CN104736550B

CN104736550B - 有机化合物

Info

Publication number: CN104736550B
Application number: CN201380050112.1A
Authority: CN
Inventors: 本杰明·杰森·康普顿; 柯林·马尔科姆·海曼; 伊恩·弗朗西斯·赫曼斯; 大卫·塞缪尔·拉森; 加文·弗兰克·佩特; 里根·詹姆斯·安德森
Original assignee: Victoria Link Ltd
Current assignee: Victoria Link Ltd
Priority date: 2012-07-26
Filing date: 2013-07-26
Publication date: 2017-12-29
Anticipated expiration: 2033-07-26
Also published as: CA2880191C; WO2014017928A1; AU2013293646A1; EP2877481B1; EP2877481A4; EP2877481A1; US9586985B2; JP2015522656A; AU2013293646B2; JP6528029B2; US20150191503A1; CA2880191A1; IN2015KN00492A; KR20150073942A; KR102162619B1; CN104736550A

Abstract

本发明涉及神经鞘糖脂类似物、包含这些化合物的组合物、用于制备该化合物的方法以及使用该化合物治疗或预防疾病或病症(如涉及感染、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症的疾病或病症)的方法。

Description

有机化合物

发明领域

本发明通常涉及某些神经鞘糖脂类似物、这些化合物的前提和前药、包含这些化合物的组合物(包括药物组合物和佐剂组合物)、用于制备该化合物的方法以及使用该化合物治疗或预防疾病或病症(尤其是涉及感染、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症的疾病或病症)的方法。

背景

非变异天然杀伤T细胞(NKT)是涉及多种疾病的一类T细胞。在一些情况下，其可增强对感染(Kinjo,lllarionov等2011)和癌症(Wu,Lin等2011)的应答，还具有抑制自身免疫疾病(Hong,Wilson等2011)和II型糖尿病的能力。NKT细胞的激活还可导致不需要的与过敏(Wingender,Rogers等2011)、自身免疫(Zeng,Liu等2003)和动脉粥样硬化(Tupin,Nicoletti等2004)相关的免疫应答。

与受呈递肽抗原的主要组织相容性复合物(MHC)分子限制的常规T细胞不同，NKT细胞独特地受CD1d蛋白的限制(Bendelac,Savage等2007)。CD1d蛋白属于含有5个成员(CD1a-e)的CD1家族。与MHC分子类似，CD1家族成员都含有抗原结合区域，其侧翼为位于一个β折叠上的两个反向平行α螺旋。与MHC分子不同，CD1的抗原结合区域含有两个大的疏水结合口袋，其适用于结合脂质抗原而非基于肽的抗原(Li,Girardi等2010)。α-半乳糖苷神经酰胺(α-GalCer)是研究得最多的NKT细胞抗原并强效激活人和小鼠NKT细胞(Kawano,Cui等1997)。在动物研究中，α-GalCer被报道可用于治疗多种疾病，包括癌症(Morita,Motoki等1995；Motoki,Morita等1995)和自身免疫疾病(Hong,Wilson等2001)。还证明该化合物可在癌症和感染性疾病的治疗和预防中作为强力疫苗佐剂发挥作用(Silk,Hermans等2004)。该佐剂活性归因于活化的NKT细胞与树突细胞(DC)(体内最强效的抗原呈递细胞)之间的刺激性相互作用。结果是，DC能够促进强适应性免疫应答(Fujii,Shimizu等2003；Hermans,Silk等2003)。

虽然α-GalCer具有相当高的生物活性，但其仍具有限制，例如低溶解性(Ebensen,Link等2007)、在人临床试验中缺乏功效(Giaccone,Punt等2002)、促进T细胞无反应性(Parekh,Wilson等2005)和生成会在模型研究中导致混合结果的Th1和Th2细胞因子。

因此，本发明的目的是提供可用作治疗与感染、自身免疫疾病、变应性疾病或癌症相关的疾病或病症的试剂的新颖化合物，或者至少提供有用的替代物。

发明内容

在第一方面，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

R¹是H或糖基，条件是如果R¹是糖基，则R²和R³都是OH且R⁴是CH₂OH；

R²选自H、OH、F和OR¹⁰，条件是如果R²是H、F或OR¹⁰，则R¹是H、R³是OH且R⁴是CH₂OH；

R³选自H、OH、F和OR¹⁰；条件是如果R³是H、F或OR¹⁰，则R¹是H、R²是OH且R⁴是CH₂OH；

R⁴是CH₃、CH₂OH、CH₂OCOR¹¹、CH₂OR¹⁰、CH₂OR¹¹、CH₂OSO₃H、CH₂SH、CH₂SR¹¹、CH₂SOR¹¹、CH₂SO₂R¹¹、CH₂PO₃H₂、CH₂OP(O)(OH)₂、CH₂OP(O)(OH)(OR¹¹)、CH₂OP(O)(OR¹¹)₂、CO₂H、CH₂NHCOR¹¹、CH₂NHCO₂R¹¹、CH₂NHCONH₂、CH₂NHCONHR¹¹、CH₂NHCON(R¹¹)₂、CH₂N(R¹¹)₂、CH₂NHSO₂R¹¹；条件是如果R⁴不是CH₂OH，则R¹是H且R²和R³是OH；

R⁵是H；

或R⁵是式(i)基团：

其中Y是以下各式基团

各E¹相同或不同，独立地选自H、烷基、烷氧基、卤素、硝基烷基，或者与其相连的环一起形成稠合二环芳基；

p是1-4的整数；

t是1-2的整数；

Alk¹是C₁-C₄直链烷基；

其中，当Y是式(a)或(b)的基团时，则Z是：

或者，当Y是式(c)、(d)、(e)、(f)或(j)的基团时，则Z是：

u是1或2；

各A¹相同或不同，独立地选自：

可选被一种或多种取代基取代的烷基，所述取代基选自(OCH₂CH₂)_mOMe、NHC(O)OR¹⁴、烷氧亚氨基、氧、卤素、烷氧基、NHCOCH₂(OCH₂CH₂)_mOMe、

可选被一种或多种取代基取代的烯基，所述取代基选自(OCH₂CH₂)_mOMe、烷氧基亚氨基、氧、卤素和烷氧基；

可选被一种或多种取代基取代的芳基，所述取代基选自(OCH₂CH₂)_mOMe、烷基、烷氧基、二烷基氨基、硝基、卤素；或者

可选被一种或多种取代基取代的芳烷基，所述取代基选自(OCH₂CH₂)_mOMe、烷氧基亚氨基、氧、卤素、烷基、烷氧基、二烷基氨基和硝基；

m是10-1500的整数；

E²和A²各自独立地选自H和A¹；

A⁴选自H、甲基、CH₂CH₂CH₂NHC(＝NH)NH₂、CH₂C(＝O)NH₂、CH₂C(＝O)OH、CH₂SH、CH₂CH₂C(＝O)OH、CH₂CH₂C(＝O)NH₂、CH₂(CH₂)₃NH₂、CH₂CH₂SCH₃、CH₂OH、

或者A⁴与其相连的碳和该碳相邻的氮一起形成吡咯烷环；

A⁵是H或苄氧基羰基；

R⁶是OR¹²、OH或H；

R⁷是OR¹²、OH或H；条件是R⁶和R⁷中至少一个是OR¹²；其中，当R⁶是OR¹²时，R⁷是H、R⁸是C_1-C₁₅烷基且X是O。则指可选的双键，其连接R⁷相邻的碳与R⁸相邻的碳；

R⁸是H或具有直链或支链碳链的C_1-C₁₅烷基，其中，碳链中可选地含有一个或多个双键、一个或多个三键、一个或多个氧原子和/或末端或非末端的可选取代的芳基；

R¹⁰是糖基；

R¹¹是低级烷基、低级烯基或芳烷基；

R¹²是具有直链或支链碳链的C_6-C₃₀酰基，其可选地在酰基的位置2和/或3处被一个或多个羟基和/或可选取代的链终止酰基取代，且其可选地含有一个或多个双键、一个或多个三键和/或一个或多个可选取代的亚芳基，其中，碳链可选地被一个或多个重氢原子取代；且芳基或亚芳基上可选的取代基可选自卤素、氰基、二烷基氨基、C_1-C₆酰胺、硝基、C_1-C₆烷氧基、C_1-C₆酰氧基和C_1-C₆硫代烷基；

R¹⁴是可选取代的烷基、芳基或芳烷基；

X是O、CH₂或S；

当X是O或S时n是1；或者当X是CH₂时n是0或1；

其中，当X是CH₂时，以下特征全部具备：式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基(galacto)；R¹是H；R²和R³都是OH；R⁴是CH₂OH、CH₂OR¹⁰或CH₂OR¹¹；且：

R⁶是OH且R⁷是OR¹²且碳原子2、3和4处的立体化学是(2S,3S,4R)、(2S,3S,4S)、(2R,3S,4S)、(2R,3S,4R)或(2S,3R,4S)；或者

R⁶是OR¹²且R⁷是H，且R⁸是C₁₃H₂₇且碳原子2和3的立体化学是(2S,3S)；

其中，当X是S时，以下特征全部具备：式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基；R¹是H；R²和R³都是OH；R⁴是CH₂OH、CH₂OR¹⁰、CH₂OR¹¹或CO₂H；且：

R⁶是OH且R⁷是OR¹²且碳原子2、3和4处的立体化学是(2S,3S,4R)；或者R⁶是OR¹²且R⁷是H且碳原子2和3的立体化学是(2S,3S)。

优选地，式(I)的化合物是式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中X、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、Y、Z、A¹、A²、A⁴、A⁵、E¹、E²、Alk¹、p、t、m、u和n全部如上文所定义。

优选地，式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基。

优选地，X是O。

优选地，式(I)中的n是1，式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基，R⁶是OH且R⁷是OR¹²。同样优选地，式(I)中的n是1，式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基，R⁶是OH、R⁷是OR¹²且碳原子2、3和4处的立体化学是(2S,3S,4R)。

或者优选地，式(I)中的n是0，X是CH₂，式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基，R⁶是OH且R⁷是OR¹²。同样优选地，式(I)中的n是0，式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基，R⁶是OH、R⁷是OR¹²且碳原子2、3和4处的立体化学是(2S,3S,4R)。

优选地，在式(I)中，当X是O、R⁶是OR¹²、R⁷是H、R⁸是C_1-C₁₅烷基且是连接R⁷相邻的碳与R⁸相邻的碳的双键时，碳原子2和3的立体化学是(2S,3S)。

优选地，R¹是H。

同样优选地，R²是OH。更优选地，R¹是H且R²是OH。

优选地，R³是OH。

优选地，R⁴是CH₂OH。同样优选地，R⁴是CH₂OH且R¹是H。同样优选地，R⁴是CH₂OH、R²是OH且R¹是H。更优选地，R⁴是CH₂OH、R¹是H且R²和R³都是OH。

优选地，R⁶是OH。或者优选地，R⁶是OR¹²。

优选地，R⁷是OR¹²。更优选地，R⁷是OR¹²且R⁶是OH。更优选地，R⁷是OR¹²、R⁶是OH且X是O。

或者优选地，R⁷是OH。更优选地，R⁶是OR¹²且R⁷是OH。

或者优选地，R⁶和R⁷都是OR¹²。

或者优选地，R⁷是H且R⁶是OR¹²。

优选地，R⁸是C_1-C₁₅烷基。更优选地，R⁸是具有直链或支链碳链的C_1-C₁₅烷基，其不含有双键、三键、氧原子或芳基。更优选地，R⁸是具有直链或支链碳链的C₁₃烷基，其不含有双键、三键、氧原子或芳基。更优选地，R⁸是C_1-C₁₅烷基、R⁷是OR¹²且R⁶是OH。更优选地，R⁸是C_1-C₁₅烷基、R⁷是OR¹²、R⁶是OH且X是O。

优选地，R¹¹是烷基，更优选地是低级烷基。

优选地，R⁵是H。

或者，优选地，R⁵是式(i)基团。更优选地，X是O且R⁵是式(i)基团。

优选地，m是10-25的整数，更优选地，m是10-15的整数。或者优选地，m是100-150的整数，更优选地，m是110-140的整数。更优选地，m是120-130的整数。

优选地，Y是更优选地，X是O且Y是

优选地，Z是更优选地，当Y是时Z是

或者，优选地，Z是更优选地，当Y是时Z是

优选地，A¹是烷基，例如低级烷基(如甲基或叔丁基)或芳基(如苯基)。

或者优选地，A¹是被一个或多个取代基取代的烷基，所述取代基选自(OCH₂CH₂)_mOMe、NHC(O)OR¹⁴、烷氧基亚氨基、(其中m如本文所定义，优选地是10-25的整数，例如10-15的整数，或者更优选地是100-150的整数，例如105-140的整数)和氧；其中m是10-25的整数，例如10-15的整数；R¹⁴是可选取代的烷基、芳基或芳烷基，例如苯基。优选地，R¹⁴是苯基。更优选地，A¹是其中m如本文所定义，优选地是10-25的整数，例如10-15的整数，或者优选地是100-150的整数，例如105-140的整数；R¹⁵是芳烷基，例如苯基；且R¹⁶是烷基，例如低级烷基，例如甲基。

优选地，A²是H。同样优选地，E²是H。更优选地，A²和E²都是H。

优选地，R⁵是式(i)基团且R¹是H，且R²和R³是OH。更优选地，R⁵是式(i)基团其中Y是且R¹是H，且R²和R³是OH。更优选地，R⁵是式(i)基团其中Y是且R¹是H，R²和R³是OH且R⁴是CH₂OH。

优选地，R¹²是具有长度为6-30个碳原子的直链碳链的酰基。更优选地，R¹²是C₂₆酰基。更优选地，R¹²是具有直链碳链的C₂₆酰基，其不含有双键、三键、氧原子、芳基且是未取代的。更优选地，X是O且R¹²是具有长度为6-30个碳原子的直链碳链的酰基。

优选地，式(I)或(Ia)的化合物中的任何卤素都是氟。

优选地，式(I)的化合物选自以下化合物或其药学上可接受的盐：

同样优选地，式(I)的化合物选自以下化合物或其药学上可接受的盐：

在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含药学有效量的式(I)的化合物和可选的药学上可接受的运载体。

在另一个方面，本发明提供了一种免疫原性组合物，其包含式(I)的化合物、抗原和药学上可接受的稀释剂。

在另一个方面，本发明提供了一种疫苗，其包含式(I)的化合物、抗原和药学上可接受的稀释剂。

该抗原可以是细菌，如卡介苗(BCG)、病毒或肽。合适的抗原的示例包括但不限于韦尔姆斯肿瘤蛋白1(Wilms’Tumor 1,WT1)(Li,Oka等2008)、肿瘤相关抗原MUC1(Brossart,Heinrich等1999)、潜伏膜蛋白2(LMP2)(Lu,Liang等2006)、HPV E6E7(Davidson,Faulkner等2004)、NY-ESO-1(Karbach,Gnjatic等2010)和糖蛋白100(gp100)(Levy,Pitcovski等2007)。

在另一个方面，本发明提供了一种与至少一种其他化合物联用的式(I)的化合物，所述其他化合物是例如第二药物化合物，例如抗病毒剂或抗癌剂，如维罗非尼(PLX4032)、伊马替尼或卡非佐米。

在另一个方面，本发明提供了式(I)的化合物作为药物的应用。

在另一个方面，本发明提供了式(I)的化合物在治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症中的应用。

在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物在治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症中的应用，所述药物组合物包含药学有效量的式(I)的化合物。

在另一个方面，本发明提供了用于药物生产的式(I)的化合物。

在另一个方面，本发明提供了一种包含式(I)的化合物的药物组合物，其用于治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症。

在另一个方面，本发明提供了式(I)的化合物在药物生产中的应用，所述药物用于治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症。

在另一个方面，本发明提供了一种治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症的方法，所述方法包括向需要治疗的患者给予药学有效量的式(I)的化合物。

在另一个方面，本发明提供了与至少一种其他化合物联用的式(I)的化合物在治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症中的应用，所述其他化合物是例如第二药物化合物，例如抗病毒剂或抗癌症剂，如维罗非尼(PLX4032)、伊马替尼或卡非佐米。

在另一个方面，本发明提供了一种治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症的方法，该方法包括给予患者与至少一种其他化合物联用的药学有效量的式(I)的化合物，所述其他化合物是例如第二药物化合物，例如抗病毒剂或抗癌症剂，如维罗非尼(PLX4032)、伊马替尼或卡非佐米。所述式(I)的化合物与所述其他化合物可以单独、同时或连续给予。

该疾病和病症包括癌症，例如黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、胶质瘤、淋巴瘤、结肠癌、头颈癌和鼻咽癌(NPV)；感染性疾病；细菌性感染；特应性疾病；或自身免疫疾病。

在另一个方面，本发明提供了改变患者体内免疫应答的方法，该方法包括给予患者式(I)的化合物和抗原。

优选地，该患者是人。

式(I)的化合物可选自上文所定义的化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(j)、(k)、(n)、(o)、(p)和(m)。

式(I)的化合物在本文中称为“本发明的化合物”。本发明的化合物包括任何形式的化合物，例如游离形式或者盐或溶剂合物形式。

应理解，本文公开的任意子范围，例如相对于X、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、Y、Z、A¹、A²、A⁴、A⁵、E¹、E²、Alk¹、p、t、u、m和n，可与本文公开的任意其他子范围联用以生成进一步的子范围。

发明详述

定义

术语“癌症”和类似术语指患者体内的疾病或病症，其特征通常是不正常或不受调控的细胞生长。癌症和癌症病理学可以与以下事件相关：例如转移、干扰相邻细胞的正常功能、以不正常水平释放细胞因子和其他分泌性产物、细胞增殖、肿瘤形成或生长、炎性或免疫应答的抑制或加剧、瘤形成、初癌、恶性肿瘤、周围或远端组织或器官(如淋巴结)的侵入等。示例包括肺癌、胶质瘤、淋巴瘤、结肠癌、头颈癌和鼻咽癌(NPV)、黑素瘤、慢性髓细胞性白血病(CML)、骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌、恶性胶质瘤、肾细胞癌和肝癌。

“感染”和类似术语指患者体内的疾病或病症，包括微生物的内部和/或外部生长或建立。微生物包括小至肉眼不可见的所有活的形式，包括细菌、病毒、真菌和原生动物。包括好氧和厌氧细菌，以及革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，如球菌、杆菌、螺旋菌和分枝杆菌。本文中详细描述了具体的感染性疾病。示例包括细菌或病毒感染。

“特应性疾病”和类似术语指患者体内的疾病或病症，其特征通常是不正常或上调的免疫应答，例如IgE介导的免疫应答和/或Th2-细胞免疫应答。这可包括超敏反应(例如I型超敏)，特别是与以下一种或多种相关：过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、特应性皮炎和过敏性(如外源性)哮喘。通常，特应性疾病与鼻液溢、打喷嚏、鼻塞(上呼吸道)、气喘、呼吸困难(下呼吸道)、痒(如眼、皮肤)、鼻甲水肿、触诊窦痛、皮肤苔藓样硬化、喘鸣、低血压和过敏性反应。本文中详细描述了具体的特应性疾病。

术语“患者”包括人和非人动物。非人动物包括但不限于鸟类和哺乳类动物，具体是小鼠、兔、猫、狗、猪、绵羊、山羊、奶牛、马和负鼠。

术语“治疗”和类似术语指方法和组合物，其用于预防、治疗或缓解内科疾病、紊乱或病症，和/或降低这类疾病或病症的至少一种症状。具体而言，这包括具有以下用途的方法和组合物：预防或延迟内科疾病、紊乱或病症的发生；治疗、校正、降低、延缓或缓解内科疾病、紊乱或病症的物理或发育影响；和/或预防、终止、降低或缓解内科疾病、紊乱或病症所导致的疼痛或痛苦。

术语“烷基”指任何具有最多30个碳原子的饱和烃基且包括任何C₁-C₂₅、C₁-C₂₀、C₁-C₁₅、C₁-C₁₀或C₁-C₆烷基，并旨在包括直链和支链烷基。烷基的示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-乙基丙基、正己基和1-甲基-2-乙基丙基。

术语“低级烷基”指任何具有1-6个碳原子的饱和烃基并旨在包括直链和支链烷基。

任何烷基都可选被一种或多种取代基取代，所述取代基选自羟基和卤素(如氟)。

术语“烯基”指任何具有至少一个双键并具有最多30个碳原子的烃基，且包括任何C₂-C₂₅、C₂-C₂₀、C₂-C₁₅、C₂-C₁₀或C₂-C₆烯基，并旨在包括直链和支链烯基。烯基的示例包括乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、仲丁烯基、叔丁烯基、正戊烯基、1,1-二甲基丙烯基、1,2-二甲基丙烯基、2,2-二甲基丙烯基、1-乙基丙烯基、2-乙基丙烯基、正己烯基和1-甲基-2-乙基丙烯基。

术语“低级烯基”指任何具有至少一个双键并具有2-6个碳原子的烃基，并旨在包括直链和支链烯基。

任何烯基都可选被一种或多种取代基取代，所述取代基选自烷氧基、羟基和卤素(如氟)。

术语“芳基”指具有4-18个碳原子的芳族基团，且包括杂芳基。示例包括单环基团以及稠合基团(如双环基团和三环基团)。示例包括苯基、茚基、1-萘基、2-萘基、薁基、庚搭烯基(heptalenyl group)、联苯基、引达省基(indacenyl group)、苊基、芴基、非那烯基(phenalenyl group)、菲基、蒽基、环戊并环辛烯基，和苯并环辛烯基、吡啶基、吡咯基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三唑基(包括1-H-1,2,3-三唑-1-基和1-H-1,2,3-三唑-4-基)、四唑基、苯并三唑基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、嘌呤基、吲唑基、呋喃基、吡喃基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、苯并噻唑基、恶唑基和异恶唑基。

术语“芳烷基”指与亚烷基部分相连的芳基，其中芳基如上文所定义。示例包括苄基。

任何芳基或芳烷基都可选被一种或多种取代基取代，所述取代基选自烷基、卤素、氰基、二烷基氨基、酰胺(N-连接的和C-连接的：-NHC(O)R和-C(O)NHR)、硝基、烷氧基、酰氧基和硫代烷基。

术语“烷氧基”指OR基团，其中R是上文所定义的烷基。术语“低级烷氧基”指OR基团，其中R是上文所定义的“低级烷基”。

术语“烯氧基”指OR′基团，其中R′是上文所定义的烯基。

术语“芳氧基”指OR″基团，其中R″是上文所定义的芳基。

术语“酰基”指C(＝O)R″′基团，其中R″′是上文所定义的烷基。

术语“糖基”指来源于环状单糖、二糖或寡糖、通过移除半缩醛羟基生成的基团。示例包括α-D-吡喃葡糖基、α-D-吡喃半乳糖基、β-D-吡喃半乳糖基、α-D-2-脱氧-2-乙酰胺基吡喃半乳糖基。

术语“酰胺”包括N-连接(-NHC(O)R)和C-连接(-C(O)NHR)的酰胺。

术语“药学上可接受的盐”旨在适用于来源于无机酸或有机酸的非毒性盐，包括例如以下酸盐：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、对-甲苯磺酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐和十一烷酸盐。

出于本发明的目的，公开的化合物包括所有可能的配制、构型和构象，例如游离形式(如游离的酸或碱)、盐或水合物形式、异构体形式(如顺式/反式异构体)、立体异构体(如对映异构体、非对映异构体和差向异构体)、对映异构体或非对映异构体的混合物形式、外消旋物或外消旋混合物的形式或者单个对映异构体或非对映异构体的形式。本文中详细描述了特定的化合物形式。

本说明书中参考的任何现有技术文件都不应被认为是承认该现有技术是本领域众所周知的或构成本领域普通知识的一部分。

如本说明书中所用，“包括”、“包含”和类似词语不应被理解为排他性或穷举性含义。换言之，其旨在表示“包括但不限于”。

本发明的化合物

本发明的化合物，特别是作为示例的那些，可用作药物，特别用于治疗或预防与感染、特应性疾病、自身免疫疾病或癌症相关的疾病或病症。本发明的化合物还可用作疫苗佐剂。例如，本发明的化合物可与一种或多种抗原一起配制在疫苗中。

本发明的化合物可以游离碱形式或盐和/或溶剂合物形式使用。

如下所述对式(I)的化合物的无环部分的碳原子进行编号。这是本文用于指示这些碳原子的编号。

本发明涉及以下出乎意料的发现，在合成α-GalCer的过程中，使用Pd(OH)₂对化合物1的氢解去保护导致分离出大量的CN089(方案1)。具体而言，当在35℃下在3:7CHCl₃/MeOH中对1进行Pd(OH)₂催化的氢解时，除预期的产物外，还分离到了17％产量的极性更高的化合物。该化合物经测定为胺CN089，这是一种α-GalCer异构体，其中C₂₆酰基链经历了1,3N→O迁移。使用2D-NMR技术确定侧链的O4上酰基的位置。虽然酰基的分子内N→O迁移是文献中已知的，但其通常发生于强酸介质中(Baadsgaard和Treadwell 1955；Drefahl和Horhold 1961；Butler,O′Regan等1978；Schneider,Hackler等1985；Johansen,Korno等1999)。不希望受理论的束缚，申请人假定在该情况下，在氢解条件下溶剂CHCl₃中会生成一定量的HCl，导致可见的迁移。对照实验显示，在类似的反应条件下，但在缺失H₂气氛的情况下，α-GalCer不会异构化为CN089。虽然已报道了通过Pd催化的氢解从CHCl₃中生成HCl(Secrist和Logue 1972；Turner,Booher等1977)，但尚未报道其将酰胺异构化为酯的应用(有意地或其他)。实际上，在α-GalCer或其类似物的其他合成的最终去保护步骤(氢解)中，CHCl₃被成功地用作助溶剂，而没有报道过酰基迁移副反应(Ivlurata,Toba等2005；Luo,Kulkarni等2006；Matto,Modica等2007；Park,Lee等2008；Tashiro,Hongo等2008；Cheng,Chee等2011；Zhang,Zhao等2011)。

方案1

用于形成CN089的替代性条件如下：在具有HCl水溶液的1,4-二噁烷中加热α-GalCer时，进行了C₂₆酰基的N→O迁移并在色谱后以65-70％产量分离出CN089。

在注射至小鼠时，CN089以NKT细胞依赖的方式强效激活DC，其特征为脾DC表面上的激活标记CD86的表达升高(图1)。观察到的活性是由于CN089在注射前回复为α-GalCer。在CN089形成的1小时内，可通过LCMSMS观察到约50％向α-GalCer的转化。当N→O酰基迁移被氨基的乙酰化(即化合物CN090)有意地阻断时，未观察到任何DC的激活，表明O4上C₂₆酰基链的位置(如同在CN089中)导致无活性构建体。

目前已发现，含有与CN089或其同类物相连的“触发”基团(R⁵)的本发明的化合物(如方案2中式(I’)的化合物所示)可用作药物。不希望受理论的束缚，申请人指出这类物质是化学稳定的，但可被酶切割或在体内在特定位点处切割，并构建有用的前药，所述前药可用作胺(I″)(如CN089)的前体，其继而进行N→O酰基迁移以生成胺(II)(如α-GalCer)。本领域技术人员应理解，式(I″)的化合物也是本发明的化合物，其中R⁵是H。

方案2

本文所述方法的一个益处是可广泛地改变R⁵以调节本发明的化合物的物理特性和药代动力学，并应在体内代谢后是否共同的产物(如α-GalCer)，其与CD1d相互作用并激活NKT细胞的功能与母体化合物(如α-GalCer)相同。

因此，在本发明的其他实施方式中，可对化合物(I″)进行化学修饰以生成一系列前药化合物，其是本发明的式(I)的化合物(例如表1和方案3中所示的那些)。

方案3

表1：某些本发明的化合物

已证明，与α-GalCer类似，本发明的化合物刺激NKT细胞，如在体内通过DC激活测量的那样(图2)。

然而出乎意料的是，某些本发明的化合物(如CN141、CN145、CN147和CN158)对NKT细胞的激活在体内诱导生成了不同的细胞因子概况(与α-GalCer诱导的那些相比)(图3和8)。注射α-GalCer诱导生成了良好纪录的细胞因子概况，其中血清中IL-4水平在2-3小时后达到峰值，随后高水平的IL-12p70在6小时处达到峰值，且IFN-γ在12小时后达到峰值。相反地，与α-GalCer相比，化合物CN141、CN145和CN147产生了IFN-γ与IL-4比例更高的概况，且IL-12p70水平在6-12小时内仍持续增加。在将化合物用作单个试剂时，释放IFN-γ多于IL-4且具有持续IL-12p70的概况预期对癌症治疗有益。在一些情况下，当化合物用作佐剂时，Th1偏向(高IFN-γ/IL-4比例)可具有优势，特别是在需要Th1偏向的T细胞或细胞毒性T淋巴细胞的疫苗环境中，如癌症、微生物感染或过敏(Fujii,Shimizu等2002；Wu,Lin等2011)。

可能更出乎意料的事实是，对于CN158没有检测到任何全身细胞因子(图8)，而该化合物在与模式肿瘤抗原共同给药时可作为有效的免疫佐剂发挥作用，提供与共同给予抗原和α-GalCer相比类似的T细胞应答(图9)和抗肿瘤活性(图10)。因此，在该治疗模型中，与NKT细胞触发的大量细胞因子释放相比，糖脂的佐剂特性更主要。实际上，一些研究表明，初免时高水平的炎性细胞因子对T细胞应答的质量具有负面影响，并且应在疫苗策略中避免(Badovinac,Porter等2004)。因此，本发明提供的益处是能够“调节”化合物以降低体内的细胞因子生产，同时保留在一些免疫策略中具有益处的佐剂特性。化合物CN141和CN145也属于该类别，因为其在总细胞因子生产水平上没有α-GalCer那么强效(图3)，但在促进抑制鼠黑素瘤中已建立的肿瘤生长的免疫应答方面具有等同的益处(图4)。总之，这些结果表明，可通过对本发明的基团R5进行化学修饰来实现细胞因子概况的倾斜或细胞因子的显著减少，从而导致有益的结果。

不希望受理论的束缚，申请人指出，对于这些观察可能的解释是本发明的化合物与σ-GalCer相比不同的药代动力学(Sullivan,Nagarajan等2010)。例如，合成了化合物CN141、CN150和CN151。CN150在苯环上含有吸电子对硝基取代基，与CN141相比可能延缓苯甲酸酯键的切割。相反地，CN151含有吸电子对硝基取代基，可能提高了切割率。实际上情况也是如此，因为在早期时间点，CN151比CN141提供了更多的激活而CN141比CN150提供了更多的激活(图5，第1天)，而在较晚的时间点(第3天)，可以观察到CN141和CN150之间类似的激活。

某些本发明的化合物(如CN147和CN158，其水溶解度分别为0.5mg/mL和38mg/mL)提供了增加溶解度的优势(与α-GalCer相比)并可以无需配制直接使用。α-GalCer的低水溶性使其需要配制(Giaccone,Punt等2002)，这增加了任何药物研发项目的花费和时间以及最终产物的成本。

某些本发明的化合物(如CN141和CN145)的生物活性不限于鼠系统，因为这些化合物能够诱导人NKT细胞从外周血单核细胞(PBMC)中扩张(图6)。

其他方面

可通过多种途径将本发明的化合物给予患者，包括口服、胃肠道外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻、口颊、静脉内、肌肉内、皮内、皮下或经由植入的储器，优选静脉内。待给予的化合物量可根据患者的性质和待治疗疾病的性质和程度广泛地变化。通常针对成人的剂量范围是50-4800μg/m²。任何特定患者所需的特定剂量取决于多种因素，包括患者的年龄、体重、总体健康情况、性别等。

对于口服给药，本发明的化合物可配制为固体或液体制剂，例如片剂、胶囊剂、粉末剂、溶液剂、混悬剂和分散剂。这类制剂是本领域熟知的，同样熟知的是本文中未列出的其他口服给药方案。在片剂形式中，可使用常规的常规片剂基料(如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)与粘合剂、崩解剂和润滑剂一起将该化合物制成片剂。该粘合剂可以是例如玉米淀粉或明胶，该崩解剂可以是玉米淀粉或海藻酸，且该润滑剂可以是硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服给药，可使用稀释剂(如乳糖和干燥的玉米淀粉)。可添加其他组分，如着色剂、甜味剂和调味剂。

当口服使用需要水性悬浮液时，可将活性成分与运载体(如水和乙醇)混合，并可使用乳化剂、助悬剂和/或表面活性剂。还可添加着色剂、甜味剂和调味剂。

还可通过在生理上可接受的稀释剂(如水和盐水)中注射的方式给予该化合物。该稀释剂可包含一种或多种其他成分，如乙醇、丙二醇、油或药学上可接受的表面活性剂。在一个优选实施方式中，该化合物通过静脉内注射给予，其中稀释剂包含蔗糖、L-组氨酸和药学上可接受的表面活性剂(如吐温20)的水溶液。

该化合物还可局部给予。用于局部给予化合物的运载体包括矿物油、液状石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。该化合物可作为洗液或乳膏剂的成分存在，用于局部给予至皮肤或粘膜。这类乳膏剂可含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的运载体中的活性化合物。合适的运载体包括矿物油、单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、十六十八醇、2-辛基十二烷醇、苄基醇和水。

该化合物还可通过缓释系统给予。例如，可将其整合至缓慢溶解的片剂或胶囊剂中。

本发明的化合物的合成

总合成策略包括在酸性条件下对α-GalCer或其同类物(其是上文方案2中所示式(II)的化合物)以生成具有游离氨基的化合物，其中脂肪酸迁移至鞘氨醇链上的O原子(式(I″)的化合物，其是本发明的化合物)，随后对游离氨基进行官能化以生成本发明的式(I’)的化合物(例如，如方案4、5和7所示)。该方法无法实现某些目标。方案6所示的替代性策略中涉及合成N-保护的中间体6，随后使用R¹²对鞘氨醇链羟基进行酰基化以生成化合物7。在多个官能团转化后，切割N保护基团以生成式(I’)的化合物，其通过常规方式转化为式(I’)的化合物。

方案4

根据以下总体步骤制备本发明的化合物(I″)：

用于合成式(I″)的化合物的总方法(1)

(其中R⁴是Me、CH₂OH、CH₂OR¹⁰、CH₂OR¹¹、CO₂H；R⁶是OH且R⁷是OR¹²，或R⁶是H且R⁷是OR¹²，或R⁶＝OR¹²且R⁷＝H。)

方案5

根据本文参考的文献方法合成式(II)的起始材料(其中R⁴是Me、CH₂OH、CH₂OR¹⁰、CH₂OR¹¹、CO₂H；R⁶是OH且R⁷是OH，或R⁶是H且R⁷是OH，或R⁶是OH且R⁷是H)，且在一些情况下，通过合并两种或多种文献方法的原理来合成(对于近期关于α-GalCer类似物合成的综述，参见Banchet-Cadeddu等(Banchet-Cadeddu,Henon等2011))。例如，所有的α-GalCer合成中的关键步骤是在糖基化反应中偶联合适保护的供体与合适官能化的受体。已在α-GalCer类似物的合成中使用了多种供体，其导致基团R¹-R⁴和这些基团的立体化学发生变化。报道了供体合成的方法，其中R¹是糖基(Veerapen,Brigl等2009)，R²或R³是O-糖基(Kawano,Cui等1997)，R²或R³是H或F(Raju,Castillo等2009)，R⁴是Me(Tashiro,Nakagawa等2008)、CH₂OR¹⁰(Uchimura,Shimizu等1997)、CH₂OR¹¹(Tashiro,Nakagawa等2008)或CO₂H(Deng,Mattner等2011)。还可使用同样多的受体。例如，已在还允许修饰基团R⁸的方法中合成了保护的植物鞘氨醇受体的全部8种立体异构体(Park,Lee等2008；Baek,Seo等2011)。此外，还描述了3-脱氧(Baek,Seo等2011)和4-脱氧植物鞘氨醇(Morita,Motoki等1995；Howell,So等2004；Du,Kulkarni等2007)衍生物。这些受体与各种供体的组合生成了保护的α-GalCer衍生物，其通过上文参考的文献方法转化为未保护的α-GalCer类似物，其保护本总方法1中的起始材料(II)(其中X是O)。对于其中X是CH₂且R⁷是OH的起始材料(II)，已描述了合成方法(Chen,Schmieg等2004；Lu,Song等2006；Wipf和Pierce 2006；Pu和Franck 2008)。通过在报道的方法中应用用于中间体XI和XII的保护基团化学，可改变基团R⁴。

对于其中X是CH₂且R⁷是H的起始材料(II)，根据报道的方法对其进行合成(Chen,Schmieg等2004)，其中使用鞘氨醇作为起始材料以代替植物鞘氨醇。对于其中X是S的起始材料(II)，已描述了合成方法(Dere和Zhu 2008；O′Reilly和Murphy 2011)。

在适当温度(60-100℃)下将起始材料(II)(约5mM)在合适的溶剂(例如10:11,4-二噁烷-水)中与酸(例如1M HCI、TFA)一起搅拌直至反应被判断为约75％完全(TLC)。除去溶剂并在硅胶上通过柱色谱纯化粗残留物。

用于合成式(I″)的化合物的替代性总方法(2)

(其中，X是O；R¹是H；R²和R³是OH；R⁴是Me、CH₂OH、CH₂OCOR¹¹、CH₂SH、CH₂SR¹¹、CH₂SOR¹¹、CH₂SO₂R¹¹、CH₂NHCOR¹¹、CH₂NHCO₂R¹¹、CH₂NHCONH₂,CH₂NHCONHR¹¹、CH₂NHCON(R¹¹)₂、CH₂NHSO₂R¹¹、CH₂PO₃H₂、CH₂OSO₃H或CH₂OPO₃H；R⁶是OR¹²且R⁷是OH，或R⁶是OH且R⁷是OR¹²，或R⁶和R⁷是OR¹²，或R⁶是H且R⁷是OR¹²，或R⁶是OR¹²且R⁷是H。)

方案6

(4e处为表示双键)

化合物2a-c(Sakurai和Kahne 2010)(方案6)的游离羟基使用THF或DMF中作为碱的NaH进行苄基化或对甲氧基苄基化。根据报道的针对二苄基化合物的方法将产物3a-c转化为受体4a-c(Plettenburg,Bodmer-Narkevitch等2002；Lee,Farrand等2006)。PMB酯4d获自D-核糖-植物鞘氨醇，如同对相应的Bn酯所报道的那样(Trappeniers,Goormans等2008；Baek,Seo等2011)。PMB酯4e获自鞘氨醇，其方法为a)使用三氟甲烷磺酰叠氮化物将氨基转化为叠氮基；b)对伯羟基进行TBDPS保护；c)对仲羟基进行PMB保护；d)去甲硅烷基化。在干燥的THF/酯中使用适当保护的糖基三氯乙酰亚胺酯供体(1.5当量)和TMSOTf(0.1当量)作为激活剂进行糖基化。适当的保护基团包括苄基和二叔丁基亚甲硅烷基。在施陶丁格(Staudinger)条件(PMe₃，THF随后NaOH水溶液)下还原5a-e的叠氮基，随后在CH₂Cl₂中使用Boc20进行胺保护。在CH₂Cl₂-水中使用CAN或DDQ切割6a-e的PMB基团并在DDC、DMAP存在的情况下使用适当的羧酸(R₁₂OH)对游离羟基进行酯化以生成酯7a-e。使用TBAF切割二叔丁基甲硅烷基以生成中间体8a-e，其可使用多种方式处理以生成具有多种不同R⁴基团的式(I″)的化合物。例如，氢解并随后进行N-Boc去保护生成了式(I″)的化合物(其中R⁴是CH₂OH)。或者，可对8的伯羟基进行酯化、硫酸化或磷酸化，随后以类似的方式进行去保护，从而生成式(I″)的化合物(其中R4是CH₂OCOR¹¹、CH₂OSO₃H或CH₂OPO₃H₂)。将8的伯羟基转化为离去基团(如碘、甲苯磺酸)并随后进行亲核取代生成了硫醚和相关衍生物、胺、氨基甲酸酯/盐、脲、N-磺酸酯/盐和磷酸酯/盐，随后通过除去保护基团生成了式(I″)的化合物。

根据以下总体步骤将胺(I″)进一步转化为本发明的其他化合物(如总方法(3)中的式(I’)的化合物所示)：

用于合成式(I)的化合物的替代性总方法(3)

方案7

对于式(I)的化合物(其中R⁵是式(i)的基团)的制备(方案7)，在室温下将胺(I″)(0.05-0.1M)、活化的碳酸盐或酯10-16(其中Y’是式(I)的本文定义的Y或Y的受保护形式)(1.05-2当量)和NEt₃(0-2当量)在合适的溶剂(如吡啶、吡啶-CHCl₃、CHCl₃-MeOH)中搅拌至基本反应完全(TLC)。在对混合物进行浓缩后，在硅胶上通过柱色谱纯化残留物。随后通过标准方法除去基团Y中任何保护基团：对于磷酸苄酯和N-Cbz基团使用Pd催化的氢解，对于硫酸叔丁酯和N-Cbz基团使用TFA/CH₂Cl₂，对于N-Fmoc基团使用哌啶并对于三氯乙基保护的硫酸酯/盐使用MeOH/THF或MeOH/CH₂Cl₂中的Zn/NH₄OCHO(Ingram和Taylor 2006；Taylor和Desoky 2011)。在硅胶或C18硅胶上通过色谱纯化去保护的产物。

试剂10-16的制备

方案8

通过在20-80℃下将4-硝基苯基碳酸碘甲酯(Gangwar,Pauletti等1997)或4-硝基苯基碳酸对氯苯酯(Alexander,Cargill等1988)与羧酸、硫代酸或二苄基磷酸的银盐在合适的溶剂(如干燥的MeCN或干燥的甲苯)中反应来制备试剂10(方案8)。包含4埃分子筛可以是有益的。通过过滤除去银盐后，在硅胶上通过色谱纯化产物。当Z是氧代二氧烯基(oxodioxolenyl)时，可根据文献方法(Alexander,Bindra等1996；Sun,Cheng等2002)制备试剂10。

方案9

根据或使用文献方法合成试剂11和12(方案9)(Greenwald,Pendri等1999)。通常，在合适的碱(如吡啶、i-Pr₂NEt)存在的情况下使适当取代的苄醇与氯甲酸对硝基苯酯在CH₂Cl₂中反应。或者，在吡啶存在的情况下使苄醇与二琥珀酰碳酸酯/盐反应。苄醇市售可得或可通过转化市售可得的2-或4-羟基苯甲醛或2-或4-羟基苄醇来获得。

例如，对于其中Z是Ν,Ν-二烷基硫代氨基甲酸酯/盐(即-SCON(A¹)₂)的苄醇，可根据文献方法(Lin 2000)将各种取代的2-或4-羟基苯甲醛转化为苯硫酚衍生物，涉及a)使酚基与Ν,Ν-二烷基硫代氨基甲酰氯反应；b)使用THF中的LiBH₄还原醛；在250℃下在醚类溶剂(如Ph₂O或双(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)醚)中加热以对硫代氨基甲酸酯/盐官能团进行Newman-Kwart重排反应(参见下文方案10)。当Z是-SCONHA¹或-SCOA¹时，上文中获得的硫代氨基甲酸酯/盐可使用KOH进行水解以生成苯硫酚，其可以与异氰酸酯反应以生成N-单烷基硫代氨基甲酸酯(Gryko,Clausen等1999)或在偶联试剂(如DCC、EDC)存在的情况下使用酸或使用酸性氯化物和NEt₃进行酰化以生成硫酯(参见方案10)。随后通过激活苄基羟基将这些产物转化为试剂11，如上文所述。

方案10

当试剂11和12中的Z是磷酸时，报道了羟基苄醇中受保护的磷酸三酯(Li,Luo等1998)。

当试剂11和12中的Z是-OCONA¹ ₂时，这些衍生物获自羟基苯甲醛衍生物与氨基甲酰氯试剂的反应。或者，这些物质可获自将1°-OH保护的羟基苄醇衍生物与光气等效物(如4-硝基苯氯甲酸酯)反应之后与仲胺反应。

当试剂11和12中的Z是-OSO_uA¹时，这些衍生物获自羟基苯甲醛衍生物与氯化亚砜、磺酰氯或磺酸酐的反应。

当试剂11和12中的Z是-OSO₃H时，这些衍生物获自使用受保护的硫酸化试剂(如Cl₃CCH₂OSO₂Cl或2,2,2-三氯乙氧基磺酰-N-三氟甲基咪唑鎓(2,2,2-trichloroethoxysulfuryl-N-methylimidazolium triflate))对羟基苄醇或羟基苯甲醛衍生物的酚O原子进行硫酸化(Ingram和Taylor 2006；Taylor和Desoky2011)。

试剂13和14根据或通过使用文献方法合成(Carpino,Triolo等1989；Amsberry和Borchardt 1991；Amsberry,Gerstenberger等1991；Nicolaou,Yuan等1996；Greenwald,Choe等2000)，或者通过以下方法合成。

方案11

当Z是NO₂、N₃或NHCOCH(A⁴)NH₂时，可选在18-冠-6存在的情况下，使用烷基碘和合适的碱(如NaH、KO^tBu、n-BuLi)对各种取代的6-硝基苯乙酸酯(获自商业来源，或通过已知方法获得，或通过相应的6-硝基苯甲酸酯的Ardnt-Eistert同系化反应(homologation)获得(Atwell,Sykes等1994)))进行偕-二烷基化。将二烷基化产物通过酸性氯化物进行Ardnt-Eistert同系化反应(CH₂N₂；随后加热或Ag(II))。可通过胺将硝基转化为叠氮化物或受保护的氨基酸胺(之前将羧基暂时还原成醇氧化水平以防止不成熟的内酰胺化作用(lactamization))。用于氨基酸的合适的保护基团(方案11中的PG)是苄氧基羰基(Cbz)、芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔丁氧基羰基(Boc)。通过标准方法将这些产物转化为活化酯13(L＝pNPO或NHS)。或者，在偕-二烷基化后，使用类似的官能团转化顺序以获得活化酯14。

当试剂13和14中的Z是-SCONA¹ ₂、-SCONHA¹、-SCOA¹、磷酸、-OCONA¹ ₂OSO_uA¹或OSO₃H时，这些化合物衍生自酚衍生物XIII(Greenwald,Choe等2000；Hillery等Cohen 1983)，如上文中试剂11和12的制备所述。

活化酯15由相应的酸(Hillery和Cohen 1983；Carpino,Triolo等1989；Amsberry和Borchardt 1991)通过标准方法制备。

活化酯16获自酚XIV的衍生化，根据文献方法(Liao和Wang 1999)和/或与上文所述化学方法结合使用。

附图简要说明

图1显示了树突细胞上的CD86表达。该数据显示注射本发明的化合物诱导了NKT细胞的激活和随后树突细胞的成熟。向C57BL/6小鼠组(n＝3)静脉内注射200ng的所示化合物，随后在20小时后移出脾用于通过抗体标记和流式细胞术分析CD11c+树突细胞上的CD86表达。显示了平均荧光指数±SEM。

图2显示了树突细胞上的CD86表达。该数据显示注射本发明的化合物诱导了NKT细胞的激活和随后树突细胞的成熟。向C57BL/6小鼠组(n＝3)静脉内注射200ng的所示化合物，随后在20小时后移出脾用于通过抗体标记和流式细胞术分析CD11c+树突细胞上的CD86表达。显示了平均荧光指数±SEM。

图3显示了注射本发明的化合物后细胞因子释放至血清的动力学。向C57BL/6小鼠组(n＝3/组)静脉内注射200ng的所示化合物，随后在所示时间点收集血清用于通过细胞因子珠阵列技术分析细胞因子水平。

图4显示了与肿瘤相关抗原共同给予时本发明的化合物对于肿瘤生长的作用。监测动物中皮下B16.OVA肿瘤的进展，所述动物在肿瘤攻击后七天经静脉内使用OVA蛋白与所示化合物治疗或使用PBS治疗。显示了每组(n＝5)的平均肿瘤尺寸±SEM。这些数据显示共同给予本发明的化合物和肿瘤疫苗提供了治疗性抗肿瘤活性。

图5显示了所给予化合物对于脾B细胞成熟的作用，方法为测量NKT细胞活性。向C57BL/6小鼠组(n＝3)静脉内注射所示剂量的α-GalCer(αGC)或200ng的所示化合物，随后在注射后20小时时移出脾用于通过流式细胞术进行分析。基于特异性针对泛B细胞标记CD45R的荧光抗体的结合来鉴定B细胞。显示了结合B细胞上细胞表面成熟标记CD86的抗体的平均荧光指数(MFI)。

图6显示了本发明的化合物对于人NKT细胞增殖的作用。来自一个供体的PBMC与不同剂量的所示化合物在IL-2存在的情况下培养7天，随后使用荧光α-GalCer加载的CD1d四聚体和抗CD3通过流式细胞术测定最终培养物中NKT细胞的百分比。数据表示为NKT细胞(α-GalCer/CD1d四聚体和抗CD3结合细胞)占全部T细胞(所有抗CD3结合细胞)的百分比。

图7显示了树突细胞上的CD86表达。数据显示注射本发明的化合物诱导了NKT细胞的激活以及随后树突细胞的成熟。向C57BL/6小鼠组(n＝3)静脉内注射200ng的α-GalCer或等摩尔量的所示化合物，随后在20小时后移出脾用于通过抗体标记和流式细胞术分析CD11c+树突细胞上的CD86表达。显示了平均荧光指数±SEM。(化合物CN158A1b＝根据实施例15配制的CN158。化合物CN158A＝水中的CN158。)

图8显示了注射α-GalCer后细胞因子释放至血清的动力学。对于本发明的化合物CN158，没有观察到可检测的细胞因子。向C57BL/6小鼠组(n＝3/组)静脉内注射200ng的α-GalCer或等摩尔量的所示化合物，随后在所示时间点收集血清用于通过细胞因子珠阵列技术分析细胞因子水平。(化合物CN158A1b＝根据实施例15配制的CN158。化合物CN158A＝水中的CN158。)

图9显示了将本发明的化合物作为佐剂静脉内注射至小鼠后对肽抗原SIINFEKL特异的T细胞的细胞技术。注射化合物以提供与α-GalCer相比等摩尔的剂量。为提高反应的灵敏度，最初时向所有小鼠提供一组10000个SIINFEKL特异性T细胞，所述T细胞来自编码该抗原的T细胞受体的转基因小鼠(OT-1小鼠)，所述转基因小鼠通过在给予疫苗前一天注射细胞来形成。为区分提供的T细胞和宿主本身的T细胞，提供的细胞具有CD45分子的CD45.1变体的同类系表达。因此，能够使用针对CD45.1的抗体与针对转基因T细胞受体的抗体(Va2)通过流式细胞术对血液内的SIINFEKL特异性T细胞进行计数。数据显示注射α-GalCer与蛋白抗原OVA诱导了SIINFEKL特异性T细胞群体，且注射本发明的化合物与OVA诱导了类似的T细胞扩张。向对照动物注射稀释剂磷酸盐缓冲盐水(PBS)。各点代表不同的动物；显示了每个治疗组的平均值±SEM。***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05。

图10显示了与肿瘤相关抗原共同给予时本发明的化合物对于肿瘤生长的作用。监测动物中皮下B16.OVA肿瘤的进展，所述动物在肿瘤攻击后七天经静脉内使用OVA蛋白与所示化合物治疗或使用PBS治疗。显示了每组(n＝5)的平均肿瘤尺寸±SEM。这些数据显示共同给予本发明的化合物(CN158)或等摩尔量的α-GalCer和肿瘤相关抗原提供了治疗性抗肿瘤活性。(化合物CN158A＝水中的CN158。)

缩写

NMR 核磁共振

HRMS 高分辨率质谱

ESI 电喷雾电离

Cbz 苄氧基羰基

RT 室温

THF 四氢呋喃

PBS 磷酸盐缓冲盐水

HPLC 高效液相色谱

FCS 胎牛血清

MS 质谱

TFA 三氟乙酸

TLC 薄层色谱

DMF 二甲基甲酰胺

DCC Ν,Ν′-二环己基碳二亚胺

NHS N-氧琥珀酰亚胺

实施例

本文所述实施例用以解释本发明的实施方式。其它实施方式、方法和分析类型在本领域一般技术人员技术范围内，无需在此赘述。其它本领域范围内的实施方式也应作为本发明的一部分。

无水溶剂是市售可得的。空气敏感性反应在Ar下进行。薄层色谱(TLC)在涂覆了60F₂₅₄硅胶的铝片上进行。快速柱色谱在默克(Merck)或SiliCycle硅胶(40-63μm)或SiliCycle反相(C18)硅胶(40-63μm)上进行。NMR谱记录于布鲁克(Bruker)500MHz分光光度计上。¹H NMR谱参考0ppm的四甲基硅烷(内部标准)或氘化的溶剂峰(CHCl₃7.26ppm，CHD₂OD3.31ppm)。¹³C NMR谱参考0ppm的四甲基硅烷(内部标准)或氘化的溶剂峰(CDCl₃77.0ppm，CD₃OD 49.0ppm)。CDCl₃-CD₃OD溶剂混合物始终参考甲醇峰。高分辨率电喷雾电离质谱记录在Q-Tof Premier质谱仪上。

实施例1-合成(2S,3S,4R)-2-氨基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-二十六烷酰基(hexacosanoyl)十八烷-1,3,4-三醇(CN089)

实施例1.1-合成(2S,3S,4R)-2-叠氮基-3,4-O-二苄基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基十八碳-6-烯-1,3,4-三醇(18)

向冰冷的全(三甲基甲硅烷基)半乳糖(Bhat和Gervay-Hague 2001)(1.44g,2.66mmol)的干燥CH₂Cl₂溶液(13mL)中逐滴添加TMSI(0.34mL,2.5mmol)。将混合物在0℃下搅拌40分钟，随后在室温下搅拌10分钟，之后转移至含有CH₂Cl₂(12mL)中Bu₄NI(2.9mg,7.9mmol)、i-Pr₂NEt(0.90mL,5.2mmol)、4埃分子筛(200mg)和受体17(442mg,0.847mmol)的烧瓶中。将反应在室温和Ar下搅拌24小时，之后使用甲醇(0.3mL,3h)猝灭反应以破坏任何剩余的半乳糖基碘。在使用石油醚(100mL)稀释并通过硅藻土过滤后，对滤液使用10％NaS₂O₃水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并浓缩以生成黄色油状物质(1.7g)。通过在室温下与DOWEX 50 WX8-200树脂(200mg)在5:1MeOH-CH₂Cl₂(36mL)搅拌60分钟来除去甲硅烷基，之后减压过滤并浓缩以生成黄色固体物质(926mg)。在硅胶上进行快速色谱(5％-15％i-PrOH/CH₂Cl₂)以生成未反应的受体17(54mg，90％纯，11％)，之后是E/Z混合物形式的18(381mg,66％)。Z异构体的数据：¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ0.88(t,J＝7.0Hz,3H),1.24-1.35(m,18H),2.00-2.04(m,2H),2.42-2.47(m,3H),2.56(br,1H),3.25(br,1H),3.39(br,1H),3.61-3.72(m,6H),3.78-3.83(m,2H),3.86-3.89(m,1H),4.02(d,J＝2.7Hz,1H),4.06(dd,J＝2.5,10.6Hz,1H),4.51(d,J＝11.6Hz,1H),4.61-4.66(m,3H),4.89(d,J＝3.7Hz,1H),5.43-5.54(m,2H),7.26-7.35(m,10H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ14.1,22.7,27.6,28.0,29.3,29.4,29.54,29.56,29.63,29.7,31.9,62.3,62.9,69.1,69.3,69.9,70.3,70.8,72.0,73.9,78.7,79.9,99.5(¹J_CH＝170Hz),124.3,127.7,127.9,128.0,128.40,128.44,132.8,137.7,138.1；HRMS-ESI m/z计算针对C₃₈H₅₇N₃O₈Na[M+Na]⁺706.4043，结果是706.4034。

实施例1.2-合成(2S,3S,4R)-3,4-O-二苄基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-2-二十六烷酰基氨基十八碳-6-烯-1,3,4-三醇(1)

将叠氮化物18(267mg,0.39mmol)的10:1THF-水(11mL)溶液与PMe₃(THF中1M溶液，1.95mL，1.95mmol)在0℃下搅拌45分钟，随后在室温下搅拌2小时，之后添加1M NaOH溶液(3.9mL)。将该双相混合物在室温下搅拌2小时后，使用EtOAc(4mL)淬灭反应并在室温下静置过夜。将反应混合物在水和CH₂Cl₂之间分配并将产物充分萃取至有机相，干燥(MgSO₄)并减压浓缩以得到粗胺产物(310mg)。在单独的烧瓶中，向无水CH₂Cl₂(5mL)中二十六烷酸(205mg,0.517mmol)和NEt₃(0.10mL,0.72mmol)的混合物添加氯甲酸异丁酯(68μl,0.52mmol)，并在室温下搅拌35分钟，之后在冰上冷却并转移至冰冷的上述胺的CH₂Cl₂(4mL)溶液中。将反应搅拌25分钟并使用饱和NaHCO₃水溶液(20mL，5分钟)淬灭反应，之后使用CH₂Cl₂萃取产物。此时，向有机萃取物中添加Et₂NH(0.5mL)以破坏过滤的活化酯。将溶液干燥(MgSO₄)并减压浓缩以得到粗产物(506mg)。在硅胶上进行快速色谱(6％-8％i-PrOH/CH₂Cl₂)以得到胺1(323mg，80％产量)Z异构体的数据：H N R(500MHz,CDCl₃)δ0.86-0.89(m,6H),1.22-1.36(m,62H),1.42-1.48(m,2H),1.82-1.95(m,2H),2.01-2.06(m,2H),2.41-2.46(m,1H),2.48-2.54(m,1H),2.70(br,1H),2.81(br,1H),3.17(br,2H),3.58-3.74(m,7H),3.81(dd,J＝5.2,11.3Hz,1H),3.94(dd,J＝3.4,10.9Hz,1H),3.98(d,J＝2.8Hz,1H),4.42-4.52(m,3H),4.64-4.67(m,2H),4.81(d,J＝3.7Hz,1H),5.44-5.55(m,2H),5.74(d,J＝9.3Hz,1H),7.27-7.37(m,10H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)614.1,22.7,25.7,27.6,28.0,29.3,29.4,29.6,29.7,31.9,36.8,50.0,62.9,69.4,69.7,70.0,70.2,71.0,71.6,73.1,78.4,80.6,100.2,124.3,127.9,128.0,128.1,128.2,128.5,128.7,132.9,137.97,138.00,173.5；HRMS-ESI m/z计算针对C₆₄H₁₀₉NO₉Na[M+Na]⁺1058.8000，结果是1058.8009。

实施例1.3–通过化合物1的氢解合成(2S,3S,4R)-2-氨基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-二十六烷酰基十八烷-1,3,4-三醇(CN089)

将3:7CHCl₃/MeOH(30mL)中化合物1(324mg,0.303mmol)和20％Pd(OH)₂/C(300mg)的混合物在氢气球下35℃搅拌21小时。将该混合物通过硅藻土过滤，使用3:1CHCl₃/MeOH(2x 100mL)洗涤并浓缩滤液。通过硅胶色谱纯化粗产物(1:4i-PrOH/CHCl₃，随后1:4EtOH/CHCl₃)以生成白色固体状的化合物CN089(45mg,17％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD 1:1)δ0.87-0.90(m,6H),1.29-1.36(m,68H),1.56-1.67(m,3H),1.81(m,1H),2.34-2.37(m,2H),3.23(m,1H),3.52(dd,J＝9.1,10.5Hz,1H),3.70-3.85(m,7H),3.97(br d,J＝3.5Hz,1H),4.87(d,J＝3.8Hz,1H),4.92(dt,J＝2.9,9.0Hz,1H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃/CD₃OD 1:1)δ14.4,23.3,25.6,25.8,29.8,30.0,30.3,31.8,32.6,35.0,53.7,62.4,65.0,69.6,70.4,70.7,71.5,71.8,73.8,100.4,174.8；HRMS-ESI计算针对C₅₀H₁₀₀NO₉[M+H]⁺858.7398，结果是858.7396。

实施例1.4–通过α-GalCer的异构化合成(2S,3S,4R)-2-氨基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-二十六烷酰基十八烷-1,3,4-三醇(CN089)

将α-GalCer(80mg,0.093mmol)的1,4-二噁烷-水(10:1,16mL)的溶液升温至，随后添加1M HCI(2.96mL)。将溶液在90℃加热45分钟，随后冻干以生成白色固体。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:10-2:3)以生成白色固体状的标题化合物CN089(50.5mg,63％)。

实施例2–合成(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-二十六烷酰基-2-磷酰氧基甲氧基羰基氨基十八烷-1,3,4-三醇(CN131)

实施例2.1-(双(苄氧基)磷酰氧基)甲基4-硝基苯基碳酸酯

在Ar下向4-硝基苯基碳酸氯甲酯(Alexander,Cargill等1988)(0.70g,3.02mmol)和二苄基磷酸酯(0.925g,3.32mmol)的无水MeCN(30mL)溶液中添加氧化银(I)(0.770g,3.32mmol)。将反应回流搅拌18小时。对冷却的混合物使用EtOAc(30mL)稀释，通过硅藻土过滤并除去溶剂。在硅胶上通过柱色谱纯化粗残留物(EtOAc/石油醚＝1:4-1:1)以得到无色油状的标题化合物(0.12g,9％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ5.12(m,4H),5.71(d,J＝14Hz,2H),7.27(m,4H),7.34(m,6H),8.24(d,J＝9Hz,2H)。¹³C NMR(125MHz)δ69.3,69.9,70.0,86.1,86.2,121.7,125.3,128.0,128.7,128.8,135.18,135.24,145.7,151.2,154.9。³¹PNMR(202MHz)δ-2.5.HRMS-ESI[M+Na]⁺计算针对C₂₂H₂₀NNaO₉P:496.0773。结果是496.0765。

实施例2.2-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-二十六烷酰基-2-磷酰氧基甲氧基羰基氨基十八烷-1,3,4-三醇(CN131)

将(双(苄氧基)磷酰氧基)甲基4-硝基苯基碳酸酯(0.055g,0.117mmol)的CH₂Cl₂(10mL)溶液添加至吡啶(10mL)中的胺CN089(0.050g,0.058mmol)。加入三乙胺(10mL)并将反应搅拌1小时。使用MeOH(30mL)淬灭混合物，随后使用CHCl₃(20mL)稀释并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:1-2:3)以得到苄基化磷酸酯的样品。向搅拌的中间体(0.032g,0.027mmol)的THF/MeOH(1:1,10mL)溶液中添加Pd(OH)₂(C上20％，30mg)。将溶液在氢气气氛下搅拌1小时。通过硅藻土过滤混合物并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃/H₂O＝40:70:0-40:70:6)以得到白色固体状的标题化合物CN131(0.023g,39％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD/D₂O 70:40:6)δ0.89(m,6H),1.20-129(m,68H),1.58-1.67(m,4H),2.37(m,2H),3.63(m,1H),3.76-3.86(m,7H),3.93(m,1H),3.97(m,1H),4.85(d,J＝2.5Hz,1H),4.95(m,1H),5.29(m,1H),5.67(m,1H)。¹³C NMR(125MHz)δ15.2,24.0,26.5,26.7,30.1,30.5,30.65,30.68,30.8,30.96,31.03,33.2,35.9,53.7,62.6,68.2,70.2,71.0,72.2,73.0,75.9,84.7,100.7,157.5,176.0。³¹P NMR(202MHz)δ-0.7。HRMS-ESI[M-H]^-计算针对C₅₂H₁₀₁NO₁₅P:1010.6909。结果是1010.6915。

实施例3-(2S,3S,4R)-2-乙酰氧基甲氧基羰基氨基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-二十六烷酰基十八烷-1,3,4-三醇(CN136)

将(4-硝基苯氧基)羰氧基甲基乙酸酯(Lin,Bitha等1997)(0.050g,0.200mmol)添加至吡啶(3mL)中的胺CN089(0.025g,0.029mmol)。加入三乙胺(1mL)并将反应搅拌1小时。使用MeOH(30mL)淬灭混合物，随后使用CHCl₃(20mL)稀释并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:1-3:7)。在RP-C18上进一步纯化样品(MeOH/CHCl₃＝1:0-6:4)以得到白色固体状的标题化合物CN136(0.019g,70％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD 3:1)δ0.84(m,6H),1.18-1.27(m,68H),1.57-1.65(m,4H),2.07(s,3H),2.31(m,2H),3.66-3.74(m,8H),3.82(m,1H),3.89(m,1H),4.82(d,J＝2.5Hz,1H),4.89(m,1H),5.68(m,2H)。³C NMR(125MHz)δ13.9,20.5,22.6,25.0,25.3,28.7,29.1,29.2,29.25,29.27,29.33,29.4,29.50,29.54,29.58,29.61,31.8,34.5,52.0,61.8,67.6,69.0,69.7,70.2,70.5,71.5,74.5,80.0,99.7,154.8,170.4,174.5。HRMS-ESI[M+Na]⁺计算针对C₅₄H₁₀₃NNaO₁₃:996.7322。结果是996.7295。

实施例4-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-二十六烷酰基-2-(新戊酰氧基甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN145)

向干燥的吡啶(0.33mL)中胺CN089(28.4mg,0.033mmol)的化合物中添加(4-硝基苯氧基)羰氧基甲基新戊酸酯(Lin,Bitha等1997)(11mg,0.037mmol)的CHCl₃(0.20mL)溶液，随后添加NEt₃(8μL,0.057mmol)。在室温下反应1.5小时后，减压浓缩挥发性物质。通过硅胶色谱纯化粗残留物(1％-7％MeOH/CHCl₃)以得到含有特定组分的产物，该特定组分进一步在硅胶上通过自动快速色谱纯化(1％-8％MeOH/CHCl₃)以得到白色固体状的标题化合物CN145(14.4mg,43％)。¹H NMR(500MHz,1:1CDCl₃/CD₃OD)δ0.87-0.90(m,6H),1.22(s,9H),1.24-1.43(m,68H),1.59-1.75(m,4H),2.31-2.41(m,2H),3.71-3.86(m,9H),3.95(br,1H),4.86(d,J＝3.4Hz,1H)4.92-5.00(m,1H),5.70-5.80(m,2H)；¹³C NMR(126MHz,3:1CDCl₃/CD₃OD)δ14.1,22.9,25.3,25.7,26.9,28.8,29.4,29.5,29.6,29.68,29.73,29.8,29.87,29.90,32.1,34.8,39.0,52.3,62.1,68.1,69.3,70.1,70.5,70.8,71.7,75.0,80.6,100.1,155.0,174.8,178.2；HRMS(ESI):m/z计算针对C₅₇H₁₀₉NO₁₃Na[M+Na]⁺1038.7797，结果是1038.7793。

实施例5–合成(2S,3S,4R)-2-((2-(苄氧基羰基氨基)乙酰氧基)甲氧基羰基氨基)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基十八烷-1,3,4-三醇(CN142)

实施例5.1-(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基2-(苄氧基羰基氨基)乙酸酯

向搅拌的4-硝基苯基碳酸碘甲酯(Gangwar,Pauletti等1997)(0.50g,1.55mmol)和Cbz保护的甘氨酸(0.65g,3.1mmol)的苯溶液中添加Ag₂O(0.71g,3.1mmol)并将反应混合物在回流下搅拌。3小时后，过滤溶液并除去溶剂。将残留物溶解在EtOAc(30ml)中并使用水(30ml)、盐水(30ml)洗涤，干燥(MgSO₄)并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(EtOAc/石油醚＝3:7-1:1)以生成淡黄色油状的标题化合物(0.24g,38％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.07(d,J＝6Hz,2H),5.13(s,2H),5.31(m,1H),5.91(s,2H),7.33-7.44(m,7H),7.34(d,J＝9Hz,2H),8.26(d,J＝9Hz,2H)。¹³C NMR(125MHz)δ42.6,67.4,82.7,121.7,125.3,128.1,128.3,128.6,135.9,145.7,151.3,154.9,168.7。HRMS-ESI[M+Na]⁺计算针对C₁₈H₁₆N₂NaO₉:427.0748。结果是427.0728。

实施例5.2–(2S,3S,4R)-2-((2-(苄氧基羰基氨基)乙酰氧基)甲氧基羰基氨基)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基十八烷-1,3,4-三醇(CN142)

将(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基2-(苄氧基羰基氨基)乙酸酯(0.060g,0.146mmol)添加至吡啶(3mL)中的胺CN089(0.025g,0.029mmol)。加入三乙胺(1mL)并将反应搅拌1小时。使用MeOH(30mL)淬灭混合物，随后使用CHCl₃(20mL)稀释并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:1-1:4)。在RP-C18上进一步纯化样品(MeOH/CHCl₃7:3)以得到白色固体状的标题化合物CN142(0.022g,67％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD 3:1)δ0.80(t,J＝7.0Hz,6H),1.73-1.25(m,68H),1.52-1.61(m,4H),2.26(m,2H),3.63-3.71(m,8H),3.79(m,1H),3.86(d,J＝2.5Hz,1H),3.91(d,J＝4.5Hz,1H),4.76(d,J＝3.5Hz,1H),4.84(m,1H),5.04(s,2H),5.64-5.76(m,2H),7.25(m,5H)。³C NMR(125MHz)δ13.9,22.6,25.0,25.3,28.7,29.1,29.2,29.25,29.27,29.37,29.44,29.5,29.51,29.54,29.58,29.62,31.8,34.5,42.3,52.2,61.7,67.0,67.5,69.0,69.7,70.2,70.6,71.6,74.5,80.2,100.0,128.1,128.4,128.7,136.5,155.0,157.5,170.0,174.8。HRMS-ESI[M+Na]⁺计算针对C₆₂H₁₁₀N₂NaO₁₅:1145.7798。结果是1145.7739。

实施例6-(2S,3S,4R)-2-(苯甲酰氧基甲氧基羰基氨基)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基十八烷-1,3,4-三醇(CN141)

将(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基苯甲酸酯(Lin,Bitha等1997)(0.050g,0.158mmol)添加至吡啶(3mL)中的胺CN089(0.025g,0.029mmol)。加入三乙胺(1mL)并将反应搅拌1小时。使用MeOH(30mL)淬灭混合物，随后使用CHCl₃(20mL)稀释并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:1-1:4)。在RP-C18上进一步纯化样品(MeOH/CHCl₃＝1:0-7:3)以得到白色固体状的标题化合物CN141(0.006g,20％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD3:1)δ0.80(m,6H),1.17(m,68H),1.49-1.65(m,4H),2.25(m,2H),3.64-3.76(m,10H),4.77(d,J＝2.5Hz,1H),4.84(m,1H),5.90(m,2H),7.36(m,2H),7.53(m,1H),7.98(m,2H)。¹³C NMR(125MHz)δ13.9,22.6,25.0,25.3,28.7,29.1,29.2,29.25,29.27,29.33,29.4,29.48,29.58,31.8,49.2,49.5,52.1,61.8,67.7,69.0,69.8,70.1,70.5,71.4,74.7,80.6,99.8,128.4,129.0,129.9,133.7,154.8,165.8,174.5。HRMS-ESI[M+Na]⁺计算针对C₅₉H₁₀₅NNaO₁₃:1058.7478。结果是1058.7440。

实施例7–合成(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-氧代戊酰氧基)甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN146)

实施例7.1-(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基4-氧代戊酸酯

通过将AgNO₃(700mg,4.1mmol)的水(10mL)溶液加入乙酰丙酸的钠盐(4.3mmol，在约10ml水中，通过使用1M NaOH水溶液将乙酰丙酸碱化至pH 7-8来制备)中来制备乙酰丙酸的银盐。30分钟后，通过过滤分离所得沉淀并依次使用冷水和Et₂O洗涤。真空干燥产物以得到白色固体状的银盐(636mg,69％)。

将干燥甲苯(1.5mL)中4-硝基苯基碳酸碘甲酯(Gangwar,Pauletti等1997)(105mg，0.325mmol，使用甲苯通过共沸蒸馏干燥)、4埃分子筛(约250mg)和乙酰丙酸银(89mg,0.40mmol)的混合物避光保存并在40℃下搅拌。4小时后，对混合物使用Et₂O稀释，通过硅藻土过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱纯化粗残留物(30％-40％EtOAc/石油醚)以得到无色油状的标题化合物(85mg,84％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ2.20(s,3H),2.67-2.70(m,2H),2.80-2.83(m,2H),5.88(s,2H),7.38-7.48(m,2H),8.24-8.34(m,2H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ27.7,29.7,37.6,82.5,121.8,125.4,145.7,151.5,155.1,171.2,206.0；HRMS(ESI):m/z计算针对C₁₃H₁₃NO₈Na[M+Na]⁺334.0539，结果是334.0544。

实施例7.2-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-氧代戊酰氧基)甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN146)

向胺CN089(22mg,0.026mmol)的d₅-吡啶(0.30mL)溶液中加入(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基4-氧代戊酸酯(8.0mg,0.026mmol)的CDCl₃(0.15mL)溶液。在NMR管中进行反应过程。室温下3小时后，加入NEt₃(2.5mg,0.025mmol)并使反应再持续2.25小时，此时已消耗了大于95％的胺CN089。减压浓缩挥发物质并通过硅胶色谱纯化粗残留物(1.5:40:60-1.5:45:55MeOH/二噁烷/CHCl₃)以得到白色固体状的标题化合物CN146(14.1mg,53％)。¹H NMR(500MHz,1:1CDCl₃/CD₃OD)δ0.88-0.90(m,6H),1.24-1.34(m,68H),1.60-1.72(m,4H),2.21(s,3H),2.31-2.42(m,2H),2.62-2.64(m,2H),2.80-2.83(m,2H),3.71-3.83(m,8H),3.88(br d,J＝10.1Hz,1H),3.95(br d,J＝2.2Hz,1H),4.86(d,J＝3.2Hz,1H)4.94-4.98(m,1H),5.68-5.76(m,2H)；<3>C NMR(126MHz,1:1CDCl₃/CD₃OD)δ14.3,23.2,25.6,25.9,28.3,29.3,29.7,29.79,28.84,29.86,29.92,30.0,30.1,30.15,30.18,30.21,32.43,32.44,35.1,38.1,53.0,62.3,68.1,69.7,70.4,70.8,71.4,72.1,75.2,80.7,100.5,155.6,172.7,175.0,208.5；HRMS(ESI):m/z计算针对C₅₇H₁₀₇NO₁₄Na[M+Na]⁺1052.7589，结果是1052.7578。

实施例8-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-(2-甲氧基(聚(2-乙氧基)亚氨基)戊酰氧基)甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN147)

使1:1CDCl₃/CD₃OD(0.15mL)中的酮CN146(10mg,0.0097mmol)、2-甲氧基(聚(2-乙氧基))氨基(平均Mw约500)(lha,van Horn等2010)(5.4mg,0.009mmol)和乙酸(0.5mg,0.008mmol)的混合物在室温下反应。在NMR管中进行反应过程。15小时后，加入额外部分的烷氧基胺(3mg,0.005mmol)并使反应持续3天，之后使用CHCl₃/甲苯稀释并减压浓缩挥发物质。通过硅胶色谱纯化粗残留物(5％-10％MeOH/CHCl₃)以得到油状的标题化合物CN147(12.3mg,78％)。¹H NMR(500MHz,1:1CDCl₃/CD₃OD)δ0.88-0.90(m,6H),1.24-1.34(m,68H),1.60-1.73(m,4H),1.87and 1.90(2x s,3H),2.32-2.42(m,2H),2.50-2.53and 2.62-2.64(2x m,4H),3.39(s,3H),3.56-3.58(m,2H),3.62-3.82(m,～66H),3.87(br d,J＝10.2Hz,1H),3.95(d,J＝2.6Hz,1H),4.14-4.16(m,2H),4.86(d,J＝3.4Hz,1H),4.94-4.98(m,1H),5.70-5.78(m,2H)；³C NMR(126MHz,1:1CDCl₃/CD₃OD)δ14.27,14.29,14.9,20.2,23.2,25.2,25.6,25.9,29.3,29.7,29.85,29.93,30.1,30.2,30.3,30.7,31.0,32.4,35.1,53.0,59.1,62.3,68.1,69.7,70.11,70.14,70.4,70.8,71.0,71.3,71.4,72.1,72.4,73.1,73.2,75.2,80.7,80.8,100.5,155.6,156.4,157.9,158.9,172.6,172.7,175.0；HRMS(ESI):m/z计算针对C₈₂H₁₅₈N₂O₂₆Na(n＝12)[M+Na]⁺1610.1001，结果是1610.1012。

实施例9-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-甲氧基苯甲酰氧基)甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN150)

实施例9.1-(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基4-甲氧基苯甲酸酯

在旋转蒸发仪中使用甲苯通过共沸蒸馏干燥4-甲氧基苯甲酸银(以与乙酰丙酸银(实施例7.1)相同的方式制备，0.32g，1.24mmol)。将残留物悬浮在干燥甲苯(40mL)中并添加4-硝基苯基碳酸碘甲酯(Gangwar,Pauletti等1997)(200mg,0.619mmol)。将混合物在回流下搅拌1小时，冷却并过滤。浓缩滤液后，通过硅胶色谱纯化粗残留物(5％-30％EtOAc/石油醚)以得到白色固体状的标题化合物(190mg,88％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ3.88(s,3H),6.11(s,2H),6.95(m,2H),7.41(m,2H),8.05(m,2H),8.27(m,2H)。¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ55.5,82.8,113.9,120.6,121.7,125.3,132.3,145.6,151.5,155.1,164.2,164.4。HRMS(ESI):m/z计算针对C₁₆H₁₃NO₈Na[M+Na]⁺370.0539，结果是370.0545。

实施例9.2-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-甲氧基苯甲酰氧基)甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN150)

将(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基4-甲氧基苯甲酸酯(0.050g,0.14mmol)添加至溶解在1:1CH₂Cl₂/吡啶(4mL)中的胺CN089(0.030g,0.037mmol)。加入三乙胺(2mL)并使反应在室温下搅拌1小时。使用CH₂Cl₂(10mL)稀释混合物并浓缩。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:1-15:85)以得到白色固体状的标题化合物CN150(0.020g,61％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD3:1)δ0.89(m,6H),1.23-1.32(m,68H),1.58-1.71(m,4H),2.29-2.39(m,2H),3.70-3.81(m,8H),3.84-3.88(m,4H),3.93(m,1H),4.86(d,J＝3.6Hz,1H),4.93(m,1H),5.94(d,J＝5.8Hz,1H),5.96(d,J＝5.8Hz,1H),6.93-6.96(m,2H),8.01-8.04(m,2H)。³CNMR(125MHz,CDCl₃/CD₃OD 3:1)δ14.2,22.9,25.3,25.6,29.1,29.5,29.62,29.64,29.7,29.8,29.86,29.92,29.95,29.99,32.2,34.9,52.5,55.7,62.2,68.1,69.4,70.1,70.5,70.9,71.8,75.1,80.8,100.2,114.1,121.6,132.4,155.3,164.4,165.9,174.8。HRMS(ESI):m/z计算针对C₆₀H₁₀₇NO₁₄Na[M+Na]⁺1088.7589，结果是1088.7587。

实施例10-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-硝基苯甲酰氧基)甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN151)

实施例10.1-(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基4-硝基苯甲酸酯

以与(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基4-甲氧基苯甲酸酯(实施例9.1)相同的方式制备白色固体状的标题化合物(81mg,36％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.17(s,2H),7.43(m,2H),8.28-8.31(m,2H),8.33(m,2H)。¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ83.2,121.6,123.8,125.4,131.3,133.7,145.8,151.2,151.4,154.9,163.1。HRMS(ESI):m/z计算针对C₁₅H₁₀N₂O₉Na[M+Na]⁺385.0284，结果是385.0281。

实施例10.2-(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-硝基苯甲酰氧基)甲氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN151)

将(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基4-甲氧基苯甲酸酯(0.060g,0.17mmol)添加至溶解在2:1CH₂Cl₂/吡啶(6mL)中的胺CN089(0.030g,0.037mmol)。加入三乙胺(1mL)并使反应在室温下搅拌30分钟。使用CHCl₃(10mL)稀释混合物并浓缩。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:1-15:85)以得到白色固体状的标题化合物CN151(0.020g,61％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD3:1)δ0.88(m,6H),1.23-1.32(m,68H),1.58-1.71(m,4H),2.29-2.39(m,2H),3.70-3.81(m,8H),3.87(dd,J＝2.4,10.2Hz,1H),3.94(m,1H),4.86(d,J＝3.6Hz,1H),4.93(m,1H),5.99(d,J＝5.9Hz,1H),6.04(d,J＝5.9Hz,1H),8.26-8.29(m,2H),8.30-8.33(m,2H).¹³C NMR(125MHz,CDCl₃/CD₃OD 3:1)δ14.2,22.9,25.3,25.7,28.9,29.4,29.56,29.58,29.60,29.7,29.77,29.83,29.88,29.92,29.95,32.2,34.8,52.6,62.1,68.0,69.3,70.0,70.5,71.0,71.8,75.0,81.5,100.1,123.9,131.4,134.9,151.2,154.9,164.1,174.8。HRMS(ESI):m/z计算针对C₅₉H₁₀₄N₂O₁₅Na[M+Na]⁺1103.7334，结果是1103.7340。

实施例11–合成(2S,3S,4R)-2-乙酰氧基甲氧基羰基氨基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-(6-苯基己酰基)十八烷-1,3,4-三醇(CN135)

实施例11.1–合成(2S,3S,4R)-3,4-二-O-苄基-1-O-(2,3-二-O-苄基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃半乳糖基)-2-(6-苯基己酰基氨基)十八碳-6-烯-1,3,4-三醇(20)

向搅拌的EDC-HCl(0.041g,0.216mmol)和HOBt-H₂O(0.033g,0.216mmol)的CH₂Cl₂/DMF(5:2,10mL)溶液中添加苯基己酸(0.031g,0.162mmol)。30分钟后，添加(2S,3S,4R)-2-氨基-3,4-二-O-苄基-1-O-(2,3-二-O-苄基-4,6-O-亚苄基-α-D-吡喃半乳糖基)十八碳-6-烯-1,3,4-三醇(19)(Plettenburg,Bodmer-Narkevitch等2002)(0.10g,0.108mmol)的CH₂Cl₂(10ml)溶液，随后添加DIPEA(0.075mL,0.432mmol)。

18小时后，对反应混合物使用CH₂Cl₂(50mL)稀释，使用水(50mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(EtOAc/石油醚＝0:1-2:3)以得到淡黄色油状的化合物20(0.101g,85％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ0.90(t,J＝7.0Hz,3H),1.23-1.34(m,20H),1.52(t,J＝7.5Hz,2H),1.58(t,J＝7.5Hz,2H),1.86(m,2H),2.02(m,2H),2.34(t,J＝8.5Hz,1H),2.47(m,2H),2.59(m,2H),3.58(m,2H),3.76(m,2H),3.93(m,3H),4.08(m,2H),4.18(br s,1H),4.39(m,1H),4.50(m,2H),4.58-4.65m,3H),4.69-4.83(m,2H),4.85(d,J＝11.5Hz,1H),4.96(d,J＝2.5Hz,1H),5.46(s,1H),5.49(m,2H),5.73(d,J＝8.5Hz,1H),7.14-7.36(m,28H),7.51(m,2H)；¹³C NMR(125MHz)δ14.1,22.7,24.6,25.5,27.6,28.7,28.9,29.3,29.37,29.44,29.55,29.60,29.64,29.67,29.68,29.71,29.73,31.1,31.2,31.9,32.8,33.4,33.5,35.7,35.8,36.6,50.3,63.0,68.2,69.4,71.61,71.63,71.7,73.3,73.4,73.8,74.4,75.7,76.1,79.0,79.3,80.0,99.59,99.64,101.0,125.1,125.7,126.3,127.55,127.57,127.63,127.68,127.75,127.78,127.84,127.85,127.88,128.1,128.27,128.29,128.31,128.32,128.36,128.39,128.5,128.8,132.3,137.9,138.3,138.4,138.6,138.7,142.5,172.8；HRMS(ESI):m/z计算针对C₇₁H₈₉NNaO₉[M+Na]⁺1122.6430，结果是1122.6369。

实施例11.2–合成(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-2-(6-苯基己酰基氨基)十八烷--1,3,4-三醇(21)

向搅拌的化合物20(0.101g,0.092mmol)的CH₂Cl₂/MeOH(1:4,5mL)溶液中添加Pd(OH)₂(C上20％，100mg)。将溶液在H₂气氛下搅拌4小时。通过硅藻土过滤混合物并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝1:9-3:7)以得到无色油状的化合物21(0.046g,77％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD 3:1)δ0.80(t,J＝7.0Hz,3H),1.17-132(m,26H),1.53-1.59(m,6H),2.12(t,J＝7.6Hz,2H),2.53(t,J＝7.8Hz,2H),3.43-3.48(m,2H),3.58-3.72(m,6H),3.78-3.81(m,1H),3.85(d,J-2.5Hz,1H),4.12(m,1H),4.81(d,J＝3.9Hz,1H),7.08(m,3H),7.18(m,2H)；¹³C NMR(125MHz)δ13.8,22.6,25.6,25.8,28.8,29.2,29.5,29.59,29.60,29.63,29.7,31.1,31.8,32.6,35.6,36.2,50.4,61.8,67.3,68.9,69.7,70.2,70.7,71.9,74.7,99.7,125.5,128.1,128.2,142.4,174.3。HRMS(ESI):m/z计算针对C₃₆H₆₃NNaO₉[M+Na]⁺676.4401，结果是676.4273。

实施例11.3–合成(2S,3S,4R)-2-乙酰氧基甲氧基羰基氨基-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-O-(6-苯基己酰基)十八烷-1,3,4-三醇(CN135)

向化合物21(0.045g,0.068mmol)的二噁烷/水(10:1,4mL)溶液中添加HCl

(1M,0.74mL)，最初升温至80℃(5分钟)并在90℃下加热(45分钟)。随后将溶液冻干并在硅胶上纯化残留物(MeOH/CHCl₃＝1:4-1:1)以得到白色固体状的胺酯22(0.030g,67％)。将(4-硝基苯氧基)羰基氧基)甲基乙酸酯(0.040g,0.160mmol)添加至吡啶(3mL)中的胺酯(0.030g,0.045mmol)。加入NEt₃(1mL)并使反应搅拌1小时。使用MeOH(30mL)淬灭混合物并使用CHCl₃(20mL)稀释并除去溶剂。在硅胶上纯化粗残留物(MeOH/CHCl₃＝0:1-1:4)。在RP-C18上进一步纯化样品(MeOH/CHCl₃＝1:0-4:1)已得到白色固体状的标题化合物CN135(0.017g,48％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD 3:1)δ0.85(t,J＝7.0Hz,3H),1.22-128(m,26H),1.61-1.65(m,6H),2.08(s,3H),2.32(t,J＝7.6Hz,2H),2.58(t,J＝7.8Hz,2H),3.69-3.76(m,10H),4.82(d,J＝2.5Hz,1H),4.89(m,1H),5.68(m,2H),7.13(m,3H),7.41(m,2H)；³C NMR(125MHz)δ14.2,20.8,22.9,25.2,25.6,29.0,29.1,29.6,29.7,29.86,29.91,29.94,30.0,31.4,32.2,34.8,36.0,52.4,62.1,68.0,69.3,70.1,70.5,70.9,71.8,75.0,80.4,100.1,125.9,128.5,128.6,142.7,155.2,170.9,174.7；HRMS(ESI):m/z计算针对C₄₀H₆₇NNaO₁₃[M+Na]⁺792.4510，结果是792.4504。

实施例12–(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((ω-甲氧基(聚(乙烯氧基))乙酰氧基)甲烯氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN155)

实施例12.1–ω-甲氧基(聚(乙烯氧基))乙酸

在50℃下将聚乙二醇单甲醚(平均Mw 5000)(2g,0.4mmol)和t-BuOK(1M，在t-BuOH中，1.6mL，1.6mmol)的化合物在t-BuOH中搅拌过夜。向混合物中添加溴乙酸(80mg,0.58mmol)的t-BuOH(1.1mL)溶液并使反应在50℃下搅拌26小时。减压浓缩挥发性物质并将残留物溶解在水中并使用1M HCl酸化至pH 2。使用二氯甲烷提取产物(x 3)并使用MgSO₄干燥。通过硅胶色谱纯化粗残留物(0:10-1:9MeOH/二氯甲烷)以得到白色固体状的标题化合物(601mg,30％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ3.38(s,3H),3.49-3.79(m,-488H),4.14(s,2H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)59.0,68.9,70.4-70.8(m),70.9,71.1,72.0,171.6；HRMS(ESI):m/z计算针对C₂₃₁H₄₆₄O₁₁₇Na(n＝114)[M+2H+Na]³⁺1711.3419，结果是1711.3702。

实施例12.2–(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基ω-甲氧基(聚(乙烯氧基))乙酸酯

将ω-甲氧基(聚(乙烯氧基))乙酸(561mg，约0.11mmol)、Ag₂O(14.3mg,0.0617mmol)和4埃分子筛(约290mg)的混合物在甲苯中搅拌过夜。向混合物中添加4-硝基苯基碳酸碘甲酯(Gangwar,Pauletti等1997)(50mg,0.155mmol)并将反应在Ar和40℃下搅拌。100分钟后，对混合物使用二氯甲烷稀释，通过硅藻土过滤并减压浓缩。通过添加Et₂O(3倍体积)使产物从浓缩的二氯甲烷溶液中沉淀出来并过滤以得到灰白色固体状的标题化合物(524mg,90％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ3.38(s,3H),3.49-3.79(m,-546H),4.28(s,2H),5.94(s,2H),7.41-7.44(m,2H),8.28-8.31(m,2H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)59.0,68.3,70.4-70.8(m),70.9,71.2,72.0,82.5,121.7,125.4,145.8,151.4,155.0,169.1；HRMS(ESI):m/z计算针对C₂₃₅H₄₆₁NO₁₂₀Na(n＝112)[M+2H+Na]³⁺1746.9966，结果是1746.9926。

实施例12.3–(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((ω-甲氧基(聚(乙烯氧基))乙酰氧基)甲烯氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇

将1:1二氯甲烷-吡啶(0.7mL)中胺CN089(13mg,0.015mmol)和(4-硝基苯氧基)羰基氧基甲基ω-甲氧基(聚(乙烯氧基))乙酸酯(82mg，约0.015mmol)的混合物与4埃分子筛一起在室温下搅拌，期间在1.5小时内分三次添加NEt₃(3x 2.5μL，总量0.054mmol)。再反应7小时后，过滤并浓缩混合物。通过硅胶色谱纯化粗残留物(2:98-15:85MeOH/二氯甲烷)以得到白色固体状的标题化合物CN155(44mg,48％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ0.86-0.89(m,6H),1.11-1.34(m,68H),1.56-1.65(m,3H),1.72-1.79(m,1H),2.32(t,J＝7.5Hz,2H),3.38(s,3H),3.49-3.86(m,-560H),3.95-3.98(m,1H),4.04(br s,1H),4.22(s,2H),4.92-4.97(m,2H),5.73(d,J＝5.8Hz,1H),5.85(d,J＝5.8Hz,1H),6.21(d,J＝9.0Hz,1H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ14.0,22.6,24.9,29.1,29.2,29.4-29.6(m),30.3,31.8,34.5,51.5,58.9,62.5,68.2,68.4,68.5,69.0,70.0,70.2-70.6(m),70.8,71.8,73.2,73.9,80.0,100.0,154.1,169.7,173.6；LRMS(ESI):m/z计算针对C₂₈₃H₅₆₅NO₁₂₈Na(n＝114)[M+4H+Na]⁵⁺1209.95，结果是1209.93。

实施例13–(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-((4-(ω-甲氧基(聚(乙烯氧基))亚氨基)戊酰氧基)甲烯氧基羰基氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN158)

以与lha,Van Horn等，2010中所述较低Mw聚合物类似的方式合成α-甲氧基-ω-氨氧基(聚(环氧乙烷))(平均Mw约5000)。使用C18硅胶层析以分离中间体与未反应的起始材料。使前述1:1CDCl₃/CD₃OD(1.5mL)中烷氧基胺(75mg,0.015mmol)、酮CN146(13mg,0.013mmol)和乙酸(5mg,0.09mmol)的混合物在室温下反应。在NMR管中进行反应过程。3天后，添加额外部分的烷氧基胺(50mg,0.010mmol)并使反应再进行18小时，之后减压浓缩挥发物质。通过反向C18硅胶色谱纯化粗残留物(60％-100％MeOH/水)以得到白色固体状的标题化合物CN158(33mg,43％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ0.86-0.89(m,6H),1.12-1.40(m,68H),1.55-1.66(m,3H),1.73-1.81(m,1H),1.84and 1.89(2x s,3H),2.25-2.41(水,重叠m),2.49-2.53(m,1.3H),2.60-2.64(m,2.7H),2.96-3.01(br m,1H),3.38(s,3H),3.45-3.89(m,-490H),3.95-4.00(m,1H),4.03(s,1H),4.12-4.17(m,2H),4.89-5.00(m,2H),5.69-5.72(m,1H),5.76-5.80(m,1H),6.13和6.23(2x d,J＝9Hz,1H；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ14.0,14.8,20.1,22.6,24.7,24.90,24.93,24.95,29.1,29.22,29.24,29.25,29.4,29.48,29.51,29.53,29.55,29.58-29.63(m),29.8,30.1,30.5,30.6,31.8,34.5,51.4,58.9,62.55,62.64,68.5,68.7,68.99,69.02,69.45,69.53,70.0,70.1,70.2,70.3,70.37,70.41,70.42-70.5(m),71.8,72.5,72.6,73.3,73.5,73.76,73.84,79.5,80.0,100.04,100.08,154.2,154.4,155.1,156.5,171.7,171.8,173.6；HRMS(ESI):m/z计算针对C₂₉₈H₅₉₂N₂O₁₃₄Na₂(n＝120)[M+2H+2Na]⁴⁺1597.4842，结果是1597.4863。

实施例14–(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-(3-(2-乙酰氧基-4,6-二甲基苯基)-3,3-二甲基丙酰氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN162)

实施例14.1–3-(2-乙酰氧基-4,6-二甲基苯基)-3,3-二甲基丙酸琥珀酰亚胺酯

向搅拌的3-(2-乙酰氧基-4,6-二甲基苯基)-3,3-二甲基丙酸(100mg,0.38mmol)(Amsberry,Gerstenberger等1991)的DCM(6mL)溶液中添加N-羟基琥珀酰亚胺(90mg,0.77mmol)，随后添加DCC(160mg,0.77mmol)。5小时后，通过硅藻土过滤混合物并在硅胶上通过色谱纯化浓缩的残留物(170mg)。使用EtOAc/石油醚(0:10-9:1)洗脱以得到白色固体状的标题化合物(128mg,94％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ1.63(s,6H),2.22(s,3H),2.32(s,3H),2.54(s,3H),2.75(bs,4H),3.13(s,2H),6.62(bs,1H),6.82(bs,1H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ20.3,21.8,25.2,25.6,30.9,39.0,123.2,132.5,132.6,136.7,137.8,149.4,166.6,169.1,169.9；HRMS(ESI):m/z计算针对C₁₉H₂₃NO₆Na[M+Na]⁺384.1423，结果是384.1417。

实施例14.2–(2S,3S,4R)-1-O-α-D-吡喃半乳糖基-4-二十六烷酰基-2-(3-(2-乙酰氧基-4,6-二甲基苯基)-3,3-二甲基丙酰氨基)十八烷-1,3,4-三醇(CN162)

将3-(2-乙酰氧基-4,6-二甲基苯基)-3,3-二甲基丙酸琥珀酰亚胺酯溶解在CH₂Cl₂(2mL)中并添加至搅拌的CN089(18mg,0.021mmol)的吡啶(2mL)溶液中，同时添加三乙胺(2mL)。18小时后，真空除去溶剂以得到粗残留物，在硅胶上通过色谱纯化，使用MeOH/CHCl₃(0:100-35:75)洗脱，之后在C18硅胶上在进行色谱纯化。使用CHCl₃/MeOH(0:100-50:50)洗脱以得到白色固体状的标题化合物CN162(16mg,0.014mmol,67％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD)δ0.88(t,J＝6.7Hz,6H),1.22-1.33(m,68H),1.58-1.64(m,10H),2.24(s,3H),2.32-2.35(m,5H),2.55(s,3H),2.64(s,2H),3.52(t,J＝6.0Hz,1H),3.56-3.60(m,1H),3.64-3.76(m,6H),3.90-3.94(m,2H),4.78(d,J＝4.0Hz,1H),4.78-4.83(m,1H),6.60(bs,1H),6.84(bs,1H)；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃/CD₃OD)δ15.3,21.3,23.0,24.0,26.4,26.6,30.4,30.5,30.7,30.9,31.0,32.8,32.9,33.3,35.9,40.9,51.5,63.2,69.7,70.5,71.1,71.7,72.0,73.4,75.8,101.5,124.6,134.0,135.1,137.9,139.8,151.1,172.8,173.2,175.8；HRMS(ESI):m/z计算针对C₆₅H₁₁₇NO₁₂Na[M+Na]⁺1126.8473，结果是1126.8461。

实施例15–配制本发明的化合物用于静脉内注射

以与α-GalCer的已报道方法类似的方式配制本发明的化合物。简言之，α-GalCer的溶解是基于Giaccone等(Giaccone,Punt等2002)所述的赋形剂部分。因此，向1.78mL的吐温20(15.9mg)、蔗糖(177mg)和L-组氨酸(23.8mg)的水溶液中添加100μL 10mg/mL α-GalCer或本发明的化合物的9:1THF/MeOH溶液。将该均匀的混合物冻干并在Ar和18℃下储存所得的泡沫。使用1.0mL的PBS或水重建该材料，之后在PBS中连续稀释以配制α-GalCer和本发明的混合物的最终可注射溶液。

实施例16-α-GalCer的HPLC-ESI-MSMS定量

使用沃特斯公司(Waters)2795HPLC和沃特斯公司Q-TOF Premier^TM串联质谱仪通过HPLC-ESI-MSMS分析对本发明化合物的各测试实施例中的α-GalCer量进行定量。该色谱使用Phenomenex Kinetex C18 2.6mm 3.0x50mm柱，使用含有10mM甲酸铵+0.5％甲酸的等度甲醇以0.2mL/分钟的流速洗脱。通过858.7-696.7Da选择性反应物监测来监测α-GalCer。通过比较对同一天运行的标准曲线的离子技术积分或者通过比较掺入已知量α-GalCer的测试样品来预测α-GalCer的量。

除非另有说明，否则α-GalCer的水平都是在新鲜重建的配制的样品上测定的。关键化合物的最大α-GalCer水平预测值如下。

*非配制的样品(水溶液)

实施例17-生物学研究

小鼠。C57BL/6来自最初获自缅因州巴港的杰克逊实验室公司(JacksonLaboratories)的繁殖对并在弗吉尼亚大学威灵顿动物伦理委员会批准下根据机构指南使用。

给予本发明的化合物。各本发明的化合物以经配制的产物的形式提供(参见实施例12)，并稀释于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中用于经静脉注射至侧尾静脉中(200ng/小鼠)。人中预期的治疗性剂量范围是50-4800(μg/m²)(Giaccone,Punt等2002)。注意，小鼠中200ng相对于人中30μg/m²的剂量。

所有抗体标记都在FACS缓冲液(补充有1％FCS、0.05％叠氮化钠和2mM EDTA的PBS)中和冰上进行。通过使用抗CD16/32Ab(24G2，从杂交瘤上清中内部制备)孵育10分钟来封闭非特异性FcR介导的抗体染色。在BD生物科学公司(BD Biosciences)FACSCalibur或BDLSRII SORP流式细胞仪上进行流式细胞术，使用FlowJo软件(美国俄亥俄州的树星公司(Tree Star,Inc.))进行数据分析。

鉴定来自脾的DC的表型。在注射本发明的化合物后，使用抗体染色和流式细胞术来检测脾中树突细胞上成熟标记的表达。通过以下方法制备脾细胞制备物：在具有2mM谷氨酰胺、1％青霉素-链霉素、5x 10-5M 2-巯基乙醇和5％胎牛血清(全部来自新西兰奥克兰的英杰公司(Invitrogen))的伊可夫氏改进的杜尔贝科培养基(Iscove′s ModifiedDulbecco′s Medium)中通过纱布温和地获取脾组织，随后使用RBC裂解缓冲液(美国明尼苏达州明尼阿波利斯的纯基因简特拉系统公司(Puregene,Gentra Systems))裂解血红细胞。在PBS 2％胎牛血清和0.01％叠氮化钠中进行抗体染色。以10mg/ml使用抗FcgRII单克隆抗体2.4G2以抑制非特异性染色。使用单克隆抗体(全部来自美国加利福尼亚州圣何塞的BD生物科学法敏进公司(BD Biosciences Pharmingen))以检测CD11c+树突细胞上成熟标记CD40、CD80和CD86的表达。

细胞因子释放至血清的分析。给予糖脂后以不同的时间间隔从侧尾静脉中收集血液。血液结块后收集血清，并根据生产商的说明通过细胞因子珠阵列技术(Bioplex，伯乐公司(Biorad))评估细胞因子IL-12p70、IL-4和IFN-g的水平。

体内肽特异性T细胞增殖的分析。从OT-I小鼠与B6.SJL-Ptprc^aPepc^b/BoyJ小鼠杂交的动物中制备合并的淋巴结细胞悬液，所述OT-I小鼠在H-2K^b分子存在的情况下表达对卵清蛋白表位SIINFEKL特异的转基因T细胞受体(TCR)，所述B6.SJL-Ptprc^aPepc^b/BoyJ小鼠对于CD45.1⁺标记是C57BL/6小鼠的同类系。使用包被抗体的磁珠(密特异公司(Miltenyi))是样品富集CD8⁺细胞，随后将样品转移至C57BL/6小鼠中(1x10⁴/小鼠)。一天后使用本发明的化合物免疫各组接受动物(n＝5)。选择剂量以提供等摩尔值的SIINFEKL肽。对照动物接受磷酸盐缓冲盐水。七天后，从侧尾静脉中收集血液样品并使用针对TCR Vα2、CD45.1和CD8的抗体直接离体染色以通过流式细胞术监测SIINFEKL特异性CD8⁺T细胞。

抗肿瘤活性的分析。各C57BL/6小鼠组(n＝5)接受向肋部皮下注射1x10⁵个B16.OVA骨髓瘤细胞，其表达编码鸡卵清蛋白(OVA)序列的cDNA。7天后(此时肿瘤已完全移植)，通过静脉内注射以下物质之一治疗不同的组：200pg OVA蛋白与200ngα-GalCer、200pgOVA蛋白与200ng本发明的化合物或PBS。每3-4天监测一次小鼠的肿瘤生长并以二等分直径的产物的平均值(±SEM)的形式计算各组的肿瘤尺寸。当第一只动物发展出超过200mm²的肿瘤时终止各组的测量。

人NKT细胞对本发明化合物的反应性的分析。将外周血提取至肝素化管中，在PBS中1:1稀释并将其层压在泛影酸钠和多糖溶液(淋巴细胞分离剂；挪威奥斯陆的轴盾公司(Axis-Shield))上，之后800xg室温离心25分钟以收集包含NKT细胞的外周血单核细胞(PBMC)组分。为评估NKT细胞的增殖，在37℃下在具有5％人AB血清和所示浓度的α-GalCer或本发明化合物的伊可夫氏改进的杜尔贝科培养基(Iscove’s Modified Dulbecco’sMedium)中培养PBMC(2x10⁵/孔)，24小时后添加重组人IL-250U/mL(加利福尼亚州埃默里威尔的西龙公司(Chiron Corporation))。培养7天后，通过流式细胞术分析细胞，使用已加载α-GalCer的荧光可溶性CD1d四聚体来鉴定NKT细胞。数据的显示形式为最终培养物中总T细胞(通过特异性针对CD3的抗体的结合来鉴定)中NKT细胞(CD1d/α-GalCer四聚体结合细胞)的百分比。

如果参考上述说明书中提及具有已知等同形式的内容，那么将这些等同形式也纳入本文，就好像在本文中单独列出那样。虽然已结合具体的优选实施方案对本发明作了描述，但应了解，如权利要求所述，本发明不应过分地受限于这些具体实施方案。应当理解的是在不背离本发明的构思和范围的情况下，可对本发明作进一步的修改。

工业应用

本发明涉及神经鞘糖脂类似物、这些化合物前体和前药，其可用于治疗或预防疾病(如涉及感染、特应性疾病、自身免疫疾病或癌症的疾病)。

参考文献

Alexander,J.,D.S.Bindra,等(1996).″Investigation of(Oxodioxolenyl)methyl carbamates as nonchiral bioreversible prodrug moieties for chiralamines((氧代二氧烯基)甲基氨基甲酸酯作为手性胺的非手性生物可逆前药部分的研究)″J Med Chem 39(2):480-486.

Alexander,J.,R.Cargill,等(1988).″(Acyloxy)alkyl carbamates as novelbioreversible prodrugs for amines:increased permeation through biologicalmembranes(作为新颖的胺的生物可逆前药的(酰氧基)烷基氨基甲酸酯：通过生物膜的透过性增加)″J Med Chem 31(2):318-322.

Amsberry,K.L.和R.T.Borchardt(1991).″Amine prodrugs which utilizehydroxy amide lactonization.I.A potential redox-sensitive amide prodrug(使用羟基胺内酯化的胺前药。I.一种潜在的氧化还原敏感型胺前药)″Pharm Res 8(3):323-330.

Amsberry,K.L.,A.E.Gerstenberger,等(1991).″Amine prodrugs whichutilize hydroxy amide lactonization.II.A potential esterase-sensitive amideprodrug(使用羟基胺内酯化的胺前药。II.一种潜在的酯酶敏感型胺前药)″Pharm Res 8(4):455-461.

Atwell,G.J.,B.M.Sykes,等(1994).″Relationships between structure andkinetics of cyclization of 2-aminoaryl amides:potential prodrugs ofcyclization-activated aromatic mustards(2-氨基芳基胺的环化的结构和动力学之间的关系：环化激活的芳香芥的潜在的前药)″J Med Chem 37(3):371-380.

Baadsgaard,H.和W.D.Treadwell(1955).″Zur Kenntnis der komplexenWolframcyanide K4[W(CN)8],2H20und K3[(CN)8],H2O″Helvetica Chimica Acta 38(7):1669-1679.

Badovinac,V.P.,Porter,B.B.,等(2004).″CD8+T cell contraction iscontrolled by early inflammation(CD8+T细胞收缩受早期炎症的控制)″Nature Immunology 5(8):809-817.

Baek,D.J.,J.-H.Seo,等(2011).″The 3-Deoxy Analogue ofα-GalCer:Disclosing the Role of the 4-Hydroxyl Group for CD1d-Mediated NKT CellActivation(α-GalCer的3-脱氧类似物：公开4-羟基对于CD1d介导的NKT细胞激活的作用)″ACS Medicinal Chemistry Letters 2(7):544-548.

Banchet-Cadeddu,A.,E.Henon,等(2011).″The stimulating adventure of KRN7000(KRN 7000的刺激过程)″Org Biomol Chem 9(9):3080-3104.

Bendelac,A.,P.B.Savage,等(2007).″The biology of NKT cells(NKT细胞的生物学)″Annu Rev Immunol 25:297-336.

Bhat,A.S.和J.Gervay-Hague(2001).″Efficient syntheses of beta-cyanosugars using glycosyl iodides derived from per-O-silylated mono-anddisaccharides(使用来源于全-O-甲硅烷基化单糖和二糖的糖基碘有效地合成β-氰基糖)″Org Lett 3(13):2081-2084.

Brossart,P.,K.S.Heinrich,等(1999).″Identification of HLA-A2-restricted T-cell epitopes derived from the MUC1 tumor antigen for broadlyapplicable vaccine therapies(来源于广泛适用的疫苗治疗的MUC1肿瘤抗原的HLA-A2-限制的T细胞表位的鉴定)″Blood 93(12):4309-4317.

Butler,R.N.,C.B.O′Regan,等(1978).″Reactions of fatty acids withamines.Part 2.Sequential thermal reactions of stearic(octadecanoic)acid withsome 1,2-and 1,3-aminoalcohols and bis-amines(脂肪酸与胺的反应。第2部分.硬脂(十八烷)酸与一些1,2-和1,3-氨基醇和双胺的连续热反应)″Journal of the Chemical Society.Perkin Transactions 1(4):373-377.

Carpino,L.A.,S.A.Triolo,等(1989).″Reductive lactonization ofstrategically methylated quinone propionic acid esters and amides(有策略地甲基化的醌丙酸酯和胺的还原性内酯化)″The Journal of Organic Chemistry 54(14):3303-3310.

Chen,G.,J.Schmieg,等(2004).″Efficient synthesis of alpha-C-galactosylceramide immunostimulants:use of ethylene-promoted olefin cross-metathesis(α-C-半乳糖苷神经酰胺免疫刺激物的有效合成：使用乙烯促进的烯烃复分解反应)″Org Lett6(22):4077-4080.

Cheng,J.M.H.,S.H.Chee,等(2011).″An improved synthesis of dansylatedα-galactosylceramide and its use as a fluorescent probe for the monitoring ofglycolipid uptake by cells(改进的丹酰化α-半乳糖苷神经酰胺的合成及其作为用于监测细胞对糖脂摄取的荧光探针的应用)″Carbohydrate Research 346(7):914-926.

Davidson,E.J.,R.L.Faulkner,等(2004).″Effect of TA-CIN(HPV 16L2E6E7)booster immunisation in vulval intraepithelial neoplasia patients previouslyvaccinated with TA-HPV(vaccinia virus encoding HPV 16/18 E6E7)(最初使用TA-HPV(编码HPV 16/18E6E7的疫苗病毒)免疫的外阴上皮内瘤样病变患者中TA-CIN(HPV16L2E6E7)加强免疫的作用)″Vaccine 22(21-22):2722-2729.

Deng,S.,J.Mattner,等(2011).″Impact of sugar stereochemistry onnatural killer T cell stimulation by bacterial glycolipids(糖立体化学对于细菌糖脂进行的天然杀伤T细胞刺激的影响)″Org Biomol Chem 9(22):7659-7662.

Dere,R.T.和X.Zhu(2008).″The first synthesis of a thioglycosideanalogue of the immunostimulant KRN7000(首次合成免疫刺激物KRN7000的硫苷类似物)″Org Lett 10(20):4641-4644.

Drefahl,G.和H.-H.Horhold(1961).″Aminoalkohole,XV.StereoselektiveDarstellung und konfigurative Zuordnung der diastereomeren DL-3-Amino-1.2-diphenyl-propanole-(1)(zum Mechanismus der Ringschβreaktion vonAminoalkoholen mit Benzimidsaureester)″Chemische Berichte 94(6):1641-1656.

Du,W.,S.S.Kulkarni,等(2007).″Efficient,one-pot syntheses ofbiologically active alpha-linked glycolipids(生物活性α连接的糖脂的有效、单罐式合成)″Chem Commun(Camb)(23):2336-2338.

Ebensen,T.,C.Link,等(2007).″A pegylated derivative of alpha-galactosylceramide exhibits improved biological properties(α-半乳糖苷神经酰胺的PEG化衍生物具有改进的生物特性)″J Immunol 179(4):2065-2073.

Fujii,S.,K.Shimizu,等(2002).″Prolonged IFN-gamma-producing NKTresponse induced with alpha-galactosylceramide-loaded DCs(使用加载α-半乳糖苷神经酰胺的DC诱导延长的IFN-γ生成的NKT应答)″Nat Immunol 3(9):867-874.

Fujii,S.,K.Shimizu,等(2003).″Activation of natural killer T cells byalpha-galactosylceramide rapidly induces the full maturation of dendriticcells in vivo and thereby acts as an adjuvant for combined CD4and CD8T cellimmunity to a coadministered protein(α-半乳糖苷神经酰胺对天然杀伤T细胞的激活在体内迅速诱导树突细胞的完全成熟并从而作为共同给予的蛋白的佐剂用于合并的CD4和CD8T细胞免疫)″J Exp Med 198(2):267-279.

Gangwar,S.,G.M.Pauletti(1997).″Synthesis of a Novel Esterase-Sensitive Cyclic Prodrug of a Hexapeptide Using an(Acyloxy)alkoxy Promoiety(使用(酰氧基)烷氧基前部分合成新颖的酯酶敏感型环状六肽前药)″The Journal of Organic Chemistry 62(5):1356-1362.

Giaccone,G.,C.J.Punt,等(2002).″A phase I study of the natural killerT-cell ligand alpha-galactosylceramide(KRN7000)in patients with solid tumors(具有固体肿瘤的患者中天然杀伤T细胞配体α-半乳糖苷神经酰胺(KRN7000)的I期研究)″Clin Cancer Res 8(12):3702-3709.

Greenwald,R.B.,Y.H.Choe,等(2000).″Drug delivery systems based ontrimethyl lock lactonization:poly(ethylene glycol)prodrugs of amino-containing compounds(基于三甲基锁内酯化的药物递送系统：含氨基化合物的聚(乙二醇)前药)″J Med Chem 43(3):475-487.

Greenwald,R.B.,A.Pendri,等(1999).″Drug delivery systems employing1,4-or 1,6-elimination:poly(ethylene glycol)prodrugs of amine-containingcompounds(使用1,4-或1,6-消除的药物递送系统：含胺化合物的聚(乙二醇)前药)″J Med Chem 42(18):3657-3667.

Gryko,D.T.,C.Clausen,等(1999).″Thiol-Derivatized Porphyrins forAttachment to Electroactive Surfaces(用于连接电化学活性表面的硫醇衍生化的卟啉)″The Journal of Organic Chemistry 64(23):8635-8647.

Hermans,I.F.,J.D.Silk,等(2003).″NKT cells enhance CD4+and CD8+T cellresponses to soluble antigen in vivo through direct interaction withdendritic cells(NKT细胞通过与树突细胞的直接相互作用在体内增强CD4+和CD8+T细胞对可溶性抗原的应答)″J Immunol 171(10):5140-5147.

Hillery,P.S.和L.A.Cohen(1983).″Stereopopulation control.9.Rate andequilibrium enhancement in the lactonization of(o-hydroxyphenyl)acetic acids(立体群体控制，9.(o-羟基苯基)乙酸内酯化中的速率和平衡增强)″The Journal of Organic Chemistry 48(20):3465-3471.

Hong,S.,M.T.Wilson,等(2001).″The natural killer T-cell ligand alpha-galactosylceramide prevents autoimmune diabetes in non-obese diabetic mice(天然杀伤T细胞配体α-半乳糖苷神经纤维预防了非肥胖型糖尿病小鼠中的自身免疫型糖尿病)″Nat Med 7(9):1052-1056.

Howell,A.R.,R.C.So,等(2004).″Approaches to the preparation ofsphinganines(鞘氨醇的制备方法)″Tetrahedron 60(50):11327-11347.

Iha,R.K.,B.A.van Horn,等(2010).″Complex,degradable polyestermaterials via ketoxime ether-based functionalization:Amphiphilic,multifunctional graft copolymers and their resulting solution-stateaggregates(通过基于酮肟酯的官能化生成的复杂、可降解的聚酯材料：两性、多功能接枝共聚物及其所得溶液相聚集体)″Journal of Polymer Science Part A:Polymer Chemistry 48(16):3553-3563.

Ingram,L.J.和S.D.Taylor(2006).″Introduction of2,2,2-trichloroethyl-protected sulfates into monosaccharides with a sulfuryl imidazolium salt andapplication to the synthesis of sulfated carbohydrates(使用磺酰咪唑鎓盐将2,2,2-三氯乙基保护的硫酸酯/盐导入单糖以及硫酸化碳水化合物合成的应用)″Angew Chem Int Ed Engl 45(21):3503-3506.

Johansen,S.K.,H.T.Korno,等(1999).″Synthesis of Carbasugars fromAldonolactones:Ritter-Type Epoxide Opening in the Synthesis ofPolyhydroxylated Aminocyclopentanes(由醛糖酸内酯合成卡巴糖：聚羟基化氨基环戊烷合成中的Ritter型环氧化物开环)″Synthesis 1999(01):171,177.

Karbach,J.,S.Gnjatic,等(2010).″Tumor-reactive CD8+T-cell responsesafter vaccination with NY-ESO-1peptide,CpG 7909and Montanide ISA-51:association with survival(使用NY-ESO-1肽、CpG 7909和Montanide ISA-51接种后的肿瘤反应性CD8+T细胞应答：与存活相关)″Int J Cancer 126(4):909-918.

Kawano,T.,J.Cui,等(1997).″CD1d-restricted and TCR-mediated activationof valpha14 NKT cells by glycosylceramides(糖基神经酰胺对vα14 NKT细胞的CD1d限制且TCR介导的激活)″Science 278(5343):1626-1629.

Kinjo,Y.,P.Illarionov,等(2011).″Invariant natural killer T cellsrecognize glycolipids from pathogenic Gram-positive bacteria(非变异天然杀伤T细胞识别来自病原性革兰氏阳性细菌的糖脂)″Nature Immunology:1-10.

Lee,A.,K.J.Farrand,等(2006).″Novel synthesis of alpha-galactosyl-ceramides and confirmation of their powerful NKT cell agonist activity(新颖的α-半乳糖苷神经酰胺合成方法及其强效NKT细胞激动剂活性的确认)″Carbohydr Res 341(17):2785-2798.

Levy,A.,J.Pitcovski,等(2007).″A melanoma multiepitope polypeptideinduces specific CD8+T-cell response(黑色素瘤多表位多糖诱导特异性CD8+T细胞应答)″Cell Immunol 250(1-2):24-30.

Li,J.,X.Luo,等(1998).″Synthesis and biological evaluation of a watersoluble phosphate prodrug of 3-aminopyridine-2-carboxaldehydethiosemicarbazone(3-AP)(3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲(3-AP)的水溶性磷酸前药合成和生物学评估)″Bioorq Med Chem Lett 8(22):3159-3164.

Li,Y.,E.Girardi,等(2010).″The Vα14invariant natural killer T cell TCRforces microbial glycolipids and CD1d into a conserved binding mode(Vα14非变异天然杀伤T细胞TCR使微生物糖脂和CD1d变成保守的结合模式)″Journal of Experimental Medicine 207(11):2383-2393.

Li,Z.,Y.Oka,等(2008).″Identification of a WT1protein-derived peptide,WT1,as a HLA-A 0206-restricted,WT1-specific CTL epitope(鉴定WT1蛋白来源的肽，WT1，作为HLA-A 0206限制型、WT1特异性CTL表位)″Microbiol Immunol 52(11):551-558.

Liao,Y.和B.Wang(1999).″Substituted coumarins as esterase-sensitiveprodrug moieties with improved release rates(具有改进的释放速率的作为酯酶敏感型前药部分的经取代的香豆素)″Bioorq Med Chem Lett 9(13):1795-1800.

Lin,S.M.,Brian；Porter,Kenneth T.；Rossman,Craig A.；Zennie,Thomas；Wemple,James.(2000).″A Continuous Procedure for Preparation of paraFunctionalized Aromatic Thiols Using Newman-Kwart Chemistry(使用Newman-Kwart化学方法制备对位官能化芳族硫醇的连续方法)″Organic Preparations and Procedures International 32(6):13.

Lin,Y.-I.,P.Bitha,等(1997).″Mono and bis double ester prodrugs ofnovel aminomethyl-THF 1β-methvlcarbapenems(权项的氨基甲基-THF 1β-巯基乙醇的单和双双酯前药)″Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 7(14):1811-1816.

Lu,X.-L.,Z.-H.Liang,等(2006).″Induction of the Epstein-Barr VirusLatent Membrane Protein 2Antigen-specific Cytotoxic T Lymphocytes Using HumanLeukocyte Antigen Tetramer-based Artificial Antigen-presenting Cells(使用基于人白细胞抗原四聚体的人造抗原呈递细胞诱导EB病毒潜在膜蛋白2抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞)″Acta Biochimica et Biophvsica Sinica 38(3):157-163.

Lu,X.,L.Song,等(2006).″Synthesis and evaluation of an alpha-C-galactosylceramide analogue that induces Th1-biased responses in humannatural killer T cells(在人天然杀伤T细胞中诱导Th1偏向应答的α-C-半乳糖苷神经酰胺类似物的合成和评估)″Chembiochem 7(11):1750-1756.

Luo,S.-Y.,S.S.Kulkarni,等(2006).″A Concise Synthesis of Tetrahydroxy-LCB,a-Galactosyl Ceramide,and 1,4-Dideoxy-1,4-imino-l-ribitol via d-Allosamines as Key Building Blocks(通过作为关键结构单元的d-异源胺合成四羟基-LCB、α-半乳糖苷神经酰胺和1,4-二脱氧-1,4-亚氨基-l-核糖醇的简明方法)″The Journal of Organic Chemistry 71(3):1226-1229.

Matto,P.,E.Modica,等(2007).″A general and stereoselective route toalpha-or beta-galactosphingolipids via a common four-carbon building block(经由重建的四碳结构单元至α-或β-半乳糖苷鞘脂的总体和立体选择性途径)″J Org Chem72(20):7757-7760.

Morita,M.,K.Motoki,等(1995).″Structure-activity relationship ofalpha-galactosylceramides against B16-bearing mice(α-半乳糖苷神经酰胺针对B16携带小鼠的结构活性关系)″J Med Chem 38(12):2176-2187.

Motoki,K.,M.Morita,等(1995).″Immunostimulatory and antitumoractivities of monoglycosylceramides having various sugar moieties(具有多个糖部分的单糖基神经酰胺的免疫刺激和抗肿瘤活性)″Biol Pharm Bull 18(11):1487-1491.

Murata,K.,T.Toba,等(2005).″Total synthesis of an immunosuppressiveglycolipid,(2S,3S,4R)-1-O-(alpha-d-galactosyl)-2-tetracosanoylamino-1,3,4-nonanetriol(免疫抑制性糖脂(2S,3S,4R)-1-O-(α-d-半乳糖苷)-2-二十二烷酰基氨基-1,3,4-壬三醇的总合成方法)″J Org Chem 70(6):2398-2401.

Nicolaou,M.G.,C.-S.Yuan,等(1996).″Phosphate Prodrugs for AminesUtilizing a Fast Intramolecular Hydroxy Amide Lactonization(使用快速分子内羟基酰胺内酯化生成胺的磷酸前药)″The Journal of Organic Chemistry 61(24):8636-8641.

O′Reilly,C.和P.V.Murphy(2011).″Synthesis of alpha-S-glycosphingolipids based on uronic acids(基于糖醛酸的α-S-糖基鞘脂的合成)″Org Lett 13(19):5168-5171.

Parekh,V.V.,M.T.Wilson,等(2005).″Glycolipid antigen induces long-termnatural killer T cell anergy in mice(糖脂抗原在小鼠中诱导长期天然杀伤细胞无反应性)″J Clin Invest 115(9):2572-2583.

Park,J.J.,J.H.Lee,等(2008).″Synthesis of all stereoisomers ofKRN7000,the CD1d-binding NKT cell ligand(CD1d结合NKT细胞配体KRN7000的全部立体异构体的合成)″Bioorg Med Chem Lett 18(14):3906-3909.

Plettenburg,O.,V.Bodmer-Narkevitch,等(2002).″Synthesis of alpha-galactosyl ceramide,a potent immunostimulatory agent(一种强效免疫刺激剂α-半乳糖苷神经酰胺的合成)″J Org Chem 67(13):4559-4564.

Pu,J.和R.W.Franck(2008).″C-Galactosylceramide Diastereomers viaSharpless Asymmetric Epoxidation Chemistry(经由Sharpless不对称环氧化化学反应生成C-半乳糖苷神经酰胺非对映异构体)″Tetrahedron 64(37):8618-8629.

Raju,R.,B.F.Castillo,等(2009).″Synthesis and evaluation of 3″-and 4″-deoxy and-fluoro analogs of the immunostimulatory glycolipid,KRN7000(免疫刺激性糖脂KRN7000的3″-和4″-脱氧和-氟类似物的合成和评估)″Bioorg Med Chem Lett 19(15):4122-4125.

Sakurai,K.和D.Kahne(2010).″Design and Synthesis of FunctionalizedTrisaccharides as p53-Peptide Mimics(作为p53肽模拟物的官能化三糖的设计和合成)″Tetrahedron Lett 51(29):3724-3727.

Schneider,G.,L.Hackler,等(1985).″Ritter-reaction on steroids:Ringexpansion of steroid oxethans into dihydrooxazines(对类固醇的Ritter反应：类固醇乙氧烷环扩展为二羟基噁嗪)″Tetrahedron 41(16):3377-3386.

Secrist,J.A.和M.W.Logue(1972).″Amine hydrochlorides by reduction inthe presence of chloroform(在氯仿存在的情况下通过还原合成胺盐酸盐)″The Journal of Organic Chemistry 37(2):335-336.

Silk,J.D.,I.F.Hermans,等(2004).″Utilizing the adjuvant properties ofCD1d-dependent NKT cells in T cell-mediated immunotherapy(在T细胞介导的免疫治疗中使用CD1d依赖的NKT细胞的佐剂特性)″J Clin Invest 114(12):1800-1811.

Sullivan,B.A.,N.A.Nagarajan,等(2010).″Mechanisms for glycolipidantigen-driven cytokine polarization by Valpha14i NKT cells(Valpha14i NKT细胞进行糖脂抗原驱动的细胞因子极化的机制)″J Immunol 184(1):141-153.

Sun,C.-Q.,P.T.W.Cheng,等(2002).″A general synthesis of dioxolenoneprodrug moieties(二氧杂环戊二烯酮前药部分的总合成)″Tetrahedron Lett 43(7):1161-1164.

Tashiro,T.,N.Hongo,等(2008).″RCAI-17,22,24-26,29,31,34-36,38-40,and88,the analogs of KRN7000with a sulfonamide linkage:their synthesis andbioactivity for mouse natural killer T cells to produce Th2-biased cytokines(RCAI-17、22、24-26、29、31、34-36、38-40和88，具有磺酰胺连接的KRN7000类似物：其合成和针对小鼠天然杀伤T细胞生成Th2偏向细胞因子的生物活性)″Bioorg Med Chem 16(19):8896-8906.

Tashiro,T.,R.Nakagawa,等(2008).″RCAI-61,the 6′-O-methylated analog ofKRN7000:its synthesis and potent bioactivity for mouse lymphocytes to produceinterferon-γin vivo(RCAI-61，KRN7000的6′-O-甲基化类似物：其合成和在体内针对小鼠淋巴细胞生成干扰素-γ的强效生物活性)″Tetrahedron Lett49(48):6827-6830.

Taylor,S.D.和A.Desoky(2011).″Rapid and efficient chemoselective andmultiple sulfations of phenols using sulfuryl imidazolium salts(使用磺酰咪唑鎓盐对酚进行快速和有效的化学选择性和多重硫酸化)″Tetrahedron Lett 52(26):3353-3357.

Trappeniers,M.,S.Goormans,等(2008).″Synthesis and in vitro evaluationof alpha-GalCer epimers(α-GalCer差向异构体合成和体外评价)″ChemMedChem 3(7):1061-1070.

Tupin,E.,A.Nicoletti,等(2004).″CD1d-dependent activation of NKT cellsaggravates atherosclerosis(CD1d依赖的NKT细胞激活使动脉粥样硬化恶化)″J Exp Med199(3):417-422.

Turner,W.W.,R.N.Booher,等(1977).″Synthesis of two metabolites of(+)-propoxyphene((+)-丙氧芬的两种代谢物的合成)″Journal of Medicinal Chemistry 20(8):1065-1068.

Uchimura,A.,T.Shimizu,等(1997).″Immunostimulatory activities ofmonoglycosylated pyranosylceramides(单半乳糖苷化吡喃神经酰胺的免疫刺激活性)″Bioorganic &:Medicinal Chemistry 5(12):2245-2249.

Veerapen,N.,M.Brigl,等(2009).″Synthesis and biological activity ofalpha-galactosyl ceramide KRN7000and galactosyl(alpha1->2)galactosyl ceramide(α-半乳糖苷神经酰胺KRN7000和半乳糖苷(α1->2)半乳糖苷神经酰胺的合成和生物活性)″Bioorg Med Chem Lett 19(15):4288-4291.

Wingender,G.,P.Rogers,等(2011).″Invariant NKT cells are required forairway inflammation induced by environmental antigens(环境抗原诱导的气管炎症需要非变异NKT细胞)″J Exp Med 208(6):1151-1162.

Wipf,P.和J.G.Pierce(2006).″Expedient synthesis of the alpha-C-glycoside analogue of the immunostimulant galactosylceramide(KRN7000)(免疫刺激性半乳糖苷神经酰胺(KRN7000)的α-C-糖苷类似物的有效合成方法)″Org Lett8(15):3375-3378.

Wu,T.-N.,K.-H.Lin,等(2011).″Avidity of CD1d-ligand-receptor ternarycomplex contributes to T-helper 1(Th1)polarization and anticancer efficacy(CD1d-配体-受体三元复合物的亲合力促进T助细胞1(Th1)极化和抗癌功效)″Proc Natl Acad Sci USA 108(42):17275-17280.

Zeng,D.,Y.Liu,等(2003).″Activation of natural killer T cells in NZB/Wmice induces Th1-type immune responses exacerbating lupus(NZB/W小鼠中天然杀伤T细胞的激活诱导了Th1型免疫应答恶化的狼疮)″J Clin Invest 112(8):1211-1222.

Zhang,Z.,W.Zhao,等(2011).″The total synthesis of immunostimulantalpha-galactosylceramides from naturally configured alpha-galactosideraffinose(来自天然构型的α-半乳糖苷棉子糖的免疫刺激性α-半乳糖基神经酰胺的总合成)″Org Lett 13(17):4530-4533.

Claims

1.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

(I)

其中：

R¹是H或单糖基，条件是如果R¹是单糖基，则R²和R³都是OH且R⁴是CH₂OH；

R⁵是H；

或R⁵是式(i)基团：

(i)

其中Y是以下各式基团

;

各E¹相同或不同，独立地选自H、烷基、烷氧基、卤素、硝基芳基，或者与其相连的环一起形成稠合二环芳基；

p是1-4的整数；

t是1-2的整数；

Alk¹是C₁-C₄直链烷基；

其中，当Y是式(a)或(b)基团时，则Z是：

或者，当Y是式(c)、(d)、(e)、(f)或(j)基团时，则Z是：

u是1或2；

各A¹相同或不同，独立地选自：

可选被一种或多种取代基取代的烷基，所述取代基选自(OCH₂CH₂)_mOMe、NHC(O)OR¹⁴、烷氧亚氨基、氧、卤素、烷氧基、NHCOCH₂(OCH₂CH₂)_mOMe、、和；

m是10-1500的整数；

E²和A²各自独立地选自H和A¹；

A⁴选自H、甲基、CH₂CH₂CH₂NHC(=NH)NH₂、CH₂C(=O)NH₂、CH₂C(=O)OH、CH₂SH、CH₂CH₂C(=O)OH、CH₂CH₂C(=O)NH₂、CH₂(CH₂)₃NH₂、CH₂CH₂SCH₃、CH₂OH、、、、、、、和；

或者A⁴与其相连的碳和该碳相邻的氮一起形成吡咯烷环；

A⁵是H或苄氧基羰基；

R⁶是OR¹²、OH或H；

R⁷是OR¹²、OH或H；条件是R⁶和R⁷中至少一个是OR¹²；其中，当R⁶是OR¹²时，R⁷是H、R⁸是C_1-C₁₅烷基且X是O，则指可选的双键，其连接R⁷相邻的碳与R⁸相邻的碳；

R¹⁰是糖基；

R¹¹是低级烷基、低级烯基或芳烷基，其中，术语“低级烷基”指任何具有1-6个碳原子的饱和烃基，术语“低级烯基”指任何具有至少一个双键并具有2-6个碳原子的烃基；

R¹²是具有直链或支链碳链的C_6-C₃₀酰基，其任选地

(a)在酰基的位置2和/或3处被一个或多个羟基取代，和/或

(b)被可选取代的链终止芳基取代，

所述碳链可选地含有有一个或多个双键、一个或多个三键和/或一个或多个可选取代的亚芳基，其中，碳链可选地被一个或多个重氢原子取代；

且所述芳基或亚芳基上可选的取代基可选自卤素、氰基、二烷基氨基、C_1-C₆酰胺、硝基、C_1-C₆烷氧基、C_1-C₆酰氧基和C_1-C₆硫代烷基；

R¹⁴是可选取代的烷基、芳基或芳烷基；

X是O、CH₂或S；

当X是O或S时n是1；或者当X是CH₂时n是0或1；

R⁶是OH且R⁷是OR¹²且碳原子2、3和4处的立体化学是 (2S, 3S, 4R)、(2S, 3S, 4S)、(2R,3S, 4S)、(2R, 3S, 4R) 或 (2S, 3R, 4S)；或者

R⁶是OR¹²且R⁷是H，且R⁸是C₁₃H₂₇且碳原子2和3处的立体化学是 (2S, 3S)；

R⁶是OH且R⁷是OR¹²且碳原子2、3和4处的立体化学是 (2S, 3S, 4R)；或者R⁶是OR¹²且R⁷是H且碳原子2和3处的立体化学是 (2S, 3S)。

2.如权利要求1所述的化合物，所述化合物是式(Ia)化合物：

(Ia)

其中X、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、Y、Z、A¹、A²、A⁴、A⁵、E¹、E²、Alk¹、p、t、m、u和n全部如权利要求1中所定义。

3.如权利要求1或2所述的化合物，所述式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基。

4.如权利要求1所述的化合物，其中，X是O。

5.如权利要求1所述的化合物，其中，式(I)中的n是1，所述式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基，R⁶是OH，R⁷是OR¹²且所述碳原子2、3和4处的立体化学是 (2S, 3S,4R)。

6.如权利要求1所述的化合物，其中，式(I)中的n是0，所述式(I)中六元糖环的立体化学是α-D-半乳糖环基，R⁶是OH，R⁷是OR¹²且所述碳原子2、3和4处的立体化学是 (2S, 3S,4R)。

7.如权利要求1所述的化合物，其中，X是O，R⁶是OR¹²，R⁷是H，R⁸是C₁-C₁₅烷基且是连接R⁷相邻的碳与R⁸相邻的碳的双键，且所述碳原子2和3的立体化学是 (2S, 3S)。

8.如权利要求1所述的化合物，其中，R¹是H。

9.如权利要求1所述的化合物，其中，R²是OH。

10.如权利要求1所述的化合物，其中，R³是OH。

11.如权利要求1所述的化合物，其中，R⁴是CH₂OH。

12.如权利要求1所述的化合物，其中，R⁵是所述式(i)基团；

(i)

其中Y是以下各式基团

。

13.如权利要求1所述的化合物，其中，R⁶是OH。

14.如权利要求1所述的化合物，其中，R⁷是OR¹²。

15.如权利要求1所述的化合物，其中，R⁸是具有直链或支链碳链的C_1-C₁₅烷基，碳链中可选地含有一个或多个双键、一个或多个三键、一个或多个氧原子和/或末端或非末端的可选取代的芳基。

16.如权利要求1所述的化合物，所述化合物选自以下化合物或其药学上可接受的盐：

17.如权利要求1所述的化合物，所述化合物选自以下化合物或其药学上可接受的盐：

18.一种药物组合物，其包含药学有效量的权利要求1-17中任一项所述的化合物和可选的药学上可接受的运载体。

19.一种免疫原性组合物，其包含权利要求1-17中任一项所述的化合物、抗原和药学上可接受的稀释剂。

20.一种疫苗，其包含权利要求1-17中任一项所述的化合物、抗原和药学上可接受的稀释剂。

21.权利要求1-17中任一项所述的化合物在用于治疗或预防感染性疾病、特应性疾病、自身免疫疾病、糖尿病或癌症的药物的制备中的应用。

22.如权利要求21所述的应用，所述癌症选自黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、胶质瘤、淋巴瘤、结肠癌、头颈癌和鼻咽癌 (NPV)。

23.如权利要求21所述的应用，所述感染性疾病是细菌或病毒感染。

24.如权利要求21所述的应用，所述特应性疾病选自过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、特应性皮炎和过敏性哮喘。

25.权利要求1-17中任一项所述的化合物和抗原在用于改变患者体内免疫应答的药物的制备中的应用。