TW414710B - Pharmaceutical composition and kit comprising ATase inhibitor and temozolomide for use in treating human tumour cells - Google Patents

Pharmaceutical composition and kit comprising ATase inhibitor and temozolomide for use in treating human tumour cells Download PDF

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TW414710B
TW414710B TW083100235A TW83100235A TW414710B TW 414710 B TW414710 B TW 414710B TW 083100235 A TW083100235 A TW 083100235A TW 83100235 A TW83100235 A TW 83100235A TW 414710 B TW414710 B TW 414710B
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TW083100235A
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John Colin Baer
Azadeh Alison Freeman
Edward Stuart Newlands
Amanda Jean Watson
Joseph Anthony Rafferty
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Cancer Res Campaign Technolgy
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Ψ, Η3Ϊ 002 Λί4ίΙύ. ft % 中文銳明書修..正灯（8 9印8月）五.、發明说明（> )
經濟部中央標準局員工消費合作社印製 圖1足於人類肫棚细胞株（依A T a s e水平增加之次序） 中德荈唑羅胺（□)及CCNU(X)之胞毒性（ICso)對细胞 ATase 水平之作画：ZR-75-1 ，U87MG | (J373，LS174T， LOVO， MCF-7 及 HAWI。 圖2為在ΙΟβΜ BG存在（□ * Δ)或不存在（〇，▽) 下，德舆唑羅胺於pZipneoSV(X)l —經轉感的（〇 , □) 或phAT-經轉感之（▽，△) XP—衍生细胞株中之胞毒性 。誤差横線表示+ / — 1標準偏差。 圖3為在僅藥物下，IC5〇(-BG)，與和BG預培育下， IC5〇( + BG)之比較，為德莫唑羅胺於MAWI(X) ，MCF-7 ( ▽)或U373 (ii)人類腫瘤妞胞株重覆每天劑量之胞毒比 例。 圖4為增加德箅唑羅胺濃度對人頚腫瘤细胞株中ATase 水平之作用：LOVO ( □ ) ，MAWI (X) ，MCF-7 (▽)， U373 ( it )。 圖5為放射標幟在4 υ下為經14C 一德莫唑羅胺處理之 细胞所吸收。MAWI (□) ，ZR-75-ΙΟί)。 譁拥銳明 德冥唑羅胺是一種可用於治療人類癌症之抗腫瘤劑，其 毒性經由與激發劑之配合使用可被大大地加強•此激發劑 為酵素〇β-烷基鳥嘌呤DNA烷基轉移酶UTase )之抑制 劑。更特別地，使用ATase抑制劑，如〇β-苄基鳥嘌呤（ BG)，可加強德莫唑羅胺之毒性，如於MAWI細胞株中當於 本發明所設計之劑量療程中利用時可加強多達約300倍’ ----------- (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁)
L 訂 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4現格（210Χ297公釐） 414710 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明說明（1 ) 發明背吾 德萁唑羅胺（Temozolomide)，或8 —胺甲醸基一3 — 甲基咪唑並[5,1-d] -1,2,3,5 -四畊一4 -(3H)—酮（ CCRG 81045, NSC 362856)頃發現具有珍貴的抗腫溷特性 ，見 Newlands et al·， Br. J. Cancer, 65: 287(1992) 。於臨床上，德莫唑羅胺已顯示出拮抗星形细胞瘤、神經 膠質瘤、惡性黒色素瘤及葷樣真菌病之活性。藥物當依據 重覆劑董程序投予時最有用。 甲基化之0β—烷基鳥喋呤•如得自與MTIC (德莫唑羅性 活性甲基化種類）之反應•由蛋白質〇β-烷基鳥嘌呤DNA 烷基轉移酶UTase )修補。以甲基化劑先處理ATase — 表現细胞（如 Zlotogoski et al.， Carinogenesis, 5: 83, 19 8 4 ； Gibson et a 1 ., Cancer Res., 46 ： 4995, 1986) 0e-甲基鳥喋呤（如 Polan et al·, Biophys. Res. Conmun.， 132: 178, 1985 )或0e~ 苄基鳥嘌呤， 因此已顯示可增加氛乙基化劑之胞毒作用，其間於未表現 ATase之细胞中幾乎無或無致敏作用可觀察到。 鉍〇3<^61，〇〇1311及？08：8，於美國專利案5,〇91，43〇中提 及為加強氯乙基化劑之有效性，全然需要ATase活性瞬時 之減低》MPCT發表之申請案W0 91/13898為例，當Me CCNU與0β-苄基鳥嘌呤混合時，在SF767细胞中之EDb〇S 3.8倍之減低。因此Moschel et al.,顥示烷化劑當與烷 基轉移酶之耗盡劑合用時，其抗赘瘤活性有總體之加強作 用。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —3 — 本紙張尺度適用中B國家標準（CNS)甲4規格（21(^X297公釐)~ 414710 A6 B6 經濟部t央標準局員工消费合作社印製 五、發明説明（2 ) 本申請人之發明，就先前研究角度而言是十分驚人且不 顯著的，此中德箅唑羅胺之化學治療作用，利用納有 ATase抑制劑投予之特殊給藥設計，可被戲剌性地加強（ 於MAWI细胞株可高達300倍）。因此，迄今對德莫唑羅胺 療法不具感受性或僅緩和感受之人類细胞癌症，可因德莫 唑羅胺與A Tase抑制劑之合用而處理之。 因此，本發明之主要目的是提出可改善及擴大德莫唑羅 胺充作抗K瘤劑之治療有用性之姐成物及方法，即經由與 激發劑之混合治療，此劑為酵素0s-烷基鳥喋呤DNA烷基 轉移酶（ATase )之抑制劑。 本發明進一步的目的是提出利用這些姐成物及方法，使 德莫唑羅胺對人類癌细胞之毒性有最佳之激發作用之治療 計劃。 又一目的是提出德莫唑羅胺重覆給藥療程，其可由 ATase抑制劑之先行或同時投予而激發。· 本發明再一目的是提出於特殊的人類癌细胞中，決定德 莫唑羅胺毒性為ATaSie抑制劑相對激發之方法，偽探査為 該癌细胞產生之ATase含量。 · 發明要點 本發明是有關利用〇β-烷基鳥嘌呤DHA烷基轉移酶（ ATase )之抑制劑激發人類癌细胞中之德莫唑羅胺毒性。 再者，提出使有最佳療法之劑最療程，及鑑足被激發之 德莫唑羅胺所致敏之人類癌细胞之方法。 附瞌說明 <請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（MS)甲4规格（2ίοX 297公釐） Ψ, Η3Ϊ 002 Λί4ίΙύ. ft % 中文銳明書修..正灯（8 9印8月）五.、發明说明（> )
經濟部中央標準局員工消費合作社印製 圖1足於人類肫棚细胞株（依A T a s e水平增加之次序） 中德荈唑羅胺（□)及CCNU(X)之胞毒性（ICso)對细胞 ATase 水平之作画：ZR-75-1 ，U87MG | (J373，LS174T， LOVO， MCF-7 及 HAWI。 圖2為在ΙΟβΜ BG存在（□ * Δ)或不存在（〇，▽) 下，德舆唑羅胺於pZipneoSV(X)l —經轉感的（〇 , □) 或phAT-經轉感之（▽，△) XP—衍生细胞株中之胞毒性 。誤差横線表示+ / — 1標準偏差。 圖3為在僅藥物下，IC5〇(-BG)，與和BG預培育下， IC5〇( + BG)之比較，為德莫唑羅胺於MAWI(X) ，MCF-7 ( ▽)或U373 (ii)人類腫瘤妞胞株重覆每天劑量之胞毒比 例。 圖4為增加德箅唑羅胺濃度對人頚腫瘤细胞株中ATase 水平之作用：LOVO ( □ ) ，MAWI (X) ，MCF-7 (▽)， U373 ( it )。 圖5為放射標幟在4 υ下為經14C 一德莫唑羅胺處理之 细胞所吸收。MAWI (□) ，ZR-75-ΙΟί)。 譁拥銳明 德冥唑羅胺是一種可用於治療人類癌症之抗腫瘤劑，其 毒性經由與激發劑之配合使用可被大大地加強•此激發劑 為酵素〇β-烷基鳥嘌呤DNA烷基轉移酶UTase )之抑制 劑。更特別地，使用ATase抑制劑，如〇β-苄基鳥嘌呤（ BG)，可加強德莫唑羅胺之毒性，如於MAWI細胞株中當於 本發明所設計之劑量療程中利用時可加強多達約300倍’ ----------- (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁)
L 訂 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4現格（210Χ297公釐） 414710 A6 B6 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（4) 且對迄今不感受此種療法或僅些微感受之人類癌症•在其 化學療法中將可使用德莫唑羅胺。 Μ許多人類腫溷细胞株可顯示出對德莫唑羅胺及婁米司 汀（lomustine ) ( CCHU)(於藥物曝露猹1小時）之類 似毒性，並與其ATase含量互有關係。DNA中鳥嘌呤〇β_ .·· · 色fi魯—德莫唑羅.胺所甲棊化，因此造成胞毒性傷害。藉著 篩選人類癌细胞中其相對的ATase產量，可決定出對德莫 唑羅胺之敏感性。可產生大量ATase之细胞因此對單獨時 之德莫唑羅胺之敏感性不如產生少虽ATase水平者。 K單一劑虽之BG先處理细胞，可造成德箅唑羅胺毒性適 度（<4倍）之增加。加強之程度於德莫唑羅胺及婁米司 汀（CCNU)是相似的幅度層次。於集落分析中，MBG預處 理之經人類ATase cDNA -轉感之娥維母细胞，對德莫唑羅 胺之抗性保持較對照組之經轉感孅維母细胞更甚，雖然 ATase蛋白質已消去。此未必可歸於德萁唑羅胺蓮送上之 差異，且可單純地反映ATase經由phAT纖維母细胞之再合 成，K滅少與抑制劑預處理之作用。 然而|更另人驚訝地，BG對德莫唑羅胺毒性之主要激'發 作用（多達約300倍）頃發現是茌MAVI細胞株經5天處理 之後。於HCF-7细胞中可見相似的加強程度，其也含有高 水平的ATase ，但在低水平之U373细胞中則僅是小作用。 於MAWI及MCF-7细胞株之試驗结果中暗示，ATase抑制劑 連鑛的存在可造成DNA傷害之逐漸增加。 本發明因此提出激發人類癌细胞中德莫唑羅胺毒性之方 一 6 — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) T 4規格（210 X 297公釐） 【請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) .裝 -訂 .線 414710 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A6 B6___ 五、發明説明（5 ) 法，係投予ATase抑制劑量之ATase抑制劑，以及一種含 有德莫.哩羅胺及ATase抑制之產物，充作可同時，分別或 相繼投予於人類癌细胞此治療中之綜合製劑。 較好* ATase抑制劑投予可在許多天或更多天期間内重 覆，且在投予德莫唑羅胺劑量之前。可於1 、2 、3 、4 或5天時投予重覆劑量· K4或5天為較佳之治療期。 再者，且更好地，德莫唑羅胺在數天期間中Μ重覆劑量 投予至病人，並在德莫唑羅胺各劑量前投予ATase抑制劑 之ATase抑制劑，造成德箅唑羅胺對人類癌细胞之毒性顯 著增加*如於MAWI细胞株為約300倍之增加。 於一個較佳之具體實例中，ATase抑制劑M ATase抑制 劑量投予，即足以在活體内致敏腫瘤之劑量，而不致造成 正常組纈不當之致敏作用·此偽當ATase抑制劑與德萁唑 羅胺同時使用而言。 於本發明中ATase抑制劑之用量，可依治療腫瘤细胞所 需之有效劑量程度而變化。適合的劑量為其在欲治療之腫 瘤細胞中所造成的ATase抑制劑濃度可造成化學治療前 ATase活性之耗盡，如約1 - 2000毫克/公斤，且較好/是 約10 - 300毫克/公斤。 德莫唑羅胺特別適合治療之赘瘤包括癌症、黑色素瘤、 肉瘤、淋巴瘤及白血病，可特別應用於星肜细胞瘤、神經 膠質瘤、惡性黑色素瘤、及鼙樣真菌病、尤因肉瘤（ Ewing、Sarcoma )、慢性淋巴细胞性白血病、及肺及乳 癌。在加有ATase抑制劑下德萁唑羅胺活性特別刺烈的加 ί請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝 :訂 ’線· 一 7 — 本紙張尺度適用中圈國家標準（CNS)〒4規格（210 X 297公釐厂 經濟部t央標準局員工消費合作社印製 414710 A6 B6_ 五、發明説明（6 ) · 強可見於乳房、星狀细胞瘤及結腸直臈腫瘤细胞中。 德莫唑羅胺典型的劑量範圍通常在0.1及200 ，較好是 1及20間之毫克/公斤體重/每天，或以體表面橫表示時 為約40 - 400 ，且較好是約150 — 300毫克/泶2 /每天 〇 為ATase抑制劑所激發之量依通常存在於特铢癌细胞型 式中ATase之量而定。具有較高ATase水平之癌细胞，經 由ATase抑制劑之預先投予可更被劇烈地激發。 可被利用於本發明中之ATase抑制劑，為已知具有此活 性者，如0e —烷基鳥嘌呤如〇β_甲基鳥喋呤、烯基鳥嗦呤 如〇3 -烯丙基鳥嘌呤，及〇β_芳基鳥嘌呤如〇β_苄基鳥嘌 呤，及0β —芾基化之鳥嘌呤、鳥苷及2'—去氧鳥苷化合物 ，述於PCT國際案W0 91/13898 (於1991年9月19日發表 )。特別通用於本發明的為0β—苄基鳥嘌呤。 ATase抑制劑之特殊劑量，依正常見於受治療之癌细胞 中ATase含董而定，K及病人的年龄及狀況，及所利用之 特殊ATase抑制劑。 頃發規德萁唑羅胺Μ重覆劑虽在相繼日子中投予最佳， 且本發明戲剌性之激發作用經瞭解是在高度較佳之療程中 ，此中涉及在德莫唑羅胺投予之各劑量之劑或同時，投予 ATase抑制劑量之ATase抑制劑。較好是利用〇« —苄基鳥 喋呤為ATase抑制劑，配合德箕唑羅胺以150 - 300毫克 /米2之每天速率投藥，M4或5次分次劑量歷4或5相 繼天數中（總劑量750 — 1500毫克/米2 )較好，ATase —8 — i紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210X297公釐） 裝......................訂.....................線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 414710 A6 B6 經濟部中央標準局員工消伊合作社印製 五、發明説明（/ ) 抑制劑之各劑量在德莫唑羅胺各劑董之前2 _8小時時投 予。此可提供德莫唑羅胺毒性有較大的激發作用，且造成 對病人特殊之贅瘤有較有效之治療。更好，此療程在約4 週間隔後可重覆。 投予德莫唑羅胺及〇β—苄基鳥嘌呤的另一劑董程序是一 種連績的程序，其中二種藥物在每天基礎下投予，歷4天 Κ上。此連續療法可依所需在連鑛基礎上擴大•直到達到 舒猨為It夂 附加地，可利用特殊人類癌细胞中之ATase之產量•做 為決定德莫唑羅胺對該細胞毒性之激發之筛選方法。於一 個較佳方法中，分析恃性細胞株中ATase含Μ ·如利用由 Lee et al·, Cancer* Res., 51: 619 (1991)所述之方法 ，並決定出對德莫唑羅胺所激發之敏感性。此一決定.之後 可使治療程序中，欲投予之德莫唑羅胺及ATase抑制作用 有適合之姐合。 於自本發明所述之化合物中製備藥學組成物方面，惰性 、藥學上可接受之載劑可為固體或液體。固體型式之製劑 包括散劑、錠劑、可分散之顆粒劑、膠囊劑、發泡性親粒 及栓劑。散劑及錠劑可含有由約5至約7 0%之活性姐份6 適合的固體載劑為技藝中已知的*如碳酸鎂、硬脂酸鎂、 滑石、糖、乳糖。錠劑、散劑、發泡性顆粒及膠囊劑可充 作適合口服之固體劑型。 於製備栓劑時，先熔化·低熔點之蠟，·如脂肪酸甘油酯或 可可油脂之混合物，且活性姐份再Μ攪拌方式均勻分散其 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -9 - 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210父297公釐） 414710 A6 B6 經濟部中夬標準局貝工消费合作社印84 五、發明説明（8) 中。熔化之均勻混合物再倒人合宜大小之模型中·令其冷 卻且因此固化。 液體型式之製劑包括溶液劑，懸液劑及乳劑。至於可提 及之實例有可供腸外注射之水或水一丙二醇溶液。 本發明化合物也可穿皮地遞送。穿皮姐成物可呈乳齎、 洗劑、氣蓀劑及/或乳劑型式，且可包括在基質或貯存槽 型式之穿皮貼布上*就此目的而言此為技藉中傳統的。 較好|藥學製劑係圼單位劑量型式。於此型式中，製劑 细分成含有適當活性姐份含量之單位劑量，如達到欲求目 的之有效劑量。 於製劑單位劑量中活性化合物之含虽可變化或由約0.1 毫克至1000毫克調整，更好是約1毫克至500毫克•此依 特殊應用而定。 所應用之確實劑量可依病人之需要及接受治療之疾病嚴 重度而定。決定特殊狀況下之適當劑墨是在技藝之技術内 的。為方使起見，可將每天劑垦之總量分割，並於必要時 於一天中分部份投予。 德莫哩羅胺可利用合宜的技術來投予，如於Wassermdn et al., Cancer 36 : 1258— 1268 ( 1975)中所述。於適 當時，Μ 40 - 40 0毫克/米2 /天之速率口服I且較好是 150 - 300毫克/张2 /天，Μ 1 — 5份且較好是4 — 5 劑量，歷1 — 5且較好是4 — 5相繼天數為最佳。以25 — 25 0毫克/米2之每夫劑量靜脈内投藥、對連續的給藥治 療療程是較佳的。於重覆給藥療程中可利用口服投藥。 {請先閲讀背面之注意事项再填寫本頁) .裝 .訂- -線〕 -10- _本紙張尺度逋用中國國^i^t(CNS)f 4蜆&210x297公釐) A6 B6 經濟部中央標準局員工消#合作社印製 五、發明説明（ ） ATese抑制劑可在德莫唑羅胺之前，或同時分別投藥。 當欲如此作時，ATase抑制劑及德莫唑羅胺可混合成一髑 單位劑型K助於病人投藥。此一姐合之劑型可呈上述任一 劑型*但如上文所註明的較好是圼口腋或靜脈內型式。 德莫唑羅胺及ATase抑制劑可包裝成套姐型式。於此種 套姐中，德莫唑羅胺及ATase抑制劑可分別調和成供特殊 投藥路徑之特殊劑型，且含有投藥指示說明。於口服之典 型實例中此一套組可呈發泡藥型式，與德莫唑羅胺及 ATase抑制劑分別調和之口服劑型一起包裝。 任何劑虽上必要的調整均可·Μ符合個別病人化學治療 所必需，且由精藝人士調整之。 本發明在此揭示的以下列製備實例示範之*其不欲因此 限制掲示之範圍。 審俐1 材料及方法 材料 姐織培養基購自 IC N B i 0 m e d i c a 1 s L t d · ( H i g h Wycombe, UK )且胚牛血清購自 Gibco Ltd. (Paisley, UK) —苄基鳥嘌呤（BG)由 Dr. R.C, Moschel ( MCI-Frederick Cancer Research & Development C e n t e r，F r e d e r i c k , M a r· y 1 a n d U S A )慷慨提供。德莫峨 羅胺及其氯乙基同糸物一麥多唑羅胺（nitozolomide)( 8 -胺甲醯基- (2 —氯乙基）咪唑並[5,1-d] — 1,2,3,5 -四畊一 4 -(3H) -酮）由 May 及 Baker 公司（ —11 一 本紙張尺^逋用中1Ϊ家標準（CNS) T4規格（210x297公愛] (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
414710 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A6 B6 10 五、發明説明（ ） Dagenham, UK)合成，且圼於DMS0之溶液型式貯於-70 C 下。所有其他的化學蔡品則購自Signa Chemical Co. Ltd. (Poole, UK) 〇 ·. 胞盡件Sff弈 细胞株例常地生長成單層*於DMEM中並添加有10%胚牛 血清、25 mM HEPES ，穀胺醸胺及青徽素/鏈衡素。胞i 性研究於無HEPES之培養基上，於5% C0Z大氣下進行。每 孔洞750二1000龃胞塗佈於96孔洞之培養盤上，經一夜培 育後* K 33 « M BG或無BG處理2小時。德莫唑羅胺或 CCNU再於相同培養基中加人1小時，DMS0之終濃度不可超 過1 %。细胞於新鲜培養基中再生長7天，並以NCI硫若 丹明分析（sulphorhodamine. assay )分析蛋白質含量.， 此分析法係由 Skehan et al.,述於 J. Hatl. Cancer Inst. , 82 : 1 107 ( 1990);生長研究顯示在分析期間， 细胞係呈對數期生長。於重覆的德莫唑羅胺給藥程序中* 細胞進行相繼24小時之處理，每天均採用斩鮮的培養基。 分析至少進行二次。 人類ATase cDNA_轉感的或對照組XP妞胞[Fanet_ al·，Nucleic Acid. Res., 18 : 5723 ( 1990)〕生長於 MEM ，並在毎孔洞塗佈1000個细胞。經3小時培育後，新 鮮稀釋至MEM之德莫唑羅胺加入，並將盤培育5天。分析 存活率，如 Mor ten et a 1 於 Car c i nogenes i s , 13 : 483 ( 1992)中所述。於BG黉驗中，300個细胞三重塗佈至9公 分韹中並令其粘附5小時。在K德莫唑羅胺處理前3小時 一請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝 訂. .線) -12- 本紙張尺度適用干國ΐΐ ΐί票準(CNS)甲4规备(21〇X 297公釐丨 二 經濟部中夬標準局員工消费合作社印製 414710 A6 __^_B6___ 五、發明説明（11 ) 加入BG (10wM / MEM )，此藥係新鮮稀釋含有10wM BG之MEM中。7天後，集落以G iema染色並計數之。 CLL—烷基鳥嗯昤DHA烷某鐘趑瞄分析 此分析法如.Lee et al·, Cancer Res.. 51: 619 ( 1991)所述般進行。因此，不同量之细胞萃取物與DNA共 培育，後者含有0β —甲基鳥嗶呤並在甲基上標以[3H]，培 育在37 Ό下較好並歷2小時，於300微升的1毫克/毫升 牛血清白f白於緩衝溶液1之缌體積中。培育後，以快速 相繼方式加入牛血清白蛋白（100微升的10毫克/毫升溶 液於緩衝溶液1中）及髙氛酸（100微升的4M溶液）。之 後再加2奄升的1Η高氮酸，且混合物在75T下加熱40分， 以將DNA降解成酸可溶性物質。含有甲基化ATase之蛋白 質再Μ離心收集，以4毫升的1M高氯酸洗滌，再懋浮於 300微升的0.01Μ氫氧化鈉中並溶於3毫升閃爍計數液體 中（Ecoscint A: National Diagnostics)，並計數之。 细胞之蛋白質含量M Bioliad蛋臼質分析套姐，利用牛血清 白蛋白為標準品決定之。ATase活性Μ萃取物中每毫克總 蛋白質有毫微微莫耳甲基轉移至蛋白質表示之。 细朐阴_餺德記之徳碧_摒昉 8 —胺甲醯基—3 _[14C]甲基眯唑並[5,1-(1]-1,2,3,5 ~四哄-4 -(3H)-酮（比活性為26.3毫居里/ 毫萁耳）由 D r · J 〇 h n S 1 a c k ( A s t ο η Μ ο 1 e w 1 e s L t d， Birmingham, UK)慷慨提供。妞胞懸液（5 x 10e /毫升 )在4 t：下平衡1並M200//M的經標記蕖物處理。1〇β细 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210x297公楚Ί (請先閱讀背面之注意事項再蜞寫本頁) -裝
I Α6 Β6 五、發明説明（ ） 胞吸取至eppertdoff管中’再經250微升之油混合物雛心 (4:1 •Three-irt-One" / Dow Corning 砂嗣油）。水曆 吸出，油層Μ再300微升之食盥水媛和地洗滌。再離心後 ，二曆均吸出，细胞團塊溶於組織增溶劑中’如 Protosol® (氫氧化铵於甲笨中·），並加至含有 Opt iphase® (95—99%二異丙基萘）：之液體閃爍計數小 瓶中。 朐表忡研究之结果 數據示於下表I中。 m_L 甲一劑虽胞畜性 (請先閲讀背面之注意事項再填'寫本頁) 装 细胞株
CCNU 德莫唑羅胺 ATase (fmol/奄克 蛋白質）！ .訂 IC50 [-BG] (μΜ) ICJ0 th3J [+BG] (μΜ) IC50 IC50 比率1 [-BG] [+BG] 〇χΜ) (μ Μ) k*·*! 丨乳房癌， ZR-75-1 MCF-7 32 325 23 171 1.4 1.9 12 70 25 31 0.52.2 <10 581.3 .星形细胞瘤 U87MG U373 172 131 131 1.3 78 1.7 28 15 8.8 12 3.2 1.2 21.9 53.2 經 濟 部 中 標 準 工 消 费 合 作 社 印 寧臈直腸瘤 LS174T 873 632 1.4 LOVO 848 323 2.6 MAWI 1173 335 3.5 ΧΡ株. pZip phAT 232 1002 - (0.8 尸-一（4·2)2·3 - —ί-4^ 3 2 3 V 9 1 133230 ·7·9·4 5·2·4 1.99.6 529.0 992.3 <2 1240 本紙張尺度適用中國國·家標翠甲4規格ί 210Χ 297公愛丨 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 414710 A6 ' …_B6_ . 五、發明説明（13 ) 细胞在曝於德萁唑羅胺或CCNU單劑量前，曝於+ / — 〇β — 苄基鳥嘌呤（BG)之姐纈培養中。 1 ICb〇[-BG]/IC5〇 [ + BG] 2· 结果由MTT分析得到，利用Vasserman et al., Int. J.Radiat. Oncol. Biol, Phys., 15： 699 ( 1988) ° a 括號內之数學係指德萁唑羅胺。 表I ：έ：數據，Μ圖示方式圼琨於圖1中，顯示在腫瘤细 胞株對德莫唑羅胺（r =關連係數= 0.87)或CCKU(r = 關連係數= 0.92)之敏感性（K生萇50%所需之濃度或. ICso來測定）及其ATase含董間有合理之關連性。斜率幾 乎平行，除了 CCNU在莫耳濃度基礎上毒性約有5倍強。一 個例外是MCP-7细胞株•其中德莫唑羅胺為中度之敏感性 ，而有相當高的ATase活性。细胞株M BG非毒性劑量預處 理，則對德莫唑羅胺及CCHU之敏感性增加高達分別的3.5 倍Μ上及6倍Κ上。 對照姐的ΧΡ细胞（色素斑乾皮病细胞以pZipneSV (X) 1) (Fan e.t al., Nucleic Acids Res., 18: 5723，1990) 可表現勉強可測及之ATase水平，較人類ATase cDNA—轉 感细胞對德莫唑羅胺或CCH 相關作用物麥多唑羅胺之敏 感性高4 - 5倍（見表I )。對於德奠唑羅胺胞毒性之集 落形成分析中（見圖2 ) ，BG預處理^對於人類ATase -經 轉感之XP细胞與對腫瘤细胞有相似的激發程度，但在對照 姐之XP细胞則無可偵測之作用，後者將不會表規ATase者 — 15 —
本紙張尺度適用中國闼家標準'(CNS)甲4规格（210X297公釐J (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
經濟部中央標準局員工消費合作社印製 414710 A6 B6____ 14 、發明説明（-) 。雖然BG可耗盡前者細胞之ATase活性（見下文）·其較 對照姐之pZ ip經轉感之纖維母细胞，對德莫唑羅胺保持更 強的抗性。 重覆的給藥程序數據示於下表II中。
宪 T T 甫孭的給予镰箄邮羅防夕朐輋桦丨 细胞株 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 -BG +BG -· -BG +BG -BG +BG ~ B G + B G -BG +BG U 3 7 3 5 1 1 8 MAW T 319 1 9 R R9 383 21 Ί 326 1.0 MTF-7 1 9 Rit .*Ϊ1 9 SI 7 R 11 细胞在Κ德莫唑羅胺重覆每天給藥前，曝於+ /— 0s-苄 基鳥嘌呤（BG)之姐織培養中。 重覆的每天給藥程序顯示在ΜΑΙίΙ及MCF-7细胞中，德莫 哩羅胺毒性可被BG剌烈地激發（也見圖3 )。 K 5個24小時劑量處理後，MAWI细胞株於BG存在時對德 莫唑羅胺之敏感性可增加300倍以上。多重劑量的德莫唑 羅胺本身在任一细胞株中不會比單一 24小時劑董堪具毒性 。於在U37 3细胞上之相似實驗中，此细胞有低的ATase水 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
經濟部t央標準局員工消費合作社印製 4t4HW A6 _B6_ 15 五、發明説明（ ） 平，經4個24小時劑量後| BG之存在僅造成3倍之激發。 烷某觸柊豳永軍 在有高ATase含虽之MAWI细胞及人類ATase cDNA經轉感 之XP纖維母细胞中，BG之使用濃度可快速減低至無法測及 之水平。HPLC分析顯示，在37T：之姐織培養中BG可穩定至 少24小時。 頃發現經過3小時培菏後，德莫唑羅胺可造成[1373、 MCF-7 、LOVO及MAWI细胞株ATase含量之減少。對各细胞 株在50-lOOwM下可有5 0%減低（見圖4)，估不論軍一 劑虽之德莫唑羅肢胞毒性在MCF-7及结腸直腸细胞株（. L0V0及MAWI)間有3 — 4倍之差異。在更敏感的ϋ373细胞 株中可見_似的減少，雖然ATase水平接近分析之偵測限 度。 為減少茌德莫唑羅胺蓮送上可能之差異，Μ最敏感及抗 性之细胞株（分別是ZR-75-1及MAWI)進行細胞吸收 [14C]—經標記化合物之研究。示於圖5之结果顧示，在 4 °C下吸收極快速，在5分鐘内二種细胞株均可完全。當 針對蛋白質濃度調整時，可在二種细胞株中發琨相似的藥 童。在4 Γ下之快速吸收符合先前由Bull et a〖.， Biochem· Pharmacol., 36: 3215， （ 1987)在二種淋巴 樣细胞株中所報告之德舆唑羅胺被動擴敗作用。 (諝先閡讀背面之注意事項再填窝本頁} .裝 訂 -線· — 17 —
本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210X297公釐J 五、發明説明（ 16 414710 A6 B6 甯例2 π 服 調 和 物 毎俩膠覇_夕 德 莫 唑 羅 胺 100 乳 糖 » USP 213 微 晶 體 纖 維 素 30 硫 酸 十 二 酯 納 20 玉 米 殺 粉 25 硬 脂 酸 m 2 混合德莫唑羅胺、乳糖、微晶體纖維素、硫酸十二酯納 及玉米澱粉。通過80號篩。加入硬脂酸鎂，混合，再包膠 至適當大小之二片式明膠膠囊中。 富例3 □腋錮赶！物 链瞭雜割之蛋京齡 οβ -苄基鳥嘌呤 100 乳糖，USP 213 微晶體纖維素 30 硫酸十二酯鈉 20 玉米澱粉 25 硬脂酸鎂 2 裝......................訂·...............…：線； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本页) 經濟部中央標準局員Η消費合作社印製 混合οβ—苄基鳥嘌呤、乳糖、微晶體缴維素、硫酸十二 酯納及玉米毅粉。通過δ〇號篩。加入硬脂酸鎂，混合再包 膠至適當大小之二片式明膠膠囊中。 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公釐） 五、發明説明（ 17 414710 A6 B6 )' 窗例4 链膠齑酺之毫京撖 德箅唑羅胺 100 00 —苄基鳥嘌呤 100 乳糖，USP 213 微晶體纖維素 30 硫酸十二酯納 20 玉米澱粉' 25 硬脂酸鎂 2. 混合德莫唑羅胺及0β—苄基鳥嘌呤、乳糖 素、硫酸十二酯納及玉米澱粉。通過80號篩。加入硬脂酸 鎂，混合再包膠至適當大小之二片式明膠膠囊中。 當例5 靜膝肉調和物 裹克/毫井 德莫唑羅胺 100 亞硫酸氫鈉，USP 3.2 乙底酸二鈉》USP 0.1 注射用水，適量加至 1.0毫升 微晶體纖維 <請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 ’線'
I 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 靜哌内調和物 德莫唑羅胺 οβ—苄基鳥嘌呤 柰克/裹并 100 100 19 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210X297公釐） 五、發明説明（ 4147 A6 B6 18 亞硫酸氬納，USP 乙底酸二納* USP 注射用水，適量加至 3.2 0 . 1 1.0毫升 本發明可K其他型式示範或K其他方式進行，只要不偏 離其精神或基本特性。因此本揭示要考瓛在所有方面偽供 說明而非限制，發明範圍由所附之申請專利範圍來表示、 且在定義内的所有變化及同等物之範圃，均意欲涵蓋於其 中。 .............................................................Γ ……裝......................訂...................綍 (諳先閎讀背面之注意事項再填窝本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 20 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公變）

Claims (3)

  1. 了「曰.瘡 ΊίΤ! 414710 第83100235號申請案 中文補充說明書（89年8 ρ 捕充膏驗 方法： Raji及Α375Μ細胞奇I，3—雙(2_氣乙基a症確脲(BC_德莫座羅胺 (temozolomide)之致敏性 Raji細胞對BCNU及德莫唑羅胺之細胞毒性效果之致敏性係以不活化劑 預處理2小時，使用XTT分析法分析。簡要地，細胞及1〇〇〇細胞/孔塗佈於 96孔平盤，並在添加含適當濃度不活化劑或等體積媒劑之培養基前，在37 °C下培養30分鐘。在37eC下接著2小時培養後，添加含增加劑量之BCNU 德莫唑羅胺或相等媒劑之培養基，並允許細胞生長6小時。在此時間，添 加XTT/·谷液及在37 C另培養細胞4小時。藉微量定量盤讀取儀測定在 45 Omn之吸收值以足置所得紅/橘色弗馬刃(fonnazan)反應產物。 A375M細胞對BCNU之細胞毒性效果之致敏性係藉不同於；^〇^分析法之 MTT分析法(如下所述)分析》允許A375M細胞(每孔1〇〇〇個)生長24小時， 接著以不活化劑處理且2小時後以BCNU處理。6天後，添加MTT溶液(4毫 克/毫升)並在37°C下培養細胞3小時。抽吸培養基且所得紫色f0rmazan結晶 溶解於DMSO(120微升)並藉使用微量定量盤讀取器測定在54〇1皿之吸收值 以定量細胞存活率。 由細胞相對於控制组之生長百分比之數據可測定在存在或缺乏不活化劑 時’ BCNU或德莫唑羅胺劑量之範圍^ Raji對BCNU(D9c · C/D9Q . I)之致敏 性之測定係藉單獨使用BCNU之數據(Dw . C) (即相對未處理控制組有 90 %生長之劑量；即1〇 %生長抑制)除以使用BCNU加不活化劑(〇9() . ρ。 U:\TYPBCCY\B\SYC-1 補充說明.<j〇c 1 了「曰.瘡 ΊίΤ! 414710 第83100235號申請案 中文補充說明書（89年8 ρ 捕充膏驗 方法： Raji及Α375Μ細胞奇I，3—雙(2_氣乙基a症確脲(BC_德莫座羅胺 (temozolomide)之致敏性 Raji細胞對BCNU及德莫唑羅胺之細胞毒性效果之致敏性係以不活化劑 預處理2小時，使用XTT分析法分析。簡要地，細胞及1〇〇〇細胞/孔塗佈於 96孔平盤，並在添加含適當濃度不活化劑或等體積媒劑之培養基前，在37 °C下培養30分鐘。在37eC下接著2小時培養後，添加含增加劑量之BCNU 德莫唑羅胺或相等媒劑之培養基，並允許細胞生長6小時。在此時間，添 加XTT/·谷液及在37 C另培養細胞4小時。藉微量定量盤讀取儀測定在 45 Omn之吸收值以足置所得紅/橘色弗馬刃(fonnazan)反應產物。 A375M細胞對BCNU之細胞毒性效果之致敏性係藉不同於；^〇^分析法之 MTT分析法(如下所述)分析》允許A375M細胞(每孔1〇〇〇個)生長24小時， 接著以不活化劑處理且2小時後以BCNU處理。6天後，添加MTT溶液(4毫 克/毫升)並在37°C下培養細胞3小時。抽吸培養基且所得紫色f0rmazan結晶 溶解於DMSO(120微升)並藉使用微量定量盤讀取器測定在54〇1皿之吸收值 以定量細胞存活率。 由細胞相對於控制组之生長百分比之數據可測定在存在或缺乏不活化劑 時’ BCNU或德莫唑羅胺劑量之範圍^ Raji對BCNU(D9c · C/D9Q . I)之致敏 性之測定係藉單獨使用BCNU之數據(Dw . C) (即相對未處理控制組有 90 %生長之劑量；即1〇 %生長抑制)除以使用BCNU加不活化劑(〇9() . ρ。 U:\TYPBCCY\B\SYC-1 補充說明.<j〇c 1 414710 • » λ 丄 ί— ! 年3曰， i 的 U觸充丨 一值指出不活化劑不引起致敏性。 Raji對德莫唑羅胺之敏感性及awsm.bqsju之致敏性係使用對應^值 (即抑制50 %生長之劑量）。 哺乳動物細胞對不活化劑或其水解產物之致敏性 為sf·估細胞生長之效果’尤⑽也圆細胞及中國倉藏V79 細胞在37°C下暴露於增加濃度(直到600# M)之經選擇的不活化劑中2小 時。在一些情況中，使不活化劑在37〇C下水解2〇小時並接著添加至Raj% 胞以評估試劑分解產物可抑制細胞生長之範圍。6天後，如上所述測定細 胞生長之範圍。 骨髓細胞對德莫唑羅胺之致敏性(CM-CFC分析） 針對粒細胞/巨噬細胞群落形成細胞(GM_CFC)分析，初級人類骨髓細胞 樣品係得自進行心臟胸廓手術之病患。接著自樣品去除紅血球，細胞由被 塗佈(1-2X105毫升)在含有ι〇#Μ不活化劑或等體積DMSO，20 %胎牛血 清’ 10 % 56；37經調理培養基作為生長因子來源及0.3 %高級瓊脂醣之3〇〇 mOsM Iscoves培養基，在含適當劑量德莫唑羅胺之1毫升培養m，並在37 eC ’於5 % (：02為95 %空氣之大氣中培養。9天後，包括多於50個細胞之 群落被計數。群落代表粒細胞/巨噬細胞類(huGM-CFC)之先質細胞。存活 率以在0劑量德莫唑羅胺之群落數目百分比。 異種移殖研究 動物 - 稱重25-3 5克間之BACB-C衍生之無胸腺公小鼠(nu/nu無胸腺）係得 Paterson Institute for Cancer Research, Christie Hospital NHS Trust, Wilmslow Road，Manchester M20 9BX，England之室内飼育群(ASU小鼠）。動物係屬 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補充說明.doc 1 -2- 414710 • » λ 丄 ί— ! 年3曰， i 的 U觸充丨 一值指出不活化劑不引起致敏性。 Raji對德莫唑羅胺之敏感性及awsm.bqsju之致敏性係使用對應^值 (即抑制50 %生長之劑量）。 哺乳動物細胞對不活化劑或其水解產物之致敏性 為sf·估細胞生長之效果’尤⑽也圆細胞及中國倉藏V79 細胞在37°C下暴露於增加濃度(直到600# M)之經選擇的不活化劑中2小 時。在一些情況中，使不活化劑在37〇C下水解2〇小時並接著添加至Raj% 胞以評估試劑分解產物可抑制細胞生長之範圍。6天後，如上所述測定細 胞生長之範圍。 骨髓細胞對德莫唑羅胺之致敏性(CM-CFC分析） 針對粒細胞/巨噬細胞群落形成細胞(GM_CFC)分析，初級人類骨髓細胞 樣品係得自進行心臟胸廓手術之病患。接著自樣品去除紅血球，細胞由被 塗佈(1-2X105毫升)在含有ι〇#Μ不活化劑或等體積DMSO，20 %胎牛血 清’ 10 % 56；37經調理培養基作為生長因子來源及0.3 %高級瓊脂醣之3〇〇 mOsM Iscoves培養基，在含適當劑量德莫唑羅胺之1毫升培養m，並在37 eC ’於5 % (：02為95 %空氣之大氣中培養。9天後，包括多於50個細胞之 群落被計數。群落代表粒細胞/巨噬細胞類(huGM-CFC)之先質細胞。存活 率以在0劑量德莫唑羅胺之群落數目百分比。 異種移殖研究 動物 - 稱重25-3 5克間之BACB-C衍生之無胸腺公小鼠(nu/nu無胸腺）係得 Paterson Institute for Cancer Research, Christie Hospital NHS Trust, Wilmslow Road，Manchester M20 9BX，England之室内飼育群(ASU小鼠）。動物係屬 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補充說明.doc 1 -2- 414710 修正 年月El / ft. 24補充 係於無菌環境直到實驗需要。在一實驗中，小鼠係得自Harlon-Olac, Harlan UK Limited, Shaw's Farm, Blackthorn, Bicester, 〇xon. 〇X6 OPT, England (OLAC小鼠）。此等小鼠稱重為丨7-23克及接著發現對結合治療(不 活化劑及BCNU)之毒性效果較為敏感。由於此理由，投藥低劑量。 細胞 A375M(人類黑色素)細胞係生長於含有10 %胎牛血清之DMEM。細胞 藉0_01 %胰蛋白酶培養而製備用於體内接種。 腫瘤 在100微升PBS中之細胞(106)皮下注射於8-10週大nu/nu無胸線小鼠之右 側腰窩。此等細胞運行於實驗動物中發展成腫瘤3-4週。測定為2mm X 2_X：2mm之腫瘤塊係皮下移殖至右侧腰窩。此等動物在7-10天中備用於 不活化劑實驗。 藥物處理 10-25毫克/公斤BCNU(i.p.)前，nu/nu小鼠以30或60毫克/公斤06-爷基鳥 嘌呤或B.42〇5及適當媒劑控制组(i,p.)處理60-90分鐘。〇6-芊基鳥嘌呤及 B.4205係製備為5毫克/公斤於玉米油中之溶液及BCNU(2毫克/毫升)製備於 PBST3%乙醇之溶液。 腫瘤測定 異種移殖腫瘤測定係藉工作員使用數位式彎腳規每U天測定。使用公 式(hXwX 1)ττ/6計算腫瘤體積。實驗動物亦每卜2天稱重。持續測定宜到 控制組動物之腫瘤達到最大可容許體積(即丨公分χ1公分χ1公分）。 結果 表4’5及6顯示對每一不活化劑之物理，生化及體間數據。所列試驗係解 釋於方法部份。 U:\TYPBCCY\B\SYC-1 補充說明.doc 节 •3- 414710 修正 年月El / ft. 24補充 係於無菌環境直到實驗需要。在一實驗中，小鼠係得自Harlon-Olac, Harlan UK Limited, Shaw's Farm, Blackthorn, Bicester, 〇xon. 〇X6 OPT, England (OLAC小鼠）。此等小鼠稱重為丨7-23克及接著發現對結合治療(不 活化劑及BCNU)之毒性效果較為敏感。由於此理由，投藥低劑量。 細胞 A375M(人類黑色素)細胞係生長於含有10 %胎牛血清之DMEM。細胞 藉0_01 %胰蛋白酶培養而製備用於體内接種。 腫瘤 在100微升PBS中之細胞(106)皮下注射於8-10週大nu/nu無胸線小鼠之右 側腰窩。此等細胞運行於實驗動物中發展成腫瘤3-4週。測定為2mm X 2_X：2mm之腫瘤塊係皮下移殖至右侧腰窩。此等動物在7-10天中備用於 不活化劑實驗。 藥物處理 10-25毫克/公斤BCNU(i.p.)前，nu/nu小鼠以30或60毫克/公斤06-爷基鳥 嘌呤或B.42〇5及適當媒劑控制组(i,p.)處理60-90分鐘。〇6-芊基鳥嘌呤及 B.4205係製備為5毫克/公斤於玉米油中之溶液及BCNU(2毫克/毫升)製備於 PBST3%乙醇之溶液。 腫瘤測定 異種移殖腫瘤測定係藉工作員使用數位式彎腳規每U天測定。使用公 式(hXwX 1)ττ/6計算腫瘤體積。實驗動物亦每卜2天稱重。持續測定宜到 控制組動物之腫瘤達到最大可容許體積(即丨公分χ1公分χ1公分）。 結果 表4’5及6顯示對每一不活化劑之物理，生化及體間數據。所列試驗係解 釋於方法部份。 U:\TYPBCCY\B\SYC-1 補充說明.doc 节 •3- 414710 Ιο/尊¾^.¾¾¾^ B4203 IQf^av&^^i/tsJHo PS05 10,-*^^>焱41 /35?oh •ss , lo^ik^if &Λ^41ΜδΗ BV2S 10'3-^#^^^^4 P4-0 ^--^^-^^^^1/2^0. P4211 ,0'3- Τ^^ΛΛ^41/2Η20 P4-2 ,0'plp e sny Ig ua ηίη P3SH2° □-213 241 1- 240 2S M79 231 251 m51 2ω9 SI o.s 22 PS able obu 0.1°1 35 0.43 P02 0- M.Wt -s^s) •3 V2 ν°Λ s 2 veo T1/2(h} Inrauffer I 0.03 V16 1·2 *Mean of β individual spefiments o.s V-G PI01 Ob01 0.02 o.s 0.10 Ra--o eMJ 0·72-7 V1B v1e vs-5 vs, l.e pa a.4 •17 s VIS*-9hp7 2- 2ώ t-7 2= s 8.0 S.7 *2·0_±_·4*··Β1+·β Tli Rail 譚 ϊ^ί ·0/"- In^BS 0·1ΡΜ-5μΜ-0-M U:\TYPE\CCY\B\SYC··!補充說明.doc 1 -4- 414710 Ιο/尊¾^.¾¾¾^ B4203 IQf^av&^^i/tsJHo PS05 10,-*^^>焱41 /35?oh •ss , lo^ik^if &Λ^41ΜδΗ BV2S 10'3-^#^^^^4 P4-0 ^--^^-^^^^1/2^0. P4211 ,0'3- Τ^^ΛΛ^41/2Η20 P4-2 ,0'plp e sny Ig ua ηίη P3SH2° □-213 241 1- 240 2S M79 231 251 m51 2ω9 SI o.s 22 PS able obu 0.1°1 35 0.43 P02 0- M.Wt -s^s) •3 V2 ν°Λ s 2 veo T1/2(h} Inrauffer I 0.03 V16 1·2 *Mean of β individual spefiments o.s V-G PI01 Ob01 0.02 o.s 0.10 Ra--o eMJ 0·72-7 V1B v1e vs-5 vs, l.e pa a.4 •17 s VIS*-9hp7 2- 2ώ t-7 2= s 8.0 S.7 *2·0_±_·4*··Β1+·β Tli Rail 譚 ϊ^ί ·0/"- In^BS 0·1ΡΜ-5μΜ-0-M U:\TYPE\CCY\B\SYC··!補充說明.doc 1 -4- 414710 PS14 DL-lo-^-f^&i^^ P4M17 dl!o-(〒s4®s4 B.51a 10,^(2--9^^)^^4 °_a21® DL-lo^l-oi齡4斛)£>蝌】駟豳4 •520 ιοα5-ψ»φ&)>^4 PS21 . 106,(5--5^漆S取ϊ1%4:172ηο B.4S2loA3-fw-^&)M^4 -^22°1 10-(2-拆2bs4¥B 舺ia4lMeoH 駟成+1.5^0 ^4 (^-鐵〕 31β 329 260 S4 2S1 261 281 22 0b9 0.G3 0.S5 s s vi vs M.wt -sl« 7 0.06 0.47 >·0 > 1b V t.o T1/-h) · 1-3 In suffer-e-J V16 1·2 •m7 •s >16 t.4 vs VIS 1b 0.12 •1 I.CT lb 5 10,0 •i T-/22nal-^^^-aaonos.-l InpBW o.tpsρ5μΞ I·-3 414710 PS14 DL-lo-^-f^&i^^ P4M17 dl!o-(〒s4®s4 B.51a 10,^(2--9^^)^^4 °_a21® DL-lo^l-oi齡4斛)£>蝌】駟豳4 •520 ιοα5-ψ»φ&)>^4 PS21 . 106,(5--5^漆S取ϊ1%4:172ηο B.4S2loA3-fw-^&)M^4 -^22°1 10-(2-拆2bs4¥B 舺ia4lMeoH 駟成+1.5^0 ^4 (^-鐵〕 31β 329 260 S4 2S1 261 281 22 0b9 0.G3 0.S5 s s vi vs M.wt -sl« 7 0.06 0.47 >·0 > 1b V t.o T1/-h) · 1-3 In suffer-e-J V16 1·2 •m7 •s >16 t.4 vs VIS 1b 0.12 •1 I.CT lb 5 10,0 •i T-/22nal-^^^-aaonos.-l InpBW o.tpsρ5μΞ I·-3
    i - ο \ · 1 7 4 4 F42S 10-(2-^专^ΐ* siMeoH pss lo-plperonyl,妒tt4^^2H2〇 D-2S 10/(5-解M4&)，抓嗾4 S7t ,0'(-5-azaplper0nyl) ^^4l/4EtoH B.4273 ,0'(5 -cyanolurluryl)^^4H20 PS74 »0-(5釦朵#»胂豳4psss 10/1-(树-¾¾) >*4l/2MeoH P4331loA'w--st^s^^+l/toHo PSUA M74 256 2S § -3 S7 2S ps obs 0·β Ο,ΟΟΑ4" •7w o.sm s s u.m ΪΒΟίρΜ) s O.OOG v-0 T1/2(h) Ralus In BuKerl^s} vie vs vie·0 T-sh} Hal-#^rv±(Dg9o/ogoj In PBS ρΐμΜ ο-μΜ-~JM -6 -
    i - ο \ · 1 7 4 4 F42S 10-(2-^专^ΐ* siMeoH pss lo-plperonyl,妒tt4^^2H2〇 D-2S 10/(5-解M4&)，抓嗾4 S7t ,0'(-5-azaplper0nyl) ^^4l/4EtoH B.4273 ,0'(5 -cyanolurluryl)^^4H20 PS74 »0-(5釦朵#»胂豳4psss 10/1-(树-¾¾) >*4l/2MeoH P4331loA'w--st^s^^+l/toHo PSUA M74 256 2S § -3 S7 2S ps obs 0·β Ο,ΟΟΑ4" •7w o.sm s s u.m ΪΒΟίρΜ) s O.OOG v-0 T1/2(h) Ralus In BuKerl^s} vie vs vie·0 T-sh} Hal-#^rv±(Dg9o/ogoj In PBS ρΐμΜ ο-μΜ-~JM -6 - 414710 p575 Clo®3'(5ii^-S*^ia4l/2H20 H20 P57SIOA2-舛2bvt4-as ,1¾¾^竑咕 Ho B,a277 lo®-4-pls 一-gs-n e •53 -^--^-9^)^1^4 Ρ427φlort^辦加竑咕一/2Hb ^4¾5^i^-#J u88 2S 242 257 0,9 p55 P13 o.s 0.033 RWt -gi Ts(h) Inoufferl Razs 522Bail 铧取诨0590/03。.-) (μ5In ss P-M O.BtM 414710 p575 Clo®3'(5ii^-S*^ia4l/2H20 H20 P57SIOA2-舛2bvt4-as ,1¾¾^竑咕 Ho B,a277 lo®-4-pls 一-gs-n e •53 -^--^-9^)^1^4 Ρ427φlort^辦加竑咕一/2Hb ^4¾5^i^-#J u88 2S 242 257 0,9 p55 P13 o.s 0.033 RWt -gi Ts(h) Inoufferl Razs 522Bail 铧取诨0590/03。.-) (μ5In ss P-M O.BtM 王充 修補一 日Μ ¢¢8.1年a 414710 l〇*4S5 1,4S3 0b3 P12 10·^^^^4p2° b2 0b6 0·- P03 •02 P06 0.04 P07 0·10 P02 pos VP09 ATase^^IL 激萃^捧^1^^-^^150 ("Μ)冷興^HA邂A® Α繳 + 120 Yshida XP Raji WiDr 8· 王充 修補一 日Μ ¢¢8.1年a 414710 l〇*4S5 1,4S3 0b3 P12 10·^^^^4p2° b2 0b6 0·- P03 •02 P06 0.04 P07 0·10 P02 pos VP09 ATase^^IL 激萃^捧^1^^-^^150 ("Μ)冷興^HA邂A® Α繳 + 120 Yshida XP Raji WiDr 8·
    414710 10 IS 20 表6 不活化劑 Α375Η 0.5uH 敏感性 π5().[Λ)5£3.ΐ) l.OuH 5-0uH Q6-芊基烏嘌呤 3.1 2.3 4-2 Q6-烯丙基鳥嘌呤 1.3 1.9 8,4203 2.0 2.5 B.4205 2·8 2.3 3,5 B.4206 3.3 4,6 B.4209 2.5 8.4210 1.5 BA21Z 2,3 2·5 B.4213 2,0 B-4220 1·3 B.4221 1.0 B.4222 1,4 B,4226 3.8 4.5 B.4229 1·8 Β·4234 0.8 Β.4266 6-3 6.3 9
    414710 10 IS 20 表6 不活化劑 Α375Η 0.5uH 敏感性 π5().[Λ)5£3.ΐ) l.OuH 5-0uH Q6-芊基烏嘌呤 3.1 2.3 4-2 Q6-烯丙基鳥嘌呤 1.3 1.9 8,4203 2.0 2.5 B.4205 2·8 2.3 3,5 B.4206 3.3 4,6 B.4209 2.5 8.4210 1.5 BA21Z 2,3 2·5 B.4213 2,0 B-4220 1·3 B.4221 1.0 B.4222 1,4 B,4226 3.8 4.5 B.4229 1·8 Β·4234 0.8 Β.4266 6-3 6.3 9 414710 圖1顯示使用4種化合物之在體外ATase不活化作用分析之結果。b.4206 係較BeG有效，但B.42丨2及B.4205在所使用分析條件下係為較佳^ b.4203 則不如BeG有效。 圖2顯示O.lgM不活化劑，在致敏Raji細胞對BCNU之生長抑制效果， B4205較BeG有效：在0.1#M不活化劑，B.4205及BeG在此方面係具相等 效果。 圖3顯示0,1/zM不活化劑’ B.4205係較BeG有效於敏感Raji細胞對德莫 •唑羅胺之生長抑制效果，但伴隨不活化劑劑量增加，BeG之致敏性變為較 有效的（當B.4205含有相同）。B.4205之劑量反應之缺乏，但具BeG之清 楚劑量反應係較清楚示於圖4。 圖5顯示B79細胞之一些生長抑制係產生自b.4203在超過100 # Μ之劑量 (即高於此化合物之I%劑量之至少100倍），使用最大濃度之Β4205亦未見 此等效果。 圖6顯示ΧΡ細胞對Β.4203之生長抑制效果較為敏感，但在此等細胞對 Β.4205之效果則較V79細胞有效。然而，生長抑制所需劑量係較ATase不 活化所需者為至少1〇〇倍。可結論為此等不活化劑之聽生長抑制效果對 細胞之致敏作用對坑化劑之生長抑制效果並不提供可檢測性。 圖7顯TjrRaji細胞不產生實質抑制效果（所提供化合物添加至細胞前不另 添加燒鋪，而進行轉）。在鱗實驗條件下，試狀降賊物，使用 此等試劑及烷化劑，不被預期可貢獻生_長抑制。 圖8 η顯示兴種移殖研究之結果細節。暴露於〇6_爷鳥嗓吟或 B.4205' < ATase活性《失去及讀係藉製備自投藥不活化劑之動物犧牲約2或 24小時之组織之A3?5腫瘤異種移轉取物測定(圖8)。 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補龙说明.d〇£1 -10- 414710 圖1顯示使用4種化合物之在體外ATase不活化作用分析之結果。b.4206 係較BeG有效，但B.42丨2及B.4205在所使用分析條件下係為較佳^ b.4203 則不如BeG有效。 圖2顯示O.lgM不活化劑，在致敏Raji細胞對BCNU之生長抑制效果， B4205較BeG有效：在0.1#M不活化劑，B.4205及BeG在此方面係具相等 效果。 圖3顯示0,1/zM不活化劑’ B.4205係較BeG有效於敏感Raji細胞對德莫 •唑羅胺之生長抑制效果，但伴隨不活化劑劑量增加，BeG之致敏性變為較 有效的（當B.4205含有相同）。B.4205之劑量反應之缺乏，但具BeG之清 楚劑量反應係較清楚示於圖4。 圖5顯示B79細胞之一些生長抑制係產生自b.4203在超過100 # Μ之劑量 (即高於此化合物之I%劑量之至少100倍），使用最大濃度之Β4205亦未見 此等效果。 圖6顯示ΧΡ細胞對Β.4203之生長抑制效果較為敏感，但在此等細胞對 Β.4205之效果則較V79細胞有效。然而，生長抑制所需劑量係較ATase不 活化所需者為至少1〇〇倍。可結論為此等不活化劑之聽生長抑制效果對 細胞之致敏作用對坑化劑之生長抑制效果並不提供可檢測性。 圖7顯TjrRaji細胞不產生實質抑制效果（所提供化合物添加至細胞前不另 添加燒鋪，而進行轉）。在鱗實驗條件下，試狀降賊物，使用 此等試劑及烷化劑，不被預期可貢獻生_長抑制。 圖8 η顯示兴種移殖研究之結果細節。暴露於〇6_爷鳥嗓吟或 B.4205' < ATase活性《失去及讀係藉製備自投藥不活化劑之動物犧牲約2或 24小時之组織之A3?5腫瘤異種移轉取物測定(圖8)。 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補龙说明.d〇£1 -10- , i 414710 圖9-13指出在無毛鼠之A375腫瘤異種移殖對〇6-;烏嗓呤或b.4205結 合BCNU之致敏性（如方法邵份所述）。在每一圖中，頂部圖顯示實驗之 時間行程中腫瘤體積增加之百分比。下方圖顯示，在每一處理組中之動物 數目及處理後存活之數目。此等圖顯示相較於〇6·苄鳥嘌吟，B.4205減少 腫瘤體積且結合BCNU時較BeG結合BCNU時具較低毒性。在人類病 患，皮膚惡性黑色素瘤係以BCNU處理，特別是在USA (Balch，C. M.， Houghton, A. & Peters, L. (1989) "Cutaneons Melanoma" in Cancer : Principles and Practise of Oncology, De Vita, V. T., Helman, S. & Rosenberg, S. A. Ceds)，ppl499-1542，Lipincott : Philadelphia)，使得生長於無毛鼠之人類 黑色素瘤異種移殖物為臨床高相關性之動物模型系統。 圖14顯示人類骨髓細胞對德莫唑羅胺之致敏性試驗(如上述方法部份) 之結果。如骨髓細胞係得自3個病患，分別為C、D及Ε。所示存活曲線 關於結合不活化劑/德莫唑羅胺處理之鈿胞毒性效果。此效果希望可降 低。病患C及Ε之結果顯示Β.4205較〇6-爷鳥嘌呤(06 BeG)具較小的致敏 效果；對病患D則無差異，但此結果係視為以人類材料之科學測試之合 理變異。 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補充說明-doc •11 - , i 414710 圖9-13指出在無毛鼠之A375腫瘤異種移殖對〇6-;烏嗓呤或b.4205結 合BCNU之致敏性（如方法邵份所述）。在每一圖中，頂部圖顯示實驗之 時間行程中腫瘤體積增加之百分比。下方圖顯示，在每一處理組中之動物 數目及處理後存活之數目。此等圖顯示相較於〇6·苄鳥嘌吟，B.4205減少 腫瘤體積且結合BCNU時較BeG結合BCNU時具較低毒性。在人類病 患，皮膚惡性黑色素瘤係以BCNU處理，特別是在USA (Balch，C. M.， Houghton, A. & Peters, L. (1989) "Cutaneons Melanoma" in Cancer : Principles and Practise of Oncology, De Vita, V. T., Helman, S. & Rosenberg, S. A. Ceds)，ppl499-1542，Lipincott : Philadelphia)，使得生長於無毛鼠之人類 黑色素瘤異種移殖物為臨床高相關性之動物模型系統。 圖14顯示人類骨髓細胞對德莫唑羅胺之致敏性試驗(如上述方法部份) 之結果。如骨髓細胞係得自3個病患，分別為C、D及Ε。所示存活曲線 關於結合不活化劑/德莫唑羅胺處理之鈿胞毒性效果。此效果希望可降 低。病患C及Ε之結果顯示Β.4205較〇6-爷鳥嘌呤(06 BeG)具較小的致敏 效果；對病患D則無差異，但此結果係視為以人類材料之科學測試之合 理變異。 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補充說明-doc •11 -
    14710 結果摘述 1. 所有化合物在體外分析之標準條件下係經測試其對不活化重組體人類 ATase之能力《在此等條件下，化合物中之二者(b.4214及B.4217)不會 不活化Atase，直到使用最高濃度。其餘不活化Atase之化合物具範圍自 0.0045至95//M之IC5〇 值。8個化合物(B.4205, B.4206, B.4212, B.4226, B.4266 ’ B.4269，B‘4273 ’ B.4275)具低於BeG之I5Q值（表4)。 2. 不活化劑在水溶液中以不同速率水解（半衰期0J7至>80小時），但其對 其作為ATase不活化劑之功率無關（表4)。 3. 在體外具不活化ATase效果（Ι50<1.〇μΜ)之化合物亦在人類細胞不活化 ATase ’ 150值一般僅些微高於在體外分析使用重組蛋白質者（表4)。 4. B.4205在人類，大鼠及中國倉鼠細胞不活化ATase具相似有效性（150值 為0.02-0.03) 〇對B.4203，範圍為0.04-0.12 〇在細胞株，使用B.4205及 B.4203係較BeG有效7倍（表5)。 5. B.4203及B.4205對XP細胞研究為具毒性的及B.4203對V79細胞研究為具 毒性的，但只有在濃度高於較BCNU觀察到致敏作用之濃度之至少1〇〇 倍。 6.在體外不活化ATase (15〇值<1.0"M)及在Raji細胞不活化ATase (150值 <1 _0 A M)具效果之化合物亦致敏Raji及A375M細胞對BCNU之生長抑制 效果（表4)。 7‘在0.1/zM之不活化劑濃度，B.4205在致敏Raji細胞對德莫唑羅胺之生長 抑制效果係較BeG有效（圖3)。 8·體外分析可用於預期化合物在哺乳動物細胞對BCNU及相關細胞毒性劑 之生長抑制效果為有效致敏劑。 U:VTYPE\CCY\B\SYC-1 捕充說明.doc 3 -27-
    14710 結果摘述 1. 所有化合物在體外分析之標準條件下係經測試其對不活化重組體人類 ATase之能力《在此等條件下，化合物中之二者(b.4214及B.4217)不會 不活化Atase，直到使用最高濃度。其餘不活化Atase之化合物具範圍自 0.0045至95//M之IC5〇 值。8個化合物(B.4205, B.4206, B.4212, B.4226, B.4266 ’ B.4269，B‘4273 ’ B.4275)具低於BeG之I5Q值（表4)。 2. 不活化劑在水溶液中以不同速率水解（半衰期0J7至>80小時），但其對 其作為ATase不活化劑之功率無關（表4)。 3. 在體外具不活化ATase效果（Ι50<1.〇μΜ)之化合物亦在人類細胞不活化 ATase ’ 150值一般僅些微高於在體外分析使用重組蛋白質者（表4)。 4. B.4205在人類，大鼠及中國倉鼠細胞不活化ATase具相似有效性（150值 為0.02-0.03) 〇對B.4203，範圍為0.04-0.12 〇在細胞株，使用B.4205及 B.4203係較BeG有效7倍（表5)。 5. B.4203及B.4205對XP細胞研究為具毒性的及B.4203對V79細胞研究為具 毒性的，但只有在濃度高於較BCNU觀察到致敏作用之濃度之至少1〇〇 倍。 6.在體外不活化ATase (15〇值<1.0"M)及在Raji細胞不活化ATase (150值 <1 _0 A M)具效果之化合物亦致敏Raji及A375M細胞對BCNU之生長抑制 效果（表4)。 7‘在0.1/zM之不活化劑濃度，B.4205在致敏Raji細胞對德莫唑羅胺之生長 抑制效果係較BeG有效（圖3)。 8·體外分析可用於預期化合物在哺乳動物細胞對BCNU及相關細胞毒性劑 之生長抑制效果為有效致敏劑。 U:VTYPE\CCY\B\SYC-1 捕充說明.doc 3 -27- 4147:10 .,4: 83: .H::::. ...... ....... 9. B.4205在致敏生長於無毛鼠之人類黑色素瘤異種移殖物對…⑹及相關 細胞毒性劑之生長抑制效果係與BeG相似或稍微有效（圖9-13)。 10. B.4205對不活化ATase在生長於無毛鼠之人類黑色素瘤異種移殖物則與 BeG—樣有效（圖8)。 11. 體外分析及/或異種移殖ATase缺乏分析可用於預期化合物為黑色素瘤 異種移殖物對BCNU及相關細胞毒性劑之有效致敏劑。 12. 相對於BeG，其引起經處理動物高達70%之死亡，B.4205對帶有人類黑 色素瘤異種移殖物在使用條件下對BCNU之急性毒性效果之致敏作用具 有極低效果（圖9-13)。
  2. 14.BeG在3種人類骨髓樣品（用於測試德莫唑羅胺之毒性效果）可致敏GM-CFCS，但在此等細胞中之2個，B.4205僅產生很少或不產生致敏的作 用。此分析可用於預期ATase不活化劑之可能骨髓抑制效果（當在臨床 上與BCNU及相關試劑結合使用）（圖14)。 U:\TYPS\CCY\B\SYCM 補充說明.doc 3 -28- 4147:10 .,4: 83: .H::::. ...... ....... 9. B.4205在致敏生長於無毛鼠之人類黑色素瘤異種移殖物對…⑹及相關 細胞毒性劑之生長抑制效果係與BeG相似或稍微有效（圖9-13)。 10. B.4205對不活化ATase在生長於無毛鼠之人類黑色素瘤異種移殖物則與 BeG—樣有效（圖8)。 11. 體外分析及/或異種移殖ATase缺乏分析可用於預期化合物為黑色素瘤 異種移殖物對BCNU及相關細胞毒性劑之有效致敏劑。 12. 相對於BeG，其引起經處理動物高達70%之死亡，B.4205對帶有人類黑 色素瘤異種移殖物在使用條件下對BCNU之急性毒性效果之致敏作用具 有極低效果（圖9-13)。
  3. 14.BeG在3種人類骨髓樣品（用於測試德莫唑羅胺之毒性效果）可致敏GM-CFCS，但在此等細胞中之2個，B.4205僅產生很少或不產生致敏的作 用。此分析可用於預期ATase不活化劑之可能骨髓抑制效果（當在臨床 上與BCNU及相關試劑結合使用）（圖14)。 U:\TYPS\CCY\B\SYCM 補充說明.doc 3 -28- 414710 修正丨 ‘ W補^ 表7顯示不活化劑單獨對得自5個病患A-E之骨髓細胞之毒性效果。 B.4205之結果係與06-芊基鳥嘌呤之結果比較。病患B之細胞對Beg及 B.4205二者幾乎為其它樣品之2倍致敏性。 表7 不活 病患 實驗曰期 A 05/02/93 B 25/03/93 C 17/05/93 D 05/05/93 E 05/05/93 群落數目之控制％(即無不活化劑） Q6-芊基鳥嘌呤 Β·42°5 95 46 83 8S 89 91 46 97 118 89 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補充說明.doc 3 -26- 414710 修正丨 ‘ W補^ 表7顯示不活化劑單獨對得自5個病患A-E之骨髓細胞之毒性效果。 B.4205之結果係與06-芊基鳥嘌呤之結果比較。病患B之細胞對Beg及 B.4205二者幾乎為其它樣品之2倍致敏性。 表7 不活 病患 實驗曰期 A 05/02/93 B 25/03/93 C 17/05/93 D 05/05/93 E 05/05/93 群落數目之控制％(即無不活化劑） Q6-芊基鳥嘌呤 Β·42°5 95 46 83 8S 89 91 46 97 118 89 U:\TYPE\CCY\B\SYC-1 補充說明.doc 3 -26- M831002355,t»^^Itm 4147 x〇 中文申請專利範圍修正本（89年6月） ABCD
    正充修補 曰ί 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 々、申請專利範圍 L 一種用於治療罹患癌症之病人其人類癌细胞之醫藥组成 钧，其包括有效劑量的A T a s e抑制劏|其係選自0 s -垸 基鳥嘌呤、0 3 -烯基鳥嘌時、0 6 -芳基鳥嘌呤及0 s -苄基 鳥嘌呤、鳥苷及2 _ -去氧鳥苷化合钧之组成群中，及有 效劑量之德莫唑羅胺； 其中該抑制劑之投予劑量為每公斤患者體重1 - 2 0 0 0毫 克•且德莫唑羅胺以每天每平方岽體表面積1 5 0 - 3 0 0毫 克之比率投予之： 2. 根據Φ請專利範圍第1項之醫藥组成物，其中ATase抑 制劑為0 s -苄基鳥喋呤。 3. 根據申請專利範圍第1項之®藥组成物，其除調製以使 該抑制劑之投予劏量約為每公斤患者體重10- 800毫克 4 根據电請專利範圍第1項之翳藥组成物，其係調製Μ連 續幾天投予個別劏量之A T a s e抑制劏及德箅唑羅胺*其 中A T a s e抑制劑Μ每公斤患者體重1 0 - S 0 0毫克投予劏量 在投予德箅唑羅胺之前投予，旦其中德莫唑羅胺乃每天 每平方米體表面積1 5 0 - 3 0 0毫克之量投予：· 5. 根據申請專利範圍第4項之醫藥姐成钧，其中AT ase抑 制劏為0 β -苄基鳥·嘱呤·： 3. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組成钧*其偽調製以使 德莫唑羅胺之總劑量可分成至少連續四天投予之至少四 次涸別劑量。 7. 根據申請專利範圍第4項之醫藥组成钧，其係調製Μ使 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） (請先閔讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 M831002355,t»^^Itm 4147 x〇 中文申請專利範圍修正本（89年6月） ABCD
    正充修補 曰ί 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 々、申請專利範圍 L 一種用於治療罹患癌症之病人其人類癌细胞之醫藥组成 钧，其包括有效劑量的A T a s e抑制劏|其係選自0 s -垸 基鳥嘌呤、0 3 -烯基鳥嘌時、0 6 -芳基鳥嘌呤及0 s -苄基 鳥嘌呤、鳥苷及2 _ -去氧鳥苷化合钧之组成群中，及有 效劑量之德莫唑羅胺； 其中該抑制劑之投予劑量為每公斤患者體重1 - 2 0 0 0毫 克•且德莫唑羅胺以每天每平方岽體表面積1 5 0 - 3 0 0毫 克之比率投予之： 2. 根據Φ請專利範圍第1項之醫藥组成物，其中ATase抑 制劑為0 s -苄基鳥喋呤。 3. 根據申請專利範圍第1項之®藥组成物，其除調製以使 該抑制劑之投予劏量約為每公斤患者體重10- 800毫克 4 根據电請專利範圍第1項之翳藥组成物，其係調製Μ連 續幾天投予個別劏量之A T a s e抑制劏及德箅唑羅胺*其 中A T a s e抑制劑Μ每公斤患者體重1 0 - S 0 0毫克投予劏量 在投予德箅唑羅胺之前投予，旦其中德莫唑羅胺乃每天 每平方米體表面積1 5 0 - 3 0 0毫克之量投予：· 5. 根據申請專利範圍第4項之醫藥姐成钧，其中AT ase抑 制劏為0 β -苄基鳥·嘱呤·： 3. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組成钧*其偽調製以使 德莫唑羅胺之總劑量可分成至少連續四天投予之至少四 次涸別劑量。 7. 根據申請專利範圍第4項之醫藥组成钧，其係調製Μ使 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） (請先閔讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 3 8 8 8 ABCD 414710 々、申請專利範圍 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A Ta s e抑制劑在投予德莫唑羅胺之前二到八小時投予之 3. 一種用於治療罹患癌症之病人其人類癌细胞之套組，其 包括有效劏量的ATase抑制劑，其降選自Ο*3-垸基鳥嘌 呤、〇 e -烯基鳥嘌呤、〇 s -芳基鳥嘌呤及0 β _苄基鳥嘌呤 、鳥苷反2 ‘ -去氧鳥苷化合钧之组成群中，及有效劏量 之德莫唑羅胺； 其中該抑制劑之投予劏量為每公斤患者體賃1 - 2000毫 克•且德莫唑羅胺以每天每平方岽體表面積1 5 0 - 3 0 0毫 克之比率投予之。 £ 根據申請專利範圍苐8項之套组•其中A T a s e抑制劑為 Ο β -苄基鳥嘌呤。 10. 拫據申請專利範圍苐8項之套组，其係調製Κ使該抑制 劑之投予劑量約為每公斤患者體重1 0 - 8 0 0毫克。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Π. 根據申請專利範圍第8項之套组，其係調製以連續幾天 投予個別劏量之A T a s e抑制劏及德莫唑羅胺，其中 ATase抑制劑以每公斤患者體重1 0 -8 00毫克投予劏量在 投予德莫唑羅胺之前投予，且其中德莫唑羅胺乃每天每 平方眾體表面積1 5 0 - 3 0 0毫克之量投予：. 12 根據申請專利範圍第1 1項之套组，其中ATase抑制劑為 〇 i苄基鳥喋呤。 13. 根據申請專利範圍第1 1項之套組，其中德莫唑羅胺之缭 劑量可分成至少連續四天投予之至少四次個別劏量。 u. 根據申請專利範圍第11項之套组|其中ATase抑制劑在 投予德莫唑羅胺之前二到八小時投予之。 本紙張尺度.適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2!0Χ297公釐）
TW083100235A 1993-01-14 1994-01-13 Pharmaceutical composition and kit comprising ATase inhibitor and temozolomide for use in treating human tumour cells TW414710B (en)

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Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5731304A (en) * 1982-08-23 1998-03-24 Cancer Research Campaign Technology Potentiation of temozolomide in human tumour cells
US5942247A (en) * 1996-07-31 1999-08-24 Schering Corporation Method for treating pediatric high grade astrocytoma including brain stem glioma
US5939098A (en) * 1996-09-19 1999-08-17 Schering Corporation Cancer treatment with temozolomide
AU2021700A (en) * 1998-12-07 2000-06-26 Schering Corporation Methods of using temozolomide in the treatment of cancers
US6251886B1 (en) 1998-12-07 2001-06-26 Schering Corporation Methods of using temozolomide in the treatment of cancers
US6465448B1 (en) * 1999-08-13 2002-10-15 Case Western Reserve University Methoxyamine potentiation of temozolomide anti-cancer activity
US6635677B2 (en) 1999-08-13 2003-10-21 Case Western Reserve University Methoxyamine combinations in the treatment of cancer
PL205936B1 (pl) * 2002-02-22 2010-06-30 Schering Corp Farmaceutyczny preparat zawierający termozolomid oraz sposób jego wytwarzania
AU2003240496B2 (en) * 2002-05-31 2008-01-10 Eisai Inc. Combination chemotherapy with chlorotoxin
CN100431605C (zh) * 2005-02-03 2008-11-12 山东蓝金生物工程有限公司 一种抗癌药物组合物
CN100350974C (zh) * 2005-02-03 2007-11-28 山东蓝金生物工程有限公司 一种抗癌药物组合物
CN100350975C (zh) * 2005-02-03 2007-11-28 山东蓝金生物工程有限公司 抗癌药物组合物
CN100402091C (zh) * 2005-02-03 2008-07-16 山东蓝金生物工程有限公司 一种抗癌药物组合物
GB0502573D0 (en) * 2005-02-08 2005-03-16 Topotarget As Therapeutic compounds
WO2008022535A1 (fr) * 2006-08-09 2008-02-28 Tian Jin Tasly Group Co., Ltd. Composition pharmaceutique pour traiter le gliome du cerveau, son procédé et sa préparation pharmaceutique
BRPI0912683A2 (pt) 2008-05-15 2016-01-26 Transmolecular Inc tratamento de tumores metastáticos
EP2531206B1 (en) 2010-02-04 2017-05-31 Morphotek, Inc. Chlorotoxin polypeptides and conjugates and uses thereof
CN106957356B (zh) 2010-05-11 2021-05-25 弗雷德哈钦森癌症研究中心 氯毒素变体、缀合物及其使用方法
CN103169664B (zh) * 2011-12-25 2015-04-22 复旦大学 一种rgd肽修饰的双层载药纳米粒及其制备方法
RU2015126650A (ru) 2012-12-10 2017-01-12 Фред Хатчинсон Кэнсер Рисёрч Сентер Партнеры липокалина по слиянию
US11559580B1 (en) 2013-09-17 2023-01-24 Blaze Bioscience, Inc. Tissue-homing peptide conjugates and methods of use thereof

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Publication number Publication date
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