TW480176B

TW480176B - Polymer-lipid microencapsulated gases for use as imaging agents

Info

Publication number: TW480176B
Application number: TW086102919A
Authority: TW
Inventors: Howard Bernstein; Julie Ann Straub; Henry T Brush; Charles C Church
Original assignee: Acusphere Inc
Priority date: 1996-07-29
Filing date: 1997-03-10
Publication date: 2002-03-21
Also published as: ATE269107T1; BR9711109B1; CN1092989C; HUP0000392A3; DE69729579T2; MY130324A; AU720727B2; AU3367297A; JPH11505272A; BR9711109A; CA2260938A1; JP2987212B2; ID17646A; WO1998004292A3; CN1226836A; DK0957942T3; DE69729579T3; DK0957942T4; HU226584B1; EP0957942B1

Description

480176 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（1 ) 登明背景本發明是有關於一般的診斷顯像劑之領域，且特別是有_於一具有脂質加入其中之微囊封化超音波顯像對比劑，以維持一段時間的回聲作用。 · 當使用超音波得到一人體或動物之内部器官或結構的影像時，超音波，即高於人類耳朵所可分辨頻率之音波能里在其穿過人體時會被反射。不同型態的組織反射出不同的超音波，且由可反射出不同的内部結構之超音波所生成的反射作用，係可偵測並被電子性地轉變成為可見之展示0 對於一些醫療病況，對有意義的器官或結構得到一有用的影像是十分困難的，蓋因，在該超音波波長反射所生成之超音波顯像中，於缺少對比劑下，詳細結構是難以充刀地自其周圍組織中區分出。藉由輸注一藥劑至一器官或結構或有意義處，而增強該超音波顯像之對比作用，因而增強一些生理或病理的偵測與觀察。在其它的例子中，對比-顯像劑本身移動的偵測是特別重要的。例如。在一已知源自於特定心血管不正常所造成之一特別的血液流動形式，可藉由輸注一對比劑至該血液流中，並觀察該血液流動的動力學，而分辨出。可使用作為超音波對比劑之物質，係可藉由當超音波穿過人體且被反射以成生一由所作的醫療診斷而生成的影像寺對超曰波具有一效用來使用。不同的物質以不同的方式影響超音波且影響至各種不同的的程度。再者，一此 :本紙張尺度適用？關家標準（CNS)A4規格⑽x 297公髮）--—---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) t 線- 48U176 A7 五、發明說明（2 ) — — — — — III · 1 I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 由對比-顯像劑所造成的效果是比其它者更易被測量與觀察的。在選擇一供用於對比-增強劑之理想組成物上，較佳的是該等當超音波穿過身體時對超音波具有顯著效果之物質。同時該對超音波之效用應是十容易被測量出的。存在於超音波顯像上可觀察到的三個主要的對比·增強效用··逆散射，光柱的衰減與音速的不同。逆散射：當一穿體身體的超音波遇到一結構時，例如器官或其它身體組織，該結構會反射一部分的超音波。身體内不同的結構以不同的方式與各種不同的強度反射該超音波。該反射的能量係被偵測且使用於生成該超音波所穿過之結構的影像。而該詞“逆散射，，指該超音波能量被具有一些物理特性的物質散射回來而朝向其來源。線- 長期來已知在超音波顯像所觀察到的對比作用，係可在可造成大量逆散射的已知物質存在下而被增強之。該些物質係被投藥至該身體的特定部分，在該部分與未含有該物質之周圍結構的超音波顯像之間的對比作用會被增強。已知由於物理特性，不同的物質可造成不同程度的逆散射作用。因此，對對比-顯像劑之搜尋已集中在該等安定且不具有毒性而又可展現出最大逆散射量的物質。一物質所具有造成超音波能量的逆散射能力，係依賴於該物質之特性，例如其可被壓縮的能力。當檢測不同物質時，其可使用比較物質被稱為“逆散射橫切面，，之造成逆散射之能力的特定測定量。一特定物質之逆散射橫切面係正比於該散射的半徑，亦依賴於超音波能量之波長與該 A7

五、發明說明（3) 物質之物理特性，」· 0phil^K J Parker，c〇ntrast Agent in

Diagonstic Ultrasound in Medicine & Biology, v〇j. is, n.4, p.219,323 (1989) 〇在評估不同物質作為顯像對比劑上，其可計算哪些試劑具有較高的散射橫切面，因此，那些試劑應會在超音波顯像上提供較大的對比作用。可推論一固體粒子壓縮性係比該等周圍的介質所具有者更低，而該粒子的密度則較之為高。使用此一推論，一固體粒子對比_增強劑之散射橫切面係被估計為[75(〇phir與Parker, supra, at 325)。對一純液體的散射，該散射與周圍介質的絕對壓縮性與密度可能是約相等的，此會造成該液體具有為零的散射橫切面的結果。但疋’若有大量體積之一液體存在時，該液體可顯示出一些逆散射。例如，若一液體試劑自一十分小的容器流至 ^分大的容器，而使得該該液體實質上占據所有的容器’則此液體可能可顯示出一可測量的逆散射。但無論如何’熟習此技藝人士皆可了解到，相較於自由氣體微泡，純液體之散射是相當不具效率的。光柱的衰減：可由一些固體對比顯像劑存在下所可觀察到的另一種效用就是超音波的衰減。由於在一些組織形之間的衰減之不同，而在傳統的呈像中可觀察到顯像對比作用。K.J. Parker與 R.C. Wang, "Measurement of Ultrasonic Attnuation Within Regions selected from B-Scan Images," IEE Trans.Biomeed. Enar. BME 30(8), p. 431-37 (1983);K.J. Parker, R.C. Wang,與 R.M.Lener，"Attenuation of Ultrasound Magnitude 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) k·. —線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 480176 A7 —-----[ _ 五、發明說明（4) and Frequency Dependence for Tissue Characterization," Radiology, 153(3)，p.785-88 (1984)。已有假設在輸注一藥劑之則或之後所取出一組織區域的衰減測量，會產生一經增強的影像。但是基於衰減對比作用之方式，而用來測量一液體試劑之對比增強作用的技術並未被完全地發展出，且即便其被全地發展出，其亦在技術上會受至所使用之内部器官或結構上限制。例如，由於液體對比劑所造成衰減的損失，由於南體積之液體對比劑，而可能可在心血管系統之顯像中觀察到，該對比劑在衰減上生成之一實質上之不同在被測量前，係必須存在於一給定的容器内。粒子的能量吸收係藉由一被稱作“相對運動，，的機制而使其發生的。由相對運動所造成衰減上的改變，係可顯示出其隨粒子的濃度而呈線性的增加，且為隨粒子與周圍介質之間的密度差的平方值增加。K.J. Parker, et al., "A ParticulateContrast Agent with Potential for Ultrasound Imaging of Liver," Ultrasound in Medicine & Biology, Vol. 13, No. 9, p.555 561 (1987)。因此，當發生固粒子實質上聚集時，衰減對比作用可以疋一用以觀察顯像劑對比劑增強作用的活機制’雖然此效果是比逆散射現象的程度低很多，且在心血液診斷上不太具有用途。光速的差異：另一個增強超音波顯像之對比作用的技術，係基於音速會隨著其旅行穿過的介質而改變之事實而被提出的。因此，若一足夠大體積且音速穿過其中會有不同於周圍組織的音速之試劑，可輸注至該鎖定區域，而和 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) # --線-

^U176 Α7 ___________Β7____ 五、發明說明（5 ) 過該鎖疋區域所生成之音速上的不同係可被測量的。絲上所言，診斷超音波係為一強力，不具有侵犯性之工具，其可使用於獲致身體之内部器官的資料。灰色程度的顯像與彩色都卜勒（D〇pp丨er)效用之來臨已大幅地改進了該技術的範嘴與解析度。雖然用以進行診斷超音波之技術以及用以製造與使用對比劑之技術已被顯著地改良，但仍存在一需求，去增強該心臟灌注以及心室，固體器官，尿道灌注，固體器官灌注之影像的解析度；在真正顯像期間金液流速與流動方向之都卜勒信號。各種天然與合成的聚合物已使用於囊封該顯像對比劑，例如，空氣。Schneider et al_，Invest· Radiol., Vol. 27, pp. 134-139 (1992)揭示3微米、空氣填充之聚合粒子。該等粒子係被報導出其在血漿且在應用的壓力下是安定的，但是在2·5ΜΗζ下，其發生回聲作用十分低。另一種形式的微泡懸浮液亦可自一經超音波治療的白蛋白中獲得。Fejnsfejn et al.，J. Am. Coll. Cadiol·，Vol.11, pp. 59-65(1988)。 Feinstein揭示一在活體外具有十分優良安定性之微泡，其具有適合的大小’以供穿過肺部通道。但是，此等微泡由於在壓力下不安定，而在活體内壽命短，即具有在幾秒鐘級的半生期（其約為一循環的流程）。Gottlieb,S. et al.，J. Am.

Soc· Echo·，Vol. 3，pp_328 (1990)，Abstract;與 Shapiro, J.R· et al_, J· Am_ Coll. Cadiol·，Vol. 16, pp.1603-1607(1990)。凝膠- 囊封之空氣泡為CanoMet al.所揭示（Canoll, B.A. et al.，

Invest. Radiol·, Vol· 15, pp.260-266 (1980)與 Canoll, B.A. et 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) t^J· --線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 480176 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（6) al.，Radiology, νοΙ.143, ρρ· 747-750(1982))。但是，因於其大尺寸（10至80// m)，而不可能穿過肺部的微細管。凝膠囊封的微泡亦為 Rasor Associates, Inc揭示於 PCT/US80/00520。此等皆是藉由“結合（colascing)”該凝膠所形成的。藉由半乳糖之微結晶（SHU454與SHU 508)所安定化之微泡亦為 Frizch et al所報導出。Fritzsch, T. et al.，Invest. Radiol· Vol· 23 (Suppl 1), pp. 302-305(1988);與 FritzschJ. et al. , Invest. Radiol·, Vol.25 (SuppM), 160-161 (1990)。該微泡在活體外係可維持15分鐘，但在活體内則維持低於20秒鐘。Rovai，D.et al.，J· Am. Coll. Cardiol.，Vol. 10，ρρ·125-134(1987);與 Smith, M. et al·, J. Am. Coll. Cardiol·，Vol.13, pp.1622-1628 (1989)。為Schering Aktiengesellschan之歐洲專利申請案第 90901933.5號揭示供用於超音波顯像用的微囊封化之氣體或揮發性液體的製備與使用，其中該微囊封係由合成聚合物或多醣所形成的。Sinetica S.A·之歐洲專利申請案第 91810366.4號（0 458 745 A1)係揭示一為一被界面沈積出之聚合物膜所限制之空氣或氣體微氣球，該微氣球係可分散於一水性載劑中，以供注射到一宿主動物，或供口服、直腸或尿道投藥，而用以治療或診斷的目的。Delta Biotechnology Limited之W0 92/18164係揭示藉由在諸如溫度、喷霧比速，粒子大小與乾燥條件等十分受到控制的條件下’來噴霧乾燥一蛋白質溶液，以形成具有氣體被捕獲於其中之中空球體，進而製備出微粒子，以供顯像用。W0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) f ——訂. --線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 480176 A7 B7 五、發明說明（7) 93/25242揭示一種用以超音波顯像之微粒子的合成，該粒子係由被包含在一由聚氰丙嫦酸酯或聚酯所構成之殼内的氣體所組成的。W0 92/21382揭示一種微粒子對比劑的製造方式，其包含一共價地結合至包含有氣體之基賣上，其中該基質係為碳水化合物。Unger之美國專利第5,334,281、 5,123,414與5,352,435號揭示使用作為超音波對比劑的脂小體，其包含氣體，氣體先驅物，例如，一 pH活化或光活化之氣體前驅物，以及其它液體或固體對比增強劑。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Quay之美國專利第5393524號係揭示使用包含有氟碳化合物之試劑，以供增強在超音波顯像上的對比作用。該試劑係由十分小之所選定氣體的泡泡或者微泡所組成，而可在溶液中顯示出長的壽命，同時又小的足以穿過肺部，而能夠使用於心臟血液系統與其它重要器官之超音波顯像劑。Nycomed之W0 95/23615揭示用於顯像之微囊封劑，其藉由一溶液（例如，一包含有一全氟化碳之蛋白質溶液）凝聚作用而形成。Massachusetts Institute of Technology之 PCUUS94/08416揭示由聚乙二醇-(聚丙交酯-共-乙交酯）嵌段聚合物所形成之微粒子，其具有被囊封於其中的顯像劑，該顯像劑包含有諸如空氣或全氟碳化合物之類的氣體。如Sonus Pharmaceutical, Inc.，之W0 94/16739所述，雖然固體與液體可反應音波至一相似的程度，但氣體已知是較具有效率的，且是使用作為超音波對比劑較佳的介質。事實上，如Sonus PCT申請案實施例12所示，蛋白微囊封物當其被應用於迷你豬中時，相對於乳化或膠狀懸浮液，因 -10· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） /0 A7 ---------一 B7 五、發明說明（8 ) 造成：：上的顧慮（以及效率的議題）而被摒棄。完全無有揭示出可使用其它方法，例如X·攝影、陽電子或光子放射X光斷層照像法或核磁共振顯像來檢測之微粒子。在所有的例子中，增強顯像劑之回聲作用，並結合有增強或疋維持該顯像劑之安定性以及該顯像劑之製造容易性’是十分想要的。_種增強—微粒子回聲作用之方法是 '曰強該被囊封於該循環微粒子内的氣體之時間。但不幸的疋，在大夕的例子中，不管該氣體之特性或該囊封物質為何’該氣體會十分快速的擴散出，特別是在血管循環環境下。因此，本發明之目的係提供一可顯著增強回聲作用之微粒子纟發明之另一目的係提供一種包含有一顯像劑的微粒子，該顯像劑可在活體内持續幾次的循環。本發明之另一目的是欲提供一種可維持較長時間之經囊封化氣體的微粒子，因而增強微粒子之回聲作用。本發明的另一目的係提供一種包含有一顯像劑之微粒子，本發明另一目的係提供一種含有一種可被鎖定至身體專一區域之顯像劑的微粒子。本發明之另一目的是提供一種製造一種具有顯像劑被捕入其中之微粒子。發明摘要已發現相較於未包含有脂質的微粒子，將氟化氣體，特別是諸如八氟丙烷之全氟化碳，加入至由天然或合成的本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) il· ·-線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 11 480176 A7

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製聚合物與脂質之組合所形成之微粒子，可達成一相當地被〜強回聲作用。其它為非親脂性且可限制水擴散至微粒子之非脂質化合物亦可加入該微粒子中，以增強該回聲作用。在較佳實施射，1¾聚合物係為合成之可生物降解之聚合物。該微粒子係T以一具有適合於欲被顯像出鎖定組織的直徑來製造出的，例如，對於血管内投藥，為具有05 至8微米的直徑，而對於胃腸道或其它腔室之顯像用的口服投藥，則是為具有0.5至5mm的直徑。較佳的聚合物係為諸如聚（乳酸-共-乙醇酸）、聚（丙交酯）或聚（乙交酯）之類的聚（羥基酸），而以綴合至聚乙二醇或其它可抑制網狀内皮系統（RES)之攝取的材料為佳。而最佳係之脂質係為W知質’較佳者為二棕櫚醢基鱗脂醢基膽驗（D p p 〇)、二硬脂醢基磷脂醯基膽鹼（DSPC)、二花生四烯醯基磷脂醯基膽鹼（DAPC)、二正二十二烷醯基磷脂醯基膽鹼（DBpc)、二二十三烷醯基磷脂醯基膽-(DTPC)、二二十四烷醯基碟脂酿基膽鹼（DLPC)，其等係以一在〇〇1-3〇 (w脂質/w聚合物）之間的比例加入其中，而以在〇_1_1〇 ( w脂質/w聚合物）之間的比例為佳。此等微粒子之黏附作用亦可經由選用生物黏附性聚合物而被增強或降低。例如，當聚合物係使用於口服投藥時，該黏附性可予以加強。鎖定目標亦可藉由聚合物之選用或在聚合物中加入配合子或將聚合物綴合至配合子來達成，該等配合子可專一地結合至特定組織形態或細胞表面分子。此久，該等配合子亦可接合至微粒子上，而影響該粒本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） -12- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) t I訂、· ;線· A7

480176 五、發明說明（10) 子的電荷、親油性或親水性。該聚合性微粒子係可使用於各種診斷顯像步驟中，包含有超音波顯像、核磁共振顯像、螢光檢測、X-光檢測以及經電腦處理之局部X射線檢測法。此等微粒子亦可使於各種顯像應用中，其包含有心臟學上的應用、血液輸注上的應用以及用於器官與周圍靜脈顯像用上的應用。凰式簡要說明第1圖係被包含至聚合性微粒子之脂質的碳鏈長之效用，其係以卵磷脂（實圓圈）、DPPC (空方形）與DSPC (空菱形）與DAPC(X)之逆散射對時間（分鐘）作圖而 i明之詳細説明本發明係提供一用以合成一聚合性輸送系統之方法，該輸送系統係由包含有氣體（特別是全氟化碳）之聚合物月曰質微粒子所構成。該微粒子可使用於各種診斷超音波顯像應用上，特別是諸如血液血管顯像與回聲心動描記法之超音波步驟中。相較於未加入額外脂質的微粒子，該等額外脂質之加入可增加該回聲作用。里製造微赵早之方法邀試却丨如在此所使用者，微粒子一詞除非有特別說明，否則其包含有微球體與微膠囊以及微粒子。微粒子在形狀上可為球形或非球形。該微膠囊係被界定具有一用以包圍另一本紙張尺度_ t關家標準規格⑽ X 297公釐） ---------.——β^·! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -13- 480176 A7

五、發明說明（U) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製個物質核Ή在此情況下’係為氣體）之外聚合物殼的微粒子。該微球體一般係為固體聚合球體，如下所述，其可包含有-由孔洞所形成之蜂高結構，經由該聚合物，該等孔洞係被填充以一顯像目的用之氣體。聚合物非可生物降解與可生物降解基質皆可與脂質混合，以供用於輸送氣體，雖然可生物降解之基質是較佳的，特別是對靜脈投藥而言。非可蝕性之聚合物亦可於口服投藥上使用。合成性聚合物是較佳的，因為其較可再生地被合成與降解。該等聚合物係基於其在活體所需之安定性而加以選擇出的，即依分佈至所欲顯像處所需之時間以及顯像所需的時間，而選擇出。在一實施例中，具有一在約2〇至3〇分鐘之間或更高之活體内安定性的微粒子係可被製造出，以使用在，例如，諸如回聲心動描述法、神經描述法 (neurosongraphy)、子宮輸卵管X光攝影法以及對固體器官之0斷步驟專應用上。該對比劑-囊封化之微粒子的活體内安定性，係可在其生成期間，利用使用諸如一與聚乙二醇（PEC)共聚化之聚丙交酯-共-乙交酯的聚合物來調整。 PEG若被暴露於外表面時，可延長該等物質的循，因為為十分親水的。代表性的合成聚合物係為：諸如聚（乳酸）、聚（乙醇酸）以及聚（乳酸-共-乙醇酸）之聚（經基酸），聚丙交酯，聚乙交酯，聚丙交酯·共·乙交酯共聚物及其等摻合本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -14- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) t 1^1· 線· 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 480176 A7 —— B7 五、發明說明（12) 物，聚酸酐，聚原酸酯，聚醯胺，聚碳酸酯，諸如聚乙撐基、聚丙禮基之聚燒撐基，諸如聚（乙二醇）之聚烧樓二醇，諸如聚（環氧乙基）之聚環氧烷基，諸如乙撐基對酚酞酸酯之聚烷撐基對酚酞酸酯，聚乙烯醇，聚乙烯醚，聚乙晞酯，諸如聚乙婦氣之聚乙烯鹵化物，聚乙烯扯洛酮，聚矽氧烷，聚（乙烯醇），聚（乙酸乙烯酯），聚苯乙烯，聚安酸甲酯及其等共聚物，諸如烷基纖維素、羥烷基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥基丙基纖維素、羥基·丙基甲基纖維素、羥基丁基甲基纖維、纖維素乙酸酯、纖維素丙酸酯、纖維素乙酸酯丁酸酯、纖維乙酸酯酚酞酸酯、羧基乙基纖維素、纖維素三乙酸酯以及纖維硫酸酯鈉鹽之類的衍生化纖維素 (在此稱為“合成纖維”），丙烯酸、甲基丙烯酸之聚合物或其等共聚物或衍生物，包含有酯類、聚（甲基丙烯酸甲醋）、聚（甲基丙烯酸乙酯）、聚（丁基甲基丙烯酸）、聚（甲基丙烯酸異丁酯）、聚（甲基丙烯酸己酯）、聚（甲基丙烯酸異癸酯）、聚（甲基丙烯酸月桂酯）、聚（甲基丙烯酸苯酯）、聚（丙烯酸甲酯）、聚（丙烯酸異丙酯）、聚（丙烯酸異丁酯）、聚（丙烯酸辛酯）（在此稱為“聚丙烯酸”），聚（丁酸）、聚（戊酸）與聚（丙交酯·共_ 己内醋），其等共聚物或摻合物。在此使用的“衍生物” 包含具有化學取基團（例如，烷基，烷撐基）之取代、加成，羥基化，氧化以及其它一般熟習此技藝人士所會進行之修飾。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂-· -•線·

A7 B7____ 五、發明說明（13 ) 較佳之非可生物降解之聚合物的例子包含有乙撐基乙稀乙酸酯’聚（甲基）丙稀酸，聚醢胺，其等之共聚物或混合物。較佳之可生物降解之聚合物的例子包含有羥基酸之聚合物，例如，乳酸與乙醇酸，聚丙交酯，聚乙交酯，聚丙交酯-共-聚乙交酯以及其與PEG之共聚物、聚酸酐、聚（原酸酯）、聚氨酸甲酯、聚（丁酸）、聚（戊酸）與聚（丙交酯-共己内酯）之共聚物。較佳的天然聚合物包含有諸如白蛋白、醇溶蛋白之類的蛋白質，例如玉米醇溶蛋白質，以及諸如藻酸、纖維與聚羥基烷酸之類之多醣，例如聚羥基丁酸。在黏膜表面（例如，在胃腸道）顯像使用上特別有意義之生物可吸附性聚合物係包含有聚酸酐，聚丙烯酸，聚 (曱基丙稀酸甲酯），聚（甲基丙烯酸乙酯），聚（丁基甲基丙稀酸甲酯），聚（甲基丙婦酸異丁酯），聚（己基甲基丙烯酸甲酯），聚（甲基丙烯酸異癸指）聚（甲基丙烯酸月桂酯），聚（曱基丙烯酸笨酯），聚（丙烯酸甲酯），聚（丙烯酸異丙酯），聚（丙烯酸異丁酯）以及聚（丙稀酸辛S旨）。溶劑如在此所界定者’聚合物溶劑係為一有機溶劑，其可揮發’或具有相當低的 '’弗點’或可在真空下被去除，且复為在人類投樂上微置時是可接受的，例如，二氣甲烧。其 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· -線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^0176 ^0176

五、發明說明（w) 它的溶劑，例如，乙酸乙酯，乙醇，甲醇，二曱基甲醯胺 (DMF)’乙酮，乙腈，四氫呋喃（THF)，乙酸，二甲基亞颯（dms〇) 以及氯仿亦可以應用。一般而言，該聚合物係被溶解於一溶劑中’以形成一具有重量對體積約在〇.1至6〇%(w/v)之濃度的聚合物溶液，特別是〇.25至3〇%之濃度的聚合物溶液。親脂性化合物脂質一般而言，藉由加入有效量之親脂性化合物以限制微粒子對水之穿透以及/或攝取，可有效地增加該等具有氣體（特別是諸如全氟化碳之氟化氣體）被囊封於其中之聚合性微粒子的回聲作用。可使用於安定化位在聚合性微粒子内部之氣體的脂質包含有，但不限於下列：脂肪酸及其衍生物、單、雙與三甘油脂、磷脂質、神經鞘脂質、膽固醇與错類衍生物、萜烯與維生素。脂肪酸及其衍生物包含有飽和與不飽和脂肪酸、奇數與偶數脂肪酸、順式與反式異構物、包含有醇、酯、酸酐、羧基與前列腺之脂肪酸衍生物。可使用的飽和與不飽和脂肪酸包含有，但不限於，該等不論是呈直線或具支鏈之具有在12個碳原子至22個碳原子之間的分子。可使用的飽和脂肪酸之例子，包含有，但不限於，月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸與硬脂酸。可使用之不飽和脂肪酸的例子包含有，但不限於，月桂酸、四碳 -5·稀酸、肉豆蔻婦酸、棕櫊烯酸、十八碳冬稀酸與油酸。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -d. 線- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -17- 480176 A7 B7 五、發明說明（l5 可使用之具有支鏈的脂肪酸例子包含有，但不限於，異月桂酸、異肉豆蔻酸、異棕櫚酸、異硬脂酸與異間戊二烯。脂肪酸衍生物包含有12-(((7··二乙基胺基香豆醯素-3-基）羰基）曱基胺基）十八烷酸；Ν-[12-(((7^二乙基胺基香豆醯素-3-基）羰基）曱基胺基）十八烷醯基]-2-胺基棕櫚酸，N-琥醯基二油醯基磷脂醯基乙醇胺以及棕櫚醯基-高胱胺酸；以及或其等組合。其等可使用之單、雙或三甘油脂係包含，但不限於具有一在6至24碳原子之間脂肪酸或脂肪酸混合物之分子，二半乳糖雙甘油脂、1,2-二油醯基-sn-甘油；1,2-二棕櫚醯基-sn-3-琥珀醯基甘油；以及1,2-二棕櫚醯基-sn-3· 琥珀醯基甘油。可使用之磷脂質包含有，但不限於，磷脂酸、具有飽和與不飽和脂質之磷脂醯基膽鹼、磷脂醯基乙醇胺、磷脂醯基甘油、磷脂醯基絲胺酸、磷脂醯基肌醇、溶血磷脂醯衍生物、心肌磷脂（cardioMpin)與冷-醯基-烷基磷脂。磷脂質之例子包含有，但不限於，醯基磷脂醯基膽，例如，二油醯基磷脂醯基膽鹼、二肉豆蔻醯基磷脂醯基膽鹼、二_ 十五醯基磷脂醯基膽鹼、二月桂醯基磷脂醯基膽鹼、二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼（DPPC)、二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼 (DSPC)、二花生四烯醯基磷脂醯基膽-(DApc)、二正二十二烷醯基磷脂醯基膽鹼（DBPC)、二二十三烷醯基磷脂醯基膽鹼（DTPC)、二二十四烷醯基磷脂醯基膽.（DLpc);以及填脂醯基乙醇胺，例如，二油醯基碟脂醯基乙醇胺或】-十六烧基-2_棕櫚醯基甘㈣脂乙醇胺。具有不對稱酿基鍵 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -a. 線_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (例如，具有一 6個碳之醯鏈與另一 12個碳之醯鏈）的合成磷脂亦可使用。可使用的神經鞘脂質包含有神經酿胺、神經勒碌脂、腦苷脂、神經節苷脂、硫酸腦苷脂與溶血硫酸腦苷脂。神經勒脂質之例子包含有’但不限於，神經節苷脂Gm 1與 GM2 〇 .可使用之错類包含有，但不限於，膽固醇、膽固醇疏酸酯、膽固醇半琥珀酸酯、6-(5-膽固醇-3沒-氧基）·己·6_胺基-6-去氧基-1-硫基-a 喃甘露糖菩、6-(5-膽崔稀-3々·氧基）-己-6-胺基-6-去氧基-1-硫基-α -吡喃甘露糖苷與膽固醇基（4^三乙基35錢）丁酸。其它可使用的脂質化合物包含有生育酴及其衍生物、與油脂及衍生化之油脂，例如硬脂醯胺。各種陽離子性脂質，例如DOTMA，Ν-[1(2,3-二油醢基氧基）丙基-Ν,Ν,Ν-三甲基銨氯；DOTAP，1,2-二油醯基氧基-3-(二甲基叙）丙烧，與d〇BT’ 1,2 -二油酿基- 3- (4-三甲基録）丁醯基-sn甘油，亦可使用。最佳的脂質係為磷脂質，更佳者為DPPC、DDSPC、 DAPC、DTPC、DBPC、DLPC，而 DPPC、DAP與 CDBPC尤佳。脂質的含量範圍係在自0.01至30 (w脂質/w聚合物）之範圍内；路最佳者係在0.1-10(w脂質/w聚合物）。其它親脂性化合物其它較佳之親脂性化合物包含有諸如色胺酸、酪胺本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -19- Γ4先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} t-T· 線· A7

五、發明說明（Π) 酸、異白胺酸、白胺酸與纈胺酸之類的胺基酸，諸如對羥基苯甲酸烷脂（例如，對羥基苯甲酸甲酯）與笨甲酸之類的芳香化合物。顯像卸丨 I體任何生物可相容或藥學上可接受的氣體皆可加入該微粒子内。該氣體一詞係指任可為氣體之化合物或者能夠在欲進行顯像的溫度下形成氣體之化合物。該氣體可由諸如氧、氮、氬、氖、氮之單一化合物或該等化合物之混合物 (例如空氣）所構成的。全氟化碳氣體是較佳的。氣體之例子包含CF4、C2F6、c3f8、SFe、（^4與C3Fe。全氟丙烷是尤佳的，蓋因其可提供一在使用的溫度下不會凝集且是藥學上可接受之不可溶氣體。甚它的顯像劑其它的顯像劑亦可加入以取代該氣體或與該氣體相組合。可應用之顯像劑包含有商業上可取得之試劑，該等試劑係使用於陽電子放射X-光斷層照像法（PET)、電腦輔助局部X攝影法（CAT)、X射線檢測法、螢光檢測法與核磁共振顯像法（MRI)。微粒子中所承載之該等試劑係可利用此技藝中之標準技術以及商業上可取得的設備來加檢測。在MRI中可使用作為對比劑之適合物質的例子包含現今可取得之鎵鏘（gatalinlum)螯合劑，例如二乙撑基三胺五本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) k^· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -20- 480176 Α7 Β7 五、發明說明（18) 乙酸（DTPA)與銀戊酸二葡胺（gat〇pent〇⑻e djmeg|umjne)，以及鐵、鎂、猛、鋼與鉻。可使用於CAT與X射線檢測法之物質包含有供靜脈投藥之以埃為主的物質，諸如被泛影酸化（djatriZ〇ate)與被磁欧酸化（iothalamate)之典型離子性單體，諸如i0pamid0卜 isohexo丨與i〇ve「sol之類之非離子性單體，諸如·丨〇t「〇丨與 lohixano丨之類的非離子性二聚體以及諸如j〇xaga丨化之類的離子性二聚體。其它可使用的物質包含有口服使用的鋇。微粒子及其Μ造方法在最佳的實施例中，該微粒子係藉由喷霧乾燥方式來生成。其它的技術亦可使用，例如以下所討論之溶劑萃取、熱熔W囊封以及溶劑蒸發作用。一重要的重點在於該聚合物在形成該微粒子前，必須可與脂質一起溶解於或熔融。雖有特別指出一脂質的加入，但可明白的是其它有用的親脂性化合物亦可用以取代該脂質。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -線· 在較佳實施例中，該氣體係以下列方式被取代的：先施用一所欲之氣體氣流至該微粒子上，或者對該微粒子抽真空以去除該囊封氣體，而後再填充以該所欲的氣體。在此方法中，該聚合物與脂質係被溶解於可揮發性有機溶劑，例如二氣甲烷。一呈固態或為水溶液形式之孔洞形成試劑可加至該溶液中，以用以形成該作欲加入氣體而作為顯像劑之微粒子。若其它的顯像劑欲被加入其中時，顯像劑可以呈固體或液體之形式加入該聚合本紐尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21G χ 297公爱） —--. /〇 A7

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480176 A7 B7 五、發明說明（20) <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 粒子外表面一般係平滑且緻密的。此步驟係可使用於製備由聚S旨及聚酸酐所製成之微粒子。但是，此一方法被限用於具有在1000-50,000之間之分子量的聚合物。熱熔融微囊封作用係揭示於E. Mathiowitz, et al.，

Reactive Polymers，6, 275 (1987)。聚酸酐，例如，由雙·羧酸苯氧基丙烷與癸二酸以莫耳比為2〇:80(P(CPP-比 SA)20:80)(Mw 20,000)所製成之聚酸酐，可藉由熱熔融微囊封化作用來予以製備，例如，聚（反式丁烯二酸_共_癸二酸 (20_80)(|\/|\/\/15,000)微粒子係可藉由熱熔融微囊封化作用來予以製備。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 c.溶劑的去除此技術基本上係對聚酸酐所設計的。在此方法中，該孔洞形成試劑係被分散或者被溶解在一由被配置於一揮發性有機溶劑（例如，二氣甲烷）内之選定聚合物與脂質所構成之溶液中。該混合物係藉由在一有機油（例如，矽酮油）中攪拌而被散浮，而形成一乳化劑。不同於溶劑蒸發，此方法可使用於自具有高溶融點以及不同分子量之聚合物來製得微球體。以此技術所生成之粒子的外在形狀係高度地隨所用的聚合物形式而改變。 d·微粒子之喷霧乾㉟冑粒子可以喷霧乾燥來製得，其係藉由溶解一生物可相容之聚合物與脂質至一適合的溶劑，分散一孔洞形成劑至該聚合物溶液中，而後喷霧乾燥該聚合物溶液，以形成微粒子。如在此所界定的，“喷霧㈣” _由—聚合物與_孔洞形成劑所構成之溶液的步驟係“步驟，其中浴液係霧化，以形成—微細的霧狀，並巧氏張尺度剌巾關家標準（CNS)A4規格— X 297公釐） 23- ^0176 ^0176

五、發明說明（21 直接與適合的熱載體氣體相接觸而將之乾燥。使用可在此技*中可取付之喷霧乾燥裝置，該聚合物溶液係被輸送經過該噴霧乾燥器之入口，流經在該乾燥器内的管路，而後經由該出口霧化。該溫度係依所使用之氣體或聚合物而變化。該入口與出口之溫度可被控制，以生成所欲的產物。聚合物溶液之粒子化的尺寸乃是所用以喷霧該聚合物之喷嘴、喷嘴壓力、流速、所使用的聚合物、該聚合物之 >辰度、該》谷劑之形式以及喷霧的溫度（入口與出口的溫度）以及分子量之函數。一般而言，在設若濃度是相同的情況下’分子量愈高，粒子尺寸就愈大。一般之用以喷霧乾燥的方法參數係為下列：聚合物濃度=0.005-0.20 g/m|、入口溫度=30-1000°C、出口溫度=20-1001、聚合物流速=5_2〇〇 ml/分鐘，以及喷嘴直徑=〇.2-4mm ID。直徑範圍在1至1〇微米内的微球體係可以一形狀得之，該形狀係依賴於聚合物、濃度、分子量與噴霧流速之選用。右顯像劑係為固態’則該試劑係以固體粒子被囊封，該粒子係在噴霧前被加入該聚合物溶液内，或者該顯像劑可被溶解於一水溶液，而後在噴霧前將其與聚合物溶液相乳化。 e_水凝膠微球體由凝膠形式之聚合物（例如，聚鱗氮烯（polyphosphazene)或聚曱基甲基丙烯酸酯）係可藉由下列方式來步驟·溶解該聚合物在一水溶液中，若有需要，散浮一孔洞形成劑以及散浮一脂質於該混合物中，均質化該混合物，再經由一微滴粒（microdroplet)形成裝置來擠壓，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -24 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 480176 A7 ' ----— ______ 五、發明說明（22) 成微滴'粒所生成微滴粒係落入-被緩慢地授拌之由一相反電荷離子或聚合電解溶液所構成的硬化浴中。該系、先的k點係其靶夠在製造後，藉由塗覆以諸如聚離胺酸之類的聚陽離子之聚合物，而進_步的修飾該微球體之表面。該微球體粒子係可使用各種尺寸的擠壓ϋ來控制。 I助於撒勒:早來戎之添加部丨各種表面活性劑係可在包含有顯像劑之微粒子合成期間中加入。可使用之乳化劑或表面活性劑（〇 1 ·5重量％ ) 之例子包含有最為生理上所接受的乳化劑。該等例子包含有天然或合成的膽酸鹽膽酸，該二者可為胺基酸綴合者或為未經綴合者，例如，牛磺去氧膽酸與膽酸。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線· 其亦可包含有一在〇_〇1%至9〇%重量對體積之量的孔洞形成劑，以增加孔洞的形成。例如，在噴霧乾燥、在溶劑蒸發中，諸如可揮發性鹽（例如，碳酸氫銨，乙酸銨，氯化銨或苯甲酸銨或其它可真空冷凍乾燥之鹽類）之類的孔洞成劑係首先溶解於水中。而後將該包含有孔洞形成劑之溶液以聚合物溶液乳化之，以在聚合物中形成孔洞形成劑之微滴粒。再將該乳化液喷霧乾燥或經過溶劑蒸發/萃取步驟，該經硬化的微球體係被冷凍並被真空冷凍乾燥，以去除孔洞形成劑。微粒子的尺寸在供用以製備一能夠流經肺微細管架之可注射微粒本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） 480176

五、發明說明（23) 的較佳貫施例中’該微粒子應具有一在約1至1 〇微米之間的直徑。較大的微粒子係被集結在肺架上，而較小的微粒子無法提供足夠的回聲作用。較大的微粒子可使用於夢由非注射之路徑來投藥，例如，口服投藥（以評詁胃腸道情況）’投藥至其它黏膜表面（例如直腸、陰道、口服、鼻内）或吸入投藥。口服用之較佳粒子尺寸係為約〇5微米至5mm。可用的藥學上可接受載劑包含有一含有甘油與 TWEEN™20之鹽水以及含有！^日以]2〇之等張甘露醇。粒子尺寸的分析較佳是利用在一光學顯微鏡、掃描式電子顯微鏡或穿透式電子顯微鏡而在C〇u|ter計數器上進行的。 (請先閱讀背面之注意ί項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製目標鎖定該微粒子係可經由形成微粒子之聚合物之選用、微粒子之尺寸以及對微粒子之配合子的加入或接合，而被專一地鎖定或非專一鎖定的，。例如，生物活性分子或可影響粒子之電荷、親脂性或親水性之分子係可接合至該微粒子的表面。此外’分子亦可被接合至該該等使組織黏附作用降至最低之微粒子，或者被接合至在活體内有助於專一目標鎖定之微粒子。代表之目標鎖定粒分子包含有抗體、植物凝集素或其它可為一在一特定形態之細胞表面上的受體所專一結合之分子。 EES攝取之抑制作q 該微粒子之攝取與去除，係可經由聚合物之選用以及本紙張尺度週用中關家標準（CNS)A4規格⑽χ 297公楚） -26- 訂線 ί /〇

五、發明說明（24) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 或該等可使黏附作用或攝取作用降至最低之分子的加入或偶合，而被降至最低。例如，微粒子之組織黏附作用，係可藉由共價地將聚（烷撐基二醇）部分結合至微粒子的表面而被降至最低。該表面聚（烷撐基二醇）部分對水具有兩親和力，而可降低蛋白質吸附至該粒表面子上的作用。因此，該網狀内皮系統（RES)之微粒子的認知與攝取會被降低。例如，該聚（烷撐基二醇）之端部羥基係使用於將生物活性分子或可影響粒子之電荷、親水性或親脂性之分子共價接合至該微粒子之表面上。在此技術中已知的方法皆可使用於接合一廣範圍的配合子至該微粒子上，以增強在活體内該微粒子之輸送特性、安定性或其它特性。塗斷應用 •線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製微粒子一般係與藥學上可接受的載劑，例如，經磷酸鹽緩衝之鹽水或者鹽水或甘露醇，相組合，而後使用於適合路徑，而將一供檢測用之有效量投藥至_病人，一般係藉由注射至血管内（i.v.)或口服。含有一囊封化顯像劑的微粒子係可使用於血管顯像與使用於肝臟、腎臟疾病上之應用、心臟病上的應用、腫瘤物質與組織之檢測與定出特徵，以及使用於測量周圍血液速度。微粒子可與該等可使組織黏附性降至最低之配合子相鏈接，或者，如前所述，與該等可在活體内將微粒子鎖定至身體之特定區域上之配合子相鍵接。上述的方法與組成物經參考下列非限制用之實施例而 i紙張尺度適用中關家標準（CNS)A4規格（21G x 297公楚 -—------ 480176 A7 B7 五、發明說明（25) 被可被進一步地了解。實施例1 :具有印鱗脂之八氟丙烧PEG-PLGA/PLGA微粒子的製備 · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --線· 3.2克之PEG-PLGA (75:25) (IV =0_75 dL/g Birmingham聚合物）、6.4g PLGA (50:50) (IV=0.4 dL/g Heney Chemicals), 23 mg 卵填脂（Spectrum Chemicals)與 193mg之棕橺酸（Spectrum Chemicals)係溶解於 190ml 二氣甲烷中。10.8ml之0.70 g/ml 乙酸銨係加入該聚合物溶液中，且該聚合物/乙酸銨係被加入聚合物溶液，並使用Virtis均質器將該聚合/乙酸銨溶液之混合物在10,000 RPM下均質1分鐘。該溶液係在流速為20 ml/min下幫浦之，並使用Bucchi Lab喷霧乾燥器將之喷霧乾燥。該進口之溫度為40°C。收集該微粒子粉末，並在FTS盤冷凍乾燥器下冷凍乾燥12〇小時。該微粒子係分樣至5 ml Purform小瓶，並以止動器來密封並將之阻塞。該小瓶在10 psig下係被填充以八氟丙院，並在該氣體下連續地π洗二次。在此點後，該小瓶係儲存於4 下，直至使用。該等粒子在具有數平均值為2_〇微米之c〇u丨ter計數器上分別其大小時，該粒子之直徑係落在彳_彳〇微米的範圍内。掃描式電子顯微鏡顯示一般被生成球形之粒子具有平滑的表面，但偶爾表面是呈細齒狀。 :具有二棕櫚醯基磷酸醯基膽鹼（Dppc)i八氟丙烷PEG-PLGA/PLGA微粒子的製備 ΐ紙張尺度適用中關家標準（CNS)A4規格（21G X 297公釐--------------_ 480176 A7 B7_ 五、發明說明（26) 以實施例1所述之方式來製備微粒子，除了使用29.6 mg之二棕橺醢基填酸醢基膽驗（Avanti，Bi「mingham A1)取代卵礙脂。 f施例3 ••具有二硬脂醯基磷酸醯基膽鹼（DSPC)之八氟丙烷PEG-PLGA/PLGA微粒子的製備以實施例1所述之方式來製備微粒子，除了使用 29.9mg之二硬脂醯基磷酸醯基膽鹼（Avanti，Birmingham A1) 取代卵磷脂。 f施例4 :具有二花生四烯醯基磷酸醯基膽鹼（DAPC)之八氟丙烷PEG-PLGA/PLGA微粒子的製備以實施例1所述之方式來製備微粒子，除了使用 29.9mg之二花生四烯醯基磷酸醯基膽鹼（Avanti，Bi「mingham A1)取代卵磷脂。 f施例5 :微粒子逆散射之活體外測量經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --線- 由實施例1-4所製得之不同之含有八氟丙烷之聚合性微粒子的逆散射，係可藉由將1 〇ml的微粒子懸浮液暴露至一經集中之超音波柱。該為深入樣品之深度函數的逆散射音波能量，係以下述方式來決定出。使用一脈衝式_接收器（Panametric®Mocdel 5800)電擊激起一超音波集中之傳感 ^§(2.25MHz)’該傳感裔可將一超音波脈衝送至在生理食鹽水中之微粒子懸浮液。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公楚) --- 480176 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（27) 該懸浮液被容納於一圓柱形之樣品室（55ml之食鹽水），該樣品室係位在被調整至37°C之溫度控制水浴内。該室是位在離傳感器1.5吋之位置，以使該傳感器聚集該室之音波視窗。該室以15rpm之速度來旋轉，以持維該等微粒粒子呈懸浮液狀態。食鹽中之溶解氣體的含量係可持維在約90%之空氣飽和狀態，此係以溶解計量器（〇ri〇n农 mode 1840)來測定的。該音波測試系統之操作係藉由％運行一由 LabVIEW® (National InstrumentPC® )所寫之適當程式來加以控制。該電腦會促使該脈衝接收器去電擎激化超音波傳感器。該逆散射信號係可利用相同的傳感器來接收，且該轉回之#號係措由衝接收裔早元而放大。經放大之信號傳至一在100MSa/s下數位化之數位化示波器（LeCroy® model 9310A)。該經數位化之信號再經加工。該信號係為乘平方並以FFT加以分析，並對該傳導器之6 dB寬帶進行積分。由該系統所收集之音波資料，在特定之單元上係以該微粒子懸浮液之深度函數而被轉變成積分逆散射功率（丨Bp)。平均出由50個脈衝所得之該IBP對深度的資料，由該平均丨Bp 決定出最適合的直線，並決定出正比於該逆散射係數之^ 切點。每一個樣品係在2.5分鐘之期間内測定，其整體之測試期係為10分鐘。該四種不同微粒子群對時間函數的逆散射情況，是顯示於第1圖中。卵磷脂係各種不同鏈長磷脂之混合物。隨接合至該填脂膽驗之脂肪酸鏈長度的增加，該逆散射強产本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -30- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 480176 A7 __B7 五、發明說明（28) 是可持維在一段較久的期間，此顯示在該微粒子内的八I 丙烷之安定性是被增加的。相較於含有卵磷脂之磷脂混合物，使用高度純化之磷脂在安定化氣體方面亦是有效地。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -31- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Claims

A8 B8 C8

480176 六、申請專利範圍第86102919號專利再審查案申請專利範圍修正本修正日期：88年12月 1 · 種用以製造供用於診斷顯像用之微粒子的方法，其中該等微粒子係由一生物上可相容之聚合物所形成，且其中併入有氣體，該方法之特徵在於， (a) 在开》成該等微粒子之前，藉由將該聚合物與一疏水性化合物溶解於一有機溶劑中，或令該聚合物熔化於該疏水性化合物中，而使該聚合物併入於該疏水性化合物内； (b) 藉由移除聚合物溶劑或冷卻該聚合物，而形成該等微粒子；其中在該微粒子中，該疏水性化合物係以一相較於不具有該疏水性化合物之微粒子的回聲作用更為有效於增進微粒子之回聲作用的用量，與該聚合物相混合；以及其中該疏水性化合物係選自於由脂肪酸、脂肪酸醇、脂肪酸酐、羥基脂肪酸、前列腺素、磷脂質、神經鞘脂質、類固醇與類固醇衍生物、脂溶性維生素、萜烯、色胺酸、酪胺酸、異白胺酸、白胺酸、纈胺酸、烷基對羥苯甲酸酯與苯甲酸所構成之群中。 2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該疏水性化合物係以一疏水性化合物對聚合物之重量比係在〇.〇1至30 之間的比例而被併入至該聚合物。 3· 如申請專利範圍第2項之方法，其中該疏水性化合物本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ---------.——9-------訂---------線· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -32- 480176 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製申請專利範圍係為一以脂質對聚合物之重量比係在0·01至30之間的比例而被併入至該聚合物的脂質。如申請專利範圍第丨項之方法，其中該疏水性化合物係選自於下列群中：磷脂酸、具有飽和與不飽和脂質之填脂醯基膽鹼、磷脂醯基乙醇胺、磷脂醯基甘油、填脂醯基絲胺酸、磷脂醯基肌醇、溶血填脂醯衍生物、心肌磷脂（cardiolipin)與石-醯基-烷基磷脂。如申請專利範圍第4項之方法，其中該填脂質係選自於下列群中· 一油酿基碟脂酿基膽驗、二肉豆蔻酿基磷脂醯基膽鹼、二-十五醯基磷脂醯基膽鹼、二月桂酿基鱗脂醯基膽鹼、二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼、二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼、二花生四烯醯基磷脂醯基膽鹼、二正二十二烷醯基磷脂醯基膽鹼、二-二十三醯基磷脂醯基膽鹼、二-二十四烷醯基磷脂醯基膽以及碟脂酸基乙醇胺。如申請專利範圍第丄項之方法，其中該氣體係為一自於下列群中之氣體：氟化氣體、氧氣、氙氣、氬氣氦氣及空氣。如申請專利範圍第夕士、l ,固乐0項之方法，其中該氣體係擇自下列群中：cf4、C2F<、r F Ο τ: ^2 6 l3f8、c4F8、c4f10、sf6、c2f 與 c3f6。；如申請專利範圍第8項之方法，其中該氣體係為八丙烧。如申請專利範圍第i項之古、1 &丄 %之方法，其中該微粒子係由 4. 5. 烧鹼 6. 8. 9· i紙張尺度適用中酬家標準（CNS)A4規格選於氟 --------------------^丨訂"--------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -33

Μ'申請專利範圍合成聚合物所形成。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如申咕專利範圍第1項之方法，其中該微粒子係由一天然聚合物所形成。 u.如申請專利範圍第1項之方法，其中該微粒子係由一生物黏附性聚合物所形成。 I2·如申請專利範圍第9項之方法，其中該微粒子係由一選自於下列之合成聚合物所形成：聚（羥基酸）、聚酸酐、聚原酸酯、聚醯胺、聚碳酸酯、聚烷烯、聚烷撐二醇、聚環氧烷基、聚烷撐基對酚酞酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯_、聚乙烯酯、聚乙烯鹵化物、聚乙烯吡咯酮、聚矽氧烷、聚（乙烯醇）、聚（乙酸乙烯酯）、聚苯乙烯、聚胺基甲酸酯及此等之共聚物、合成纖維素、聚丙烯酸、聚（丁酸）、聚（戊酸）及聚（丙交酯-共-己内 S曰）、乙撐基乙烯基乙酸酯，此等之共聚物與此等之換合物。 13· —種供用於診斷顯像之組成物，其包含併有一氣體之緩濟部智慧財產局員工消費合作杜印製生物上可相容的聚合性微粒子，該微粒子係由下列步驟所形成： (a) 在形成該4微粒子之前，將該聚合物與一疏水性化合物溶解於一有機溶劑中，或令該聚合物熔化於該疏水性化合物中； (b) 藉由移除該溶劑或冷卻該聚合物來形成該等微粒子；其中在該微粒子中，該疏水性化合物係以一相較於本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21Q x 297公爱)- -34- 8888 ABCD 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製六、申請專利範圍不具有該疏水性化合物之微粒子的回聲作用更為有效於增進微粒子之回聲作用的用量，與該聚合物相混合；以及其中該疏水性化合物係選自於由脂肪酸、脂肪酸醇、脂肪酸酐、羥基脂肪酸、前列腺素、填脂質、神經鞘脂質、類固醇與類固醇衍生物、脂溶性維生素、枯婦、色胺酸、絡胺酸、異白胺酸、白胺酸、顯胺酸、烷基對羥苯甲酸酯與苯甲酸所構成之群中。一 i4·如申請專利範圍第13項之組成物，其中該疏水性化合物係以一疏水性化合物對聚合物之重量比係在〇〇 j至 3 0之間的比例而與該聚合物相結合。 15·如申請專利範圍第13項之組成物，其中該疏水性化合物係為一以脂質對聚合物之重量比係在0·01至3〇之間的比例而被併入該聚合物的脂質。 16·如申請專利範圍第13項之組成物，其中該疏水性化合物係選自於下列群中：磷脂酸、具有飽和與不飽和脂質之磷脂醯基膽鹼、磷脂醯基乙醇胺、磷脂醯基甘油、磷脂醯基絲胺酸、磷脂醯基肌醇、溶血磷脂醯衍生物、心肌構脂（cardiolipin)與/5 -醯基-烷基填脂。 17·如申請專利範圍第16項之組成物，其中該磷脂質係選自於下列群中··二油醯基磷脂醯基膽鹼、二肉豆蔻醯基填脂醯基膽鹼、二-十五醯基填脂醯基膽鹼、二月桂醯基磷脂醯基膽鹼、二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼、二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼、二花生四烯醯基磷脂醯基贍本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - n ϋ ϋ an ϋ t§ 一 Mm -ϋ n n ·ϋ -線. -35 - 480176 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍鹼、二正二十二烷醯基磷脂醯基膽鹼、二_二十三烧醯基麟脂醯基膽驗、二-二十四烧醯基蹲脂醯基膽鹼以及磷脂醯基乙醇胺。 18·如申請專利範圍第13項之組成物’其中該氣體係為一選自於下列群中之氣體：氟化氣體、氧氣、氙氣、氬氣、氦氣及空氣。 19.如申請專利範圍第18項之組成物，其中該氣體係擇自於下列群中：CF4、C2F6、C3F8、C4F8、C4F1()、SF6、 C2F4與 C3F6。 20·如申請專利範圍第19項之組成物，其中該氣體係為八氟丙烧。 21·如申請專利範圍第13項之組成物，其中該微粒子係由一合成聚合物所形成。 22·如申請專利範圍第21項之組成物，其中該微粒子係由一選自於下列之合成聚合物所形成：聚（羥基酸）、聚酸酐、聚原酸酯、聚醯胺、聚碳酸酯、聚烷烯、聚烷撐二醇、聚環氧烷基、聚烷撐基對酚酞酸酯、聚乙烯醇、聚乙稀謎、聚乙稀S旨、聚乙婦南化物、聚乙婦 °比咯酮、聚矽氧烷、聚（乙烯醇）、聚（乙酸乙烯酯）、聚苯乙烯、聚胺基甲酸酯及此等之共聚物、合成纖維素、聚丙烯酸、聚（丁酸）、聚（戊酸）及聚（丙交酯-共-己内酯）、乙撐基乙烯基乙酸酯，此等之共聚物與此等之掺合物。 23·如申請專利範圍第15項之組成物，其中該脂質與該聚本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -------訂·--------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -36 - 480176 Α8Cl _ D8六、申請專利範圍合物一起被液化，以形成該微粒子。 24·如申明專利範圍第23項之組成物，其中該脂質與該聚合物被溶解於一供該二者用之溶劑内，而後再被形成一微粒子。 25·如申讀專利範圍第23項之組成物，其中該氣體係在該聚合物與該脂質固化後被併入至該微粒子内。 26.如申請專利範圍第13項之組成物，其中該聚合物係為一選自於由蛋白質與多醋所構成之群中的天然聚合物0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 27· —種用以增進微粒子之疏水性的方法，該等微粒子係由一生物上可相容之疏水性聚合物所構成，且併有一氣體顯像劑，該方法之特徵在於，在形成該4微粒子之前，將該聚合物與一疏水性化合物溶解於一有機溶劑中，或令該聚合物熔化於該疏水性化合物中；藉由移除該溶劑或冷卻該聚合物來形成該等微粒子；其中在該微粒子中，該疏水性化合物係以一相較於不具有該疏水性化合物之微粒子的回聲作用更為有效於增進微粒子之回聲作用的用量，與該聚合物相混合。如申吻專利犯圍第27項之方法’其中該疏水性化合物係選自於由脂肪酸、脂肪酸醇、脂肪酸肝、經基脂肪酸、前列腺素、磷脂質、神經鞘脂質、類固醇與類固

(210 X 297 公釐） ------------—訂· 線丨 -37- 480176 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍醇衍生物、脂溶性維生素、萜烯、色胺酸、酪胺酸、異白胺酸、白胺酸、纈胺酸、烷基對羥苯甲酸酯與苯曱酸所構成之群中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -38-