527190 A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明背景 急性腎衰竭係定義為具有氮血熱、電解質不平衡、尿毒 症及其他急性腎官能異常引起之症狀。急性腎衰竭係可分 為腎前急性腎衰竭、腎急性腎衰竭及腎官能異常引起之腎 後急性腎衰竭。腎急性腎衰竭可再分為（1 )血管炎、腎小右# 之損害、（2)急性間質腎炎、（3)腎小管閉塞及（4)狹義之 急性腎衰竭。狹義之急性腎衰竭伤由急性腎小管壞死所引 發。狹義之急性腎衰竭起因為（1)局部缺血、（2 )腎毒物質 、或（3)肌崩解之物質（即肌球蛋白）等等。 局部缺血之急性腎衰竭係由外科手術、休克、外傷、燒 傷及其他失血所造成。局部缺血之急性腎衰竭之實驗動物 模式可由腎動脈結紮來例示。在大鼠之模β中，ΒϋΝ (血尿 素氮）及血清內肌胺酸酐為升高，HGF(肝綑胞生長因子）訊 息核醣核酸（H G F it〗R N A )之表現在局部缺血後6至1 2小時為 增強，而之後在大鼠內腎臟及血漿內之HGF生物活性為活 化的（Americstn Journal of Physiology， 1 9 9 3； 26 5 ; 61-69) 〇 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 急性腎衰竭亦可由腎毒物質如抗生素、抗腫瘤劑、對比 介質所造成。由腎毒物質造成之急性腎衰竭實驗動物模式 係由給予大鼠如氯化汞、順氯氨鉛、及對比介質等化合物 達成。服用氯化汞之大鼠顯示如在局部缺血模式上所報告 之BUN及肌氨酸酐之增加，HGF ®RNA表琨與HGF活性之增加 。因此便可推測HGF參與悛復腎衰竭病人之健康。 曾有報導由局部缺血或如氯化汞及順氯氨鉑等物質造成 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規枱（210X 297公釐） 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527190 A7 B7 五、發明説明（2 ) 之實驗動物模式之腎官能異常可由投予HGF而恢復正常（ American Journal of Physidugy， 1994； 266； 129-134, P r o c * Natl. Acad* Sci. 19 9 4 i 91； 4537-4361)° 在兩 個模式中，B U N及肌胺酸酐之增加可藉H G F之投予而快速恢 復正常。因而HGF被認為可作為增加受傷害腎小管细胞之 增殖之腎生長因子。 肌崩解物質（如肌球蛋白、磷酸、鉀及尿酸）會在外傷、 壓傷（如壓傷症候群）、燒傷、感染、藥物中毒（如酒精、 巴比妥衍生物）、肌肉代謝疾病、肌肉過度使用、血內磷 酸鹽過少、蛇毒及其他傷害下釋放出並對賢小管细胞有毒 性。结果，會發生腎小管细胞之壞死、而壞死之细胞及蛋 白質（透明質）管狀物造成腎小管之堵塞。亦有報導發現肌 球蛋白會降低腎内血流。上逑機制被認為是引起橫紋肌溶 解所造成的急性腎衰竭（Cominon Disease Series 17: Z i n f u z e n Crenal f a i lure)，57-61，Nankoudo, (1991))0 橫紋肌溶解的臨床症狀有：（1)肌肉特有之酵素增加， 如肌胺酸磷酸激酶、乳酸去氫酶、醛縮酶、穀麩胺酸草醯 乙酸轉胺酶；（2)受傷肌肉增加99 m TC-焦磷酸之攝入； (3)肌球蛋白之存在；（4)0-20或更低之BUN/血清肌胺酸酐 之比例；（5)高尿酸血症；及（6)血內磷酸鹽過多、血鈣過 少及高血鉀症。 橫紋肌溶解之治療包括體液替代療法、投予利尿劑、筋 膜釋出療法、血漿去除術、抗血小板療法，但這些治療方 法皆對嚴重或較差預後者不夠。也就是沒有完備之方法可 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） e (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 V. — ϋϋ·· ml —.ml —^i·— \ m^i HBH ϋϋ· «ϋ·ϋ 經满部中决標率局員Τ-消費合作社印f 527190 A7 B7 五、發明説明（3 ) Μ治療或預防橫紋肌溶解所引起之急性腎衰竭，亦無醫藥 組合物可治療或預防橫紋肌溶解所引起之急性腎衰竭。 亦無完備之方法可Μ治療或是預防溶血性尿毒症（HUS) 或是醫藥組合物可治療或預防H US。臨床鑑定溶血性尿毒 性有血小板減少素、徼血管病之溶血性貧血，及急性腎衰 竭之症狀。溶血性尿毒症之起因有「感染（如0-157)，遣 傳、藥物之給予（如環孢素）、懷孕、器官移植、全身性紅 斑狼瘡、高血壓、不同血型之輸血或其他等等。溶血由上 逑情形造成，然後血紅素或其他物質便釋出，最後便發生 溶血性尿毒症。 一甘油引發之動物模式公知用於模擬急性腎衰竭。在動 物模式中，當甘油注射至動物之肌肉，甘油之高滲性造成 肌肉細胞及肌間小管之溶血。肌球蛋白、血紅素、鉀及其 他橫紋肌溶血物質釋出至血液並危及腎细胞。動物模式之 脫水進一步促進橫紋肌溶血物質之毒性。結果，造成嚴重 之腎血流減少及局部缺血，而嚴重之腎小球濾過造成尿液 減少及無尿。在甘油注射之肌肉部分變為儲存體液之處， 且全身之循環、血液流速、及心臟輸出皆降低（JINS ΙΚΚΑΝ M0DEL(a model for renal disease)* JIN TO TOUSEKK kidney and dialysis) Vol*31(1991) 395-399)。若進 行模擬之動物在投予甘油前便已缺水，則肌崩解之效應加 強而引發了橫紋肌溶解之模式。 本發明之簡要說明 本發明提供一醫藥組合物，用於治療橫紋肌溶解所引起 之急性腎衰竭，該組合物含有治療上有效量之HGF。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 6 527190 A7 B7 五、發明説明（4 ) 本發明提供一方法用於治療橫紋肌溶解所引發之急性腎 衰竭，其包含投予治療上有效量之H G F至有需要之病體， 特別是病人。 本發明另提供醫藥組合物來治療肌球素尿，其包含治療 上有效量之H G F。 本發明另提供一方法來治療由肌崩解物質釋出引起之橫 紋肌溶解所造成之急性腎衰竭，該肌崩解物質係因外傷、 壓傷（如壓傷症候群）、燒傷、感染、藥物中毒（如酒精、 巴比妥衍生物）、肌肉代謝疾病、肌肉過度使用、血內磷 酸鹽過少、蛇毒及其他傷害下釋放出該方法含有投予治療 上有效量之HGF至有需要之病人。 本發明另提供醫藥組合物來治療由肌崩解物質釋出引起 之橫紋肌溶解造成之急性腎衰竭，該肌崩解物質係因外傷 、壓傷、燒傷、感染、藥物中毒（即酒精、巴比妥衍生物） 、肌肉代謝疾病、肌肉過度使用、血內磷酸鹽過少、蛇毒 及其他傷害下釋放出該醫藥組合物含有治療上有效量之 H G F 〇 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項4填寫本頁) 本發明另提供醫藥組合物來治療溶血性尿毒症，其含有 治療上有效量之HGF及醫藥上可接受載劑。 本發明又提供方法來治療溶血性尿毒症，其含有投予治 療上有效量之H G F至有需要之病人。 本發明另提供醫藥組合物來治療因感染（如0 -1 5 7 )，遺 傳、藥物之給予（如環孢素）、懷孕、器官移植、全身性紅 斑狼瘡、高血壓，不同血型之輸血或其他等等所引起之溶 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規枱（210X297公釐） η 527190 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（6 ) application ΚΟΚΑ I 5 - 1 1 1 3 83; Japanese patent application KOKAI 3-255096; Biochem. Biophys. Res. Commun·，1 6 3, 967 , 1 989 ). 宿主細胞並未特別限定，一般用於遺傳工程方法之各種 宿主細胞皆可使用，例如大腸桿菌（Escherichia coli)、 枯草桿菌（Bacillus Sub tilus)、酵母菌、黏菌、真菌、植 物及動物細胞及其他等等。 從活體組織製備HGF之一更特定方法包含步驟有注射四 氯化碳至大鼠之腹腔以引發大鼠肝炎，將該大鼠之肝摘除 並將之同質化，並用蛋白質純化之一般步驟如膠體柱色層 分析（如S -瓊脂糖、肝素瓊脂糖及其他）、高效液相色層分 析等來純化HGF。 HGF可用遺傳工程之方法製備，其包含步驟有將編碼爲 HGF胺基酸序列之基因轉形至動物細胞（如中國倉鼠卵巢 細胞CCHO cel 1 s )，小鼠C127細胞，猴子之COS細胞’ S f ( S ρ 〇 d 〇 p t e r a f r u g i p e r d a )細胞等）’並從該細胞懸浮液 純化HGF。 HGF包含人類之HGF及哺乳類之HGF，較佳爲人類之 HGF，更佳HGF爲人類基因重組之HGF(J apanese patent application KOKAI H5-111383(1993))。 由上述方法製備之HGF包含具有大體與全長HGF相同之 HGF，如HGF之部份刪除衍生物，HGF之單胺基酸取代衍生 (請先閱讀背面之注意事項
本頁) · •線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 修正頁 527190 A7 B7 五、發明説明（7 ) 物，H G F之胺基酸序列插入衍生物，由將一個或以上之胺 基酸結合至H G F胺基酸序列之Ν端或C端所做式之H G F衍生物 ，或是糖鏈刪除或取代之HGF。 HGP可Μ不同方式處方如液體製備，固體製備、膠囊製 備、長效製備等。HGF之處方可為不需載劑或是適當既有 載劑下注射之非經腸投予及在適當既有載劑之口服方式。 注射式之非經腸投予之處方可由熟於此技藝者既知之方法 來製備*如方法含有步驟為將HGF溶於適當溶劑如經滅菌 之水、雜衝液、等張氯化納溶液等，用濾過滅菌並裝該溶 液於滅菌瓶中，非經腸吸收處方之HGF之量為約0,0002至 約（Κ 2 ( w / w % *較佳量為從約0 . 0 0 1至約0 , 1 ( w / w % )。處方 可由既有處方技術製備。根據處方，所治療之疾病，病人 之症狀等H G F之量可Κ變動。H G F可做為直腸組合物處方如 栓劑或滯留性灌腸，如含有既有栓劑基質如可可油、水溶 性基質（含甘油之明膠、聚乙二醇等）或其他甘油脂。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) HGF可Μ吸入形式投予。為使HGFK吸入投予，既有方式 係Μ從加壓包裝或霧化器呈現噴霧水沫之方式蓮送，並使 用適當之推進器如二氧化碳或其他適當氣體。 可用熟於此技藝者既知之藥物輸送系統投予HGF。製備 藥物輸送系統之例有微球粒（極微粒、微粒、微膠囊、珠 粒、徼脂粒、多重乳化等）及相似物。 較佳，安定劑可加入處方之中。安定劑之例包含白蛋白 、球蛋白、明膠、甘露酵、葡萄糖、葡聚_、乙二醇及相 似物。本發明之處方可含有必需之添加劑例如賦形劑、肋 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規枱（210Χ 297公釐） _ ί Λ _ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527190 A7 B7 五、發明説明（8 ) 溶劑、抗氧化麵、止痛麵、等張劑及相似物。液狀處方可 儲存於冷凍狀態，或在用如冷凍乾燥之方法除去水分後儲 存。冷凍乾燥製劑可在使用前溶於水用於注射及其他相似 物。 投予HGF之有效劑量與時間表要Μ實驗決定，其為熟於 此技藝者之技術可做決定。製備之投予途徑可依據製備之 形式而有不同，例如，非經腸吸收之製備可由靜脈内、動 脈內，皮下或肌内注射。投予量可依據病人症狀、年齡、 體重等變動。劑量可選自從0.1/i g至10rog/kg 體重之範 圍。較佳範圍為從lu g至400& g/kg。HGF製備可每天一次 或數次（2或3)投予。 HGF亦可做長效製備之處方。此種長久作用處方可Μ植 入方式（例如皮下或肌内）投予或肌内注射。因此，例如可 與合適聚合的或疏水材料（例如做為在可接受油内之乳化 劑）、離子交換樹脂做處方，或做為黴溶衍生物，例如做 為微溶性之可溶性鹽。 投予長效製備之有效劑量與時間表要Κ實驗決定，其為 熟於此技藝者之技術可作之決定。儲存製備之投予途徑可 依據製備之形式而有不同。 儲存製備投予之較佳模式為一週至少一次，較佳為每月 至少一次。 本發明之一目的為提供一包裝產品、套組或製造商品， 含有HGFM治療因橫紋肌溶解或肌球蛋白尿引起之急性腎
衰竭。包裝產品可含有容器，其含有治療上有效量之HGF 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規枱（210Χ 297公釐） ,3 ί —^—^1 ^ϋ-ϋ ml ^ιϋ__— an ***v\j^^ —^m —mi ϋϋ· 1__ι_ιϋ BUI— iil_l— 一 ^ m_i— l_ai mu— mis (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527190 A7 B7 五、發明説明（9 ) Μ治療因橫紋肌溶解或肌球蛋白尿引起之急性腎臟疾病， 及附於容器之指示說明可指出H G F可用於治療因橫紋肌溶 解或肌球蛋白尿引起t急性腎衰竭疾病。例如，HGF可置入 滅菌小瓶中，接著可放入另一容器如盒中，關於本發明藥 物投予之指示說明可置於小瓶之標籤上及/或在盒上及/或 塞入盒内做為包裝內含物。 實施例 下列實施例僅為例示並非囿限本發明。 實施例1 材料 動物 雄性威斯塔大鼠（wistar rats)(7週大）購自NIHON SLC (S h丨z u 〇 k a ,日本），並先被飼養三天。雄性威斯塔大鼠 (7 , 5週大，重量約2 0 0 g )使用於下逑實施例。 急性腎衰竭模式之方法 製備鹽水中50¾之甘油溶液並在二乙醚麻醉下K肌内注 射至大鼠（lOinl/kg)，該大鼠在注射前已缺水15小時。在 注射8小時後大鼠可自由喝水。 注射劑 重組之人類肝细胞生長因子（hHGF)用HGF溶液稀釋至125 ug/ml0經由尾靜脈注入2fflg/kg(25〇iUg/inl)之劑量° HGF之溶液為10mM檸檬酸鈉水溶液，其含有0 , 3M氯化鈉 及 0. 01¾吐溫 80 (Tween 80)。 投予 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） ，。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·裝· 、17 527190 A7 B7 五、發明説明（10) 大鼠分為二組，一為控制組，另一為投予hHGF組。在投 予甘油前一小時注入h H G F溶液並在甘油注入後1、3、5、8 、24及36小時亦注入hHGF溶液。在甘油注入後1及3小時注 射IbiL之鹽水至控制組。在甘油注入後5及8小時亦注入1ml 之水至控制組。 症狀之觀察 在注射甘油後1 4天觀察大鼠之存活率。 結果 甘油之注射引起大鼠嚴重之急性腎衰竭而血清Β ϋ N及血 清肌胺酸酐之值在二天之後許多仍為增加（血清肝胺酸酐 之值：控制組=5,1土1.2姐§/(11，投予1^「之組=4.2士0,8 ffi g / d 1 ) ° 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖1顯示大鼠之存活率。在控制組從注射甘油之第三天 起觀察到大鼠之死亡，而在9天内13隻大鼠中之9隻死亡， 在其死亡後大鼠立刻進行死後之檢驗，而腎之外觀被觀察 到甚不相同。並觀察到腎皮質輸尿管之壞死。在投予H G F 之組，在實驗期間並未觀察到死亡。在甘油注射後1 4天之 存活率Μ X-平方法來分析，而投予HGF之組之存活率為顯 著高於（Ρ < 0 . 0 1)控制組。 實施例2 材料 實驗動物
雄性威斯塔大鼠（wistar rats)(7週大）購自NIHON SLC (Shizuoka,日本），並先被飼養三天。雄性威斯塔大鼠 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規枱（210X 297公釐） ，9 經满部中戎標準局员h消費合作社印f 527190 A7 B7 五、發明説明（11) (7, 5週大，重量約20 Og)使用於下述簧施例 急性腎衰竭模式之方法 製備鹽水中50¾之甘油溶液並在二乙醚麻醉下Μ肌内注 射至大鼠UOml/kg)，該大鼠在注射前已缺水15小時。在 注射8小時後大鼠可自由喝水。 注射劑 重組之人類肝細胞生長因子（hHGF)用HGF溶液稀釋至125 u g/nil。經由尾靜脈注入2aig/kg(250itig/ffll)之劑量。 投予 大鼠分為二組，一為控制組（η = 10)，另一為投予hHGF 組（η = 10)。在投予甘油前一小時注入hHGF溶液並在甘油 注入後1、3、5、8、2 4及3 6小時亦注入h H G F溶液。在甘油 注入後1及3小時注射1 in 1之鹽水至控制組。在甘油注入後5 及8小時亦注入1 in 1之水至控制組。 測量血清及尿液生化值 在甘油注射後1、3及6天於乙二醚麻醉下由尾部動脈取 得血清、血清尿素氮（BUN)及血清肌胺酸酐（Cre)之量藉由 超徼量多用途生化自動分析儀，CHEM1來測量。利用代謝 籠在注射甘油後1、3、6天收集1 2小時之尿。測量尿液量 。在尿液中肌胺酸酐之量K超微量多用途生化自動分析儀 ，（:HEM1來測量。由上面數據來分析，內生性肌胺酸酐之 肅清力可由下逑方程式得到。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣 訂 14 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527190 A7 B7 五、發明説明（12 ) 尿液肌胺酸酐值（ffig/dl) X 12 小時收集之尿液（m 1 ) 内生性肌胺酸酐之肅清力- 血清之肌胺酸酐值（mg/dl) X 尿液收集時間（720inin) 症狀之觀察 在甘油注射後1 5天觀察大鼠之存活率。 統計處理 在甘油注射後15天之存活率用X-平方鑑定法分析。 在甘油注射後1及3天所得血清生化值以t-鑑定法或威爾 式鑑定法（welch-test)分析。 结果 存活率 在控制組，在甘油注射後三天起觀察大鼠之存活率，而 9天內10隻大鼠有7隻死亡，在投予HGF之組，在實驗進行 中有10隻大鼠有2隻死亡。投予HGF之組之存活率顯著高於 (Ρ<0,05)控制組。 血清及尿液之生化值Μ及腎功能 圖2顯示由血清、尿得到之生化值及腎功能。 在控制組，在甘油注射後開始一天便觀察到血清Β ϋ Ν及 肌胺酸酐之顯著增加，而其值變差有6天之久。內生性肌 胺酸之肅清力保持在0 . 1或以下並觀察到嚴重腎衰竭症狀。 相反的，在投予H G F之組，在甘油珪射後三天之久觀察 到血清Β ϋ Ν之減少，其伴隨急性腎衰竭之顯著壓制（Ρ < 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） ,e 丨*裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 口 HI : n - . -—. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527190 A7 B7 五、發明説明（13 ) 0.05)，同時，内生性肌胺酸酐之肅清力亦顯著改善（P< 0.05) 〇 實施例3 材料 動物 雄性威斯塔大鼠（wistar rats)(7週大）購自NIHON SLC (Shizuoka,日本），並先被飼養三天。雄性威斯塔大鼠 (7,5週大，重量約20 0g)使用於下逑實施例。 急性腎衰竭模式之方法 製備鹽水中50%之甘油溶液並在二乙醚廳醉下以肌内注 射至大鼠（1 0 m 1 / k g )，該大鼠在注射前已缺水1 5小時。在 注射8小時後大鼠可自由喝水。 注射劑 重組之人類肝细胞生長因子（h H G F )用H G F溶液稀釋至1 2 5 "g/ml。經由尾靜脈注入2nig/kg(25〇iUg/nii)之劑量° 大鼠分為二組，一為控制組（η = 8 )，另一為投予h H G F組( η = 8)。在投予甘油前一小時注入hHGF溶液並在甘油注入 後1、3、5、8、2 4及3 6小時亦注入h H G F溶液。在甘油注入 後1及3小時注射1ml之鹽水至控制組。在甘油注入後5及8 小時亦注入1 m 1之水至控制組。 腎組織之分析 在甘油注射後3天殺死大鼠，萃取其腎臟，K福馬林磷 酸緩衝液固定並包埋於石蠟中。由石蠟包埋之組纖製作腎 切片並M PAS法染色。取得每隻大鼠切片之腎皮質光學顯 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規梏（210Χ 297公釐） _ 1 ρ _ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ---I_ ,_裝-- 、1· 527190 A7 _ B7 五、發明說明（14 ) 像，並分析腎皮質小管細胞之壞死程度。分析藉由微少、 輕微與嚴重來評定。在控制組及投予HGF之組間之差異由 X -鑑定法決定。 ΐϋ 賢小管細朐之組織傷害 腎組織傷害程度顯示於表1。在投予HGF之組則相對於 控制組，傷害被顯著壓制。 表1 嚴重 輕微 弱 控制組 6 1 1 投予HGF之組 0 4 4 補充實施例 實施例4 方法 使用購自日本SLC公司（Shizuka，日本）之雄性威斯塔 (Wistarrat)大鼠來進行以下之實驗。 將HGF溶解於賦形藥（含有0.3 M NaCl及0.01% Tween 80 之10mM Na-citrate緩衝液（ρΗ6·0))中，濃度調整至0.125 mg/ml 0 將16隻大鼠分別接受HGF(lmg/kg/劑，2劑）或賦形藥 (lml/kg/劑）。在注射甘油前的1和18小時，由靜脈注射 HGF或賦形藥。在第一次HGF或賦形藥注射後，所有大鼠 立刻保持在缺水狀態。在每次注射後之30和45分鐘，所 有動物皆藉由皮下給予一含有〇·45 %氯化鈉和025%葡萄 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -I.---------*---裝—— (請先閱讀背面之注音？事項寫本頁) 訂： 線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 17修正頁 527190 A7 ___ B7 五、發明說明（15 ) 糖之溶液。在乙醚麻醉下，將8ml/kg之溶於〇·9%鹽水中 之5 0%甘油，由肌肉注射至大鼠的兩側後腿。在甘油注射 後4小時，經口投予2ml的水。之後就任大鼠任意地飮水。 在實驗期間，每日觀察大鼠的存活情形並測量其體重。在 生化分析方面，將大鼠以乙醚麻醉，藉由尾靜脈取得血液 樣品。在甘油注射後之第2、5及6天測量尿素氮（urea nitrogen，BUN)及血淸肌氛酸酐（serum creatinine，Cre)。 在甘油注射後之24小時則測量天門冬酸胺基轉移酶 (aspartate aminotransferase)及氨基丙酸胺基轉移酶 (alanine aminotransferase)的血淸量（AST 和 ALT)。 結果 圖3顯示大鼠的存活率。在控制組方面，在接受甘油後 3天觀察到大鼠的死亡，而8隻大鼠在6天內死了 6隻 (75%)。剩下的兩隻大鼠出現全身痙攣現象，瀕臨死亡。在 甘油注射前的1及18小時由靜脈投予HGF(lmg/kg)顯著防 止了這些動物的死亡，即使是在此一嚴重之模式下。在觀 察期結束時（第6天），施以HGF之大鼠之存活率明顯高出 施以賦形藥之大鼠（P<〇. 01)。施予賦形藥而存活之大鼠’ 其體重繼續減少達七天之久。然而，施予HGF之大鼠之體 重在注射甘油後5天停止減少，並開始回復（圖4 A)。兩組 大鼠體重之差異在甘油注射後之第5及第6天很明顯（分別 爲 Ρ<〇·〇5) 〇 在施予賦形藥之大鼠中，反應腎功能的生化指數一 BUN(圖4Β)及血淸Cre(圖4C)，在甘油注射後2天顯著上 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項Η Γ本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 18修正頁 527190 A7 B7 五、發明說明（16 ) 升。在施予賦形藥而存活之大鼠中，該等指數在觀察期間 持續惡化。在施予HGF之大鼠中，BUN及Cre値在甘油注 射後2天明顯地被抑制（分別爲Ρ<〇.〇1，Ρ<〇.〇〇〇1)。再者， 相對於施予賦形藥之大鼠，該等指數在觀察期間開始回復 到正常値。 對施予賦形藥之大鼠，甘油的注射明顯地於注射後12 小增加了反應肝損害之生化指數—血淸AST及ALT値。 相反地，血淸AST及ALT在施予HGF之大鼠中，較施予 賦形藥之大鼠來得低。該等組群在AST及ALT値上有顯 著之不同（圖5A，B，分別爲Ρ<0·001)。 (請先閱讀背面之注意事項 本頁) 裝 0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 19修正頁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 527190 A7 ____B7___ 五、發明說明（17 ) 圖式之簡單說明 圖1爲顯示控制組及投予HGF組之存活率之組。 圖2爲一圖，其顯示在注射甘油後一、三及六天之血淸、 尿、及腎功能之生化値。 圖3爲HGF之前處理對大鼠死亡之影響。符號表示：（籲) 施予HGF之大鼠；（〇）施予賦形藥之大鼠。**Ρ<〇·〇ι。 圖4(A)、4(B)和4(C)爲施予賦形藥或HGF之大鼠之體重變 化（Α)及反應腎功能之生化指數（B : BUN ; C : Ci:e)。符號 表示：（·）施予HGF之大鼠（N = 8);(〇）施予賦形藥之大鼠 (第-1、0、1、2 天，N = 8;第 3、4 天，N = 6;第 5 天，N = 3; 第 6 天，N = 2)。*Ρ<0.05，**Ρ<0·01，***Ρ<0.001。 圖5(A)和503)爲HGF之前處理對大鼠中，反應肝損害之 生化指數（A : AST ; B : ALT)之影響。符號表示：（)施予 HGF之大鼠（N = 5) ; ( □)施予賦形藥之大鼠（N = 5)。 **尸<0.001 。 (請先閱讀背面之注音？事項再本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20修正頁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）