TW491828B - Bis alkanoyl esters of carnitine having bactericidal, fungicidal and antiprotozoal activity - Google Patents

Description

491828 A7 B7 五、發明説明（ 本發明爲關於下式（I )之DL —、D —或L —肉毒 鹼酯 H^C—N h3c X" 0\ ο \r ο 〇、

、R •Cg ⑴ 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 R爲具有2 - 1 6個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不 飽和烷醯基， Y爲具有3 - 6個碳原子之直鏈或支鏈伸烷基、或鄰 、間或對一苯二甲基；且 X 一爲藥理容許酸之陰離子。 式（I )化合物具有兩個對掌中心。其各可彼此獨;^ 表示D或L構型。 式（I )化合物被賦與強力的抗細菌、抗真菌與抗原 蟲活性。 本發明亦關於化合物（I )之製法及藥學組成物，其 爲用於治療由細菌、酵母、真菌或原蟲作爲單一或混合感 染病原之皮膚疾病。 可被本發明組成物處理之侵入皮膚感染實例爲由皮真 菌所引起者（體癖、股癬、頭癬、腳癬、鬚癬、甲癬）； 由類酵母株所引起者，如鵝口瘡、唇炎、鼻咽炎、外陰陰 道炎、龜頭包皮炎、擦疼、變色糠疹、耳炎、甲炎、甲周 皮炎；由細菌所引起者，如膿疱、葡萄球菌鼻架炎、紅癬 、陰道炎、及由原蟲引起者，如皮膚利什曼病、棘狀阿米 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491828 A7 B7 五、發明説明（2 ) 巴原蟲所引起的角膜炎、由毛體線蟲所引起的陰道炎。 於混合皮膚感染外陰陰道炎、陰道炎、龜頭炎、龜頭 包皮炎中，應注意患者若於糖尿病之經感染的皮膚潰瘍、 外耳感染、及免疫危害患者中之感染。 本發明之組成物亦可用於治療對最普通的抗有絲分裂 劑及抗生素耐受菌株之感染性病理及用於消毒手術暴露之 組織。 於式（I )化合物中，R較佳具有9 一 1 3個碳原子 〇 R較佳爲癸醯、十一醯和十三醯。 Y較佳爲選自三伸甲基、四伸甲基、五伸甲基、六伸 甲基和鄰、間或對一苯二甲基。 X 一較佳爲選自氯、溴、甲烷磺醯鹽、磷酸鹽、酸式 反丁烯二酸鹽、反丁烯二酸鹽、酸式酒石酸鹽和酒石酸鹽 〇 由於式（I )化合物爲特別有效於治療皮膚疾病，故 本發明之較佳組成物爲適於局部運用之皮膚製劑，例如乳 劑、藥膏、凝膠、乳液、溶液等。適當的組成物被認定爲 內含0. 5至2%重量比，較佳爲1至1. 5%重量比之 一種式（I )化合物。 本發明組成物製備中所用之賦形劑已爲熟知且爲熟悉 配藥及藥劑技術者注意到欲製備之特定組成物所明白知曉 〇 關於先前技術，考慮構造及活性方面與本發明化合物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） — -5 一 衣IT (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 491828 A7 B7 五、發明説明（3 ) 最接近之已知化合物爲下式之醯基L -肉毒鹼之長鏈酯類

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其中R爲具有2 - 1 6個碳原子之直鏈或支鏈醯基，n爲 整數7至1 5且X-爲藥理容許酸之陰離子，其爲揭示於 ΕΡ-Α —〇 552137 及 ΕΡ — Α — 0 552138 ’兩者均與本專利申請案爲相同之申請 者。ΕΡ—Α-0 552 137爲揭示此類化合物抗 細菌活性而ΕΡ — Α - 〇 5 52 1 38爲揭示其抗真菌 活性。 於此些已知化合物中，異戊醯1-肉毒鹼^--基酯甲 院磺醯鹽（化合物編號：ST 1103)於作爲抗細菌 及抗真菌劑兩者中顯示出最強活性。 現今發現式（I)化合物被賦與較已知化合物甚至更 爲強力的抗細菌及抗真菌活性，更佳的皮膚耐受性及更低 的細胞毒性。 此些化合物亦顯示出已知化合物未事先揭示的抗原蟲 活性。 參考反應流程，當Α = 0-時（其後流失Cj?-)，製 法包括下列步驟： (a )令院醯L -肉毒驗內鹽懸浮於一有機、無水惰 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491828 A7 ____B7 五、發明説明（4 ) 性溶劑如N，N—二甲基甲醯胺、乙睛或二氯甲烷中； (b )於0 °C — 1 0 °C下，在懸浮液中加入相當於烷 醯L 一肉毒鹼1/2莫耳量之式Z — Y — Z化合物，其中 Y具有前述定義且Z爲選自鹵素、較佳爲氯或溴、0 -甲 磺醯或甲苯磺醯； (c )令懸浮液於2 0°C — 5 0°C攪拌下保持2 4小 時直到懸浮液完全溶解； (d )加入溶劑如乙基醚或己烷令反應粗產物沈澱、 濾出產物並以丙酮或甲基乙基酮清洗至取得固體產物； (e )令產物溶於水中並於經式HX之適當酸活化之 強鹼性樹脂如Amberl ite IRA-402上洗脫，以取得 於尋求後型式中之含鹽化產物； (f) 令洗脫物冷凍乾燥或濃縮以分離此固體產物； 及 (g) 令步驟（f )之固體於C8矽膠上層析、以 H20/CH3N 70 : 30洗脫而予以純化。 選擇性地，當A = C j?時，製法包括下列步驟： (a )令院醯L -肉毒鹼醯基氯懸浮於有機、.無水 惰性溶劑如N，N —二甲基甲醯胺、乙睛或二氯甲烷中； (b /)於室溫下在懸浮液中加入相當於烷醯l 一肉 毒鹼1/2莫耳量之式Z—Y - Z化合物，其中γ具有前 述定義且Z爲OH ; 本紙張尺度適用中國國家標準(iNS ) A4規格（210X297公釐）一 7 一 '' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· -訂 反應流程

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491828 A7 __B7 五、發明説明（5 ) (c >)令懸浮液於室溫攪拌下保持1 6 - 2 4小時 直到懸浮液完全溶解； (d >)於真空下令溶液濃縮至乾； (e >)令由此所得之粗產物以矽膠層析純化、以 H20/CH3CN溶液洗脫；及 (f /)經濃縮且續以冷凍乾燥令化合物分離。 〇 (Γ) 〇 IRA 402[X']

⑴ 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

491828 A7 ___ B7 五、發明説明（6 ) — A =〇—，C芡 Y =爲如前述

Z = C 义、Br、I、〇Ms、〇Ts、〇H M s =甲礎酿基 T s =甲苯磺醯基 χ-=藥理容許酸之陰離子 本發明之部分化合物的製備及物化特性爲示於$ ^ # 一 F列非 限定實施例中。 實施例1 雙（H--*醯L 一肉毒鹼氯）對一苯二甲基二酷（s 了 1 2 2 6 )之製備 丨._：_______ΦΓ, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂·

〇 令十一醯L —肉毒鹼內鹽（8. 5克；0. 025莫 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 耳）懸浮於5 0毫升之無水N，N —二甲基甲醯胺中。 冷卻至0 °C，於懸浮液中加入α，α / —二溴基對一 二甲苯（3. 4克；0· 013莫耳）。令所得之混合液 於攪拌下保持4小時直到達成完全溶解。於溶液中加入乙 基醚直到膠狀塊完全沈澱。 由此所得之粗產物重覆以丙酮清洗並於真空下過濾生 成7克之固體產物。莫耳產率6 5% (以α，α -二溴基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -9 一 491828 A7 B7 五、發明説明（7 ) 對一二甲苯計算）。 令產物溶於水中並於IRA — 402 (140毫升） 上洗脫活化成C j?-形式。 由冷凍乾燥洗脫物/取得6 . 3克微吸濕性產物。 C44H78〇8N2C义2之元素分析 C% H°/〇 N°/〇 Cl°/〇 計算值 62.68 10.40 3. 32 8.41 實測值 60.25 8. 98 3. 03 8. 1 0

H2〇 1. 4°/〇 Η P L C

柱：SGE-SCX(5//m) 1 2 5 0 m m X

4 . 〇mm 溫度：3 0 °C 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 洗脫液：CH3CN/NH4H2P04 5 0 m μ 65/35 pH=T (NH4OH) 流速：0. 75毫升/分鐘 R t : 1 7 . 6 分鐘

D (α ) =-17 ( c = 0. 6%Η20) 2 5 Ν Μ R C D C 1 3 1 Η ά 7 . 4 (4Η，苯基） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -10 - 491828 A7 B7 五、發明説明（8 ) 5 6 ( 2 Η m y 2 c I H ) $ 1 〇 C 〇 5 . 2 ( 4 Η ， S 2 C H 2苯基） ; 4 . 2 — 4 0 ( 4 H d d y 2 N + c H 2) 3 . 4 ( 1 8 Η s 2 ( C H a) 3 N + ); 3 . 0 — 2 8 ( 4 H y m 2 c H 2 c 0 0) 2 . 3 ( 4 Η t ϊ 2 〇 C 〇 c H 2) ; 1 . 6 ( 4 Η m j 2 C H 2,丨 C H 3 ) t 1 . 1 ( 3 2 Η m > 2 ( C H 2) 8) t 0 . 9 ( 6 Η t j 2 C H 3) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實施例2 雙（十一醯L 一肉毒鹼氯）對一苯二甲基二酯（S T 1/2 2 6 )之製備（經由醯基氯途徑，參見反應流程，A =C j?) 令十一醯L —肉毒鹼氯（18克；0. 05莫耳）懸 浮於5 0毫升之二氯甲烷中並加入亞硫醯氯（7. 5毫升 ;0. 1莫耳）。令混合液於室溫攪拌下保持3小時。 其後於真空下令混合液濃縮，殘留約重覆以E t 20 清洗並濃縮。 令反應產物懸浮於無水二氯甲烷（5 0毫升）中並歷 2小時逐份加入1，4 一苯二甲醇至混合液中。所得之混 合液於室溫攪拌下保持過夜。於真空下令反應混合液濃縮 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -11 一 491828 A7 B7 五、發明説明（ 反應粗產物以C 8矽膠層析純化，以Η 2 0 / c Η 3 C Ν 70 : 30 洗脫。 令內含標題化合物（ST 1 2 26)之餾分濃縮且 其後令以冷凍乾燥。 由此所得之產物顯示出同於實施例1所得化合物之特 性。 · 實施例3 雙（十三醯L 一肉毒鹼氯）三伸甲基二酯（ST 1 2 3 3 )之製備 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

nrr 一 〇=Τ°

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 令十三醯L 一肉毒鹼內鹽（5. 15克； 〇· 0144莫耳）懸浮於50毫升之無水N，N— D M F中。冷卻至〇 °C下，於懸浮液中加入1，3 —二溴 丙烷（0. 73莫耳，0. 0072莫耳）。所得之混合 液於室溫攪拌下保持過夜。 其次，加入兩次過量的十三醯L -肉毒鹼內鹽（ 0 . 5克）並再將混合液於攪拌下保持過夜，直到反應混 合液爲完全溶解。 於反應終了時，加入乙基醚直到反應粗產物完全沈澱 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）_ _ 491828 A7 B7 五、發明説明（10 ) 〇 濾出固體物可得6克產物，令其溶於水中並於I RA -402 (1 20毫升）上洗脫活化成形式。 取得5克之標題化合物（ST 1 2 3 3 )。產率 4 4%° C43H84〇8N2C义2之元素分析 C°/〇 H°/〇 N°/〇 Cl°/〇 以3. 35%H2〇計算 60. 28 10. 25 3. 27 8. 27 實測值 60.82 10.46 3. 17 8.50 i a = - 1 3 . 2(c = 1%H20) v N M R C D C 1 a ^(55. 6(2H，m，2 — CH〇C〇）； 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4. 5(2H，d，2N+— C ϋ_Η )； 4. 3 — 3. 9(6H，m，2N+— CHJi_; 2 C H 2 0 )； 3.5(18H，s，2(CH3)3N+); 3 . 0 — 2. 8 (4H- 2CH2C00)； 2 . 3 (4H， t ，〇C〇CH2); 2· 0(2H，m，-CH2 — C H ? - C H 2 -)； 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）_ _ 491828 A7 B7五、發明説明（11 ) 1 . 6 ( 4 Η，m，2 C H ^ C Η 3 ); 1.2(36H，s，2(CH2)9); 0.8(6H，t，2CH3) 實施例4 雙（十一醯L 一肉毒鹼氯）鄰一苯二甲基二酯 ST 1249)之製備 〇

〇 Ο I cr 0¾ο 丫 (叫CH3 〇 如實施例1所述製備並分離出標題化合物。產率5 8 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) % 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C44H78〇8N2C又2之元素分析 Η P L C 柱·· SGE-SCX(5//m) 1 2 5 0 m m X 4 . Omm 溫度：3 0 °C 洗脫液：ch3cn/nh4h2po4 6 5 / 3 5 ρ Η = 7 . 2 流速：1毫升/分鐘 R t : 9 . 6 8 分鐘 5 0 m Μ Ν Η 4 〇 Η ) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -14 - 491828

A7 B7 五、發明説明（i2 ) 2 5 C a ] =—16〇C(c = 1%H2〇）

D nmr對應於實施例1。 實施例5 雙一（十一酿一 L 一肉毒鹼氯）間一苯二甲基二酯（ S T 1250)之製備

如實施例1所述製備並分離出標題化合物。產率7 8 %對應於C44H7808N2C又2之元素分析 Η P L C爲如實施例1所述。 R t = 9 . 1 8 分鐘 N M R對應如實施例1所述 2 5 〔α〕 = - 18· 2。（c = 〇. 5 % Η 20 ) 本發明化合物之強力的抗細菌、抗真菌與抗原蟲活性 及其對最接近之先前技術化合物，如上^^胃戊基L 毒鹼十一基酯甲烷磺酸鹽（ST 1 1 〇 3)之優異性爲 於數個藥理試驗中評估，其部分示於下。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）—15 裝 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491828 A7 B7 五、發明説明（13) 生體外抗微生物活性 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ST1226與ST 1103於革蘭氏陽性和革蘭 氏陰性菌（參與皮膚病之實驗室收集及新鮮的臨床分離物 )上之最低抑制濃度（m c g / m {)之比較 材料和方法 由米勒—希頓培養液（Mueller-Hinton broth)之過 夜培養物製得細菌懸浮液，並以相同培養基將9 6孔口微 適度平板之各孔口調整至終濃度5. 0乂104細胞/毫 升。於懸浮液中加入物質稀釋液（0. 3對數）/米勒一 希頓培養液，以使其具有0.19至100mcg/m义 範圍之終濃度。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 其後將微滴度物於2 7 °C下培養1 8小時（參見L. D. THRUPP，於液體培養基中抗生素感受性試驗，於： Antibiotics in laboratory medicine. V· L0RIAN出版 ，第 I I 版，4，93 - 150，Williams & Wilkins, Baltimora， MD 21202 U·S.A) 0 結果 關於實驗室收集及臨床分離物之菌株數據分別記錄於 表1及2。由單獨之結果及平均MI C值可看出’ ST 1 2 2 6較ST1 1 0 3於革蘭氏陽性菌上展現出較高'活 性（表1 a及1 b )。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） j — 491828

7 B 五、發明説明（14 ) 相反地，兩物質對於革蘭氏陰性菌並未發現有顯著差 異（表2 a及2 b )。 表la ST 1226及ST 1103對革蘭氏陽性 菌（實驗室收集）之最低抑制濃度（m c g/mj?) I----------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) p

I

I 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 革蘭氏+ 短小芽胞桿菌CN 607 1. 56 3. 12 糞鏈球菌5 0 9 1. 56 1. 56 糞鏈球菌5 0 1 3. 12 3. 12 金黃色葡萄球菌3G6MR 3. 12 6. 25 金黃色葡萄球菌303 3. 12 6. 25 平均 2.49 4. 06 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ，▽ -1 ί 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491828 A7 _____ _ B7____ 五、發明説明（l5 ) 表lb ST1226及ST1 103對革蘭氏陽性菌（ 臨床分離物）a之最低抑制濃度（mcg/mj?)。分離 出細菌菌株之皮膚感染的診斷爲僅將已知者示出。 微生物菌株 ST 1 2 2 6 ST 1103 診斷 蔔萄球菌種s G 1 I I 3. 12 6. 25 一 金黃色葡萄球菌IDI 3530 3. 12 3. 12 潰瘍 金黃色葡萄球菌IDI 3593 3.12 3. 12 潰瘍 金黃色葡萄球菌SG II 3. 12 3. 12 — 表皮葡萄球菌IDI 3482 3.12 1.56 化膿性傷口 表皮蔔萄球菌IDI 3502 1. 56 3. 12 膿皰（頭皮） 表皮葡萄球菌IDI 3482 3. 12 6. 25 化膿性傷口 糞鏈球菌IDI 3580 6. 25 6.25 潰瘍 鏈球菌種SG 7 I I 3. 12 3. 12 一 微球菌種I D I 3 5 0 2 1. 56 3. 12 膿皰（頭皮） 平均Μ I C 3. 12 3. 90 a = S G菌株（來自羅馬之s. Gallicano醫院）。ID I 囷株（來自羅馬之Immacolata皮膚學會）。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 491828 A7 B7 五、發明説明（16 ) 表2a ST 1226及ST 1103對革蘭氏陰性 菌（實驗室收集）之最低抑制濃度（m c g/ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 革蘭氏- 鼠傷寒沙門氏菌DS 25 25 產氣腸桿菌UM 6. 25 25 普通變形桿菌UM 50 50 催產克雷白氏菌552 25 12. 5 大腸桿菌92F 25 25 均MIC 26.25 27.5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -19 - 491828 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明说明（I7) 表2b ST 1226及ST 1103對革蘭氏陰性 菌（臨床分離物）a之最低抑制濃度（m c g/ mi?) 〇 分離出細菌菌株之皮膚感染的診斷爲僅將已知者 示出。 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 診斷 銅綠假單胞菌IDI 3530 50 25 潰瘍 肺炎桿菌SG 5 I I 50 50 ~ 陰溝腸桿菌SG 3 I I 12. 5 25 — 大腸桿菌SG 4 I I 12. 5 25 — 變形桿菌種SG 9 I I 50 50 — 平均MIC 35. 0 35. 0 a = SG菌株（來自羅馬之S. Gallicano醫院）。I D I 囷種（來自羅馬之Ifflmac〇lato皮膚學會）。 ST1 226與ST 1 1 03於革蘭氏陽性及革蘭氏陰 f生厭氧菌（實驗室收集及臨床分離物）之最低抑制濃度（ mcg/mj?)之比較 材料及方法 I紙張尺度適用巾關家標準（CNS )( 210X297公釐）一 2〇 一 ---------衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 491828 A7 B7 五、發明説明（18 ) ~ 將取自於培養皿上1?11^1“-(：11人1^1?£1^(?.(：.)培養基 中，壓氧缸中3 5 °C下過夜生長之細菌，再懸浮於

Brucella培養液中。將懸浮液調整至1. 〇xl〇8細胞 /毫升）並分配至微滴度平板中（9 6孔口 U型底部平板 )。同時，於4分隔培養皿中將物質之0. 3對數稀釋液 與W. C.洋菜培養基混合，其後以多尖端接種器（ 1 . 0 X 1 0 5細胞/點）之方式播種以細菌懸浮液。其 後將平板於一厭氧缸中3 5 °C下培養4 8小時（參見J.E. ROSENBLATT,厭氧菌之抗微生物敏感性試驗，於

Antibiotics in laboratory medicine中，V· L0RIAN出 版，第 I I 版，6，1 5 9 - 1 8 0，Williams & Wilkins,

Baltimora, MD 2 1 2 0 2 U. S.A.) 結果 •化合物對3個厭氧性細菌菌株之MIC值（meg/ mj?)記錄於表3。ST 1226之平均MIC值小於 S T 110 3。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T- Φ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（ 210X297公釐）一 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491828 A7 ____B7 _ 五、發明説明（19 ) 表3 ST 1226及ST 1103對厭氧菌之最低 抑制濃度（mcg/mi?)。由分離出細菌菌株之 皮膚感染的診斷爲僅將已知者示出。 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 診斷 Eubacterium 1 entum 6. 25 3. 12 化膿性傷口 IDI 3502* 粉刺丙酸菌 IDI 3482* 6. 25 6.25 化膿性粉刺 脆弱擬桿菌 ATCC 25285… 12. 5 25 — 平均MIC 8. 33 11. 4 5 * =革蘭氏陽性菌（來自羅馬之ImmacoUta皮膚會之 臨床分離物）。 革蘭氏陰性菌（實驗室收集）。 ST 1226與ST 1103於類似酵母菌株（實驗 室收集及臨床分離物）之最低抑制濃度（m c g/m^ ) 之比較 材料及方法 將薩布羅氏甘露醇培養液中過夜培養之酵母培養物適 當清洗並於補充加入天冬醯胺及葡萄糖之Yeast Nitrogen Base(Y.N.B.s.)中稀釋’以於微滴度孔口中產 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) #· 訂 -22 - 491828 A7 B7 五、發明説明（20 ) 生約5. 0xl04CFU/m$。於此些懸浮中加入終 濃度範圍由0. 19至10 0mcg/mj?之物質稀釋液

(〇. 3對數）/Y.N.B.s.。其後將微滴度平板於35°C (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 下培養 2 4 — 4 8 小時（參見 PFALLER M.，RINALDI Μ. G. ， GALGIANI J. M., BARTLETT M.S., BODY B.A., ESPINEL-INGROFF A., FROMTLING R.A., HALL G.S., HUGHESG· H·, ODDS F· C·，SUGAR A. M·,酵母敏感性試 驗變化之共同研究者，Ant. Agent and Chemoth., 34，9 ：1 6 48- 1 6 5 6, 1 9 9 0. COOK R. , McINTYRE K. A. , GALGIANI J. M.,培養溫度、接種物大小、及培養基於大及微稀釋 培養液一致上對酵母所造成之感受性試驗，Ant. Agent and Chemoth. , 34, 8： 1 5 42- 1 5 45, 1 9 9 0 ° ANAISSIE E., PAETZNICK V. , B0DEY G. P.，測試「白色念株菌」微滴度 法，即與接種物大小、溫度及到達時間無關之 Fluconazole感受性，Ant· Agent and Chemoth·, 35，8: 164卜 1 646, 1 9 9 1 )。 經濟部中央標準局員工消費合作社印褽 結果 關於實驗室收集及臨床分離物之數據分別記錄於表4 及、5°ST 1226表現出高於ST 1103之活性 ，特別對參與皮膚病之念株菌臨床分離物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -23 - 491828 A7 B7 五、發明説明（21 ) 表4 ST 12"2 6及5丁 1003對類似酵母菌株 (實驗室收集）之最低抑制濃度（m c g/mj?) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 釀酒酵母ATCC 7752 1. 56 3. 12 克魯斯氏念珠菌ISS 1 3. 12 3. 12 熱帶念珠菌ISS 1 1. 56 3. 12 白色念球菌ISS 1 3. 12 1.56 白色念球菌5 6 2 3. 12 3. 12 平均MIC 2. 49 2. 80 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -24 -

491828 五、發明説明（22 ) 表5 S T 1226及ST 1103對念球菌菌株（ 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 臨床分離物）a之最低抑制濃度（m c g/mj?) 。分離出念球菌菌株之皮膚感染的診斷爲僅將已知 者示出。 ， 微生物菌株 ST 1 226 ST 1103 診斷 治療 白色念珠菌 SG 14 III 1.56 6.25 陰道炎 白色念珠菌 SG 7 I 3.12 3. 12 爪甲癖（手） 一 白色念珠菌 IDI D 3575 3. 12 6. 25 — 一 白色念珠菌 IDI D 0297 3.12 3.12 外陰陰道炎 Pevaryl® 白色念珠菌 IDI D 1088 3. 12 3. 12 一 — 白色念珠菌 IDI D 0101 1.56 6.25 濕疹X腎間） Versus ® 白色念珠菌 IDI D 1056 1.5 6 3.12 — _ 白色念珠菌 SG 2 III 1.56 6. 25 陰道炎 — 白色念珠菌 1786/94 3. 12 6.25 一 _ 白色念珠菌 IDI D 1046 3.12 3. 12 舌炎 Dak tar i n ® I-------0^------1T------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） - 25 - 491828 A7 —____B7 _ 五、發明説明（23 ) a = S G菌株·（來自羅馬之S. Gallicano醫院）。 10 1菌株（來自羅馬之11111118(：〇1818皮膚學會） 。SM菌株（來自pavia之S.Matteo醫院）。 b=於臨床診斷前投予治療。 S T 1226與ST 1103於絲狀真菌（實驗室收 集）之最低抑制濃度（m c g/mj?)之比較 材料及方法 由薩布羅氏甘露醇洋菜7 2小時培養物經以薩布羅氏 甘露醇培養液及0. 5% Tween 80清洗收集其 分生孢子。粗略過濾及清洗後，將所得之懸浮液於微滴度 平板中調整至約5. 0xl04CFU/mj2之終濃度。 於真菌懸浮液中加入物質（於Y. N. B. s.中之 〇· 3對數稀釋液）以產生0· 19至lOOmcg/ m芡範圍之終濃度。其後將微滴度平板於3 5 °C下培養 4 8 — 7 2小時。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 結果 以兩化合物所得之結果示於表6。單一結果及平均 MIC值兩者均清楚地顯示ST 1226較ST 11 0 3展現出顯著的較高活性。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -26 - 491828 Α7 Β7 五、發明説明（24) 表 6 ST 1226 及 驗室收集）之最低 ST 110 抑制濃度（m 3對絲狀真菌（實 c g / m 芡） 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 鐮刀菌種F 7 7 3. 12 6. 25 青霉菌種sp. 1302 1.56 12.5 蜂毛霉ATCC 7941 25 50 黑曲霉ATCC 1 6404 6. 25 12. 5 煙曲霉 ATCC 2 82 1 2 6. 25 12. 5 平均 MIC 8. 43 18. 75 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印褽 ST 1226及ST 1103對皮真菌（參與皮膚病 之臨床分離物）之最低抑制濃度（m c g/mp )之比較 〇 材料及方法 由馬鈴薯葡萄糖洋菜中3 0°C下生長7天之真菌培養 物、經以薩布羅氏甘露醇培養液及0 . 5 % T we η 8 0清洗收集其菌絲體斷片、微和巨粉狀孢子。粗略過濾 及清洗後，將真菌懸浮液再懸浮於補充加入天冬醯胺及葡 萄糖之Yeast Nitrogen Base (YNBs)中，以於微滴度平 板中產生1. ΟΧΙΟ5感染性單位/毫升之終濃度。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐} -27 - 491828 A7 ____B7___ 五、發明説明（25 ) 於真菌懸浮液中加入物質（於Y · N . B . s .中之 〇. 3對數稀釋液）以產生0. 19至lOOmcg/ T 〇 S 性 出活 看高 易較 輕出 可現 〇 展 7 菌 表真 於皮 示對 果 3 結 ο 之 1 〇 得 1 度所 濃物 T 終合 S 之化較 圍 兩 6 範以 2 芡果 2 m結 1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28 - 491828 A7 B7 五、發明説明（26 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 診斷 治療 鬚髮癬菌 IDI D 1101 1. 56 12.5 皮真菌病（臉） 一 鬚髮癬菌 SG 8 II 1.56 12. 5 股癬 一 鬚髮癬菌 SG 3 I 1. 56 12. 5 腳癬 一 鬚髮癬菌. SG 4 II 1.56 12. 5 股癖 一 鬚髮癬菌 SG 5 III 3.12 12. 5 腳癬 一 鬚髮癬菌 IDI D 1027 3.12 12. 5 膿疱性濕疹（頰）- 鬚髮癬菌 IDI D 1049 1. 56 12. 5 一 — 昆克氏髮癬菌 NCPF 309* 1. 56 6. 25 一 一 深紅色髮癬菌 IDI D 0222 1. 56 12. 5 甲癬 一 深紅色髮癬菌 IDI D 0261 1. 56 12. 5 (左及右大腳趾） 汗泡性濕疼 Fargan @ SG 13 III 1. 56 12. 5 (右腳） Gentalyn 点 及可體松 腳癬 一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -29 - 491828

A

7 B

五、發明説明（27 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 診斷 治療 深紅色髮癣菌 IDI D 1017 1.56 12. 5 甲癖（右大腳趾） Azo 1 men ® 深紅色髮癣菌 IDI D 0252 1. 56 25 膿疱病（左臂） Rifocin ® 深紅色髮癬菌 IDI D 1150 1. 56 12. 5 表皮癬 Genta1yn ® 深紅色髮癖菌 IDI D 1155 1. 56 3. 12 (臂、腳及臂） 大小孢子菌 IDI D 1123 1. 56 12. 5 表皮癣（背） Genta1yn ® 大小孢子菌 IDI D 0238 12.5 25 髮癖菌病 Ner i sona ® 大小孢子菌 IDI D 1011 3. 12 12.5 (右臂） 濕疹（頸） Genta 1 yn ® 大小孢子菌 IMM 3868* 1.56 12.5 及可體松. 絮狀表皮癖菌 IDI D 0011 12.5 12. 5 表皮癖 — 絮狀表皮癖菌 SG 6 I I 6. 25 12. 5 (腳趾間） 腳癖 絮狀表皮癖菌 SG 3 I I I 6. 25 25 — 一 平均Μ I C 3. 19 13. 49 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -30 - A7 '^ ____B7 _ 五、發明説明（28 ) "實驗室收集之菌株。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) aS G菌株（來自羅馬之S.Gallican醫院）。I D I 菌株（來自羅馬之Immacolata皮膚學會）。 b於臨床診斷前投予治療。 S τ 1226與ST 1103對原蟲（陰道毛滴蟲） &最低抑制濃度（m c g / m ί )之比較 材料及方法 由補充加入1 0%熱失活F C S之DIAMOND Τ.Υ.Μ.培 養液中3 7°C及5%C02生長2 4小時之培養物製備原 蟲懸浮液。 以相同培養基將懸浮液調整至9 6 -孔口微滴度平板 之每孔口終濃度爲2. 5x10 5細胞/毫升。於懸浮液 中加入物質稀釋液（0. 3對數）以使其具有0. 19至 經濟部中央標準局貝工消費合作社印繁 1 0 0m c g/mj?範圍之終濃度。其後將微滴度物於 3 7 °C及5 % C 0 2下培養2 4小時。Μ I C爲意指抑制 原蟲或鞭毛或波動膜運動性之最低濃度（參見JULIAN0 C.，MARTIN0TTI M.G., CAPPUCCINELLI Ρ.，微管狀抑制劑 對陰道毛滴蟲之生體外功效，Microbiologia, 8:31-42， 1 9 8 5。L0VGREN T.及SELMELA I.,陰道毛滴蟲及白色念珠 菌對化學治療劑之生體內敏感性，Acta Path.

Microbiol. Scand.，86:155-158, 1978) 0 結果 ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ 491828

A B 五、發明説明（29 ) 以兩化合物所得之結果示於表8 : ST 1 226展 現出大於S T 1 1 〇 3之活性（2倍）。 表8 S T 1226及ST 1103對陰道毛滴蟲菌 株a之最低抑制濃度（m c g/mj?) 微生物菌株 ST 1226 ST 1103 陰道毛滴蟲SS-2 12. 5 25 陰道毛滴蟲SS- 9 12. 5 25 陰道毛滴蟲SS-20b 12. 5 25 陰道毛滴蟲ss-22b 12. 5 25 平均 MIC 12.5 25 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) a =來自Sassari大學之微生物及病毒研究所之菌株 b ==甲硝_嗤（Metronidazole)耐受菌株（2 5及 5〇mcg/mj?之 MIC)。 生體內活性 評估ST 1226及1 103對於由皮真菌（昆克氏髮 癬菌）及革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌）所引起之局部 混合感染之生體內抗感染功效。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（210X297公釐）

-OL ⑽ 1828 A7 B7_ 五、發明説明（3〇 ) 材料及方法 動物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 使用6週齡近視交配BALB/C公鼠（c . River)(每群5隻動物）。 微生物菌株 令動物以髮癬菌（昆克氏髮癬菌NCPF 3 0 9 ) 及葡萄球菌（金黃色葡萄球菌L ( I )病原性菌株予以局 部感染。 實驗步驟 將真菌的微粉狀孢子及細菌之懸浮液分別調整至 5. 0x10 7及1. 0x10 7細胞/毫升之終濃度。將 各懸浮液之0. 2毫升體積投予至動物的上背區域（其爲 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 事先被剃毛並以手術刀溫和地擦傷至「光亮」）。接種後 3 0小時開始經由在感染皮膚上投予5 0毫克以凝膠狀之 各物質（1%試驗物品）每天一次連續治療5天。於最後 治療兩天後，將動物殺死並收集感染組織樣品。均質化及 適當稀釋於培養基後，將組織樣品塗布（於真菌及細菌分 別以Mgcobi otic洋菜及甘露糖醇鹽洋菜）以選擇性評估病 原的生長。真菌的生長爲以任意標度方式評估，而細菌生 長爲以測定C F Us (菌落形成單位）而評估。 結果 >紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210χ297公釐）~~ 491828 A7 _________B7 五、發明説明（31 ) 分子所得之結果7K於表9。其示出分子對金黃色葡萄 球菌均具有相同活性，而ST 1 2 2 6展現出大於ST 1 1 0 3之抗真菌活性。 表9 ST 1226與ST 1103於混合局部 感染（昆克氏髮癬菌NC P F 3 0 9及金黃色 葡萄球菌）之生體內抗感染功效 治療 金黃色葡萄球菌 昆克氏髮癬菌 治癒動物 未治癒 治癒動物 未治癒 動物 動物 ⑻ (平均CFU/ (%) (真菌 /鼠） 生長）e 對照 0 2. 73 X 104 0 + + 賦形劑 0 3. 36 X 104 0 + + / + ST 1 1 03b 80 40 80 + ST 1 2 2 6b 80 50 100 一 a =每實驗群之 5隻動物 b =動物被投予 5 0毫克/天之以1 %於凝膠中之各 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 物質（羥乙基一纖維素，2. 5克；甘油7. 0 克；丙=醇7. 0克；清潔水至100毫升）局 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 34 - 五、 發明説明（32 ) 部治療連續5天。 + + +匯集之真菌生長（由1毫升之皮膚均質物 ) + +半匯集之真菌生長（由1毫升之皮膚均質物 +中度的真菌生長（由1毫升之皮膚均質物） ^ S T 1 22 6及1 1 03對鼠劃痕皮膚重覆皮膚後 1皮膚耐受性評估 材料及方法 動物 使用6週齡CD I公鼠（C. RIVER)(每群5 隻） 物寶 於凝膠（羥乙基一纖維素2. 5克；甘油7. 0克； 两二醇7. 0克；水加至100毫升）中製成物質配方（ 1 %之試驗物品）。 實驗步驟 先將動物的背部中央區域剃毛，且其後以手術刀溫和 地劃痕。於皮膚劃痕1天後開始經由投予5 0毫克之各物 質配方每天一次連續處理1 0天。受試的皮膚區於劃痕後 5、7、9、和1 1天進行檢視。評估乃依據下列標度將 損傷分級成紅斑（E)、剝落（D)、和破裂（C)。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -35 491828 A7 B7 五、發明説明（33 ) E D C 0=無紅斑 0二無 0=無 1=輕微（勉強可見） 1=輕微（勉強可見） 1=輕微（表皮破裂） 2 =中度（明確的） 2 =中度（疙瘩和鱗片） 2 =中度（真皮破裂） 3二嚴重（紫紅色） 3=顯著（有鱗片剝落） 3=顯著（流血破裂） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'〆297公釐） -36 - 491828 A7 B7_ 五、發明説明（34 ) 相同動物群中各參數之平均值令吾等可於檢視下評估 由物質所誘發之組織損傷。 結果 以化合物所得之結果（以相同實驗群中評估之各參數 的平均表示）爲記錄於表1 0。其可看出ST 12 2 6 爲比ST 1103被較佳耐受。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -37 - 491828 A7 B7 五、發明説明（35 ) 表10 ST 1226及S1103對鼠科劃痕皮膚重 覆投予之皮膚耐受性。以範圍由0(無影響）至 3 (嚴重損傷）之任意標度（紅斑、剝落、和破 裂）之方式於劃痕後第5、7、9、和1 1天進 行評估。結果爲以各實驗群之平均值表示（5隻 動物/群）。 -------------II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 治療 +5a +7a +9a +ir a E D C E D C E D C E D c 對照 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 賦形劑 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ST 1103 1.2 0.4 0 0.4 0.4 0 0 0 0 0 0· 0 ST 1226 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 a =皮膚劃痕後之天數 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -38 - 491828 A7 B7 五、發明説明（36 ) ST 1226 (1%和1· 5%)及雙氯苯咪唑（

1. 5%)於天竺鼠之腳以髮癬菌屬（鬚髮癬菌id I D 1 0 4 9 )菌株所誘發之實驗性感染模型（腳癬）中之 抗真菌活性的評估 由組織上及臨床上之看等，其慢性感染之特徵及與人 類感染之相似性使得此模型爲非常有用於最廣泛蔓延之局 部性真菌病狀的研究（運動員之腳）。此外，治療的克月艮 可構成一個良好的參考點，由其可外推對其他皮真菌感染 之不同身體區域的重要指示。再者，此感染之慢性度（高 達6個月）令物質即使以長期持續治療（如其通常於人體 中發生）亦可被研究。 於本研究中，吾等在天竺鼠模型中評估不論以兩種不 同濃度’ ST 1226均可治癒此種長期且經常發生於 人體之典型的皮膚皮真菌感染。 材料及方法 動物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 使用十二隻重3 5 0 - 4 0 0克之Hart ley天竺鼠公 鼠（C. RIVER)(每實驗群3隻動物）。 感染菌株 使用一種臨床分離物（鬚髮癬菌I D I D 1 〇 4 9 ’來自羅馬之Immacolata皮膚學會）。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -39 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 491828 A7 —. ___B7 五、發明説明（37 ) 接種物製劑 首先由馬鈴薯葡萄糖洋菜中生長之7天真菌培養物刮 取收集微粉狀孢子，且其後再戀浮於具有〇. 5% Tweeri 8 〇之薩布羅氏甘露醇培養液中。 清洗後，將孢子於無菌食鹽水中規格化產生1 . 〇 X 1 〇 8孢子/毫升之終濃度。 實驗群 五個實驗群爲如下準備I 對照群I:經感染動物 對照群I I :經感染並以安慰劑處理之動物 處理群I :經感染並以1%ST 1226處理之動 物 處理群I I :經感染並以1. 5%ST 1226處 理之動物 處理群I I I :經感染並以1. 5%雙氯苯咪唑處理 之動物。 各群包括3隻動物，且僅左後腳被接種。於2個對照 群，使用共計3隻動物，且各動物之兩後腳均被接種。 實驗步驟 將濾紙圓片（12毫米直徑及0_ 3毫米厚度）以鋁 鉑紙包住下半部用以預防接種物擴展。其後將此濾紙黏至 一 1 X 3 -公分之雙黏石膏片（其爲黏著至一環繞腳之紗 -40 - -----------------訂------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 491828 A7 B7 五、發明説明（38 ) 布上）。 其後將濾紙圓片以1 0 〇微升之感染性懸浮液弄濕’ 且其後固定至天竺鼠之腳。 將動物腳以繃帶及石膏包紮’並令其停留於此些狀況 7天。 感染七天後，將感染區域露出並依如下之任意標度將 損傷之類型分級： 紅斑 糜爛 剝落 0 =無 0 =無 0 =無 1 =輕微 1 =輕微 1=輕微 2 =中度 2 =中度 2二中度 _ 3 =嚴重 3 =嚴重 3 =嚴重 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 於第+1 4、+ 2 1、及+3 1天（殺死動物之天數 )再檢視此些「臨床上」症候。損傷類型之第一觀察三天 後（第+10天），開始以不同配方處理，且進行20天 (每天一次）。最後處理之二天後（第+3 1天），將動 物殺死並將腳之蹏區分解成每腳各10份。 將此些切片置補充添加青霉素G及鏈球菌素（ 1 0 0mg/m5 )之Mycobiotic洋菜上。其後將此兩種 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） '—~" -41 - 491828 A7 B7 五、發明説明（39 ) 抗生素以5 0微升量加至躕切片，以預防任何可能干擾檢 視下鬚髮癬菌於樣品中生長之細菌的生長。所得之數據以 總檢視切片上之微生物學上無菌的皮膚切片數目表示。 結果 於此實驗模型中以ST 1 2 2 6所得之結果適於稱 爲「微生物上恢復」（以1%及1. 5%ST 1226 分別爲80%和100%)(表11)。 以雙氯苯咪唑（1. 5%)之治療爲同樣地可將所有 經處理樣品之感染根除。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -42 - 491828

7 7 A B 五、發明説明（40 ) 表1 1 於受髮癬菌（T. mentagrophytes I D I D 1 0 4 9 )所感染之天竺鼠踱中以S T 1 2 2 6及雙氯苯咪唑之皮膚治療的臨床上及微生 物上評估。 治療 7thdaye A E D lphday® A E D 21st:daysa A E D 31eMa疒 A ED 無菌樣品 (11=30)(¾) 對照I 0 0 0 0 0.3 0 0 0.3 0.3 0. 3 0.6 0.6 1/30(3.33) 對照IIb 0 0 0 0 0.3 0 0 0.3 0 0.3 0.6 0.6 0/30(0) ST 1226(1%) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 24/30(80) ST 1226(1.5¾) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20/20(100) MCZCl.5») 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 30/30(100) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) a=感染接種物之天數 b ==經感染動物以安慰劑（羥乙基一織維基，2 · 5克；甘油，7 · 0克； 丙二醇7 · 0克；清潔水加至1 0 0毫升）處理。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -43 - 491828 A7 B7 五、發明説明（41 ) 內含1%ST 1 2 2 6之4個水狀配方於鼠劃痕皮膚上. 之皮膚耐受性之比較評估。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 材料及方法 動物 使用45隻7週齡之CD1公鼠（C. RIVER) (每實驗群各5隻動物）。 物質配方 乳劑 T F 2 4 / 6 3 2 7 成分 1 S T 1 2 2 6 1

Para comb i η 0.25

Propy 1 ene G 1 i co 1 2

Sepigel 305 5 凡士林油 10 Η 2〇至 10 0 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）』』 -44 - 491828 A7 B7五、發明説明（42 ) 乳劑 T F 2 5 / 6 3 2 7 成分 %_ S T 1 2 2 6 1 Fattylan 16 甘油 3 丙二醇 5 N i pa sept 0.2 Η 2〇至 10 0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 乳劑 丁 F 2 8 / 6 3 2 7 成分 S T 12 2 6 Fattylan Tween 80 B H A 山梨酸 E D T A 凡士林 丙二醇 矽油 A K 3 5 0 凡士林油 Η 2〇至 %_ 1 11.5 0 . 3 0.004 0 . 2 0 . 1 12 2 . 5 0 . 1 5 10 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 491828 A7 B7 五、發明説明（43 ) 乳劑TF 14/6327 成 分 S Τ 12 2 6 1 羥 乙基纖維 素 1 . 6 甘 油 8 Pr opy 1 ene G 1 i co 1 3 乙 醇 15 香 料 0 . 0 Η 2〇至 10 0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實驗步驟 先將動物的背部中央區域剃毛，且其後以手術刀溫和 地劃痕。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 於皮膚劃痕1天後開始經由投予5 0毫克之各物質配 方每天一次連續處理1 0天。受試的皮膚區於劃痕後5、 7、9、和1 3天進行臨床檢視。評估乃依據下列標度將 損傷分級成紅斑（E )、剝落（D )、和破裂（C )： 491828 A7 B7 五、發明説明（44 ) E D C 0=無紅斑 0=無 0=無 1=輕微（勉強可見） 1=輕微（勉強可見） 1=輕微（表皮破裂 2 =中度（明確的） 2 =中度(疙瘩和鱗片） 2 =中度（真皮破裂） 3=嚴重（紫紅色） 3=顯著（有鱗片剝落） 3=顯著（流血破裂） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -47 - 491828 A7 B7 五、發明説明（45 ) 相同動物群中各參數之平均值令吾等可於檢視下評估 由物質所誘發之組織損傷。 結果 所有的安慰劑顯現出被非常良好的耐受。相反地，於 1 % S T 1226水狀乳劑中，僅TF 24/ 6327及TF 14/6327爲完全安全，而TF/ 6327至較低擴大、且TF 28/6327至較大擴 大，造成不良地耐受（表1 2 )。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -48 - 491828

A B 五、發明説明（46 ) 表12 以ST 1226 1%於4種不同賦形劑中之 對鼠劃痕皮虜之重覆局部治療（5 0毫克/鼠連 續10天）後之皮虜耐受性評估 經濟部中央標準局員工消費合作社印裴 劃痕後之天數 +5 +7 +9 + 13 治療 E D C E D C E D C E D C 對照 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 TF 19/6327CP) TF 24/6327CF) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 TF 20/6327CP) TF 25/6327CF) 0 0.4 0 0 0 0 0 0 0 0.4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 TF 27/6327CP) TF 28/6327CF) 0 1.0 0 0.6 0 0 0 1.0 0 1.2 0 0 0 0 0 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 TF 12/6327CP) TF 14/6327CF) 0 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -49 - 491828 A7 B7 五、發明説明（47 ) E=紅斑；D=剝落；C=破裂

P =安慰劑；F =完全配方（安慰劑+ 1 % S T 1± 2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -50 -

Claims (1)

1. 491828

   ;N 民國9 1年4月修正 種式（ϊ )之DL —、D -或L 一肉毒鹼酯 % CH3 CH 〇\ 〇 R

   'N; X- ⑴ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁 其中： R爲具有2 — 1 6個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或γ 飽和烷醯基； Υ爲具有3 — 6個碳原子之直鏈或支鏈伸烷基、或％ 、間或對一苯二甲基；且 X—爲藥理容許酸之陰離子。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2·如申請專利範圍第1項之肉毒鹼酯，其中R爲$ 有9_13個碳原子之烷醯基。 3. 如申請專利範圍第1項之肉毒鹼酯，其中¥爲_ 自三伸甲基、四伸甲基、五伸甲基和六伸甲基。 4. 如申請專利範圍第1項之肉毒鹼酯’其中X-舄 選自氯、溴、甲烷磺酸鹽、磷酸鹽、酸式反丁烯二酸鹽、 反丁烯二酸鹽、酸式酒石酸鹽和酒石酸鹽。 5. 如申請專利範圍第1項之肉毒鹼酯’其爲選自雙 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210X297公羡1 -1 - 491828 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 (十一醯一 L —肉毒鹼氯對一苯二甲基二酯、雙（十三醯 一 L 一肉毒鹼氯）三甲基二酯、雙（十一醯基一 L 一肉毒 鹼氯）鄰一苯二甲基二酯、雙（十一醯一 D —肉毒鹼氯） 間一苯二甲基二酯、雙（十一醯一 L 一肉毒鹼氯）間一苯 二甲基二酯；雙（癸醯一 L 一肉毒鹼氯；雙（癸醯一D — 肉毒驗氯）；雙（十二醯一 L 一肉毒驗氯）；及雙（十二 醯一D—肉毒鹼氯）。 6. —種用於治療細菌、酵母菌、真菌或原蟲引起之 皮膚疾病的藥學組成物，其包括以式（I )之化合物作爲 活性成分：

   ⑴ ----------! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) X' •訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中： R爲具有2 — 1 6個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不 飽和烷醯基； Y爲具有3 - 6個碳原子之直鏈或支鏈伸烷基、或鄰 、間或對一苯二甲基；且 X 一爲藥理容許酸之陰離子；及 其藥理容許賦形劑。 7 .如申請專利範圍第6項之藥學組成物，其爲適於 局部投予。 r T - * 公 7 29 491828 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 8.如申請專利範菌第6項之藥學組成物，其中該皮 膚疾病係選自下列：潰瘍、化學性傷口、膿皰、化膿性粉 刺、陰道炎、爪甲癬、外陰陰道炎、濕疹、舌炎、皮真菌 病、股癬、腳癬、膿疱性濕疹、甲癬、汗疱性濕疹、膿疱 病、表皮廯、髮癬菌病。 9 ·如申請專利範圍第7項之藥學組成物，其包括 0. 5至2%重量比之式（I)化合物及其藥理容許賦形 劑。 1 0 .如申請專利範圍第· 9項之藥學組成物，其包括 1至1 · 5 %重量比之式（I )化合物及其藥理容許賦形 劑。 1 1 .如申請專利範圍第7或9項之藥學組成物，其 爲以乳劑、藥膏、凝膠、乳液或溶液之形式。 12. —種製備式（I)化合物之方法： X - X H3C 〇 Ο 〇 〇\ CH^ R ⑴ R 其中： R爲具有2 — 1 6個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不 飽和院酸基； Y爲具有3 - 6個碳原子之直鏈或支鏈伸烷基、或鄰 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）-3- ----------.— (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁J /η 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 491828 A8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 、間或對一苯二甲基；.且 X-爲藥理容許酸之陰離子； 其步驟包括： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (a )令烷醯L -肉毒鹼內鹽懸浮於一有機、無水惰 性溶劑如N，N —二甲基甲醯胺、乙腈或二氯甲烷中； (b )於0 °C — 1 0 °C下，在懸浮液中加入相當於烷 醯L 一肉毒鹼1/2莫耳量之式Z - Y — Z化合物，其中 Y具有前述定義且Z爲選自鹵素、0 —甲磺醯或甲苯磺醯 j (c )令懸浮液於2 0 °C - 5 0 °C攪拌下保持2 4小 時直到懸浮液完全溶解； (d )加入溶劑如乙基醚或己烷令反應粗產物沈澱、 濾出產物並以丙酮或甲基乙基酮清洗至取得固體產物； (e )令產物溶於水中並於經式Η X之適當酸活化之 強驗性樹脂如A m b e r 1 i t e I R A — 4 0 2上洗脫，以取得 於尋求後型式中之含鹽化產物； (f) 令洗脫物冷凍乾燥或濃縮以分離此固體產物； 及 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (g) 令步驟（f)之固體於C 8矽膠上層析、以 H 20 / C Η 3 C N 70 : 30洗脫而予以純化。 1 3 .如申請專利範圍第1 2項之方法，其中Ζ爲氯 或溴。 1 4 · 一種製備式（I )化合物之方法： 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）- 4 - 491828 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

   ⑴

   N;-- X % 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中= r爲具有2 - 1 6個碳原子之直鏈或支鏈、飽和或不 飽和烷醯基； γ爲具有3 - 6個碳原子之直鏈或支鏈伸烷基、或鄰 、間或對一苯二甲基；且 X-爲藥理容許酸之陰離子； 其步驟包括： (a /)令院醢L 一肉毒驗醯基氯懸浮於有機、無水 惰性溶劑如N，N —二甲基甲醯胺、乙睛或二氯甲烷中； (b /)於室溫下在懸浮液中加入相當於烷醯L 一肉 毒鹼1/2莫耳量之式Z_Y — Z化合物，其中Y具有前 述定義且Ζ爲0Η; (c /)令懸浮液於室溫攪拌下保持1 6 — 2 4小時 直到懸浮液完全溶解； (d >)於真空下令溶液濃縮至乾； (e /)令由此所得之粗產物以矽膠層析純化、以 Η 2 0 / C H 3 C N溶液洗脫；及 (f /)經濃縮且續以冷凍乾燥令化合物分離。 -- Γ請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -5 一