CN103180338A - 糖依赖性胰岛素释放肽类似物 - Google Patents

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CN103180338A CN2011800513187A CN201180051318A CN103180338A CN 103180338 A CN103180338 A CN 103180338A CN 2011800513187 A CN2011800513187 A CN 2011800513187A CN 201180051318 A CN201180051318 A CN 201180051318A CN 103180338 A CN103180338 A CN 103180338A
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Abstract

本发明提供了作为糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)的类似物的化合物和这样的化合物的药学上可接受的盐。这些化合物具有作为GIP受体的激动剂的活性。

Description

糖依赖性胰岛素释放肽类似物
本发明提供了作为糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)的类似物的化合物和这样的化合物的药学上可接受的盐。本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以用于治疗代谢疾病和紊乱，包括、例如，肥胖、糖尿病、代谢综合征、胰岛素抗性、异常脂血症、空腹血糖受损和糖耐量减低。
在某些实施方案中，所述化合物是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
(Y)n-R1-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-R2-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-R3-NH2    (I)
其中：
R1选自：(D)Tyr、DesNH2-Tyr、(D)Phe、DesNH2-Phe、(D)Trp、(D)3Pya、2-Cl-(D)Phe、3-Cl-(D)Phe、4-Cl-(D)Phe、2-F-(D)Phe、3-F-(D)Phe、3，5-二F(D)Phe和3，4，5-三F(D)Phe；
R2是Lys或Ala；
R3是Lys或聚乙二醇化的Lys；
Y是酰基；
当R1是(D)Tyr、(D)Phe、(D)Trp、(D)3Pya、2-Cl-(D)Phe、3-Cl-(D)Phe、4-Cl-(D)Phe、2-F-(D)Phe、3-F-(D)Phe、3，5-二F(D)Phe或3，4，5-三F(D)Phe时，n是1；且
当R1是DesNH2-Tyr或DesNH2-Phe时，n是0。
胰岛素是通过刺激葡萄糖在肝、肌肉和脂肪组织中的吸收而在葡萄糖代谢的调节中起重要作用的激素。葡萄糖被储存在这样的组织中，并被代谢以供给能量。胰岛素产生故障、胰岛素调节异常或对胰岛素的抗性会导致代谢疾病和紊乱，例如，糖尿病。
糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)是由肠上段分泌的42-残基肽。碳水化合物和脂类都会刺激GIP的分泌。与胰高血糖素样肽-1(GLP-1)一样，GIP是一种肠降血糖素，这意味着，它具有刺激胰岛素释放的能力。GIP的效应是通过它与GIP受体(GIPR)的结合来介导。据信，该结合会刺激cAMP，所述cAMP促进胰腺β-细胞中的葡萄糖刺激的胰岛素释放。
在体内，天然GIP被酶二肽基肽酶IV(DPPIV)快速地降解，该酶除去2个N-端残基：Tyr-Ala。天然GIP在体内的半衰期是约2-7分钟，这取决于物种。代谢物(GIP3-42)不会活化GIPR，并且实际上充当GIPR的拮抗剂。另外，所述代谢物在人类中可容易地清除。这样，天然GIP作为治疗剂的有效性受到限制。
本发明涉及截短的GIP(1-42)类似物的开发，所述截短的GIP(1-42)类似物保留GIP的效能和它的结合GIPR的能力，从而充当GIPR的激动剂，同时具有与天然GIP相比提高的血浆稳定性和增加的体内半衰期。
图1显示了含有实施例20的化合物的反应混合物的RP-HPLC色谱图。
图2显示了纯化的实施例20的化合物的RP-HPLC色谱图。
图3显示了实施例20的化合物的MALDI-TOF谱。
图4显示了含有实施例21的化合物的反应混合物的RP-HPLC色谱图。
图5显示了纯化的实施例21的化合物的RP-HPLC色谱图。
图6显示了实施例21的化合物的MALDI-TOF谱。
图7显示了含有实施例22的化合物的反应混合物的RP-HPLC色谱图。
图8显示了纯化的实施例22的化合物的RP-HPLC色谱图。
图9显示了实施例22的化合物的MALDI-TOF谱。
根据一般约定书写本文提及的所有的肽序列，其中N端氨基酸在左边，而C端氨基酸在右边，除非另外指出。在两个氨基酸残基之间的短线指示肽键。当氨基酸具有同分异构形式时，其是表示的氨基酸的L形式，除非另外特别指出。除非特别指出，所述残基未被聚乙二醇化。
为了描述本发明的方便，使用各种氨基酸残基的常规和非常规缩写。这些缩写是本领域技术人员熟悉的，但是为了清楚在下面列出：
Asp＝D＝天冬氨酸；Ala＝A＝丙氨酸；Arg＝R＝精氨酸；Asn＝N＝天冬酰胺；Gly＝G＝甘氨酸；Glu＝E＝谷氨酸；Gln＝Q＝谷氨酰胺；His＝H＝组氨酸；Ile＝I＝异亮氨酸；Leu＝L＝亮氨酸；Lys＝K＝赖氨酸；Met＝M＝甲硫氨酸；Phe＝F＝苯丙氨酸；Pro＝P＝脯氨酸；Ser＝S＝丝氨酸；Thr＝T＝苏氨酸；Trp＝W＝色氨酸；Tyr＝Y＝酪氨酸；和Val＝V＝缬氨酸。
还为了方便，且本领域技术人员可容易地知晓，使用下列的缩写或符号来表示本发明中使用的结构部分、试剂等：
(D)Tyr                D-酪氨酸
DesNH2-Tyr            脱氨基酪氨酸
(D)Phe                D-苯丙氨酸
DesNH2-Phe            脱氨基苯丙氨酸
(D)Trp                D-色氨酸
(D)3Pya               D-3-吡啶基丙氨酸
2-Cl-(D)Phe           D-2-氯苯丙氨酸
3-Cl-(D)Phe           D-3-氯苯丙氨酸
4-Cl-(D)Phe           D-4-氯苯丙氨酸
2-F-(D)Phe            D-2-氟苯丙氨酸
3-F(D)Phe             D-3-氟苯丙氨酸
3，5-二F-(D)Phe       D-3，5-二氟苯丙氨酸
3，4，5-三F-(D)Phe    D-3，4，5-三氟苯丙氨酸
SSA                   琥珀酰亚胺基琥珀酰胺
PEG                   聚乙二醇
PEGm                  (甲氧基)聚乙二醇
PEGm(12,000)          具有约12kD的分子量的(甲氧基)聚乙二醇
PEGm(20,000)          具有约20kD的分子量的(甲氧基)聚乙二醇
PEGm(30,000)          具有约30kD的分子量的(甲氧基)聚乙二醇
Fmoc                  9-芴基甲氧羰基
DMF                   二甲基甲酰胺
DIPEA                 N，N-一异丙基乙胺
TFA                   三氟乙酸
HOBT                  N-羟基苯并三唑
BOP                   苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)
Figure BDA00003096116900041
-六氟磷酸盐
HBTU                  2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲
Figure BDA00003096116900042
-六氟磷酸盐
NMP                   N-甲基-吡咯烷酮
FAB-MS                快速原子轰击质谱
ES-MS                 电喷雾质谱
本文使用的“PEG部分”表示聚乙二醇(PEG)或其衍生物，例如(甲氧基)聚乙二醇(PEGm)。
本文使用的“聚乙二醇化的肽”表示其中至少一个氨基酸残基(例如，赖氨酸)已经缀合有PEG部分的肽。“缀合”是指，所述PEG部分与所述残基直接连接，或者经由间隔部分(例如交联剂)与所述残基连接。当所述缀合是在赖氨酸残基处时，该赖氨酸残基在本文中被称作“聚乙二醇化的Lys”。与仅一个PEG部分缀合的肽被称作“单聚乙二醇化的”。
本文使用的“Lys-PEG”和“Lys-PEGm”分别表示已经与PEG和PEGm缀合的赖氨酸残基。“Lys(ε-SSA-PEGm)/Lys(epsilon-SSA-PEGm)”表示其中ε-氨基已经使用适当地官能化的SSA与PEGm交联的赖氨酸残基。“Lys(ε-SSA-PEGm(12,000)/Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000)”表示其中ε-氨基已经使用适当地官能化的SSA与PEGm(12,000)交联的赖氨酸残基；“Lys(ε-SSA-PEGm(20,000)/Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000)”表示其中ε-氨基已经使用适当地官能化的SSA与PEGm(20,000)交联的赖氨酸残基；和“Lys(ε-SSA-PEGm(30,000)/Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000)”表示其中ε-氨基已经使用适当地官能化的SSA与PEGm(30,000)交联的赖氨酸残基。
本文使用的术语“药学上可接受的盐”是指式(I)化合物的任何药学上可接受的盐。盐可以由药学上可接受的非毒性的酸和碱制备，所述酸和碱包括无机的和有机的酸和碱。这样的酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、二氯乙酸、甲酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、草酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、三氟乙酸、草酸和对甲苯磺酸等。在一个实施方案中，所述酸是富马酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、三氟乙酸或甲磺酸。可接受的碱盐包括碱金属(例如钠、钾)盐、碱土金属(例如钙、镁)盐和铝盐。
术语“药物制剂”表示这样的制剂：其处于允许其中含有的活性成分的生物活性为有效的形式，且其不含有对于所述制剂将要施用的受试者而言具有不可接受的毒性的其它组分。
本文使用的“药学上可接受的载体”表示药物制剂中除了活性成分以外的成分，其对受试者是非毒性的。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
本文使用的“治疗(treatment)”(及其语法变体，诸如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)指在尝试改变待治疗的个体的天然进程中的临床介入，并且可以为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的理想效果包括但不限于防止疾病发生或复发，缓和症状，消除疾病的任何直接或间接病理学后果，预防转移，减少疾病进展速率，改善或减轻疾病状态和症状缓解或改善的预后。在一些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。
这些化合物具有作为GIP受体的激动剂的活性。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的如上所述的化合物或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体。
本发明还涉及如上所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。
另外，本发明涉及一种治疗代谢疾病或紊乱的方法，所述代谢疾病或紊乱例如肥胖、糖尿病、代谢综合征、胰岛素抗性、异常脂血症、空腹血糖受损和糖耐量减低，所述方法包括：给需要所述治疗的患者施用有效量的如上所述的化合物或其药学上可接受的盐。
另外，本发明涉及一种激动(agonizing)个体中的糖依赖性胰岛素释放多肽受体(GIPR)的方法，所述方法包括：以有效地激动GIPR的量，给所述个体施用如上所述的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明提供了作为糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)的类似物的化合物和这样的化合物的药学上可接受的盐。这些化合物具有作为GIP受体的激动剂的活性。
在某些实施方案中，所述化合物是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
(Y)n-R1-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-R2-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-R3-NH2    (I)
其中：
R1选自：(D)Tyr、DesNH2-Tyr、(D)Phe、DesNH2-Phe、(D)Trp、(D)3Pya、2-Cl-(D)Phe、3-Cl-(D)Phe、4-Cl-(D)Phe、2-F-(D)Phe、3-F-(D)Phe、3，5-二F(D)Phe(3，5-DiF(D)Phe)和3，4，5-三F(D)Phe(3，4，5-TriF(D)Phe)；
R2是Lys或Ala；
R3是Lys或聚乙二醇化的Lys；
Y是酰基；
当R1是(D)Tyr、(D)Phe、(D)Trp、(D)3Pya、2-Cl-(D)Phe、3-Cl-(D)Phe、4-Cl-(D)Phe、2-F-(D)Phe、3-F-(D)Phe、3，5-二F(D)Phe或3，4，5-三F(D)Phe时，n是1；且
当R1是DesNH2-Tyr或DesNH2-Phe时，n是0。
在本发明的一个实施方案中，R1选自：(D)Tyr或DesNH2-Tyr。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr。
在本发明的一个实施方案中，R1选自：(D)Phe、DesNH2-Phe、2-Cl-(D)Phe、3-Cl-(D)Phe、4-Cl-(D)Phe、2-F-(D)Phe、3-F-(D)Phe、3，5-二F-(D)Phe和3，4，5-三F-(D)Phe。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Trp。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)3Pya。
在本发明的一个实施方案中，R2是Lys。
在本发明的一个实施方案中，R2是Ala。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys。
在本发明的一个实施方案中，R3是聚乙二醇化的Lys。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys-PEG。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys-PEGm。
在本发明的一个实施方案中，R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约20,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约5,000至约40,000道尔顿的的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约20,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys(ε-SSA-PEGm)。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys(ε-SSA-PEGm)，其中所述PEGm具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R3选自：Lys(ε-SSA-PEGm(12,000))、Lys(ε-SSA-PEGm(20,000))、和Lys(ε-SSA-PEGm(30,000))。
在本发明的一个实施方案中，R3是Lys(ε-SSA-PEGm(20,000))。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，且R2是Ala。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中所述PEG部分具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中所述PEG部分具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中所述PEG部分具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中所述PEG部分具有约20,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中所述PEGm具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中所述PEGm具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中所述PEGm具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中所述PEGm具有约20,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，R1是(D)Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中所述PEGm具有约20,000道尔顿的分子量。
在本发明的一个实施方案中，所述化合物选自：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：3)；DesNH2-Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：4)；
Ac-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：5)；DesNH2-Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：6)；
Ac-(D)Trp-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：7)；Ac-(D)3Pya-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：8)；
Ac-2-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-AsP-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：9)；Ac-3-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：10)；
Ac-4-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：11)；
Ac-2-F-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：12)；
Ac-3-F-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：13)；
Ac-3，5-DiF-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ IDNO：14)；
Ac-3，4，5-TriF-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-AsP-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQID NO：15)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-AsP-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：16)；Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000))-NH2(SEQ ID NO：17)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；和
它们的药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方案中，所述化合物选自：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQID NO：16)；Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000))-NH2(SEQ ID NO：17)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；
及其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方案中，所述化合物是：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：16)
或其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方案中，所述化合物选自：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000))-NH2(SEQ ID NO：17)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；
及其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方案中，所述化合物选自：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；
及其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方案中，所述化合物是
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys
(ε-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)或其药学上可接受的盐。
本发明的化合物可以通过用于在氨基酸之间形成肽键的任何已知常规方法容易地合成。这些常规方法包括例如任何溶液相方法，该方法允许氨基酸或其片段(它的羧基和其它反应性基团被保护)的游离α-氨基基团和另一个氨基酸或其片段(它的氨基或其它反应性基团被保护)的游离的伯羧基基团之间的缩合。
这些用于合成本发明新型化合物的常规方法包括例如任何固相肽合成法。在该方法中，新化合物的合成可以如下进行：按照固相法的一般原理，相继地将所需氨基酸残基每次一个地结合到生长的肽链上。这些方法公开在例如Merrifield，R.B.，J.Amer.Chem.Soc.(美国化学协会会刊)85，2149-2154(1963)；Barany等，The Peptides，Analysis，Synthesis and Biology(肽，分析，合成和生物学)，卷2，Gross，E.和Meienhofer，J.，Eds.学术出版社(Academic Press)1-284(1980)中，这些文献通过引证结合入本文中。
在肽合成过程中，可能希望对氨基酸上的某些反应基团(例如，α-氨基、羟基和/或反应性的侧链基团)进行保护，以防止与它们发生化学反应。这可以如下实现：例如，使所述反应基团与保护基反应，所述保护基可以在以后除去。例如，可以保护氨基酸或其片段的α氨基，以防止与其发生化学反应，而该氨基酸或其片段的羧基与另一个氨基酸或其片段反应以形成肽键。这之后可以选择性地除去α氨基保护基，以允许在该位点发生后续反应，例如与另一个氨基酸或其片段的羧基反应。
α氨基可以例如被选自以下的适当的保护基保护：芳族氨基甲酸乙酯类型的保护基，如烯丙氧羰基、苄氧羰基(Z)和取代的苄氧羰基，如对氯苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、对溴苄氧羰基、对联苯基-异丙氧羰基、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)和对甲氧基苄氧羰基(Moz)；和脂族氨基甲酸乙酯类型的保护基，如叔丁氧羰基(Boc)、二异丙基甲氧羰基、异丙氧羰基和烯丙氧羰基。在一个实施方案中，Fmoc用于α氨基保护。
氨基酸的羟基(OH)可以例如被选自以下的适当的保护基保护：苄基(Bzl)、2，6-二氯苄基(2，6diCl-Bzl)和叔丁基(t-Bu)。在其中意图保护酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸的羟基的实施方案中，可以使用例如t-Bu。
ε-氨基酸基团可以例如被选自以下的适当的保护基保护：2-氯-苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴-苄氧羰基(2-Br-Z)、烯丙基羰基和叔丁氧羰基(Boc)。在其中意图保护赖氨酸的ε-氨基的实施方案中，可以使用例如Boc。
β-和γ-酰胺基团可以例如被选自以下的适当的保护基保护：4-甲基三苯甲基(Mtt)、2，4，6-三甲氧基苄基(Tmob)、4，4′-二甲氧基二苯甲基(dityl)(Dod)、二-(4-甲氧基苯基)-甲基和三苯甲基(Trt)。在其中意图保护天冬酰胺或谷氨酰胺的酰胺基的实施方案中，可以使用例如Trt。
吲哚基团可以例如被选自以下的适当的保护基保护：甲酰基(For)、2，4，6-三甲苯基-2-磺酰基(Mts)和叔丁氧羰基(Boc)。在其中意图保护色氨酸的吲哚基团的实施方案中，可以使用例如Boc。
咪唑基团可以例如被选自以下的适当的保护基保护：苄基(Bzl)、叔丁氧羰基(Boc)和三苯甲基(Trt)。在其中意图保护组氨酸的咪唑基团的实施方案中，可以使用例如Trt。
固相合成可以从肽的C-末端开始，将被保护的α-氨基酸偶联至适当的树脂。该原材料可以如下制备：将α-氨基-保护的氨基酸通过酯键连接到对-苄氧基苄基醇(Wang)树脂上，或通过Fmoc-接头，如对-((R，S)-α-(1-(9H-芴-9-基)-甲氧基甲酰氨基)-2，4-二甲基氧基苄基)-苯氧基乙酸(Rink接头)和二苯甲基胺(BHA)树脂之间的酰胺键连接。羟甲基树脂的制备是本领域公知的。Fmoc-接头-BHA树脂支持体是可商购的并且通常当被合成的所需肽在C-末端具有未取代的酰胺时使用。
在一个实施方案中，用微波辅助肽合成。微波辅助的肽合成是一种有吸引力的加速固相肽合成的方法。这可以如下实现：使用微波肽合成仪，例如Liberty肽合成仪(CEM Corporation，Matthews，NC)。微波辅助的肽合成允许建立这样的方法：所述方法控制反应在设定的温度持续设定的时间量。所述合成仪自动地调节递送给反应的功率的量，以保持温度在设定点。
典型地，使用氨基酸或模拟物的Fmoc保护形式，用2-5当量的氨基酸和适当的偶联剂，将氨基酸或模拟物偶联到Fmoc-接头-BHA树脂上。在偶联后，可以洗涤树脂并在真空下干燥。氨基酸在树脂上的负载可以通过对等分试样的Fmoc-氨基酸树脂的氨基酸分析、或通过UV分析测定Fmoc基团来确定。任何未反应的氨基可以通过将树脂与在二氯甲烷中的乙酐和二异丙基乙胺反应来加帽。
对树脂进行几个重复循环，以顺序地添加氨基酸。在碱性条件下除去α氨基Fmoc保护基。在DMF中的哌啶、哌嗪或吗啉(20-40％v/v)可以用于该目的。在一个实施方案中，使用在DMF中的20％哌啶。
在除去α氨基保护基之后，将随后的被保护的氨基酸以所需顺序逐步偶联以获得中间体，被保护的肽-树脂。在肽的固相合成中用于氨基酸偶联的活化试剂是本领域公知的。例如，用于该合成的适当试剂是苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)
Figure BDA00003096116900141
六氟磷酸盐(BOP)、三吡咯烷基溴化六氟磷酸盐(PyBroP)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲
Figure BDA00003096116900143
六氟磷酸盐(HBTU)和二异丙基碳二亚胺(DIC)。在一个实施方案中，所述试剂是HBTU或DIC。Barany和Merrifield描述了其它活化剂(在The Peptides(肽)，卷2，J.Meienhofer编，学术出版社(Academic Press)，1979，第1-284页)。可以将各种试剂如1-羟基苯并三唑(HOBT)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)和3，4-二氢-3-羟基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪(HOOBT)加入偶联混合物中，以便最优化合成循环。在一个实施方案中，加入HOBT。
在肽合成以后，可以除去封闭基团，并从树脂上切割肽。例如，每克树脂可以用100μL乙二硫醇、100μl二甲基硫、300μL茴香醚和9.5mL三氟乙酸在室温下处理肽-树脂180分钟。备选地，每克树脂可以用1.0mL三异丙基硅烷和9.5mL三氟乙酸在室温下处理肽-树脂90分钟。然后将树脂滤出，通过加入冷乙醚来沉淀肽。然后可以将沉淀物离心，并滗析乙醚层。
例如，通过在反相C18柱(50x250mm，
Figure BDA00003096116900151
10μm)上的高效液相色谱法(HPLC)，可以在Shimadzu LC-8A系统上进行粗制肽的纯化。可以将肽溶解在最小量的水和乙腈中，并注射到柱中。通常在2％-70％B开始梯度洗脱，历时70分钟(缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)，流速为60ml/min。紫外检测设定在220/280nm。可以分离含有产物的级分，并在Shimadzu LC-10AT分析系统上判断它们的纯度，其中使用反相Pursuit C18柱(4.6x50mm)，流速为2.5ml/min，梯度(2-70％)历时10min[缓冲液A：0.1％TFA/H2O，缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)]。然后可以将判断为高纯度的级分合并，并冻干。
如上所述，在某些实施方案中，将在本发明的肽的位置30处的赖氨酸残基在ε-氨基处与PEG部分例如使用SSA交联。所述交联可以在碱性pH的溶液中进行，其中交联剂优先与伯胺(诸如ε-胺)反应。得到的聚乙二醇化的肽通过稳定的酰胺键共价地缀合。然后可以通过阳离子/阴离子交换色谱法从反应混合物中分离出聚乙二醇化的肽，其中交换树脂的选择通常取决于缀合物的净电荷。
本发明的化合物可以以药用盐的形式提供。优选的盐的实例是与药用有机酸以及聚合酸形成的那些和与无机酸形成的盐，所述有机酸如乙酸、乳酸、马来酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸或双羟萘酸，所述聚合酸如鞣酸或羧甲基纤维素，所述无机酸如氢卤酸(例如，盐酸)、硫酸或磷酸等。可以使用本领域技术人员已知的获得药用盐的任何方法。
本发明也部分地涉及一种治疗代谢疾病或紊乱的方法，所述方法包括：给需要所述治疗的患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。所述代谢疾病或紊乱可以是，例如，肥胖、2型糖尿病、代谢综合征、胰岛素抗性、异常脂血症、空腹血糖受损或糖耐量减低。
在本发明方法的实施中，经由本领域已知的任何常规的和可接受的方法，单独或者组合施用有效量的任一种本发明化合物或其药学上可接受的盐，或任一种本发明化合物或其药学上可接受的盐的组合。施用可以例如进行一天一次，每三天一次或一周一次。化合物或组合物可以通过以下方式施用：例如，口服(例如口腔)，舌下，肠胃外(例如，肌内，静脉内，或皮下)，直肠(例如，通过栓剂或洗剂)，透皮(例如，皮肤电穿孔)或通过吸入(例如通过气溶胶)，和以固体、液体或气体剂型的形式，包括片剂和混悬剂。给药可以以单一单位剂量形式连续治疗或随意以单一剂量治疗进行。治疗组合物还可以是与亲油性盐如双羟萘酸结合的油乳剂或分散体的形式，或者是用于皮下或肌内给药的生物可降解的缓释组合物的形式。
例如，当症状的减轻特别需要或可能危急时，可以实施本发明的方法。备选地，本发明的方法可以例如作为连续或预防性治疗而有效实施。
本发明也部分地涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体。
用于制备此组合物的有用药物载体可以是固体，液体或气体；因此，组合物可以采取片剂，丸剂，胶囊，栓剂，粉剂，肠溶包衣或其它保护的制剂(例如结合在离子-交换树脂上或包装在脂质-蛋白囊泡中)，缓释制剂，溶液剂，混悬剂，酏剂，气溶胶等形式。载体可以选自各种油类，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油，大豆油，矿物油，芝麻油等。水、盐水、葡萄糖水溶液和二元醇是优选的液体载体，特别是(当与血液等渗时)用于注射液。例如，用于静脉内给药的制剂包括一种或多种活性成分的无菌水溶液，其制备如下：将一种或多种固体活性成分溶解在水中，产生水溶液，并使得溶液无菌。适当的药用赋形剂包括淀粉，纤维素，滑石，葡萄糖，乳糖，滑石，明胶，麦芽，大米，面粉，白垩，硅石，硬脂酸镁，硬脂酸钠，单硬脂酸甘油酯，氯化钠，干脱脂奶粉，甘油，丙二醇，水，乙醇等。组合物可以加入常规药物添加剂，如防腐剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，用于调节渗透压的盐，缓冲剂等。适当的药用载体和它们的制剂在E.W.Martin的Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药科学)中描述。这些组合物在任何情况下将含有有效量的活性化合物以及适当的载体，以便制备用于适当给药于接受者的适当剂型。
本发明另外涉及一种在个体中激动糖依赖性胰岛素释放多肽的方法，所述方法包括：以有效地激动糖依赖性胰岛素释放多肽受体的量，给所述个体施用式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的化合物的剂量取决于许多因素，如例如，给药方式，受试者的年龄和体重，和待治疗的受试者的病症，并且最终将由主治医生或兽医决定。这样的由主治医生或兽医确定的活性化合物的量在本文中和在权利要求中称为“有效量”。例如，用于鼻内给药的剂量典型地在约0.001至约0.1mg/kg体重的范围内。在人中，优选的皮下剂量是约0.001mg至约100mg；例如，约0.1mg至约15mg。
除了上述内容以外，本发明部分地涉及根据式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。所述药物可以用于，例如治疗代谢疾病或紊乱。在一个实施方案中，所述药物可以用作糖依赖性胰岛素释放多肽受体的激动剂。
实施例
通过参考下述实施例，将会更完整地理解本发明。但是，下述实施例不应解释为限制本发明的范围。
本文使用的缩写如下。
Et2O       乙醚
hr(s)      小时
TFA        三氟乙酸
TIS        三异丙基硅烷
所有的溶剂，异丙醇(iPrOH)、二氯甲烷(CH2Cl2)、二甲基甲酰胺(DMF)和N-甲基吡咯啉酮(NMP)购自费雪(Fisher)或Burdick&Jackson并且在不另外蒸馏的条件下使用。
三氟乙酸商购自Halocarbon或Fluka并且在不进一步纯化下使用。
二异丙基碳二亚胺(DIC)和二异丙基乙胺(DIPEA)购自Fluka或阿德里奇(Aldrich)并且在不进一步纯化下使用。
羟基苯并三唑(HOBT)、二甲硫(DMS)和1，2-乙二硫醇(EDT)购自希格玛化学公司(Sigma Chemical Co.)并且在不进一步纯化下使用。
被保护的氨基酸通常是L构型并且商购自Bachem，或Neosystem。
这些试剂的纯度在使用前通过薄层色谱法、NMR和熔点证实。
二苯甲基胺树脂(BHA)是获自Bachem或Advanced Chemtech的苯乙烯-1％二乙烯基苯的共聚物(100-200或200-400目)。这些树脂的总氮含量通常为0.3-1.2meq/g。
在带有CLASS-VP-7.3软件系统的自动化Shimadzu HPLC上进行高效液相色谱法(HPLC)。使用Pursuit C18柱(4.5x50mm)，以反相模式进行分析型HPLC。
在反相Varian(Pursuit)或Waters(Xtera或Xbridge)C18柱(50x250mm)上进行制备型HPLC分离。
实施例1
下面是用于室温肽合成的方案。
方案1
将用于所有洗涤和偶联的溶剂量取至10-20ml/g树脂的体积。通过Kaiser Ninhydrin试验监视贯穿合成的偶联反应，以确定完成的程度(Kaiser等，分析生物化学(Anal.Biochem.)34，595-598(1970))。任何不完全的偶联反应或者与新鲜制备的活化氨基酸重新偶联，或者如上所述通过用乙酐处理肽-树脂来加帽。将完全装配的肽-树脂在真空中干燥数小时。
实施例2
下述实施例描述了用于微波肽合成的方案。
使用生产商提供的软件，通过修改预载荷的0.25mmol循环，将Liberty肽合成仪(CEM Corporation，Matthews，NC)编程用于双重偶联和加帽。使用微波编辑器将在Fmoc去保护、氨基酸偶联和用乙酸酐加帽过程中使用的微波功率方法编程。在循环编辑器中选择氨基酸添加和最终去保护的默认循环，并在产生肽时自动地加载。
使用Fmoc-接头-BHA树脂(450mg，0.25mmol；可得自AnaSpec，Inc.，Fremont，CA)，在0.25mmol规模进行合成。用在DMF溶液中的20％哌啶进行去保护。用0.5M HBTU和2M N-甲基吗啉(NMM)进行所有偶联反应，并在每个氨基酸偶联以后，用在DMF中的25％乙酸酐加帽(方案2)。每个去保护、偶联和加帽反应使用微波在35瓦功率和氮鼓泡下在75℃进行360秒。
对于每个氨基酸偶联，使用下述的0.25mmol偶联循环。
方案2
将树脂转移至容器
加入20％哌啶(10mL)进行去保护
对于第1次去保护，在最高75℃进行微波方法30秒
用DMF(10mL)洗涤树脂
对于第2次去保护，在最高75℃进行微波方法180秒
用DMF(10mL)洗涤树脂3次
加入0.2M氨基酸(5mL)
加入0.5M活化剂(HBTU)(2mL)
加入2M活化剂碱(NMM)(1mL)
在最高75℃用微波方法偶联6分钟。
用DMF(10mL)洗涤树脂
加入0.2M氨基酸(5mL)
加入0.5M活化剂(HBTU)(2mL)
加入2M活化剂碱(NMM)(1mL)
在最高75℃用微波方法偶联6分钟。
用DMF(10mL)洗涤树脂3次
在最后一次氨基酸偶联以后，用在DMF中的25％乙酸酐给肽加帽(方案3)
方案3
用DMF(10mL)洗涤树脂3次
加入20％哌啶(10mL)进行去保护
对于第1次去保护，在最高75℃进行微波方法30秒
用DMF(10mL)洗涤树脂
对于第2次去保护，在最高75℃进行微波方法180秒
用DMF(10mL)洗涤树脂3次
加入加帽剂(乙酸酐10mL)
在最高75℃进行微波方法(加帽)180秒
用DMF(10mL)洗涤树脂3次
实施例3
本实施例描述了PEGm(30,000)-SSA的制备。遵循类似的操作，以生产PEGm(12,000)-SSA和PEGm(20,000)-SSA。
PEGm(30,000)-甲磺酸酯的合成
Figure BDA00003096116900201
其中n～682
给配有磁力搅拌器、迪安-斯达克榻分水器、回流冷凝器和氩气入口鼓泡器的圆底烧瓶装入100g(3.34mmol)PEGm(30,000)-OH和500mL甲苯。通过蒸馏，将PEG在甲苯中的溶液共沸干燥，然后冷却至室温。加入200mL无水二氯甲烷，并将溶液冷却至0-5℃。加入三乙胺(0.67mL，4.84mmol)和甲磺酰氯(0.33mL，4.34mmol)，并将混合物在约4℃搅拌2小时，然后在室温在氩气下过夜。
使用旋转蒸发器，在减压下除去二氯甲烷。滤出残余的盐，并用冷的异丙醇和乙醚(30∶70，v/v)沉淀产物。收集产物，并在真空下在室温干燥。收率为～90％。
PEGm(30,000)-胺的合成
Figure BDA00003096116900211
其中n～682
给配有磁力搅拌器和氩气入口鼓泡器的圆底烧瓶装入90g(3.00mmol)PEGm(30,000)-甲磺酸酯和1600mL氢氧化铵水溶液(30％，v/v)。加入氯化铵(160g)，并将溶液在室温搅拌48小时。加入氯化钠160g(10wt％)，并用二氯甲烷萃取PEG胺。合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥。滤出硫酸钠，并在旋转蒸发器上除去剩余的二氯甲烷。用冷乙醚沉淀产物。收集产物，并在真空下在室温干燥过夜。收率为～94％。
PEGm(30,000)-琥珀酰胺酸(SAA)的合成
Figure BDA00003096116900212
其中n～682
给配有磁力搅拌器和氩气入口鼓泡器的圆底烧瓶装入60g(2.00mmol)PEGm(30,000)-胺和500mL无水乙腈。将该溶液冷却至约4℃，然后通过加料漏斗缓慢地加入2g(20.0mmol)琥珀酸酐在50mL无水乙腈中的溶液。将所述反应混合物在氩气下在室温搅拌过夜。
结束后，使用旋转蒸发器除去溶剂，然后将产物溶解在400mL水中。用1M NaOH溶液调节溶液的pH至7.0，并搅拌1h。加入氯化钠(40g，10重量％)，并用6N HCl溶液将pH调至～4.2。用二氯甲烷萃取产物3次。合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥。通过过滤除去硫酸钠，并使用旋转蒸发器浓缩滤液。用冷乙醚沉淀产物。收集产物，并在真空下干燥过夜。收率为～93％。
PEGm(30,000)-琥珀酰亚胺基琥珀酰胺(SSA)的合成
Figure BDA00003096116900221
其中n～682
给配有磁力搅拌器和氩气入口鼓泡器的圆底烧瓶装入56g(1.87mmol)PEGm(30,000)-琥珀酰胺酸和500mL无水二氯甲烷。缓慢地加入N-羟基琥珀酰亚胺(0.24g，2.05mmol)和1，3-二环己基碳二亚胺(0.46g，2.24mmol)。将所述反应混合物在氩气下在室温搅拌过夜。
结束后，使用旋转蒸发器除去溶剂。然后将产物溶解在无水甲苯中。通过过滤除去残余的盐，并在冷的无水异丙醇和乙醚(30∶70，v/v)中沉淀产物。收集产物，并在真空下在室温干燥过夜。收率为80％。
实施例4
合成H-Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-Gly-Lys-Lys-Asn-Asp-Trp-Lys-His-Asn-Ile-Thr-Gln-OH(SEQ ID NO：1)1∶6TFA
使用Fmoc化学法，在CEM微波肽合成仪上合成上述肽。使用在方案2中描述的模块，将合成仪编程用于双重偶联。使用Fmoc Gln(Trt)Wang树脂(Sub：6meq/g；用量400mg)，在0.250mmol规模进行合成。在合成结束时，将树脂转移至在振荡器上的反应容器中进行切割。使用17mL97％TFA(3％水)和1mL TIS和丙烷硫醇(1∶2)，在室温从树脂切割肽1.5小时。将去保护溶液加入100mL冷的Et2O中，并用1mL TFA和30mL冷的Et2O洗涤，以沉淀所述肽。在2x50mL聚丙烯试管中离心肽。将得自各个试管的沉淀物合并到单个试管中，并用冷的Et2O洗涤3次，并在低真空(housevacuum)下在干燥器中干燥。
通过制备型HPLC(Shimadzu)在Xtera C18-柱(250x50mm，10μm粒度)上纯化粗制肽，并用10-99％B的线性梯度(缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)洗脱90分钟，流速为60mL/分钟，并在220/280nm检测。收集各级分，并通过分析型HPLC进行检查。使用C18反相Waters Xtera/pursuit4.6x50柱，使用10-99％的梯度，使用A：0.1％Water/TFA和B：0.1％乙腈/TFA，在Shimadzu HPLC上进行所有分析操作。合并含有纯产物的级分，并冻干，得到138mg(6.1％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C226H338N60O66S的计算值4983.64，实测4983.62。
实施例5
合成Ac-Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ IDNO：2)1∶2TFA
使用Fmoc化学法，在CEM微波肽合成仪上合成上述肽。使用在方案2和3中描述的模块，将合成仪编程用于双重偶联。使用Fmoc RinkAmide MBHA树脂(Sub：.45meq/g；用量450mg)，在0.25mmol规模规模进行合成。在合成结束时，将树脂转移至在振荡器上的反应容器中进行切割。使用17mL97％TFA(3％水)和1mL TIS和丙烷硫醇(1∶2)，在室温切割肽1.5小时。将去保护溶液加入100mL冷的Et2O中，并用1mL TFA和30mL冷的Et2O洗涤，以沉淀所述肽。在2x50mL聚丙烯试管中离心肽。将得自各个试管的沉淀物合并到单个试管中，并用冷的Et2O洗涤3次，并在低真空(house vacuum)下在干燥器中干燥。
通过制备型HPLC(Shimadzu)在Xtera C18-柱(250x50mm，10μm粒度)上纯化粗制肽，并用10-99％B的线性梯度(缓冲液A：0.1％TFA/H2O；缓冲液B：0.1％TFA/CH3CN)洗脱90分钟，流速为60mL/分钟，并在220/280nm检测。收集各级分，并通过分析型HPLC进行检查。使用C18反相WatersXtera/pursuit4.6x50柱，使用10-99％的梯度，使用A：0.1％Water/TFA和B：0.1％乙腈/TFA，在Shimadzu HPLC上进行所有分析操作。合并含有纯产物的级分，并冻干，得到180mg(18.9％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMSm/e：C164H242N40O48S的计算值3574.06，实测3574.04。
实施例6
合成Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ IDNO：3)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到108mg(11.4％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H242N40O48S的计算值3574.06，实测3574.04。
实施例7
合成DesNH2-Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQID NO：4)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到70mg(7％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C162H239N39O47S的计算值3517.01，实测3516.91。
实施例8
合成Ac-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ IDNO：5)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到80mg(8.3％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H242N40O47S的计算值3558.06，实测3558.11。
实施例9
合成DesNH2-Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQID NO：6)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到120mg(12.7％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C162H239N39O46S的计算值3501.01，实测3500.98。
实施例10
合成Ac-(D)Trp-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ IDNO：7)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到62mg(6.4％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C166H243N41O47S的计算值3597.10，实测3596.99。
实施例11
合成Ac-(D)-3-Pya-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQID NO：8)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化得到40mg(4％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C163H241N41O47S的计算值3559.05，实测3559.01。
实施例12
合成Ac-2-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：9)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到94mg(9.7％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H241ClN40O47S的计算值3592.51，实测3592.49。
实施例13
合成Ac-3-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-He-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：10)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到70mg(7.2％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H241Cl N40O47S的计算值3592.51，实测3592.48。
实施例14
合成Ac-4-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：11)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到96mg(10％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H241ClN40O47S的计算值3592.51，实测3592.50。
实施例15
合成Ac-2-F-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQID NO：12)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到92mg(9.5％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H241FN40O47S的计算值3576.05，实测3576.04。
实施例16
合成Ac-3-F-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQID NO：13)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到100mg(10.4％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H241FN40O47S的计算值3576.05，实测3576.04。
实施例17
合成Ac-3，5-DiF-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：14)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到64mg(6.6％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H240F2N40O47S的计算值3594.04，实测3593.99。
实施例18
合成Ac-3，4，5-F3-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：15)1∶2TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到30mg(3％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C164H239F3N40O47S的计算值3612.03，实测3612.01。
实施例19
合成Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQIDNO：16)1∶1TFA
按照在实施例5中的操作，对Fmoc Rink酰胺MBHA树脂(450mg，0.25mmol)进行固相合成和纯化，得到80mg(9％)白色无定形粉末。(ES)+-LCMS m/e：C161H235N39O48S的计算值3516.96，实测3516.94。
实施例20-22的分析方法
使用下述反相HPLC/UV操作，分析试验物和对照物：
Figure BDA00003096116900281
流动相梯度条件(RP-HPLC)：
Figure BDA00003096116900291
实施例20
合成Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000))-NH2
将PEGm(12,000)结构部分与得自实施例19的化合物缀合。
称量10mg得自实施例19的肽，并溶解于50mM硼酸盐、pH8.5缓冲液中。称量130mg PEGm(12,000)-琥珀酰亚胺基琥珀酰胺(按照实施例3的操作制备)以得到4∶1PEG∶肽摩尔比，并加入溶解的肽中。将所述反应混合物在室温搅拌过夜，然后将它在20mM Tris、pH8.0缓冲液中10倍稀释，并通过阴离子交换色谱法在FF(GE Healthcare)上纯化。图1是反应混合物的RP-HPLC色谱图。反应生成38.1％聚乙二醇化的肽。
使用不连续NaCl梯度，洗脱单-聚乙二醇化的肽。用200mM NaCl洗脱期望的单-聚乙二醇化的肽。用1M NaOAc酸化洗脱液，并使用3kDaMW截止值的膜，在Amicon超滤设备中浓缩。然后用20mM NaOAc、pH4.5，将它渗滤10倍1次。
然后对浓缩的聚乙二醇化的肽进行分析，测定，并在4℃保存。图2是纯化的PEGm(12,000)-肽(RT＝2.72分钟)的RP-HPLC色谱图。测得聚乙二醇化的肽的纯度＞98％。图3的图代表了PEGm(12,000)-肽的MALDI-TOF谱，进行该操作以确认分子量。
实施例21
合成Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2
将PEGm(20,000)结构部分与得自实施例19的化合物缀合。
称量10mg得自实施例19的肽，并溶解于50mM硼酸盐、pH8.5缓冲液中。称量225mg PEGm(20,000)-琥珀酰亚胺基琥珀酰胺(按照实施例3的操作制备)以得到4∶1PEG∶肽摩尔比，并加入溶解的肽中。将所述反应混合物在室温搅拌过夜，然后将它在20mM Tris、pH8.0缓冲液中10倍稀释，并通过阴离子交换色谱法在
Figure BDA00003096116900301
FF(GE Healthcare)上纯化。图4是反应混合物的RP-HPLC色谱图。反应生成54.9％聚乙二醇化的肽。
使用不连续NaCl梯度，洗脱单-聚乙二醇化的肽。用200mM NaCl洗脱期望的单-聚乙二醇化的肽。用1M NaOAc酸化洗脱液，并使用3kDaMW截止值的膜，在Amicon超滤设备中浓缩。然后用20mM NaOAc、pH4.5，将它渗滤10倍1次。
对浓缩的聚乙二醇化的肽进行分析，测定，并在4℃保存。图5是纯化的PEGm(20,000)-肽(RT＝2.70分钟)的RP-HPLC色谱图。测得聚乙二醇化的肽的纯度＞98％。图6的图代表了PEGm(20,000)-肽的MALDI-TOF谱，进行该操作以确认分子量。
实施例22
合成Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2
将PEGm(30,000)结构部分与得自实施例19的化合物缀合。
称量50mg得自实施例19的肽，并溶解于50mM硼酸盐、pH8.5缓冲液中。称量1625mg PEGm(30,000)-琥珀酰亚胺基琥珀酰胺(按照实施例3的操作制备)以得到4∶1PEG∶肽摩尔比，并加入溶解的肽中。将所述反应混合物在室温搅拌过夜，然后将它在20mM Tris、pH8.0缓冲液中10倍稀释，并通过阴离子交换色谱法在
Figure BDA00003096116900311
FF(GE Healthcare)上纯化。图7是反应混合物的RP-HPLC色谱图。反应生成85.0％聚乙二醇化的肽。
使用不连续NaCl梯度，洗脱单-聚乙二醇化的肽。通常，用200mMNaCl洗脱期望的单-聚乙二醇化的肽。用1M NaOAc酸化洗脱液，并使用3kDa MW截止值的膜，在Amicon超滤设备中浓缩。然后用20mMNaOAc、pH4.5，将它渗滤10倍1次。
对浓缩的聚乙二醇化的肽进行分析，测定，并在4℃保存。图8是纯化的PEGm(30,000)-肽(RT＝2.59分钟)的RP-HPLC色谱图。测得聚乙二醇化的肽的纯度＞98％。图9的图代表了PEGm(30,000)-肽的MALDI-TOF谱，进行该操作以确认分子量。
实施例23
进行下述研究来评估实施例19的化合物在Hannover Wistar大鼠和人血浆中在4和24小时以后的稳定性。
称量2.08mg实施例19的化合物，并放入4mL琥珀色瓶中。向其中加入1.0mL DMSO。小心地涡旋该瓶，以制备573μM所述化合物的储备溶液。
将Hannover Wistar大鼠血浆和人血浆(抗凝剂EDTA钠)在水浴中预温热至37℃保持30分钟。大鼠血浆pH为7.45，人血浆pH为7.47。使用1.5mL微型离心瓶。
将8.7μL573μM的实施例19的化合物的储备溶液加入491.3μL大鼠血浆中，并放入1个瓶中。将8.7μL573μM的实施例19的化合物的储备溶液加入491.3μL人血浆中，并放入另一个瓶中。将2个瓶轻轻涡旋，以确保适当混合。
如下标记6个新瓶：大鼠T0、大鼠T4、大鼠T24、人T0、人T4、人T24。向这些瓶中的每一个中，加入50μL处理过的血浆。给T4和T24瓶盖上帽，并在37℃培养箱中分别放4和24小时。
向2个T0瓶中的每一个中，加入50μL Sorensen缓冲液和200μL1.0％的乙酸在乙腈中的溶液。然后给T0瓶盖上帽，涡旋，并在10000xg离心10分钟。在离心结束后，将100μL每个瓶的上清液加入96-孔注射块的单个孔中。然后向每个孔中加入200μL0.1％的乙酸在
Figure BDA00003096116900321
水(Millipore)中的溶液。
对于2个T4瓶(在4小时时间点)和T24瓶(在24小时时间点)，重复上面关于T0瓶所述的操作。对于每个时间点，如上所述制备新鲜的T0样品，以确保没有样品降解。
通过LC/MS/MS分析所有样品。处理得到的色谱图(chromatographs)，以获得每个样品的峰面积。计算在每个时间点剩余的化合物相对于在对比T0样品中存在的量的百分比。
Figure BDA00003096116900322
数据表明，所述化合物在大鼠血浆中在4小时时是稳定的，但是在24小时时间点稍微低于接受范围(75-125％)。所述肽在人血浆中在4小时和24小时时间点都是稳定的。
实施例24
从DiscoverX Corporation(Freemont，CA)得到表达人GIPR的CHO-K1细胞。在5％CO2培养箱中在Ham氏F-12营养培养基中在37℃培养细胞，所述培养基补充了10％胎牛血清、800μg/ml遗传霉素、300μg/ml湿霉素、2mM L-谷氨酰胺和青霉素-链霉素(100单位，100μg)。在90％汇合时，收获细胞。
将所述细胞悬浮于Ham氏F-12营养培养基中至200,000个细胞/ml的浓度。然后将细胞铺板在384孔板中，每个孔中加入0.025ml悬浮液。将细胞在5％CO2培养箱中在37℃温育过夜。
如下测定化合物的活性：用试验化合物刺激CHO-K1细胞，并测量生成的cAMP的水平。将所述化合物的活性与天然GIP的活性进行对比，因为GIP刺激cAMP生成。将在刺激缓冲液(990ml汉克平衡盐溶液(HBSS)(1X)(Invitrogen Corp#14025-092)、10ml Hepes缓冲溶液(1mol.L)(Invitrogen Corp15630-080)、1g BSA(最终0.1％)和1ml IBMX250mM的在DMSO中新鲜制备的储备液(Sigma-Aldrich I5879))中的6μl试验化合物加给细胞，然后添加在刺激缓冲液中的6μl Alexa
Figure BDA00003096116900331
647-抗cAMP抗体(Perkin Elmer)。另外，将6μl天然GIP(实施例4的化合物)在刺激缓冲液中的溶液加给在一个孔中的细胞作为对照。将所述孔板在300rpm离心3分钟，并在室温温育45分钟。加入12μl检测混合物(生物素cAMP和EUW8044标记的链霉抗生物素蛋白(Eu-SA)在cAMP检测缓冲液中的溶液(Perkin Elmer))，并在室温温育60分钟。
根据在Perkin Elmer LANCE cAMP Assay Perkin Elmer Lance cAMPKit手册中阐述的详细方案，测量生成的cAMP的水平。将所述化合物的活性与天然GIP的活性进行对比。
在TRF检测仪器
Figure BDA00003096116900332
(Perkin Elmer)(在340nM激发，在665nM发射)上对平板读数。从标准的cAMP曲线获得cAMP信号的值，并用于确定最大刺激的量和刺激cAMP信号的EC50。
Figure BDA00003096116900333
Figure BDA00003096116900341
Figure IDA00003096117300011
Figure IDA00003096117300041
Figure IDA00003096117300051
Figure IDA00003096117300061
Figure IDA00003096117300071

Claims (48)

1.具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
(Y)n-R1-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-R2-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-R3-NH2    (I)
其中：
R1选自由以下组成的组：(D)Tyr、DesNH2-Tyr、(D)Phe、DesNH2-Phe、(D)Trp、(D)3Pya、2-Cl(D)Phe、3-Cl(D)Phe、4-Cl(D)Phe、2-F(D)Phe、3-F(D)Phe、3，5-二F(D)Phe和3，4，5-三F(D)Phe；
R2是Lys或Ala；
R3是Lys或聚乙二醇化的Lys；
Y是酰基；
当R1是(D)Tyr、(D)Phe、(D)Trp、(D)3Pya、2-Cl-(D)Phe、3-Cl-(D)Phe、4-Cl-(D)Phe、2-F-(D)Phe、3-F-(D)Phe、3，5-二F(D)Phe或3，4，5-三F(D)Phe时，n是1；且
当R1是DesNH2-Tyr、(D)Phe或DesNH2-Phe时，n是0。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1是(D)Tyr。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自由以下组成的组：(D)Phe、DesNH2-Phe、2-Cl-(D)Phe、3-Cl-(D)Phe、4-Cl-(D)Phe、2-F-(D)Phe、3-F-(D)Phe、3，5-二F-(D)Phe和3，4，5-三F-(D)Phe。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是(D)Trp。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是(D)3Pya。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R2是Lys。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R2是Ala。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R3是Lys。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R3是聚乙二醇化的Lys。
11.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R3是Lys-PEG。
12.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R3是Lys-PEGm。
13.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
14.根据权利要求1-10或13中任一项所述的化合物，其中R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
15.根据权利要求1-10、13或14中任一项所述的化合物，其中R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
16.根据权利要求1-10或13-15中任一项所述的化合物，其中R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约20,000道尔顿的分子量。
17.根据权利要求1-9或11中任一项所述的化合物，其中R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
18.根据权利要求1-9、11或17中任一项所述的化合物，其中R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
19.根据权利要求1-9、11或17-18中任一项所述的化合物，其中R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
20.根据权利要求1-9、11或17-19中任一项所述的化合物，其中R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约20,000道尔顿的分子量。
21.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中R3是Lys(ε-SSA-PEGm)。
22.根据权利要求1-9或21中任一项所述的化合物，其中R3选自由以下组成的组：Lys(ε-SSA-PEGm(12,000))、Lys(ε-SSA-PEGm(20,000))和Lys(ε-SSA-PEGm(30,000))。
23.根据权利要求1-9、21或22中任一项所述的化合物，其中R3是Lys(ε-SSA-PEGm(20,000))。
24.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，且R2是Ala。
25.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys。
26.根据权利要求1或25所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
27.根据权利要求1、25或26中任一项所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
28.根据权利要求1或25-27中任一项所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
29.根据权利要求1或25-28中任一项所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是聚乙二醇化的Lys，其中PEG部分具有约20,000道尔顿的分子量。
30.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约5,000至约40,000道尔顿的分子量。
31.根据权利要求1或30所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约10,000至约30,000道尔顿的分子量。
32.根据权利要求1、30或31中任一项所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约15,000至约25,000道尔顿的分子量。
33.根据权利要求1或30-32中任一项所述的化合物，其中R1是(D)Tyr或DesNH2-Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约20,000道尔顿的分子量。
34.根据权利要求1或30-33中任一项所述的化合物，其中R1是(D)Tyr，R2是Ala，且R3是Lys-PEGm，其中PEGm具有约20,000道尔顿的分子量。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：3)；
DesNH2-Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-lle-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：4)；
Ac-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：5)；
DesNH2-Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：6)；
Ac-(D)Trp-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-AsP-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：7)；
Ac-(D)3Pya-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：8)；
Ac-2-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：9)；
Ac-3-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：10)；
Ac-4-Cl-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-A sn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：11)；
Ac-2-F-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：12)；
Ac-3-F-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：13)；
Ac-3，5-DiF-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：14)；
Ac-3，4，5-TriF-(D)Phe-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：15)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-Hi s-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：16)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000))-NH2(SEQ ID NO：17)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；和
它们的药学上可接受的盐。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-Hi s-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Tr-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：16)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000))-NH2(SEQ ID NO：17)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；
及其药学上可接受的盐。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的化合物，其中所述化合物是：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys-NH2(SEQ ID NO：16)
或其药学上可接受的盐。
38.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(12,000))-NH2(SEQ ID NO：17)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；和
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；
及其药学上可接受的盐。
39.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)；
Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(30,000))-NH2(SEQ ID NO：19)；
及其药学上可接受的盐。
40.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是Ac-(D)Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Ala-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Lys(epsilon-SSA-PEGm(20,000))-NH2(SEQ ID NO：18)或其药学上可接受的盐。
41.一种药物组合物，其包含：治疗有效量的根据权利要求1-40中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；和药学上可接受的载体。
42.用于治疗代谢疾病或紊乱的根据权利要求1-40中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
43.根据权利要求1-40中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。
44.根据权利要求43所述的用途，其中所述药物用于治疗代谢疾病或紊乱。
45.根据权利要求43或44所述的用途，其中所述药物用作糖依赖性胰岛素释放多肽受体的激动剂。
46.一种治疗代谢疾病或紊乱的方法，所述方法包括：给需要所述治疗的患者施用有效量的根据权利要求1-40中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
47.一种在个体中激动糖依赖性胰岛素释放多肽的方法，所述方法包括：以有效地激动糖依赖性胰岛素释放多肽受体的量，给所述个体施用根据权利要求1-40中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
48.前文描述的发明。
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