TW394795B

TW394795B - Enzymatically -aided liming process

Info

Publication number: TW394795B
Application number: TW083111382A
Authority: TW
Inventors: Alan Cecil; Jurgen Christner; Gertrud Wick
Original assignee: Roehm Gmbh
Priority date: 1993-09-27
Filing date: 1994-12-07
Publication date: 2000-06-21
Also published as: BR9403865A; AU676600B2; IT1267462B1; GB2282148B; NZ264546A; ITTO940747A1; DE4332785A1; ITTO940747A0; AU7426494A; ES2076905B1; GB2282148A; KR950008695A; ES2076905A1; GB9419426D0

Description

A7 B7 五、發明説明（—τ 擇，前文提到之水溶物及胺類化合物亦可在本階段同時添加，當採用毛髮保存法，酵素可與較少量的石灰、選擇性採用還原劑（如公式I )、水溶物及胺類共同添加，脱毛過程持續1至2小時，藉由添加無機硫化物如鈉--硫化物 60% (0.5-1.5%)脱毛處理完成。在毛髮保存法，將毛髮自皮慮分離，例如可將羊毛用人工或機械方式自羊皮去除，豬皮上的鬃毛通常用機械脱除，小牛皮革及牛科動物皮革上的鬆毛可利用翻滾或機械脱毛，同時進行去肉及脱毛處理是可能的（如採用Steh ling \ 1 機）〇經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如本發明所使用的方法，脱毛處理通常産生完金脱毛. 的及無色素的皮虜及皮革，在加灰璘灰石粉自皮慮及皮革流出後，最好用水沖洗之，如使用150重量百分比的水，在新的磷灰石粉中皮虜的打開步驟易於進行，通常50到200 重量百分比皮慮及皮革重量，pH值12到14内，通常進行超過10到20小時時間，利用氫氧化鈉溶液設定pH值，並使用較一般用量少量的石灰，氫氣化鈉溶液及石灰的使用可視作反應指標，然後如傳統技術將皮慮及皮革作進一步的處理。與所預期的相反，如本發明的方法所製造的皮革具有較大的平滑度且沒有nubuk效應或鬆弛的顆粒，更進一步地，高濃度酵素作用在顆粒表面的結果，使得經保存的任何生物種類均可完全解決，脱毛作用發生得更快且疏化物的用量可進一步減少，這表示毛髮可保存得更好且易於在本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐 12 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _____B7 _ 五、發明説明（）本發明像有關一種改良之酵素催化加灰法，本法中可有效減少加灰作業所需時間。蛋白酶在皮革製造過程的各種步驟的使用增加（見E.

fWW

Pfleiderer 及 Rjj^iner 於 H.-J. Rehm & G. Reed，生物技術，卷6b, 7^^43頁VCH 1988年），近年來，在鹺性範圍内性質穩定且大部分為枯草桿菌及地衣芽抱捍菌之變異種的蛋白酶，日益廣泛得使用在脱毛及打開動物皮虜，這些蛋白酶，通常與如石灰、碩酸鈉、或氫氧化鈉水溶液等鹼類，及與還原劑如硫化物或硫醇等，在PH值介於10至 14的條件下結合使用，處理過程所需時間介於6至24小時 ,視最終皮革産物的性質而定（見K. Alexander, J. A. L. C. A.卷83，287-316頁，1988年）。關於毛髮-保存加灰法之記載見 W0 92八7 613, US-A 4 960 428 及 DE-A 41 09 826〇酵素-輔助加灰法幫助增加表面産量、促進皮革清潔及染色，同時，使用此種分法可有效減低還原劑如硫化物 (如1至1.4重量百分比硫化鈉，60%)的需要量，此處，産物為2000LVU、酵素劑量為0.4至0.8重量百分比，當作業時間為6小時的情況下可選用較高劑量（0.8重量百分比）。〔根據TEGEWA修正法的LV來判定酵素活性見Das Leder 22，121-126頁（1971年）；N. C. J. Lamb,皮革技術員/化學家協會期刊66: 110-113頁（1982年）。除酵素-輔助加灰法的優點，此法具有特定的缺點，舉例來說，在較長進行時間及高溫條件下，其操作可信度本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

經濟部十央樣隼局員工消費合作杜印製五、發明説明（）較低，導致皮慮表面會裂（發生nubuk作用，鬆弛顆粒結構及皮革觸感空虛）。迄今克服這些缺黏的努力仍未成功，假使減少酵素或操作時間或溫度，則有可能克服這些缺點，但在同時，酵素産生的作用也大量降低，試圔降低酵素的活性因此降低對膠原蛋白的破壞作用亦幾告失敗。採用各種類型的酵素做指標實驗，各類酵素對膠原蛋白及彈性蛋白的活性各異，結果顯示，在加灰步驟中，膠原蛋白及粒狀膜對於酵素的敏感性發生在鹼性打開階段，如時間愈長及鹼類物質對於皮虜的作用愈大時，皮慮膠原蛋白對酵素愈敏感，依據本發明，此項影響因子，比較加灰酵素的膠原蛋白溶解作用更為重要。上述的任何克服這些缺點的嘗試均在此一方向考慮：任何對處理分法的改變，考慮經認可的處理分法順序（見 Kirk-Othmer,化學技術百科全書，卷8, 292-299頁， Interscience 刊物，1952年）。驚人地，目前已發現若在加灰過程中酵素採用傳統用量2至3倍以上，則可大量避免上述缺點，因此，依據此方向，本發明提供一種酵素-輔助加酶法，採用傳統的、鹼性的蛋白酶在pH值範圍9至14下，在鹺硅含水磷灰石粉中當作加灰酵素，酵素使用濃度介於2 nEc至5 nEc (此處 nEc傺使用在石灰時的酵素濃度單位），最大作用時間3至 6小時，3至4小時為佳（如 ''酵素冲洗〃所知），加灰磷灰石粉易於流出，亦即是，當添加非離子或陰離子潤濕本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

五、發明説明（）劑，其隨後的如採用水的沖洗步驟，可便利加灰磷灰石粉流出，在新的磷灰石粉--含氫氧化鈉溶液下，皮慮打開作用可進行得較為理想，可選擇較傳統用量小量的石灰且不需添加硫化物，作用時間10至20小時。本發明的加灰法可作毛髮消除或保持毛髮下進行，在毛髮消除過程，蛋白酵素在加灰開始時與石灰及還原劑共同使用--特別是無機硫化物及/或氫硫基化合物，一般來説，磷灰石粉的pH值介於11至14,含有如0.5至0.8重量百分比之硫化鈉溶液（60¾硫化鈉）。毛髮保持過程可在此方式下進行：使用較毛髮消除過程用量較少量的石灰及硫化物（約0.5-2%,石灰及硫化物的重量百分比），在添加酵素及剩餘的硫化物前，允許加灰過程進行約2小時。在毛髮消除過程使用之氫硫基化合物例舉包括公式I 化合物： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (其中 R i代表可選擇性支鏈的、環狀或無環的磺12至磺24 烷基，特別是硕2至碩18烷基，尤其是碩2至碩12烷基，其可被氫氣基或硫赶基取代，或Ri代表-(CHS)P-NR2R3族群〇其中1?2及1?3單獨代表氫或一個碩1至6烷基，此烷基可被氮、氧或硫原子穿插其中形成一個（飽和者較佳）雜環本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（）基，或R2及1?3單獨代表-1?4-(：001^基，及p代表由2至6的整數。其中R4代表可選擇性支鏈的磺2至磺6亞烴基，其可為一-COORB基取代，其中Re代表氫或一磺1至磺6烷基。其中硫氫基可與1^基的第一個、第二個或第三値磺原子鍵結。該氫硫基可為甲脒化亞磺酸（硫脲二氧化物）。公式I較適當的化合物包括硫醇類，尤其是正烷基硫醇類，例如正丁基硫醇、正戊基硫醇、正十二基硫醇、L-OROL型硫醇、正十四基硫醇，及氫氧基取代之烷基硫醇類，例如2-氫硫基乙醇、3-氫硫基-2,3-^1-<^3_116{1丨〇1，及_. 基取代之烷基硫醇類，例如冷-(二-正-戊氨基）乙基硫醇 ,這些化合物易於以其塩類形式使用，視所採用之磷灰石粉水溶液的酸鹸值而定。公式I中最適當的化合物為氫硫基-單-，及二羧酸或其塩類，例如氬硫基醋酸、2-氫硫基丙酸、3-氳硫基丙酸及氩硫基琥珀酸。除了氫硫基化合物，亦可添加0.2至2重量百分比的水溶物於加灰磷灰石粉，已發現適宜的水溶物，如H. Rath 等人在 Melliands Textilbericht, 43 (7): 718, 1962 年 Ο 較佳的水溶物如公式E所示本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 B7 &'發明説明（） H2N-C = X (Π )

I

R (其中 R表 H、-NHa、-CH3 或-NH-CN, X 代表 0、S或 NH ，或X與R構成雜環条統，但此雜環条統僅含有氮雜原子）及其酸成塩類如氫氯化物、硫酸埴、瞵酸塩及硫氰酸塩。最適宜的水溶物包括尿素、硫脲、乙醱胺、甲醯胺、胍、蜜胺及雙«胺，此外，胺類，尤其是乙醇胺亦可使用，其包括單一、二一、三乙醇胺及氨基♦乙基乙醇胺。上述化合物（水溶物、胺類）可提高加灰酵素的功效，僳由於其毛髮鬆散作用及膨脹延緩作用，該作用可促進酵素的散播，這些化合物便於與加灰酵素共同投入，或在加入加灰酵素的1至2小時前添加，如本發明使用在加灰過程中的適宜的加灰酵素為鹸性蛋白酶，如蛋白酶可在pH 值介於9到14, 9至13為佳，的條件下抑制解朊作用及飽和穩定度，這些包括中性（E.C.3.4.24)及，尤其是_性蛋白酶（E.C.3,4.21)[見 Kirk-Othmer,第三販，199 頁及 202 頁，J. Wiley 1990年；Ullmann’s工業化學百科全書，A9 卷，409至414頁，VCH 1987年，L. Keay於、'程序生物化學〃 17-21 (1971年）]。較佳的加灰酵素是： --鹼性蛋白酶，在pH值介於8到14, 8.5到14為佳，的條件下表現其最佳活動性，這些包括鹼性細菌性蛋白酶，大部分屬於絲氨酸型及鹼性真菌蛋白酶，上述者特別是來自細菌菌株的蛋白酶，如枯草桿菌本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 i、發明説明（）、地衣芽孢桿 ®、B. firmus、B. alc'alophilus，多黏芽孢捍菌、B.mesentericus，及 Streptomyces 菌株如S. a leal phil us,鹼性細菌性蛋白酶的最適宜工作溫度通常為4〇-60°C，真菌蛋白酶為20-40°C ，鹸性真菌蛋白酶包括來自麴屬菌株如A. oryae ，來自青徽素_株如P. cyanofulvum或來自 Paecilomyces persicinus等類似細菌，驗性真菌蛋白酶的活性主要在pH值8到11以内，預期酵素的活性為每克酵素8,000至10,000 LVU。 --中性蛋白酶在pH值6.0到9.0範圍内表現最理想的活性，其包括待別是中性細菌性蛋白酶，通常屬於 .metalloenzymes,及真菌蛋白酶，如中性芽孢桿菌靥蛋白酶如枯草桿菌、B. natto及多黏芽孢桿菌、假單胞菌屬一蛋白酶、Streptomyces-蛋白酶、麴菌屬-蛋白酶來自A. 〇 r y z a e、A. p a r a s i t i c u s及. Penicillium glaucum，中性細菌性蛋白酶在工作溫度20到50Ϊ：時表現最理想活性，中性真菌蛋白酶的最適宜工作溫度約為35到40 Ό。特別適宜的蛋白酶為當pH值10到14範圍内表現顯著的活性者，酵素的解朊作用活性的判定，利用Anson血活蛋白法〔Anson，J. Gen. Physiol, 22，79 ( 1939年）〕或 Lohlein-Volhard 法〔依據 TEGEWA in Leder 22，121-126 頁修正（1971年）〕，此處，在測試條件下（小時，37C )，一値Lohlein-Volhard單位（LVU)相當於在20毫升的本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _ B7 五、發明説明（）酪蛋白濾液内增加相當於一當量5.75X10-3毫升、0.1 η 氫氧化鈉之水解産物時的酵素數量。除了酵素外，亦可添加傳統的賦形劑如穩定劑，液態鹼性蛋白酶的穩定劑包括，多價酵類如二甘醇、甘油、丙二醇、山梨糖醇、醚醇類、二烴基甲醯胺或二噁烷。如本發明加灰過程使用的蛋白酶經證實特別適合者為那些亦可移除磷脂、甘油三酸酯及脂肪酸自皮革或皮虜的粒狀層者（存在於皮脂腺脂肪或皮脂），此移除作用必須視為從屬於解朊作用，不會發生在磷脂酶或脂肪酶的直接作用下，經過此較強烈的酵素處理後，顯然地可發現到較傳統使用方法更多的磷脂及脂肪。在本操作過程中並未絶對清楚皮廉的哪一種蛋白質結構必須予以破壞，然而，不欲在任何方向限制本發明之範圍，似乎該解除作用極可能與彈性蛋白的逐漸瓦解有關，此發現由同時具有彈性蛋白酶活性之蛋白酶其展現最佳的效力之事實支持，彈性蛋白酶活性可依據DE-A 42 20 838 判定，當該相闢的疏水性磷脂層經移除後，水性加灰化學物質的貫穿更為均一，因此顆粒較為平坦，此現象亦可解釋季節性發生的問題關於drawn顆粒：懷孕的或待宰的動物産生較多的皮脂腺皮脂。如前已述，本發明的特點為某濃度加灰酵素在加灰磷灰石粉中的使用，該濃度至少為2X nEc至5X nEc，2.5X nEc 至5 x nEc為佳，nEc代表過去加灰方法的正常酵素濃度，在石灰中，此正常酵素濃度約為10,〇〇〇至20,000 LVU每公本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X 297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

10 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（）斤皮慮（見e.g. W0 92/17613),過去的方法慣常使用的酵素數量約為0.1%至0.2¾皮慮及皮革重量百分比，此類産物其為_性安定蛋白酶且主要衍生自枯草桿菌、地衣芽孢桿菌及alcalophilus菌株，其解朊活性約為10,000 LVU每公斤皮虜。如本發明之加灰過程，便於採用過去的操作方法進行 (見F. Stather, Gerbereichemie und Gerbereitechno 1ogie ，第四販，Akademie-Verlag, Berlin, 1967年），一般來説，動物皮膚及皮革可採用本發明的方法進p加灰處理，首先，將保存的皮虜及皮革施以完全的浸泡，通常乾燥的皮虜及皮革需浸泡整晚，但塩漬的材料浸泡4至6小時，經浸泡處理後，大部分的磷灰石粉流出，可發現到當在經浸泡處理隨後將皮膚及皮革削肉處理（利用機器），則脱毛更容易進行，如本發明的加灰程序若使用新鮮的礎灰石粉則更易於進行，視皮慮及皮革的種類而定，本程序的進行使用50到300重量百分比的水一依皮慮及皮革的最初重量。加灰程序可在大桶中、鞣皮機、混合器或攪拌桶中進行，如本發明的處理程序，脱毛處理所耗時間較短，且處理需時最多3到4小時，浸液的溫度25到27°C為宜，酵素的製備，可以粉末態加入磷灰石粉中。當採用毛髮消除法時，多半將酵素與石灰及還原劑在進行步驟開始時共同加入，適合的還原劑包括硫化鈉、硫酸鈉塩及硫醇化合物，如公式I所示，作為更進一步的選本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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A7 B7 五、發明説明（—τ 擇，前文提到之水溶物及胺類化合物亦可在本階段同時添加，當採用毛髮保存法，酵素可與較少量的石灰、選擇性採用還原劑（如公式I )、水溶物及胺類共同添加，脱毛過程持續1至2小時，藉由添加無機硫化物如鈉--硫化物 60% (0.5-1.5%)脱毛處理完成。在毛髮保存法，將毛髮自皮慮分離，例如可將羊毛用人工或機械方式自羊皮去除，豬皮上的鬃毛通常用機械脱除，小牛皮革及牛科動物皮革上的鬆毛可利用翻滾或機械脱毛，同時進行去肉及脱毛處理是可能的（如採用Steh ling \ 1 機）〇經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如本發明所使用的方法，脱毛處理通常産生完金脱毛. 的及無色素的皮虜及皮革，在加灰璘灰石粉自皮慮及皮革流出後，最好用水沖洗之，如使用150重量百分比的水，在新的磷灰石粉中皮虜的打開步驟易於進行，通常50到200 重量百分比皮慮及皮革重量，pH值12到14内，通常進行超過10到20小時時間，利用氫氧化鈉溶液設定pH值，並使用較一般用量少量的石灰，氫氣化鈉溶液及石灰的使用可視作反應指標，然後如傳統技術將皮慮及皮革作進一步的處理。與所預期的相反，如本發明的方法所製造的皮革具有較大的平滑度且沒有nubuk效應或鬆弛的顆粒，更進一步地，高濃度酵素作用在顆粒表面的結果，使得經保存的任何生物種類均可完全解決，脱毛作用發生得更快且疏化物的用量可進一步減少，這表示毛髮可保存得更好且易於在本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐 12 - A7 B7 五、發明説明（) 短暫的處理時間内或在反應完畢後將毛髮自磷灰石粉移除〇提供下例説明本發明，賦形劑"産品A 〃的成份敘述如下： 15Wt-% (重量百分比）/S--氫硫基丙酸 17wt-!S三乙醇胺 8wt-%尿素及 lOOwt-% 水節例例1 牛科動物皮廉之毛髮消除法脱毛處理材料：埴漬牛皮工作器皿： fWfj 大桶；％ (百分比）資料以埴漬材!量為準章揞發酵浸液： 150.0%, 30t：水經濟部中央標準局員工消費合作社印製 0.1% 防腐劑，二甲基二硫代氨基甲酸鉀塩（ARACIT® KF) 0.1% tenside, C13脂肪族醇的羥乙基酯，含有8 -9克分子量的環氧乙烷（如B0RR0N® N) 攪拌60分磷灰石粉流出主浸液： 13 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 394795 *— -五、發明説明（ A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

150.0%, 28¾ 水 0.2% 得自地衣芽孢捍菌的鹼性蛋白酶，活性4000 LVU (如 ERHAZYM® S) 0.2¾ tens i de 0.1% 防腐劑，二甲基二硫代氨基甲酸鉀塩（ARACIT® KF) 0.5¾ 氫氣化鈉溶液，33%, 1:3 攪拌300分 pH值9.2-9.5 溫度27-29Ό 磷灰石粉流出脱毛液： 90.0%, 27°C 水 2.0% 鹼性蛋白酶，得自枯草桿菌，酵素活性2000 LVU (如 ERHAVIT® MM) 1.0% 産品A 0.1% tenside,正鏈烷磺酸鈉塩（如B0RR0N® A) 1.5¾ 硫化鈉，60¾ 2.5% 石灰水合物攪拌60分，靜置30分攪拌60分，靜置30扮攪拌60分 pH值12.2-12.5 溫度 26-27°C 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -1 >1 14 A7 B7 S94795 i、發明説明（) 磷在石粉流出石灰： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 100.0%, 271 水 2.5% 石灰水合物 0.5% 氫氧化鈉溶液，33%, 1:3 0.1¾ tenside，正一鏈院磺酸鈉塩（如borroh® A) 0.05%潤滑劑，高分子丙烯酸塩聚合物（40¾活性物質）攪拌30分，然後交替操作攪拌2分，靜置30分時間：12-14小時 pH值12.3-12.5 溫度26-27Ό 隣灰石粉流出持纊正常操作，不需加灰後處理例2 牛科動物皮虜之毛髮保存法脫毛處理材料：經濟部中央標準局員工消費合作社印製塩漬牛皮工作器皿：大桶，％ (百分比）資料以埴漬材料重量為準發酵浸液： 150.0%，30°C 水 0.Π 防腐劑，二甲基二硫代氨基甲酸鉀塩（如本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 15 A7 394795 五、發明説明（） ARACIT® KF) .0.1% tenside，Ci 3脂肪族醇，含8 - 9克分子量環氧乙烷（如B0RR0N® N) 攪拌60分磷灰石粉流出主浸液： 150.0%, 28°C 水 ' 0.2¾ 酵素浸泡劑，得自地衣穿孢桿菌，活性3000 LVU (如ERHAZYM® C) 0.2% tenside 0.1% 防腐劑，二甲基二硫代氨基甲酸鉀塩（如 ARACIT® KF) 0.5% 氫氣化鈉溶液，33%，1: 3 攪拌300分 pH值9.2-9.5 溫度27-29Ό 磷灰石粉流出脫毛液：

90.0%, 27°C 水 1.5% 産品A 2.0% 驗性蛋白酶，得自枯草捍_，酵素活性2000 LVU (如 ERHAVIT® MM) 〇. Π tenside,正一鏈烷磺酸鈉塩（如B0RR0N® A) 1.0% 石灰水合物，攪拌60-120分本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 -16- A7 B7 五、經濟部中央標準局員工消費合作社印製 394795 發明説明（ 1.2% 硫化銷，60¾ 攪拌60分，靜置30分攪拌60分，靜置30扮攪拌60分 pH值12.2-12.5 溫^6-27勺礎剩粉流出 1¾) 石灰： 100.0%, 27t!水 2.0% 石灰水合物 0.7% 氫氧化鈉溶液，33!K, 1:3 0.1¾ tenside,正一鏈烷磺酸鈉埴（如B0RR0N® A) 0.058：潤滑劑，高分子丙烯酸埴聚合物（40%活性物質），（如ROHAGIT® 3995) 攪拌39分，然後交替操作攪拌2分，靜置30分時間：12-14小時 pH值12.3-12.5 溫度 26-27°C 磷灰石粉流出持續正常操作，不需加灰後處理取代得自枝草桿菌之鹼性蛋白酶，在例1中亦可使用得自B. alcalophilus之鹼性蛋白酶，需進行計量以確保相同的解朊作用，可將結果與例1的結果比較，其最終皮革亦具有非常好的柔軟性、平滑性及顔色均勻性的特徵。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

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Claims

經濟部中央標準局員工消費合作社印製六、申請專利範圍：:iiy第83111382號專利再申請案申請專利範圍修正本修正曰期·· 88年12月 1 . 一種使用蛋白酶以作為加灰酵素之皮革及獸皮的加灰法’其中在一具有一 pH值在9 -14之範圍内的水性鹸性懸浮液中，該加灰酵素之使用濃度為每公斤皮箪或獸皮使用大於20,000至100,〇〇〇 LVU之酵素。 2 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該加灰酵素被容許對該皮革和獸皮發揮作用歴時至多3至6小時。 3 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該加灰酵素包含有在P Η值為8至14之範圍内具有一最佳的活性之鹼性 '蛋白酶。 4 .如申請專利範圍第3項之方法，其中該加灰酵素包含有在pH值為10至14之範圍内具有一最佳的活性之鹼性蛋白酶。 5 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該加灰酵素具有一彈性蛋白溶解活性。 6 .如申請專利範圍第1項之方法，其中在該加灰方法之開始時，將該加灰酵素與石灰及還原劑一起添加至該懸液浮中。 7 .如申請專利範圍第1項之方法，其中在該加灰方法開始之後，將該加灰酵素添加入該懸液浮中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ΙΦ 裝. 訂 CC 11 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

經濟部中央標準局員工消費合作社印製六、申請專利範圍：:iiy第83111382號專利再申請案申請專利範圍修正本修正曰期·· 88年12月 1 . 一種使用蛋白酶以作為加灰酵素之皮革及獸皮的加灰法’其中在一具有一 pH值在9 -14之範圍内的水性鹸性懸浮液中，該加灰酵素之使用濃度為每公斤皮箪或獸皮使用大於20,000至100,〇〇〇 LVU之酵素。 2 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該加灰酵素被容許對該皮革和獸皮發揮作用歴時至多3至6小時。 3 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該加灰酵素包含有在P Η值為8至14之範圍内具有一最佳的活性之鹼性 '蛋白酶。 4 .如申請專利範圍第3項之方法，其中該加灰酵素包含有在pH值為10至14之範圍内具有一最佳的活性之鹼性蛋白酶。 5 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該加灰酵素具有一彈性蛋白溶解活性。 6 .如申請專利範圍第1項之方法，其中在該加灰方法之開始時，將該加灰酵素與石灰及還原劑一起添加至該懸液浮中。 7 .如申請專利範圍第1項之方法，其中在該加灰方法開始之後，將該加灰酵素添加入該懸液浮中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ΙΦ 裝. 訂 CC 11 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）