TW314467B - - Google Patents

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314467 A6 B6 五、發明説明（1 ) 經濟部中央標準局β工消費合作社印製 歐洲專利第13,376號揭示作為抗發炎劑之〜(4_三氟曱 基苯基)-5-甲基異噁唑―4—胺基甲酸酯(化合物1}。該專利亦 揭示製備此化合物的方法。 另知悉化合物1與N-(4-三氟甲基苯基)_2_氰基_3_幾基 巴豆醯胺(化合物2)具有免疫調節特性，故適用於作為藥物 以拮抗宿主之慢性移植病症及自體免疫失調症，特別是全 身紅斑性狼瘡(EPO,217,206)。 美國專利第4,〇61，767號揭示2_經基乙基—氰基乙醯胺衍 生物於製備具抗發炎及止痛作用之藥物上的用途。 牛皮癣為一種特殊型皮膚失調症，其特徵在於形成紅 斑且其易為乾燥及鱗屑狀。牛皮癖病變係由異常增加的上 皮細胞增生引起，例如角質細胞之增生受到促進。此病造 成皮膚脱落，雖然此脱落不雅觀且造成情緒壓力，但甚少 危及一般健康。於美國，I"2年測知有4至8億人口患有牛 皮癖。每年約有2〇〇,〇〇〇個此病的新病例被診斷出來。牛皮 癖為全球性困擾，報告指出歐洲有i至2%的人口患有此病 。牛皮癖之病因仍未察出，雖然似乎是有遺傳因素ό牛皮 癖常見形式有： 尋常性（斑狀）：慢性斑狀牛皮癖通常可居家治療，使用潤 滑藥、焦油、I,8,9-三羥蒽(dithranol)及局部 用皮質類固醇。作用機制顯示最可能為直 接調節角皮細胞增生及分化。病人通常會 察覺到皮膚刺激，但甚少需要中斷治療。 疹狀/滴狀：發生在兒童及年音人的疹狀牛皮癬，其特徵 一 3 — (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) •裝. 訂；· .繞 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS>甲4规格（210 X 297公釐） A6 __ B6 五、發明説明（） 為急性發展出多數滴狀病變*繼而有点~溶 血性鍵球菌所引起的上呼吸道感染。 紅皮性：牛皮癖可發展為嚴重之慢性病微，包括紅斑（泛 紅）及整個皮膚的鱗狀剝落，此可能是由寇伊能 (Koebner)現象引起。 膿疮性：膿痕性牛皮癖主要發生在成人，可為局部性及慢 性的，在較嚴重的病例中為全身性的。影響局部 及全身性型式之促成因子包括多種藥物（例如麵 ’氫氯查(hydrochlorquine)，刺激性局部療法（例如 焦煤油），牙齒及上呼吸道感染，懷孕及陽光刺 激。排除刺激因子乃處理之首要步驟。 牛皮癖之治療不令人完全滿意。至今已使用許多軟膏 及油膏，但其反應無法預期。經常曝露在陽光或紫外線下 會使病況改善，但通常不論何種型式的治療皆無法改善牛 皮癣。 經濟部中央標準局S工消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) .裝· 牛皮癬治療之有希望治療方向在於使用免疫抑制劑。 使用口服環孢子素A治療牛皮癖之人類研究·在近九年來已 有進展。具嚴重牛皮癖之九仟位病患普遍接受治療，呈現 高治療成功率。但如絕大多數強效藥物一般，環孢子素A 有多種副作用’其中大部份是暫時的且不嚴重。然而，即 使是最小的副作用，仍有腎失調現象(Mas〇nj，pharmac(?lrev, 41: 423, 1989; Borel and Kis, Transplantation Proc., 23:1867-1874, 1991) 0 使用免疫抑制劑之療法通常伴隨著嚴重的副作用例如 —4 — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉甲4規格（210 X 297公楚) ^14467

毒性（包括神經毒性）、高血壓、低鎂血症、貧血 、白血球 減少症、血小板減少症、易受感染之傾向、腎功能損壞與 畴胎形成。 、冀求發展出治療牛皮癖之較佳藥劑上，已發現式印！ <化合物能有效抑制角質細胞増生。式1或11化合物相當可 被人類耐受。人類之治療過程中，未發現任何對感染症抵 抗力之減少，腎功能失調，實驗數値之有關變化例如肝酵 素、血球計數或體重。式1或11化合物顯示有比其它免疫 抑制劑更佳的危機效應量，即用藥後有長期持續作用且提 供短期治療及較長緩解間期。 因此本發明係關於預防或治療病患皮膚病之方法，其 係經由施用有效劑量之式I或π化合物 (請先閲讀背面之注意事項再^寫^茛》 n n . Η Ν. 0

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經濟部中央標準屬貝工消費合作社印製 其中R1表示 a) 曱基， b) (C3-C6)-環烷基， c) (C2-C6)-烷基，其碳原子間至少有1個雙键或參鍵， 一 5 — -本糾長尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） 314467 A6 B6 五、發明説明（） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 R2表示 a) -CF3i b) -CN， R3表示 a) (CrC4)-烷基，或 b) 氫原子， X表示 a) -CH-基，或 b) 氮原子， 其中式II化合物以所示結構式或生理上可耐受之鹽型式存 在。 較佳之式I或II化合物為： 其中R1為 a) 甲基， b) 環丙基，或 一 .· c) -CH2-CH2-C 三 CH， R2為-CF3， R3為甲基或氫原子，且 X為-CH-基。 特別佳之式I化合物為，其中R1是甲基，R2是-CF3， R3是氫原子且X是碳原子(N-(4-二氟曱基苯基)-5_曱基異噁 唑-4-羧醯胺），或較佳之式II化合物為，其中R1是甲基， R2是-CF3，R3是氫原子且X是-CH-基(N-(4_三氟甲基苯基)- -6 - (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本I) •裝· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 314467

五、發明説明（5 ) 銨鹼 2-氰基-3-羥基巴豆醯胺）。 式Π化合物之合適生理上可耐受之絲，舉例而言有 鹼金屬鹽，鹼土金屬鹽或銨塱，包括生理上可耐受之有機 式I或II化合物可由如下方法製備 令式III化合物 (請先閲讀背面之注意事項再續冩本頁) Η

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III 其中Y為齒原子’較好是氣或溴， 與式(IV)之胺反應 裝·

生成式I化合物，且在鹼性劑存在下，其可再反應以 生成式II化合物。 上述反應係根據習知方法中之標準條件進行(EP I3,376 ;EP 484，223 ; EP 538,783 ; US 4,061,767)。 此反應之初物質為習知的或可用文獻得知方法輕易製 經濟部中央標準曷負工消費合作社印製 備者。 本發明亦關於針對下列疾病之有效醫療：濕疹-皮膚 炎、藥物性皮炎、過敏性皮炎、毒性皮炎、光過敏性皮炎 及異位性皮炎。 —7—— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉甲4規格（210 Χ 297公货） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 314467 A6 -------------- 五、發明説明（6 ) 本發明另關於抑制角質細胞增生的方法，包括施用有 效劑量之式I或π化合物或式II化合物之生理上可耐受之鹽 〇 本發明亦關於含有效劑量之式I化合物及/或式π化合 物的藥物’其中式II化合物係以生理上可耐受之鹽形式存 在’該藥物另含有藥學上適合且生理上可耐受之賦形劑、 稀釋劑及/或其它活性物質與佐劑。 •本發明之藥物可經口、局部、經直腸或注射用藥。 適合之固體或液體用藥形式有、例如粒劑、散劑、糖 衣鍵、錠片、（微）膠囊、栓劑、糖漿、藥液、懸浮液、乳 液、滴劑或注射溶液及具延長釋放活性物質之製劑，這些 製劑中使用習知佐劑、例如賦形劑、分裂劑、黏著劑、糖 衣劑、膨鬆劑、潤滑劑、芳香劑、甜味劑或助溶劑。可知 之常用佐劑例如有碳酸鎂、二氧化鈦、乳糖、甘露糖醇及 其它糖類、滑石、牛奶蛋白質、明膠、澱粉、纖維素及其 衍生物、動物及植物油、聚乙二醇及溶劑，例如-蒸螽水及 一元醇或多元醇，例如甘油。 較好此醫藥製劑係以劑量單位形式製備及施用，每單 位含有作為活性組份之特定劑量的式I及/或II化合物，其 中式II化合物以其本身或生理上可耐受鹽之形式存在。若 為固體劑量單位，例如錠劑、膠囊或栓劑，此劑量可高達 500毫克，較好為5至400毫克，5至200毫克，1◦至100毫克，10 至25毫克。 欲治療患有早期牛皮癖之病患（70公斤），建議之負荷 —8 — 本紙張K度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) -裝- 訂. A6 B6 五、發明説明（ 劑量最高為每日600毫克，較佳一曰為3〇〇毫克且於稍後之 復原期每曰口服3次200毫克，較好是1次每曰2〇毫克之N-(4-三氟甲基苯基)_5—甲基異噁唑-4-羧醯胺及/或N-(4-三氟甲 基苯基)-2-氰基-3-輕基巴豆醯胺。 然而某些情況下，亦適用較高或較低之劑量。施用劑 量時，可以單次施用呈單獨劑量單位或數個較小劑量單位 之形式者或在特定間期多次施用再細分的劑量。 預防措施包括易感受哺乳動物之牛皮癖的預防性治療 ’而治療包括阻止易感受哺乳動物之牛皮癖發展及阻礙其 擴大。 於製備上述用藥形式之過程中，亦可將式I/Ιϊ化合物 及/或其對應鹽類與適合的活性物質混合，例如抗尿酸病 變劑’血小板凝集抑制劑，止痛藥及類固醇類或非類固醇 類消炎劑。 製備N-(4_三氟甲基苯基)_5-甲基異嚼吐_4_叛酿胺(化合物1) (請先閲尊面之注意事项再項寫本頁} ---- - - - - - - - - J— ,ΤΓ— I I I — 竣4斯部中央棣%局員X消費合作，社印製

-9 - 國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公;) A6 B6 五、發明説明（ 將含0.05莫耳之5-甲基異德峻-4_碳酿氣(7.3克）之乙腈 溶液（乙腈2〇毫升），室溫下遂滴加入含0，1莫耳4_三氟甲基 苯胺(16.1克)之乙腈溶液中（乙腈150毫升）。攪拌20分鐘後， 以抽氣方式將沈澱之4-三氟甲基苯胺鹽酸鹽濾出，以20毫 升乙腈清洗二次，且減壓下濃縮經匯集的濾液。如此製得 I2.8克白色結晶之N-(4-三氟甲基苯基)-5—甲基異噁唑—4_羧 醯胺(化合物1)。 實例2 製備N-(4-三氟曱基苯基氰基_3_羥基巴豆醯胺(化合物2) (請先閲讀背面之注意ί項再填寫本頁> i裝·

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CH 經 濟 部 中 央 標 準 局 員 工 消 费 合 作 社 印 製 將0.1莫耳N-(4-三氟甲基苯基)-5-甲基異噁唑-4-叛醯胺 溶於100毫升甲醇中，並於+10。(：，與含0.11莫耳(4·4克）氫氧 化納之水溶液（水100毫升）反應。攪拌此混合液30分鐘且經 水稀釋後’以濃縮鹽酸酸化之。藉抽氣法將結晶之沈溉產 物濾出’以水清洗且風乾。產物為244克之N_(4_三氟甲基 苯基)_2-氰基―3—經基巴豆醯胺(化合物2)。 本紙張尺度適用中囷围家標準（CNS〉 甲4規格（210 X 297公货） M4467 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明說明（9 ) 自甲醇分離之熔點為205至206°C。 下述篩檢係評估活體外化合物抑制DNA合成的能力， 其係測定胸腺核苷同系物5_溴_2，_去氧-尿嘧啶核苷(BrdU) 攝入培養中複製細胞内的情形。 材料： 細胞’正常人類上皮角質細胞^sjjjgK, Clonetics Corp.，San Diego, CA) 〇 標記試劑：由5-溴_2，_去氧尿嘧啶核苷與5_氟_2，_去氧尿嘧 淀核誓(Amersham Corp.，1)組成的水溶液。 含抗-溪代去氧尿喊淀核苷之核酸酶(Clone BU-1, Amersham 麻·.，1)。 過氧化酶-抗-小白鼠免疫球蛋白（得自經匯集之綿羊抗血 清的免疫球蛋白，Amersham Corp., 1>〇 過氧化酶受質：ABTS[(2,2’-連氮基-二-(3-乙基-苯噻也啉磺 酸鹽)]Amersham 戚.，1)。 化合物：化合物係溶於無水酒精（終濃度$ 〇.1%) ^各種藥 物濃度係於BrdU存在下，以不含胸腺核苷之角質 細胞生長培養基配製(不含皮質醇之KGM，Clonetics 废·，CA)。

Dynatech MR 7〇00微量測戟盤判讀機，具4l〇mm濾光鏡。含 經磷酸緩衝之生理食鹽水(PBS)的1公升水·· 11.5 克 Na2HP04 —11 — 本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) -------裝------- 訂 I ^---- A6 B6 五、發明説明（） 2.96 克 Na2HP〇4 · 2H2〇 5.84克 NaCl Tween-20 (Sigma 麻） 牛血清白蛋白（BSA; Sigma麻） 醋酸/乙醇固定劑： 50毫升冰醋酸 900毫升乙醇 50 .毫升水 終止劑(100毫升）： 0.01克叠氮化納 2.01克檸檬酸-水合物 方法： 以每孔洞5,000個細胞之密度，將角質細胞種於96孔之 平底(6.4mm直徑）培養m。令細胞生長(2至3天），再添加酿 製於KGM之各種濃度的化合物，此KGM不含胸腺核苷、無 皮質醇但有BrdU(l:2〇〇)。於37°C，5%C02 18小時後·，以温 熱之PBS清洗細胞且以醋酸/乙醇固定之，於室溫歷30分鐘 。以 PBS/0.1% Tween-2〇 清洗孔洞後，以含 3%BSA之 pBSy〇 i% Tween-2〇阻斷聚苯乙烯試盤上殘留之靜電位置。每孔洞加 入抗-溴代去氧尿嘧啶核苷抗體溶液，其中含有用來使DNA 變性之核酸酶’令其於37°C，5%c〇2中靜置反應2小時。 再次令試盤以PBS/0.1%Tween_2〇清洗，接著與經過氧化酶標 記之抗小白鼠免疫球蛋白（1:6〇〇)於室溫靜置反應。洗去第2 抗體後’將ImM ABTS加入所有孔洞’直到產生意欲之色 (請先Μ讀背面之注意事項符墙寫本頁> —装— 訂 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 s) -12- A6 B6 五、發明説明（11 ) 度（綠色）為止。終止顯色係經由加入終止劑。然後測量41〇 11111之吸光度，其使用微量試盤判續器，並以孔洞中含細胞 但該細胞不與BrdU接觸者作為空白組。 結果： 呈色反應之強度與被增生細胞攝入之BrdU量呈比例關 係。被攝入孔洞内經處理細胞中的BrdU與未處理對照組之 BrdU比較，係根據如下公式： 相粉於斜昭fa女供化π公理細之吸光度X v 100(_1〇〇)

對照组410mm之吸光度X (請先閲讀背面之注意ί項再塡寫本頁) 表1 n hek增生情形之抑制作用（BRDU) •化合物 劑量(Μ) t· . 抑制百分比％ 顯著性心 ICgQ (//Μ) 1 10_4 87 Ρ < 0.01 10·5 22 NS ισ6 12 NS 18.0 2 ισ4 84 Ρ < 0.01 10'5 49 Ρ < 0.05 Ί5.Β IC50為抑制濃度；NS表示不顯著 -裝· 訂. 經 濟 部 中 央 標 準 員 工 消 費 合 η 社 印 製 腹膜内用藥後之急性毒性 腹膜内施用測試物質後之急性毒性係以NMRI小白鼠(20 至25克)及SD大鼠(12〇至195克)測定。將測試物質懸浮於1% 濃度之羧甲基纖維素鈉鹽溶液中。將不同劑量之測試物質 •13. 514467 A6 B6 12 五、發明説明（） 施用在小白鼠，其量為10毫升/每公斤體重；用於大鼠時， 其量為5毫升/每公斤體重。每種劑量使用10隻動物。3週後 ，根據Litchfield與Wilcox方法測定急性毒性。結果示於表2 表2 化合物1 化合物2 急性毒性 急性毒性 腹膜内： 腹膜内 L〇50 (毫克/公斤） LD50 (毫克/公斤） NMRI小白鼠 SD大鼠 185 (163 - 210) 170 (153 - 189) 150 (100 - 200) 富例5 對人進行之雙盲測試(Double blind study) 於利用400位人類進行之隨機雙盲測試中，病人先行 接受分別為50，100及100毫克之單次初劑量，然後接受5 ’ 1〇 及25毫克化合物1之每日持續治療。測試過程中_，為人之 尿液分析顯示無腎功能失調(無腎毒性）。- (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) -裝. 訂， 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 一 14_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS>甲4規格（210 X 297公釐） A7 B7 五、發明説明（叫專利申請案第酬薦號 補充之實例中文本一附件(三） Supplemental Examples in Chinese - Enel. (1H ) (民國84年8月·7日送呈） (Submitted on August η , 1995) ROC Patent Appln. No.83102166 (請先閱讀背面之注意事反 化合物1與2 : 抗增生對細胞毒性 藥物濃度 ("Μ)

Η- 0.1 ng/ml EGF 化合物1

NRB

BrdU 化合物2

NRB

BrdU 2

無EGF 化合物1

NRB

BrdU3 化合物2

NRB

Brdl —裝-- 再填寫本頁)4 100 •17 -81 -29 -95 -30 -50 -40 30 -10 -13 14 •64 -26 -40 10 20 -16, -56 -0.2 -21 26 -10 -22 20 14 -90 -4：； -4(. 11 訂

1匸5〇 〜66·5 "M 2IC5〇 = 7.02//Μ l\CSQ > 100/yM

IC5〇 = 19.5/M 對照組改變的％ NRB=中性紅生物分析（測定活力細胞）NB 1669:pgl87 BrdU= 5-溴-2’-脱氧旅嘧啶核苷（測定細胞增生） EGF=表皮生長因子 14a 本纸張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） 線 經濟部中央標準局貝工消费合作社印装 化合物 劑量（M) 抑制％ 顯著性1 IC50 (_ 3 1〇·4 85 p < 0.01 1〇-5 40 p < 0.01 10'6 15 NS 17.0 S14467 A7 B7 五、發明説明（/4) 實例6 依據實例1製備化合物N-[(3-曱基-4-三氟甲基）-苯基 ]-5-曱基異噁唑-4-羧醯胺（化合物3 )。

以實例3之方法測試化合物3，其結果示於表3中。 表3 nhek增生之抑制（BRDU) IC5〇係爲抑制濃度；NS:不顯著 -14b - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 裝 訂 線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Claims (1)

1. 314467

   0

   申請專利範圍 專利申請案第83102166號 ROC Patent Appln. No.83102166 修正之申請專利範園中文本-附件㈠ Amended Claims in Chinese - Enel. (I ) (民國85年8月7日送呈） (Submitted on August i , 1996) 1. 一種供預防或治療牛皮廯、尋常性牛皮癖、療狀牛 皮癖、紅皮性牛皮癬及膿疱性牛皮癖的醫藥組合物 ，其包括做爲活性成份之式（I )或式)化合物 1 (I) 、(Τ

   其中 R1表示（Ci_C4)_燒基， R2 是 CF3， R3是氫或（G -C4 )-垸基，以及 X表示_CII_， 其中式E化合物以其本身或生理上可耐受之鹽型式存在 -15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------- -裝------訂一 r 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 314467 A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 2. 如申請專利範圍第1項之組合物，其中化合物係選自下列 包括：N-(4-三氟甲基苯基)-2-氰基-3-羥基巴豆醯胺及N-(4-三氟甲墓苯基)-5-曱基異噁唑-4-羧醯胺。 3. 如申請專利範圍第1項之組合物，其係以靜脈内、經口、 局部或注射方式用辏。 4. 如申請專利範圍第1項之組合物’其係以最多500毫克之固 體劑量單位施用。 ——；------^ -裝------訂-------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）