TW294724B - - Google Patents

Description

A7 B7 經濟部中央揉準局貞工消費合作社印製 五、發明説明（i ) 發明茜晷 四唑鹽，如2-U-碘苯基）-3-(4-硝苯基）-5-苯基四唑雄 (INT) ·可用Μ测量分析物·此分析物藉了四唑钂隈離子 堪原成對應的甲赠可轉化成堪原輔酶I (MADH)的對等濃度 *而此埋原可用比色計精確測出。 典型的測定體液中分析物（如葡萄糖）濃度的試劑系统1 是基於化學上的通原反懕，其中初鈒成分是己糖激_ (ΗΚ)，三磷酸腺苷（ΑΤΡ) *葡萄糖-6-磷酸脫氳_ (G-6-PDH)，黃遞梅，輔酾I(NAD)，及作為指示劑的四唑 9。搡作時*己糖激海催化反懕，而在反應中有分析物（ 如葡萄糖）及作為醃活化劑的鎂存在時•從ATP取得磷酸根 ，ATP轉化成二磷酸腺苷•而葡萄糖轉化成葡萄糖_6-璘酸 酯；而在有HAD及G-6-P之存在下，葡萄糖-6-瞵酸酯氧化 • NAD還原成HADH。在有作為電子接受者的黃遞酶的存在 下，NADH使無色的四唑鹽堪原成有色的甲粮*由此提供可 測出的反應，直接對NAD Η作定量测定，間接對分析物作定 量測定（因分析物的存在引發HAD堪原成NADH)。 四唑鹽指示劑通常與乾嫌試劑調配物使用•此乾嫌試劑 調配物於顔色產生階段使用黃邋海或化學介霣。必須有遘 量的指示劑能完全消耗流入試劑系統內的分析物（如葡萄 糖）所產生的堪原當量。 美國專利3,655,382號揭示四唑鱷，其中相對除離子可 、能是氮化物、碘化物、溴化物、硫代氰酸鼸、硫代硫酸鹽 、碕酸鱷、對位甲笨磺酸酯、硫酸甲酯、疏酸乙_、硝酸 -4- 本紙張尺度逋用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10^000 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央棵準局貝工消费合作社印輦 Α7 Β7 五、發明説明（2 ) 鹽、醋酸鹽、過氛酸鹽、過砸酸鹽、亞硫_鹽、氫氧化物 或碳酸鹽。 美國專利4,22 1,864號專利中，專利人說明其發明目的 之一是提供一種新穎的光敏感性照像材料，此物霣含四唑 鎰化合物。他們指出，此目的及其他目的可藉製備一種照 像材料達成•而此照像材料包括一種載體及塗覆於載體上 的至少一種光敏感性鹵化銀層及另一親水膠樣層，此等層 之一含四唑鹽。他們指出，此四唑邇化合物係用作非擴散 性成分，且此種鼸可用四唑限離子與能使所選擇的化合物 不擴散的因離子反應合成。並揭示了相對陰離子，如衍生 自高烷基笨磺酸（如十二烷基苯磺酸）或高烷基碲酸（如硫 酸月桂酯）的反離子。 共同申請中的美國專利申謫案07/898,317號四唑鎰化合 物的磺酸鹽及膦酸鹽，此等鹽在極性溶劑中有極佳的溶解 度。此申請系也掲示了試驗片的製造，其製法是先將基質 浸人四唑笨磺酸鹽指示劑化合物的甲酵溶液内，然後再與 三磷酸腺苷的水溶液接觸。 太銥明溉沭 本發明闞於製造一種診斷裝置的方法，此診斷裝置包括 作為基霣的基質材料（基質分散有作為指示劑的四唑蘧）及 一試劑条統（此試劑系统在此裝置與含要測定的分析物溶 液接觸時能將四唑鹽轉化成其對應的甲勝。此方法包括的 、步驟是： a) Μ基質與四唑鹽溶解在有機溶劑内的溶液接觸，並 中國國家標準（CNS ) Α4说格（210X297公釐） 83.3.10,000 (請先閣讀背面之注$項再填寫本頁) 訂 A7 A7 經濟部中央標率局貝工消費合作社印製 _-_ 五、發明説明（3 ) 使基質乾堞箱Μ提供有四唑纽均匀分佈的基質；並 b) 使有四唑鹽均勻分佈的基®與試劑系统的水溶液接 觴（此水溶液含5-7涸碳原子的直鐽烷基磺酸酯）*再使 基質乾埭藉以使試劑系统沉著於基質上而不使其上的四 嗖鹽有顯著的洗離，Μ製成有四唑鹽及試劑系铳均勻分 佈的基質。 ^ 豳艋篛沭 " 匾1圖示各種界面活性0!對指示劑反萃取於浸潰溶液內 的效果。 圖2代表有機磺酸酸對試劑反應的影響。 太發明詳怵 適用於本發明的四唑鹽Μ下式代表： R1 R2 \® /

N N

X

R 其中X®是相對陰離子*如氯化物、澳化物、或碘化物。 一般R1及R3是苯基，R2是苯基或2-噻唑基。此等苯基及視 情形使用的噻唑基可Μ是取代的未取代的。更特定地說， R1，R3及視情形使用的R2可Μ，但不限於》下式代表： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 東！ 本紙張尺度適用中國國家揲準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 294724 五、發明説明（

Y

Y3 其中各Y基圑（Y1，，Y3，Y4)可相同或相異，可能是， 例如，烷氧基，芳氧基•烷基，醢胺基，烷基醢胺基，芳 基醯胺基，烷碕基，芳疏基，鹵，氫，羥基，胺甲醯基· 烷氧炭基，羧基，氰基，硝基，磺基，亞磺醣胺基•胺磺 醢基，三烷胺基*或腺基。較佳是，各烷基含1至6儸碳 原子，而芳基是笨基、萘基、吡啶基、嗶唑基、喹啉基、 噻唑基、噻吩基及呋喃基。 在R2是噻唑基時，R2可Κ是取代的或未取代的。例如， 以下式代表的噻唑基： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

Λ ! 經濟部中央橾隼局員工消费合作社印製 而R4及R 8是氫或其他的取代基。在本發明的較佳實施例中 ，四唑鹽的R1及Rs部分係如前述•而112是_唑基•其中 114及Rs共同形成取代的或未取代的苯并環；”是羧基，烷 氧羰基，胺甲醯基或氰基，而RB是烷基或氯；R*是烷基或 -7 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 83. 3.10,000 A7 _B7___ 五、發明説明（5 ) 芳基•而Re是羧基•烷氧羰基，芳氧羰基，胺甲醯基或氰 * ; R4是二-或三氟烷基（其中氟係位於鄰近噻唑殘基的碳 原子上；或R4及R5之一或二者都是取代的或未取代的苯基 ，且假使其中之一是取代的時，另一個便是氫或烷基。在 此等四唑结陽離子中•於本發明中特別有用的是那些其 114及Rs共同形成苯并環的\此笨井環可是取代的或未取代 的，形成如下式的i并噻唑殘基： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印製 其中（i) 1{8及1{7或R7及R8或1?8及『共同形成苯并或環己基 環》而此環又可是未取代的或Μ烷氧基、芳氧基、烷基、 醯胺基、烷醣胺基、芳醯胺基、烷硫基、芳硫基、胺基、 胺甲醯基、烷氧羰基、氰基、鹵、羥基、磺基、磺醣胺基 、三烷基胺基或脲基取代的、而其中其他的可相同或相異 的取代基是氫、烷氧基、芳氧基、烷基、醢胺基、烷醯胺 基、芳醯胺基、烷硫基、芳硫基、胺基、胺甲醢基、烷氧 羰基、氰基、鹵、羥基、磺基、磺胺醣基、胺磺醢基、三 烷基氨基或脲基，如果R7及R8共同形成笨并或環己基環， 則Re不是簋，或 (ii)Re，R7，R8，&Re之一或多個是烷氧基、‘芳氧基、 -8- R6 R7

R 本紙張又度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 81 3.10,000 294724 A7 B7 五、發明説明（ό ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 烷基、醯肢基、烷醯胺基、芳醯胺基、烷逋基、芳磓基、 胺基、胺甲醯基、烷氧羰基、氰基、鹵、羥基、磺基、磺 胺醢基、胺磺皤基、三烷基氨基或腺基，如果埋有其他取 代基的話，則為氫。 逋用於本發明的基質材料是此技s所已知的，包括吸紙 ，纗的或非孅的布 > 玻璃嫌維濾紙，聚合物膜及薄膜。較 佳的基質材料包括荷有兩性離子的尼龍布，其孔的大小自 0.45微米至0.8微米。有吸收性或可膨脹的載體，例如濾 紙，有吸收性的玻璃纖維濾紙或合成的非嫌布浸漬於或喷 上四唑鹽/有機溶劑溶液•然後乾燥，並再將此基霣用試 ·ι_· 劑的水溶液處理，再乾煉，即製成診斷用試驗装置，此試 驗装置在接觸含合適的分析物的溶液時，由於四唑a轉化 成其對應的有色的甲#，即會提供可測出的反應。 四唑鹽典型的是只邊際性的溶於水中，是μ需使用有機 溶劑κ使其沉著於基質材枓上。合適的有櫬溶劑包括，例 如，甲酵及丙酮。四唑鹽溶液典型的濃度是50至100奄莫 耳，較佳是70至90毫莫耳* Μ此湄度使四唑鹽沉著於基質 材料基霣上。 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印装

試劑系統典型地包括一種或多種_，如己糖激酶（ΗΚ)及 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，共因子（如三磷酸腺苷（ΑΤΡ)，鎂 苷，氧化劑（如輔酶I)及霣子接受者（如黄遞_)。搡作時 ，己糖激81催化反應·在反應中取自ΑΤΡ的磷酸根形成葡 、萄糖-6-磷酸，在有NAD及葡萄糖-6-磷酸脫氫_之存在下 ，葡萄糖-6-瞵酸又行氧化，NAD藉此堪原成NADH。而HAD -9- 83. 3.10,000 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 第8 3 1 0 3 5 1 5號專利申請茱 五、發明説明（了） 中文說明蓄修正頁（8 5年8月）A7 _ B7

，在有作為霄子接受者的黃遞_之存在下，使無色的四啤 鹽還原成有色的甲勝親。下面銳明的反應步驟代表NADHW 測定為間接測定試驗樣品的葡萄糖塘度方法。 HK葡萄糖---^葡萄糖-6-磷酸+ ADp _^ ATP, Mg

NAD Θ MADH +氧化的匍萄糖_6_磷酸 IG - 6 - P H D ] 的 色 無 /\· 鹽 唑 四 酶 遞 黃 吗的 甲色 + 有 m 的 他5 其物 括析 包分 可的 也外 统之 系糖 驗萄 試葡 此定 測 0 脫 糖 萄 葡 如 酯 油 甘 酸 三 或 醇 固 膽 要在 在存 〇 的 酶— --------裝------訂----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 性 擇 選 有 物 產 應 反 其 或 物 析 分 窆 特 對 用 使 可 時 度 濃。 其酶 及的 糖 萄 葡 定 測 備 製 ο 上 質 基 於 用 使 液 ： 溶含 水液 其溶 Μ的 是用 統使 糸所 劑置 試裝 的 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨ΟΧ 297公釐） 五、發明説明（3 ) A7 B7 經濟部中央標率局負工消费合作社印製 試 劑 m m 酧住澶麽 己 耱 激 梅 1500 -3500 IU/B 1 2000- 3000 IU/m 1 ATP 50 -120 η Μ 70- 110 nM 鎂 30 -70 mM 40- 60 Μ G- 6 _ PHD 600 -1600 IU/m 1 900- 1320IU/m 1 黄 涵 m 500 -1200 αΜ 6 5 0- 1000 αΜ 注 IU/m 1 = 國 際 單 位 /奄升；B 丨Μ = 奄 莫 耳 此 外 9 試 驗 糸 統 m 可 含 聚合物 ，如 聚 乙 烯酵 及/ 或狻 甲 基 級 維 素 梦 作 為 顔 色 穩 定 劑；也 含級 衝 劑 如 HEPES :牛 血 卵 蛋 白 作 為 酶 安 定 劑 > 草 胺酸以 抑制 任 何 外來 乳糖 脫氳 m 0 又 9 也 需 界 面 活 性 劑 使 試劑系 铳易 於 使 用於 基質 上° 理 想 的 是 1 此 界 面 活 性 劑 能 展現下 述特 擞 * 1 . 藉 減 低 含 乾 四 啤 鹽 的基質 的表 面 張 力使 試劑 条统 加 快 濕 潤 型 基 質 〇 2 · 使 膜 經 熱 處 理 後 仍 維持其 濕潤 性 参 即在 診斷 装置 存 放 期 間 重 吸 水 時 仍 雄 持 試爾条 统的 濕 潤 性。 3 . 不 使 指 示 劑 反 萃 取 入浸潰 溶液 中 0 在 各 經 試 驗 遇 的 界 面 活 性 劑中， 只有 5-7 涸碳 原子 的焼 磺 酸 酯 具 有 所 有 道 些 •性 質 0 就此方 面考 慮 » 己烷 磺酸 酯特 別 有 用 〇 現 已 發 現 9 使 用 此 等烷磺 酸酯 作 為 試劑 系统 調配 物 的 界 面 活性 劑 由 於 其 親 水性的 大小 $ 可 預防 乾嫌 過的 指 示 劑 反 濾 回 水 相 中 〇 使 用 其他界 面活 性 劑 ，如 Crod a fos (m 化 十 烷 基 醚 )' > 01 in 10G (對 位 壬 基笨 氧基 -2,3 - 氧 丙 酵 ) ，S > U Γ f y η 〇 丨1 ( 四 甲 基癸炔 基二 酵 f 以30 '莫耳 環氧 乙 -11- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） 83. 3.10,000 A7 B7 i、發明説明（9 ) 烷乙氧化«)，Triton(乙醣基苯氧基聚乙氧基乙酵）· Si丨we t(K聚氧化伸烷基修改過的二甲基矽氧烷），短鍵烷 磺酸酯•如磺酸甲酯或磺酸丙酯，或長鏈烷磺酸酯，如含 8-10個碳原子的長鍵烷磺酸酯，即達不到此目的。己烷磺 酸酿也可增強試劑系统的濕潤特性。由四唑鹽指示劑的反 萃取、試劑糸統的不良膩滴性、及因毎批每批間的差異， 也可因此用己烷磺&酯而減至最低》 以下式代表的己烷磺酸酯

(请先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中夬標隼局WC工消费合作社印装 可由市場購得。在本發明的霣行上•一般加於試劑系统水 溶液中的曇是從0.5¾至1.3X(重量/容量）*較佳是0.7X至 1.U(重量/容量）。先將基質浸入四唑鹽，再蒸發去有櫬 溶劑，再使用含其他成色反應必需成分的溶液，此溶液内 也含己烷磺酸酯濕潤劑，簧質上可預防四唑鹽指示劑反萃 取入水溶液中，同時並確保基霣重吸水時試劑系統的再濕 性。 本發明進一步用下述S例說明： 啻俐T 將四唑嗡指示劑，2-U-碘苯基）-3-(4-硝笨基）-5-笨基 四睡嗡氛化物（INT)或2,2’.5,5’-四苯基-3,3'(3,3'-二甲 、氧基-4,4’-二伸笨基）二四唑氯化物（NBT)，溶於甲酵溶液 内，或50份甲酵/ 50份二甲基甲醯胺内*使其濃度為 -12- 本纸張尺度通用中國國家橾準（CNS ) Α4洗格（210X297公釐） 83. 3.10,000 、ΤΓ 經濟部中央棣準局員工消费合作社印製 A7 B7__五、發明説明（10 ) 80mM。將此溶液浸於固體支撐紙或膜（如Pall BUdyne A menbrane)上，於50t：的爐内乾烯近10分鐘。再將乾埭遇 的指示劑基霣浸入含_、基霣、及界面活性劑（己烷磺酸 酯及其他比較用的界面活性劑）内*再使浸過的支撐乾燫 。浸過的基質上的試劑灑度如下表所示： 探作t»l (葡萄糖試劑，使用己糖激_) 5.5X (重量/重量）四唑嗡指示爾 4X (重量/重量）HEPES埋衝劑•出7.5 2% (重量/重量）NAD 6* (重量/重量）ATP 1% (重量/簠量）界面活性劑 IX (重董/重量）Mg — 2500單位/毫升己糖激酶 1000單位/毫升葡萄糖-6-磷酸脫氫K 800單位/毫升黃邋B 3¾ (重1 /重量）非活性成分 操作K2 (葡萄糖試劑，使用葡萄糖脫氪_) 3. 5ϋί (重量/重霣）四唑嗡指示劑 4¾ (重量/重量）HEPES缓ff劑，pH 7.5 2¾ (重量/重量）HAD 1¾ (重量/重量）界面活性劑 2000單位/毫升葡萄糖-6-磷酸脫氫_ 、 800單位/奄升黃遞酶 3¾ (重最/重ft )非活性成分 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) *?τ 良 -13- 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 經濟部中央樣準局另工消费合作社印装 A7 B7 五、發明说明（11 ) 操作#3 (膽固酵試劑） 1/5X四甲基聪苯胺鹽酸化物指示_ 4X P i pes 緩街劑· cH 7.0 240 單位/毫升遇氧化物梅 240 單位/毫升膽固酵醱_ 120 單位/¾升膽固酵氧化_ 1* 界面活性劑 3X 非活性成分 操作#4 (三酸甘油試劑） 1. IX四唑錨指示劑 一 2.4X HEPES 級街劑，出 7.5 0. 7* Mg —

2.7¾ ATP 25,000軍位/毫升酯_ 800單位/¾升甘油激酶 1,000單位/¾升甘油-3-級酸脫氬_ 500單位/毫升黃遞酶 IX 界面活性劑 1. 53ί非活性成分 要测定反萃取於第二浸潢溶液（即水性介質）中指示劑的 量·在浸漬期間每5分鐘取樣溶液一次，K HP LC澜定溶液 中指示劑的濃度。 ' 要摩擬儲藏期限完了時試01的效果，係使用高溫（典型 是60 t)下試劑系统的加速應力。界面活性劑常是加於乾 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210Χ297公釐） 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ，1Τ 成！ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _ B7__ 五、發明説明（12 ) 燥劑調配物中，以確保乾埭試繭的快速重姐嫌，尤Μ在接 近鏟藏期限终了時為然。典型的是•無界面活性劑的試_ •在加熱後常因再吸水的濕性不良*而顯示劑量反懕的減 退及準確性的降低。有界面活性劑（如己烷磺酸酯）的試劑 ，在加热後則無試劑作用的改變。但並非所有界面活性劑 都有己烷磺酸鹿這樣的表現。各不同界面活性劑對試劑表 現（使用操作#1調配物）的影響*見表I。 m τ 界而法袢豳對試繭麵噩反鏖的嵌雄 繭最反 鏖蚪銮& 於6〇υ 蓂而法《 _ 宝通 _加_ 5夭 無 0.71 0.165 己烷磺酸酯 1.037 1.059 戊烷磺酸酯 0.996 1.017 Croda F0S 1.003 1.002 01 in 10G 0.975 1.017 磺酸苯酯 1.063 0.85 Surf yno 1 1.126 0.785 Si 1 w e t 0.8 0.538 Triton 1.15 0.71 3：試劑反應與血漿葡萄糖的對比鼷係（奄克/分升） 置例丄I.

Μ己焼磺酸酯、戊烷碌酸_、Crode FOS、或01in 10G -15 - 本紙張 ΛΜ财關家&( CNS ) A4 祕（210X297公釐） 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本页) 訂 294724 A7 B7 五、發明説明（15 ) 所製的試劑，經加熱後不顯示明顯的試劑劑量反應變化。 但Μ碌酸苯酷、Triton、Silwet、或Surfynol所製的試劑 ，經加热後顯示明顯的低反應。在維捋合適的試劑反應所 用的界面活性劑中，Croda F0S或Oiin 10G不逋於與四唑 鎰指示劑合用，因為用這類界面活性劑會遇到嚴重的指示 劑的反萃取。與己烷碩酸酯相比，Crode F0S或Olin 10G 使四唑鎰指示劑之反萃取在試劑浸濱步《較使用己烷磺酸 酯高3至4倍。這可由圃1說明。為测定哪一界面活性劑 (己烷磺酸酯，Croda F0S*或Olin 10G)在第二浸潢溶液 中導至最壊的指示劑反萃取，製成三種上述的浸潢溶液· 每一種都含U的特定界面活性劑，並用以浸潢尼筋基質， 即Pall Biodyne A，此基質已先於2- (4-二氟甲基-5-氮 -唾唑-2-基）-3-(3,4,5-三甲氧苯基）-5- (3,4-伸甲基二 氧笨基）四唑鹽中浸潰過。第二浸潰開始後，於0、5、 10及20分鐘取樣第二次浸漬溶液，並以HPLC測定四唑羧指 示劑之濃度。圖1所示数據代表第二次浸漬時指示劑反萃 取於第二浸漬溶液内的指示劑的量。

啻例T T T 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 用第二浸漬溶液中含1¾的不同有機磺酸酯（甲烷、丙烷 、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、癸烷及苯）製成試劑，並使 用於由第一浸潰吸附有四唑箱指示劑的尼龍基質上。多數 第二浸漬溶液在加有機磺酸酯後*都維持澄澝，但暘K於 '甲烷、辛烷、及庚烷磺酸酯内者•則由於有機磺酸酯使酶 沉澱的藺係，變成混濁。乾燥過的試劑的劑量反應用加糖 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央梂準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（14 ) 的40¾血细胞比容的全血測定，此全血已製成血漿含葡萄 糖最為50、100、250、450、及600亳克/分升。每一樣品 都用5種市場上可購得的反懕«萄糖含量的儀器重複作 20次，以最终反應點計算試劑反應。有不同有機磺酸酯的 試劑的表現，以40 X血细胞比容的全血作評估。结果顥示 ，含戊烷磺酸酯、己烷磺酸酯或庚烷磺酸酯的試劑有較高 的反應（圔2)*且在加热後仍有良好的穩定性（表1)。短鏈 (少於C5，如甲烷磺酸酯及丙烷磺酸酯）或長鏈（大於C7* 如辛烷磺酸酯或癸烷磺酸_)者，都會在浸潰時引起酶沉 澱從而形成低反應*或使终產物對熱有g小的射受性。 此等試劑並以葡萄糖液對照樣品作市驗，Μ證明臞2所 示結果並非由紅血球與試劑交互作用所致。此等試驗所提 供的结果與血樣品所作的结果相似。 (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁)

*tT < ! -17- 本紙張尺度逍用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000

Claims (1)

1. 第83103515號專利审請系 中文由請專利範圍修正本（85年8月） A8 B8 C8 D8

   Μ 年月a修正 &5U補充 2 . 3. 一樺将指示劑/試劑糸统 劑包括一種四唑锂，此四 物之存在下，會進行氧化 甲冉賢（formazan.) *此一改 a) Μ基質與四唑鹽溶 並使基質乾烽藉Κ提供 b ) 使有四唑鹽均勻分 接觸（此水溶液含5-7個 再使基質乾燥藉K使試 上的四唑鹽有顯著的洗 統均勻分佈的基質。 根棟申請專利範圍第1項 澈藹，三磷酸腺苷，葡萄 (diaphorase)及輔酶 I 0 根捭申請專利範圍第1項 示： 施於基 唑鹽在 堪原反 良包括 解在有 有四唑 佈的基 碳原子 劑系统 離，Μ 之方法 糖_ δ _ 質載體的方法，該指示 有試劑糸统及預定分析 應，结果邐原成有色的 機溶劑内的溶液接觸， 鹽均句分佈的基質；及 質與試劑糸统的水溶液 的直鍵烷基磺酸酯）, 沉著於基質上而不使其 製成有四唑餚及試劑糸 ,其中試劑糸统含己糖 碟酸脫氫酶，黃遞酶 之方法’其中四唑鞔以下式表 R R J 裝— II 訂 IL ^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) // 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製

   R. 其中χΘ為相對陰難子，R1及R3是取代的或未取代的 苯基，而R 3是取代的或未取代的苯基或2 -嗶〇$基。 根搏申請專利範圍第1項之方法，其中基質材料是吸收 紙 張尺度適用中國國家標準（€阳）厶4規格（210><297公釐） 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 Α8 Β8 C8 D8 々、申請專利範圍 性的紙，織的或非織的布，坡璃纖雄漶紙，或聚合物膜 或薄_。 5. 根據申請專利範圍第4項之方法，其中基質材料是多孔 的載有兩性離子的尼龍布* ，其孔之大小介於0.45至 0 . 8微米之間。 6· 根揲申請專利範圍第1項之方法，其中烷碩酸酯在溶液 闪之濃度為0.53!至1.3%重量/體積。 7 根據申請專利範圍第6項之方法，其中烷磺酸酯之存在 夤為0.7¾至1.U重量/髖積。 8. —檷將指示劑/試劑条統施於多孔的載有兩性離子的尼 龍布基質上的方法，該指示劑包括四唑鹽，此四唑鹽在 有試劑糸统及預定分析物之存在下，會進行氧化還原反 應，结果還原成有色的甲晉，此方法包括： a) Μ基質與四唑鹽溶解在有機溶劑内的溶液接觸， 並使基質乾博藉Μ提供有四啤鹽均勻分佈的基質；並 b) 使有四唑鹽均勻分佈的基質與含己糖激酶，三磷 酸腺苷，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，黃遞酶，及輔酶I的 水溶液接觸，此水溶並含5-7個碳原子的直鍵烷磺酸 酯，再使基質乾烽藉K使試劑糸統沉著於基質上，且 減少其上的四唑鹽被水溶液洗離。 9· 根撺申請專利範圍第8項之方法，其中烷磺酸酯為己烷 磺酸酯，且在水溶液内之濃度為0.55K至1.33!重量/鱈積 Ο 10.根撺申請專利範圍第9項之方法*其中己烷磺酸酯在水 溶液內之濃度為0.7¾:至1.1 J：重最/賴積。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Μ現格（210X297公釐） --------j 裂 訂 ^線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)