TW482676B - Interferon composition for oromucosal contact to stimulate host defense mechanisms or an immune response in a mammal - Google Patents

Description

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 _ _B7__ 五、發明説明（I ) 本發明係Η於一在晡乳類動物體内經口腔黏膜施闱高 劑量之干擾素來剌激宿主防衛:系統對抗病原之方法。尤其 是，本發明可被應用在自體免疫，腫瘤，神經變性，寄生 蟲和病毒性疾病之治療方法上。 本發明之背景 α -干擾素被廣泛用於許多惡性血液疾病的治療上， 這類疾病包括髮綑胞白血病，慢性骨髓白血病，低等淋巴 瘤，皮膚Τ-觀胞淋巴瘤，和固態腫瘤如腎ffl胞癌，黑色 瘤，輕癌和與愛滋病相關的卡波西式肉瘤（Sutter班an， J . 11. , P r 〇 c . Natl. Acad. 8 c i . USA, 1 9 9 4 9 1: Π98-1205)。高麵量時有抗癌效果，所用a -干擾素 量通常在吉萬分之數十Μ上，並Μ非經腸的方式施藥。p -千擾素則是被核淮用於多發性硬化之再發及舒解和慢性 B-型及C-型肝炎的_床治療上。 a -干擾素及/3 -千擾素均屬於第I型干擾素。第I型 干擾素為一大類天然存在之綑胞素包括超邊16種以上之a -干擾素的亞型，及/3 -干擾素和ω-干擾素。第I型干擾 素會與單纈胞表面之受體結合，並引起一蓮串複雜的訊息 傳遞事件，終至引發抗病毒，抗增生及其它兔疫調控之效 果，綑胞素的生成$和第一類及第二類HLA之諝控（

Pestka e t a I . , Annu . Rev. B i o c π ei. , 1 9 8 7 5 8:7 2 7 ) 。I型干擾素其個別亞型之活性均不太相同。經過_選許 多α -干擾素之對偶質亞型已可鍵定岀每一位置上最常見 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（> ) 之氨基酸順序，且具有保守顚序之第I型干擾素也已被合 成出來（Alton e t a 1 in "The Biology of the Interferon System' E . d e H a e y e r and H . Schellekens eds· Elsevier ( 1 9 8 3 ) 1 9 9 1 - 1 2 8 )。此保守干擾素在市面 上ti有fe售（I n f e r g e n ; A in g e η , I n c ) 且近來已被證 賞較d2a-干擾素或a2b-干擾素具有更高的活性（M重量 對重量比而言）;因此有建議認為此類保守干擾素之臨床 效果會高出任何一種天然干擾素之亞型（Blatt et ai .， J. interferon and cytokine Research, 1396 16: 489-499 ) 〇 雖然種施用途徑5包括靜脈注射*皮下注射， 肌肉注射，局部塗用，K及傷口內注射，_是第I型干擾 素常見的施用方式，但通常較不摇用□服的方式，此乃因 干擾素係蛋白質，其活性會被蛋白質裂解酵素抑_旦其天 然形式在腸道中的吸收效果不佳。的確的研究指出p服後 無法在血液中測得干擾素的存在(Cantell and Pyhala， J. Gen. Virol., 1973 20: 97-104; Wills et ai., J. IFN Res., 1 9 84 4 : 3 9 9 - 4 0 9 ; Giisοn et ai·，J · I FN Res. 5 1 9 8 5 5: 4 0 3 - 4 0 8 ) 〇 一般認為欲獲得最大的藥效，應儘可能使用最高劑量 之干擾素。雖然Μ基因重組方式製造的干擾素已經商品化 表示使用高劑量是可行的，但實際上使用干擾素的一些副 作用卻嚴重的限制了所能用之干擾素的爾.量及其治療時間 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •爭·

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（1 ) 。這些副作用包括嚴重的不適及憂鬱，在某些病例中甚至 導致自殺。最近Hoofnagle在新英格蘭醫學期刊中就為這 些問題作了一個總结報導（Hoofnagle，J. H.，and Uu， D. , New Eng. J. Medicine 1 9 9 6 , 3 3 4 : 1 4 7 0 - 1 4 7 1 ) ^ 在B-型肝炎抗原圼陽性的慢性B-型肝炎患者身上所作的cx -千擾素療效分析顯示其再發率在25¾至40¾之間$在患有 典型慢性B-型肝炎之患者身上乃是Μ每天五百萬單位或每 週一千萬單位治療三次，連續治療3至6儷月。但這些 治療均無法達到治癒的效果$大部分的患者對肝炎表面抗 原仍鎖圼陽性反應旦Μ聚合蘭鍵反應仍可偵涵到病毒的 DNA 。再者，患者對這些干擾素的劑量容忍度筮不好，由 於無法忍受這些副作用導致有101至4(3¾的患者須要減 輕鑲量。但是，在普遍都可容忍的麵量下，亦卽每天一百 萬單位，再發率則只有17%(Perrillo e t a I . , New Eng. J. Medicine, 1990，323: 295-301 )。對於慢性 C-型肝炎之患者，在M每週三百萬單位治療三次連績治療 6個月$只有10¾至2(]¾的患者可發琨有長期持續性的改 善，主要是HCV病毒 OA的減少（Hoofnagle and Uu， 〇P. cit.)。至於癌症患者，只在使用可容忍之最高劑量 的α -干擾素才可看到明顯有反應的比例。因此對患有多 發性骨髓瘤之患者，例如，在Μ每天二千至三千萬覃位治 療之患者身上其有反應的比例為5(3¾ ，而在以每天三百萬 覃位治療之患者身上其有反應的比例則僅.有15¾至2 01 - 5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) r

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（^ ) 。但是，只有非常少數的患者能忍受這樣高的劑量超過一 段 fe 詩間（Ahre et al·，Eui?· J· Heniatol·，1388，41: 1 2 3 - 1 3 0 )。顯然須要找到一種能使用高爾量又不會引發 嚴重副作用的施用方式。 已有一些%報導指於K鼻噴謂或口服掖方式來施用 低劑量十擾素K治療許多病毒感染，尤其是感冒之效率。 但是，在大部分這些報導中所用之干擾素製麵為相當粗燥 的ϋ在以相當高謂量鼻内十擾素來治療鼻病毒感染之Μ安 慰麵為控制組的試驗中s顯市此種治療是有效的，但會出 現顯著的副作用情況（Haye n et al.5 J. Infect. Dis·， 1983，148: 314-921)。同樣的，雖然有許多的研究，包 括雨組隨機雙盲臨床試懸（Douglas et ai.，Sew Eng. J. Med., 1986, 3i4:65-80；Hayden et al.5 New Eng. J· Med·，1 98 6，3i4:7：L-75) 5顯示Λ鼻內施用高劑量的 α 2-干擾素來保護受鼻病毒感染的個體之效果，但這些 研究均無法為整體性的效果評估提供任何證據。 最进一系專利說明書描逑了口服不同來源之干擾素Μ 治療感染鼻病毒之牛隻（岀血性敗血病），貓白血病，及 其它疾病的治療5提高疫苗的效周；改進食a利用的效率 ;及牛隻泰勒蟲病的預防。參見美國專利案號4,462,985 ，澳洲專利案號 6Q8513 ，湊洲專利寨號 58 3 3 3 2和美國 專利寨號5，2 1 5，7 4 1。此外，美醒專利寨號5，G 1 ?，3 7i也 揭露/ Μ此種方式使用干擾素來治療癌症化療及放射線治 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 ___B7 五、發明説明（t ) / 療時所引起的副作用。在這些案例中，所用干擾素是以 Can tell法製成之人類α -干擾素，每磅體重在磷酸塩緩 衝疲中_用〇.〇1至5單位_量。這些寨例中建議在口咽黏 膜上施用低劑量干擾素5較好是Μ能長期與口 _黏膜接觸 的形式施用，fc許在許多疾病的治療上可發揮其功效，包 括癌症，除了出愈性敗血病、貓白血病、犬之小])n A病毒 和泰勒蟲病外，大部份為無對照組的實驗證據。但是5在 任何入類癌症之動物模型中都缺乏有此種治療方式其邁 當控制組實驗的報導。 在近期的研究中總評了由口及口_黏膜上_羯低劑量 干擾素的效果（B 〇 e e i， din. Phariacokinet . , 1931, 21: 411-417; Critic. Rev. Therap. Drug Carrier S y s t e hi s s 1 9 9 2, 9:9 1 - 1 3 3 ； C u 11 i n s and G e o r g i a d e s s Archi vuni i sifflun. Therap. Exp. , 1 9 9 3 , 4 1 : 1 8 9 - 1 7 2 ) 〇 有報導指出此種治療方式對HIV感染的治療特別有效，至 少可改善愛滋患者的生活品質（Kaiser e t a I . , AIDS, 19 9 2 , 6:5 6 3 - 5 6 3 ; K o e c h e t a 1., Mol. Biol. T h e r . 9 139 ϋ5 2:9卜95 )。但是$也有報導指出fc種治療方式並 沒有任何的臨床效果。已有報導指出Μ含低謂量干擾素的 口服式藥錠來治療Β-型肝炎（Zielinska et al . , Archiv 11® u η o . T h e r p . Exp· 1 9 9 3 41:241-252)- 相反的，由布來罕婦女醫院所提出之國際專利申請寨 號W0 35/27 4 3 9中顯示在設計完善的動物模型中，如果在 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（。） 引發抗原之前Μ插胃管方式施用点-干擾素至少可部分抑 制自體免疫疾病例如第一型糖尿病，多發性硬化及和自體 免疫之«節炎。由此種方式或與结合了由Μ中給抗原之腹 膜注射來施用/3 -干擾素在容忍度上更有效。此可看出Ρ -干擾素在提高口服容忍度上很有效，而不是在引發體疲 或ffl胞對外來抗原之反愿上有效。 在澳洲臨詩專利Φ請寨號PN 9765中，由口腔黏膜途 徑施用低劑量干擾素至口 _腔中能有效保護老鼠對抗具高 度轉移性痛纟ffi胞之攻擊。由於這些结果之非常例外的特性 ，及只有非常少數物質能對侵路性的腫瘤表琨出抗癌效杲 的事實，顯示施用干擾素至D咽腔中的確能有效的治療癌 症。在口腔黏膜上用低劑量干擾素對治療由腹膜腔中注 射/腦心肌炎病毒（E M C V )的老鼠·&有同樣的效果，此 ί丙毒通常會很快引發涉及中til神經:系統和腦炎的致命性疾 病。雖然此条統是一種抗病毒活性的嚴格測試方法，但由 口腔黏膜來_用干擾素與由腹膜腔中施用其效果是一樣的 發明摘逑

本發明提供了一種在晡乳類動物體内經口腔黏膜施用 一高於非經腸道的千擾素劑量，來剌激宿主防衛系銃的方 法5 fc劑量虽Μ非經曝道的方式施用時通常會引發病理/又 應，在入體通常是施用約高於2 Ox 覃位之同源性第I 型干擾素。對其它型之干擾素，會引發病理反應之謂量可 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（"I ) 能輿會在人體中引發病理反愿的同源性第I型干擾素之麵 量不同。 観點之一 5本發明可當作是一種方法5在哺乳類動物 體内經口腔黏膜接觸來施用一足Μ引起免疫反應之干擾素 劑量，來剌激宿主產生免疫反應，此_量高於當Κ非經腸 道的方式施用時會引發病理反應之劑量。 或者，本發明提供了一種經口腔黏膜來施用干擾素Μ 増加干擾素之治療指標的方法。 經□腔黏膜來旛用可能包拮在單一_量詩卽_用一足 夠有效之千擾素劑量或是在一段時間肉連續施闱梠當於單 一劑量所引發之免疫反應的小量麵量。同樣的，也可連續 施用干擾素一段足夠長的時間，Μ達到相當於使用覃一劑 量所引發之免疫反應。 在應闱方面，本發明提供一種在哺乳類動物體内經口 腔黏膜接觸來施甩一有效的干擾素劑量Μ治療自體免疫， 分枝桿菌，和神經變性疾病，腫瘤及病毒慼染的方法，tt 劑量須高於當Μ非經腸道的方式施用時通常會引發病理反 應之劑量。特別是，本發明提供一種治療自體免疫疾病的 方法例如類節炎，第一型糖尿病，狼瘡，及多發性硬化， 分枝桿菌疾病如麻風和肺结核，神經變性異常如海»性腦 炎和庫非德-傑柯氏病（Creutzfeldt-Jakob disease )，寄生性疾病如瘧疾，和病毒性疾病如子宫頸癌，生殖 器疱疹， B-型和C-型肝炎 HIV 5 RPV ，和 HSV-1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 Φ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7_____ 五、發明説明（》） 及 H S V - 2 〇 本發明也提洪了一種治療多發性骨髓瘤5髮ffl胞白血 病，慢性骨髓白血病，低等淋巴瘤，皮膚T-綑胞群巴瘤 ，輕丨I，子宫頸a，卡波西式肉瘤，腎癌，腎繃胞癌5肝 细胞癌，鼻咽癌，结腸直腸癌，神經膠母綑胞瘤，乳頭狀 喉瘤，肺癌，直腸癌，惡性黑色瘤，和惡性腦瘤的方法。 在一具體實施洌中，本發明通常是被應用在非病毒性腫瘤 的治療上。 在另一具體實施例中，本發明提供了一種用於口腔黏 膜施用含有效治療量之至少一種干擾素及一藥學上可接受 載體的醫藥組成物，此劑量係高於當Μ非經腸道的方式施 用時通常會引發病理反應之謂量。此組成物可Κ溶疲，藥 Η，錠劑，凝謬，糖漿，_麵，或可控制釋放之口腔黏膜 傳送条統。或者5組成中也可含緩衝溶液，安定劑，濃化 劑，吸附劑和黏度増稠謂及其它類Μ物。 在一實施例中，醫藥組成物乃是Κ內含約2(ϊχ10δ至 1 0 0 0 x 1 0 s 單位之千擾素的單位劑量存在，較好是内含約 20x10s至5 0 0 xl0e單位之干擾素，更好是内含約50xi0s 至5S)0xi06單位之干擾素。 在應用上，本發明方法可單獨作為治療方法使用5或 與放射線治療$化療5或其它類之ffl胞素，如白介素一2 (interieukin-2)，或15;或干擾素-誘導劑一併使用 -i0- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 Φ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（1 ) 進行本發明方法時較好是使用選自α，Θ，7 ，〇；， 和保守干擾素之第I型或第Β：型干擾素，最好是Κ重組α -千擾素來進行。 發明詳逑 Κ下將Μ定義及實例為本發明作詳綑說明。所有在此 引用之專利寨及公開案均併於本文作為參考。 疋衰 如文中所逑，“干擾素”係指第I型或第I型干擾素 ，包含所有常被稱為σ，3，7 ，和ω之千擾素，及其混 合物，也包括具有保守序列之干擾素。干擾素來自許多商 用來源fc被核准用於許多情況的治療上。千擾素可Μ是天 然來源，但較好是Μ基因重組方式所製備的。對本發明之 目的，“干擾素”一詞尚包括多肽或其裂解後仍具千擾素 活性之Η段，和引入修改過之氨基酸順序的干擾素嵌合體 或突變體，例如在不影響其原有生物活性下來增加安定度 ，例如揭示於美國專利案號5 , 5 8 2，8 2 4，5，5 9 3，6 6 7 ， 和5, 594, 107及其它。 ”高劑量”係指高過於Μ非經腸道途徑給藥時所能忍 受之最大麵量，例如靜腿注射或腹膜注射。如文中所逑， 對一體重70 Kg的成入而言，高麵量之干擾素係指高於 2ϋχ1υβ 單位之同源性第I型千擾素。較好之»量是高於 30ΧΙ06 覃位。在本發明之特別佳之形式中，議_量約在 50χ1ϋ8至lilGOxi”單位之干擾素，更好的是約在50x10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 ♦ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（/。） 6至50 0x1『覃位之千擾素。如文中所逑，“高劑量”係 指當施用於口腔黏膜時具有有效治療之劑量，跆劑量當Μ 非經腸道的方式施用時會引發病理反應之麵量，表現無法 接受之副作用或具毒性之指標。高劑小，重量，及患者年 齡，治療之性質及嚴重度，所用千擾素及施用時專一賦形 麵的不同而有所變化。當醫師Μ某一特別之干擾素來治療 患者時須能很容易的鑑定出適宜欲治療患者之高謂量干擾 素的範圍。 千擾素也可和能誘發胞合成或釋岀干擾素之物質一 同使用。此物質可與干擾素一同，或分開施用。能誘發干 擾素之合成或釋放的物質包括，例如，多核苷酸節聚i:C (poly i:c);最好是使用能夠口服的低分子量的干擾素 誘導劑。熟悉技藝的人士對安定的誘導劑應不陌生，例如 ，乙氨芴_ ( Tilorone )(美_專利寨號 3532813 ；

Albrecht et al., J. Med. chei. 1974 17: 1150-1156 )和喹諾釀1 ( quinoione )之衍生物乙米奎莫（

Iiiquiioci) ( Savage et a i . 5 Brit. J . cancer, 1936 7 4 : 1 4 8 2 - 1 4 8 6 ) 〇 本發明之方法及組成物對於特殊狀況，可M選擇性地 與一種或多種其他治療法共同使用。可Μ使醫師或獸醫師 很容易地選擇適合此種情況的治療法。 在一具體實施例中，本發明提供了一種治療晡乳類動 物腫瘤狀況的方法，包括用如上所逑之干擾素的步驟。 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（丨u 該腫瘤狀況可Μ是屬於會轉移的癌症。 雖然本發明之方法可Μ不和其它麵劑一同使用，但可 預期本發明之此實施偶在Μ下情況下會特別有用： a) 在一般標準之手術，化療，或放射線治療後作為一 輔助性的治療方法； b) 用來治療對干擾素敏感的腫瘤5本發明之方法可單 獨或輿傳統的化療或放射線治療一同使用； c) 用來治療能抗干擾素之腫瘤，本發明之方法可單獨 使用或在多數情況下較好是配合傳統的化療或放射線治療 一同使用 ϋ 上逑之方法旨在誘發和/或保持疾病在一較緩和的狀 況。“與其它方法一同使用”意指在其它化療或放射線治 療之前，期聞和/或之後施用千擾素。最遺合的程序視許 多因數而有所變化，Μ下將詳繃討論。 特別是，可預期本發明之方法將較適合與至少一種選 自Μ下族群之其它療法一同使用5 ft族群包含使用能抑制 觀胞生長之藥物的化療法，一或多種其它具抗癌活性但與 干擾素作用機轉不同之麵胞素$抗血管生成藥劑，及能增 強干擾素活性之藥劑。較適合之第二種胞素乃是白介素 -1 (IL-1)，白介素-2 (IL-2)，白介素-12 UL·-12) ，或白介素-15 (U-15);較適宜之血管生成抑制物乃是 AGM-1 470 ;能增強千擾素活性之較適宜的治療乃是發熱療 法或精氨酸丁酸醒。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A 7 _ _B7__ 五、發明説明（|1) 能與干擾素一同施用之較遘宜綑胞生長抑制劑包含但 不限於環磷胺，順氯氨鉛，碳鉛、卡氮芥；（B C N U ; N，N -雙（2——氯乙基）-N-亞硝縣），氨基甲基葉酸，阿黴素，α -二氟甲基鳥氨酸，5-氟尿_啶。 遺用於本方法之腫瘤包括但不限於那些對Μ非經腸胃 給予高類量cc - +擾素有反懕的癌症，例如血液性惡疾， 多發性骨髓瘤，髮鼦胞白血病，或慢性骨髓白血病，低等 淋巴瘤，皮膚Τ-鼦胞淋巴瘤，和固態腫瘤如腎細胞癌和 黑色瘤，輕癌，或與愛滋病相關的卡波西式肉瘤，特別是 由非病毒所造成的惡性腫瘤。腫瘤情況可Μ是急性或猛爆 式的感染，例如鼻病毒，流行性感冒，疱疹，帶狀疱疹， 登革熱，或病毒性腦炎包括但不限於廳疹病毒性腦炎，莫 瑞山谷腦炎（Murray Vaiiey eneephaiitis )，日本 Β-型腦炎，由壁蝨媒介的腦炎和瘤疹性腦炎；岀血性熱例_ 艾波拉病毒，馬伯病毒（Marburg virus 拉薩熱（

Lassa f ever)，漢他病毒感染，及其它由動物傳樂至人 體的病毒性感染，例50馬的廳疹病毒。目前許多此種情況 都是無法治療的或是沒有疫苗可供治療的，而一些支援性 的治療則仍嫌不足。或者這類病毒性感染也可能是慢性慼 染所造成的結果，如β-型肝炎，C-型肝炎，D-型肝 炎或其它病毒性肝炎，和CMV ， HIV ， HPV ，和 HSVI 和 II所造成的結杲。β-型肝炎.和C-型肝炎目前都Μ 非經腸Μ式的干擾素來治療；目前臨床上正在試驗Κ干擾 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（G ) 素來長期治療因HIV病毒感染所造成的愛滋病。 在第二β賞施例中，被治療的疾病是瘧疾$同樣的Μ 上逑第I型及第Ε型干擾素來作治療。引起瘧疾的徹生物 定四d瘡原蟲ΐ r 1 a s πι 〇 Li i U si hi a I a r i a e j ，間日瘡减蟲ι P lasiodiuni v i vax ) ， ii M m S ( Plasiodiuii faieiparunO 或卵圏瘧蟲（Piasffiodiui ovale)。本發 明之方法可有效防止瘧疾侵犯到大腦。 在第三漏實施例中，本發明提供了一種治療自體免疫 例如HI V，風濕性關结炎，和多發性硬化的方法，無論是 .屬於疾病的舒緩一再發或慢性發展或免疫不全如愛滋病* 均包含了施用上逑千擾素的步驟。 同樣的本發明之劑量可Μ和其它治療方法一同使用。 例如*對於疱疹病毒感染可使用無環鳥苷（acyclovir)或 甘西克羅維耳（ganciclovir)。對 HIV感染可使用疊氮 胸脊（a z 1 d 〇 t h y is i (1 i η e) ( z i d o v u d i n e )或一或多種其 它的HIV反轉錄釀的抑制劑，和或HIV蛋白菌抑制_。 在本發明藥學配方的製備上干擾素之載體及 賦形麵均可使用，這點對熟習技藝的人士而言將是顯而易 見的·。在 β e m i n g t ο η 所著的：T h e Science and Practice 〇 i i" li δ Γ Hi 3, C y j 1 〇 t ii u . 5 π d C Λ Γ 11 ϋ i i S ΪΪ 丄 li g υ 0 . , E ci b t u Π » PA，1995—書及其之前的販本中談及許多代表性的藥劑配 方技衞。干擾素配方中可含安定性増強劑$例如美國專利 案號4, 436, 537中所逑的甘氨酸或丙氨酸.，和或一或多種 -1 5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T Φ 482676 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（【Λ[) 載體，如攜帶性蛋白質。例如，常見的治療羯屬人類藥學 綴的入類血清白蛋白，或者與作為稀釋劑的磷酸緩衝疲一 同使用。其中作為干擾素賦形劑的是入類血清白蛋白5人 類血清白蛋白可Μ衍生自人血，或是獲自基因重組方式。 一般而言當使用血清白蛋白詩通常其均來自_質來源。 干擾素的旛用可Κ任何一種能使患者口腔黏膜接觸到 干擾素的方法來施用。因此本發明並不侷限於使用某一種 特定配方。本說明描述了在口腔黏膜上使用干擾素，此可 碧蠢液體，固體，或空氣噴_j，Μ及鼻滴劑或噴刪來達成ϋ 因此本發明包括，但不限於，液體，噴謂，糖漿，藥錠， 口含片，和鼻噴劑配方。熟習技藝的入士將可理解對於氣 溶膠或鼻噴劑配方，製品中粒子的大小將很重要，且了解 將可Μ何種適當的方法來改良粒子的體積大小。 觀點之一，Μ單一劑量來施用干擾素。或者，在一段 時間內Μ數個低劑量來施用干擾素，使其整體效果達到使 用一謂高劑量之相同效果。藥品的蓮送方式之一乃是藉一 黏附或植於口腔黏膜腔內的一種持久或可控制的釋放裝置 來達成，tt釋放裝置乃是設計成可隨時間釋出效果梠當於 一單一高劑量的干擾素。 可用於Q腔黏膜之代表性干擾素配方包括下列（均K 重量百分比表示）： 藥錠：右旋糖BP 45¾ ;明膠BP 3G% ;小麥澱粉 BP i Π ;卡密羅 _ U a r in e 11 〇 s e s 〇 d i ϋ in) B P 5 % ;卵白蛋白 -16- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 0 訂 ·, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 482676 A7 B7 五、發明説明（/Γ) “C 4¾ ;白氨酸USP 3¾丨1，2-丙二醇BP 2¾ ;和50叉 1ϋ 6 HI之α 2-干擾素所組成。藥錠可直接服用並使其 緩緩在口中溶解或加水溶解並含於口内使口腔黏膜能與其 接觸。 也可製懂干擾素的糖如美國專利寨號4，6 7 5，1 84 中所逑，由甘油4 5 %，羧甲基纖維素鈉2 % ，檸檬酸緩衝疲 (ΡΗ4,5) 25% ，加蒸餾水至 U)iU，和 50 X 10s IU之 α 2-干擾素所組成。可將千擾素糊劑敷貼在口頰黏膜上。同 樣的，也可藉添加所須之干擾素量至市售之漱口水或咳歡 糖漿之配方中Μ製成漱咽劑或糖漿。 在上逑某特定劑量範圍内，每葡個寨中最佳的治療劑 量將視個寨情況，疾病的階段，先前治療方式，其它持續 進行之治療方式，該晡乳動物的一般健康情形，該個案主 對干擾素的敏感性Μ及其它而有所不同，因此醫師或獸翳 師須考慮所有情況後才作決定。治療時間的長短將視被治 療的情況而定，例如，對於生長緩慢之腫瘤的治療5如前 列腺癌，將可預期其治療方式會與快速生長之腫瘤，如肝 癌的治療方式不同。同樣的，也可預期由使λ波拉病毒所及 引起之急性感染將會與慢性感染，如肝炎有所不同。 在此所揭露之有效靆量，當Κ非經腸胃的途徑施用時 乃是一能在喃乳動物體內引起病理反應之劑量，旦當施用 於口腔黏膜時其效果良好且不具毒性或是毒性甚小。所引 發之病理反應可Κ是急性，慢性，或累積式，且會表琨在 1 r? _ i丨一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（（fc ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 血液化學上，如白血球減少，骨髓減少，或其它盥液之參 數上。如在此所使用的，病理反應包括不良的副作用，例 擁發燒，不適，或感冒症狀，血管反應，例節靜脈炎，和 注射處的局部發炎反應。這類反應會因病患其個別對干擾 素的敏感程度情況而有所不同。 對許多患者而言，使用於口腔黏膜之劑量將會比先前 Μ非經腸胃的途徑施用時所能容忍的劑量來得高。在一簧 施例中，總麵量可藉著黏附或植入於黏膜上的一種控制釋 放裝置在一段時閭内使用許多低劑量而達成，或以達續或 1R動式之_用方式來達成ϋ 千擾素和千擾素之配方 老鼠Ζ σ: / ρ -干擾素 依前逑方法（Tovey e t a 1 . , P r o c . S oc · Exp. Biol, a n d M e d ·，1 3 7 4 1 4 6 : 8 0 9 - 8 5 ) M 新堡病毒 （Newcastle diease virus，NDV)剌激 C243-3 綑胞並 中製備 並浦化老鼠之a / /5 _干擾素（MuIFN-〇t /召）。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 用於本研究之製備其效值為每毫升4 X 10- 園際單泣 (IU)旦其比活性為每毫克蛋白質5 X 107 ίϋ ，此乃依前 逑方法 (Tovey e t a I . , P roc. Sue. Exp. Biol, and M e d · , 1 9 7 4 1 4 6 : 8 0 9 - 8 1 5 ) M 水泡性口 炎病毒（v e s i e u i a 3? stomatitis virus，VSV)剌激老鼠329细胞後所測得之 结果。本製備並Μ國家衛生院（!ΓΙΗ)之國際參考製備之鼠 α / 3 -干擾素（G 3004-5411)為參考.來加Μ標準化。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 482676 A7 B7 五、發明説明（^ ) 人類之α -卜8-千擾素 依前逑方法（Meister e t a 1 . , J . Gen. Virol., 1386 6 7 : i 6 3 3 - 1 6 4 3 )製備並純化重組的人類a -卜S-千擾 素（Hu IFN - a - 1-8 ; BDBB lot No. CGP 3 5 2 6 9 - 1 , C i b a - G e i g y，B a s e i，S w i t z e r i a n d)。用於本研究之製備 其效值為每毫升7 ϋ x 1 Q 6 IU ，此乃依前逑方法（ϊ o v e y et al·, Nature, 1977 267: 455-457) K VSV 割激入類 WISH麵餹後所測得之結果，而其在非同源性老鼠L 923® 跑上之效值則為每毫升1 X ΙΟ6 IU 。本製備並K_家衛 生院之國際參考製備之人類α-干擾素（G-!323-g(U-527 )及國家衛生院之鼠α /点-千擾素（G - 0 0 2 - 9 0 0 4 - 5 4 i 1)為 參考來加Κ標準化。本製備干擾素之比活性為每毫克蛋白 質 2 X 1〇8 Ιϋ 〇 重組之鼠α-千擾素 重組之鼠α -千擾素乃購自生命科技公司（Life T e e h n 〇 i 〇 g i e s I n c .)。甩於本研究之製備（批號Η K K 4 0 4 )其效值為每毫升6xifls Ιϋ，且其比活性為每毫克蛋白質 6 X 103 ί ϋ ，此乃是M VSV剌激老鼠L 9 2 9綑胞後所得之 结杲（Τ ο ν e y 81 a 1 . , P r o c . S o c . Exp. Biol. Med., 1974 146: 406-415} 〇 重組之鼠Θ -千擾素 重組之鼠/3-干擾素乃購自R&D糸統公司（R&D System Inc·)。用於本研究之製備（批號1376-GiS )其效值為 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7

五、發明説明（丨<H 每毫升3.2x ii)4 IU，旦其比活性為每毫克蛋白質8x 10 6 Ιϋ，此乃是M VSV剌激老鼠 L92g 觀胞後所得之結果 (T 〇v ey et a 1 . , P r o c , S o c . Exp. Biol, Med. , 1374 146: 408-415) 0 重組之鼠7 -干擾素

重組之鼠7 -干擾素乃購自 R&D 条統公司（R&D

System Ine·)。绢於本研究之製備（2 58 0 - 0 3 SA )其效 值為每毫升2xi05 IU，且比活性為每毫克蛋白質IxlO7 Ιϋ ，此乃是M VSV剌激老鼠 L323 细胞後所得之结果 (T〇v ey e t a I . , P roc . Soc . Exp . Biol. Med., 1974 146: 406-415} 〇 所有之干擾素的製備均M相同分析方法同時滴定並M美 _園家衛生院之國際參考製備之鼠α / β - 干擾素 - 0G2-9iS04-5411)為參考來加Μ標準化。 無論是鼠α /点-干擾素或是重組之鼠干擾素在施用 用前均先M Fer iiniuneTM賦型劑加Μ吸收。 Κ形_ Μ内含牛血清白蛋白（BSA)之磷酸塩緩衝痕（PBS)或 Μ下所逑有專利權之Μ形劑來稀釋干擾素之製備。將牛血 清白蛋白之第五部分 （R I Α級；不含免疫球蛋白；貨號 h i Ο ό 5 5 i S 1 α 5 ϋ b A j 搭於鱗 fe IS 綾 W 液（P H / · 4 )中 使其最铬濃度達 ii)Qig/nii 並Μ過濾方式殺菌（0.2 ffisMillex-Gvs Mill ipore, USA ) ° ο n -乙u 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（ 在Μ下所述之實驗中干擾素之製備乃是K具專利權之 賦型謂來作稀釋。所用賦形麵1如下，乃是Κ藥錠形式存在 (Fer iiuiuneTM , Pharma Pacific )： 重量百分比％ mg/藥錠 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) # 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

(節注射式葡聚糖40 BP 磷酸納BP 5t lb m B P 酸式磷酸納 B P 總計 ** M無水物來作計算 *** 衍生自： 右旋糖（葡萄糖）BP .無水物） -El- 0.06 0.030.01 On 1 .U 1 0.08 0.04 η η 1 u . u i 0 . Ol 25.04 44 . 64¾ 右 旋 盤 {葡萄糖）β P * * 44 , 55 .84 明 膠 η r\ ^ r中 窣 3 0 n p • ϋ 0 o r? u i .5 8 小 麥 m 粉 ΤΛ T"' b L ^ I I ( O 1 ,O i 14 .14 卡 密 m m (carael lose sodiui) ^ 4 i .96 6 .20 卵 白 蛋 白 BPC** 4 , ,0.3 g .04 白 氨 酸 Tj Q D U I 3 . η n ,u u Q .75 i， ¢) 丙 二 醇 BP l , ,88 2 • 35 m 聚 鐘 備 4 0宰 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（2l〇X297公釐） 482676 A7 B7 五、發明説明（W) 葡萄糖BP (如注射式葡聚糖40 BP ) 0.03¾ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 將一藥錠溶於i.5 nil之磷酸塩緩衝液中，M16,000g 籬心1 ϊ)分鐘，之後X過濾方式殺囷（0 . 2 & , M i i 1 e X - G V，

MiUipore，USA)，並在使用前先儲存於4 Ό下。賦型劑 乃是每天在使用前才準備。 干擾素之傳送系銃 前導實驗顯示Κ Ρ20之微量吸管將5iel之結晶紫SU 在一正常成入的每個鼻孔中5染料幾乎是立刻便均勻的分 佈在整個口咽腔中。g卩使在經過30分鐘之後，染料仍清 if可見。基本上Μ同樣方式來施用標有放射性碘12 5之人 類基因重組σ -i-8-干擾素也會得到類似的結果。因此在 Μ下所有的實驗中均採用本施用方法。 ’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在此說明書所逑之動物實驗之目的上，將清楚了解_ 於施用干擾素的途徑之” 口腔黏膜”或“口咽腔”或〃鼻 內/ 口”或”鼻內和口 ”或” in/ or”之詞係表示將干擾 素製謂深入鼻腔來胞用，μ使其能a達的分佈在整個口腔 黏膜腔中，亦即，接受治療之哺乳動物之口與喉矓處，Μ 使其能與腔道中的黏膜相接觸。 EMCV (腦心肌炎病毒） 批次： 批號 0 9 5 0 0 1 有效日期截止日： i337年12月 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐） 482676 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（/\ ) 製儀：.K前述方法（Gresser I· Bourali C, Thoisas MT5 Fa 1coff E. Effect of repeated inoculation of interferon preparations on infection of mice with encephaloiyocarditis virus. P r o c · S o c. Exp . Biol. Med· 1968 Feb; 127:49卜6)將腦心M炎病毒 JH株在老 鼠L 9 2 3麵胞中繁殖。 特性： 用於本研究之病毒其在老鼠L929麵胞上的效殖 為 5 X 108 · 62 TCID50· 儲存方式： 腦心肌炎柄毒乃儲存於 -? 0 °c。第一天 由於斷電使得須將病毒滴定分析立卽轉移至㈣用的儲存容器 中，此儀用貯存容器之溫度須輿儲存溫度相同。無論任何情 況"> 所有的物質均須維持在冷凍狀態。第八天用拉貯存病毒 之-7ϋυ冷凍櫃的溫度升高至-"υ。在使用前才開始配製 稀釋的腦心肌炎病毒，並將其置於冰上或動物房之冷凍欐中 直到要使用時才取出。 富藍得紅白血病ffl胞 一種能抗α I β -干擾素之富藍得紅白血病鼦胞株 ，3C18，乃是獲自羅馬之阿法比博士處，並詳逑於 A f f a b r i s e t a 1，i 3 8 2 ( V i r ο 1 〇 g y，12 0 : 4 4 卜 4 5 2 )。並不 斷的繁殖此姻胞。簡言之，Μ腹膜内注射法在DBA/2老鼠 身上接種約 100 LD50之3C18·胞，且在一週後由老鼠 的腹膜中收集癌鼦胞，計數後再繼續在另一隻老鼠身上接 種約i ϋ ϋ L D 5 ϋ之3 C i 8 ffl胞。重覆進行此一步驟約 6 0 一 L ύ 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 1·. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _ __B7__ 五、發明説明（yi/) 窆Ιϋί)代。已知第60至第代的3Ci8綑胞在肝臟 和_臟具高度轉移性（Gr esser et al·， Int. J . caneer，U87 3 9 : 7 8 9 -7i)2 )。藉著在體外存有 a / p 〜千擾素的情況下不斷培養這些在體内繁®之癌綑胞已證 寶ft_胞乃是具有能對抗千擾素之表現型綑胞（

Belardelli et al., Int. J. Cancer, 1982 30:813-820 )〇 L121QR6 ffl胞株及EL4可移殖式腫瘤 一種能抗ct / β - 干擾素之L· 1 2 1 0淋巴瘤ffl胞株’ L i 2 i 〇 R 6 ， 乃是由本實驗室所分離出來的（G r e s s e r e t a K， 1 9 7 4, Interferon and cell division. IX· interferon-resistant L 1 2 1 0 cells: characteristics and Origin. J. Nat. Cancer Inst.s 52: 553-559 ) 0 EL4可移殖式腫瘤乃衍生自接種了致癌物 卜2二甲基 苯礼星（ 1-2 diioethyI benzanthrein )之老鼠（

Gorer, P.A., 1950, Br. J. Cancer, 4： 372-381 ) ^

Li2i0淋巴瘤顚β株乃是藉著在無病原之 DBA/2老鼠 身上作一条列的體内繁殖來維持。 EL4可移殖式腫瘤乃是藉著在無病原之 C57BL/6老鼠 身上作一系列的體肉繁殖來維持。 Β 1 6黑色瘤 Β16黑色瘤乃是衍生自C57BL/6老鼠之一種自發性可移 殖式腫瘤（Fidler， I· J. and Kriple., M. L. 1977, 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) Α4規格（210χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（4 )

Science i3?，8 9 3 -8 3?) 。 B1 6黑色瘤乃是一種生長迅速 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ，具高度造形，可產生黑色素之腫瘤，其主要移轉的部位 是肺。一般認為Β16黑色瘤乃是一種能快速生長，具高度 侵犯性之入類腫瘤的良好模型条統。 Β16黑色瘤鼦胞乃是藉著在無病原之C57BL/6老鼠身上 作一糸列的體肉繁殖來維持。 動物 用於本研究之老鼠乃取自無病原之老鼠族群（IFFA CREDO，France )。 這些老鼠乃是飼養在 Villejuif之 Federatif CNRS研究院中一符合EEC標準之無特定病原 之動物房中。 干擾素之生物分析 干擾素乃是依傳統的方法加K分析。簡言之，樣品（ 2 0 /i 1 ) K 30 /i 1内含21經熱去活化之胎牛血清（ FCS ) ( Gibco, France )的伊果最少基本培養基（

Eagle’s M iniial Essential M e d i u i, MEM ) ( G i b c o 3

France )來加K稀釋， 並M多管式徵量吸管（ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Finnpipette, Labsystero, 5 0 - 3 0 0 ΤΙ )將其加至黴量培 養Μ的培養孔中。將WISH或L329 IH跑（每個培養孔含 2xl04ffl胞）加到100// 1内含2%FCS之MEM培養 基中並在 37 1， 5¾ C02下培養一夜（Forma 3023二 氧化碳培養箱）。Μ配有 10倍鞠鏡的Oiy®pus倒立式顯 黴鏡GLDW型來檢查觀胞是否有任何毒性。對未表琨毒性之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 ___ _B7^__ 五、發明説明（〆，） 5留胞進打一系到雨倍稀釋，由開始時在總體積為 2 (J 0 ^ 1 内含 2 % F C S之Μ E Μ培養基中的1 : 1 〇比例開始·’以多管 道徵量吸管取10Q 之稀釋物5加到黴量培養祖之培養 孔中，每一個培養孔内均有 100 u i内含2 % F C S之 Μ E Μ培養基，同樣以美國園家衛生院之人類α -干擾素標 準參考 （G-0 2 3 - 9 0 1 - 5 2 7 )或美國_家衛生院之鼠α / Ρ - 干擾素標準參考（G - 0 ϋ 2 - 9 ϋ ϋ 4 - 5 4 11)重覆作一系列的兩 倍稀釋。將懸浮於 100 // 1内含2% FCS之MEM培養基 中的WI S Η或L 9 2 9觀胞（每個培養孔含2 X 1 0 4綑胞） 加到培養孔中並在3 ， 5 % C 0 2的情況下培養一夜。檢 查培養後之單層細胞是否有任何毒性顯示或毒物存在，將 培養基吸掉後再加入2·3ί)ί〇1含 2¾ FCS之MEM培養基，培 養基中並含 100 TCID50 之VSV (對WISH鼦胞為2 X 1〇-4 VSV23 ，或對L323细胞為i〇- VSV23)。之後在 37 °C， 5% C〇2的情況下培養一夜°之後Μ 〇 iysipus倒立 式顯黴鏡ULWD型來檢查所培養之單層齠胞是否有任何特定 之病毒所造成的鼦胞病變。由稀釋物值來反推出干擾素之 效值，此效值乃是可對抗任何特定之病毒所造成的綑胞病 變 5 Q %之值，並Μ每笔升多少園P祭篸考單位表示（I ϋ / m i )0 實施例i高劑量干擾素對Μ致死性腦心肌炎病毒感染胞 後其存活率的影響 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（<)

在雄鼠及雌鼠身上注射致死謂量的腸心ffil炎病毒後， 再經由口腔黏膜給予 1，000 [0,000，和100, 000 IU 不同麵I量之α -干擾素並観察其影響。測試不同型式的σ - 干擾素3並比較經甶腹膜內和經由Ρ腔黏膜途徑給藥的 影響ϋ除了監測致死_量後的存活率外，並Κ許多臨床化 學和血液參數來監測干擾素治療法的毒性。 在病毒感染之後立即Κ每天一次經由口腔黏膜給予 105Ιϋ之σ -干擾素來治療老鼠，連續治療四天，结果 發現可完全保護所有的動物。經過干擾素治療的老鼠百分 之百都存活旦在注射致死爾量的腦心肌炎病毒1 0 0天後仍 非常健康，在同樣倩形下的控_組老鼠則在感染開始七天 後已全部死亡。 依據體重換算，經由口腔黏膜Μ ΙίΡΙϋ之σ -干擾 素來治療老鼠相當於Κ二億四千萬個單位在人體上作治療 3此遠超遴任何已知曾用於人身上的麵量c 經由口駿黏膜Μΐϋ5 Ιϋ之α -干擾素來治療老鼠較 Μ 1ϋ4Ιϋ之cx -干擾素來治療，能保護更多的老鼠，很 可能在更高的_量時所造成的保護效果（對抗更高量的病 毒或腫瘤負荷）會更好。截至目前為止我們在_量及藥效 曲線上並未觀察到有任何驅近平緩之平原期的岀現。 我們的結杲也顯示經虫口腔黏膜給予高和超高劑量之 千擾素具有高度抗病毒效杲，且Μ此途徑給予 1()5 IU之 a -干擾素對所用之腦心肌炎病毒量有完全治癒的效果。 ο η 一“一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（>< ) 卽使依體重換算，此劑量遠超過任何曾用於人體上之劑量 ，相當於240 χΐί)6 Ιϋ 5但從未有任何臨床5生化或血 液上的證據顯示使用這樣的郵j量會產生任何毒性。相反的 ，在臨床上Μ非經腸胃途徑給予干擾素時所能容忍的最高 劑量範圍僅為每天2 0至3 0 X 10s I ϋ 。 實施2高劑量α -干擾素對感染具高度轉移性腫瘤ffl胞之 老鼠的影響 於第 〇 天時在一組 1 0 隻，六週大的 D B A / 2老鼠之靜 脈内注射105能抗干擾素之富藍得紅白血病ffl胞株3C18 或10s之L121Q淋巴瘤ffl胞（能抗干擾素之 L1210R Μ 巴瘤顯胞）。接種後，將老鼠分為不治療，或每天_次連 續 20 天經由鼻内/ 口 Μ總體積iO /ii内含10 5 III 老鼠cx / β -干擾素之賦型麵5或10 1之Κ型麵（ 控制組）來治療老鼠。 經過干擾素治療的老鼠百分之五十都存活且在注射具 高度轉移性之富藍得紅白血病綑胞ΙϋΟ天後仍非常键康。 經遴干擾素治療的老鼠百分之三十都存活且在注射 U 2 i 0 巴瘤顧胞100天後仍非常健康。臨床上的觀察發現這些 經干擾素治療1 ϋ 0天後仍存活的老鼠如果不加Μ犧牲的話 可Μ很健康的過完其正常的生命週期。器官之病理檢驗並 未發琨任何殘存之腫瘤。相反的，所有未經治療及控制組 中的老鼠則分別在富藍得紅白血病細胞感染開始後13天 ，LUiG淋巴瘤ffi胞慼染開始後14天已全部死亡。 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) * 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（1 ) 這些结果具高度顯著性，由於所用之兩種腫瘤_胞株 均具高度侵犯性，旦所用之劑量約梠當於百分之五十致死 劑量 UD5(J)的2ϋ，Οί)ί3倍。再者，富藍得紅白血病细跑 及LUll)淋巴瘤ffl胞為非常不同的腫瘤，此乃因富藍得紅 白血病ffl SS帶有反轉錄病毒，即富藍得紅白血病病毒，而 L1210淋巴瘤鼦胞則並未帶有任何已知之病毒。經由口腔 黏膜給予α -干擾素在接種了 L121G淋巴瘤繃胞之動物 上所得之结果約相當於甚或超過在此模型中使炤全身系統 性之α -干擾素治療來得有效（I. Gresser，尚未發表之 结果）。在我們先前的報導中，澳洲臨時串請寨號P N 9 7 6 5 中，接種了富藍得紅白血病ffl胞並M100或1，00 0單位α -千擾素作治療的老鼠無一殘存，而單位d-千擾 素作治療的老鼠則有約之動锪可完全被治癒。 實議例3高劑量α-干擾素對感染具高度轉移性Bi 6黑色瘤 胞或EL4腫瘤顚胞之老鼠的影響。 在一組10隻，六週大的C57B1/6老鼠之_脈内注射 105之B16黑色瘤顯胞，或105之EL4腫瘤綑胞。接種 後，爵老鼠分為不治療，或每天兩次連績2ί)天經由口腔 黏膜Μ讓體積l〇u 1内含105IU老鼠α / 3 -干擾 素之賦型劑，或1 0 /i 1之賦型麵（控制組）來治療老鼠。 經過干擾素治療的老鼠百分之三十都存活且在接種了 具高度轉移性之B16黑色瘤ffl胞或EL4腫瘤ffl胞1GG天 後仍非常健康。相反的，所有未經治療及控制組中的老鼠 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（><T) 則分別在 B 1 6黑色癯綑胞感染開始後2 0天，EL4腫瘤 麵胞感染開始後22天已全部死亡。臨床觀察顯示所有經 過干擾素治療且在1 Ο ϋ天後仍存活的老鼠，gp使干擾素已 在第2G天停用5韶果未將其加Μ犧牲的話，這些老鼠均 可很健康的存活下來。在第100天詩將這些經干擾素治療 的老鼠犧牲並進行器官的病理檢驗，均未發琨任何殘存的 腫瘤。 實施例4由口腔黏膜施用干擾素來對抗水泡性口炎病毒 (vesicular stomatitis virus, V S V)之的效果 在一組1ϋ隻，於不含病原環境下培養大的六週大的 老鼠之鼻孔内接種 1 0 /i i 1 0 0 L D 5 0之水泡性口炎病毒 ί V S V } ( To Very e t a I ., P r o c . S o c . Exp. Biol. Med., 1374，1 4 6:4 0 6 - 4 1 5)。接種後7小時，將老鼠分為不治 療，或每天一次達績4天經由鼻或口途徑Μ內含老鼠σ / ρ -千擾素在總體積IS)// i之費立慕賦型謂 (FeriMune excipient)，或單獨ΙΟ" 1之賦型劑（控親 組）來進行治療。 Κ α /3 -干擾素來治療成鼠可大大提升感染了致死 劑量之水泡性D炎病毒老鼠之存活率。因此，30%經過 1ϋ，0ϋϋΙϋ之σ /泠-干擾素治療的老鼠在接種了致死 麵量之水泡性口炎病毒後的21天仍能存活，同樣情況下 所有未受治療，或僅Κ賦型麵作治療的控制組老鼠則在感 染後第10天已全部死亡。臨床觀察顯示所有經過干擾素 -3 0 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（1) 治療且在第2 1天後仍存活的老鼠均可很健康的存活下來。 實施倒5由口腔黏膜施用干擾素對顯胞内蛋白質表琨的影 響。 已知〇t _干擾素在與其位於Μ胞表面的受體結合後可 誘發許多_胞内蛋白質的表現。一般認為這些蛋白質能作 為干擾素在_胞内產生作用時的標記。 我們評估了 Κ鼻内/ 口途徑施用α -干擾素對干擾素 所誘發的三種蛋白質之表現的影響，亦即MHC第一型抗原 5 Ly6A/E抗原和2’-5’_寡腺脊_合成釀（ 2 ’ - 5 ’ - ο 1 i g 〇 a d e n y 1 a t e synthetase ) ° 經由口腔黏膜M高達20,000 Ιϋ之老鼠a-干擾素來治 療DBA-2老鼠（H-2Kd )並未明顯的增加 H-2-Kd之週邊 血液淋巴_胞，覃核ffl胞或粒鼦胞之表琨，而在同樣情況 下僅須2Q IU之老鼠at -干擾素可大量增加li-2-Kd抗 原在週邊血液單核觀胞或粒ffl胞之表現。的確，在單核SB 胞上的表琨稍微受到抑制。 丨司樣的，經由鼻肉/ 口 Μ高達2 0 , 0 0 0 I U之老鼠a 一 干擾素來治療DBA-2老鼠（H-2Kd)對Ly 6A/E抗原的表 琨並未有明顯的效果，在Μ非經腸焉的方式來施用第一型 干擾素後可大量増邡此抗原在許多種淋巴ffl胞表面的表琨 (Dumont 81 a 1 . , J . I nuno I , 1 8 8 8,1 3 7: 2 0 1 - 2 1 0 )。 經由鼻内/PM200或20,000 ill之老鼠α-干擾素或人 類d -卜8-干擾素來作治療也會得到類似的結果。 -31- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 41 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（^ ) 經由非經腸胃的注射僅Μ 20 IU之老鼠α -干擾素 來治療瑞士或DBA/2老鼠可大量增加2’-5’_寡腺苷醯合 成藺在週邊血液單核ffl胞及腾ffl胞内之表琨。相反的，同 樣的賞驗，經由鼻内/ 口 K高達2 0 0或2 0，0 0 0 i U之老鼠 α -干擾素或入類a-i-8-干擾素來治療$在干擾素治療 開始後i 0内之任何一個時間下進行測量，發琨其對2 ’ - 5 5 -寡腺登醯合成藺的活性並未有明顯的效果。賞施例6經由 口腔黏膜來旛用千擾素後干擾素之生物可利用性。 為測試千擾素之生物可利用性及其藥學動力學，將遺 於本研究具有最佳_物血液體積比之老鼠，K具最高量碘 125標定之單一高麵量基因重組式a -干擾素來進行治療 0 將70 X 106 IU之純化的入類a -i-8-千擾素溶於 1.4 si].之 PBS 中，並K Mogensexi 等人（Int. J *

Cancer, 1981,28: 575-582 )所逑改良自 Hunter 及

Greenwood 等入( Nature, 1962 194:495-498 )之氯駿 -T (Chl〇Miine-T)方法來作碘的標定。 M VSV剌激入類WISH組I胞來測試標有1 2 5 I之人類 cc -1-8-千擾素（批號CGP 35269-1)之生物活性，所测得 之生物活性為2 X 107 Ιϋ/ιΐ ，而K VSV剌激老鼠 L323 _胞時其生物活性則為1 X 1 0 6 I li / i 1 。

六至t週大的瑞士雌鼠分別Μ靜脈注射，腹膜注射， 或經由鼻内/ 口給予梠當於ixiO6之老鼠IU的2xi07 IU -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（>\) 標有1 2 5 ί之人類σ -卜8-干擾素（1.0 3 6 9 xi07 cp®/老 鼠）。在所示時間内，將每組三隻老鼠加以犧牲，收集其 血液，並測定體積。分別摘取腎贜，肝贜，肺臟，胰臟， 及胃/食道，擦乾後稱重至準確度為土 1.0 /i g ϋ Μ 7射 線計數器來測每一個樣品的放射線強度。Μ離心（8i)0g， 1 0分鐘；4 °C )來分離全血，並收集血清，計數後凍-8 0 °C 。之棱在入類 W i b Η顯fe和老鼠L 3 2 9翻胞中Μ上述Z標 準的生物分祈法測定血清中干擾素的含量。之後Μ親和性 免疫i冗穀法來分離血清樣品中的放射性物質並M S D S _ P A G Ε 加Μ分析。 每隻老鼠經靜賑注射了 1.Q 3 6 9 X 1 07 cpm標有1 2 5 ί 之人類α -卜8-干擾素5分鐘後，可在其周邊血液中_得高 董的放射線（> 2 X 1 0 6 c ρ in / πι 1)。全血中的放射線強度會在 之後的1 5全3 0分鐘內迅速降低。周邊血液中的放射線強度 在腹膜注射了 l.G 3 6 9 xiG7 cpis標有1 5 ί之入類卜8- 干擾素5分鐘後約比剛開始注射詩的強度低了 20倍。在 注射後1 5至3 ί)分鐘内放射線強度會迅速的增加。動物 體在經由鼻内/ 口旛駡標有1 2 5 I之人類α -卜8-干擾 素5 ，或15分鐘後其血液中的放射線強度顯著的 低於開始注射相同量具有同樣放射性標示物之干擾素時的 強度。對三種施用途徑而言，經由鼻内/ 口施用標有1 2 I之人類α -卜8-干擾素後在血清中所測得之放射線強度要 高於全血中所能測得的強度。與同樣體積.的血清ffi較下， -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（y^) 在全血中所測得之每毫升的放射線強度顯示在去除了全血 中其它细胞内成分後之血清具有較高的靨積。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) μ前逑之標準分析方法來分析本研究中所有老鼠血清 樣品中具有生物活性的干擾素，结果顯示在所有經靜脈或 腹膜注射了標有1 2 5 I之入類ex-卜3-干擾素的老鼠體内 ，無論是那一個灌試時間，均可在其血清中测到有生物活 性的千擾素。相反的，在經由口鼻途徑施用干擾素的動物 體肉，無論是那一個測試時間，均無法在任一動锪體之血 清中測到具有生物活性的千擾素，即使這些動物的血清中 含有非常高的放射線強度。 為證實Κ標有12 5 I之入類α -卜8-干擾素作治療 的動物其血清中的放射性物質的確代表原始的干擾素，因 此將樣品Κ連有Α- 蛋白質之G-瓊脂謬來進行免疫沉澱 ， 為使存在於樣品中的免疫球蛋白能被沉澱出來，Μ由親 和性法純化出的抗α -千擾素之多株抗體來作處理，並進 一步進行免疫沉澱。之後將樣品Μ上逑方法來進行 SDS -聚丙烯醯胺膠質電泳（SDS-PAGE)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在由靜脈或腹膜注射標有5 I 之入類a-i-8_干 擾素後M SDS-PAGE來分析血清中的放射性物質，只發琨 •一絛單獨均勻的蛋白質其移動位置與標有1 2 s I之人類 a -卜8_干擾素的移動位置相同。此物質之分子量經估計 大約為200㈣D ，約梠當於人類a -卜8-干擾素之原始 重量。相反的，經由鼻或P腔黏膜給予標有1 2 5 I之人 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（yy 類α -卜8-干擾素之老鼠血清樣品中，卽使每一 Η膠片上 含有幾乎完全相同量之放射線物質 5 也未在樣品中發琨與 原始干擾素重量類似之放射性物質。 放射性物質在組懸中的分佈顯示動物體在經由靜腿注 射標有i£ 5 I之入類α -1-8-干擾素5分鐘後，在腎 臟出現非常高的放射性，肝贜，肺臟，和胰麗也有高量的 放射性ϋ 這四種器官内的放射性強度會在 1 5 至 3 G分鐘 内開始大幅度的下降。梠反的，賈的放射線強度則會在1 5 至3ί3分鐘内開始大幅度的增加，直到其強度與動物體在 靜注射3 0分鐘後其血清中的放射性強度相同為止。 若是經由腹膜注射標有1 ζ 5 I之人類α —卜8-干擾素 ，則放射線強度會在分鐘內於所有的組嫌中達到高峰 ，且在接下來的 3 0 分鐘内逐漸下降。同樣的，經由鼻或 口腔黏R給予標有1 2 5 I之人類α -卜8-千擾素，則 放射線鹽度會在15分鐘內於所有的組纖中達到高峰，里 在3 0分鐘後稍稍下降。經由鼻或口腔黏膜給予標有1 2 $ ί 之人類α -1 - 8 - 千擾素後’在焉 / 食道中的放射線強 度較其它器官中約大一倍，且遶較Κ非經腸賈的方式，無 論是靜脈或腹膜注射，給予這些組織同量的放射性入類α -卜8-千擾素之量來得高出許多。 實施倒7經甶鼻内/ 口施羯干擾素後干擾素之藥學動力學 在由靜驗 5 腹膜注射或經由鼻/ 口給予每隻老鼠 1·ϋ369χ1ί)7 epi標有1 2 5 I之人類α -1-8-干擾素後5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明（34) 進行4次测試Μ決定入類ot -卜8-干擾素之藥學動力學特性 5 在2 4小時内一糸列的時間點中群j定全血及血清中放射性 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 物質之強度。 靜脈注射後老鼠全血及血清中標有1 2 5 I之人類α -卜8-干擾素之藥學動力學分佈圖圼一對數清除率曲線。 此結果與先前在老鼠身上Κ類似的分子，基因重組之人類 I A/D ( B g I) (Bohoslawed e t a 1 ； J , I F N Res. , 1 9 8 8, 6 : 2 0 7 - 2 1 3 } 所作岀的研究報導結果一致。由濃度時間曲 線下的面積所算岀來的可供生物利用之物質的量，也和入 類a A/D 之结果類Μ。靜匿注射標有1251 之人類α - i-8-干擾素之動力擧分佈圖曲線圼一二時間消耗清除率 曲線，此乃是腎贜清除物質時所表現出的特性，此輿範例 6的结果一致。腹膜注射後標有i 2 $ I之人類α -1-8-干擾素之藥學動力學曲線輿先前Μ肌肉注射干擾素在老鼠 身上所作的结果一致。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 不論是經由靜脈或腹膜注射了標有1 2 5 I 之人類α -- 8 -千擾素後，在所有老鼠之血清中都可丨>(偵ill到具有 生物活往的千擾素。 1. 抗癌活性之討論 富藍得紅白血病模型系統中包含一嚴謹的屬於臨床應 用前的抗癌活性灑試，由於富藍得紅白血病胞屬惡性且 經由靜脤注射後會轉移至肝臟和誤鱺觀跑。的確，Μ此模 型所得之结果為採用非經腸胃道施用d -干擾素來治療人 -3 6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明 類腫瘤的基礎。因此，用於本研究中所有實驗中未經處理 或Μ控制組藥物處理ft之動物均在 10 至 11 天内死亡e 如果沒有治療的話，僅注射了 4或5個富籃得紅白血病 ffi胞即足夠殺死一隻老鼠。相反的，某些動锪在接種了 105 的富藍得紅白血病綑胞100天後，經由α腔黏膜Μ老鼠α -千擾素來治療後ί乃然可Μ存活，因此此治療迸被認為乃 屬有效的。 的確 5 甶前逑的结果判斷 5 經由口腔黏膜來蔽用α _ 干擾素Μ乎是比經非腸.胃道施用環磷醯胺，5-氟腿_啶 ，或氨基甲基葉酸來得更有效，且Μ這些藥物僅能增加注 射了富藍得紅白血病_胞之動物幾天的生命而已（Gres ser θ t a 1 . , J . Natl. Cane e r Inst. , 1 9 88 8 0:12 6 -131} 0 其它藥物 s 例如顒氯氨鉛 (cispiatin) ，長春新鹼 (vincristine) ，阿黴素（d ο x o r ub i e i η) ，博萊黴素 (bleoinyein)或鬼臼乙叉甙（etoposide)對此種癌並無作 m ( Gresser et a 1 . , I · Natl · cancer Inst·，1 988 80 : 126-131} 〇 _樣的 5 經由□腔黏膜施用a -千擾素來對抗富藍得 紅白血病似乎是比在全身使用其它ffl胞素例如白介素-/3 ，白介素-2和ot -千擾素來得更有效5這些ffl胞素在此 模型系統中所展琨的活性非常小。 先前的研究結果顯示Μ非經腸賈途徑來K用千擾素乃 是此模型中最具抗癌效果的藥物5並卩使在癌顏胞已開 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明 始轉移至肝臟時此干擾素療法仍非常有效 (Gresser et a I , Inti. J . Cancer, 1 9 8 7 39: 7 8 9 - 7 9 2 ) 0 本研究结 果顯示經ffl 口腔黏膜施用千擾素輿上逑方法同樣$或甚至 吏月或0 當被診躐出已患有淋巴瘤後，相較於只服用α -干擾 素或只服用環磷驢胺的老鼠，每天注射α -干擾素並同時 嚴用覃一麵量之環磷釀胺，能大幅提高帶有淋巴瘤之AKR 老鼠的生存擺率（Gresser e t a 1 , E ur . J . Cancer, 19 7 8 1 4 ； 9 7 - 9 9 ) ° 在先前各種臨床前的動物試驗模型糸 統中也提到了一些成功结合了使用α//3 -干擾素和 B C N U ， c i s - D D P (順氯氨鉑），氨基甲基葉酸，阿黴素 ，和a -二氟甲基鳥氨酸的療法。有報導指岀結合 5 - 氟 腸嘧啶 （5-FU)和千擾素的療法對治療入類轉移性直腸癌 有所助益(Ernstoff e t a I， Journal of clinical Oneoiogy，198 7 7 :1764-1765)。然而，也有其它報導指 出合併使用+擾素和環鱗》駿（Marquet et al，Int. J. Cancer, 1 9 8 3 3 1 : 2 2 3 - 2 2 6 ; L e e 81 a 1 , B i o c h 8 ni.

Pharffiacol . , 1884 33: 3 4 33-3443)，阿黴素（BlackwiM

e t a ί , cancer Res·，1 9 8 4 4 4 : 9 0 4 - 9 0 8 ) ，或 5 - Μ M 嚷曉（Marquet et 1985 109: 156-158)會降低其抗 癌活性，亦即，在某些報導中已顯示同樣的藥物當K非經 腸胃途徑與干擾素合併施用時能有所助益。可Κ在此所逑 之方法來測試詰合使用干擾素和其它化療法藥物的效果。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 A7 B7 五、發明説明Ο")) 在注射了富藍得紅白血病綑胞之老鼠身上合併使用白 介素-1 (U-υ和α /召-干擾素可更增_其抗癌活性 (Belardeili e t a 1, In t. J. Cancer , 1 3 3 1 4 9 : 274-278 )。同樣的療法對具轉移性質的 Eb淋巴瘤（ pl l-R-Eb) 也有同樣的抗癌效果，任一藥®在單獨使用時 均無抗癌活性（Gabriele et ai，Invasion Metastasis, 1 9 9 3 1 3: 1 4 7 - 1 6 2 )。在所有已測試過的鼦胞素中，當與 非經腸道之第I型千擾素合併使用時白介素-1乃是最有 士 _ 双PH υ 合併使用血管原抑制物 AGM-1470 [( 氯乙醯基）-氨 基甲酸 (3 R- 3 a ,4 a (2 R ^, 3R*)，5 β , 6 β ))- 5 -甲 氧基 - 4 - ( 2 -甲基 -3 - ( 3 -甲氧基 -2 _ 丁烯基）環氧基 )-1-氧代 ίΐ 環（2.5)辛-6-基酯]([(ehioroaeetyl) -carbaiic acid {3 R- 3 a ， 4 a (2R*， 3R*)，5p 5 6 β )) -5 -1 e t h o x y - 4 - (2 -1 e t h y I - 3 - ( 3 - ® e t h o x y - 2 - b u t e n y 1} oxiranyl)-l-oxaspiro{2.5)oct-6-yl ester])與 a / β -干擾素較覃獨使用任一藥麵更可大蝠增加其抗癌活性 1 Β Γ e in e t a 1 5 J . Pediatric Surgery, 1 9 9 3 2 8 ： -t nr i 〇. rr rr \ . 16ϋύ-16ϋίJ u 已知高熱可提高a / /3 -干擾素對抗路易士肺癌之抗 癌活性(Yerusha Iii e t a 1 , P r o c . S o c . Exp. b i o 1 . Med·，1982 163: 413-415 )。已知精氨酸丁酸酯能増強 α -十擾素之抗癌活性(Chan y and Ceriitti，I n t. J. -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（#)

Cancer，i 38 2 3 0: 4 8 9 -03)。經由D腔黏膜途徑給予某 一類型及劑量之千擾素其所提供的保護程度與系統系施用 (腹膜注射）時之结果相比較，顯示Μ非經腸胃道的方式 施用干擾素在某些病例中能提供稍許好處，在某些病例中 則不見得比經由口腔黏膜途徑來得更有效。 2 · 抗；丙毒活性的討論 雖然抗病毒活性無法甶經鼻内/ 口 途徑給予標 W 1 ζ 5 I之入類α -卜3-千擾素，老鼠α /冷-千擾 素和老鼠α -干擾素之動物體血清中灑得，但在這些注射 了致死劑量之腦心肌炎病毒（EMCV )的動物體上卻可観 察到在統計學上有意義的保護效果（表1)。 找們由此一設計良好的臨康前急性病毒感染實驗模型 条統中所得的結果能為在口腔黏膜上使用高劑量干擾素以 治療人體急性条統性病毒感染提供一些原則性證據的支持 ，此摸型系統同時也顯示了無論是使用各類天然α -干擾 素亞型的混合物或是單一 重組α -千擾素異構物（例 如老鼠之〇(-干擾素）其抗病毒活性在統計學上顯著。當 經Η 口腔黏膜途徑施用時，天然之老鼠（Ι//3 -千擾素和 入類α -卜8-干擾素乃同樣有效。 重組Θ-干擾素和 老鼠K-干擾素也有類Μ的抗病毒活性。 3 · ~*般性8¾討論 前導性之生物標記實驗结果很清楚的顯示所测試的三 種生物標記（MHC第一型抗原，Ly6 Α/E抗原，和 -40- 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) L#,

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明 2~5’-〇^€〇&(16 1^13 10合成釀）在經由口腔黏膜施用干擾 效的反愿出所標記之生物活性（飼如，抗癌和 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 素後均能有 饥病毒®性 在所有 造成所有三 膜旛用高達 這兩種賞驗 雖然我 對一或其它 因為十擾素 It並不會預 理數+時。 ipj 樣的 干擾素後對 銃性影響， 之基因之表 到對干擾素 ®用α千擾 與未能 是5在口腔 IU之干擾素 何血液或血 生_活 )0 實驗中經由腹 種干擾素引起 20,000 IU 之 结果的差異是 們無法排除在 生物標記的影 乃1乍用在娠碼 期看到對於這 其他多 但似乎 琨乃受 生物標 素後在 在生物 黏膜治 液化學 性藥學 •nii mn w fM irj m 種千擾 不太可 到不同 記的影 鼻淋巴 標記實 療中即 能在P 參數觀 動力學 膜注射僅僅20 IU之干擾素即可 之蛋白質的表琨，而經由口腔黏 干擾素後郤未能測得任何影響， 相當令入驚奇的。 更早期或中期的時閭點内觀察到 響之可能性，但Μ乎不太可能5 這些蛋白質的基因之轉譯上，因 些生物標記的影響直到干擾素處 法排除在經由□腔黏膜途徑施用 素誘導之蛋白質之一所造成之条 能，因為有可能某些千擾素誘導 的調控。但是，許可在局部觀察 響，例$D 5 在經甶口腔黏膜途徑 细胞中局部觀察到。 驗中SII到任何影響之結果一致的 使動物體被注射了高達 20,000 腔黏膜干擾素治療期閭監測的任 察到一致的影響。 實驗的结果很清楚的顯示K敏慼 -41- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T t 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482676 A7 B7 五、發明説明（^0) 度較K前方法高一倍的方法也無法在週邊血液測到干擾素 的情況下，經由口腔黏膜施用一單一劑量具放射線標示的 人類σ-卜8-干擾素可得到在統計學上具有意義的抗病毒 效果。且經由口腔黏膜施用千擾素所得抗病毒活性程度曲 線遵循傳統的ftj董反應關ί糸曲線。 經由口腔黏膜施用標有1 25 I之入類σ -卜8-干擾 素至動物體内，可輕易的在其全血及血漬中偵溯到具放射 性的锪質。這些结果與前逑结果不同之處，即在於即使經 由口腔黏膜在動物體上用了高量未有放射線標示的干擾 素，也無法在其全血及血槳中偵測到千擾素。但是，經由 口腔黏膜施用後在全血及血漿中偵測到的放射性物質乃是 具有生物活性的。再者，SDS-PAGE的分祈结果顯示此物 質具有低分子量，且很可能是在腸胃消化干擾素之後其降 解產物的再吸收所致。經由口腔黏膜施用後分析此放射性 物質在組嫌中的分佈顯示該放射性物在胃的強度要高過任 何其它經測試的器官。我們的结果顯示在經由口腔黏膜· 用後卽使具生物活性的干擾素尚未被吸收，此種治療方法 在生物體内仍表琨岀顯著具統計學意義的抗癌及抗病毒活 性。 在不受限於任何有關能解釋這些有利效果之作用握制 的前題下$我們的结果顯示經由口腔黏膜施用干擾素乃是 經由目前一種仍無法定義的新機轉使其能有對抗癌ffl胞及 病毒的效果，此新機轉並未牽涉到外3G干擾素的直接作用 -42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

482676 Α7 Β7 五、發明説明（φ丨） ，或誘發内在干擾素產生作用。這點可由無法由循環条統 中瀏得任何干擾素或任一生物標計物上得到證實。此機轉 有一部分似乎乃是經由剌激環涵d鼻腔週圍許多的淋巴組 孅來達成。由於我們已經證簧經由口腔黏膜施用干擾素所 產生的效果與系統性施用干擾素之效果類似，因此我們的 结杲對μ經由ρ腔黏膜施用干擾素來治療腫瘤或病毒性疾 病的方法提供了一強而有力的證據。這點對將干擾素用於 臨床上可能非常重要。 在此為能清楚的解釋之故對本發明作了很詳綑的描逑 ，但對熟習技藝的人士而言，應該可Μ 了解任何在此所逑 之方法或簧施例之改良或變化均應不悖離在此所揭露之本 發明的精神及観念範囔肉。 表1 施用單一麵量標有i 2 5 I之入類σ-干擾素對治療接 種了腦心m炎病毒之瑞士鼠之存活率的影響 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 每組中繼靈《目驻鋪妖數} mm 謂量 途徑 3 4 5 6 rj g 9 10 15 30 Λ Ο 一兮G 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 482676 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（丨>) 木治療 6/6 4/6 η /η ά/Ό 0/6 ΑΙΙα-i -1.4X 口腔 〇—ΤΜΜ 1 ί\Κ I Iτ iu-丄ϋ 黏膜 6/6 5/6 4/6 ίη 0/0 Ι/6 Ι/6 1/6 1/6 1/6 1/0 老鼠0:/ Ο Λ ν / 口腔 /i干麗 ΙΟ4 Ιϋ 粘膜 6/6 rr /〇 ϋ/ D 5/6 4/6 3/6 2/6 2/6 ：2/6 1/6 i /〇 1/0 二^ η

表 L 單一麵量（每天一次達績四天）老鼠α -干擾素對治 療接種了腦心肌炎病毒之瑞士鼠之存活率的影響. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

( _) mmm 撕！ El 劑虽 、八 4:-77 m a 3 :\ g n Γ7 8 0 10 15 %JV TFidM 10/ 9/ i/ n / w 10 iu 10 10 老鼠a/ η v / 乙八 !r—i l| 和 Wbx 10/ Λ !\ / i.U/ 10/ 10/ 10/ 10/ 10/ 3/ 7/ 7/ p~r馁糸 Ι Ο4 Ι ϋ 黏膜 1 Γ5 iu iO 10 10 10 10 10 10 10 10 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 482676 A7 B7 五、發明説明 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 482676 A8 丨 姆、.正* C8 (知 a > _™ 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 1♦一種干擾素組成物，用於口腔黏膜接觸Μ剌激哺 乳動物宿主防衛機制或免疫反應，該組成物係包含由 2 Ο X 1 0 6 I U至1 0 Q Q X 1 0 6 I U的干擾素之刺激量，該量係超過 當非經腸道施用時會引起病理反應之量。 2 ·如申請專利範圍第1項之干擾素組成物，其用於 口腔黏膜接觸Κ剌激哺乳動物的宿主防衛機制或免疫反應 ，該哺乳動物係受到腫瘤，自體免疫或慢性病毒攻擊，或 受到急性病毒攻擊，其選自流行性感冒病毒，日本Β型腦 炎，由壁蝨媒介的腦炎及疱疹性腦炎，出血性熱包括伊波 拉病毒，馬伯病毒（Morburg virus)，拉薩熱（Lassa fever)，漢他病毒感染，Μ及可由動傳染至人類的病毒 感染，包括馬的麻疹病毒，該組成物係包含由20x10δ Ιϋ至1000x10s IU的千擾素之剌激量，該量超過當非經 腸道施用時會引起病理反應之量。 3 ·如申請專利範圍第1項之干擾素組成物，其用於 口腔黏膜接觸以剌激哺乳動物的宿主防衛機制或免疫反應 ，該哺乳動物係患有多發性骨髓瘤，髮细胞白血病，慢性 骨髓白血病，低等淋巴瘤，细胞淋巴瘤，類癌樣瘤，腎臟 瘤，腎细胞癌，肝细胞癌，癌症，结腸直腸癌，神經膠母 细胞瘤，结腸癌，及惡性腦瘤，其中該組成物包含一治療 上有效量的干擾素，該量高於20x10s IU。 4 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物， 其包含單一有效且無毒之干擾素劑量。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) 482676 A8B8C8D8 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 5 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物， 其包含多個干擾素的較小劑量，其足以引起相當於使用單 一劑量時所引發之宿主防衛或免疫系統之反應。 6 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物， 其施用剌激宿主防衛或免疫反應，提供連績無毒的劑量一 段時間，且此段時間足K引發相當於使用單一劑量時所引 起之宿主防衛機制或剌激免疫反應。 7 ♦如申請專利範圍第2項之組成物，其係用來治療 腫瘤狀況。 8 *如申請專利範圍第2之組成物，其係用來治療病 毒感染或慢性病毒感染。 9 ·如申請專利範圍第2項之組成物，其係用於治结 核病。 1 〇 ♦如申請專利範圍第1至3項中任一項之组成物 ，其包含一干擾素及一干擾素誘發物。 1 1 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物 ，其包含另一種治療藥劑Μ用於同時，分開或連續的治療 中0 1 2 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物 ，其中該治療藥劑乃選自抑制细胞生長，抗癌，抗血管生 成，和抗病毒藥劑中。 1 3 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物 ，其中該干擾素係為第I型干擾素。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) 482676 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 1 4 ♦如申請專利範園第1 3項之組成物，其中該第 I型干擾素係選自ex -干擾素，/5 -干擾素，ω -干擾 素，保守干擾素，及其混合物所組成之族群中。 15 ♦如申請專利範圍第14項之組成物，其中該第 I型干擾素係為ct -干擾素。 1 6 ♦如申請專利範圍第1 3項之組成物，其φ該干 擾素係為重組物質。 17·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物 ，其中該干擾素係為第][型干擾素。 1 8 ♦如申請專利範圍第1 7項之組成物，其中該胃 I型干擾素係為7 -干擾素。 1 9 ·如申請專利範圍第1 7項之組成物，其中該干 擾素係為重組物質。 20♦—種用於口腔黏膜施用Μ單位劑量形式之醫藥 組成物，其係包括20xl〇s ν至ιοοοχίο6 ιυ之干擾素及一 藥學上可接受之載體。 21♦如申請專利範圍第20項之組成物，其包括 20x106 11]至50(^106 Ιϋ 之干擾素。 22 ♦如申請專利範圍第2 1項之組成物，其包括 50x10s Ιϋ 至 500 X ΙΟ6 Ιϋ 之干擾素。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) * 訂!» 線