TW380142B - An analgesic peptide for oral administration - Google Patents

Description

經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 __85. I %補充| 87_ 五、發明説明（4 ) 性仍然存疑。 此外，瑄些合成類鴉片胜肽作為口服劑使用之可能性 相當困難，例如，近年來廣泛作為癌症末期疼痛治療劑使 用之硫酸嗎啡之持續鑀釋放性口服劑之MS-抗痛（MS-CON TINE)的代替藥品一直尚未獲得。MS -抗痛之每日服用 最可能增加至兑單位Μ上，服用上也有造成困難之情形。 此外，也可能產生起因於組織胺游離所引起之騒癢副作用 ' / ，有時亦有不得不停止使用之情形。因此，期望能開發出 一種比嗎啡更安全及更有藥效之代替藥品。 〔發明之揭示〕 本發明人等為解決上逑課題，因而深入探討具有優異 鎖痛效果及具有口服吸收性之類鴉片胜肽衍生物。结果發 現M L-Tyr-(L或D)-ArS-Phe為基本骨架且端具有脒基（ amidino. group)之寡胜_肽衍生物及其塩類具有逭些特性， 因而完成本發明。 亦即，本發明之胜肽衍生物可用下列式（I)表示。 Η NH R1 CHaCeHs

I II I R2 - Η - C - L - Tyr - Q - N - C - CO - X (I)

II

〔實施本發明之最佳形式J 關於上述式中之取代基，Q為D-Arg(D -精胺酸之殘基） 或L-Arg(L -精胺酸之殘基）；R1為氫原子或Ci-ei碳原子數 1〜6個）烷基。其中，較好是Q為D-Arg及R1為氫原子之化 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 4 (修正頁） ---------φ.^-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 A7 B7 經濟部中央標準局員.工消費合作社印製 五、 發明説明 、3 ) i C 技 術 領 域 - 1 1 本 發 明 偽 有 關 可 藉 與 類 鴉 片 (〇 ρ ί 〇 i d) 受 容 體 作 用 以 發 k- 1 1 揮 鎮 痛 等 藥 理 效 果 之 胜 肽 衍 生 物 〇 ^- 請 1 先 1 C 技 術 背 景 聞 讀 1 I 與 嗎 啡 等 類 鴉 片 化 合 物 結 合 之 受 容 在 1 9 7 0 年 代 之 刖 月 之 1 1 注 1 半 卽 已 證 明 其 存 在 0 巨 刖 傺 將 類 鴉 Η 受 容 體 分 類 為 U δ 意 攀 1 項 I 及 K 三 大 類 0 嗎 啡 主 要 傜 作 為 U 受 容 體 ns 之 激 動 劑 (a g 〇 n i S t # ύ ί )而與之作用， 因而發揮鎮痛、 抑制腸管蓮動、 抑制呼趿 寫 本 頁 装 1 等 之 藥 理 學 上 的 效 果 〇 1 1 1 9 7 5 年 以 來 各 種 與 類 鴉 片 受 容 體 結 合 之 體 内 生 成 之 1 1 嗎 啡 類 似 物 相 繼 被 發 現 » 這 Xtfc 物 質 全 部 都 是 胜 肽 類 化 合 物 1 訂 > 總 稱 為 類 鴉 片 胜 肽 (〇 Pi 0 1 d p e p t i d e ) 0 類 鴉 片 胜 肽 之 藥 1 I 理 學 上 的 效 果 基 本 上 可 視 為 與 嗎 啡 相 同 〇 由 於 、-a- 洹 物 質 原 1 1 本 是 生 體 内 存 在 之 物 質 9 因 此 可 期 望 成 為 較 嗎 啡 安 全 之 藥 1 劑 〇 妖 而 9 天 然 之 類 鴉 片 胜 肽 由 於 在 體 内 動 態 平 衡 上 之 問 ( 」i 題 9 至 今 尚 未 作 為 醫 藥 品 使 用 0 1 | 1 9 8 0 年 代 9 由 青 蛙 之 皮 膚 分 離 出 含 有 D- 丙 胺 酸 之 皮 嗎 I I 啡 (d e r m 〇 Γ p hi n e )0 將皮嗎啡投與至腦室内， 其鎮痛效果 1 1 為 嗎 啡 之 大 約 1 0 0 0 倍 f 並 發 現 其 在 體 内 具 有 較 佳 之 安 定 性 1 〇 其 後 * 開 始 製 備 含 有 D- 胺 基 酸 之 合 成 類 鴉 片 胜 肽 〇 特 別 1 r 期 望 的 對 象 偽 可 作 為 鎮 痛 藥 使 用 而 又 不 具 麻 藥 性 質 之 對 K 1 1 受 容 體 具 高 選 擇 性 的 合 成 類 鴉 片 胜 肽 0 百 V-»- 刖 雖 然 臨 床 試 驗 1 l 亦 在 進 行 之 中 9 但 是 > 從 效 果 及 可 能 是 起 因 於 K 激 動 劑 所 1 I 産 生 之 副 作 用 進 行 撿 討 $ 巨 刖 將 其 作 為 醫 藥 品 使 用 之 可 能 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 3 五、發明説明会6

Α7 Β7 表3 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 本發明之胜肽衍生物 ED50 (mg/kg) s . c . P . 0 . 對照（嗎啡） 4.6 29.6 . H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-HHCH2CH2C00H 0.14 5.8 H2NC(NH)-TyrH「g-Phe-NHCH2CH2C0NH2 0.13 10.7 H2NC(NH)-Tyr~D-Arg-Phe-H(CH3)CH2CH2C00H 0.10 6.6 U2jjQ(fjjj)_Yyr-D-Arg_Phe-K(CH2CH3)CH2CH2C00H 0.15 16.0 H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-N(Me)2 1.22 #N. T. H2NC(MH)-Tyt*-(D)Arg-Phe-N(CH3)CH2C0NH2 0.27 N.T. H2NC(HH)-Tyr*Urg-Phe-N(CH3)CH2C00H 0.39 17.8 H2HC(NH)-Tyr*D"Arg-Phe-NHCH2CH2CH2〇H 0.88 N.T. H2NC(KH)-Tyr-D"Arg-Phe-H (CH3)CH2CH2C0NH 0.31 24.6 H2NC (HH) -TyrHwPhe-N (CH3)CH2CH2C00CH3 0.12 8.9 l-[H2NC(NH)*Tyr-D-Arg-Phe]-l^i!$-3-COOH 0.25 N.T. *N . T,:未試驗 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家搮準（CNS ) Α4规格（210X297公釐）26 (修正頁） 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 __85. I %補充| 87_ 五、發明説明（4 ) 性仍然存疑。 此外，瑄些合成類鴉片胜肽作為口服劑使用之可能性 相當困難，例如，近年來廣泛作為癌症末期疼痛治療劑使 用之硫酸嗎啡之持續鑀釋放性口服劑之MS-抗痛（MS-CON TINE)的代替藥品一直尚未獲得。MS -抗痛之每日服用 最可能增加至兑單位Μ上，服用上也有造成困難之情形。 此外，也可能產生起因於組織胺游離所引起之騒癢副作用 ' / ，有時亦有不得不停止使用之情形。因此，期望能開發出 一種比嗎啡更安全及更有藥效之代替藥品。 〔發明之揭示〕 本發明人等為解決上逑課題，因而深入探討具有優異 鎖痛效果及具有口服吸收性之類鴉片胜肽衍生物。结果發 現M L-Tyr-(L或D)-ArS-Phe為基本骨架且端具有脒基（ amidino. group)之寡胜_肽衍生物及其塩類具有逭些特性， 因而完成本發明。 亦即，本發明之胜肽衍生物可用下列式（I)表示。 Η NH R1 CHaCeHs

I II I R2 - Η - C - L - Tyr - Q - N - C - CO - X (I)

II

〔實施本發明之最佳形式J 關於上述式中之取代基，Q為D-Arg(D -精胺酸之殘基） 或L-Arg(L -精胺酸之殘基）；R1為氫原子或Ci-ei碳原子數 1〜6個）烷基。其中，較好是Q為D-Arg及R1為氫原子之化 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 4 (修正頁） ---------φ.^-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 ir Cl P| ' -r A 7 I .__85- 1- B7_五、發明説明（2 6 Ί g油ί例8 n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-^ Ala-OH 上述胜肽係MTsOH· /SAla-OBzl為起始原料，與實例 6阆樣由C-末端依序Μ液相法製造之。將被保護胜肽8〇〇_ Tyr^BzO-iDiArgC/^^Phe-zS Ala-OBzl Μ 4Ν.鹽酸-乙酸乙 酯處理，脫去Β 〇 c基後，於室溫搅拌下加入[(丙胺）碲代甲 基]胺甲酸第三丁酯J KDC及TEA·獲得被保護胜肽11-?广-N H C ( N Η ) - T y r ( B z 1 ) - ( D ) - A r g ( Z 2 ) - P h e -/9 A 1 a - 0 B z 】。將此 被保護胜肽溶於乙酸中*將鈀碳加至溶液中，吹送氫氣混 合之使接觸遨原。將鈀碳除去後，減壓濃縮，冷凍乾煉之 ，得到粉末之胜肽 n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/3 Ala-0H。此胜肽經胺基酸組成及質虽分析，结果均支持上述構 造。 W油i俐9 Ac-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/3 Ala-OH 將實施例8所得被保護胜肽Boc-Ty「（Bzl)-(D)Arg U2) -Phe-/3Ala-0BzlM4N鹽酸-乙酸乙豳處理，脫去Boc基後 ，於室溫攪拌下加人Ac-HNC(N-Z)Pyrazole(單乙醚脒基化 試藥），得到被保護胜肽 Ac-NHC(N-Z)-Tyr(Bzl)-(D)Arg( Z2)-Phe-/a/Ua-0Bzl。將此被保護胜肽溶於乙酸中，添加 鈀碳至溶液中•吹至氫氣混合之，使接觸遢原。除去鈀碳 ，減J1濃縮，進行冷凍乾煉而得粉末之胜肽n-Pr-NHC(NH) -Tyr-(D)Arg-Fhe_/3 Ala-OH。此胜肽經胺基酸及質量分.析 ，結果支持上述構造。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝— tt^n i nm 1 I 訂------^fr---------一- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4^格（210X297公釐） 2 6 - 1 (追加頁） A7 》 ^ B7_ 五、發明説明（5 ) 合物。R2為氫原子、Ct-6烷基、芳基、Cl-6烷醯基、或芳 基羰基。關於芳基、烷醯基、或芳基羰基，可為，例如， 取代或未取代之苯基，較好是未取代之苯基等的芳基；乙 醯基或丙醯基等之烷醯基；或苯甲醯基等之芳基羰基。 X 為-OR3、-NU4R5、或- NR6-CR7R8R9中之任何一種。 R3tf氫原子或Ci-6院基、R4示氫原子或Ci. - 6院基。R5示 Cl-6羥烷基或磺酸取代之Ct-6烷基。羥基或磺醯基可在烷 基之任何位置取代，但是較好是末端取代之烷基。R 4及 R5亦可一起和R4及R5上取代之氮原子共同形成5節或6節 之飽和雜環基，該雜環基亦可含有二個以上之氮原子。例 如，-NR4R5可使用1-哌嗪基、1-吡咯烷基或1-哌啶基等。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ---------1 装-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 又，X為NR6-CR7R8R9時，R6示氫原子，Ci-6烷基、或 苯基等芳基取代之C i -6烷基（芳烷基）。芳烷基可為，例如 ，苯甲基等。R7示氫原子；錢基；甲氧羰基、乙氧羰基 等之C t - 6烷氧基取代之羰基；取代或未取代之胺基甲醯基 ;羧基取代之Cl-6烷基；被取代或未取代之胺基甲醯基取 代之Cl-6烷基；或具有Cl-6烷氧基取代之羰基的Ci-6烷基 0 R8示氫原子；Cl-6烷基；胺基Cl-6烷基；脒基取代之 Cl-6烷基；胍基取代之Cl-6烷基、羥基C〗-6烷基；羧基取 代之Cl-6烷基、或被取代或未取代之胺基甲醯基取代之 C!-6烷基。或R6及R8—起和R6上取代之氮原子共同形成環 上具有羧基之5節或6節之含氮原子的飽和雜環基。此雜 環基可為，例如，2-羧基-1-吡咯烷基（-Pro-OH)或3 -羧基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 5

—補充I A7 . ' B7 五、發明説明（26_》 聰诰例

Ac-HHC(N-Z)-Pyrazo 1 e 將 H2NC(N-Z)-Pyrazole(依參考文獻：M.S. Bernatowicz, Y . y u 及 G . R . M a t s u e d a，T e t.r.a h..e.dr-QJL i. p 1.1. p r s， 34，3389-3392(1993)之方法製造）溶解於乾燥 之四氫呋喃中，-10Ό下加入氫化納後，於攪拌下加入 無水乙酸，得到目的物之Ac-HNC(H-Z)-Pyrazole。 ---------—— (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 26-2 (追加頁） 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐〉 A7 B7五、發明説明（） 基 乙 羧 為 7 R 如 例 是 好 較 中 基 代 取 些 這 ο 等 基 啶 呢

基 或 _ 子烷 原或 氫 ， 示基 R9氧 。烷 合 ， 組基 之烷 子 -原中 氫基 為代 R8取 及各 ，之 基述 乙上 醯 。 甲基 基烷 胺-6 或 C 自 來 了 除 物 合 化 明 發 本 /之 分(I 或式 鏈述 直上 為 可 及 基 殘 為 有 尚 外 另 外 子 原 碩 稱 對 不 個 兩 之 基 殘 ε Γ A- L 或 子 原 碳 稱 對 不之U 酸 7 胺R 丙Ξ.可 是 苯 中 但 之 ί 基 合子代 結原取 Q 碳各 與稱述 自對上 來不及 在 存 之 代 取 8 R 及 7 外 除 時 基 代 取 之 同 相 示 子 原 磺 稱 對 不 之 上 以 個 以來 (讀先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 自 為 可 子 原 碳 稱 對 不 之 外 以 基 殘 g Γ A- L 及 或式 型含 構包 式 明 發 本 又 ο <111 種 1 何 任 之 型 構 體 旋 消 、 體 性 活 學 光 何 任 之 示 所 物構 合異 化像 示鏡 所非 加 鹼 對之 或等 、 塩 塩胺 。 酸機 物乙有 合 、或 混塩塩 之酸銨 意塩其 任其及 其含以 及包 ， 以亦塩 ， 物成 r)合加 me化酸 之之 明等 St發塩 la本酸 (d磺 物 苯 ο Θ Γ e 甲 合端 化末 述 N 上 與 含端 包末 亦C-, 之 外物 物 合 合化 化些 示這 所及 式以 般 ， 一 物 述合 上聚 除 、 ， 物 又聚 〇 二 塩之 成物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 果 效 痛 鎮 之 佳 更 啡 嗎 較 有 具 〇 物 物合 合化 化肽 狀胜 環之 之明 成發 而本 合 結 作適 低望 降可 之此 動因 脈 ， 臓 低 心較 及亦 用 性 作耐 離叉 游交 胺之 織啡 組嗎 之 與 起 ， 弓弱 所為 用啡 作 噍 痛較 鎮則 隨 用 、 經 藥括 投包 。 内 ，用 脈如使 靜 igi 可 如 ，亦 諸藥等 用投劑 採之收 可式吸 式方皮 方他經 藥其及 投 。以 。等劑 劑藥製 療投收 治口吸 痛經膜 疼 、粘 症藥之 癌投收 於下吸 用皮鼻 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX297公釐） 6 修正 A7 B7 五、發明説明（2 6-> 經濟部十央標準局員工消費合作社印裝 w 2 z Π I s π η 1 5 $ α 6 $S ? α 53 k oo 1 抖 • 'V ΒΓ ? s r^* Q 2 /¾ 2 • 2： β Χ η X "η ί α ί η 8 〇 O 3 »n § 其 ο Id On b O S ' s Μ S b »—· s 減 1 b 彦 CO 爾 •κ： CC m b 1 N· t ,? w O ^ m > « ΕΓ V\ 1 I» 龙 a 痒 W 1 w冰 Pf TO 0> K » .垚 s 垚 o 自 Q \〇 cv Q 00 NM M Q X •Cw 姻 00 a 4jg 1 s z U) I’W 抖 δ 8 § » σ' HfSB !5 ON ;S| Ξ!Ρ Wn ··· 械忒 粞w 酿！ 〇\ 商郐 商筇 V、 Γ3 •^s + mS ifi -α. > 蓮& «]· is X 咖 + X m 〇u + Μ > 酿s

Ms S t# (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26“3 (追加頁） A7 - 1 B7 五、發明説明（7 ) 本發明之胜肽衍生物可經由一般胜肽合成方法使用之 固相法及液相法予以合成。例如，可先採用固相法合成不 含脒基之胜肽鏈，然後再於酪胺酸（tyrosine)之H -端導入 脒基而製得預期之胜肽衍生物。此外，亦可於導入脒基後 對C -端再作修飾。胺基之保護基以及縮合反應之縮合劑已 有許多悉知之優異産品，可參考以下之實施例。另外，亦 可參考下列文獻資料，例如：鈴木紘-編著，蛋白質工學 —基礎及應用，九善（株）（1992); M. Bondanszky, et al .,"Peptide Synthesis", John Wiley & Sons, N . Y .( 1976)； J. M. Stewart and D. J. Young, "Solid Phase Peptide Synthes is" , ¥ . H . Freeman and Co., San

FranCiSC〇(]969)等。採用固相法時，可使用市售之各種 胜肽合成裝置，例如，Perkin Elmer, Japan (舊公司名為 Applied Bio System)製造之Model 430A型裝置，相當方 便。使用於合成之樹脂、試藥等均可容易地由市面獲得， 如下列實施例所示。 〔實施例〕 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 以下以實施例更具體而詳細地對本發明加以説明，但 本發明並不受限於這些實施例。參照本發明實施例或將其 予以修飾或變更、或將起始原料或反應試藥作適當之選擇 ，均可容易地製得上述一般式（I)所示之本發明胜肽衍生 物。又，於實施例中，胺基酸基之意義偽指一般同樣的意 義。論及D -異構體及L -異構體時，如未特地標明D -胺基酸 ,則偽指L -胺基酸。又，下文中因常使用簡略代號，如未 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 7 日 月 WX- 3 # -A4'- ΛΗ? ^

A

7 B 五、發明説明（2 6

H,NC(KH>Tyx-D-AJg-pb^(n pr)PAia OH ^NC<NHvTyr-D-Ar'pf OMe HJNC{NH'Tyr-D-AT'pbc-NHMe H2zn{NH>-Tvr-D-Ar'pbe>-PAJa01 ^NdYTyr-D-Ar'pbe-Gly-ofl 0MNCirm>Tyf-D-Ar'pff,AJroffi HJzc(KH>-Ty?D-Arg-pb^Mep Abba J= m d S' i zQ *r^ x

3» IntF (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i rs 1,00rs 1.00 1.8 l .00 B* § ΗΓ ·00 ·00 1.0】 0.99 0.0» 【.00 1,02

Ibl PAia 2y 0.95 Ala P95 爾 m E· m m Nf I 昏 U) 垚 訂 φ· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C31H45MS6 so £0 (M+Hr C26H3§805 C2S37N904 C28H4IN905 C27H37Z906 C28H392906 C3E45N906 MO 541{Vi 十 ΗΓ 539 540 fM+H3, 583 § 5S3 584 (M+Hr 597 598 (M+ffir 639 640 CT姻W min SB 獅$ 酿耷wr Ο w 2爸 v〇 s OS s> Lf\ s Q\2 4*s

Et Ί6 抖. 商部 Wi"§' 菌s if 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26-4 (追加頁） A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（δ ) 1 1 特別説明， 則 其代 號 之 ,Q»、 義 如 下 ：' 1 Ζ ： 苯甲 氧 基 羰 基 .1 0 T c e ： 三氯 乙 酯 基 ，~、 請 I 先 1 B 〇 c t-丁 氧 m 基 閱 讀 1 I WSC I ： 1-乙 基 -3 -( 3 - 二 甲 胺 基 丙基） -磺化 二亞 胺 η 之 1 1 注 1 TosOH 對-甲苯磺酸 意 孝 1 項 | OBz 1 * 苯甲 氣 基 # Η He/3 k] a Wi β MeAla * N - 甲 基 -β — 丙胺酸 寫 本 頁 装 1 H- ^ A 1 a - ο 1 ： NH 2CH2CH2CH2 OH 1 | F m o c 9 -芴 基 甲 氧 基 羰 基 (9 -f ]u 〇 r e n y 1 ~ 1 1 ffl e t h y I 0 X y c a r bo n y 1 ) 1 1 訂 P in c j 2,2, 5 , 7 , 8 - 五 甲 基 色 滿 - 6 _磺 醯基 1 I t - B u : 第三 級 丁 基 1 1 NMP ： N -甲 基 吡 咯 院 酮 1 DMF ： 二甲 基 甲 醯 胺 1 i DMSO * 二甲 基 礎 醯 胺 TF A ： 三氟 乙 酸 1 1 TEA * 三乙 基 胺 1 1 DCM ； 二氮 甲 烷 1 1 DMAP = N , N - 二 甲 胺 基 吡 啶 1 DIPEA N , N - 二 異 丙 基 乙 胺 1 1 DIPCI N , N - 二 異 丙 基 碳 化 二 亞 胺 1 1 HOB t ： 1 -羥 基 苯 並 三 唑 1 1 EDC 1 - (3 -二甲胺基丙基） -3 -乙基 -硕化 二亞 胺 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（C摩規格⑺0-X2贈）

五、發明説明（2 6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -NcfNHyryr.D-AI'ph^NlKCH^COMNt ~NQNH>Tyr-DIATg-plle-ose 1.00 1.00 1.03 1.00 PAJa 1_°2 QH41N906 C26H36N805 63 J 6129?}· 540 54UM+3, 撂造式 表1之代合物 HjNQNHXTyr-D-Arg-Phe-MepAk-OlI 搰造式 1 實施値7之化合物 π η 1 1 3 ^ ? ? 1" S ^ | 女 9 I ^ 6 1 Phe 0.90 Phe 1 1 7 | m ί b ο 胺基酸分析 Ate MeDAJa i 'g -- s s 其他 其他 CT1 姻 Wi Ξ!)ϊ3| 商筇 酿 C29H41N906 611 612(Μ+Ι〇* cv 掘 画已 商 η ο c 〇 ra ra t t Z 2 1 ^ On ON 0\ W k) Ό L/t ε s O 〇\ 2 2 ：c i: Phe 爾唞®φ^? An; MeQAla ^lNsllj酿 Μ'ίδ0ί6Ν·^φ菪 .-mil (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂—— ------ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ297公釐） 26-5 (追加頁） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（9 ) HBTU : 2 - (1 Η -苯並三唑-1 -基）-1 , 1 , 3 , 3 -四甲基鏠 •六氟磷酸塩 P y B r ο ρ :溴三（吡咯烷基）麟♦六氟磷酸塩 Alko樹脂：P -烷氧基苯甲醇樹脂[4-羥甲基苯氧甲基 共聚苯乙烯U二乙烯苯樹脂、J . m . Chem. Soc.， 95， 1325(1974)],渡邊化 學工業

Fmoc-NH-SAL樹脂：4-(2',4’-二甲氣基苯基-9-芴基 甲氧羰胺基甲基）苯氧基樹脂，渡 邊化學工業 富掄例1

H2HC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-HHCH2CH2C00H 使用 Applied Bio Systems (ABI)公司之 Model 430A 胜肽合成裝置，以固相法（Original Autogram for the Fmoc/NMP method)依下述操作合成上述之胜肽。. 將 Fmoc-/Q -Ala-Alko 樹脂 0.25nimol/675nig 以 NMP 洗滌 一次，以含有2 0 %吡啶之Ν Μ P處理4分鐘，然後再以同樣之 含有2 0 %吡啶之Ν Μ Ρ處理1 6分鐘。以Ν Μ Ρ洗滌5次後令其與 Fmoc-Phe-OH反應61分鐘。繼之以ΝΜΡ洗滌4次，由第4次之 洗滌液中回收樹脂，使未反應之胺基與醋酸酐反應。 以上之操作一循環需時1 2 0分鐘。第二循環改用F π» 〇 c -D-Arg(Pmc)-〇H取代Pmoc-Phe-OH,其餘同樣地實施。第三 循環則改用F m 〇 c - T y r (t - B u ) - 0 Η。關於側鏈保護基，對D - _Arg係使用Pmc;對Tyr傷使用t-Bu。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、tT # 9 年 /.·?> -·** Wjr- 8544麵无.i A7 B7 五、發明説明（2 6-jfe /i,2c2H>Tyr.D-Arg-phe-NHCH<CHJnHJ0H HJ'NCO'lHVT'yr-D-Arg-pi'e-AJg-N.F' HJzc{N>Q-Tyr-D-Arg-phe、Leu0H HJNC<KH5TyT-D-Arg-ph?0K "2c<NH>Tyr-D-AJrg-pllc-Giy0tt HJ^ctNH}-Tyr-D-Aig-PI!?A"'OH H, NQ NH} -Tyr-D-Ar'phe 丨 Ala -OH 5NclvTyr-D-Arg-ph?N{CH,K:H,c^OH. H^ciNHYTyr-D-Acg-pbe-NicHOQ-OOOMe H3NcfNH>Tyr-D-Arg-pb?Glyr2H, ^NcfNH>Tyr‘D-ATg-pbe-N{Q13xcay,CONCMe)3 ^zc{NH>Tyr-DArg-pb?PIO-OH HJNC{NHYTyr-D-Ar'pfl?zHMC ^NcfNHVryr-D-ATg-pbc-NfcH^CH^CONlKn.HCX) l .00 K2Nic{NH>T7r-I>-AIglphe-NH:Et Ibo HJNC{NHvTyr6-Arg-ph?D.Ala-N-1‘00 HJNClNH>-Tyr6-Ai'pb?:N{Q€CH(CH^C8H 1.00 ^NqNH>Tyr-D-ATg-D-ph?N(Ql3)CH(CH3}oc>OH 1.02 1.00 1.00 00 i 00 00 00 s 00l.s P9M 1.00 l_00

1.05 1.97 Ibo t.2 0. 9°· ?99 1. § Ibi 1.03 0.% rs S6 J.OJ 1.03 P99 1.00 1.2 PS

Ibo丨 0.97 ·00 ---------©in (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

Ala P96

Leu rs Gly 0.95 Asp 】°5 Ala 0.95 Sar 1.0】 Gly 0.98 Pro 1.05 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C28H4 5 905 583 03 IBS21305 C3LH45N906 639 C25H34N805 n27H37N906 583 C29H39N908 641 C28H39N9Q6 597 028H41N9O5 5S C29H459C6 611 C27H38N1005 582 n3JH4§】85 638 C30H-UN9O6 623 C26H37N904 539 C35H54NJ005 s厶 C2739N9CM 553 C28H4S1005 596 C29H4 5906 6二 C29H4S906 611

s4 (M+H· 682 (S+Ky 2°(si· .527 {2+Hy 584 (Mi)· 642 fM+HZ 598 {M+5· 584 (M+3· -2 <s+s· 583 (M+Hr 29 S+Hr 62λ(μ+η>· 540 fM+HT 695 (M+H· 354 ?Hr 597 (Μ+ΗΓ 612(MiIr 6J2 2+HT 本紙張尺度適用t國國家揉準（CNS )八4規格（210X297公釐） 26-6 (追加頁） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（10) 將上述操作所得之樹脂5 0 0 m g與酚（結晶）0 . 7 5 g ,乙烷 二硫醇0.25ml、水0.50ml及TFA 10.Oml於室溫下混合攪拌 3小時，當胜肽自樹脂中釋出時，其保護基亦同時被去除 。然後以3 μ m過濾器（A D V A N T E C - Ρ ο 1 y f 1 ο η過濾器）過瀘，於 濾液中添加2 0 0 m 1之冷乙醚。以3 μ m過濾器（A D V A N T E C -Polyflon過濾器）過濾收集生成之沈澱物。將過濾器上之 沈澱物以2 N乙酸1 0〜2 0 m 1溶解，冷凍乾燥而得粗胜肽産物 〇 將粗胜肽産物1 3 5 m g溶於1 3 . 5 m 1之水，添加1 Μ之0 -甲 基異尿素1 3 . 5 m 1 ,於4 °C攪拌1 4天，令其進行脒基化作用 。將所得粗製之脒基化胜肽1 0 6 m g溶於2 0 m 1之0 . 1 % T F A水溶 液中。以0.01N塩酸調PH至4〜5，以Gilson HPLC条統進行 胜肽之精製。HPLC僳使用Cosmosil Ci8管柱，以0.1%TFA 水溶液及含有7 0 %乙腈之0 . 1 % T F A水溶液進行連續濃度梯度 之洗提（混合比開始時為0 %，至4 5分鐘後之6 0 %為止），流 速為1 0 m 1 /分鐘。 將所得之精製胜肽取約10〇Mg置於加水分解管中，添 加含有0 . 2 %酚之6 N塩酸1 m 1 ,脱氣封管，然後於1 1 0 °C進行 水解2 4小時。室溫下冷却後於4 0它濃縮乾涸。以0 . 0 1 N塩 酸1 m 1溶解，將溶液2 0 μ 1以胺基酸分析儀進行分析[分析儀 :日立L-8500;管柱：Hitachi Custom離子交換樹脂ft 2622;前置管柱：Hitachi Custom離子交換樹脂W2650L; 緩衝液：鋰緩衝液（0.09^-?^.8，0.251^1^.7,0.721^-PH3.6, 1.00N-PH4.1,再生 0.20N)，反應溫度：135°C, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 II X . 10 8 月 年 3 6 2 /V 明説 明發五 E!-HNGCNH}-Ty^cD)AIg-ph9NkpAia-OH Et-HNCiNH}.Tyr-CD)Arg-phc^ AJa-om .00 l.s bo 1.2

Phc r-J --1 --.

A B L2 pAla P98 0,^0ss Arg McDAia_K fg -NONH>Tyr-D-A^-pbe-NHC(CH-COOK LOO P96 ^NQNS.Tyr-D-Arg-phc-fR'NHC-PHJCOOH 1.00 0.95 ^NQKHvTyr-D-Axg.ph=-D-AIa0H l.§ 0.99 ^ζαΝΗ>τ7Γ-ΑΓΒ-ΡΗ?Ν(€Η3)(β~030Η LOOr05 -NciKH>TyrD-Arg-phc-NHCHJC-SOJH l bo 1.0 J '【HJNC{NH}-Tyr-D-Arg-phe'pipc3-dinc 1.00 1.20 J-fHJNCCNtivTyr-D.Arg-ph-—pipcrazine 1.0Q l.£ H3NC{NH>Tyr-Arg-phez(CH,pH,)(CH^CO0K J .00 1.27 ^NC{2H>Tyr-Ar'phe^R.S>-NHCH3CH<c-}COOB I bo 1.05 HMNC{NH>Tyc-AX^-phc-N<a^cB3)(CH,v:OOMC 1.00 L32 H^ctNHVTyr-AT^Phi^phc-offi 2‘0°0.96 1.04 ---------— — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ

Tau 0.99

Ala 0.96 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 i) 1-姻抖 n-wlg 减韹酿 n3LH45N9Q5 639 εοίΜ+3* 门 30H5N9O6 625-6 CM+}°， C29H4W906 C29H41N906 C2SS 窆 906 C29H412906 C27B39N907S owom— C29H42NJ84 C35H45N9Q5 C2955906 C3JH45N9C6 6二 612?ΗΧ 611 612{M+Hr 597 598 (Mi*611 612(s+qr 633 634 (M+Hr 593 594 (f5* 594 595^+5‘ 687 s^611 612(M+Hr 639 640 fs+HT 673 674 (2+3- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26-7 (追加頁） A7 B7 五、發明説明（n ) 緩衝液流速：0.30ml/min,寧海準_(ninhydr.in)流速： 0.35ml/min,檢出器波長：570nm/440nm,分析時間： 1 5 0分鐘]。胺基酸分析結果支持上述標題化合物之構造。 另取精製胜肽約15〇με溶液25〇μ1之5%乙酸溶液中，取 溶液1 μ 1以液態S I M S進行質量分析（M S , M S / M S ,使用鉋離 子槍，分析儀：Finnigan TSQ700, Matrix:甘油-硫代 甘油（1 = 1 ),碰撞氣體：A r ( 3〜5 m T 〇 r r ),碰撞能量：-20eV,電子放大器：1000-1500V)。分析結果亦支持上述 標題化合物之構造。 窨掄例2 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-NHCH2CH2C0NH2 合成反應開始時，使用F m 〇 c - N Η - S A L樹脂0 . 2 5 m m ο 1 / 3 8 5 m g ,於反應操作第一循環，第二循環及第三循環依序 分別使用 Fmoc-/3 -Ala-OH, Fmoc-Phe-ΟΗ 及 Fmoc-D-Arg( Pmc)-0H，再於第四循環使用Fmoc-Tyr(t-Bu)-〇H。其他操 作則與實施例1相同。如是而得上述胜肽衍生物。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 至於脒基化胜肽之合成與精製，除混合液偽使用0 . 〇 5 %犠酸水溶液及含有7 0 %乙腈之0 . 0 5 %蟻酸水溶液外（混合比 為Η P L C開始時0 %，至4 5分鐘後之4 0 %為止，以連續濃度梯 度之方式洗提），其餘與實施例1之同樣方法操作。胺基 酸組成分析及質量分析亦與實施例1同樣地實施。分析結 果均支持上述標題化合物之構造。 奮掄例3 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-N(CH3)CH2CH2C00H 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 11 85 月 ο 3 ^\DO 6 2 /_V 明説 明發五

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7 B

n-pr-HNCCNS-TyKD^r'phe-AJa-OB ph-HNC(KH>Tyl>CD)Arg-??PAJa-OH AC-HNCCNH^-T^r-CD) Arg-p-?p Al¥OH -zCCNH>Tyr-p)Axg-phc-3u〒pr) H,NQKH>TyKD)Arg-pbc-NH(CH3-OH 5NQNH>TyI-<D)Arg.phe,KHCH(CH,)CH,OHBJ ^Νη^Ηντ^τα^ΑΓ'ΡΗΟ-ΝΗίαί^οΕ ^NQNHyryrct^Ar'Fhc-Gl'OMe ^NC{NH>Tyr8)AIg-ph^<?lyle H^c{NHJ-Tyr-(D)Arg-pbe-MeGl'°H -NciKH>TyrB)Arg-ph?A1a-OMC nJNCiNIiyTyr.cD)AIg-ph?Ala-NH^ HJNCfhrH>Tyr-o:>)Arg-Fhe-AJa-NHMe H2zc(NH>Tyr(D)Arg-phe-(D)A'NHMe KJNQNHKryr-iE^Arg-Fh又 D)MeAla-°tr EJNCfNH丫 Tyr-(D)Arg-ph?PAla0H 1.00roo lb5 1.00 1,00 roo roo ·§ roo 1.03 1.03 1.2 1.02 roorooroo

P96 0.97roo 0.95 0.96 Γ2 P94roo Ibl【boroo 1,00rooo.s 0.99 KOI PAlalbl

Gly Gly sar Ala Ah Ala Ala 1.04 P95 0·94o.s p96 0.95 0.95 PAJa ogw pAla P99 PAla 0.97 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C28IS1N9D4 C2759N905 n2s41N905 C29H43N905 G2i9N906 G2°°Hi5 C28H39N906 C29H45906 C2S40N185 C2S42N10O5 €2^=4¾ 1005 029H4m906 C2°°H39N905 638 569 583 597 597 596 597 611 596 610 610 6】I 597 C30H41N907 639 § cm+h* S9 fM 十 HT 570<M+Fi) 52"十3 -8ίΜ+Η} 59804+3 597 <M 十 H> 59891+3 612(M+H> 597 ?Hy 6Π {M+H} 6U{M+Hy 6l2(M-fHr 59gis+Hy C34H43N906 673 674 {M+s, C31H45N906 639 640 CM+- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26-8 (追加頁） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ' B7 五、發明説明（i 2) 根據Pmoc/NMP方法，採用固相法依照下述操作方式合 成上述構造之四肽衍生物。 將A 1 k 〇樹脂0 . 5 0 0 g以6 m 1之D M F處理，令其膨脹，然後 添加 Fmoc-N -甲基-丙胺酸（Frooc-/S -MeAla-〇H)0.228g 及吡啶0.093ml,振盪1分鐘，繼之添加2,6 -二氯苯醯氯 0.147g，振盪24小時。將生成之Fmoc-/S-MeAla-Alko樹脂 依序分別以6 m 1之D M F洗滌三次，以6 m 1之甲醇洗滌三次， 再以6 m 1之D C Μ洗_三次；未反應之羥甲基則於6 m 1 D C Μ中 添加0 . 0 δ 9 1 m 1苯甲醯氯及0 . 0 8 4 7 in 1吡啶振盪反應1小時， 令其進行苯甲醯基化反應。再將胺基酸樹脂依序分別以 6 in 1之D C Μ洗滌三次，以6 m 1之D M F洗滌三次，以6 m 1之甲醇 洗滌三次，然後置於氫氧化鉀之乾燥器中進行真空乾燥。 將F ία 〇 c - /3 - M e A1 a - A1 k 〇樹脂依序分別以1 2 m 1之D M F處 理三次，含有20%哌啶之DMF 12ml處理三次，再以12ml之 DMF處理六次，以去除Fmoc基；添加Fmoc-Phe-OH 0.262g 、PyBrop(渡邊化學工業）0.315g、NMP 6ml 及 DIPEA 0.273ml,振鹽 24 小時，生成 Fmoc-Phe-/3-MeAla-Alko 樹 脂。過濾，以之NMP洗滌，將未反應之胺基在1-乙醯基 眯唑0.248g及含有0.0784ml DIPEA之DMF 6ml中處理1小時 而予以保護。繼之，將所得之樹脂以6 π> 1之Ν Μ P洗滌。 依照上述同樣之操作，將Fmoc-Phe-0 -MeAla-

Alko樹脂中之Fmoc基去除，添加Fmoc-D-Arg(Pmc)-〇H 0 . 5 57 g , HOBt 0 . 121g , HBTU 0 . 2 9 9 gS DIPEA 0.2 7 4ml, 振·1 小時，而生成 Fmoc-D-Arg(Pmc)-Phe-UeAla-本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

12 —2¾. m:::— 年月^修-jL.. 、S .* *Λ A7 ' ' B7 ί It] 五、發明説明- .HJzciNl°TyrAD)Arg-Fhc 丨 Mcp AJa-OK H,NQNs-TyKD)ATg-n?MepAk-NH, HJNn{NHyTyr-{D) AjTg-Phc-Mc P A1 一-NHMc -zc{NH}-T>ZD)Arg.rhc,系 PAJa-ssl -zQNH>Tyr CD)Arg-rhc-系 PAla-NH(n-pr) RJNQNHKrJTASArg-pbc-iv^PAIa-NCEOJ tt,NC{NH>Tyr-8)Arl-phc-BPAla-OMC - -ZGtKHyryc-tD^rg.pbeASAf'NII, EJNQKn^TyrctoArg-pllc-AS-OH ilJNGCNHl-ryr.ccoArg-phc-saJ-OH H,zCCKH}-Tyr-CD)Arg-ph?p30H H,2QNHJ-ryr-CD)Arg-pbc-pr?OMe

Jbo l bo Jbo ~03 roo roo 1.32 1.96 0.95 1.00 G.96 0.9Λ roo I.Q5 0.96 0.97 1.00 J.05 0.97 i.oj roo .00 1.06 sg (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

LOD 0.96 1.0} roo 1.05

LOO A5= sar Pro Pro

P97 0.9λ 】.05 P9B 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 n33H50N185 666 n3JH45N906 639 031H47N1305 6-C3357N908 697 C28H39N906 597 Gas 623 C31H43N906 637 667 {m+b)· 20{M+H· S2 ?3, 69°·{μ+μ)· 59S <M+ey 624 {S+H}· 63°°{Μ+ΗΤ S95S906 6二 612 CM+HV C29H42N1005 610 6=(2+H)· C30185 624 625_(M4Hr c31H46Ni85 6300S9 艺+®· C32H48N185 652 653 fM+Hy i------ΐτ------0-------—--------- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 26-9 (追加頁） A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（ 1 3) 1 A 1 k 〇 樹 脂。 繼 之 9 依 前 項同 樣 方 法 進 行 過濾 、 洗 滌 將未 1 反 應 之 胺基 予 以 保 護 〇 1 Ί 依 照上 述 同 樣 之 操 作， 將 F m 0 C -P he -β - Me A 1 a - A 1 k 〇樹脂 /·^·« 請 1 先 1 中 之 F m 0 C基 去 除 9 添 加 F m 〇 c -DFdTy r ( t - Bu )- 閱 讀 1 背 1 0H 0 .3 1 0 g、 Η0Β t 0 . 1 0 3 g > ΗΒΤϋ 0 .2 56 g、及D IPE A 面 之 1 注 0 . 2 3 5 m 1，振盪1 小時ffi ί生成F ffl 0 c - Ty r (t - B u )- D- Ar g ( P in c ) 意 1 項 I -P h e -冷-M e A 1 a - ή 1 k 〇 樹 脂。 繼 之 > 依 _、人 刖 項同 樣 方 法 進 行過 再 4 —1 裝 1 濾 洗 滌， 將 未 反 應 之 胺基 予 以 保 護 ο 寫' 本 頁 依 照上 述 同 樣 方 法 操作 y 將 F m 0 C -Τ y r (t -B u) -D -A r g ( S' 1 1 Pm c ) - P h e - β - Me A 1 a - A 1 k 〇樹 脂 中 之 F ίο 0 c 基去 除 » 添 加 依照 1 | Ma t s u e da等 人 之 方 法 (The J 0 U r η a 1 0 f 0 r g a Π 1 c 1 訂 Ch e in is try, 5JL, 2 4 9 7 - 2 5 0 2 9 1992 )製備之1 Η - 吡 唑 -1 -磺 1 I 化 胺 肟 (1H- Py r a Z 0 1 e -1 -Car bo x a mi d i n e )塩酸塩0 .989 g , 1 1 DIPEA 1.293m 1 及 DMF 6 ml， 於 10 60 °c (較好是40〜50 °C ) 1 1 反 應 4小時， 令N末 丄山 m 之 酪胺 酸 的 胺 基 進 行脒 基 化 反 應 〇繼 ! X 之 $ 過 濾、 洗 滌 (NMP 6 m 1洗 滌 三 次 f 再 以甲 醇 6 m 1洗滌三 1 1 次 ), 然後S >氫氧化鉀之乾燥器中進行真空乾燥。 1 I 將 上述 操 作 所 得 之 樹脂 5 9 6 g 置 於 玻 璃過 濾 器 上 以 TFA 1 I 酚 與 水之 U 合 液 (TF A :酚 • 水 = 93 :2 :5)5 ml 處 理 1 小時 1 1 I 然 後 過據 0 進 行 同 樣 操作 兩 次 0 再 將 樹脂 以 5 ml TF A處 1 理 5 分 鐘， 再 行 過 濾 〇 進行 同 樣 操 作 三 合 併 收 集 各濾 1 1 液 $ 於 2 0 °C 以 下 之 溫 度 減壓 蒸 餾 去 除 溶 劑。 於 殘 渣 中 加 1 1 20bi 1 乙 醚， 生 成 白 色 沈 澱、 丟 棄 上 清 液 ，如 曰 疋 操 作 三 次。 1 I 將 所 得 白色 粉 末 溶 於 20 m 1水 9 置 於 分 液 漏斗 中 以 5 in 1乙醚 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 13 年月 β Ig.-i匕 A7 . ' ___1. #;j B7_ 五、發明説明~ ~ 註1:胺基酸分析依J, Vendrell等之方法[J,Chroinat〇s「. 401-413(1986)]實施。即，取約0.5奄克胜肽於加水 分解管中•加入1奄升之6N鹽酸*抽氣封管後110Ό下加水 分解24小時（加水分解裝置：島津製造廠AHST-1)。於室溫 冷卻後減壓使乾固•置於5奄升純水中溶解。取此溶液5 微升予Μ減壓乾固，殘餘物中於70C 下加入20微升之50 mM NaHCOa媛衝溶液（ΡΗ9.0)· 40微升之單醢氛/乙腈溶液 ，加熱10分鐘。將反應溶液減壓濃縮，將殘餘物溶於100 微升之50¾乙酵，取20微升作HPLC分析（装置：JASC0LC-800 型，管柱：Hovapak C 1 8 60 A 4 u in ( 3 . 9 x 1 5 0 m id )，溶 提液：（A)含有9idM磷酸納鑀衡溶液（pH6.5)之4%DMF及（B) 含有乙腈之4¾ DMF·用Μ梯度溶出•管柱溫度：50¾ ，流 速1奄升/分鐘，偵測器之波長：UV 436nm)。 至於胺基酸分析•每一個樣品均偵測賂胺酸，於N-端 經修飾之賂胺酸及其變化體之混合物也予Μ偵测。彼等構 造及生成比因化合物不同而無法定最。但是，依據上列物 性數據及下列官能基定性試驗，脒基及經取代之脒基附加 於賂胺酸之《-胺基至為明顯。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 試驗項目 结果 備考 茚滿三嗣里色試驗 陰性 末端胺基經修飾 保里（Pawly)試藥 陽性 胳胺酸羥基處無取代基 坂口試藥 皤性 存在未經取代之胍基 在爨h刹用夕可抽忡 本發明之胜肽衍生物可使用於癌症疼痛之治榭，在產 業J:相當有用。____ 本紙張尺度逍用中國國家捸準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~~ " 26-10 (追加頁） 經濟部中央標準局負工消費合作社印製· A7 B7 五、發明説明（14) 洗滌三次。將水層冷凍乾燥而得粗製之脒基化胜肽。 將粗製之脒基化胜肽5 6 . 2 m g溶於1 0 m 1之0 . 0 5 % T F A水溶 液中，以島津Η P L C条統精製。Η P L C管柱為Y M C D - 0 D S - 5 -ST Ci8管柱，洗提溶劑為含有0.5%乙腈之0.05% TFA水溶 液及含有7 0 %乙腈之0 . 0 5 % T F A水溶液的混合液（混合比為 HPLC開始時為0%,至50分鐘之90%為止，採用連續濃度梯 度法，流速為1 m 1 / m i n )。依實施例1之同樣方法進行胺基 酸組成及質量分析，結果均支持上述標題化合物之構造。 實旆例4

H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-N(CH2CH3)CH2CH2C00H 依照F m 〇 c / Ν Μ P方法，採用固相法，依照下述之操作合 成上述構造所示之四肽衍生物。過濾偽使用玻璃過濾器。 將A 1 k 〇樹脂1 . 0 0 0 g以1 2 m 1之Ν Μ Ρ令其膨脹，然後添加

Fmoc-N -乙基 _丙胺酸（Fmoc-^ -EtAla-〇H)0.475g 及 DMAP 0.017g,振盪1分鐘，繼之添加DIPCI 0.177g,振盪 2 4小時。將生成之F m 〇 c - yS - E t A1 a - A丨k 〇樹脂依序分別以 Ν Μ P 1 2 m 1洗滌三次，甲醇1 2 m 1洗滌三次，再以D C Μ 1 2 m 1 洗滌三次。將未反應之羥甲基於12tnl之DCM中添加苯甲醯 氯0 . 1 7 8 m 1及吡啶0 . 1 7 0 m 1，振盪1小時，進行苯甲醯化反 應。再將胺基酸樹脂依序分別以1 2 m 1 D C Μ洗滌三次， 1 2 m 1 D M F洗滌三次，1 2 m 1甲醇洗滌三次，然後置於氫氧化 鉀之乾燥器中進行真空乾燥。 將Fmoc-/3-EtAla-Alko樹脂以20ml DMF處理三次，繼 之以含有20%哌啶之01^1211'1處理三次，再以1211110料「處 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . I 装 訂 I. # 14 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（ 15 ) 1 理 •- 次， 以 去除 F m 〇 c 基 添 加 F m 0 C -P h e -0H 0 . 3 8 7 g , 1 Py B r ο p 0 .4 6 6 g , NMP 1 2 m 1 , 及D IPEA 0 .523 ml > 振盪 2 4小 1 Ί 時 t 而生 成 F m 〇 c -P h e -β - E t A 1 a ™ A 1 k o樹 脂 0 過 ί慮 ,以 請 1 先 1 12 ml NMP洗 滌， 未反 m 之 胺 基 則 以 含有 1 - 乙 醯 基 眯唑 閱 讀 1 1 0 . 55 U及 D IPEA 0.174m 1 之 DMF 1 2 m 1處理1 小 時 9 將其 予 以 面 之 1 注 保 護 。將 所 得樹 脂再 以 12 ml NMP洗 滌。 意 孝 1 項 I 將Fin 0 C -P h e -β - Et A 1 a - A 1 k ο 樹 脂依 上 述 同 樣 方法 操 作 # 4 以 去 除Fm 0 C 基。 於樹 脂 中 添 加 F m 0 C -D - A r g ( P m c )-0Η % 本 頁 装 1 0 . 7 0 7 g , HOBt 0 .153 g、 HBTU 0 . 3 7 9 g , D IPE A 0 . 3 4 8 m 1 , 1 1 振 盪 1小時， 而生成F mo C - D - Ar g ( P in c ) - P h e -β - Et Ala- 1 | A 1 k 〇 樹脂 〇 依前 項同 樣 方 法 進 行 過 爐， 洗 滌 9 及 將未 反 應 1 訂 之 胺 基予 以 保護 0 1 I 將Pm 0 C -D-A r g ( Ρ me )- P h e - β -E t A 1 a -A lk 0樹脂依上述 1 1 同 樣 方法 操 作以 去除 F m 0 c 基 9 添 加 F m o c -τ y r (t -Bu) -0H 1 I 0 . 460 g , HOBt 0 .153 g、 HBTU 0 . 3 9 9 g > DIPEA 〇, 3 48 m 1 , d 振 盪 1小時， 而生成F HI 0 C - Ty Γ ( t - Bu )-D - Ar g ( P m C ) -P h e ~β - I I Et A 1 a-A 1 k ο 樹脂 。依 前 項 同 樣 方 法 進行 過 濾 、 洗 滌， 及 將 I I 來 反 應之 胺 基予 以保 護 0 1 | 將Fm 0 C -T y r (t - B u ) - D -A rg (P me )-Ph e - β -E t A 1 a-ή 1 k 0 1 丨 樹 脂 依上 述 同樣 方法 操 作 以 去 除 F in 0 c基 » 添 加 與 實施 例 3 1 中 同 法製 得 之1H -吡唑_ 1 - 磺 化 胺 肟 塩酸 塩 2 . 1 99g 、DIPEA 1 1 2 . 8 7 4m U DHF 6 ml, 於 40 50 °c 反 應1〜4小 時 f 使N - 末 丄UI m 1 1 之 酪 胺酸 的 胺基 進行 眯 基 化 反 應 ο 繼之 9 過 滤 洗滌 (以 1 I NMP 12ml 洗 滌三 次， 再 以 甲 醇 12 ml 洗滌 三 次 )， 置於氫氧 1 1 本紙張尺細侧辦Μ» (窗297讀）工5 A 7 1 B7 五、發明説明（16 ) 化鉀之乾燥器中進行真空乾燥。 將上述所得樹脂1.514g置於玻璃過濾器上，以TFA, 酚與水之混合液（T F A :酚：水=9 3 : 2 : 5 ) 1 Ο κι 1處理1小時， 然後過濾。進行同樣操作兩次。再將樹脂以l〇ml TFA處理 5分鐘，然後過濾。進行同樣操作三次。合併各操作之濾 液，於2 0 °C以下之溫度減壓蒸餾去除溶劑。於殘渣中添加 20πι1乙醚，生成白色沈澱。丢棄上清液，進行同樣操作三 次。將所得白色粉末溶於3 0 m 1水，置於分液漏斗中，以 5 m 1乙醚洗滌三次，將水層進行冷凍乾燥而得粗製之脒基 化胜肽。 將粗製脒基化之胜肽lOOmg溶於20ml之0.05%TFA水溶 液中，依照實施例3之同樣方法進行精製。依實施例1之 同樣方法進行胺基酸組成及質量分析。結果均支持上述標 題化合物之化學構造。 窨旆例fi 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) H2NC (NH) - Tyr-D-Arg-Phe-〇Me H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-NHMe H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-/S Ala-〇l H2HC (NH) - Tyr-D-Arg-Phe-Gly-〇H H2NC (NH) - Tyr-D-Arg-Phe-Ala-〇H H2NC (NH) - Tyr-D-Arg-Phe-Me/S Ala-〇Et H2NC (NH) - Tyr-D-Arg-Phe - (n-Pr) β Ala-OH 使用下式所示被保護之胜肽為原料：ZHNC(N-Z)-Tyr( Β z 1 ) - D - A r· g ( Z 2 ) - P h e - 0 Η ,採用液相法，依照下述之操作 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 16 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（:7 ) 製造上述之胜肽。 起始原料Z-Phe-OTce 254g以25%溴化氫900 ml處理， 使脱去Z基後，於冰浴下以C Η 2 C 1 2 1 0 0 0 in 1溶解之。於此 溶液中加人Boc-D-Arg(Z2)-0H 288g， HOBt 85g，以 TEA 77ml中和後，以EDC.HC1 121g進行縮合而得B〇c-D-Arg(Z2)-Phe-0Tce。然後將241g Boc-D-Arg(Z2)-Phe- OTce以4N塩酸-乙酸乙酯1000ml處理使脱去Boc基，於冰浴 下以1300 ml DMF溶解之。於此溶液ΨΛλΒ〇(ί-Τ7Γ(Βζ1)-0Η 108g，HOBt 46g,並以 TEA 42ml中和後，以 EDC· HC1 65g進行縮合，而獲得下式所示被保護之胜肽：B〇c-Tyr( Bzl) -D-Arg (Z2) - Phe-〇Tce〇 以4N塩酸-乙酸乙酯2 5 0 ml處理Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg( Z2)-Phe-0Tce 48g使脱去Boc基後，於冰浴下以DMF 1 5 0 m 1溶解之。所得溶液以T E A 7 m 1中和後，加入Z - Η N C ( N -Z)Pyrazole(脒基化試藥）19g,於室溫攪拌之，而得下式 被保護 tKK:Z-HNC(N-Z)-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-0 T c e。將此被保護之胜肽4 2 g ,於水浴下以乙酸溶解之， 於其中加入2 1 g鋅粉，攪拌2小時，去除反應液之鋅粉，減 壓濃縮而得被保護之胜肽：Z-HN-C(N-Z)-Tyr(Bzl)-D-Arg (Z2) - Phe-0H〇 使 Z-HNC(N-Z)-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-0H於 MeOH( EDC-DMAP法）；NH2Me(EDC-H0Bt法）；H-/S Ala-ol (EDC-HOBt法）；H-Gly-0Bzl*Tos0H(EDC-H0Bt法）；H-Ala-OBzl- TosOH(EDC-HOBt^)； H -Me /3 Ala - DEt(EDC-H0Bt 法） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 17 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（18 ) 1 1 ♦ 以 及 H - (η - P r ) β A 1 a 一 0 B z 1 * Tc > S 0H ；EDC- Η 0 B t 法 )進行縮 1 合 反 lf£ 0 生成 物 於 水 浴 下 以 乙 酸 溶 解 後 » 在 把碩 之存在 下 丨 進 行 接 ύαα w »*=» —*· 厘兀 去 除 htsa 觸 媒 後 反 m 液 進 行 減 壓 濃縮 ,再加 以 —V 請 1 先 1 冷 凍 乾 燥 而得 巨 的 物 之 胜 肽 粉 末 〇 於 下 列 條 件下 進行胺 基 閱 讀 1 I 酸 分 析 及 質量 分 析 > 由 其 結 果 亦 支持 上 述 胜 肽化 合物之 構 背 之 1 1 注 I 造 0 意 事 1 中 項 1 胺 基 酸之 分 析 偽 將 約 0 5 m g胜 肽 置 於 加水 分解管 再 A 1 » 添 加 1 π» 1 6N 塩 酸 t 脫 氣 封 管 後 $ 於 1 1 0 °c加水 分解24小 寫 本 頁 装 1 時 0 室 溫 冷却 後 於 40 °c 濃 縮 乾 涸 9 殘 渣 以 精 製水 5 m 1溶解 、〆 1 I 之 0 所 得 溶液 取 5 μ 1減壓乾燥 之 ， 於殘 查中加入 5 0 m Μ 1 I N a HCOs 緩 衝液 (ρΗ9 .0 )2〇μ 1 , 單 m 3ΠΕ 氯 -乙 腈 溶 液40 μ ί,於 1 1 訂 70 °c 加 溫 1 0分 鐘 0 反 應 液 減 壓 濃 縮， 殘 渣 溶 於5 0 %乙醇 1 1C 0 μ 1中， 取該溶液20 μ i 1進行 液 相 色 罾 分， 开0 質 量分析 為， 1 1 將 約 15〇μ g胜肽溶於2 5 0 μ 1 之 5%乙 酸中 > 取 1 μ 1進 行液態 1 1 S ] MS分 析 0 Ϊ \ Ί I 實 旅 例 H5 NC (ΚΗ) -T y r -D -A r g -M e P h e - Me β A 1 a - 0H 1 1 I H2 NC (ΝΗ) -T y r -D -A r g -E t P h e - Me β A 1 a - 0H 1 上 述 胜肽 傺 以 To sOH .Μ e β A 1 a - OB 2 1 為起始 原料， 由 I 1 C - -末 丄山 m 依 序以 液 相 法 製 造 之 0 & EDC -HOB :法 使Β oc-MePhe- 1 OH與 To sOH · Μ e /S A 1 a -0 B 2 :1進 行 縮 合 而 得 5 〇 c - M e P h e - 1 1 Me /9 A 1 a - OBz 1 > 使 用 4N塩 酸 - 乙 酸 乙 酯 將 3 o c - M e P h e - 1 I Me >3 A 1 a - OBz 1 之 Bo c基 悦去後 9 與 Bo C - D - ί\ r g ( Z 2 )-OH , 以 1 I EDC - •HOBt 法進 行 縮 合 而 得 B 0 C -D -A r g (12)- -M e P h e - 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X Μ?公釐） A7 ' B7 五、發明説明Q 9 ) M e召A 1 a - Ο B z 1。然後，使用4 N塩酸-乙酸乙酯去除B 〇 c - D-Arg(Z2)-MePhe-Me/S Ala-OBzl 之 Boe基後，與 Boc-Tyr( B z 1 ) - 0 Η以E D C - Η 0 B t法進行縮合，而得被保護之胜肽： Boc-Tyr (Bz 1 ) - D- Arg (Z2) - MePhe-Me/? Ala-〇Bzl 〇 以4N塩酸-乙酸乙酯處理Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-MePhe-Me/S Ala-OBzl使去除 Boc基後，MAZ-HNC(N-Z)-P y r a z ο 1 e (脒基化試藥）於室溫下攪拌之，而得被保護之胜 0 B Z 1。此被保護之胜肽以乙酸溶解後，加入鈀磺並通入氫 氣至溶液中使進行接觸還原。去除耙碩後，減壓濃縮，進 行冷凍乾燥而得粉末之胜肽H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-MePhe-MeyS AU-0H。此胜肽進行實施例5記載之胺基酸分析及質 量分析，其結果亦支持偽上述構造。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 使用Boc-EtPhe-OH代替Boc-MePhe-OH,依上述同樣之 方法，與TosOH· MeySAla-OBzl以EDC-HOBt法縮合而製得 B 〇 c - E t P h e - M e /3 /U a - 0 B z 1。然後，依上述方法反覆操作進 行脫保護及縮合反應，而得下式所示之被保護胜肽：Z -HNC(N-Z)-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-EtPhe-Me/S Ala-OBzl。.此 被保護胜肽溶於乙酸後，添加把磺並於溶液中通入氫氣以 進行接觸還元。去除耙磺後，減壓濃縮，並冷凍乾燥而得 粉末之胜肽 H2HC(NH)-Tyr-D-Arg-EtPhe-Me/S Ua-OH。此 胜肽以實施例5記載之方法進行胺基酸分析及質量分析， 所得結果亦支持上述之構造。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 19 A 7 ' B7 五、發明説明（2〇 ) 窨偷例7

H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-Me/S Ala-〇H 以通常用來合成胜肽液相法，依下法進行合成：以Z -Phe-OTce 2 5 4g為起始原料，以9 0 0 ml 25%溴化氫-乙酸脫 去Z基後，於冰浴下以C Η 2 C 1 2 1 0 0 0 m 1溶解之。於此溶液中 加入 Boc-D-Arg(Z2)-0H 288g， HOBt 85g,並以 TEA 77ml 中和後，以EDC· HC1 121g進行縮合而得Boc-D-Arg(Z2)_ Phe-OTce。然後，以4N塩酸-乙酸乙酯1000ml使Boc-D-Arg (Z 2 ) - P h e - 0 T c e 2 4 U脱去B o c基後，於冰浴下溶於D M F 1 3 0 0 m 1 中。於此溶液中添加 B o c - T y r ( B z 1 ) - 0 Η 1 0 8 g， HOBt 46g，以TEA 42ml中和後，以EDC* HC1 65g進行縮合 ，而得下式所示之被保護胜肽：B〇c-Tyr(BZl)-D-Arg(Z2) -Phe-〇Tce〇 以4N塩酸-乙酸乙酯2 5 0ml處理Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(

Z 2 ) - P h e - 0 T c e 4 8 g使脱去B 〇 c基後，於冰浴下以D M F 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 5 0 m 1溶解之。此溶液以T E A 7 κι 1中和後，加人Ζ - Η N C ( Ν - Ζ ) -Ρ y r a ζ ο 1 e (脒基化試藥）1 9 g ,於室溫下攪拌之，而得下式 之被保護胜肽：2-11{|(：([|-2)-了7以821)-0-“8(22)-卩^^- 0 T c e。此被保護之胜肽4 2 g在水浴下溶於乙酸中，添加 2 1 g鋅粉至其中，攪拌2小時。反應液去除鋅粉後，減壓 濃縮之而得被保護之胜肽：Z-HNC(N-Z)-Tyr(Bzl)-D-Arg( Z2) -Phe-〇H 〇 上述被保護之胜肽：Z-HNC(N-Z)-Tyr(Bzl)-D-Arg( 22)-卩}^-0111.158與1'〇50}1.1^召/\13-08210.938於冰浴 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 20 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明 (2 1 ) 1 1 下 溶 於 30 m 1 DMF (含 1 0%DMS0)中； 於所得溶液中加入 1 Η00Ε t 0 . 24 以TEA 0 .2 1 m 1中和後， 以EDC ♦ HC 1 0 . 25 g ' 1 進 行 縮 合 9 而 得 下 式 所 示 被 保 護 之 胜 肽 : Z - HNC (N- Z) — /、 請 1 先 1 Ty r ( B z 1 ) -D -A r g ( Z 2 ) - P h e -N e β k 1 a -0 Β z 1 0 此被保護之胜 閱 讀 1 背 I 肽 0 . 90 g溶於1 00 m 1 乙 酸 中 > 於 此 溶 液 中 加 入 耙碳0 . 90 g » 之 1 注 1 並 通 入 氫 氣 進 行 接 Atot 觸 還 原 0 去 除 耙 硝 後 減 壓 濃縮之 i 並 加 意 華 1 項 | 以 冷 凍 乾 燥 而 得 粉 末 胜 肽 : H2 NC (NH) -T y r -D -Arg-Phe - V Me β A 1 a — 0H 〇 此 胜 肽 進 行 睡 貝 施 例 5 所 記 載 之 胺基酸 分 析 及 寫 本 頁 装 1 質 量 分 析 之 結 果 亦 支 持 上 述 之 構 造 〇 1 1 以 下 表 1 係 顯 示 本 發 明 胜 肽 衍 生 物 之 物 理化學 性 質 ♦ 1 I HPLC 滯 留 時 間 以 及 薄 層 色 層 分 析 之 Rf值 〇 這 些胜肽 衍 生 物 1 訂 均 為 冷 凍 乾 燥 製 品 〇 1 I HPLC 條 件 1 1 裝 置 = 曰 本 分 光 880条統。 1 I 管 柱 * Nu C 1 e 〇 si 1 5C 1 δ 1 0 0 0^ (4 X 1 50 mm )0 > 溶 劑 ： A液（ 乙 腈 ： 精 製 水 ; 三 氟 乙 酸 =1 0:90:0 .1 )。 I | B液（ 乙 腈 精 製 水 二 氟 乙 酸 =70:30:0 .1 )0 I I 梯 度 ： B液0 100%/30分。 1 | 流 速 • 1 ml / Η! in 0 1 丨 溫 度 40 °c 0 1 撿 出 波 長 : 230 n m 0 1 1 注 入 量 ： 以 白 動 注 入 裝 置 注 入 樣 品 (濃度1 in g / ml ) 1 | 2〇μ 1 〇 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 21 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 ' B7 五、發明説明（22 ) 薄層色層分析之條件： R fa :正丁醇：乙酸：精製水=4 : 1 : 5混合後， 取其上層作為展開溶劑使用。 R f b :正丁醇：乙酸：精製水：吡啶=1 5 : 3 : 1 Ο : 1 2作為展開溶劑使用。 薄層板：矽膠（Merck F254)。 又，以同樣方法所合成之化合物示於表2。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

22 五、發明説明（23 A7 B7 表1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本發明胜肽衍生物 HPLC (滯留時間） Rfa Rfb H2NC (NH)-Tyr-D-Arg-Phe-NH(CH2)2C00Me 10.79 0.49 0.74 H2NC (NH)-Tyr-D_Arg~Phe'0Me 11.37 0.60 0.84 HsNCO'IiO-Tyr-D-Ar'g-Phe-NHCfHCHdCHsOH 9.11 0.46 0.70 H2NC (HH)-Tyr-D-Arg-Phe-Arg-NH2 7.83 0.23 0.55 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-Leu-〇H 13.19 0.41 0.64 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-OH 9.35 0.50 0.76 H2NC (NH)-Tyr-D'Arg_Phe"Gly_0H 8.54 0.37 0.60 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-Asp-〇H 8.41 0.25 0.44 H2HC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-Ala-〇H 9.27 0.43 0,66 H2NC (NH) "Tyr-D-Arg-Phe-N (CH3)CH2CH2〇H 9.64 0.51 0.74 H2NC ({,[H)-Xyr-D-Arg-Phe-N(CH3)CH2C00Me 11.49 0.49 0.74 H2NC (NH)-Tyr-D-Arg-Phe-Gly-NH2 8.09 0.38 0.60 Η〇ΝΓ -Tyr-D_Arg-Phe-H(CH3)(CH2)2CON(Me)2 11.11 0.35 0.69 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-Pr〇-〇H 10.68 0.33 0.54 HaNC (MH)-Tyr-D_Arg"Phe'NHMe 9.01 0.43 0.68 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-H(CH3)(CH2)2CONH(n-Hex) 17.26 0.52 0.79 H2NC (NH)-Tyr-D-Arg-Phe-NHEt 10.24 0.59 0.81 H2NC (NH)-Tyr-D-Arg-Phe-D-Ala-NH2 9.09 0.40 0.67 H2NC(NH)_TyP-D-Arg-Phe-N(CH3)CH(CH3)C00H 10.81 0.42 0.67 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-D-Phe-N(CH3)CH(CH3)C00H 11.58 0.41 0,58 H2NC (NH) - Tyr-D"*Arg_Phe-NHC (CH3) 2COOH 10.57 0.41 0.61 H2NC(M)-Tyr-D-Arg-Phe-(R)-NHCH(C2H5)C00H 11.17 0.39 0.59 H2NC (NH)-Tyr-D-^rg-Phe-D-Ala-OH 9.94 0.40 0.65 H2NC (NH)~Tyr-Arg"Phe_N(CH3)(CH2)2C00H 11.65 0.33 0.54 H2NC (NH)卜Ars-Phe_NHCH2CH2S〇3H 7.67 0.38 0.68 1-[H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe]^^ 14.87 0.66 0.80 1-[H2NC ⑽卜Tyr-D-Arg-Phe]-哌 D秦 7.55 0.28 0.60 H2NC(NH)_Tyr-D*-Arg*"Phe-N (CH2C6H5) (CH2)2C00H 14.87 0,51 0.70 H2NC(NH)_Tyr-D-Arg-Phe-(R,S)-NHCH2CH(CH3)C00H 9.96 0.41 0.62 H2NC (NH) -TyrD-Arg-Phe-N (CH2CH3) (CH2)2C00Me 12.74 0.47 0.74 H2NC (NH)-Tyr-D-Arg-Phe-Phe-OH 13.86 0.41 0.62 ----Λ)^.------訂--- (请先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

Q 本紙張尺度適用中國國家樵準（CNS ) A4規格（210x297公釐） A7 B7 五、發明説明（24 ) 表2 本發 明胜肽 衍生物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Et-HNC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-Me/3 Ala-〇H Et™HNC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-yS Ala-〇H n-Pr-HNC(NH)-Tyr*(D)Arg-Phe-/3 Ala- OH Ph-HNC (NH) - Tyr - (D)Arg-Phe-/3 Ala-〇H Ac~HHC (NH) - Tyr - (D) Arg-Phe-^δ A 1 a - 0 H H2NC (HH) -Tyr - (D)Arg-Phe-NH (n-Pr) H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-NH(CH2)2〇H H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-NHCH(CH3)CH2〇H[D] H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-NH(CH2)4〇H H2NC (NH) -Tyr - (D)Arg-Phe-Gly-OMe H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-Gly-NHMe H2NC (NH) -Tyr - (D)Arg-Phe-MeGly-OH H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-Ala-OMe H2NC (HH) -Tyr - (D) Arg-Phe-Ala-NH2 H2HC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-Ala-NHMe H2NC (NH) -Tyr - (D)Arg-Phe - (D) Ala-NHMe H2NC(HH)-Tyr-(D)Arg-Phe-(D)MeAla-0H H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-yS Ala-OH H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg~Phe-Me/3 Ala-OH H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-Me/fi Ala-NH2 H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-Me.e Ala-NHMe H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe™Me/S Ala-NHEt H2NC (NH) - Tyr™ (D) Arg-Phe-Me/S Ala-NH (n-Pr) H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-Me/3 Ala~N(Et)2 H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe™EtyS Ala-OMe H2NC (NH) - Tyr - (D)Arg-Phe - (A) Arg-NH2 H2NC (HH) -Tyr - (D) Arg-Phe-Asu-OH H2NC (NH) -Tyr - (D) Arg-Phe-Sar-OH H2NC (NH) -Tyr - (D) Arg-Phe-Pro-OH H2NC (NH) -Tyr - (D)Arg-Phe-Pro-OMe —--------衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX297公釐） A7 ' B7 五、發明説明（25 ) 〔試驗例〕 關於本發明胜肽衍生物之鎮痛效果僳以下述之壓力刺 激法進行評估。對小白鼠尾之根部以1 〇 m ra H g /秒之增加 速率施以壓力刺激，測定小白鼠開始産生身體扭動或剌激 部位拉動等反應行動時的壓力，而以此壓力作為疼痛反應 之閾值。在此實驗中，預先選用對40〜50mni Hg壓力發生 反應之小白鼠。最大剌激壓力訂為l〇〇mm Hg。鎮痛效果以 下式計算之。 P t - P 〇 % of MPE = - x 100 P c - P 〇 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (式中，Po為藥物處理前之疼痛反應閾值，Pt為藥物 處理t分鐘後之疼痛反應閾值，P c為最大剌激壓力）。由 上式計算出”最大之可能效果百分率” U MPE; percent of maxium possible effect)。由用量反應曲線 求出達到50% MPE”時之藥物投與量作為EDso值，而以此比 較藥物之鎮痛效果。皮下投藥（背部皮下）及經口投藥之結 果如表3所示。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X2.97公釐） 25 五、發明説明会6

Α7 Β7 表3 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 本發明之胜肽衍生物 ED50 (mg/kg) s . c . P . 0 . 對照（嗎啡） 4.6 29.6 . H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-HHCH2CH2C00H 0.14 5.8 H2NC(NH)-TyrH「g-Phe-NHCH2CH2C0NH2 0.13 10.7 H2NC(NH)-Tyr~D-Arg-Phe-H(CH3)CH2CH2C00H 0.10 6.6 U2jjQ(fjjj)_Yyr-D-Arg_Phe-K(CH2CH3)CH2CH2C00H 0.15 16.0 H2NC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-N(Me)2 1.22 #N. T. H2NC(MH)-Tyt*-(D)Arg-Phe-N(CH3)CH2C0NH2 0.27 N.T. H2NC(HH)-Tyr*Urg-Phe-N(CH3)CH2C00H 0.39 17.8 H2HC(NH)-Tyr*D"Arg-Phe-NHCH2CH2CH2〇H 0.88 N.T. H2NC(KH)-Tyr-D"Arg-Phe-H (CH3)CH2CH2C0NH 0.31 24.6 H2NC (HH) -TyrHwPhe-N (CH3)CH2CH2C00CH3 0.12 8.9 l-[H2NC(NH)*Tyr-D-Arg-Phe]-l^i!$-3-COOH 0.25 N.T. *N . T,:未試驗 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家搮準（CNS ) Α4规格（210X297公釐）26 (修正頁） 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 ir Cl P| ' -r A 7 I .__85- 1- B7_五、發明説明（2 6 Ί g油ί例8 n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-^ Ala-OH 上述胜肽係MTsOH· /SAla-OBzl為起始原料，與實例 6阆樣由C-末端依序Μ液相法製造之。將被保護胜肽8〇〇_ Tyr^BzO-iDiArgC/^^Phe-zS Ala-OBzl Μ 4Ν.鹽酸-乙酸乙 酯處理，脫去Β 〇 c基後，於室溫搅拌下加入[(丙胺）碲代甲 基]胺甲酸第三丁酯J KDC及TEA·獲得被保護胜肽11-?广-N H C ( N Η ) - T y r ( B z 1 ) - ( D ) - A r g ( Z 2 ) - P h e -/9 A 1 a - 0 B z 】。將此 被保護胜肽溶於乙酸中*將鈀碳加至溶液中，吹送氫氣混 合之使接觸遨原。將鈀碳除去後，減壓濃縮，冷凍乾煉之 ，得到粉末之胜肽 n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/3 Ala-0H。此胜肽經胺基酸組成及質虽分析，结果均支持上述構 造。 W油i俐9 Ac-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/3 Ala-OH 將實施例8所得被保護胜肽Boc-Ty「（Bzl)-(D)Arg U2) -Phe-/3Ala-0BzlM4N鹽酸-乙酸乙豳處理，脫去Boc基後 ，於室溫攪拌下加人Ac-HNC(N-Z)Pyrazole(單乙醚脒基化 試藥），得到被保護胜肽 Ac-NHC(N-Z)-Tyr(Bzl)-(D)Arg( Z2)-Phe-/a/Ua-0Bzl。將此被保護胜肽溶於乙酸中，添加 鈀碳至溶液中•吹至氫氣混合之，使接觸遢原。除去鈀碳 ，減J1濃縮，進行冷凍乾煉而得粉末之胜肽n-Pr-NHC(NH) -Tyr-(D)Arg-Fhe_/3 Ala-OH。此胜肽經胺基酸及質量分.析 ，結果支持上述構造。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝— tt^n i nm 1 I 訂------^fr---------一- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4^格（210X297公釐） 2 6 - 1 (追加頁）

—補充I A7 . ' B7 五、發明説明（26_》 聰诰例

Ac-HHC(N-Z)-Pyrazo 1 e 將 H2NC(N-Z)-Pyrazole(依參考文獻：M.S. Bernatowicz, Y . y u 及 G . R . M a t s u e d a，T e t.r.a h..e.dr-QJL i. p 1.1. p r s， 34，3389-3392(1993)之方法製造）溶解於乾燥 之四氫呋喃中，-10Ό下加入氫化納後，於攪拌下加入 無水乙酸，得到目的物之Ac-HNC(H-Z)-Pyrazole。 ---------—— (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 26-2 (追加頁） 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐〉 修正 A7 B7 五、發明説明（2 6-> 經濟部十央標準局員工消費合作社印裝 w 2 z Π I s π η 1 5 $ α 6 $S ? α 53 k oo 1 抖 • 'V ΒΓ ? s r^* Q 2 /¾ 2 • 2： β Χ η X "η ί α ί η 8 〇 O 3 »n § 其 ο Id On b O S ' s Μ S b »—· s 減 1 b 彦 CO 爾 •κ： CC m b 1 N· t ,? w O ^ m > « ΕΓ V\ 1 I» 龙 a 痒 W 1 w冰 Pf TO 0> K » .垚 s 垚 o 自 Q \〇 cv Q 00 NM M Q X •Cw 姻 00 a 4jg 1 s z U) I’W 抖 δ 8 § » σ' HfSB !5 ON ;S| Ξ!Ρ Wn ··· 械忒 粞w 酿！ 〇\ 商郐 商筇 V、 Γ3 •^s + mS ifi -α. > 蓮& «]· is X 咖 + X m 〇u + Μ > 酿s

Ms S t# (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26“3 (追加頁） 日 月 WX- 3 # -A4'- ΛΗ? ^

A

7 B 五、發明説明（2 6

H,NC(KH>Tyx-D-AJg-pb^(n pr)PAia OH ^NC<NHvTyr-D-Ar'pf OMe HJNC{NH'Tyr-D-AT'pbc-NHMe H2zn{NH>-Tvr-D-Ar'pbe>-PAJa01 ^NdYTyr-D-Ar'pbe-Gly-ofl 0MNCirm>Tyf-D-Ar'pff,AJroffi HJzc(KH>-Ty?D-Arg-pb^Mep Abba J= m d S' i zQ *r^ x

3» IntF (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i rs 1,00rs 1.00 1.8 l .00 B* § ΗΓ ·00 ·00 1.0】 0.99 0.0» 【.00 1,02

Ibl PAia 2y 0.95 Ala P95 爾 m E· m m Nf I 昏 U) 垚 訂 φ· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C31H45MS6 so £0 (M+Hr C26H3§805 C2S37N904 C28H4IN905 C27H37Z906 C28H392906 C3E45N906 MO 541{Vi 十 ΗΓ 539 540 fM+H3, 583 § 5S3 584 (M+Hr 597 598 (M+ffir 639 640 CT姻W min SB 獅$ 酿耷wr Ο w 2爸 v〇 s OS s> Lf\ s Q\2 4*s

Et Ί6 抖. 商部 Wi"§' 菌s if 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26-4 (追加頁）

五、發明説明（2 6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -NcfNHyryr.D-AI'ph^NlKCH^COMNt ~NQNH>Tyr-DIATg-plle-ose 1.00 1.00 1.03 1.00 PAJa 1_°2 QH41N906 C26H36N805 63 J 6129?}· 540 54UM+3, 撂造式 表1之代合物 HjNQNHXTyr-D-Arg-Phe-MepAk-OlI 搰造式 1 實施値7之化合物 π η 1 1 3 ^ ? ? 1" S ^ | 女 9 I ^ 6 1 Phe 0.90 Phe 1 1 7 | m ί b ο 胺基酸分析 Ate MeDAJa i 'g -- s s 其他 其他 CT1 姻 Wi Ξ!)ϊ3| 商筇 酿 C29H41N906 611 612(Μ+Ι〇* cv 掘 画已 商 η ο c 〇 ra ra t t Z 2 1 ^ On ON 0\ W k) Ό L/t ε s O 〇\ 2 2 ：c i: Phe 爾唞®φ^? An; MeQAla ^lNsllj酿 Μ'ίδ0ί6Ν·^φ菪 .-mil (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂—— ------ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ297公釐） 26-5 (追加頁） 年 /.·?> -·** Wjr- 8544麵无.i A7 B7 五、發明説明（2 6-jfe /i,2c2H>Tyr.D-Arg-phe-NHCH<CHJnHJ0H HJ'NCO'lHVT'yr-D-Arg-pi'e-AJg-N.F' HJzc{N>Q-Tyr-D-Arg-phe、Leu0H HJNC<KH5TyT-D-Arg-ph?0K "2c<NH>Tyr-D-AJrg-pllc-Giy0tt HJ^ctNH}-Tyr-D-Aig-PI!?A"'OH H, NQ NH} -Tyr-D-Ar'phe 丨 Ala -OH 5NclvTyr-D-Arg-ph?N{CH,K:H,c^OH. H^ciNHYTyr-D-Acg-pbe-NicHOQ-OOOMe H3NcfNH>Tyr-D-Arg-pb?Glyr2H, ^NcfNH>Tyr‘D-ATg-pbe-N{Q13xcay,CONCMe)3 ^zc{NH>Tyr-DArg-pb?PIO-OH HJNC{NHYTyr-D-Ar'pfl?zHMC ^NcfNHVryr-D-ATg-pbc-NfcH^CH^CONlKn.HCX) l .00 K2Nic{NH>T7r-I>-AIglphe-NH:Et Ibo HJNC{NHvTyr6-Arg-ph?D.Ala-N-1‘00 HJNClNH>-Tyr6-Ai'pb?:N{Q€CH(CH^C8H 1.00 ^NqNH>Tyr-D-ATg-D-ph?N(Ql3)CH(CH3}oc>OH 1.02 1.00 1.00 00 i 00 00 00 s 00l.s P9M 1.00 l_00

1.05 1.97 Ibo t.2 0. 9°· ?99 1. § Ibi 1.03 0.% rs S6 J.OJ 1.03 P99 1.00 1.2 PS

Ibo丨 0.97 ·00 ---------©in (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

Ala P96

Leu rs Gly 0.95 Asp 】°5 Ala 0.95 Sar 1.0】 Gly 0.98 Pro 1.05 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C28H4 5 905 583 03 IBS21305 C3LH45N906 639 C25H34N805 n27H37N906 583 C29H39N908 641 C28H39N9Q6 597 028H41N9O5 5S C29H459C6 611 C27H38N1005 582 n3JH4§】85 638 C30H-UN9O6 623 C26H37N904 539 C35H54NJ005 s厶 C2739N9CM 553 C28H4S1005 596 C29H4 5906 6二 C29H4S906 611

s4 (M+H· 682 (S+Ky 2°(si· .527 {2+Hy 584 (Mi)· 642 fM+HZ 598 {M+5· 584 (M+3· -2 <s+s· 583 (M+Hr 29 S+Hr 62λ(μ+η>· 540 fM+HT 695 (M+H· 354 ?Hr 597 (Μ+ΗΓ 612(MiIr 6J2 2+HT 本紙張尺度適用t國國家揉準（CNS )八4規格（210X297公釐） 26-6 (追加頁） 8 月 年 3 6 2 /V 明説 明發五 E!-HNGCNH}-Ty^cD)AIg-ph9NkpAia-OH Et-HNCiNH}.Tyr-CD)Arg-phc^ AJa-om .00 l.s bo 1.2

Phc r-J --1 --.

A B L2 pAla P98 0,^0ss Arg McDAia_K fg -NONH>Tyr-D-A^-pbe-NHC(CH-COOK LOO P96 ^NQNS.Tyr-D-Arg-phc-fR'NHC-PHJCOOH 1.00 0.95 ^NQKHvTyr-D-Axg.ph=-D-AIa0H l.§ 0.99 ^ζαΝΗ>τ7Γ-ΑΓΒ-ΡΗ?Ν(€Η3)(β~030Η LOOr05 -NciKH>TyrD-Arg-phc-NHCHJC-SOJH l bo 1.0 J '【HJNC{NH}-Tyr-D-Arg-phe'pipc3-dinc 1.00 1.20 J-fHJNCCNtivTyr-D.Arg-ph-—pipcrazine 1.0Q l.£ H3NC{NH>Tyr-Arg-phez(CH,pH,)(CH^CO0K J .00 1.27 ^NC{2H>Tyr-Ar'phe^R.S>-NHCH3CH<c-}COOB I bo 1.05 HMNC{NH>Tyc-AX^-phc-N<a^cB3)(CH,v:OOMC 1.00 L32 H^ctNHVTyr-AT^Phi^phc-offi 2‘0°0.96 1.04 ---------— — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ

Tau 0.99

Ala 0.96 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 i) 1-姻抖 n-wlg 减韹酿 n3LH45N9Q5 639 εοίΜ+3* 门 30H5N9O6 625-6 CM+}°， C29H4W906 C29H41N906 C2SS 窆 906 C29H412906 C27B39N907S owom— C29H42NJ84 C35H45N9Q5 C2955906 C3JH45N9C6 6二 612?ΗΧ 611 612{M+Hr 597 598 (Mi*611 612(s+qr 633 634 (M+Hr 593 594 (f5* 594 595^+5‘ 687 s^611 612(M+Hr 639 640 fs+HT 673 674 (2+3- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26-7 (追加頁） 85 月 ο 3 ^\DO 6 2 /_V 明説 明發五

A

7 B

n-pr-HNCCNS-TyKD^r'phe-AJa-OB ph-HNC(KH>Tyl>CD)Arg-??PAJa-OH AC-HNCCNH^-T^r-CD) Arg-p-?p Al¥OH -zCCNH>Tyr-p)Axg-phc-3u〒pr) H,NQKH>TyKD)Arg-pbc-NH(CH3-OH 5NQNH>TyI-<D)Arg.phe,KHCH(CH,)CH,OHBJ ^Νη^Ηντ^τα^ΑΓ'ΡΗΟ-ΝΗίαί^οΕ ^NQNHyryrct^Ar'Fhc-Gl'OMe ^NC{NH>Tyr8)AIg-ph^<?lyle H^c{NHJ-Tyr-(D)Arg-pbe-MeGl'°H -NciKH>TyrB)Arg-ph?A1a-OMC nJNCiNIiyTyr.cD)AIg-ph?Ala-NH^ HJNCfhrH>Tyr-o:>)Arg-Fhe-AJa-NHMe H2zc(NH>Tyr(D)Arg-phe-(D)A'NHMe KJNQNHKryr-iE^Arg-Fh又 D)MeAla-°tr EJNCfNH丫 Tyr-(D)Arg-ph?PAla0H 1.00roo lb5 1.00 1,00 roo roo ·§ roo 1.03 1.03 1.2 1.02 roorooroo

P96 0.97roo 0.95 0.96 Γ2 P94roo Ibl【boroo 1,00rooo.s 0.99 KOI PAlalbl

Gly Gly sar Ala Ah Ala Ala 1.04 P95 0·94o.s p96 0.95 0.95 PAJa ogw pAla P99 PAla 0.97 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C28IS1N9D4 C2759N905 n2s41N905 C29H43N905 G2i9N906 G2°°Hi5 C28H39N906 C29H45906 C2S40N185 C2S42N10O5 €2^=4¾ 1005 029H4m906 C2°°H39N905 638 569 583 597 597 596 597 611 596 610 610 6】I 597 C30H41N907 639 § cm+h* S9 fM 十 HT 570<M+Fi) 52"十3 -8ίΜ+Η} 59804+3 597 <M 十 H> 59891+3 612(M+H> 597 ?Hy 6Π {M+H} 6U{M+Hy 6l2(M-fHr 59gis+Hy C34H43N906 673 674 {M+s, C31H45N906 639 640 CM+- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 26-8 (追加頁） —2¾. m:::— 年月^修-jL.. 、S .* *Λ A7 ' ' B7 ί It] 五、發明説明- .HJzciNl°TyrAD)Arg-Fhc 丨 Mcp AJa-OK H,NQNs-TyKD)ATg-n?MepAk-NH, HJNn{NHyTyr-{D) AjTg-Phc-Mc P A1 一-NHMc -zc{NH}-T>ZD)Arg.rhc,系 PAJa-ssl -zQNH>Tyr CD)Arg-rhc-系 PAla-NH(n-pr) RJNQNHKrJTASArg-pbc-iv^PAIa-NCEOJ tt,NC{NH>Tyr-8)Arl-phc-BPAla-OMC - -ZGtKHyryc-tD^rg.pbeASAf'NII, EJNQKn^TyrctoArg-pllc-AS-OH ilJNGCNHl-ryr.ccoArg-phc-saJ-OH H,zCCKH}-Tyr-CD)Arg-ph?p30H H,2QNHJ-ryr-CD)Arg-pbc-pr?OMe

Jbo l bo Jbo ~03 roo roo 1.32 1.96 0.95 1.00 G.96 0.9Λ roo I.Q5 0.96 0.97 1.00 J.05 0.97 i.oj roo .00 1.06 sg (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

LOD 0.96 1.0} roo 1.05

LOO A5= sar Pro Pro

P97 0.9λ 】.05 P9B 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 n33H50N185 666 n3JH45N906 639 031H47N1305 6-C3357N908 697 C28H39N906 597 Gas 623 C31H43N906 637 667 {m+b)· 20{M+H· S2 ?3, 69°·{μ+μ)· 59S <M+ey 624 {S+H}· 63°°{Μ+ΗΤ S95S906 6二 612 CM+HV C29H42N1005 610 6=(2+H)· C30185 624 625_(M4Hr c31H46Ni85 6300S9 艺+®· C32H48N185 652 653 fM+Hy i------ΐτ------0-------—--------- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 26-9 (追加頁） 年月 β Ig.-i匕 A7 . ' ___1. #;j B7_ 五、發明説明~ ~ 註1:胺基酸分析依J, Vendrell等之方法[J,Chroinat〇s「. 401-413(1986)]實施。即，取約0.5奄克胜肽於加水 分解管中•加入1奄升之6N鹽酸*抽氣封管後110Ό下加水 分解24小時（加水分解裝置：島津製造廠AHST-1)。於室溫 冷卻後減壓使乾固•置於5奄升純水中溶解。取此溶液5 微升予Μ減壓乾固，殘餘物中於70C 下加入20微升之50 mM NaHCOa媛衝溶液（ΡΗ9.0)· 40微升之單醢氛/乙腈溶液 ，加熱10分鐘。將反應溶液減壓濃縮，將殘餘物溶於100 微升之50¾乙酵，取20微升作HPLC分析（装置：JASC0LC-800 型，管柱：Hovapak C 1 8 60 A 4 u in ( 3 . 9 x 1 5 0 m id )，溶 提液：（A)含有9idM磷酸納鑀衡溶液（pH6.5)之4%DMF及（B) 含有乙腈之4¾ DMF·用Μ梯度溶出•管柱溫度：50¾ ，流 速1奄升/分鐘，偵測器之波長：UV 436nm)。 至於胺基酸分析•每一個樣品均偵測賂胺酸，於N-端 經修飾之賂胺酸及其變化體之混合物也予Μ偵测。彼等構 造及生成比因化合物不同而無法定最。但是，依據上列物 性數據及下列官能基定性試驗，脒基及經取代之脒基附加 於賂胺酸之《-胺基至為明顯。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 試驗項目 结果 備考 茚滿三嗣里色試驗 陰性 末端胺基經修飾 保里（Pawly)試藥 陽性 胳胺酸羥基處無取代基 坂口試藥 皤性 存在未經取代之胍基 在爨h刹用夕可抽忡 本發明之胜肽衍生物可使用於癌症疼痛之治榭，在產 業J:相當有用。____ 本紙張尺度逍用中國國家捸準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~~ " 26-10 (追加頁）

Claims (1)

1. H3 附 件 四 第8 4 1 0 2 2 2 8號專利申請案 追加實例 (85年1月1 5日） n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/9 Ala-〇H 上述胜肽係Μ T s Ο Η ♦ /S A 1 a - Ο B z 1為起始原料，與實例 6同樣由C -末端依序以液相法製造之。將被保護胜肽8〇(：-Ty「（Bzl)-(D)Arg(Z2)-Phe-/3 Ala-OBzl M4N鹽酸-乙酸乙 酿處理，脫去B 〇 c基後，於室溫攪拌下加人[(丙胺）硫代甲 基]胺甲酸第三丁酯」EDC及TEA，獲得被保護胜狀n-Pr-ΝΗ(：(ΝΗ)-Τυγ·(Βζ1)-(0)-Αγ^(Ζ2)-Ρ}ιθ-/3/\13-0Βζ1 。將此 被保護胜肽溶於乙酸中，將鈀碳加至溶液中，吹送氫氣混 合之使接觸遛原。將鈀碳除去後，減壓濃縮，冷凍乾煉之 ，得到粉末之胜肽 n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/3 /Ua-0 Η。此胜肽經胺基酸組成及質量分析，结果均支持上述構 造。 啻例9 θ' 經濟部中央標準局Μ工福利妾Μ會印製 得以卩謂 所 ZFJ保 8DB下被 例-0拌w 施la搅ΪΪ 實A溫〜 θ. , 將 _ 室丨 he於藥 -P，試 被 入 胜 1 胜 護酸HNAC 保鹽C-肽 肽 —- C 理 處 酯 乙 酸 乙 Ζ a 後化 基基 C 脒 BO醯 去乙 脫單 加碳 添鈀 ’ 去 中除 酸。 乙原η-於遛肽 溶觸胜 肽接之 胜使末 護，粉 保之得 被合 而 此混燥 將氣乾 氫凍 至冷 ΟΒ吹行 a-,進 A1中， 々 液縮 e-溶濃 ph至壓 )-碳減 Z2鈀， Γ 本紙張尺度適用中國國家標準cCNS )Α4規格（210 X 297公發) 1

   H3 附 件 四 第8 4 1 0 2 2 2 8號專利申請案 追加實例 (85年1月1 5日） n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/9 Ala-〇H 上述胜肽係Μ T s Ο Η ♦ /S A 1 a - Ο B z 1為起始原料，與實例 6同樣由C -末端依序以液相法製造之。將被保護胜肽8〇(：-Ty「（Bzl)-(D)Arg(Z2)-Phe-/3 Ala-OBzl M4N鹽酸-乙酸乙 酿處理，脫去B 〇 c基後，於室溫攪拌下加人[(丙胺）硫代甲 基]胺甲酸第三丁酯」EDC及TEA，獲得被保護胜狀n-Pr-ΝΗ(：(ΝΗ)-Τυγ·(Βζ1)-(0)-Αγ^(Ζ2)-Ρ}ιθ-/3/\13-0Βζ1 。將此 被保護胜肽溶於乙酸中，將鈀碳加至溶液中，吹送氫氣混 合之使接觸遛原。將鈀碳除去後，減壓濃縮，冷凍乾煉之 ，得到粉末之胜肽 n-Pr-NHC(NH)-Tyr-(D)Arg-Phe-/3 /Ua-0 Η。此胜肽經胺基酸組成及質量分析，结果均支持上述構 造。 啻例9 θ' 經濟部中央標準局Μ工福利妾Μ會印製 得以卩謂 所 ZFJ保 8DB下被 例-0拌w 施la搅ΪΪ 實A溫〜 θ. , 將 _ 室丨 he於藥 -P，試 被 入 胜 1 胜 護酸HNAC 保鹽C-肽 肽 —- C 理 處 酯 乙 酸 乙 Ζ a 後化 基基 C 脒 BO醯 去乙 脫單 加碳 添鈀 ’ 去 中除 酸。 乙原η-於遛肽 溶觸胜 肽接之 胜使末 護，粉 保之得 被合 而 此混燥 將氣乾 氫凍 至冷 ΟΒ吹行 a-,進 A1中， 々 液縮 e-溶濃 ph至壓 )-碳減 Z2鈀， Γ 本紙張尺度適用中國國家標準cCNS )Α4規格（210 X 297公發) 1 S8Q142 H3 附 件 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 修正 年月曰.、87.10. 31 補充 第84102228號專利申請案 申請專利範圍修正本 下式所示化合物及其塩類， 式 [ R R Q 示 (87年10月31日） IX R 中 或 .，L 子子或 原原ΓΚ 氫氫-A 基 烷 或 子 原 氫 示 示 5 R % 基 烷 基 烷 羥 或 7 子 原 氫 示 子 原 氫 示 7 R 基 烷 烷-£基 -6C1燒 116 C 或 * 基、C 羧基、 、 烷子 基-6原 醯C1氧 甲基示 基醯R8 胺甲 .， 之基基 代胺烷 取之-6 未代C1 、 取基 基未羰 幾、氧 、 基烷 基 胺 醯 基 胍 r 基 烷 以或 與節 R6五 或成 , 形 基同 烷共 6 - 子 C1原 基氮 羥的 基的 代代 取取 、 之基 基R6羧 烷與之 _'起 節 C 一 六 1 R 9 中 其 。 類 )]塩 子其 原及 氫物 示合 9 b R 仆 ; 之 環項 雜 1 和第 飽圍 氮範 含利 專 請 申 如 2 本紙張尺度適用中國國家標準（CN S ) A4規格（210 X 297公楚) 1 Η θ· 析 分 量 質 及 酸 基 胺 經 肽 胜 此 造 構 述 上 持 支 果 结 例 诰 0 C 將 Z a Γ 獻 文 考 參 依 a c ο 及 η ο r 中 喃 呋 氫 四 之 燥入 乾加 於Τ.. 解拌 溶攪 )V 造 ο 製於 法 ， 方後 之納 3)化 99S (1入 92加 33下 9-OC 之 物 的 百 到 得 酸 乙 水 無 Ζ 經濟部中央標準局Μ工福利妾Μ會印製 本紙張尺度適用中國國家標準ccNS )A4规格（210X 297公楚) 2 H3 附件 年月曰87.10. 31. 84102228號專利申請案補充 申請專利範圍修正本 (87年10月31日） .下式所示化合物及其塩類，

   Η Η II- CHaCsH 2一 κ - C - L - Tyr - Q - N_ '德参Q - [式中， R1示氫原子或Ci-6烷基； R 2示氫原子； Q示 D-Arg或 L-Arg; X示 HR4RS(R4示氫原子或Ci-6烷基、R5示Ci-6羥烷基）， 或 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 MR6-CR7R8R9(R6示氫原子、Ci-6烧基；R7示氫原子 、羧基、未取代之胺基甲釀基、羧基Ci-6烷 基、未取代之胺基甲醯基Cl-6烷基、或Cu 烷氧羰基“·^烷基；R8示氧原子、Ci-6烷基 、醯胺基C i - 6烷基、胍基C t - _6烷基、 羥基Ci-6烷基，或R6與R8—起與R6之取代基 的氮原子共同形成五節或六節之羧基取代的 含氮飽和雜環；R9示氫原子）]。 2.如申請專利範圍第1項之化合物及其塩類，其中，R1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )A4規格（210 X 297公楚)~' HJzc<>JB>avr6-Arg,ph&-N(cei>CHnH2COOH P9OS Phe ^2:c{NH>-TyrO-Arg-ph?NHCHJCH; CONH, i Phe HzniNH}-Tyr-D-Arg-plle-2:HCH20HJCO0H LOO Phe in 1.05 lbo C29H45906 611 612<S+Hy 0 rol 1¾ i :^cd’ Igll^Lit Arg MbrcpAla 外^^:一 4 aU lb】 β/Jar02 C2OOK40N1005 ^ 597 (Μ+ΗΓ XJaAla lbl G2SHi906 597 59002+H〕' Axg i&a 、K 弋 ίΐΛίί -Ι9ΪΗΗ{Ι>-·.Ι<?~Ι^ /11^1^1-^ ttiNCC^-Tyr-D-AI^-ph^oMe H2NC{NH>.Tyr-D-Ar^.pb&-NHMe H2NC{NH>Ivr-D’Arg.phe^A3a-ol HJNCCNHvTyr-D-Arg-pbe-Gly-OH E^NCd-Tyr-D-AI^-plK-Aia-OB HJNCiNH>-Ty?9Arg-pi&-Mep Ali-OEt HJNC(NH}-Tyr-D-AIg、ph&-(n,pr)PAlaoH I.s 0.99 i P9O0 1.8 L.00 1.00 102 LOO roo -.001.01 Ibl CHyP9U Ala 0.95 C31H45Z906 6392:0 (M+Hr C26H3§S05 540 C26H37K904 539 C28H4IN905 hoow C2S37Z906 s C2SH39N906 597 C3UB45N906 639 541 (M+Hr MOCM+马 5SCM+HT 5S4 (S+Hr 治8 (Μ+ΗΓ 640 云+H)， 1.8 LOO 構造式 H2NC(NH)-Tyr-D-Arg-Pbe-N(CH2CH3>CH2CH2COOH 搆造式 Pbc ].00 Phe M 系t > ^ Λ _m__ L32 - 11 §戣 έ* φ !» w 彦 扣 吉 ^SZ^2^2Liiik<FAB) ioxrawa C30H43N9O6 625 626(Μ+Ή)+ P- I Λν- fLS c" © fflNONHyry r-D -Arg-ph?NH(CH^C02i^ «NC{NH>Tyr-D-AI^-phe6Me i 二.03roo roo Pbe 雜發 ψ- HJ2c(NH>Tyr,D-Arg-pie-MepAk0H P96 Pbe HjN〇NH 丫Tyr-D.AI?-Etphe-Ni-&Aia-OH ^NC{NH>-!>r,D-Alg-Meph?Mex»Ala0H Phe coAla 1.02 C29a41isf906 s 612CM+H)* C26H36N805 540 54〗(M+Hr MeoAJIM hli.^ ^__ 1.05 roo I ArpqiMbreaAla_ 1.03 1.00 1.02 .8 Αγη

   ^-H^CPAB)工加「4aldd- l^/LS·!^ /ItlTrs^ C2106 611 612CM+S+ JDm^ka ^ -i^Baad 辦|^*一'^ C3S45N906 S9 640(M+Hy n30H43MSK>6 scr\26CMiy / i ^^r^^cCFAB) 4jsm^a ίί?ΰΒ41^Ηι^ SI、J K3zc(NH>Tyr.D.Arg-:phe-NHCHnHtcHJ0H lbo L.05 HJNCCNHvTyr-D-Arg-phe-Arg-z,p'1,00L97 '^NC<NH>Tyr-D-Arg-phe-Leu-OH 1 .OQ 1.00 pNcfNH^-Tyr-D-Arg-plle-OH ^.00 【04 H2NC{NH>Tyr,D-Arg-phe-GIy6H 100 P9& 5NctzH}-Tyr-D-AJqg-ptr>e-ASP0H 1,000.99 ^NciNHJ-Tyr-D-Arg-phe-Ala-OH l.§ l‘g T^zcivTyr-D-AIg-phe-NfcHJK^CBLloH. 1.00 lol H2:-c{NHvTyr,I>-Acg-PIle-N(CH3}c^OOOMe 1.00 103 Hzc{NH>T>T,;D-Arg-ph?G?NH2 1.00P96 H3zc{NH>-Tyr-D-AIS-pll?N{CH3xcs^noNCM^0.98 rs i.s 0.96 H3NC{NHYTyr.D-Arg-pile-NHMe 1.00 】0「 H3NC{NH>-Tyr,D.AXg-phe-N{CH3XCH^COmi(n-Itx) LOO 103 H2NC{NH>-Tyr-D-Arg—phe-NHEEt 1 bo P9VO Hzc{NHvTyr-D-AIg-Fh7D-AIa-NH2 lbo l.s HJNqNH>-Tyr-D-AIg-phe-NoH3}CH(CH,>c8H 1.00 104 ffizqNH}-Tyr-D-Arg-d-phe-N(CH3)CK(s3}OOOH 1‘02 0.98 Loo— 0.97 1.00 Ala P96 Leu l.s Gly 0.95 Asp 】o5 Ala 0.95 Sar lol Gly 0.9 s Pro 105 C2SH4S9Q5 C3IH47N1305 C3LH45N906cizoooLrv C27H37N906 §H39N908 C200H39N905 C28H41N905 n29H4s906 C27H38N10O5 n3】HA6N1005 C30H41Z9O6 026H37N§ C35H54N185 C27EB 芝 9CH G28Hils5 C29PW1N906 C29H41N906 USos rlvl+ts;6001S2 (fur 639so (Μ+ΗΓ 526 527 583 5g4{i)’ 641 642 ?s+ 597 598 CM+a)* 5003 584 (M+Ar 6H 6SS十®* 582 s (M 与 638 § 623 624 ?H>* 53VO540^+与 69^ 695 (M+H+ 553 554 ?ar 5S 3(？Hr 611 612 (M+Hf 611 61204¾ n.prLHNCtzH>Tyr-<D)Arg-phe-T»AJa0l3 ph-HNC(NH}-TyIV9)Arg-ph?PAla-OH A?HNCCNH}-^r-8)Arg-ph?PAla-OH H2NaNH>Tyr-§Arg-phe-NH?pr) HJNqNH>Tyi-8)ATg-pITe-NH(CH^oH H2:c{NH>TyI-(D)AI^Phe-NHS(CH3)CB20HID】 Hzco'iHyTyJ.eWArg-phe-NHtcHyoH H2NQNH>-Tyr.cD)Arg-phe-G】y-CMe KJNC-gH^Tyr.ozoAxg-phsly—NHMe HzQNH>-Tyr.(D)Ar^-phe-MeGly0H KJNC{NH>-T^r-{D)Ar^-phe-Aja-OMe HzcfNH>-Tyr-CD)Arg-ph^Ala-NH2 Hzc{NH>Tyr,{D)Arg-phe-Ala-NHMe H2NQNH>-Tyr‘(D)Arg-phe-(D)Ak,NHMe H3NC{NHKy7§Arg-fh?(D)MI.0H H JNCiNHJ-Tyr. (D) Arg-Phe-β Ala-OH 105 rOG 1.00 1,00 LOGl_srod 103 103rs L.G2roo 1.00 1.00 L§ P95 P96 1.2 P94 roo 101 roo roo 1.00 so 0.9s 0.99 1.2 roo 0.97 lbo 0.96 Gly 104 Gly sv\ Sar 0.94 Ak S5 AJa G.96 Ak 0.95 Ala S5 ? lol PAla 0.98 fJAla S9 PAM 0.97 C30H41N907 639 C28H4IN92 638 C27H39N905 569 C2SH41N905 583 029H43N9Q5 597 C2SH39N906 597 C28I85 596 C28H39N906 597 C29i905 611 c28Hiloo5 596 C29H42N10C^ 6】0 C29H42N185 6J0 C29H4】N906 s G2ooffi39N906U197 639 CM+Hr 570{M+Hr 5O04CM+RT 598 H)* 59oo?Hr 597 CM十ΗΓ 5900CM+HT 612 (M+Hr 597{M+HT 61i (Μ+ΗΓ 611 (M+HT ε (M+Hr 598 (M+Hy C34H43N906 673 674t+Er C31H45N906 639 640 {M+E)— Et-HNC(NH}-Tyr-CD)AIS-Fh^-CBAJa6H Ei-HNCXNH>TyI-9)AI^Ph9MepAIa0H Ibo 1.00 Phe lbl l.g ib4 pAla P98 Arg MbrcaAia m2^t 銮__E____ HJMaNH}-Tyr,D-Arg-pbe-NHCoH3),COOK I boP96 H2NaNH>Tyr-D-Arg-ph?3-§CH<PHJ)c8H LooP95 HzctNHyr^D-Arg--phe~D-Ala0H 1.00ps H2zc(NH>Tyr-Ar^-phe,N(CH3KCH^COOH 【00r05 H3NC{NH>Tyr-D-Arg-phe-NHCHJCH2SPH roo 1.0】 i-fH^NCiNE^-T'yr-D-Atg-phel-pipcridiDe 1.00 1.20 l-tHJNCXNHyryr-D.Arg-phe.pipeEazine 1.00 1.04-Η5ζΟΝΗ>τ>Γ-ΑΧο«ι-ρίι9Ν<€Η,ο,Η5)οΗ^€οοκ i l.tol K,NC(NH>Tyr-Arg-ph§,s>-NHCH,CH{cw}COOEr 100r05 «NC{NH>Tyr-Arg，pcre-N(c£^CBxCH^CCO^ l.§ 1.32 mJNC{NHvTyr-AJg-phe-phe-OH 2,00 P96 1.04 C30H43N9O6 625S6 CM+S， C3m45N906 639SOCM+S, t Tau0.99 Ala 0.96 C29H41N906 611 C29H41N9O6 611 C28H39N906 597 C29a412:906 611 C27B39N907S 633 c30ra43N9CH1-093 C2S42N1CXM 594 Π35Η45Ν906 § C29H4S906 6 二 C31H45N905 639 C34H43N906 673 612 (M+Hr ‘ 598 (M+Ir 612 (M+s* 634 ?HT 594 (Μέ* 595 ?H>‘ 688 {Μ+ΗΓ 6SS+HT Ss+B)+ 6：M (M+Hr ί、$·λ lrr上.L h<^5lrs:cl^fl ~f u-c-7-At>K、£T<、j^(el-5k^/友^?^t ♦ ijt>i»x.s7-一 ) e ]WJ]-^-^-^--1^4^^ ti 浒一 : ^-^^^^FLVenCLreQI^wtJ.OIromatogr. a5s:0I-4I3溶批^'^/^2 旁 u, iil^iiTuvFf—^;· EVSLI-VGIOfsu'sp。 HJNCXNH>Tyr-CD)Arg-phe,wepAla-N^ a1zn{NHKryr<D)AIK-phe-MepAIa-NHMe HJNC{NHVT>zD)Arg-phe—？PAIa-NEEt H^NQNH>Tyr-§Arg-phe—MS?a-NH?pr) HJNQNH}-Tyr-(D)Arg-Fbe—？p Ala-N§J ffizc{NH>-Tyr.§Arg_phe-Bx»Ala-CMe I HJNOCNH}-ryr-§AJg-pbe—(D)AIg-NH^ HzONH}-Tyr.cD)Artrt,Fh?>su-0al H,ZCCNHH>r-B)Arg.phe-sar-OH HJNQNH}-Tyr’§Arg-phe-pro-OH szONH3-ryr-CD)Arg-pbe-pro-oMe lbo Ibo 1.03 1.00 lbo 1.96 P95 】‘00 0.96 P94 LOO 1.32 roo 1.05 0.95 0.97 LOG J.05 P97 lbJ ibo 1.00 1.06 pvfig LOO 1.0】 roo C29H42N185 610 611 <2+ffl>* n3oEi85 624 625.(M+Hr C311005 638 § c32E-ck.8Nls5 652 s ¥5* C33H5GN185 666 667 ir C3m45z906 639so{M+fo, Π31.Η47ΝΙ305 681 6002 CM+Hy Asu P97 C33H47N908 697 698 CM+E)* Sar 0.9私 C28H39N906 597 59S <M+By Pro 105 C30H41N906 §CTS24 (M+H)* Pro 0.9s C31H432:906 637 638 {S+Hy HJZCiF'iHyTyzSArglphe-Mep Ala-OH 0.96 1,05 i C29H41N906 6112:2{M+H)+ ^fcTtvwfi, 都i;l'llc3l3fp>iA'ST? &n^0 00 蹈漭 is谇 蓉荖黑$4^决背户.¾^cfcsr

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   C · H〒 Tyr-D . Arg.-phe—J3 ->a -〇H^s : 597 H2N、 HN. <~\Mi〕.+£ ciii•€ID-Maee-e-peetmm-el4h(b--^M-f44l· Cl Ο 4 i ?') i . spectmm- m n/i H2N C · HN . Tyr-D · Arg-Phe-i3 * Ala · OH MW ; 597 Hass m/z %RA ft 598 0.51 MH 581 4.34 b4 (mh-nh3]+ 580 4.40 [MH-H2〇> 564 3.46 (ΜΗ-2ΝΗ3Γ 563 2.48 b*4 S21 10.08 [yQj-NH3}··, [y*4-H20]h 520 2.08 [y^i -2H 2〇]+.lMH-Gua-2H 2〇+H> 462 8.95 - [y〇4- (Gua-NH)- .HjO}*· 393 100.00 Y3 384 2.93 376 14.57 y*3 b*2 345 6.02 - 285 2.78 [YR-NH3-H20}+ 259 13.00 [RF-C0-NH 3]+ 244 2.66 237 6-27 Y2 217 •3.07 [RF-CO-NH 3-Gua+H] + 157 10.87 [R+C〇r 140 9.05 [r+co-nh3]+ 120 2.50 F. , 112 6.22 [r -νη3]+ [主） i右^ 1¾¾ mi<eK - n t4 ^ Ammonium Ion):沉冶toerca^OZrT^:— • -i»D .ic 上。7亡-/砹=J~~H^re^ ^ ^femal Ion : iS^ey·!^; tsne l&ttereoded石配列 1?.裘.2己房·么叫 i3 j 色？滅士 4mmoniui|iSl!; »^1 型-CO Gua ^τ-m 瓜I MM NH C Gua-NH C-NH S8Q142 H3 附 件 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 修正 年月曰.、87.10. 31 補充 第84102228號專利申請案 申請專利範圍修正本 下式所示化合物及其塩類， 式 [ R R Q 示 (87年10月31日） IX R 中 或 .，L 子子或 原原ΓΚ 氫氫-A 基 烷 或 子 原 氫 示 示 5 R % 基 烷 基 烷 羥 或 7 子 原 氫 示 子 原 氫 示 7 R 基 烷 烷-£基 -6C1燒 116 C 或 * 基、C 羧基、 、 烷子 基-6原 醯C1氧 甲基示 基醯R8 胺甲 .， 之基基 代胺烷 取之-6 未代C1 、 取基 基未羰 幾、氧 、 基烷 基 胺 醯 基 胍 r 基 烷 以或 與節 R6五 或成 , 形 基同 烷共 6 - 子 C1原 基氮 羥的 基的 代代 取取 、 之基 基R6羧 烷與之 _'起 節 C 一 六 1 R 9 中 其 。 類 )]塩 子其 原及 氫物 示合 9 b R 仆 ; 之 環項 雜 1 和第 飽圍 氮範 含利 專 請 申 如 2 本紙張尺度適用中國國家標準（CN S ) A4規格（210 X 297公楚) 1 S8G.I42 、' 1 _____H3 _ 係氫原子_者〇 _ _ _… 3. 如申請專利範圍第1項或第2項之化合物及其塩類， 其中，R6係甲基或乙基者。 4. 如申請專利範圍第3項之化合物及其塩類，其中，R7 係羧基或胺基甲醯基者。 5. 如申請專利範圍第1項之化合物及其塩類，其中，R7 係羧甲基或胺基甲醯甲基者。 6. 如申請專利範圍第1項之化合物及其塩類，其中，Q係 D - A r g 者0 7. 如申請專利範圍第6項之化合物及其塩類，其中，R1 係氫原子，R6係氫原子，R7係羧甲基，及R8係氫原 子者。 8. 如申請專利範圍第6項之化合物及其塩類，其中，R1 係氫原子，R6傜氫原子，R7係胺基甲醯甲基，及R8係 氫原子者。 9. 如申請專利範圍第6項之化合物及其塩類，其中，R1 係氫原子，R6係甲基，R7係羧甲基，及R8係氫原子者 0 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 10. 如申請專利範圍第6項之化合物及其塩類，其中，R1 係氫原子，R6係乙基，R7係羧甲基，及R8係氫原子。 11. 如申請專利範圍第1項之化合物之塩類，係圼塩酸塩 或乙酸塩者。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )A4規格（210 X 297公瘦) H3 附件 年月曰87.10. 31. 84102228號專利申請案補充 申請專利範圍修正本 (87年10月31日） .下式所示化合物及其塩類，

   Η Η II- CHaCsH 2一 κ - C - L - Tyr - Q - N_ '德参Q - [式中， R1示氫原子或Ci-6烷基； R 2示氫原子； Q示 D-Arg或 L-Arg; X示 HR4RS(R4示氫原子或Ci-6烷基、R5示Ci-6羥烷基）， 或 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 MR6-CR7R8R9(R6示氫原子、Ci-6烧基；R7示氫原子 、羧基、未取代之胺基甲釀基、羧基Ci-6烷 基、未取代之胺基甲醯基Cl-6烷基、或Cu 烷氧羰基“·^烷基；R8示氧原子、Ci-6烷基 、醯胺基C i - 6烷基、胍基C t - _6烷基、 羥基Ci-6烷基，或R6與R8—起與R6之取代基 的氮原子共同形成五節或六節之羧基取代的 含氮飽和雜環；R9示氫原子）]。 2.如申請專利範圍第1項之化合物及其塩類，其中，R1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )A4規格（210 X 297公楚)~' 580142 ‘ ) ' _H3_ 係氫原子者。 3. 如申請專利範圍第1項或第2項之化合物及其塩類， 其中，R6係甲基或乙基者。 4. 如申請專利範圍第3項之化合物及其塩類，其中，R7 係羧基或胺基甲醯基者。 5. 如申請專利範圍第1項之化合物及其塩類，其中，R7 係羧甲基或胺基甲醯甲基者。 6. 如申請專利範圍第1項之化合物及其塩類，其中，Q係 D - A r g 者。 7. 如申請專利範圍第6項之化合物及其塩類，其中，R1 係氫原子，R6係氫原子，R7係羧甲基，及R8係氫原 子者。 ’ 8. 如申請專利範圍第6項之化合物及其塩類，其中，R1 係氫原子，R6係氫原子，R7係胺基甲醯甲基，及R8係 氫原子者。 9. 如申請專利範圍第6項之化合物及其塩類，其中，R1 係氫原子，R6係甲基，R7係羧甲基，及R8係氫原子者 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 塩及類 其，塩 及基之 物甲物 合羧合 化係化 之 R 之， 項 ，項 6 基 1 第乙第 圍係圃 範 R 範。 利 ，利者 專子專塩 請原請酸 申氫申乙 如係如或

   R1。塩 ,子酸 中原塩 其氫圼 , 係 係 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公楚) 2