TW202342728A - 細胞支架材形成用塗佈液及其製造方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種能夠簡便地形成厚度較大之細胞支架材，能夠提高細胞之增生性的細胞支架材形成用塗佈液。 本發明之細胞支架材形成用塗佈液包含：具有合成樹脂部及肽部之含肽之樹脂、及醇溶劑，且上述含肽之樹脂之含量為0.1重量%以上。

Description

細胞支架材形成用塗佈液及其製造方法
本發明係關於一種細胞支架材形成用塗佈液及其製造方法。
於學術領域、藥物開發領域及再生醫療領域等之研究開發中，使用人類、小鼠、大鼠、豬、牛及猴等之動物細胞。作為用於培養動物細胞之支架材料，使用層連結蛋白及玻連蛋白等黏附蛋白、以及源自小鼠肉瘤之Matrigel等天然高分子材料。
又，亦已知使用合成樹脂之支架材料、及使用結合有肽之合成樹脂之支架材料。例如，於下述之專利文獻1、2中，揭示有一種細胞培養用支架材料，其包含具有聚乙烯醇衍生物部、及肽部之含肽之聚乙烯醇衍生物。  [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]WO2020/230884A1 [專利文獻2]WO2020/230885A1
[發明所欲解決之問題]
使用進行加工或成形等製成特定之形狀之支架材料(細胞支架材)，能夠於液體培養基中培養細胞。先前，包含結合有肽之合成樹脂之細胞支架材係藉由固相法而製作。然而，於該方法中，細胞支架材之製作步驟容易變繁雜。
又，本發明者等人發現：於使用厚度較大之細胞支架材之情形時，相較於使用厚度較小之細胞支架材之情形時，能夠提高細胞之增生性。然而，於固相法中，厚度較大之細胞支架材之製作步驟容易進一步變繁雜。
本發明之目的在於提供一種能夠簡便地形成厚度較大之細胞支架材，能夠提高細胞之增生性的細胞支架材形成用塗佈液。又，本發明之目的亦在於提供一種上述細胞支架材形成用塗佈液之製造方法。 [解決問題之技術手段]
根據本發明之廣泛之態樣，提供一種細胞支架材形成用塗佈液(於本說明書中，有時將「細胞支架材形成用塗佈液」簡稱為「塗佈液」)，其包含：具有合成樹脂部及肽部之含肽之樹脂、及醇溶劑，且上述含肽之樹脂之含量為0.1重量%以上。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，藉由水解胺基酸組成分析法檢測出之胺基酸量為75 μmol/L以上。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述合成樹脂部具有(甲基)丙烯酸系共聚物部、或聚乙烯醇衍生物部。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述含肽之樹脂為具有(甲基)丙烯酸系共聚物部及肽部之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物，上述(甲基)丙烯酸系共聚物部具有源自下述式(A1)或下述式(A2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元。
[化1]
上述式(A1)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
[化2]
上述式(A2)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述(甲基)丙烯酸系共聚物部具有源自(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之結構單元，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)具有能夠與胺基或羧基反應之官能基，且於上述含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物中，上述肽部結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述含肽之樹脂為具有聚乙烯醇衍生物部及肽部之含肽之聚乙烯醇衍生物。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述含肽之聚乙烯醇衍生物進而具有源自下述式(C1)或下述式(C2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物(C)之結構單元。
[化3]
上述式(C1)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
[化4]
上述式(C2)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述含肽之聚乙烯醇衍生物進而具有源自(甲基)丙烯酸酯化合物(D)之結構單元，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)具有能夠與胺基或羧基反應之官能基，且於上述含肽之聚乙烯醇衍生物中，上述肽部結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述含肽之聚乙烯醇衍生物為具有聚乙烯醇縮醛部及肽部之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂。
於本發明之塗佈液之某特定之態樣中，上述肽部具有RGD序列。
根據本發明之廣泛之態樣，提供一種上述細胞支架材形成用塗佈液之製造方法，其具備如下步驟：準備步驟，其準備包含具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂、肽、及縮合劑之溶液；及反應步驟，其使上述合成樹脂與上述肽反應。
於本發明之塗佈液之製造方法之某特定之態樣中，上述製造方法進而具備純化步驟。
於本說明書中，亦提供一種以下之含肽之樹脂之製造方法。
根據本發明之廣泛之態樣，提供一種含肽之樹脂之製造方法，其具備如下步驟：準備包含第1溶劑、具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂、及肽之第1溶液；準備包含第2溶劑、及縮合劑之第2溶液；及將上述第1溶液與上述第2溶液混合。
於本發明之含肽之樹脂之製造方法之某特定之態樣中，上述製造方法進而具備使上述具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂與上述肽反應之反應步驟。
於本發明之含肽之樹脂之製造方法某特定之態樣中，上述製造方法進而具備純化步驟。
於本發明之含肽之樹脂之製造方法之某特定之態樣中，上述具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂為(甲基)丙烯酸系共聚物、或聚乙烯醇衍生物。
於本發明之含肽之樹脂之製造方法之某特定之態樣中，上述肽具有RGD序列。 [發明之效果]
本發明之細胞支架材形成用塗佈液包含具有合成樹脂部及肽部之含肽之樹脂、及醇溶劑，且上述含肽之樹脂之含量為0.1重量%以上。本發明之細胞支架材形成用塗佈液由於具備上述之構成，故而能夠簡便地形成厚度較大之細胞支架材，能夠提高細胞之增生性。
以下，說明本發明之詳情。
[細胞支架材形成用塗佈液] 本發明之細胞支架材形成用塗佈液(以下，有時簡稱為「塗佈液」)包含：具有合成樹脂部及肽部之含肽之樹脂、及醇溶劑，且上述含肽之樹脂之含量為0.1重量%以上。
本發明之塗佈液由於具備上述之構成，故而能夠簡便地形成厚度較大之細胞支架材，能夠提高細胞之增生性。本發明之塗佈液能夠將該塗佈液簡便地塗佈於容器等之表面。又，由於本發明之塗佈液中包含相對較多之含肽之樹脂，故而藉由使塗佈之塗佈液乾燥，能夠簡便地形成厚度較大之細胞支架材。進而，本發明之塗佈液由於能夠簡便地形成厚度較大之細胞支架材，故而能夠提高細胞之增生性。
又，本發明之塗佈液由於無需使用細胞外基質(ECM)等天然高分子材料作為材料，故而廉價，批次間之差異較小，安全性優異。
(含肽之樹脂) 上述塗佈液含有含肽之樹脂(peptide-conjugated resin)。上述含肽之樹脂係結合有肽之合成樹脂。上述含肽之樹脂具有合成樹脂部與肽部。上述含肽之樹脂可僅使用1種，亦可併用2種以上。
就發揮本發明之效果之觀點而言，上述塗佈液100重量%中，上述含肽之樹脂之含量為0.1重量%以上。
上述塗佈液100重量%中，上述含肽之樹脂之含量較佳為0.3重量%以上，更佳為1重量%以上，進而較佳為3重量%以上，且較佳為15重量%以下，更佳為10重量%以下，進而較佳為8重量%以下。若上述含肽之樹脂之含量為上述下限以上，則能夠進一步簡便地形成厚度較大之細胞支架材，能夠進一步提高細胞之增生性。若上述含肽之樹脂之含量為上述上限以下，則能夠進一步提高含肽之樹脂對醇溶劑之溶解性，又，能夠提高塗佈性。
於上述塗佈液中，藉由水解胺基酸組成分析法檢測出之胺基酸量較佳為75 μmol/L以上，更佳為250 μmol/L以上，進而較佳為750 μmol/L以上，且較佳為10 mmol/L以下，更佳為5 mmol/L以下，進而較佳為3 mmol/L以下。上述胺基酸量對應於塗佈液1 L中檢測出之胺基酸量(μmol)。若上述胺基酸量為上述下限以上，則能夠進一步提高細胞之增生性。若上述胺基酸量為上述上限以下，則能夠進一步提高含肽之樹脂對醇溶劑之溶解性，又，能夠提高塗佈性。
上述胺基酸量例如係以如下方式進行測定。
首先，使塗佈液進行真空乾燥，將溶劑完全去除而獲得乾燥物。將所獲得之乾燥物5 mg與6 mol/L之鹽酸500 μL放入至小瓶，脫氣密閉後，以110℃加熱22小時，藉此進行肽之水解。水解反應後，藉由吹送氮氣而去除鹽酸。繼而，添加pH值2.2之檸檬酸鈉緩衝液500 μL再次溶解。將所獲得之溶液添加至離心式過濾器單元(Ultrafree-MC UFC30系列、孔徑0.1 μm、Merck公司製造)，於13400 rpm及3 min之條件下進行離心過濾。對濾液藉由使用鄰苯二甲醛(以下，有時記載為OPA)之管柱後衍生化法，於以下之分析條件及檢測條件下進行分析。再者，濾液係根據譜強度，利用pH值2.2之檸檬酸鈉緩衝液稀釋至1倍～125倍而用於測定。
＜分析條件＞ 管柱：Shim-pack Amino-Na(100 mmL×6.0 mmI.D.) 氨捕獲管柱：ISC-30/S0504 Na(50 mmL×4.0 mmI.D.) ・流動相：胺基酸流動相套組Na型(島津製作所公司製造) A液：檸檬酸鈉緩衝液 B液：檸檬酸鈉緩衝液 C液：氫氧化鈉溶液 梯度溶出(高分離模式) ・流量：0.4 mL/min ・溫度：60℃ ・注入量：10 μL
＜檢測條件＞ ・反應試劑：胺基酸分析套組OPA試劑(島津製作所公司製造) A液：包含次氯酸鈉之鹼性溶液 B液：包含OPA及N-乙醯基-L-半胱胺酸之鹼性溶液 ・流量：0.2 mL/min ・溫度：60℃ ・檢測：分光螢光檢測器RF-20Axs 應答：1.5 sec 激發波長：350 nm 螢光波長：450 nm 增益：×1 感度：低
繼而，使用胺基酸自動分析用胺基酸混合標準液H型(和光純藥工業公司製造、各胺基酸濃度2.5 μmol/mL)作為定量用標準用試劑製成校準曲線，對所獲得之各胺基酸之峰面積值進行定量化。根據用於測定之塗佈液量、所獲得之乾燥物量及胺基酸濃度，算出塗佈液中之胺基酸量(μmol/L)。
上述合成樹脂部較佳為具有(甲基)丙烯酸系共聚物部、或聚乙烯醇衍生物部，更佳為(甲基)丙烯酸系共聚物部、或聚乙烯醇衍生物部。上述含肽之樹脂較佳為具有(甲基)丙烯酸系共聚物部及肽部之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物、或具有聚乙烯醇衍生物部及肽部之含肽之聚乙烯醇衍生物。於該情形時，能夠進一步提高細胞之增生性。上述合成樹脂部亦可具有(甲基)丙烯酸系共聚物部與聚乙烯醇衍生物部之雙方。
再者，於本說明書中，「(甲基)丙烯酸」意指「丙烯酸」與「甲基丙烯酸」之一方或雙方，「(甲基)丙烯酸酯」意指「丙烯酸酯」與「甲基丙烯酸酯」之一方或雙方。
＜含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物＞ 就進一步提高細胞之增生性之觀點而言，上述含肽之樹脂較佳為具有(甲基)丙烯酸系共聚物部及肽部之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物。上述含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物較佳為結合有肽之(甲基)丙烯酸系共聚物。上述含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述(甲基)丙烯酸系共聚物部較佳為具有源自下述式(A1)或下述式(A2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元。於該情形時，能夠增大含肽之樹脂(含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物)之疏水性，因此，於細胞培養中細胞支架材不易溶出至液體培養基中，又，於細胞培養中細胞支架材不易自容器等剝離。其結果，即便長時間培養細胞，細胞之增生速度亦不易降低。再者，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(A)可包含下述式(A1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物，亦可包含下述式(A2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物，亦可包含下述式(A1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物與下述式(A2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物之雙方。於上述(甲基)丙烯酸酯化合物(A)包含下述式(A1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物與下述式(A2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物之雙方之情形時，下述式(A1)中之R與下述式(A2)中之R可相同，亦可不同。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(A)可僅使用1種，亦可併用2種以上。又，下述式(A1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物及下述式(A2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物分別可僅使用1種，亦可併用2種以上。
[化5]
上述式(A1)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
[化6]
上述式(A2)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
上述式(A1)中之R及上述式(A2)中之R分別可為脂肪族烴基，亦可為芳香族烴基。就使含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之溶解度變良好之觀點而言，上述式(A1)中之R及上述式(A2)中之R分別較佳為脂肪族烴基。上述脂肪族烴基可為直鏈狀，亦可具有支鏈結構，可具有雙鍵，亦可不具有雙鍵。上述式(A1)中之R及上述式(A2)中之R分別可為烷基，亦可為伸烷基。
上述式(A1)中之R之碳數及上述式(A2)中之R之碳數分別較佳為4以上，更佳為6以上，進而較佳為8以上，尤佳為10以上，且較佳為16以下，更佳為14以下，最佳為12。若上述碳數為上述下限以上，則能夠增大含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之疏水性，因此，於細胞培養中細胞支架材不易溶出至液體培養基中，又，於細胞培養中細胞支架材不易自容器等剝離。若上述碳數為上述上限以下，則能夠使對醇溶劑之溶解性進一步變良好，因此能夠進一步提高塗佈性及加工性。尤其是若上述碳數為12，則能夠更進一步有效地發揮本發明之效果，又，能夠更進一步提高塗佈性及加工性。
上述(甲基)丙烯酸系共聚物部之所有結構單元100莫耳%中，上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元之含有率較佳為25莫耳%以上，更佳為30莫耳%以上，進而較佳為40莫耳%以上，尤佳為50莫耳%以上，且較佳為98莫耳%以下，更佳為95莫耳%以下，進一步較佳為90莫耳%以下，進而較佳為80莫耳%以下，尤佳為75莫耳%以下。上述(甲基)丙烯酸系共聚物部之所有結構單元100莫耳%中，上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元之含有率較佳為25莫耳%以上、98莫耳%以下，更佳為30莫耳%以上、95莫耳%以下，進一步較佳為40莫耳%以上、90莫耳%以下，進而較佳為50莫耳%以上、80莫耳%以下，尤佳為50莫耳%以上、75莫耳%以下。若上述含有率為上述下限以上，則能夠增大含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之疏水性，因此，於細胞培養中細胞支架材不易溶出至液體培養基中，又，於細胞培養中細胞支架材不易自容器等剝離。若上述含有率為上述上限以下，則能夠使對醇溶劑之溶解性進一步變良好，因此能夠進一步提高塗佈性及加工性。
上述(甲基)丙烯酸系共聚物部較佳為具有源自(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之結構單元，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)具有能夠與胺基或羧基反應之官能基。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)可具有能夠與胺基反應之官能基，亦可具有能夠與羧基反應之官能基，亦可具有能夠與胺基反應之官能基及能夠與羧基反應之官能基。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)可僅使用1種，亦可併用2種以上。
作為上述能夠與胺基或羧基反應之官能基，可例舉：羧基、硫醇基、胺基、及氰基等。
就有效地發揮本發明之效果之觀點而言，於上述含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物中，較佳為上述肽部結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。更具體而言，較佳為構成上述肽部之胺基酸之羧基或胺基結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。
上述能夠與胺基或羧基反應之官能基較佳為羧基或胺基。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)較佳為具有羧基或胺基。
作為上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)，可例舉：(甲基)丙烯酸、3-丁烯酸、4-戊烯酸、5-己烯酸、6-庚烯酸、7-辛烯酸、苯丙烯酸、琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、鄰苯二甲酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯、鄰苯二甲酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯、六氫琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、六氫鄰苯二甲酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、六氫琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯、及六氫鄰苯二甲酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯等。
上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)較佳為(甲基)丙烯酸、琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯、六氫琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、六氫琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯、或者丁烯酸，更佳為(甲基)丙烯酸。於該情形時，能夠進一步有效地發揮本發明之效果。
上述(甲基)丙烯酸系共聚物部之所有結構單元100莫耳%中，上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之結構單元之含有率較佳為2莫耳%以上，更佳為5莫耳%以上，進一步較佳為10莫耳%以上，進而較佳為20莫耳%以上，尤佳為25莫耳%以上，且較佳為75莫耳%以下，更佳為70莫耳%以下，進而較佳為60莫耳%以下，尤佳為50莫耳%以下。若上述含有率為上述下限以上，則能夠提高對醇溶劑之溶解性。若上述含有率為上述上限以下，則容易長時間維持細胞之培養穩定性。
上述(甲基)丙烯酸系共聚物部之所有結構單元100莫耳%中，上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元與上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之結構單元之合計含有率較佳為50莫耳%以上，更佳為65莫耳%以上，進一步較佳為80莫耳%以上，進而較佳為90莫耳%以上，尤佳為95莫耳%以上，最佳為100莫耳%。若上述合計含有率為上述下限以上，則能夠進一步有效地發揮本發明之效果。再者，上述合計含有率可為100莫耳%以下，亦可為90莫耳%以下。
只要不違反本發明之目的，則上述(甲基)丙烯酸系共聚物部亦可包含源自與上述(甲基)丙烯酸酯化合物(A)及上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之雙方不同之(甲基)丙烯酸酯化合物的結構單元。又，只要不違反本發明之目的，則上述(甲基)丙烯酸系共聚物部亦可包含源自能夠與(甲基)丙烯酸酯化合物共聚之乙烯基化合物之結構單元。
上述(甲基)丙烯酸系共聚物部中之上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元之含有率、上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之結構單元之含有率、及後述之含肽之聚乙烯醇衍生物中之源自(甲基)丙烯酸酯化合物(C)之結構單元之含有率例如可藉由NMR(核磁共振)進行測定。
＜含肽之聚乙烯醇衍生物＞ 就進一步提高細胞之增生性之觀點而言，上述含肽之樹脂較佳為具有聚乙烯醇衍生物部及肽部之含肽之聚乙烯醇衍生物。上述聚乙烯醇衍生物部係源自聚乙烯醇衍生物之部分。上述聚乙烯醇衍生物係藉由聚乙烯醇而衍生出之化合物。就進一步提高細胞支架材與細胞之黏附性之觀點而言，上述聚乙烯醇衍生物較佳為聚乙烯醇縮醛樹脂，上述聚乙烯醇衍生物部較佳為聚乙烯醇縮醛部。即，上述含肽之聚乙烯醇衍生物更佳為具有聚乙烯醇縮醛部及肽部之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂。再者，上述聚乙烯醇衍生物及上述聚乙烯醇縮醛樹脂分別可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述聚乙烯醇衍生物部及上述聚乙烯醇縮醛部較佳為於側鏈具有縮醛基、羥基、及乙醯基。但上述聚乙烯醇衍生物部及上述聚乙烯醇縮醛部例如亦可不具有乙醯基。例如，亦可藉由使聚乙烯醇衍生物部及聚乙烯醇縮醛部之乙醯基全部與連接基鍵結而使上述聚乙烯醇衍生物部及上述聚乙烯醇縮醛部不具有乙醯基。
聚乙烯醇縮醛樹脂可藉由利用醛使聚乙烯醇縮醛化而合成。
用於聚乙烯醇之縮醛化之上述醛並無特別限定。作為上述醛，例如，可例舉碳數為1～10之醛。上述醛可具有亦可不具有鏈狀脂肪族基、環狀脂肪族基或芳香族基。上述醛可為鏈狀醛，亦可為環狀醛。上述醛可僅使用1種，亦可併用2種以上。
就進一步提高細胞支架材與細胞之黏附性之觀點而言，上述醛較佳為甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、或戊醛，更佳為丁醛。因此，上述聚乙烯醇縮醛樹脂更佳為聚乙烯醇縮丁醛樹脂，上述聚乙烯醇縮醛部更佳為聚乙烯醇縮丁醛部。就進一步提高細胞支架材與細胞之黏附性之觀點而言，上述含肽之樹脂較佳為具有聚乙烯醇縮丁醛部與肽部之含肽之聚乙烯醇縮丁醛樹脂。
於上述含肽之聚乙烯醇衍生物中，上述聚乙烯醇衍生物部及上述聚乙烯醇縮醛部之縮醛化度(於聚乙烯醇縮丁醛部之情形時為丁醛化度)較佳為40莫耳%以上，更佳為50莫耳%以上，且較佳為90莫耳%以下，更佳為85莫耳%以下。若上述縮醛化度為上述下限以上，則能夠進一步提高細胞之固定性，細胞效率良好地增生。若上述縮醛化度為上述上限以下，則能夠使對溶劑之溶解性變良好。
於上述含肽之聚乙烯醇衍生物中，上述聚乙烯醇衍生物部及上述聚乙烯醇縮醛部之羥基之含有率(羥基量)較佳為15莫耳%以上，更佳為20莫耳%以上，且較佳為45莫耳%以下，更佳為30莫耳%以下，進而較佳為25莫耳%以下。
於上述含肽之聚乙烯醇衍生物中，上述聚乙烯醇衍生物部及上述聚乙烯醇縮醛部之乙醯化度(乙醯基量)較佳為1莫耳%以上，更佳為2莫耳%以上，且較佳為5莫耳%以下，更佳為4莫耳%以下。若上述乙醯化度為上述下限以上及上述上限以下，則能夠提高聚乙烯醇縮醛樹脂與連接基之反應效率。
上述聚乙烯醇衍生物部及上述聚乙烯醇縮醛部之縮醛化度、乙醯化度及羥基量可藉由 1H-NMR(核磁共振譜)進行測定。
上述含肽之聚乙烯醇衍生物較佳為進而具有源自下述式(C1)或下述式(C2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物(C)之結構單元。於該情形時，能夠抑制肽間之氫鍵(尤其是分子間之氫鍵)之形成，因此，能夠使對醇溶劑之溶解性進一步變良好。再者，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(C)可包含下述式(C1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物，亦可包含下述式(C2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物，亦可包含下述式(C1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物與下述式(C2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物之雙方。於上述(甲基)丙烯酸酯化合物(C)包含下述式(C1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物與下述式(C2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物之雙方之情形時，下述式(C1)中之R與下述式(C2)中之R可相同，亦可不同。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(C)可僅使用1種，亦可併用2種以上。又，下述式(C1)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物及下述式(C2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物分別可僅使用1種，亦可併用2種以上。
[化7]
上述式(C1)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
[化8]
上述式(C2)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
上述式(C1)中之R及上述式(C2)中之R分別可為脂肪族烴基，亦可為芳香族烴基。就使含肽之聚乙烯醇衍生物對醇溶劑之溶解性變良好之觀點而言，上述式(C1)中之R及上述式(C2)中之R分別較佳為脂肪族烴基。於該情形時，上述脂肪族烴基可為直鏈狀，亦可具有支鏈結構，可具有雙鍵，亦可不具有雙鍵。上述式(C1)中之R及上述式(C2)中之R可分別為烷基，亦可為伸烷基。
上述式(C1)中之R之碳數及上述式(C2)中之R之碳數分別較佳為4以上，更佳為6以上，進而較佳為8以上，尤佳為10以上，且較佳為16以下，更佳為14以下，最佳為12。若上述碳數為上述下限以上及上述上限以下，則能夠抑制肽間之氫鍵之形成，因此，能夠使對醇溶劑之溶解性進一步變良好。
於上述含肽之聚乙烯醇衍生物中，上述源自(甲基)丙烯酸酯化合物(C)之結構單元之含有率較佳為5莫耳%以上，更佳為10莫耳%以上，且較佳為50莫耳%以下，更佳為30莫耳%以下。若上述含有率為上述下限以上及上述上限以下，則能夠抑制肽間之氫鍵之形成，因此，能夠使對醇溶劑之溶解性進一步變良好。
上述含肽之聚乙烯醇衍生物較佳為進而具有源自(甲基)丙烯酸酯化合物(D)之結構單元，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)具有能夠與胺基或羧基反應之官能基。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)可具有能夠與胺基反應之官能基，亦可具有能夠與羧基反應之官能基，亦可具有能夠與胺基反應之官能基及能夠與羧基反應之官能基。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)可僅使用1種，亦可併用2種以上。
作為上述能夠與胺基或羧基反應之官能基，可例舉羧基、硫醇基、胺基、羥基及氰基等。
就有效地發揮本發明之效果之觀點而言，於上述含肽之聚乙烯醇衍生物中，較佳為上述肽部結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。更具體而言，較佳為構成上述肽部之胺基酸之羧基或胺基結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。
上述能夠與胺基或羧基反應之官能基較佳為羧基或胺基。上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)較佳為具有羧基或胺基。
作為上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)，可例舉作為上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)所例舉之化合物等。
上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)較佳為(甲基)丙烯酸、琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯、六氫琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基乙酯、六氫琥珀酸(甲基)丙烯醯氧基丙酯、或者丁烯酸，更佳為(甲基)丙烯酸。於該情形時，能夠進一步有效地發揮本發明之效果。
＜肽部＞ 上述肽部係源自肽之結構部分。上述肽部具有胺基酸序列。構成上述肽部之肽可為寡肽，亦可為多肽。上述肽可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述肽部之胺基酸殘基之數較佳為3個以上，更佳為4個以上，進而較佳為5個以上，且較佳為10個以下，更佳為8個以下，進而較佳為6個以下。若上述胺基酸殘基之數為上述下限以上及上述上限以下，則能夠進一步提高與接種後之細胞之黏附性，能夠進一步提高細胞之增生率。其中，上述肽部之胺基酸殘基之數可超過10個，亦可超過15個。
上述肽部較佳為具有細胞黏附性之胺基酸序列。再者，細胞黏附性之胺基酸序列係指藉由噬菌體展示法、瓊脂糖珠法、或板塗佈法確認到細胞黏附活性之胺基酸序列。作為上述噬菌體展示法，例如可使用「The Journal of Cell Biology, Volume 130, Number 5, September 1995 1189-1196」所記載之方法。作為上述瓊脂糖珠法，例如可使用「蛋白質 核酸 酵素 Vol.45 No.15 (2000) 2477」所記載之方法。作為上述板塗佈法，例如可使用「蛋白質 核酸 酵素 Vol.45 No.15 (2000) 2477」所記載之方法。
作為上述細胞黏附性之胺基酸序列，例如，可例舉：RGD序列(Arg-Gly-Asp)、YIGSR序列(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg)、PDSGR序列(Pro-Asp-Ser-Gly-Arg)、HAV序列(His-Ala-Val)、ADT序列(Ala-Asp-Thr)、QAV序列(Gln-Ala-Val)、LDV序列(Leu-Asp-Val)、IDS序列(Ile-Asp-Ser)、REDV序列(Arg-Glu-Asp-Val)、IDAPS序列(Ile-Asp-Ala-Pro-Ser)、KQAGDV序列(Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val)、及TDE序列(Thr-Asp-Glu)等。又，作為上述細胞黏附性之胺基酸序列，亦可例舉「病態生理、第9卷 第7號、527～535頁、1990年」、及「大阪府立母子醫療中心雜誌、第8卷 第1號、58～66頁、1992年」所記載之序列等。上述肽部可僅具有1種上述細胞黏附性之胺基酸序列，亦可具有2種以上。
上述細胞黏附性之胺基酸序列較佳為具有上述細胞黏附性之胺基酸序列中之至少任一者，更佳為至少具有RGD序列、YIGSR序列、或者PDSGR序列，進而較佳為具有RGD序列，尤佳為至少具有下述式(1)所表示之RGD序列。於該情形時，能夠進一步提高與接種後之細胞之黏附性，能夠進一步提高細胞之增生率。
Arg-Gly-Asp-X      式(1)
上述式(1)中，X表示Gly、Ala、Val、Ser、Thr、Phe、Met、Pro、或者Asn。
上述肽部可為直鏈狀，亦可具有環狀肽骨架。上述環狀肽骨架係指由複數個胺基酸構成之環狀骨架。就進一步發揮本發明之效果之觀點而言，上述環狀肽骨架較佳為由4個以上之胺基酸構成，更佳為由5個以上之胺基酸構成，且較佳為由10個以下之胺基酸構成。
於上述含肽之樹脂中，上述肽部之含有率較佳為0.5莫耳%以上，更佳為1莫耳%以上，進而較佳為2莫耳%以上，尤佳為5莫耳%以上，且較佳為25莫耳%以下，更佳為20莫耳%以下，進而較佳為15莫耳%以下，尤佳為10莫耳%以下。若上述肽部之含有率為上述下限以上，則能夠進一步提高與接種後之細胞之黏附性，能夠進一步提高細胞之增生率。又，若上述肽部之含有率為上述上限以下，則能夠抑制製造成本。再者，上述肽部之含有率(莫耳%)係相對於構成含肽之樹脂之各結構單元之物質量之總和的上述肽部之物質量。
上述肽部之含有率例如可藉由NMR(核磁共振)進行測定。
＜含肽之樹脂之其他詳情＞ 上述含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之數量平均分子量較佳為5000以上，更佳為10000以上，進而較佳為50000以上，且較佳為5000000以下，更佳為2500000以下，進而較佳為1000000以下。若上述數量平均分子量為上述下限以上，則能夠增大含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之疏水性，因此，於細胞培養中細胞支架材不易溶出至液體培養基中，又，於細胞培養中細胞支架材不易自容器等剝離。若上述數量平均分子量為上述上限以下，則能夠提高對醇溶劑之溶解性。
上述含肽之聚乙烯醇衍生物之數量平均分子量較佳為10000以上，更佳為50000以上，進而較佳為100000以上，且較佳為5000000以下，更佳為2500000以下，進而較佳為1000000以下。若上述數量平均分子量為上述下限以上，則於細胞培養中細胞支架材不易溶出至液體培養基中，又，於細胞培養中細胞支架材不易自容器等剝離。若上述數量平均分子量為上述上限以下，則能夠提高對醇溶劑之溶解性。
再者，上述含肽之樹脂(含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物、含肽之聚乙烯醇衍生物)之數量平均分子量例如可藉由以下之方法進行測定。將上述含肽之樹脂溶解於四氫呋喃(THF)，製備含肽之樹脂之0.2重量%溶液。繼而，使用凝膠滲透層析(GPC)測定裝置(APC系統、Waters公司製造)，藉由以下之測定條件進行評價。
管柱：HSPgel HR MB-M 6.0×150 mm 流量：0.5 mL/min 管柱溫度：40℃ 注入量：10 μL 檢測器：RI、PDA 標準試樣：聚苯乙烯
(醇溶劑) 上述塗佈液包含醇溶劑。上述醇溶劑可僅使用1種，亦可併用2種以上。
作為上述醇溶劑，可例舉：甲醇、乙醇、丁醇、異丁醇、第二丁醇、第三丁醇、異丙醇、丙醇、己醇、辛醇、月桂醇及乙二醇等。
就良好地形成具有均勻之厚度之樹脂膜(細胞支架材)之觀點而言，上述醇溶劑較佳為碳數2以上4以下之低級醇，更佳為乙醇、丙醇或丁醇，進而較佳為丁醇。
於上述塗佈液100重量%中，上述醇溶劑之含量較佳為80重量%以上，更佳為85重量%以上，進而較佳為90重量%以上，且較佳為99.9重量%以下，更佳為99重量%以下，進而較佳為98重量%以下。若上述醇溶劑之含量為上述下限以上及上述上限以下，則能夠進一步提高含肽之樹脂對醇溶劑之溶解性，又，能夠提高塗佈性。
於上述塗佈液100重量%中，上述含肽之樹脂與上述醇溶劑之合計含量較佳為80重量%以上，更佳為85重量%以上，進而較佳為90重量%以上。上述合計含量可為100重量%以下，亦可未達100重量%。
(pH值調整劑) 上述塗佈液較佳為包含pH值調整劑。藉由使用pH值調整劑，能夠調整上述含肽之樹脂對醇溶劑之溶解性。作為上述pH值調整劑，可例舉有機酸、無機酸、有機鹼及無機鹼。作為上述pH值調整劑，例如，可例舉：乙酸、三氟乙酸、鹽酸、三乙胺、及N,N-二異丙基乙基胺等。上述pH值調整劑可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述pH值調整劑之含量相對於上述醇溶劑100重量份，較佳為0.1重量份以上，更佳為0.5重量份以上，且較佳為20重量份以下，更佳為15重量份以下。
(其他成分) 上述塗佈液可於不阻礙本發明之效果之範圍內，包含與上述成分(上述含肽之樹脂、上述醇溶劑及上述pH值調整劑)不同之其他成分。作為上述其他成分，可例舉醇溶劑以外之溶劑、及多糖類等。上述其他成分可僅使用1種，亦可併用2種以上。
作為上述醇溶劑以外之溶劑，例如，可例舉：水、二甲基亞碸、N,N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二氯甲烷、乙腈等。
上述塗佈液較佳為實質上不含源自動物之原料。藉由不含源自動物之原料，能夠提供安全性較高且製造時品質之差異較少之細胞支架材。再者，「實質上不含源自動物之原料」意指上述塗佈液中之源自動物之原料為3重量%以下。於上述塗佈液中，塗佈液中之源自動物之原料較佳為1重量%以下，最佳為0重量%。即，上述塗佈液最佳為完全不含源自動物之原料。
(塗佈液之製造方法) 本發明之塗佈液之製造方法為上文所述之塗佈液之製造方法。本發明之塗佈液之製造方法具備如下步驟：準備步驟，其準備包含具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂、肽、及縮合劑之溶液；及反應步驟，其使上述合成樹脂與上述肽反應。
再者，於本說明書中，有時將「具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂」記載為「合成樹脂X」。
因此，本發明之塗佈液之製造方法具備如下步驟：準備步驟，其準備包含合成樹脂X、肽、及縮合劑之溶液；及反應步驟，其使上述合成樹脂X與上述肽進行反應。
上述合成樹脂X可具有能夠與胺基反應之官能基，亦可具有能夠與羧基反應之官能基，亦可具有能夠與胺基反應之官能基及能夠與羧基反應之官能基。
作為上述合成樹脂X，可例舉(甲基)丙烯酸酯共聚物及聚乙烯醇縮醛衍生物等。更具體而言，作為上述合成樹脂X，可例舉：使包含上述(甲基)丙烯酸酯化合物(A)與上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之單體混合物聚合而成之(甲基)丙烯酸酯共聚物、及具有源自上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)之結構單元之聚乙烯醇縮醛衍生物等。上述合成樹脂X可僅使用1種，亦可併用2種以上。
作為上述肽，可例舉具有上文所述之肽部之欄中記載之胺基酸殘基之數及胺基酸序列等的肽等。上述肽可僅使用1種，亦可併用2種以上。
作為上述縮合劑，可使用先前公知之縮合劑。作為上述縮合劑，可例舉：1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽、N,N'-二環己基碳二醯亞胺、1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-氮雜苯并三唑、疊氮磷酸二苯酯、六甲基磷醯三胺、六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5,-三𠯤、氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5,-三𠯤-2-基)-4-甲基嗎啉鎓、三氟甲磺酸4,6-二甲氧基-1,3,5,-三𠯤-2-基)-(2-辛氧基-2-側氧基乙基)二甲基銨、2,2,6,6,-四甲基哌啶及六氟磷酸(1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺基氧基)二甲基胺基嗎啉基碳鎓等。上述縮合劑可僅使用1種，亦可併用2種以上。
於上述準備步驟中，準備包含合成樹脂X、肽、縮合劑、及溶劑之溶液。包含合成樹脂X、肽、縮合劑、及溶劑之上述溶液亦可為分散液。於上述準備步驟中，可於同一溶劑中混合合成樹脂X、肽、及縮合劑而獲得上述溶液，例如，亦可藉由將包含合成樹脂X、肽及縮合劑中之至少1種成分之溶液A、及包含合成樹脂X、肽及縮合劑中之至少1種成分之溶液B混合而獲得上述溶液。
上述準備步驟較佳為具備如下步驟：準備包含第1溶劑、合成樹脂X、及肽之第1溶液；準備包含第2溶劑與縮合劑之第2溶液；及將上述第1溶液與上述第2溶液混合。於該情形時，能夠使控制縮合反應變容易。再者，上述第1溶劑與上述第2溶劑可為同一種類之溶劑，亦可為不同種類之溶劑。可於準備上述第1溶液後，準備上述第2溶液，亦可於準備上述第2溶液後，準備上述第1溶液。亦可同時準備上述第1溶液與上述第2溶液。
上述溶劑、上述第1溶劑及上述第2溶劑分別可為醇溶劑，亦可為醇溶劑以外之溶劑。於上述塗佈液之製造方法不具備後述之純化步驟之情形時，上述溶劑、上述第1溶劑及上述第2溶劑分別較佳為醇溶劑。
作為上述溶劑、上述第1溶劑及上述第2溶劑，可例舉：甲醇、乙醇、丁醇、二甲基甲醯胺(DMF)、四氫呋喃(THF)、乙腈、丙酮、甲基乙基酮(MEK)、二甲基亞碸(DMSO)、及水等。
於上述反應步驟中，使上述合成樹脂X與上述肽反應。較佳為使上述合成樹脂X之上述能夠與胺基或羧基反應之官能基與構成上述肽之胺基酸之羧基或胺基結合。藉此，能夠獲得上述含肽之樹脂。於使用醇溶劑作為上述溶劑之情形時，能夠於上述反應步驟中獲得含有含肽之樹脂與醇溶劑之液體。上述反應步驟中之反應條件無特別限定。
上述塗佈液之製造方法較佳為進而具備純化步驟。作為上述純化步驟中之純化方法，並無特別限定，例如，可例舉：(1)使液-液相分離後，回收含有含肽之樹脂之液相的方法；(2)使含肽之樹脂再沈澱後回收之方法；及(3)使用離子交換樹脂進行離子交換之方法等。於上述塗佈液之製造方法具備上述純化步驟之情形時，藉由去除未反應之縮合劑或肽，能夠獲得雜質較少之塗佈液。於上述純化步驟中，亦可組合複數種純化方法。又，可將純化後所獲得之溶液直接用作塗佈液，亦可將使溶劑揮發後再溶解於醇溶劑而得者用作塗佈液。
(塗佈液之其他詳情) 藉由將上述塗佈液塗佈於容器等之表面，使塗佈之塗佈液乾燥，能夠形成細胞支架材。作為上述塗佈之方法，可例舉：旋轉塗佈法、凹版塗佈法、柔版塗佈法、噴霧塗佈法、鑄塗法、浸漬塗佈法、噴射點膠法及噴墨法等。
上述細胞支架材之厚度並無特別限定。上述細胞支架材之平均厚度較佳為10 nm以上，更佳為20 nm以上，進而較佳為30 nm以上，且較佳為1 μm以下，更佳為500 nm以下，進而較佳為200 nm以下。若上述平均厚度為上述下限以上，則能夠提高細胞之增生性。於本發明之塗佈液中，能夠簡便地形成平均厚度為上述下限以上之細胞支架材。若上述平均厚度為上述上限以下，則容易獲得表面之凹凸較少，外觀良好之細胞支架材。再者，上述細胞支架材之平均厚度可為50 nm以上，亦可為100 nm以上，且可為1000 μm以下，亦可為500 μm以下。
上述細胞支架材之表面粗糙度Ra較佳為10 nm以下，更佳為5 nm以下。若上述細胞支架材之表面粗糙度Ra為上述上限以下，則能夠獲得細胞之增生性之差異較少之細胞支架材。上述細胞支架材之表面粗糙度Ra可藉由適當選擇上述塗佈液之塗佈方法或乾燥條件等而調整為上述上限以下。
上述細胞支架材較佳為用作培養細胞時之該細胞之支架。
作為上述細胞，可例舉人類、小鼠、大鼠、豬、牛及猴等之動物細胞。又，作為上述細胞，可例舉體細胞等，例如，可例舉：幹細胞、前驅細胞及成熟細胞等。上述體細胞亦可為癌細胞。
作為上述幹細胞，可例舉：成體幹細胞、胚胎幹細胞等，例如，可例舉：神經幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞(MSC)、iPS細胞、ES細胞、Muse細胞、胚胎癌性細胞、胚胎生殖幹細胞、及mGS細胞等。
作為上述成熟細胞，可例舉：神經細胞、心肌細胞、視網膜細胞及肝細胞等。
上述細胞支架材較佳為用於細胞之二維培養(平面培養)、三維培養或懸浮培養，更佳為用於二維培養(平面培養)或三維培養，進而較佳用於二維培養。
上述細胞支架材較佳為用於無血清培養基培養。上述細胞支架材由於包含上述含肽之樹脂，故而即便利用不含飼養細胞或黏附蛋白之無血清培養基進行培養，亦能夠提高細胞之黏附性，尤其是能夠提高細胞接種後之初期固定率。
(細胞培養用基材) 藉由將上述塗佈液塗佈於基材之表面，並使塗佈之塗佈液乾燥，能夠製作細胞培養用基材。上述細胞培養用基材具有基材、及形成於該基材之表面上之上述細胞支架材。於上述細胞培養用基材中，上述細胞支架材為上述塗佈液之乾燥物層。於上述細胞培養用基材中，較佳為上述細胞支架材為樹脂膜。
上述基材之形狀及大小無特別限定。作為上述基材，例如，可使用纖維、不織布、中空纖維、粒子、膜、多孔質膜等。
作為上述纖維，例如，可使用平均長度為1 μm～10 mm、平均直徑為100 nm～300 μm之纖維。作為上述纖維之材質，例如，可例舉：合成樹脂、纖維素、玻璃等。作為上述合成樹脂，例如，可例舉：苯乙烯共聚物、聚酯、聚醯胺、(甲基)丙烯酸系樹脂、聚乙烯醇等。
作為上述不織布，例如，可使用平均纖維徑為0.01 μm～10 μm、視密度為1 kg/m 3～100 kg/m 3、平均厚度為10 μm～1000 μm之不織布。作為上述不織布之材質，例如，可例舉：合成樹脂、纖維素等。作為上述合成樹脂，可例舉：聚丙烯、聚酯、聚醯胺、聚苯硫醚等。
作為上述中空纖維，例如，可使用內徑為50 μm～1000 μm、膜厚為10 μm～400 μm、孔徑為0.001 μm～0.5 μm之中空纖維。作為上述中空纖維之材質，例如，可例舉：聚乙烯、聚醯胺、聚酯、聚醚碸、聚碸、聚偏二氟乙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯、纖維素、聚丙烯腈共聚物、聚氯乙烯、聚乙烯乙烯醇、陶瓷等。
作為上述粒子，例如，可使用平均粒徑為10 μm～1000 μm、比重為0.5～5.0之粒子。作為上述粒子之材質，例如，可例舉：合成樹脂、多糖類、二氧化矽等。作為上述合成樹脂，例如，可例舉：聚苯乙烯、(甲基)丙烯酸系樹脂、二乙烯苯等。
作為上述膜，例如，可使用厚度為1 μm～1000 μm之膜。上述膜可為單層，亦可為多層。作為上述膜之材質，例如，可例舉：聚乙烯、聚丙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚酯、聚醯胺、聚矽氧系彈性體、聚苯乙烯系彈性體、離子聚合物樹脂等。
作為上述多孔質膜，例如，可使用平均孔徑為0.01 μm～10 μm、氣孔率為1體積%～95體積%、平均膜厚為1 μm～100 μm之多孔質膜。作為上述多孔質膜之材質，例如，可例舉：聚酯、聚乙烯、聚醯亞胺、氟樹脂等。
上述塗佈液對上述基材之表面之塗佈方法及塗佈條件可根據上述基材之尺寸及形狀等，適當選擇最佳之方法及條件。
例如，於膜狀之基材之情形時，可使用輥塗法將上述塗佈液塗佈於該基材。作為輥塗法，可例舉：凹版塗佈法、柔版塗佈法、反向塗佈法、狹縫式模嘴塗佈法、模唇塗佈法及刮塗法等。可將上述塗佈液整面塗佈於膜狀之基材，亦可將上述塗佈液以形成點狀、條紋狀等圖案之方式塗佈。
又，例如，於多孔質之基材或纖維狀之基材之情形時，可使用浸漬塗佈法將上述塗佈液塗佈於該基材。
(細胞培養用容器) 藉由將上述塗佈液塗佈於容器本體之表面並使塗佈之塗佈液乾燥，能夠製作細胞培養用容器。上述細胞培養用容器具有容器本體、及形成於上述容器本體之表面上之上述細胞支架材。於上述細胞培養用容器中，上述細胞支架材為上文所述之塗佈液之乾燥物層。於上述細胞培養用容器中，較佳為上述細胞支架材為樹脂膜。
作為上述容器本體，可使用先前公知之容器本體(容器)。上述容器本體之形狀及大小無特別限定。作為上述容器本體，例如可使用2～384孔板、單層燒瓶、多層燒瓶、多面燒瓶、皿、轉瓶、袋、插入杯、微流控晶片等。
作為上述容器本體之材質，例如，可例舉：合成樹脂、金屬、玻璃等。作為上述合成樹脂，可例舉：聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚醚碸、聚碳酸酯、聚酯、聚異戊二烯、環烯烴聚合物、聚醯亞胺、聚醯胺、聚醯胺醯亞胺、(甲基)丙烯酸系樹脂、環氧樹脂、聚矽氧等。
上述塗佈液對上述容器本體之表面之塗佈方法及塗佈條件可根據上述容器本體之尺寸及形狀等，適當選擇最佳之方法及條件。
例如，可使用鑄塗法、噴霧塗佈法、旋轉塗佈法等將上述塗佈液塗佈於上述容器本體之表面。又，亦可將上述塗佈液以形成點狀、條紋狀等圖案之方式塗佈於上述容器本體之表面。作為以形成圖案之方式塗佈上述塗佈液之方法，例如，可使用噴墨法、網版印刷法、微接觸印刷法等。
(含肽之樹脂之製造方法) 於本說明書中，亦揭示具備下述之構成之含肽之樹脂之製造方法。
一種含肽之樹脂之製造方法，其具備如下步驟：(1)準備包含第1溶劑、具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂(合成樹脂X)、及肽之第1溶液；(2)準備包含第2溶劑及縮合劑之第2溶液；及(3)將上述第1溶液與上述第2溶液混合。
上述含肽之樹脂之製造方法係具有合成樹脂部及肽部之含肽之樹脂之製造方法。藉由上述含肽之樹脂之製造方法，如上所述能夠良好地製造塗佈液。再者，藉由含肽之樹脂之製造方法所獲得之含肽之樹脂較佳為以包含該含肽之樹脂與醇溶劑之塗佈液之形式使用，亦可不以塗佈液之形式使用。
於上述含肽之樹脂之製造方法中，可於準備上述第1溶液後，準備上述第2溶液，亦可於準備上述第2溶液後，準備上述第1溶液。亦可同時準備上述第1溶液與上述第2溶液。
上述含肽之樹脂之製造方法中之上述合成樹脂X(具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂)之詳情係與上文所述之塗佈液之製造方法之欄中記載之合成樹脂X之詳情相同。
上述含肽之樹脂之製造方法中之上述合成樹脂X較佳為(甲基)丙烯酸酯共聚物、或者聚乙烯醇縮醛衍生物。上述含肽之樹脂之製造方法中之上述合成樹脂X更佳為使包含上述(甲基)丙烯酸酯化合物(A)與上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之單體混合物聚合而成之(甲基)丙烯酸酯共聚物、或者具有源自上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)之結構單元之聚乙烯醇縮醛衍生物。上述合成樹脂X可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述含肽之樹脂之製造方法中之上述肽之詳情與上文所述之塗佈液之製造方法之欄中記載之肽之詳情相同。即，作為上述肽，可例舉具有上文所述之肽部之欄中記載之胺基酸殘基之數及胺基酸序列等之肽。上述肽可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述肽之胺基酸殘基之數較佳為3個以上，更佳為4個以上，進而較佳為5個以上，且較佳為10個以下，更佳為8個以下，進而較佳為6個以下。若上述胺基酸殘基之數為上述下限以上及上述上限以下，則能夠進一步提高與接種後之細胞之黏附性，能夠進一步提高細胞之增生率。其中，上述肽之胺基酸殘基之數可超過10個，亦可超過15個。
上述肽較佳為具有細胞黏附性之胺基酸序列，更佳為至少具有RGD序列、YIGSR序列、或PDSGR序列，進而較佳為具有RGD序列，尤佳為至少具有上述式(1)所表示之RGD序列。
上述肽可為直鏈狀，亦可具有環狀肽骨架。上述環狀肽骨架係指由複數個胺基酸構成之環狀骨架。上述環狀肽骨架較佳為由4個以上之胺基酸構成，更佳為由5個以上之胺基酸構成，且較佳為由10個以下之胺基酸構成。
上述含肽之樹脂之製造方法中之上述縮合劑之詳情與上文所述之塗佈液之製造方法之欄中記載之縮合劑之詳情相同。上述縮合劑可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述含肽之樹脂之製造方法中之上述第1溶劑及上述第2溶劑之詳情與上文所述之塗佈液之製造方法之欄中記載之上述第1溶劑及上述第2溶劑之詳情相同。上述第1溶劑及上述第2溶劑分別可僅使用1種，亦可併用2種以上。
上述含肽之樹脂之製造方法中之上述第1溶劑較佳為醇溶劑，上述第2溶劑較佳為醇溶劑。
上述含肽之樹脂之製造方法較佳為進而具備使上述合成樹脂X與上述肽反應之反應步驟。
於上述反應步驟中，使上述合成樹脂X與上述肽反應。較佳為使上述合成樹脂X之上述能夠與胺基或羧基反應之官能基與構成上述肽之胺基酸之羧基或胺基結合。藉此，能夠獲得上述含肽之樹脂。於使用醇溶劑作為上述溶劑之情形時，能夠於上述反應步驟中獲得含有含肽之樹脂與醇溶劑之液體。上述反應步驟中之反應條件無特別限定。
上述含肽之樹脂之製造方法較佳為進而具備純化步驟。作為上述純化步驟中之純化方法，並無特別限定，例如，可例舉：(1)使液-液相分離後，回收含有含肽之樹脂之液相的方法；(2)使含肽之樹脂再沈澱後回收之方法；及(3)使用離子交換樹脂進行離子交換之方法等。於上述含肽之樹脂之製造方法具備上述純化步驟之情形時，藉由去除未反應之縮合劑或肽，能夠獲得雜質較少之含肽之樹脂。於上述純化步驟中，亦可組合複數種純化方法。
以下，揭示實施例及比較例對本發明進而詳細地進行說明。本發明並不僅限定於該等實施例。
再者，所獲得之含肽之樹脂中之結構單元之含有率、及肽部之含有率可將該含肽之樹脂溶解於DMSO-d6(二甲基亞碸)後，藉由1H-NMR(核磁共振譜)進行測定。
準備以下之肽(A)、(B)。
肽(A)： 具有Gly-Arg-Gly-Asp-Ser之胺基酸序列之直鏈狀之肽(胺基酸殘基數為5個，表中記載為GRGDS) 肽(B)： 具有Arg-Gly-Asp-Phe-Lys之胺基酸序列之環狀之肽(胺基酸殘基數為5個，藉由Arg與Lys結合而形成環狀骨架，Phe為D體，表中記載為c-RGDfK)
(實施例1) ＜塗佈液之製作＞ 具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂(合成樹脂X)之製作： 準備縮醛化度(丁醛化度)65莫耳%、羥基量32莫耳%、乙醯基量3莫耳%之聚乙烯醇縮丁醛樹脂作為聚乙烯醇縮醛樹脂。將丙烯酸30重量份與聚乙烯醇縮醛樹脂70重量份溶解於四氫呋喃255重量份而獲得聚合物混合溶液。於所獲得之聚合物混合溶液中溶解PERBUTYL O(日油公司製造)0.015重量份，於90℃下反應6小時。繼而，將反應後之溶液與30000重量份之水混合。將所獲得之沈澱物以80℃真空乾燥3小時，製作具有源自丙烯酸之結構單元之聚乙烯醇縮醛樹脂X(具有源自丙烯酸之結構單元之聚乙烯醇縮丁醛樹脂)作為上述合成樹脂X。
準備步驟： 準備DMF作為第1溶劑。準備DMF作為第2溶劑。準備肽(A)作為肽。準備1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽作為縮合劑。於第1溶劑1000重量份中混合聚乙烯醇縮醛樹脂X 50重量份與肽2重量份，製備第1溶液。又，於第2溶劑1000重量份中混合縮合劑1重量份，製備第2溶液。將第1溶液與第2溶液混合，製備包含聚乙烯醇縮醛樹脂X、肽、及縮合劑之溶液。
反應步驟： 使所獲得之溶液於40℃下反應2小時，使聚乙烯醇縮醛樹脂X之源自丙烯酸之結構單元中之羧基與肽之Gly之胺基脫水縮合，獲得含有含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂(表中記載為樹脂X1)之溶液。
純化步驟： 將所獲得之含有含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂之溶液利用DMF進行100倍稀釋，以0.3 mL/min之速度滴加至填充有離子交換樹脂(Organo公司製造)之管柱中進行洗淨。對洗淨後之溶液進行60℃、3小時之真空乾燥，將所獲得之乾燥物溶解至丁醇(醇溶劑)後，相對於丁醇(醇溶劑)100重量份，添加乙酸(pH值調整劑)5重量份，獲得含有含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂(樹脂X1)與丁醇(醇溶劑)之塗佈液。再者，將塗佈液中之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂之含量設為0.1重量%。
＜細胞培養用容器之製作＞ 將所獲得之塗佈液20 μL利用鑄塗法塗佈於6孔板之各孔之後，藉由60℃、3小時之真空乾燥去除醇溶劑。如此，獲得於各孔之底面配置有塗佈液之乾燥物層即細胞支架材(樹脂膜)之細胞培養用容器。
(實施例2、4及比較例2) 除了將塗佈液中之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂之含量設為表3、4所記載之含量以外，以與實施例1相同之方式獲得塗佈液及細胞培養用容器。
(實施例3、5) 藉由將第1溶液中所包含之肽量分別變更為0.3重量份(實施例3)及4重量份(實施例5)，從而將含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂中之肽部之含有率設為表1所記載之含有率。又，將塗佈液中之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂之含量設為表3所記載之含量。除了該等以外，以與實施例1相同之方式，獲得塗佈液及細胞培養用容器。再者，於表中，將實施例3中使用之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂記載為樹脂X2，將實施例5中使用之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂記載為樹脂X3。
(實施例6) 準備肽(B)作為肽，將第1溶液中所包含之肽量設為2重量份。使聚乙烯醇縮醛樹脂X之源自丙烯酸之結構單元中之羧基與肽之Lys之胺基脫水縮合，合成含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂(表中記載為樹脂X4)。除了使用該含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂、及將塗佈液中之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂之含量設為表4所記載之含量以外，以與實施例1相同之方式獲得塗佈液及細胞培養用容器。
(實施例7) 使丙烯酸15重量份、丙烯酸十二烷基酯15重量份、及聚乙烯醇縮醛樹脂70重量份溶解於四氫呋喃255重量份，獲得聚合物混合溶液。除此以外，以與實施例1相同之方式，製作具有源自丙烯酸之結構單元與源自丙烯酸十二烷基酯之結構單元的聚乙烯醇縮醛樹脂X(具有源自丙烯酸之結構單元與源自丙烯酸十二烷基酯之結構單元的聚乙烯醇縮丁醛樹脂)作為上述合成樹脂X。
又，準備肽(B)作為肽，將第1溶液中所含之肽量設為4重量份。除此以外，以與實施例6相同之方式，合成含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂(表中記載為樹脂X5)。除了使用該含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂、及將塗佈液中之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂之含量設為表4所記載之含量以外，以與實施例1相同之方式獲得塗佈液及細胞培養用容器。
(實施例8) 除了將塗佈液中之醇溶劑變更為乙醇、及將塗佈液中之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂之含量設為表4所記載之含量以外，以與實施例1相同之方式獲得塗佈液及細胞培養用容器。
(比較例1) 使用實施例1中製作之聚乙烯醇縮醛樹脂X(與肽反應前之樹脂，表中記載為樹脂Y1)。又，將塗佈液中之醇溶劑變更為乙醇，將塗佈液中之樹脂Y1之含量設為表4所記載之含量。除該等以外，以與實施例1相同之方式，獲得塗佈液及細胞培養用容器。
(實施例9) ＜塗佈液之製作＞ 具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂(合成樹脂X)之製作： 使丙烯酸十二烷基酯70重量份、及丙烯酸30重量份溶解於四氫呋喃27重量份，獲得丙烯酸系單體溶液。使Irgacure184(BASF公司製造)0.0575重量份溶解於所獲得之丙烯酸系單體溶液，將所獲得之液體塗佈於PET膜上。對塗佈物於25℃下使用UV輸送器裝置(EYE GRAPHIC公司製造之「ECS301G1」)，以累計光量2000 mJ/cm 2照射波長365 nm之光，藉此獲得(甲基)丙烯酸系共聚物溶液。將所獲得之(甲基)丙烯酸系共聚物溶液以80℃進行3小時真空乾燥，獲得(甲基)丙烯酸系共聚物。如此，製作(甲基)丙烯酸系共聚物X作為上述合成樹脂X。
準備步驟： 準備DMF作為第1溶劑。準備DMF作為第2溶劑。準備肽(A)作為肽。準備1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽作為縮合劑。於第1溶劑1000重量份中混合(甲基)丙烯酸系共聚物X 50重量份及肽2重量份，製備第1溶液。又，於第2溶劑1000重量份中混合縮合劑1重量份，製備第2溶液。將第1溶液與第2溶液混合，製備包含(甲基)丙烯酸系共聚物X、肽、及縮合劑之溶液。
反應步驟： 使所獲得之溶液於40℃下反應2小時，使(甲基)丙烯酸系共聚物X之源自丙烯酸之結構單元中之羧基與肽之Gly之胺基脫水縮合，合成含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物(表中記載為樹脂X6)。
純化步驟： 將所獲得之含有含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之溶液利用DMF進行100倍稀釋，以0.3 mL/min之速度滴加至填充有離子交換樹脂(Organo公司製造)之管柱進行洗淨。將洗淨後之溶液進行60℃、3小時之真空乾燥，將所獲得之乾燥物溶解於丁醇(醇溶劑)後，相對於丁醇(醇溶劑)100重量份，添加乙酸(pH值調整劑)5重量份，獲得含有含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物(樹脂X6)與丁醇(醇溶劑)之塗佈液。再者，將塗佈液中之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之含量設為0.1重量%。
＜細胞培養用容器之製作＞ 將所獲得之塗佈液20 μL利用鑄塗法塗佈於6孔板之各孔後，利用60℃、3小時之真空乾燥去除醇溶劑。如此，獲得於各孔之底面配置有塗佈液之乾燥物層即細胞支架材(樹脂膜)之細胞培養用容器。
(實施例10、11及比較例3) 除了將塗佈液中之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之含量設為表5所記載之含量以外，以與實施例9相同之方式，獲得塗佈液及細胞培養用容器。
(實施例12) 準備肽(B)作為肽，將第1溶液中所含之肽量設為2重量份。使(甲基)丙烯酸系共聚物X之源自丙烯酸之結構單元中之羧基與肽之Lys之胺基脫水縮合，合成含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物(表中記載為樹脂X7)。除了使用該含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物、及將塗佈液中之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之含量設為表5所記載之含量以外，以與實施例9相同之方式，獲得塗佈液及細胞培養用容器。
(實施例13) 除了使用丙烯酸丁酯70重量份代替丙烯酸十二烷基酯，將塗佈液中之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之含量設為表5所記載之含量以外，以與實施例9相同之方式獲得塗佈液及細胞培養用容器。再者，於表中將實施例13中製作之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物記載為樹脂X8。
(實施例14) 除了使用丙烯酸辛酯70重量份代替丙烯酸十二烷基酯，將塗佈液中之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物之含量設為表5中記載之含量以外，以與實施例9相同之方式，獲得塗佈液及細胞培養用容器。再者，表中將實施例14中製作之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物記載為樹脂X9。
(評價) (1)對乙醇之溶解性(60℃下之最大溶解量) 基於以下之基準評價所獲得之樹脂X1～X9及Y1對乙醇之溶解性(60℃下之最大溶解量)。
＜對乙醇之溶解性之判定基準＞ ○○：最大溶解量為1重量%以上 ○：最大溶解量為0.5重量%以上且未達1重量% △：最大溶解量為0.1重量%以上且未達0.5重量% ×：最大溶解量未達0.1重量%
(2)塗佈液中檢測出之胺基酸量 於所獲得之塗佈液中，利用上述方法測定藉由水解胺基酸組成分析法檢測出之胺基酸量。
(3)細胞支架材之平均厚度 於所獲得之細胞培養用容器中，使用反射分光膜厚測定計(Lasertec公司製造之「OPTELICS」)測定細胞支架材(樹脂膜)之平均厚度。
(4)細胞培養評價(細胞之增生性) 準備以下之液體培養基。
R-STEM(樂敦製藥公司製造)
於所獲得之細胞培養用容器中添加磷酸緩衝生理鹽水1 mL，於37℃之保溫箱內靜置1小時後，自細胞培養用容器去除磷酸緩衝生理鹽水。
準備於液體培養基1.5 mL中包含5×10 4個細胞(Lonza公司製造、源自人類脂肪之間葉系幹細胞、型號：PT-5006)之細胞懸浮液。將該細胞懸浮液接種於6孔板之各孔。繼而，將6孔板左右振盪5次，放入至37℃及CO 2濃度5%之保溫箱內進行培養。
使用NucleoCounter NC-3000(M&S TechnoSystems公司製造)對培養5天後之細胞數進行計數。依據以下之算出方法算出倍增時間，利用以下之基準判定細胞之增生性。
＜倍增時間之算出方法＞ X＝log2÷{log(N(5))－log(N(0))}×T X：倍增時間(小時) N(0)：接種之細胞數(cells) N(5)：接種5天後之細胞數(cells) T：培養時間(小時) 再者，由於進行5天培養，故T＝120。
例如，於接種5天後之細胞數為65000 cells、接種之細胞數為20000 cells之情形時，倍增時間(X)為log2÷(log65000－log20000)×120≒70小時。
＜細胞培養評價(細胞之增生性)之判定基準＞ AA：倍增時間(X)未達24小時 A：倍增時間(X)為24小時以上且未達28小時 B：倍增時間(X)為28小時以上且未達36小時 C：倍增時間(X)為36小時以上
將詳情及結果示於下述之表1～5。
[表1]
含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂 樹脂X1 樹脂X2 樹脂X3 樹脂X4 樹脂X5 樹脂Y1
聚乙烯醇縮醛部 PVB 莫耳% 75 75 75 75 75 75
接枝鏈 源自(甲基)丙烯酸酯化合物(D)之結構單元 丙烯酸 莫耳% 22 24.5 19 22 9 25
源自(甲基)丙烯酸酯化合物(C)之結構單元 丙烯酸十二烷基酯 莫耳%             10   
肽部 GRGDS 莫耳% 3 0.5 6         
c-RGDfK 莫耳%          3 6   
對乙醇之溶解性(60℃下之最大溶解量)    ○ ○○ △ △ ○ ○○
[表2]
含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物 樹脂X6 樹脂X7 樹脂X8 樹脂X9
(甲基)丙烯酸系共聚物部 源自(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元 丙烯酸十二烷基酯 莫耳% 70 70      
丙烯酸丁酯 莫耳%       70   
丙烯酸辛酯 莫耳%          70
源自(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之結構單元 丙烯酸 莫耳% 27 27 27 27
肽部 GRGDS 莫耳% 3    3 3
c-RGDfK 莫耳%    3      
對乙醇之溶解性(60℃下之最大溶解量)    ○○ ○ ○ ○
[表3]
   實施例1 實施例2 實施例3 實施例4 實施例5
塗佈液 樹脂之種類    樹脂X1 樹脂X1 樹脂X2 樹脂X1 樹脂X3
醇溶劑之種類    丁醇 丁醇 丁醇 丁醇 丁醇
塗佈液100重量%中，含肽之樹脂之含量 重量% 0.1 0.4 0.7 0.7 0.7
含肽之樹脂之胺基酸量(肽部之含有率×5個殘基) 莫耳% 15 15 2.5 15 30
塗佈液中檢測出之胺基酸量 μmol/L 142 566 165 991 1981
細胞支架材(樹脂膜)之平均厚度 nm 15 25 50 50 50
細胞培養評價(細胞之增生性)    B A B A AA
[表4]
   實施例6 實施例7 實施例8 比較例1 比較例2
塗佈液 樹脂之種類    樹脂X4 樹脂X5 樹脂X1 樹脂Y1 樹脂X1
醇溶劑之種類    丁醇 丁醇 乙醇 乙醇 丁醇
塗佈液100重量%中，含肽之樹脂之含量 重量% 0.5 0.7 0.7 0.7 0.05
含肽之樹脂之胺基酸量(肽部之含有率×5個殘基) 莫耳% 15 30 15 0 15
塗佈液中檢測出之胺基酸量 μmol/L 708 1981 991 0 71
細胞支架材(樹脂膜)之平均厚度 nm 30 50 50 50 10
細胞培養評價(細胞之增生性)    A AA A C C
[表5]
   實施例9 實施例10 實施例11 實施例12 實施例13 實施例14 比較例3
塗佈液 樹脂之種類    樹脂X6 樹脂X6 樹脂X6 樹脂X7 樹脂X8 樹脂X9 樹脂X6
醇溶劑之種類    丁醇 丁醇 丁醇 丁醇 丁醇 丁醇 丁醇
塗佈液100重量%中，含肽之樹脂之含量 重量% 0.1 0.5 1 1 1 1 0.05
含肽之樹脂之胺基酸量(肽部之含有率×5個殘基) 莫耳% 15 15 15 15 15 15 15
塗佈液中檢測出之胺基酸量 μmol/L 142 708 1415 1415 1415 1415 71
細胞支架材(樹脂膜)之平均厚度 nm 15 30 100 100 100 100 10
細胞培養評價(細胞之增生性)    B A AA AA A A C
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Claims (12)

  1. 一種細胞支架材形成用塗佈液，其包含：具有合成樹脂部及肽部之含肽之樹脂、及  醇溶劑，且  上述含肽之樹脂之含量為0.1重量%以上。
  2. 如請求項1之細胞支架材形成用塗佈液，其中藉由水解胺基酸組成分析法檢測出之胺基酸量為75 μmol/L以上。
  3. 如請求項1或2之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述合成樹脂部具有(甲基)丙烯酸系共聚物部、或聚乙烯醇衍生物部。
  4. 如請求項1或2之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述含肽之樹脂為具有(甲基)丙烯酸系共聚物部及肽部之含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物，且  上述(甲基)丙烯酸系共聚物部具有源自下述式(A1)或下述式(A2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物(A)之結構單元；  [化1] 上述式(A1)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基；  [化2] 上述式(A2)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
  5. 如請求項4之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述(甲基)丙烯酸系共聚物部具有源自(甲基)丙烯酸酯化合物(B)之結構單元，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(B)具有能夠與胺基或羧基反應之官能基，且  於上述含肽之(甲基)丙烯酸系共聚物中，上述肽部結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。
  6. 如請求項1或2之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述含肽之樹脂為具有聚乙烯醇衍生物部及肽部之含肽之聚乙烯醇衍生物。
  7. 如請求項6之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述含肽之聚乙烯醇衍生物進而具有源自下述式(C1)或下述式(C2)所表示之(甲基)丙烯酸酯化合物(C)之結構單元；  [化3] 上述式(C1)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基；  [化4] 上述式(C2)中，R表示碳數為2以上18以下之烴基。
  8. 如請求項6之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述含肽之聚乙烯醇衍生物進而具有源自(甲基)丙烯酸酯化合物(D)之結構單元，上述(甲基)丙烯酸酯化合物(D)具有能夠與胺基或羧基反應之官能基，且  於上述含肽之聚乙烯醇衍生物中，上述肽部結合於上述能夠與胺基或羧基反應之官能基。
  9. 如請求項6之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述含肽之聚乙烯醇衍生物為具有聚乙烯醇縮醛部及肽部之含肽之聚乙烯醇縮醛樹脂。
  10. 如請求項1或2之細胞支架材形成用塗佈液，其中上述肽部具有RGD序列。
  11. 一種如請求項1至10中任一項之細胞支架材形成用塗佈液之製造方法，其具備如下步驟：  準備步驟，其準備包含具有能夠與胺基或羧基反應之官能基之合成樹脂、肽、及縮合劑的溶液；及  反應步驟，其使上述合成樹脂與上述肽反應。
  12. 如請求項11之細胞支架材形成用塗佈液之製造方法，其進而具備純化步驟。
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